PLATELIA HSV IgG 96 TESTES 72682 - Bio-Rad
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1. 0 3 mol l em solu o pronta a usar FITA ADESIVA 2 SACO DE POLIETILENO 1 MATERIAIS NECESS RIOS MAS N O FORNECIDOS Incubadora a 37 C 40 C Leitor de microplacas comprimento de onda 450 ou 450 620 nm com linearidade D O at 2000 pelo menos Aparelho de lavagem de microplacas de prefer ncia capaz de distribuir volumes entre 225 375 ul Agua destilada ou desionizada Recipientes de vidro habitualmente utilizados em laborat rio provetas tubos de ensaio etc Micropipetas para recolha rigorosa de 10 100 1000 ul de solu o Luvas descart veis Temporizador Solu o de hipocloreto de s dio 5 Contentores para recolha de materiais potencialmente infecciosos Papel absorvente 5 CONSERVA O E ESTABILIDADE DOS REAGENTES Os reagentes devem ser conservados temperatura de 2 8 O prazo de validade est indicado em cada componente e na etiqueta da respectiva embalagem Os reagentes t m uma estabilidade limitada ap s abertura e ou prepara o REAGENTE CONDI ES Microplaca 6 semanas a 2 8 saco de polietileno Controlos 6 semanas a 2 8 Conjugado 6 semanas a 2 8T Substrato at ao termo do prazo de validade a 2 8 C 1 semana a 15 30 guardar ao abrigo da luz Diluente de Amostras at ao termo do prazo de validade a 2 8T Tamp o de Lavagem 2 semanas a 2 8 5 dias a 15 30 Solu o de Paragem at ao termo do prazo de validade a 2 8 Portugu2. adicionar 100 ul do conjugado a cada po o e incubar de novo durante 45 minutos a 37 cobrindo os pocos com a pel cula de protec o A placa novamente lavada 4 vezes como acima descrito Finalmente distribuir o substrato 100 ul poco Ap s 15 minutos temperatura ambiente parar a reacc o enzim tica com 100 ul de Solugao de Paragem A absorv ncia D O lida a 450 nm ou 450 620 nm no prazo de 30 min Portugu s 6 10 9 Procedimento de Teste para o Virus Herpes Simplex IgG T cnica Manual PASSO 1 Colocar 100 ul de amostra dilu da controlos nos pocos das tiras Incubar durante 45 minutos a 37 C Lavar 4 vezes 300 ul PASSO2 Adicionar 100 uL de conjugado em cada poco Incubar durante 45 minutos a 37 C Lavar 4 vezes 300 ul PASSO 3 Adicionar 100 ul de Substrato em cada poco Incubar durante 15 minutos temperatura ambiente PASSO 4 Adicionar 100 ul de Soluc o de Lavagem Proceder a leitura da absorv ncia a 450 nm no prazo de 30 min VALIDA O DO TESTE Subtrair o valor do controlo lt 0 150 de todos os outros valores lidos Os valores de D O do soro de controlo Cut off devem situar se a 2596 do valor m dio se for testado em triplicado Rejeitar qualquer valor anormal e calcular de novo a m dia O controlo Positivo deve apresentar uma D O de pelo menos 1 5 vezes a do soro de cut off A raz o entre o Controlo Negativo e o Cut off deve ser inferior a 0 6 A D O do soro de cut off deve ser gt 0 2 a
3. es anal ticas 1 Todos os reagentes e amostras dever o ser estabilizados temperatura ambiente 18 30 antes de serem usados Imediatamente ap s a utiliza o levar de novo os reagentes temperatura de conserva o recomendada E importante trabalhar temperatura correcta O term stato n o dever situar se abaixo de 35 C ou acima de 39 O envelope contendo as tiras s deve ser aberto depois de pelo menos meia hora temperatura ambiente 2 N o utilizar os reagentes ap s o prazo de validade indicado A contamina o microbiol gica dos reagentes deve ser evitada j que pode reduzir o tempo de vida til do produto e dar origem a resultados err neos 3 N o modificar o Procedimento de Teste ou substituir reagentes de outros fabricantes ou outros lotes a menos que o reagente