Reagentes
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1. Conserve os controlos por abrir a 2 8 C Nao congele Os reagentes permanecem est veis ate a data de validade indicada quando armazenados e manipulados conforme descrito no protocolo Podem utilizar se os controlos abertos ate 15 vezes com um tempo maximo de 10 minutos inseridos no instrumento por utiliza o O tempo total em que os tubos de controlo podem estar abertos colocados no instrumento de 2 horas e meia ou 10 minutos por utiliza o Se se deixarem os controlos abertos colocados no instrumento por um per odo total superior a 2 2 horas dever se o eliminar Utilizar o mesmo tubo de controlo durante mais de 15 utiliza es e ou mais de um total de 2 horas pode originar resultados errados Para a estabilidade ideal retire os controlos do sistema imediatamente ap s a amostragem e guarde os a 2 8 C tapados no frasco original Procedimento Para criar novos materiais de CQ para o Ensaio MPO 1 Antes de utilizar Controlos QUANTA Flash MPO pela primeira vez no instrumento tem de introduzir no software o nome o lote as replicas data de validade o valor ou dose e as informa es de DP alvo A partir do ecra Instrument Summary clique no botao de seta Choose more options Ctrl M VW Selecione QC Ctrl F2 Clique no bot o New QC Material Com cada conjunto de Controlos esta incluida uma ficha tecnica de dados especifica do lote Introduza primeiro o nome o numero do lote a data de validade desta folha2. es de conserva o para as amostras 1 Nao conservar as amostras a temperatura ambiente durante mais de 8 horas 2 Se o teste n o for conclu do num prazo de 8 horas guardar a amostra a 2 8 C 3 Se o teste n o for conclu do num prazo de 48 horas ou se houver transporte da amostra congelar a 20 C ou a uma temperatura inferior As amostras congeladas devem ser bem agitadas depois de descongelarem e antes de serem testadas Procedimento Materiais fornecidos 1 Cartucho de Reagente QUANTA Flash MPO Materiais adicionais necess rios mas n o fornecidos Instrumento BIO FLASH com computador Lavagem do Sistema BIO FLASH N mero de Pe a 3000 8205 Ativadores BIO FLASH N mero de Pe a 3000 8204 Tinas BIO FLASH N mero de Pe a 3000 8206 Calibradores QUANTA Flash MPO N mero de Pe a 701131 Controlos QUANTA Flash MPO N mero de Pe a 701132 Utilizar o Analisador Quimioluminescente BIO FLASH 1 Consulte o manual do operador fornecido com o sistema BIO FLASH relativamente a instru es de funcionamento pormenorizadas do analisador quimioluminescente BIO FLASH e do software BIO FLASH Para informa es adicionais e resolu o de problemas com este ensaio contacte a assist ncia t cnica da INOVA Diagnostics Inc no endere o ou atrav s do n mero de telefone indicados no final das Instru es deste Folheto Para esvaziar o recipiente de res duos s lidos abra a gaveta dos res duos Remova o recipien
3. Estes controlos est o concebidos para 15 utiliza es A etiqueta de cada tubo de controlo tem uma fila de 15 caixas que podem retirar se para verificar o n mero de utiliza es O tempo total em que os tubos de controlo podem estar abertos colocados no instrumento de 2 horas e meia ou 10 minutos por utiliza o Se se deixarem os controlos abertos colocados no instrumento durante mais tempo dever se o eliminar Utilizar os mesmos tubos de controlo durante mais de 15 utiliza es e ou mais de um total de 2 horas e meia pode originar resultados errados Refer ncias 1 Kallenberg CG Pathogenesis of ANCA associated vasculitides Ann Rheum Dis 2011 70 Suppl 1 i59 i63 2 Trevisin M Pollock W Dimech W Savige J Evaluation of a multiplex flow cytometric immunoassay to detect PR3 and MPO ANCA in active and treated vasculitis and in inflammatory bowel disease IBD J mmuno l Methods 2008 336 104 112 3 Holle JU Hellmich B Backes M Gross WL Csernok E Variations in performance characteristics of commercial enzyme immunoassay kits for detection of antineutrophil cytoplasmic antibodies what is the optimal cut off Ann Rheum Dis 2005 64 1773 1779 4 Mahler M Radice A Yang W Bentow C Seaman A Bianchi L Sinico RA Development and performance evaluation of novel chemiluminescence assays for the detection of anti PR3 and anti MPO antibodies Clin Chim Acta 2012 413 719 26 5 Trevisin M Pollock W Dimech W Melny J
