HCV BLOT 3.0 - MP Biomedicals
Contents
1. Diagnostics HCV BLOT 3 0 WESTERN BLOT ASSAY 0123 DATA de REVIS O 01 06 Observa o altera es MAD 0011 POR 1 real adas REF kit com 18 testes 11130 018 kit com 36 testes 11130 036 NOME E APLICA O MP Diagnostics MPD HCV Blot 3 0 um imunoensaio enzim tico qualitativo para a detec o in vitro de anticorpos para HCV em soro ou plasma humano usado como um teste suplementar mais espec fico em amostras de soro ou plasma humano repetidamente reativas usando procedimentos de triagem como o ensaio de ELISA INTRODU O O HCV foi identificado como a maior causa de transmiss o da hepatite n o A e n o B NANB Testes de triagem s o amplamente utilizados para o diagn stico da infec o da Hepatite C Estes testes de triagem envolvem ant genos da regi o estrutural capsid como tamb m um ou mais ant genos mais espec ficos de regi es n o estruturais do v rus NS3 NS4 NS5 Testes de triagem repetidamente positivos requererm testes adicionais e mais espec ficos para confirmar a soropositividade para o HCV Rea es falso positivas s o poss veis se forem utilizados m todos de triagem convencionais tais como HCV imunoenzim ticos ELISA Testes Confirmat rios adicionais devem incluir ant genos virais individuais como tamb m controles negativos apropriados O MP Diagnostics HCV BLOT 3 0 inclue ant genos estruturais e n o estruturais do HCV e usado co2. Ec REP MP Biomedicals Asia Pacific Pte Ltd 85 Science Park Drive 04 01 The Cavendish Singapore Science Park Cingapura 118259 Tel N 65 6775 0008 Fax N 65 6775 4536 E mail enquiry ap mpbio com Medical Technology Promedt Consulting GmbH Altenhofstrasse 80 D 66386 St Ingbert Alemanha Tel N 49 68 94 58 1020 Fax N 49 68 94 58 1021 E mail info mt procons com Escrit rios Regionais MP Biomedicals Suisse S A Halle de Fret Aeroport P O Box 1015 1211 Genebra 5 Su a Tel N 4122 788 1908 Fax N 4122 788 1986 E mail mpbiosuisse mpbio com O nome e o logotipo Genelabs s o licenciados da Genelabs Technologies Inc e FIGURA 1 a b m E E 8 Bo mm Controle Reativo Fraco Controle Reativo Forte Controle N o Reativo Nota A posi o da banda GST est indicada mas a banda n o ficar vis vel se o soro n o for reativo para 1 a banda GST 8 11 3 banda controle Core NS3 1 ns3 2 ao HGV NS4 NS5 GST banda controle 1 banda controle 12
3. 2008 3 Usar at Dispositivo Sin nimos m dico para Data de Validade diagn stico in vitro C digo de Lote EST Sin nimos N mero de N mero de lote cat logo C digo da remessa Aten o Limites de N Ver Instru es temperatura de Uso i Representante Fabricante ganl A EC REP Autorizado na Comunidade NV Cont m o suficiente Europ ia para lt n gt testes CH E instru es de uso Q N o reutilize PRINC PIOS QU MICOS E BIOL GICOS DO PROCEDIMENTO As tiras de nitrocelulose cont m quatro prote nas recombinantes do HCV e formam o Capsid NS3 NS4 e regi es NS5 do genoma do HCV As prote nas de HCV s o expressadas como GST fus o prote nas assim uma GST banda controle incluida para indicar reatividade para nativa GST As tiras de nitrocelulose tamb m cont m uma banda controle IgG e a banda anti IgG As tiras de nitrocelulose s o incubadas individualmente com amostras de soro ou plasma humanos dilu dos e controles Anticorpos espec ficos do HCV se presentes nas amostras ir o se ligar as prote nas de HCV nas tiras As tiras s o lavadas para remover materiais n o ligados e depois incubadas utilizando se conjugado enzim tico purificado com fosfatase alcalina O anticorpo conjugado ir se ligar a qualquer ant geno anticorpo apresentado na tira O conjugado n o ligado ser removido das tiras pelo processo de lavagem O BCIP NBT substrato ser adicionado para visualiza o das prote na
