SeroELISATM Chlamydia TRUE IgMTM
Contents
1. da CDC NIH Bioseguran a em Laborat rios Microbiol gicos e Biom dicos 1988 A Solu o Substrato Cromog neo um produto que provoca irrita o na pele e membranas mucosas Evitar o contacto directo Para Diagn stico In Vitro 9 Tampa da placa 1 Unidade 10 Manual de Instru es 1 Material necess rio mas n o fornecido 1 Tubos de ensaio limpos para dilui o das amostras de soro 2 Micropipetas ajust veis ou pipeta multicanal 5 50 50 200 e 200 1000 ul e pontas descart veis 3 Pipetas de pl stico descart veis tamanhos sortidos e dispositivos para aspira o 4 Bal o volum trico de um litro 5 Proveta volum trica de 50ml 6 Placa ou frasco de lavagem para ELISA 7 Toalhas de papel ou papel absorvente 8 Agitador autom tico vortex 9 Banho a 37 C com cobertura ou c mara h mida colocada numa incubadora a 37 1 C 10 Refrigerador a 4 C 11 Leitor de ELISA com filtro de 450nm 12 Agua destilada ou desionizada para dilui o do Tamp o de Lavagem concentrado Conserva o e Estabilidade dos Reagentes Composi o do Kit Todos os materiais fornecidos dever o ser armazenados 2 8 C Quando mantidos a esta temperatura os reagentes do teste permanecer o est veis at expira o da data de validade indicada na embalagem do kit A exposi o de componentes fechados ou selados na origem temperatura ambiente por algumas horas n o ir provocas d2. mulheres A endometrite salpingite poder conduzir a oclus o tubular aumentando o risco de gravidez extra uterina e de infertilidade A infec o genital poder causar uma infec o aguda e persistente ocasionalmente sem quaisquer sintomas cl nicos Geralmente estas infec es s o trat veis aquando do seu diagn stico No entanto sem qualquer tratamento a infec o poder progredir para uma inflama o cr nica severa conduzindo a infertilidade gravidez ect pica indu o de aborto e parto prematuro Al m do mais crian as de mulheres infectadas podem ser infectadas aquando do nascimento podendo provocar conjuntivites ou pneumonia 5 M112 01P 05 10 13 C pneumoniae um patog nio respirat rio importante nos humanos e provoca at 10 dos casos de pneumonia adquirida em comunidade Foi associada a doen as respirat rias agudas pneumonia asma bronquite faringite s ndrome pulmonar agudo da drepanocitose doen a coron ria e s ndrome Guillain Barr 6 C psittaci infecta uma gama de esp cies hospedeiras diversa desde moluscos at aves e mam feros e tamb m provoca pneumonia severa Os testes serodiagn sticos que se baseiam em marcadores imunol gicos espec ficos s o usados como ferramenta n o invasiva de diagn stico para identifica o tanto de infec es distais como profundas 7 Descobriu se que o anticorpo IgM ANTI Chlamydia de grande valor para o diagn stico de pneumonias provocad
3. C 0483 SeroELISA Chlamydia TRUE IgM Imunoensaio ligado a uma enzima ELISA para detec o de anticorpos IgM espec ficos contra Chlamydia em soro humano Manual de Instru es Kit de testes para 96 determina es Cat logo N 112 01 Para Diagn stico In Vitro Apenas para uso profissional Armazenar a 2 8 C N o Congelar Savyon Diagnostic Ltd 3 Habosem St Ashdod 77610 ISRAEL Tel 972 8 8562920 Fax 972 8 8523176 E mail support savyondiagnostic com Interesse Clinico O kit SeroELISA Chlamydia TRUE IgM foi concebido para detec o de anticorpos espec ficos contra Chlamydia numa nica amostra de soro humano por um imunoensaio ligado a uma enzima ELISA Para diagn stico In Vitro Introdu o Chlamydia uma bact ria gram negativa intracelular obrigat ria que provoca doen as agudas e cr nicas quer em esp cies mamiferas como de aves O g nero Chlamydia compreende quatro esp cies C trachomatis C pneumoniae C psittacie C pecorum C trachomatis esta dividida em 15 serovares 1 Os serovares A B Ba e C sao agentes de tracoma 2 a principal causa de cegueira evitavel end mica nos paises do terceiro mundo Os serovares L1 L3 s o agentes de linfogranuloma ven reo Os serovares D K s o a causa mundial mais comum de infec es genitais sexualmente transmiss veis cervicite endometrite salpingite 3 nas mulheres e uretrite 4 tanto nos homens como nas