apresente a indica o de intermut vel N o reduzir qualquer dos tempos de incuba o recomendados 4 Os recipientes em vidro utilizados com os reagentes dever o ser meticulosamente lavados com cido clor drico 2M e depois enxaguados com gua destilada ou gua desionizada de alta qualidade 5 N o expor os reagentes a uma luz intensa ou a vapores de hipocloreto durante o armazenamento ou durante as opera es de incuba o 6 N o permitir que os po os sequem durante o procedimento de teste 7 Evitar cuidadosamente qualquer contamina o cruzada dos reagentes E importante que as pipetas sejam exclusivamente dedicadas ao uso de c
4. 450 nm e gt 0 16 a 450 620 nm 11 INTERPRETACAO DOS RESULTADOS Resultados qualitativos Se a absorv ncia da amostra for superior do valor cut off a amostra positiva quanto presenca de IgG espec fica Calcular a raz o entre o valor D O da amostra e o do valor de Cut off INDEX A amostra considerada Positiva se a raz o for gt 1 2 Duvidosa 20 do valor cut off Negativa se a raz o for lt 0 8 Em caso de um resultado duvidoso o teste deve ser repetido Se mesmo assim se mantiver duvidoso recolher uma nova amostra de soro LIMITA ES DO PROCEDIMENTO Uma amostra de soro obtida durante a fase aguda da infec o quando existirem apenas anticorpos IgM pode ser negativa segundo este procedimento O t tulo de V rus Herpes Simplex IgM deve ser determinado utilizando o dispositivo Platelia HSV IgM Alternativamente uma segunda amostra de soro obtida 8 14 dias mais tarde dever ser testada em paralelo para determinar um aumento no t tulo de anticorpos IgG O resultado do teste deve ser utilizado em conjunto com as informa es dispon veis a partir da avalia o de outros procedimentos de diagn stico 13 ESPECIFICIDADE ANAL TICA Foram testadas 17 amostras que eram negativas para Herpes Simplex mas que continham anticorpos IgG contra outros v rus tais como Rub ola Epstein Barr Citomegalovirus ou Papeira Nenhum destes anticorpos influenciou o teste 14 SENSIBILIDADE E ESPECIFICIDADE Nu
5. CLD PLATELIA HSV IgG 96 TESTES 2682 DISPOSITIVO IMUNOENZIM TICO PARA DETERMINA O QUALITATIVA DE ANTICORPOS DE CLASSE IgG AO VIRUS HERPES SIMPLEX TIPOS 1 E 2 NO SORO HUMANO Portugu s 1 10 10 11 12 13 14 15 16 17 NDICE FINALIDADE RESUMO E EXPLICA O DO TESTE PRINC PIO DO TESTE CONTE DO DO DISPOSITIVO E PREPARA O DOS REAGENTES CONSERVA O E ESTABILIDADE DOS REAGENTES PRECAU ES TIPO E CONSERVA O DAS AMOSTRAS PROCEDIMENTO DE TESTE ESQUEMA DO PROCEDIMENTO DE TESTE VALIDA O DO TESTE INTERPRETA O DOS RESULTADOS LIMITA ES DO PROCEDIMENTO ESPECIFICIDADE ANAL TICA SENSIBILIDADE E ESPECIFICIDADE DE DIAGN STICO PRECIS O RESOLU O DE PROBLEMAS REFER NCIAS BIBLIOGR FICAS Portugu s 2 10 1 FINALIDADE DISPOSITIVO IMUNOENZIMATICO PARA DETERMINAGAO QUALITATIVA DE ANTICORPOS DE CLASSE IgG AO VIRUS HERPES SIMPLEX TIPOS 1 E 2 NO SORO HUMANO 2 RESUMO E EXPLICACAO DO TESTE O v rus Herpes simplex HSV um membro da fam lia Herpesviridae do qual se conhecem dois tipos tipo 1 HSV 1 e tipo 2 HSV 2 apresentando ligeiras diferen as antig nicas O HSV 1 causa essencialmente les es orofaciais enquanto que o HSV 2 principalmente respons vel por les es genitais embora esta distin o nao seja taxativa j que ambos os tipos podem por vezes causar infec es em qualquer zona anat mica O HSV pode igualmente causar uma forma de queratite