4. Para melhores resultados dispense todos os reagentes enquanto estiverem frios e retorne os ao armazenamento 2 C a 8 C o mais r pido poss vel 9 Recomenda se que a vidraria a ser utilizada com os reagentes seja lavada com cido clor drico 2M e enxaguada abundantemente com gua destilada ou deionizada antes do uso 10 Use somete gua de qualidade grau reagente deionizada ou destilada para diluir os regentes 11 Todos os reagentes devem ser bem misturados antes de uso 12 A solu o de Conjugado deTrabalho a Solu o de Tamp o de Lavagem Dilu da e a Solu o Tamp o para Blotting devem ser preparadas logo antes do uso 13 A solu o de Conjugado de Trabalho deve ser preparada usando um recipiente Becher de polipropileno 14 N o exponha os reagentes ou realize testes em reas que apresentem altos n veis de vapores de desinfetantes qu micos por exemplo vapores de hipoclorito durante as etapas de armazenamento ou de incuba o O contato inibe a rea o colorida Da mesma forma n o exponha os reagentes luz intensa 15 O ensaio dever ser realizado preferencialmente temperatura ambiente 25 C 3 C 16 Certique se que as tiras de testes est o dispostas com os n meros nas tiras voltados para cima 17 Para o ensaio de WesternBlot importante usar um agitador de plataforma oscilante e n o um agitador rotativo Caso contr rio o dempenho do kit ficar comprometido A velocidade e o
5. de solu o de hipoclorito de s dio antes de continuar o trabalho O hipoclorito de s dio n o deve ser usado em derramametos contendo cidos a n o ser que a rea seja primeiro enxugada com pap l absorvente O material usado inclusive as luvas descart veis deve ser descartado como material biol gico potencialmente perigoso N o esterelize em autoclave material que contenha hipoclorito de s dio 10 Antes do descarte esterelize em autoclave a 121 Ca 15 p s i durante 30 minutos todo o material contaminado utilizado Alternativamente descontamine o material em solu o de hipoclorito de s dio a 5 durante 30 60 minutos antes de descartar em sacos para lixo biol gico 11 Descontamine todas as subst ncias qu micas usadas e reagentes adicionando um volume suficiente de hipoclorito de s dio para obter uma concentra o final de pelo menos 1 Deixe agir durante 30 minutos para assegurar uma desinfec o efetiva 12 N s n o recomendamos a reutiliza o das bandejas de incuba o PRECAU ES ANAL TICAS 1 Amostras de soro plasma de EDTA ou citrato de plasma podem ser utilizados Amostras de plasma coletadas em heparina n o devem ser utilizadas pois podem causar rea es n o especif cas para a banda n cleo de HCV HCV Core 2 O timo desempenho do ensaio requer SEGUIR RISCA ao procedimento de ensaio descrito neste Manual de Instru o Diverg ncias do procedimento podem acarretar resultados an ma
6. C em uma plataforma de agita o velocidade de 12 a 16 oscila es por minuto Remover a solu o tamp o por aspira o 4 Adicionar 2 ml da SOLU O PARA 2 mi BLOTTING em cada canaleta 5 Adicinar 20 ul de cada soro de pacientes 20 ul ou controles nas canaletas apropriadas Deve se ter cuidado para assegurar se que as amostras n o s o adicionadas diretamente sobre as tiras 6 Cobrir a bandeja com a tampa fornecida 60 minutos e incubar durante 1 hora em temperatura ambiente 25 3 C na plataforma de agita o 7 Retirar cuidadosamente a tampa da bandeja evitando respingos ou misturar as amostras Inclinar a bandeja para aspirar a mistura das canaletas Troque as ponteiras do aspirador entre as aplica es das amostras para evitar contamina o cruzada 8 Lavar cada tira 3 vezes com 2 ml de 3x2mil TAMP O DE LAVAGEM DILU DO deixando de molho imersas durante 5 minutos na plataforma de agita o entre cada lavagem 9 Acrescentar 2 ml da SOLU O DE 2 mi TRABALHO CONJUGADO em cada canaleta 10 Cobrir a bandeja e incubar durante 1 hora 60 minutos a temperatura ambiente 25 3 C na plataforma de agita o 11 Aspirar o CONJUGADO das canaletas 3x2ml Lavar como na etapa 8 12 Adicionar 2 ml da SOLU O de 2 ml SUBSTRATO em cada canaleta 13 Cobrir a bandeja e incubar durante 15 minutos 15 minutos na plataforma de agita o AVISOS E PRECAU ES 1 Somente para uso dia