4. Huttunen J K Leiononen M Ekman M R Makela P H and Valtonen V 1988 Serological evidence of an association of a novel Chlamydia TWAR with chronic coronary heart disease and acute myocardial infection Lancet Il 983 986 Puolakkainen M Saikku P Leinonen M Nurminen V Vaananen P and Makela P H 1984 Chlamydial Pneumonitis and tis Serodiagnosis in Infants J Infect Dis 149 598 604 Grayson J G 1989 Chalmydial pneumoniae Strain TWAR Chest 95 664 669 Gardner P S Rapid Virus Diagnosis In Voller A Bartlett A and Bidwell D Eds Immunoassays for the 80s pp 353 360 MTP Press Limited 1981 Chantler S and Diment J A Current Status of Specific IgM Antibody Assays In Voller A Bartlett A and Bidwell D Eds Immunoassays for the 80s pp 417 430 MTP Press Limited 1981 Numazaki K Chiba S Yamanaka T Moroboshi T Aoki K Nakao T 1985 Detection of IgM Antibodies againts Chlamydia trachomatis by Enzyme Linked Fluorecence Immunoassay J Clin Pathol 38 733 739 M112 01P 05 10 13 Obelis s a European Authorized Representative Center Boulevard G n ral Wahis 53 1030 Brussels Belgium Tel 32 2 732 59 54 Fax 32 2 732 60 03 e mail mail obelis net
5. ano a testar tem de ser posto em contacto com o revestimento de material antig nico dos po os da placa de microtitula o O anticorpo espec fico quando presente no soro do paciente liga se ao antig nio que reveste a placa forma um complexo antig nio anticorpo e todos os restantes componentes do soro s o removidos aquando da fase de lavagem e AntilgM humano espec fico contra a cadeia u conjugado com peroxidase de r bano HRP adicionado aos po os Se se formar um complexo antig nio anticorpo no passo anterior o anticorpo conjugado peroxidase ir ligar se a meio do anticorpo do complexo Se n o se formar o complexo antig nio anticorpo o conjugado ser removido na fase de lavagem e E adicionado Substrato TMB A reac o positiva indicada por uma colora o azul que se desenvolve nos po os testes ap s a reac o enzim tica entre a metade da peroxidase com o per xido e o reagente cromag neo Depois de terminada a reac o enzim tica por adi o de solu o cida Stop a absorv ncia dos po os determinada a 450 nm num espectrofot metro e A absorv ncia a 450 nm indicativa da presen a de t tulos de IgM anti Chlamydia nas amostras de soro dos pacientes Procedimento 1 Antig nio Chlamydia Soro positivo para IgM ligados fase s lida Anti Chlamydia Ab A Ag y Complexo AgAb 2 Complexo AgAb Conjugado HRP Anti IgM Humano Abs Complexo AgAb Ab gt 3 Comple
6. anos nos reagentes N O CONGELAR Quando um kit est a uso o material original permanecer est vel durante 60 dias a partir do dia da sua abertura Uma vez aberto a embalagem de alum nio que cont m as tiras dever ser selado com fita cola N o dever ser removido o pacote desidratante 1 Placa de microtitula o pr revestida 96 po os Cada embalagem cont m uma microplaca constitu da por 12 tiras remov veis colocadas num suporte pl stico Cada tira est revestida com antig nios de Chlamydia 1 Unidade M112 01P 05 10 13 Colheita das amostras As amostras de soro dever o ser colhidas assepticamente e armazenadas a 2 8 C com 0 05 de azida s dica NaNs como conservante se forem analisadas dentro de alguns dias Para per odos mais longos al quotas dos soros dever o ser mantidas a 20 C Soros turvos ou hemolisados poder o originar resultados menos reprodut veis logo altamente recomend vel que as amostras dos soros a testar sejam l mpidas e n o hemolisadas Procedimento da An lise Notas a Os componentes do kit foram testados como unidade N o misturar componentes de kits de lotes diferentes ou com outros kits do mesmo fabricante b Todos os reagentes devem ser colocados temperatura ambiente antes da sua utiliza o O Diluente do Soro e o Diluente do Conjugado gelificam quando refrigerados Se necess rio acelerar a liquefacgao aquecendo estes co