6. ada um dos reagentes 8 Evitar tocar ou salpicar o rebordo do poco com conjugado Nao tentar eliminar soprando sobre as microplacas Portugu s 5 10 9 Os imunoensaios enzim ticos podem ocasionalmente exibir um efeito de orla que deve ser minimizado aumentando a humidade durante as opera es de incuba o As placas devem ser cobertas com a respectiva tampa e incubadas a 37 em banho de gua com um suporte ou flutuador para suportar as placas se necess rio ou numa incubadora Em alternativa as placas podem ser incubadas num analisador aprovado Para mais informa es favor consultar o manual de instru es apropriado N o devem ser utilizadas incubadoras de CO 10 Assegurar que o fundo da placa se apresenta limpo e seco e que n o s o vis veis quaisquer bolhas superf cie do l quido antes de proceder leitura da placa 11 O uso de amostras altamente hemolizadas soros n o completamente coagulados ou amostras com contamina o microbiana pode dar origem a resultados err neos 12 Para cada instrumento utilizado recomenda se a leitura cuidadosa das respectivas instru es do fabricante por forma a obter informa es adicionais sobre os seguintes pontos instala o e requisitos especiais princ pios de funcionamento instru es precau es e riscos especifica es do fabricante e desempenho do instrumento assist ncia t cnica e manuten o 7 TIPO E CONSERVA O DAS AMOSTRAS A amost
7. ados com Peroxidase em solu o tamp o de fosfato contendo fenol 0 05 e Bronidox 0 02 Pronta a usar sem dilui o adicional Portugu s 3 10 CONTROLO IgG NEGATIVO PF93910 1 x 1 6 ml INTERMUT VEL ENTRE LOTES Conte do Soro humano em Tamp o fosfato 0 01 mol l com BSA 1 e azida de s dio 0 09 l quido pronto a usar sem dilui o adicional Estabilidade O produto mant m se est vel at ao termo do prazo de validade quando conservado intacto a 2 8 C WASH BUF 10x WASH BUFFER 10X PF93603 1 x 100 ml INTERMUT VEL ENTRE LOTES Conte do Solu o salina tamp o de fosfato concentrada 10 vezes cont m Brij 0 5 Prepara o diluir o volume necess rio a 1 10 com gua destilada para obter a solu o de lavagem pronta a usar Se estiverem presentes cristais estes dever o ser dissolvidos a 37 antes da dilui o SAMP DIL DILUENTE 2 PF93611 1x100 mL Pronto a usar INTERMUT VEL ENTRE LOTES Para dilui o de amostras de soro Conte do Solu o proteica em tamp o fosfatado com azida de s dio a 0 09 adicionado de metil orange como corante SUBS TMB SUBSTRATO PF93619 1 x 15 ml Pronto a usar INTERMUT VEL ENTRE LOTES Conte do Tetrametilbenzidina 0 26 mg ml e per xido de hidrog nio 0 01 estabilizado em tamp o de citrato 0 05 mol pH 3 8 H SO 0 3M SOLU O DE PARAGEM PF93602 1 x 16 ml INTERMUT VEL ENTRE LOTES H gt SO
8. ectiva Europea puede ser obtenida en su oficina local Biorad Die anderen Sprachen die in bereinstimmung mit der europaischen IVD Direktive ben tigt werden erhalten Sie ber Ihre lokale Bio Rad Niederlassung Le altre lingue che sono richieste in conformit con le Direttive Europee possono essere ottenute dal locale agente Bio Rad As restantes l nguas obrigat rias em conformidade com a Directiva Europeia podem ser obtidas atrav s da subsidi ria Bio Rad mais pr xima de si vriga spr k som kr vs i enlighet med EG direktivet kan erh llas fr n din lokala Bio Rad representant De vrige sprog som kr ves i henhold til EU direktiv kan fas ved henvendelse til den lokale Bio Rad leverander Ol uTr OITEG YAWOOES TOU arrairo vrair att THY Eupurraikri Odnyia SiatiPevtal orov rorriK AVTITIPOOWTTO Bio Rad Bio Rad C 3 boulevard Raymond Poincar 05 2012 92430 Marnes la Coquette France Tel 33 0 1 47 95 60 00 ud Fax 33 0 1 47 41 91 33 Portugu s 10 10