7. do HCV foi avaliado testando amostras de doadores de sangue pacientes com anticorpos conhecidos para HCV pacientes com doen as relacionadas com HCV e pacientes com doen as n o relacionadas com HCV Al m disso foi testado em pain is de soroconvers o comercialmente dispon veis Sensibilidade Foram estudadas 330 amostras reativas para anti HCV ELISA das quais 329 amostras foram detectadas reativas para HCV BLOT 3 0 MPD Um resultado negativo foi confirmado como um falso positivo do ELISA Foi calculada sensibilidade como gt 99 9 A sensibilidade tamb m foi avaliada usando 14 pain is de soroconvers o comerciais e 4 baixos ou misturados pain is de t tulo comercialmente dispon veis O desempenho do Diagn sticos do HCV BLOT 3 0 MPD foi compar vel ao Chiron HCV RIBA 3 0 Al m disso o HCV BLOT 3 0 MPD foi capaz de detectar amostras do genotipo do HCV gen tipo 1a 6 no BBI HCV painel do Gen tipo PHW 201 Especificidade Um total de 200 amostras de doadores de sangue foi testado 193 amostras eram negativas enquanto 7 amostras apresentaram um resultado indeterminado Al m disso um total de 280 esp cies cl nicas de infec es vir ticas e bacterianas agudas s neonatal lipemia ictericia e amostras hemolisadas O HCV BLOT 3 0 MPD apresentou alta especificidade nestas amostras LIMITA ES DO METODO Uma excelente performance da rea o requer estrita ader ncia do procedimento descrito O n o cum
8. erceiros por quaisquer danos preju zos perdas de car ter econ mico causados pelo uso ou aplica o do produto PROBLEMAS T CNICOS RECLAMA ES Caso haja algum problema t cnico solicitamos proceder da seguinte forma 1 Anotar o n mero do lote do kite a data de vencimento 2 Conserve o kite os resultados que foram obtidos 3 Contate o escrit rio da MP Biomedicals mais pr ximo ou seu distribuidor local REFER NCIAS 1 Choo Q L et al 1989 Isolation of a cDNA clone derived from a blood borne Non A Non B viral hepatitis genome Science 244 359 62 2 Kuo G et al 1989 An assay for circulating antibodies to a major etiologic v rus of human Non A Non B hepatitis Science 244 362 364 3 Kleinman S Altere o H Busch M et al 19983 Increased detection of hepatitis C v rus infected blood donors by a multiple ant gen HCV enzyme immunoassay Transfusion 32 805 813 4 Van der Poel C L Reesink H W Schaasberg W et al 1990 Infectivity of seropositives for hepatitis C v rus antibodies Lancet 335 558 560 5 Colombo M Kuo G Choo Q L et al 1989 Prevalence of antibodies to hepatitis C virus in Italian patients with hepatocellular carcinoma Lancet 2 1006 8 6 Bruix J Barrera J Calvert X et al 1989 Prevalence of antibodies to hepatitis C virus in Spanish patients with hepatocellular carcinoma and hepatic cirrhosis Lancet 2 1004 6 1004 6 10
9. gn stico in vitro 2 Exclusivamente para uso de Profissional 3 Por favor recorra a bula do produto para informa es sobre componentes potencialmente perigosos INFORMA ES DE SA DE E SEGURAN A humana Nenhum m todo de teste pode oferecer garantia total que produtos de sangue humano n o transmitam infec es CUIDADO Este kit cont m materiais de origem MANUSEI AS AMOSTRAS ASSIM COMO OS CONTROLES REATIVOS E N O REATIVOS COMO AGENTES POTENCIALMENTE INFECCIOSOS Recomenda se que os componentes e amostras dos testes sejam manuseados de acordo com as boas pr ticas de laborat rio O descarte dever ser realizado de acordo com procedimentos de seguran a vigentes O Controle Reativo e o Controle N o Reativo cont m Timerosal e azida s dica enquanto a Solu o Tamp o Estoque Concentrada e a Solu o Tamp o de Lavagem Concentrada cont m Timerosal e o Conjugado cont m azida s dica A azida s dica pode reagir com cobre e o chumbo usados em alguns sistemas de canaliza o formando sais explosivos Embora as quantidades usadas neste kit sejam pequenas o descarte de materiais contendo azida s dica deve ser feito por lavagem com volumes relativamente altos de gua de forma a evitar a forma o de azida met lica no sistema de canaliza o As frases de risco R pertinentes s o R20 21 22 Nocivo por inala o em contato com a pele e em caso de ingest o O Substrato cont m 5 bromo 4 cloro 3 indolfosfat