7. as por C pneumoniae TWAR e C psittaci 8 O padr o serol gico das IgM em pneumonias por Chlamydia o seguinte os anticorpos s o produzidos num est dio inicial de uma infec o apresentam um pico m ximo ap s 1 2 semanas e geralmente apresentam um decl nio gradual at atingir n veis indetect veis cerca de 2 3 meses depois 11 Este padr o tem sido observado em 20 50 das crian as descendentes de mulheres que apresentam culturas positivas quando testadas para Chlamydia trachomatis e ou que demonstraram n veis elevados de anticorpos IgG e IgA espec ficos contra Chlamydia Estas crian as desenvolveram pneumonia por Chlamydia durante os primeiros 6 meses de vida 7 Uma vez que as IgM s est o presentes no caso de uma doen a aguda e ou recente o teste IgM Chlamydia requer apenas uma nica amostra de soro e os resultados poder o ser observados em termos de presen a ou aus ncia de IgM Elevados t tulos de IgG que competem com as IgM para os mesmos s tios antig nicos poder o produzir resultados IgM falso positivos O factor reumat ide RF com actividade auto imune provoca resultados IgM falso positivos 10 Assim a remo o de IgG e RF um passo essencial para o procedimento IgM O teste SeroELISA Chlamydia emprega o antig nio sorovar L gt de C trachomatis largamente reactivo Detectar anticorpos C trachomatis C psittaci e C pneumoniae TWAR Fundamento do teste e O soro hum
8. dever o ser molhadas com solu o Tamp o de Lavagem e devem ser secas batendo levemente sobre papel absorvente limpo antes da aplica o das amostras a testar Se n o houver uma placa de lavagem de ELISA autom tica dever seguir se o seguinte procedimento 1 Remover o n mero desejado de tiras da sua embalagem de alum nio e inserir no suporte de tiras 2 Fazer dilui o de 1 20 do Tamp o de Lavagem concentrado com gua destilada M112 01P 05 10 13 Por exemplo Para uma tira preparar 100ml de Tamp o de Lavagem 5ml de Tamp o de Lavagem concentrado com 95ml de gua destilada Agitar suavemente durante 20 minutos A solu o Tamp o de Lavagem s dever ser preparada imediatamente antes de usar e o excesso dever ser descartado 3 Ap s per odo de incuba o encher cada po o com solu o Tamp o de Lavagem at ao meio 4 Permitir impregna o durante 2 minutos depois remover o conte do da s tira s Repetir este passo duas vezes 5 Secar o topo das tiras batendo suavemente sobre papel absorvente limpo E essencial a lavagem completa dos po os ap s incuba o para obten o de melhores resultados N o se dever o deixar res duos de Tamp o de Lavagem nos po os B Incuba o das Amostras de Soro e dos Controlos 6 Diluir a amostra de soro 1 105 com o diluente do soro fornecido adicionando 10 ul de amostra de soro a 200 ul de diluente de soro 1 21 e posterior dilui o de 25 ul da dilu
9. i o 1 21 com 100 ul de diluente de soro IgM Nota O Diluente do Soro IgM cont m Anti lgG Humana para que haja remo o de anticorpos IgG do soro humano 7 Adicionar 50 de Controlo Positivo Controlo Negativo e amostras dilu das 1 105 para os po os correspondentes nas tiras de teste Adicionar 50 de Diluente de Soro IgM para um po o correspondente ao valor do branco O tempo para dispensar todas as amostras e controlos n o dever exceder os 10 minutos 8 Cobrir as tiras com a tampa da placa e incubar durante 30 minutos a 37 C numa c mara h mida 9 Descartar o conte do