9. iminado e o substrato de peroxidase adicionado A cor que se desenvolve proporcional concentra o de anticorpos espec ficos presentes na amostra de soro 4 CONTE DO DO DISPOSITIVO E PREPARA O DOS REAGENTES O dispositivo cont m reagentes suficientes para 96 determina es Estabilizar temperatura ambiente antes de usar MT PLATE MICROPLACA 12x8 po os revestidos com v rus herpes simplex corados de violeta Utiliza o abrir a embalagem do lado oposto ao c digo H seguido do n mero de lote que pode ser til para fins de identifica o retirar da embalagem de alum nio o suporte e as tiras a usar e colocar as tiras n o utilizadas no saco de polietileno contendo s lica gel expelir o ar e selar pressionando o fecho CONTROLO POSITIVO 1 x 1 6 ml Conte do Soro humano dilu do a uma concentra o determinada de anti HSV IgG em Tamp o fosfato 0 01 mol l contendo BSA 1 e azida de s dio 0 09 l quido pronto a usar sem dilui o adicional Cor a cor proporcional ao t tulo relativo de anticorpos CONTROL CUT OFF CONTROLO CUT OFF 1 x 2 0 ml Conte do Soro humano dilu do a uma concentra o determinada de anti HSV IgG em Tamp o fosfato 0 01 mol l contendo BSA 1 e azida de s dio 0 09 l quido pronto a usar sem dilui o adicional Cor a cor proporcional ao t tulo relativo de anticorpos CONJ CONJUGADO 1 x 16 ml Conte do anticorpos monoclonais marc
10. m ensaio cl nico realizado em laborat rio hospitalar foram analisadas 348 amostras 61 das quais comprovadas negativas e 287 positivas As amostras foram analisadas com outro m todo imunoenzim tico existente no mercado registou se uma concord ncia de 100 entre os dois m todos O dispositivo Platelia HSV IgG oferece 100 de sensibilidade e especificidade Portugu s 7 10 15 PRECIS O DO DISPOSITIVO PLATELIA HSV IgG Precisao intra s rie CutOff n 15 Lote n 084 Lote n 085 Lote n 086 D O 0 446 0 388 0 598 CV 6 10 6 Precis o inter s ries INDEX Amostra Is rie Il s rie Ill s rie IV s rie V s rie M dia CV HSG 1 0 4 0 5 0 5 0 4 0 4 0 4 12 HSG2 1 9 24 2 2 2 0 1 7 2 0 13 HSG 3 3 7 4 9 5 5 4 7 3 4 4 4 20 Controlo Positivo 6 3 6 7 7 9 8 0 5 8 6 9 14 16 GUIA DE RESOLU O DE PROBLEMAS PROBLEMA POSS VEL ORIGEM TESTE OU AC O S rie n o v lida totalmente negativa Um ou mais reagentes n o adicionados ou inclu dos na sequ ncia errada Verificar de novo o procedimento Verificar se existem solu es que n o tenham sido utilizadas Repetir o teste Placa n o reactiva Verificar o c digo da embalagem que cont m a placa ver qual o c digo correcto no par grafo 4 do folheto de instru es Verificar se a placa n o usada apresenta humidade o dessecante de s lica gel deve se
11. ocular e les es ao n vel do sistema nervoso central O HSV pode afectar praticamente toda a popula o A primeira infec o surge normalmente de forma subcl nica e raramente diagnosticada Ap s um per odo de lat ncia de dura o vari vel pode ocorrer reactiva o e a replica o viral pode ou n o dar origem a les es cl nicas A infec o contra da durante o nascimento de particular relev ncia uma vez que constitui importante causa de morbilidade e mortalidade Torna se por isso importante determinar o estado imunit rio das mulheres durante a gravidez por forma a detectar qualquer seroconvers o O teste de IgM espec ficas importante para o diagn stico de infec o neonatal e encefalite causada por HSV Al m disso a presen a de IgM espec ficas indica a exist ncia de actividade viral em desenvolvimento embora n o seja poss vel distinguir entre uma primo infec o e a reactiva o 3 PRINC PIO DO TESTE O teste baseado na t cnica ELISA Enzyme linked Immunosorbent Assay 1 8 O antig nio composto de V rus Herpes tipo 1 e 2 purificado e inactivado liga se fase s lida tiras de 8 po os As imunoglobulinas espec ficas ligam se ao antig nio por incuba o com soro humano dilu do Ap s lavagens para eliminar as prote nas que n o reagiram a incuba o efectuada com o conjugado composto de anticorpos monoclonais IgG humanos marcados com peroxidase O conjugado n o ligado el