10. la o Precau o Algumas amostras podem provocar manchas escuras no ponto da tira em que s o aplicadas Para evitar este problema deve se i Pipetar a amostra somente ap s a adi o da SOLU O TAMP O PARA BLOTTING ii Inclinar a bandeja ligeiramente elevando a extremidade superior ou inferior da bandeja A SOLU O TAMP O PARA BLOTTING fluir para a extremidade mais baixa da bandeja Adicione a amostra onde a SOLU O TAMP O PARA BLOTTING coletada Quando todas as amostras tiverem sido adicionadas retorne a bandeja posi o horizontal original Certifique se que as tiras se mant m sempre midas durante o procedimento iii Alternativamente caso n o deseje inclinar a bandeja as amostras podem ser adicionadas na extremidade superior ou inferior da canaleta Desta forma a leitura da tira n o ser afetada caso tenham se desenvolvido manchas escuras COMPONENTES DO KIT Descri o dos componentes Quantidade Fornecida TIRAS DE NITROCELULOSE Dispon veis Incorporadas com HCV em 18 ou recombinante estrutural e 36 tiras ant genos n o estruturais Duas bandas de soro controle adicionais IgG anti numano e IgG humano Mantenha as secas e longe de luz CONTROL CONTROLE N O REATIVO 1 frasco Soro humano normal inativado 80 ul n o reativo para o ant geno de superf cie da Hepatite B HBsAg anticorpos para HIV 1 HIV 2 e HCV Cont m azida s dica e timerosal como c
11. los 3 N O MODIFIQUE OU SUBSTITUA REAGENTES DE UM LOTE DE KIT PARA OUTRO Controles conjugado e as tiras de Western Blot s o combinadas entre si para oferecer um desempenho perfeito Use somente reagentes fornecidos com o kit 4 N o use componentes do kit ap s a data de validade impressa no kit 5 Evite contamina o microbiana dos reagentes ao abrir e retirar al quotas dos frascos originais A contamina o reduz prematuramente a vida til dos kits e fornece resultados err neos Use t cnicas ass pticas como por exemplo pipetas ou ponteiras descart veis para retirar al quotas dos frascos 6 Em cada ensaio de amostras de pacientes deve se utilizar os controles do kit em paralelo 7 Use uma ponteira de pipeta nova para cada amostra para evitar contamina o cruzada CONTROLE DE QUALIDADE Os controles N o Reativo e Reativo devem ser usados independentemente do n mero de amostras sob an lise Para que todos os resultados obtidos nos testes sejam considerados v lidos as seguintes condi es dever o ser preenchidas 1 BANDA CONTROLE Anti lgG e IgG CONTROLE As duas bandas controle anti IgG e IgG que se referem ao diagrama abaixo poder o apresentar diferentes rea es em todos os blots A presen a da banda anti lgG indica que o soro foi adicionado na etapa de incuba o inicial A aus ncia da banda controle anti IgG e a presen a da banda IgG na tira indica que houve falha para adici