l quido dos po os Lavar os po os cinco vezes e secar como nos passos A 3 5 C Incuba o com Conjugado 10 Adicionar 50ul de solu o Conjugado HRP Anti lgM Humana a cada po o 11 Cobrir as tiras com a tampa da placa e incubar durante 30 minutos a 37 C numa c mara h mida 12 Remover o conte do l quido dos po os lavar cinco vezes e secar como nos passos A 3 5 D Incuba o com Substrato TMB 13 Adicionar 100ul de Substrato TMB em cada po o 14 Cobrir as tiras com a tampa da placa e incubar a temperatura ambiente durante 15 minutos 15 Para a reac o adicionando 100ul de Solu o Stop em cada po o Aquando da adi o desta solu o utilizar a mesma sequ ncia e o mesmo intervalo de tempo utilizados na adi o do Substrato TMB no passo 14 16 Calibrar o espectrofot metro com o po o correspondente ao branco Determ
10. inar a absorv ncia a 450 nm e registar os resultados E aconselh vel a determina o imediata da absorv ncia mas n o obrigat ria A determina o da absorv ncia n o dever exceder os 30 minutos ap s paragem da reac o cromog nica Valida o do Teste Caracter sticas de Desempenho Um teste v lido quando A absorv ncia do Controlo Positivo 20 8 a 450nm A absorv ncia do Controlo Negativo lt 0 15 a 450nm Se estas condi es n o foram cumpridas o teste decorrido inv lido e dever ser repetido C lculo do Valor de Cut off COV O valor de cut off calculado de acordo com a seguinte f rmula COV 0 24 x Cp Cn Cn Cp Absorvancia do Controlo Positivo a 450nm Cn Absorvancia do Controlo Negativo a 450nm Interpreta o dos Resultados Absorv ncia a Resultado Interpreta o dos 450nm Resultados Inferior a Negativo Anticorpos IgM anti COV 0 03 Chlamydia n o detect veis COV 0 03 Duvidoso Repetir teste da amostra classificada como duvidosa Se persistir o resultado duvidoso recomend vel testar amostras subsequentes do mesmo paciente Superior a Positivo Indica o de COV 0 03 infec o aguda e ou recente por Chlamydia Limita es do teste m Para o diagn stico n o se dever usar apenas um testes serol gico Dever ser tidos em conta todos os dados cl nicos e laboratoriais n O teste um en
11. mponentes a 37 C durante alguns minutos Podem formar se cristais de sal no Tamp o de Lavagem concentrado quando armazenando a 2 8 C estes cristais dever o ser completamente dissolvidos a 37 C previamente dilui o c N o proceder ao teste na presen a de vapores reactivos por exemplo de cidos de subst ncias alcalinas ou de alde dos ou poeira pois a actividade enzim tica do conjugado HRP Anti lgM Humana poder ficar afectada d N o tocar no topo das tiras N o tocar no limite dos po os com as pontas aquando da distribui o dos reagentes e Usar pontas descart veis Evitar contamina o cruzada entre reagentes f Bater levemente o frasco sobre uma superf cie dura para libertar o l quido possivelmente retido na tampa 9 Evitar a forma o de bolhas de ar nos po os h Dispensar os reagentes l quidos lentamente para evitar salpicos i Os soros Controlo Positivo e Negativo dever o ser testado em simult neo com as amostras de soros todas as vezes que se proceda a um teste j Um po o por teste dever ser usado como valor do branco todas as vezes que se proceda a um teste k Todos os passos do procedimento dever o ser realizados sequencialmente sem interrup es Procedimento do teste Manual Protocolo para automatiza o dispon vel sob requisi o A Lavagem das Tiras E aconselh vel a pr lavagem das tiras mas n o obrigat rio Em qualquer dos casos as tiras