4. 640 290 45 00 00 284 4 4 40 5 63 Limites de dete o intervalos lineares e pass veis de relat rio De acordo com a CLSI EP17 A o limite de dete o inferior deste ensaio aproximadamente 560 URL que equivalem a 0 4 UQ o que bastante abaixo do intervalo razo vel O limite superior de dete o cerca de 1 000 000 RLU que aproximadamente 330 acima do topo do intervalo razo vel Todo o intervalo pass vel de relat rio desde 3 2 UQ at 739 8 UQ linear Realizou se um estudo de linearidade de acordo com a CLSI EP6 A e abaixo encontram se os dados resumidos Intervalo do E Amostra Teste UQ Inclina o 95 IS Interce o Y 95 IS Oo 1 3 a 12 5 0 99 0 96 a 1 02 0 257 a 0 2 3 2 a 32 1 1 00 0 97 a 1 02 pp prio 1 1 32 3 a 322 5 1 02 0 99 a 1 05 2 6 3 453 a 8 7 93 9 a 939 0 0 97 0 93 a 1 00 32 0 11 76 a 52 2 8 8 a 87 7 1 01 0 98 a 1 04 0 7 0 923 a 2 3 Interfer ncia As amostras que cont m at 10 mg dl de bilirrubina 200 mg dl de hemoglobina 1000 mg dl de triglic ridos 224 mg dl de colesterol ou 500 Ul ml IgM de fator reumatoide n o mostraram interfer ncia no QUANTA Flash MPO QUANTA Flash MPO 701131 Calibradores Para utiliza o em diagn stico In Vitro Aplica o diagn stica Os Calibradores QUANTA Flash MPO destinam se a utiliza o com o imunoensaio quimioluminescente EQL QUANTA Flash MPO no instrumento BIO FLASH Cad
5. Paspaliaris B Gillis D et al Antigen specific ANCA ELISAs have different sensitivities for active and treated vasculitis and for nonvasculitic disease Am J Clin Pathol 2008 129 42 53 6 Xu PC Chen M Cui Z Zhao MH Influence of myeloperoxidase by anti myeloperoxidase antibodies and its association with the disease activity in microscopic polyangliitis Rheumatology Oxford 2010 49 2068 2075 7 Westman KW Bygren PG Eilert Wiik A Wieslander J Rapid screening assay for anti GBM antibody and ANCAs an important tool for the differential diagnosis of pulmonary renal syndromes Nephrol Dial Transplant 1997 12 1863 1868 8 Aslam A Newman TL Misbah SA Audit of the clinical usefulness of a rapid qualitative ELISA screen for antimyeloperoxidase and antiproteinase 3 antibodies in the assessment of patients with suspected vasculitis J Clin Pathol 2003 56 775 777 9 Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories Centers for Disease Control and Prevention National Institutes of Health 2007 Fifth Edition S mbolos Utilizados 09 gt E gt O ml ONTR ONTR me DBE SHETE Meo Dispositivo m dico para diagn stico n vitro Consultar as instru es de utiliza o Limite de temperatura N o reutilizar Riscos biol gicos C digo do lote N mero de refer ncia Utilizar at Fabricante Representante autorizado Cont m o suficiente para lt n gt testes Controlo P
6. 152720 15 Anti MPO ANCA do Center of Disease Control and Prevention CDC e determinou se uma concentra o de 331 6 UQ Para al m disso realizou se o teste de linearidade e determinou se um valor R de 1 0 Pode utilizar se um fator de convers o de 0 3 para converter UQ em Ul ml Ao escolher Ul ml o software BIO FLASH utiliza o fator de convers o para indicar resultados em Ul ml Limita es Estes calibradores est o concebidos para 4 calibra es O tempo total em que os tubos calibradores podem estar destapados dentro do instrumento de 8 horas Se se deixarem os calibradores destapados dentro do instrumento durante mais tempo dever se o eliminar Utilizar os mesmos tubos calibradores durante mais de 4 calibra es e ou mais de 8 horas pode originar uma calibra o incorreta do ensaio que por sua vez pode fornecer resultados errados QUANTA Flash MPO 701132 Controlos Para utiliza o em diagn stico In Vitro Aplica o diagn stica Utilizam se os Controlos QUANTA Flash MPO para controlo da qualidade do kit de imunoensaio quimioluminescente EQL QUANTA Flash MPO testado num instrumento BIO FLASH utilizado na medi o de autoanticorpos para antimieloperoxidase MPO IgG em soro humano Resumo e princ pios do procedimento Os Controlos QUANTA Flash MPO s o constitu dos por um Controlo Negativo e um Controlo Positivo Cada um cont m uma quantidade diferente de anticorpos MPO O Controlo Negativo destina se a a