12. mo um teste comfirmat rio suplementar para an lise e presen a de anticorpos para o HCV INSTRU ES DE ARMAZENAMENTO 1 Conserve o kit HCV BLOT 3 0 MPD e seus componentes a 2 C a 8 C quando n o estiverem em uso 2 Todos os reagentes e tiras do teste permanecem est veis at a data de validade fornecida no kit se conservado entre 2 C a 8 C N o congele os reagentes A Tiras de ant geno e Evite exposi o desnecess ria das tiras de ant geno luz B Reagentes e Armazene os reagentes nos frascos originais e mantenha os tampados ao armazen los e Dispense todos os reagentes ainda frios e volte a armazen los o mais r pido poss vel a 2 C a 8 C e Precipita es podem se formar quando o Substrato armazenado 2 C a 8 C Isto n o afetar o desempenho do kit PRECAU O Evite exposi o desnecess ria do Substrato luz COLETA TRANSPORTE E ARMAZENAMENTO DAS AMOSTRAS Soro amostras de plasma de EDTA ou citrato de plasma podem ser utilizados Amostras coletadas em heparina preferencialmente n o devem ser utilizadas pois podem causar uma rea o n o espec fica para a banda HCV Core As amostras devem ser conservadas 2 C a 8 C se o teste for realizado dentro de 7 dias ap s a coleta ou congelada 20 C se for previsto que o teste ser realizado em mais de 7 dias ap s a coleta prefer vel usar amostras l mpidas e n o hemolisadas Amostras lip micas ic
13. ngulo de inclina o recomendados para o agitador s o de 12 a 16 ciclos por minuto e 5 a 10 graus respectivamente 18 Se usar equipamento automatizado verifique se est aferido antes do uso 19 Certifique se que as amostras s o adicionadas longe da tira A bandeja pode ser agitada e a amostra adicionada no local onde a solu o tamp o for coletada na extremidade inferior Isto evitar a forma o de manchas escuras devido adi o de amostra na tira 20 Evite o uso de congeladores do tipo frost free para armazenar reagentes e amostras PERFIL DO BLOT INTERPRETA O Nenhuma banda de 1 ou maior NEGATIVO reatividade 1 ou maior reatividade para 2 ou mais ant genos do HCV ou POSITIVO 2 maior reatividade somente para banda Core Nenhuma banda do HCV de 1 ou maior reatividade mas o padr o n o corresponde ao crit rio para POSITIVO INDETERMINADO Rea es contendo unicamente a banda controle GST s o consideradas NEGATIVA A rea o da banda controle GST 1 ou mais e 1 ou maior reatividade em um ou mais ant genos de HCV s o considerados INDETERMINADOS Qualquer amostra n o reativa no HCV de outro fabricante de HCV ELISA ou teste confirmat rio poder ser reativo no HCV BLOT 3 0 MPD devido presen a de um nico Epitope neste teste confirmat rio CARACTER STICAS ESPEC FICAS DE DESEMPENHO O desempenho do HCV BLOT 3 0 MPD para a detec o de anticorpos
14. o e azul de nitrotetraz lio classificados por Diretrizes da Comunidade Econ mica Europ ia CEE aplic veis como nocivo Xn As frases de risco R pertinentes s o R20 21 22 Nocivo por inala o em contato com a pele e em caso de ingest o 1 Evite contamina o microbiana dos reagentes ao abrir e retirar al quotas dos frascos originais 2 N o pipetar com a boca 3 Manuseie as amostras de testes as tiras de nitrocelulose o Controle Reativo e N o Reativo como agentes potencialmente infecciosos 4 Use vestu rio de laborat rio e luvas descart veis durante a realiza o do teste Descarte as luvas em sacos pl sticos para lixo biol gico perigoso A seguir lave bem as m os 5 altamente recomend vel que o teste seja realizado numa c mara adequada para material biol gico perigoso 6 Mantenha todo o material longe de alimentos e bebidas 7 Em caso de acidente ou contato com os olhos lave imediatamente com gua em abund ncia e procure orienta o m dica 14 Aspirar o SUBSTRATO e enxaguar as 3x2ml tiras pelo menos tr s vezes com gua grau reagente para parar a rea o a lavagem insuficiente nesta etapa poder provocar o desenvolvimeto de um fundo escuro 15 Usando a pin a remover cuidadosamente as tiras e coloque as sobre papel toalha Cobrir com toalhas de papel e secar Alternativamente deixar as tiras secarem nas canaletas da bandeja 16 Montar as tiras sobre folha de trabalho