12. saio ELISA de um s serovar L2 O L2 cont m determinantes antig nicos existentes tanto em serovares de Chlamydia trachomatis como no grupo antig nico Com este teste ELISA poder o ser detectados anticorpos contra Chlamydia psittaci Chlamydia pneumoniae TWAR a Acinetobacter calcoaceticus Este teste n o indica o local de infec o por Chlamydia N o substitui o isolamento por cultura quando dispon vel Uma vez que a infec o por Chlamydia poder n o provocar de imediato sintomas significativos o est dio agudo poder ser falhado e poder o j n o existir anticorpos IgM detect veis Isto n o exclui a possibilidade de infec o por Chlamydia Soros contaminados por bact rias ou hiperlip micos poder o originar resultados err neos M112 01P 05 10 13 O teste SeroELISA Chlamydia foi comparado com o teste IPAzyme Chlamydia TRUE IgM produto da Savyon Diagnostic Ltd Cat logo N 012 01 que um teste serol gico aceite para detec o de anticorpos IgM anti Chlamydia A popula o estudada incluiu pacientes com suspeita de infec o por Chlamydia e indiv duos saud veis n 162 Os resultados est o sumariados da seguinte forma Compara o de SeroELISA e IPAzyme eroElisa Positivo Negativo Total IPAzyme Positivo 76 4 80 Negativo 4 78 82 Total 80 82 162 Concord ncia geral 154 162 x 100 95 1 Reac es Cruzadas Pacientes hospi
13. talizados infectados com Neisseria gonorrhea Staphylococcus aureus e Peptostreptococcus anaerobius cujos diagn sticos foram realizados com kits serologicos tamb m foram testados com o kit SeroELISA Chlamydia N o foram detectadas reac es cruzadas significativas Bibliografia 10 11 Yuan Y Zhang Y X Watkins N G and Caldwell H D 1989 Nucleotide and Deduced Amino Acid Sequences for the Four Variable Domains of the Major Outer Memebrane Proteins of the 15 Chlamydia trachomatis Serovars Infection and Immunity 57 1040 1049 Copyright 1989 American Society for Microbiology Treharne J D 1985 the community epidemiology of trachoma Rev Infect Dis 7 760 763 Piura B Sarov l Kleinman D Chaim W and Insler V 1985 Serum IgG and IgA antibodies especific for Chlamydia trachomatis in salpingitis patients as determined by immunoperoxidase assay Eur J Epidemiol 1 110 116 Wang S P Grauston J T Kuo C C Alexander E R and Holmes K K 1977 SeroDiagnosis of Chlamydia trachomatis infection with the microimmunofluorescence test In Nongooccocidal urethritis and related infection D Hobson and K K Holmes Eds P American Society for Microbiology Washington DC p 237 248 Thompson Ill S E and Dretler R H 1982 Epidemiology and Treatment of Clamydial Infections in Pregnant Women and Infants Review of Infection Diseases 4 S747 Saikku P Mattila K Nieminen M S
14. xo Substrato TMB AgAb Aba Vv Solu o Azul VY Solu o Stop do Cromog neo Solu o Amarela Determina o da Absorv nica a 450 nm 2 Controlo Positivo soro humano positivo para anticorpos IgM anti Chlamydia Pronto a usar 1 Frasco 2 0 ml 3 Controlo Negativo soro humano negativo para anticorpos IgM anti Chlamydia Pronto a usar 1 Frasco 2 0 ml 4 Conjugado HRP Anti lgM Humano espec fico para a cadeia u Pronto a usar 1 Frasco 10 ml 5 Diluente do Soro IgM Pronto a usar 1 Frasco 60 ml 6 Tamp o de Lavagem concentrado 20x 1 Frasco 100 ml 7 Substrato TMB Pronto a usar 1 Frasco 14 ml 8 Solu o Stop HSO 1 M Pronto a usar 1 Frasco 15 ml Aviso e Precau es Aviso OS MATERIAIS ANTIGENICOS DE CHLAMYDIA FORAM INACTIVADOS E N O CONT M ORGANISMOS VIVOS DETECT VEIS NO ENTANTO AS TIRAS DEVEM SER CONSIDERADAS E MANIPULADAS COMO MATERIAL DE LABORATORIO POTENCIALMENTE PERIGOSO Precau es Este kit cont m soros humanos que foram testados por t cnicas aprovadas pela FDA e deram resultados negativos para antig nios de HBV ee para anticorpos de HCV HIV 1 e HIV2 Uma vez que nenhum m todo oferece seguran a total quanto a n o transmissibilidade de infec es a partir de sangue humano todos os componentes sangu neos fornecidos neste kit devem ser manipulados como soros ou sangue potencialmente infecciosos de acordo com a recomenda es publicadas no manual
Download Pdf Manuals
Related Search