12. r de cor amarela clara Repetir o teste S rie n o v lida totalmente positiva Contamina o do substrato Tirar nova al quota do substrato Lavagem inadequada Verificar se o aparelho de lavagem est a funcionar correctamente Fraca precis o Lavagem incompleta dos pocos Verificar se o aparelho de lavagem est a funcionar correctamente Aspira o incorrecta dos pocos Verificar se o aparelho de lavagem est a funcionar correctamente Erro de pipetagem Verificar o funcionamento da pipeta Adi o de reagente demasiado lenta Evitar deixar secar a placa ap s a opera o de lavagem Adicionar imediatamente os reagentes Presen a de bolhas Evitar a forma o de bolhas durante a pipetagem Passagem ptica n o limpa Verificar se a fonte de luz e o detector do aparelho est o sujos Limpar o fundo da placa com um papel macio Revela o de cor inadequada Tempos de incuba o ou temperatura incorrectos Verificar os controlos de temperatura e tempo Respeitar as instru es de utiliza o recomendadas Volume incorrecto de substrato adicionado placa Verificar o funcionamento da pipeta Portugu s 8 10 17 REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS 1 2 3 G B Wisdom Enzyme Immunoassay Clin Chem 22 1243 1976 S Land et al Rapid diagnosis of herpes simplex virus infections by enzyme linked immunosorbent assay J Clin Mic
13. ra composta pelo soro recolhido da forma habitual a partir da veia e submetido a tratamento com todas as precau es ditadas pelas boas pr ticas de laborat rio O soro fresco pode ser conservado durante 4 dias a 2 8 ou congelado por per odos mais prolongados a 20 podendo ser congelado um maximo de 3 vezes As amostras descongeladas devem ser cuidadosamente agitadas antes do teste A inactiva o t rmica pode levar a resultados err neos A qualidade da amostra pode ser seriamente afectada por contamina o microbiana podendo conduzir a resultados err neos As amostras fortemente lip micas ict ricas ou contaminadas dever o ser evitadas O plasma humano n o pode ser utilizado no teste 8 PROCEDIMENTO DE TESTE T cnica Manual Preparar o n mero de tiras necess rias Preparar a solu o de lavagem diluindo o Tamp o de Lavagem 10x 100 ml 900 ml H20 Diluir as amostras 1 101 distribuindo 10 uL de soro em 1 ml de diluente Deixar um po o para o controlo preparado utilizando 100 ul da mistura de substrato Distribuir 100 ul de cada amostra dilu da por po o recomenda se a realiza o do teste em duplicado Colocar os controlos N O DILUIDOS se poss vel em duplicado numa tira 100 ul em cada po o O requisito m nimo um controlo negativo 2 valores de cut off e 1 controlo positivo Cobrir os po os com fita adesiva e incubar durante 45 minutos a 37 C Depois de quatro lavagens durant e 30 segundos 300 yl
14. robiol 19 865 1984 B Gonik et al Comparison of two enzyme linked immunosorbent assays for detection of herpes simplex virus antigen J Clin Microbiol 29 436 1991 C Gleaves et al Evaluation of an enzyme immunoassay for the detection of herpes simplex virus HSV antigen from clinical specimens in viral transport media J Virological Meth 28 133 1990 M Morgan and T Smith Evaluation of an enzyme linked immunosorbent assay for the detection of herpes simplex virus antigen J Clin Micronbiol 19 730 1984 D Ho et al Indirect ELISA for the detection of HSV 2 specific IgG and IgM antibodies with glycoprotein G gG 2 J Virological Meth 36 249 1992 R Eberle