7. Add System Rinse Remove bottles clique em Next Siga as instru es na janela nova Add System Rinse Add bottle Quando o c digo de barras tiver sido aceite se necess rio clique em Finsih Para esvaziar o Recipiente de Res duos de Fluido a partir do ecr Inventory Bulks clique no bot o Fluid Waste Retire e elimine os res duos de fluido Clique em Next Quando tiver substitu do a garrafa vazia clique em Finish M todo Prepara o do cartucho de reagente Da primeira vez que utilizar o cartucho do reagente tem de seguir os passos seguintes para instalar corretamente o cartucho no instrumento BIO FLASH Nota N o utilize o cartucho de reagente se observar quaisquer sinais de danos Cartucho de Reagente QUANTA Flash MPO As micropart culas assentam durante o envio e armazenamento e necessitam de agita o para voltarem a ficar em suspens o Da primeira vez que utilizar o cartucho inverta suavemente o cartucho 30 vezes evitando a forma o de espuma Verifique a re suspens o completa das microparticulas Se as microparticulas n o estiverem totalmente em suspens o continue a inverter o cartucho at que as micropart culas estejam completamente em suspens o Se as micropart culas n o ficarem em suspens o N O UTILIZE O CARTUCHO Assim que as micropart culas ficarem em suspens o coloque o cartucho de reagente numa superf cie s lida para remover a patilha vermelha Com uma m o segure o cartucho
8. barras nos tubos calibradores e identificar o cartucho de reagente necess rio Consulte o manual do operador fornecido com o sistema BIO FLASH relativamente a instru es de funcionamento pormenorizadas do analisador quimioluminescente BIO FLASH e do software BIO FLASH O instrumento testar ent o cada calibrador em triplicado Ap s os Calibradores terem sido testados o software exigir a valida o da calibra o A partir do ecr Instrument Summary clique no bot o de seta Choose more options Ctrl M V Selecione Calibration Ctrl F3 Na janela Calibra o realce o ensaio pretendido e clique em Details Na nova janela Calibration Details selecione a calibra o que acabou de ser executada A Curva Modelo aparece como uma linha tracejada ao passo que a Curva de Trabalho aparece como uma linha cont nua Se os resultados da calibra o forem v lidos aparecer um bot o de valida o no canto inferior esquerdo do ecr Clique no bot o Validate Calibration Quando a calibra o tiver sido validada o lote do cartucho de reagente onde se realizou a calibra o est pronto a ser utilizado Recomenda se testar os Controlos QUANTA Flash MPO vendidos separadamente numero de pe a 701132 ap s a calibra o de um lote de cartucho de reagente Rastreabilidade Atualmente n o existe uma norma internacional reconhecida para a medi o de anticorpos anti MPO IgG Contudo testou se o soro de refer ncia internacional
9. bom durante um per odo de 8 horas ou 4 calibra es ap s o qual tem de eliminar se A contamina o qu mica dos reagentes pode surgir devido a limpeza ou lavagem inadequada do instrumento Res duos de qu micos laboratoriais comuns como formalina lix via etanol ou detergente podem causar interfer ncia no ensaio Certifique se de que segue o procedimento de limpeza do instrumento recomendado conforme definido no manual do operador do BIO FLASH Precau es particulares de conserva o 1 2 Conserve os calibradores por abrir a 2 8 C Nao congele Os reagentes permanecem estaveis ate a data de