15. onar o soro do paciente A aus ncia de qualquer banda no ensaio incluindo as bandas controle indica falha na t cnica ou em algum reagente do kit 2 CONTROLE N O REATIVO Somente a presen a das bandas controle IgG e anti lgG aparecer o na rea o da tira Figo 1c 3 CONTROLE REATIVO Todas as prote nas HCV recombinantes ser o reativas juntamente com o soro controle reativo Adicionalmente as bandas controle anti IgG e IgG tamb m estar o presentes A banda controle GST pode n o estar presente Figo 1b INTERPRETA O DE RESULTADOS O diagrama abaixo apresenta os ant genos e controles do HCV BLOT 3 0 MPD 3 control band Anti lgG band GST Control 1 control band IgG band Strip Identification Core NS3 1 NS3 2 NS4 NS5 Localize e identifique a intensidade das bandas controle A 3 intensificada a anti IgG e a 1 intensificada a banda controle IgG Essas dever o estar vis veis em todas as tiras A intensidade de qualquer banda reativa comparada com essas duas bandas como refer ncia A compara o com essas duas bandas utilizada para avaliar o resultado da rea o para cada ant geno nas tiras PADR O INTERPRETA O 1 Nenhuma reatividade 2 Reatividade lt 1 controle 3 Reatividade 1 controle 1 4 Reatividade gt 1 e lt 3 controle 2 5 Reatividade 3 controle 3 6 Reatividade gt 3 controle 4 8
16. onservantes CONTROLE REATIVO 1 frasco AN Soro humano inativado com 80 ul alta concentra o de anticorpos para HCV e n o reativo para anti HIV 1 e HIV 2 e HBsAg Cont m azida s dica e timerosal como conservantes murfstockmor TAMP O ESTOQUE 1 frasco CONCENTRADA 10x 20 ml Tamp o TRIS com soro de cabra normal inativado por calor Cont m timerosal como conservante sows TAMP O DE LAVAGEM 1 frasco CONCENTRADO 20x 70 ml Tamp o TRIS NaCl com tween 20 Cont m timerosal como conservante CONJUGADO 1 frasco Anti lgG humano de cabra 120 ul conjugado com fosfatase alcalina Cont m azida s dica como conservante suss scir nsT SUBSTRATO 1 frasco Solu o de 5 bromo 4 cloro 3 100 ml indolfosfato BCIP e tetraz lio de nitroazul NBT P PARA BLOTTING 10 embalgens Leite desnatado em p 1g cada Bandejas de incuba o com 9 canaletas cada 2 ou 4 bandejas Manual de Instru es 1 exempler Pin as 1 par Nota O volume fornecido de reagentes suficiente para 4 procedimentos Procedimento 1 Usando pin a retire cuidadosamente o n mero necess rio de TIRAS do tubo e coloque as em cada canaleta com a face numerada voltada para cima Inclua tiras para os controles REATIVO e N O REATIVO 2 Adicionar 2 ml da SOLU O DE 2 mi LAVAGEM DILUIDO em cada canaleta 3 Incubar isoladamente as tiras durante 2 minutos pelo menos 1 2 minutos a temperatura ambiente 25 3
17. pap l branco n o absorvente Monte em folha de trabalho livro branco n o absorvente N o aplicar fitas adesivas sobre as bandas reveladas Observar as bandas Veja Interpreta o dos Resultados e interpretar os resultados Para armazenamento mantenha as tiras no escuro RESUMO DOS PROTOCOLOS DO TESTE Reagentes Qty Dura o Tiras de Nitrocelulose 1 Solu o Tamp o de Lavagem 2 ml 2 mins Solu o Tamp o para Blotting 2ml Amostra 20 ul 60 mins Solu o Tamp o de Lavagem 3x2ml 3 x 5 mins Conjugado 2ml 60 mins Solu o Tamp o de Lavagem 3x2ml 3 x 5 mins Substrato Pronto para uso 2ml 15 mins gua destilada 3x2ml QUANTIDADE NECESS RIAS DE REAGENTES PARA VARIAS TIRAS N MERO DE TIRAS A SEREM USADAS Reagentes 3 6 9 15 20 27 36 1X Solu oTamp o 60 100 140 240 300 400 520 de Lavagem ml 1X Solu o Tamp o 20 40 60 80 100 120 160 para Blotting ml Conjugado ul 11 17 23 35 45 59 77 Substrato ml 11 17 23 35 45 59 77 P de Blotting 9 1 2 3 45 6 8 8 Consulte um m dico imediatamente caso ocorra ingest o de materiais contaminados ou contato com feridas abertas ou outras solu es de continuidade da pele 9 Enxugue imediatamente derramamentos de materiais infecciosos com papel absorvente e limpe imediatamente a rea contaminada com 1