et al The immune response to herpes simplex virus comparison of the specificity and relative titers of serum antibodies directed against viral polypeptides following primary herpes simplex virus type 1 infections J Med Virology 16 1247 1985 J E Kuhn et al Analysis of the IgM and IgG antibody response against herpes simplex virus type 1 HSV 1 structural and nonstructural proteins J Medical Virology 23 135 1987 Portugu s 9 10 The other languages which are required in conformity to the European Directive can be obtained from your local Bio Rad agent Les autres langues requises par la Directive Europ enne sont disponibles aupr s de votre repr sentant Bio Rad local Los otros idiomas que se requiren para la conformidad de la Dir
15. s 4 10 6 PRECAUC ES i PARA UTILIZA O EXCLUSIVA NO DIAGN STICO IN VITRO Cuidado Este dispositivo cont m materiais de origem humana que foram testados e forneceram uma resposta negativa pelos m todos aprovados pela FDA quanto presen a de HbsAg e anticorpos anti HIV 1 anti HIV 2 e anti HCV Uma vez que nenhum teste de diagn stico pode fornecer garantia absoluta quanto aus ncia de agentes infecciosos todo o material de origem humana dever ser considerado como potencialmente infeccioso No manuseamento de materiais de origem humana todas as precau es normalmente adoptadas na pr tica laboratorial dever o ser cumpridas Informa es quanto Sa de e Seguran a 1 N o pipetar com a boca Usar luvas descart veis e culos de protec o durante o manuseamento de amostras e a realiza o do ensaio Lavar cuidadosamente as m os quando terminar 2 Os seguintes reagentes cont m baixas concentra es de subst ncias perigosas ou irritantes a a Solu o Tamp o de Lavagem cont m detergentes b o conjugado cont m fenol c o substrato cido d os calibradores cont m 0 09 de Azida de S dio como conservante que pode reagir com o chumbo e o cobre das canaliza es formando azidas met licas potencialmente explosivas Para eliminar irrigar com grande volume de gua por forma a impedir a forma o de azidas Se qualquer dos reagentes entrar em contacto com a pele ou os olhos lavar a zona afectada com g
16. ua abundante 3 Os dispositivos n o descart veis devem ser esterilizados ap s a utiliza o O m todo preferencialmente recomendado a esteriliza o em autoclave durante 1 h a 121 os elementos descart veis devem ser esterilizados em autoclave ou incinerados 4 O cido sulf rico necess rio para a Solu o de Paragem e o cido clor drico utilizado na lavagem dos recipientes de vidro s o corrosivos e dever o ser manuseados com os devidos cuidados Em caso de contacto com a pele ou os olhos lavar com gua abundante 5 Os cidos neutralizados e outros res duos l quidos dever o ser descontaminados adicionando um volume de hipocloreto de s dio suficiente para obter uma concentra o final de pelo menos 1 0 Para assegurar uma descontamina o eficaz poder ser necess ria uma exposi o de 30 minutos ao hipocloreto de s dio a 1 6 Qualquer derramamento de materiais potencialmente infecciosos dever ser eliminado imediatamente por meio de papel absorvente e a rea contaminada dever ser lavada com por exemplo hipocloreto de s dio 1 0 antes de se prosseguir com a actividade N o aplicar hipocloreto de s dio sobre zonas derramadas com cido antes de secar primeiro toda a rea Os materiais utilizados para a limpeza de derramamentos incluindo as luvas devem ser eliminados em contentor de res duos biol gicos potencialmente perigosos N o esterilizar materiais que contenham hipocloreto de s dio Precau
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