validade indicada quando armazenados e manipulados conforme descrito no protocolo Devem eliminar se os calibradores abertos apos 8 horas Procedimento 1 Tem de calibrar se cada lote do cartucho de reagente novo antes da primeira utiliza o O software n o permitir utilizar este lote novo at que seja calibrado Antes da utiliza o tem de misturar se suavemente cada calibrador para garantir a homogeneidade Evite a forma o de espuma uma vez que as bolhas podem interferir com a dete o do n vel do l quido dos instrumentos Destape cada tubo calibrador e coloque ambos numa prateleira de amostras com os c digos de barras virados para a frente atrav s dos espa os na prateleira Coloque a prateleira de amostras no carrossel de amostras no instrumento BIO FLASH e feche a porta O instrumento ler os codigos de
10. entanto os utilizadores tamb m dever o considerar os requisitos regulamentares locais nacionais Antes da utiliza o tem de misturar se suavemente cada controlo para garantir a homogeneidade Evite a forma o de espuma uma vez que as bolhas podem interferir com a dete o do n vel do l quido dos instrumentos Destape cada tubo de controlo e coloque ambos numa prateleira de amostras com os c digos de barras virados para a frente atrav s dos espa os na prateleira Coloque a prateleira de amostras no carrossel de amostras no instrumento BIO FLASH e feche a porta O instrumento ler os c digos de barras nos tubos de controlo e identificar o cartucho de reagente necess rio Consulte o manual do operador fornecido com o sistema BIO FLASH relativamente a instru es de funcionamento pormenorizadas do analisador quimioluminescente BIO FLASH e do software BIO FLASH Rastreabilidade Atualmente n o existe uma norma internacional reconhecida para a medi o de anticorpos anti MPO IgG Contudo testou se o soro de refer ncia internacional 152720 15 Anti MPO ANCA do Center of Disease Control and Prevention CDC e determinou se uma concentra o de 331 6 UQ Para al m disso realizou se o teste de linearidade e determinou se um valor R de 1 0 Pode utilizar se um fator de convers o de 0 3 para converter UQ em Ul ml Ao escolher Ul ml o software BIO FLASH utiliza o fator de convers o para indicar resultados em Ul ml Limita es
11. fica da maquina ser utilizada para converter as ULR em UQ Pode ent o classificar se a reatividade do anticorpo para MPO de acordo com a tabela abaixo Reatividade UQ Negativo lt 20 Positivo 220 A reatividade em UQ est relacionada diretamente com o t tulo do autoanticorpo na amostra do doente Aumentos e diminui es nas concentra es do anticorpo no doente refletir se o numa subida ou descida correspondente em UQ proporcionalmente quantidade de anticorpo O intervalo pass vel de relat rio do ensaio de 3 2 UQ para 739 8 UQ Se o resultado de um doente for inferior a 3 2 UQ ent o o sistema BIO FLASH indic lo como lt 3 2 UQ Visto ser inferior a 20 UQ considera se um resultado negativo Se o resultado de um doente for superior a 739 8 UQ ent o o sistema BIO FLASH indica lo a como gt 739 8 UQ Este considerado um resultado positivo O software BIO FLASH disponibiliza uma op o de Novo teste autom tico Se esta op o estiver selecionada o instrumento retestar automaticamente qualquer amostra que tenha um resultado gt 739 8 UQ diluindo a mais por um fator de 20 e calculara a UQ real utilizando este fator de dilui o adicional Interpreta o dos resultados O Ensaio QUANTA Flash tem capacidade para detetar pequenas diferen as em popula es de doentes Cada laborat rio deve estabelecer os seus pr prios valores de refer ncia com base nos seus controlos e popula o de doentes em fun