18. primento poder resultar em rea es aberrantes Um resultado NEGATIVO n o exclui a possibilidade de infec o pelo v rus do HCV Um resultado INDETERMINADO n o poder ser considerado um diagn stico de infec o pelo HCV Rea o de maior ou igual 1 sobre um ant geno de HCV ser considerado como uma rea o n o espec fica uma indica o de uma infec o passada solucionada ou uma indica o de uma recente soroconvers o N s recomendamos a restestagem com uma nova amostra de dois a seis meses ap s Amostras de soro que apresentem resultados indeterminados podem ser testadas por PCR para futuras determinacoes quer a pessoa seja exposta ou infectada com HCV ISEN O DE RESPONSABILIDADE EXPL CITA LIMITADA O fabricante n o oferece nenhuma garantia expressa se n o a de que o kit de teste funcionar como um ensaio diagn stico in vitro dentro das especifica es e limita es descritas neste Manual de Instru es do Produto quando usado em conformidade com as instru es nele contidas O fabricante isenta se de qualquer garantia expressa ou impl cita incluindo as garantias expressas ou impl citas em rela o a capacidade de comercializa o de utiliza o ou utilidade impl cita para quaisquer outros fins A responsabilidade do fabricante limita se a substitui o do produto ou reembolso do pre o de compra do produto O fabricante n o ser considerado respons vel pelo comprador nem por t
19. s reativas nas tiras PREPARA O DOS REAGENTES 1 SOLU O TAMP O DE LAVAGEM DILU DO A TAMP O DE LAVAGEM DILU DO deve ser preparado recentemente antes do uso B Diluir 1 volume do TAMP O DE LAVAGEM CONCENTRADO 20X com 19 volumes de gua grau reagente Misturar bem 2 SOLU O TAMP O PARA BLOTTING A TAMP O PARA BLOTTING deve ser preparado recentemente antes do uso B Diluir 1 volume do TAMP O ESTOQUE CONCENTRADO 10X com 9 volumes de gua grau reagente Misturar bem C Adicionar 1 g de PO PARA BLOTTING para cada 20 ml do TAMP O ESTOQUE DILU DO preparado no passo 2 B acima Misturar bem D Misturar novamente antes de dispensar 3 SOLU O DE TRABALHO DO CONJUGADO Nota Prepare a solu o em recipiente de polipropileno proveta A SOLU O DE TRABALHO DO CONJUGADO deve ser preparado recentemente antes do uso B Preparar a SOLU O DE TRABALHO DO CONJUGADO diluindo o CONJUGADO 1 1000 no TAMP O PARA BLOTTING por exemplo 5 CONJUGADO para 5ml do TAMP O PARA BLOTTING 4 SOLU O do SUBSTRATO pronto para uso A Dispensar o volume necess rio diretamente do frasco Usar uma pipeta limpa Fechar bem o frasco ap s o Uso PROCEDIMENTO DO TESTE Nota A Aspirar todos os produtos qu micos e reagentes utilizados para o sistema de aspira o contendo hipoclorito de s dio B Todas as incuba es devem ser realizadas em plataforma de agita o por osci
20. t ricas ou contaminadas part culas ou bact rias devem ser filtradas a 0 45um ou centrifugadas antes do teste Os soros dos pacientes podem ser inativados mas esta n o uma exig ncia para timo desempenho de teste Inative da seguinte forma 1 Afrouxe as tampas dos recipientes de soro 2 Aque a o soro a 56 C durante 30 minutos em banho maria 3 Deixe o soro esfriar antes de apertar novamente as tampas 4 O soro pode ser mantido congelado at a an lise Recomendamos que os soros dos pacientes n o sejam submetidos a v rios ciclos de congelamento e descongelamento antes de serem analisados MATERIAIS ADICIONAIS NECESS RIOS MAS N O FORNECIDOS e gua deionizada ou destilada Luvas descart veis Plataforma de Agita o com velocidade de agita o na faixa de 12 a 16 oscila es por minuto e com capacidade de inclina o entre 5 a 10 para lavagem uniforme das membranas Pipetadores e ponteiras de volumes apropriados Sistema de aspira o e conten o em hipoclorito de s dio 56 C banho maria opcional Hipoclorito de s dio para desinfec o DESCRI O DOS S MBOLOS USADOS Os s mbolos gr ficos usados ou encontrados nos produtos e embalagens MP Diagnostics est o indicados a seguir Estes s o os s mbolos mais comuns em dispositivos m dicos e respectivas embalagens Estes s mbolos s o explicados com mais detalhes no British e European Standard BS EN 980
Download Pdf Manuals
Related Search