12. CDC e determinou se uma concentra o de 331 6 UQ Para al m disso realizou se o teste de linearidade e determinou se um valor R de 1 0 Pode utilizar se um fator de convers o de 0 3 para converter UQ em Ul ml Ao escolher Ul ml o software BIO FLASH utiliza o fator de convers o para indicar resultados em Ul ml Compara o do m todo com dispositivo implicado As amostras para a an lise de compara o do m todo inclu ram as amostras dos estudos de valida o cl nica que estavam dentro do intervalo pass vel de relat rio do ensaio Testaram se estas amostras no QUANTA Flash MPO e no dispositivo implicado ELISA Compara o do M todo MPO ELISA Concord ncia de percentagem N 178 Intervalo de seguran a de 95 QUANTA Concord ncia Pos 100 93 2 100 2 Flash MPO Negativo o 106 106 Concordancia Neg 84 1 76 6 90 0 CIA Concordancia Total 88 8 83 2 93 0 Sensibilidade e especificidade cl nicas O estudo de valida o cl nica incluiu 89 amostras de granulomatose com poliangite GPA 89 com poliangite microsc pica MPA 10 com Sindroma de Churg Strauss CCS 47 com Sindroma de Goodpasture GPS 73 com artrite reumatoide 101 com lupus eritematoso sistemico 7 com Sindroma de Sj gren 47 com doen a inflamat ria intestinal 49 com esclerose sist mica 18 com esclerose m ltipla 29 com v rus da hepatite B 19 com virus da hepatite C 7 com virus da imunodefici ncia humana 10 com s filis e 66 do
13. QUANTA Flash MPO 701133 Para utiliza o em diagn stico n Vitro Reagentes Aplica o diagn stica O QUANTA Flash MPO um imunoensaio quimioluminescente IEQ para a dete o semiquantitativa de autoanticorpos para antimieloperoxidase MPO IgG em soro humano no instrumento BIO FLASH O QUANTA Flash MPO uma ajuda no diagn stico de poliangite microsc pica MPA em conjunto com conclus es cl nicas e outros testes laboratoriais Resumo e explica o do teste Os testes a anticorpos citopl smicos anti neutr filos ANCA revolucionaram o diagn stico e o tratamento das v rias vasculites mediadas autoimunes O ANCA perinuclear DANCA e o ANCA citoplasm tico CANCA provaram ser clinicamente teis para ajudar no diagn stico de vasculites de vasos pequenos como granulomatose com poliangite GPA anteriormente conhecida por granulomatose de Wegener WG glomerulonefrite crescente necrotizante idiop tica incluindo poliangite microsc pica MPA e Sindroma de Churg Sirauss CSS Para al m disso pode encontrar se O ANCA noutras doen as como poliarterite nodosa Sindroma de Goodpasture e doen a inflamat ria intestinal Os dois antig nios principais visados pelo ANCA s o a mieloperoxidase MPO e a serina protease 3 PR3 Realizaram se v rios estudos para analisar a preval ncia de PR3 e MPO ANCA em doen as diferentes e para investigar a sensibilidade e a especificidade desses auto anticorpos gt Recentemente d
14. a calibrador estabelece um ponto de refer ncia para a curva de trabalho utilizada na medi o de autoanticorpos para antimieloperoxidase MPO IgG em soro humano Resumo e princ pios do procedimento O QUANTA Flash MPO CIA utiliza uma Curva Modelo espec fica do lote predefinida que est armazenada no c digo de barras do cartucho de reagente Os Calibradores QUANTA Flash MPO est o concebidos para produzir uma Curva de Trabalho espec fica do instrumento a partir de par metros da Curva Modelo com um ponto de decis o baseado nas carater sticas de desempenho e na avalia o cl nica do QUANTA Flash MPO CIA Antes da atribui o do valor testam se os calibradores em v rios instrumentos com diversos lotes de reagentes Reagentes 1 Calibrador 1 do QUANTA Flash MPO Dois 2 tubos marcados com codigo de barras com tampao contendo anticorpos de soro humano para MPO diluidos previamente prontos a utilizar 0 7 ml cor rosea contendo tampao estabilizadores proteicos e conservantes 2 Calibrador 2 do QUANTA Flash MPO Dois 2 tubos marcados com c digo de barras com tamp o contendo anticorpos de soro humano para MPO dilu dos previamente prontos a utilizar 0 7 ml cor r sea contendo tamp o estabilizadores proteicos e conservantes Advert ncias 1 os calibradores cont m um quimico 0 02 clorafenicol conhecido no Estado da California por causar cancro 2 A azida de s dio utilizada como conservante Este pr
15. de reagente no lugar Com a outra m o segure firmemente a patilha vermelha na parte de tr s do cartucho de reagente e puxe a totalmente para fora Pressione as duas patilhas nos lados da tampa perfurada parte cinzenta e exer a press o na parte superior do cartucho de reagente at encaixar numa posi o bloqueada As patilhas dever o deixar de estar vis veis N O INVERTA O CARTUCHO ABERTO Coloque cuidadosamente o cartucho de reagente em qualquer ranhura aberia no carrossel do reagente do instrumento BIO FLASH Quando o cartucho colocado no carrossel do reagente o instrumento executa a mistura peri dica adicional das esferas Calibra o do ensaio 1 Tem de calibrar se cada lote do cartucho de reagente novo antes da primeira utiliza o O software n o permitir utilizar este lote novo at que seja calibrado Consulte a se o intitulada QUANTA Flash MPO Calibrators 701131 deste Folheto de Instru es relativamente a instru es pormenorizadas sobre como calibrar o cartucho de reagente Quando a calibra o tiver sido validada o lote do cartucho de reagente onde se realizou a calibra o est pronto a ser utilizado Programa o e realiza o de testes 1 Pressione o bot o Worklist na parte superior do ecr e selecione o separador Racks no fundo 2 Selecione o rack de amostra a utilizar real ando o rack no ecr ou digitalizando o c digo de barras com o leitor de c digo de barras port
16. de dados no software Em seguida clique no bot o Add Assay Na nova janela certifique se de que a caixa Show All Assays est marcada Selecione o ensaio MPO da lista e clique em Add Por fim introduza na dose alvo e DP alvo Clique em Save Execute este processo para ambos os controlos Para criar um novo lote para materiais de CQ existentes 1 Antes de utilizar um lote novo de Controlos QUANTA Flash MPO pela primeira vez tem de introduzir no software o lote a data de validade o valor ou dose e as informa es de DP alvo A partir do ecr Resumo do Instrumento clique no bot o de seta Choose more options Ctrl M V Selecione QC Ctrl F2 Realce o ensaio MPO na coluna do lado esquerdo Em seguida realce o material do controlo adequado direita MPON para o Controlo Negativo ou MPOP para o Controlo Positivo Clique no bot o New QC Lot 3 Com cada conjunto de Controlos esta incluida uma ficha tecnica de dados especifica do lote Introduza as informa es desta ficha tecnica de dados no software Estas dever o incluir o n mero do lote a data de validade a dose alvo e o DP alvo Se necess rio clique no bot o Add Assay Na nova janela certifique se de que a caixa Show All Assays est marcada Selecione o ensaio MPO da lista e clique em Add Clique em Save Execute este processo para ambos os controlos Recomenda se a utiliza o dos controlos QUANTA Flash MPO uma vez por cada dia que se utilize o ensaio no
17. entes com outras doen as Incluiram se ainda amostras de 405 dadores de sangue normais Sabe se que os doentes com CSS e GPS cont m anticorpos anti MPO sendo assim exclu dos do c lculo da especificidade Abaixo encontram se os resultados destes testes Estudo cl nico N 661 An lise N o MPA Intervalo de seguran a de 95 Quanta Positivo 71 22 93 Sensibilidade 79 8 69 9 87 6 S Especificidade 96 2 94 2 97 6 Total 89 572 661 Concord ncia Total 93 9 91 9 95 6 Nove amostras discrepantes foram de doentes com GPA 9 foram de doentes com GPS 2 foram de doentes com DII 1 foi de um doente com CSS e 1 foi de um doente com SLE Precis o e reprodutibilidade Avaliou se a precis o do ensaio QUANTA Flash MPO testando 11 doentes de acordo com o CLSI EP5 A2 e abaixo encontram se os dados resumidos Durante os Entre Testes Entre Dias Total Testes Amostra N M dia DP CV oo 00 DP CV DP CV A 8 19 02 48 00 0 0 03 58 04 7 5 B 84 127 13 104 00 0 0 09 74 16 128 pc 8 190 07 38 02 09 08 40 11 55 dD 80 176 07 38 00 00 05 31 09 51 E o 02 ta 38 oo 00 07 32 1 01 51 oF 8 324 14 43 00 00 12 38 19 58 Gi 84 o 14 39 00 00 21 58 25 7 0 CH 8 390 23 60 00 00 33 85 41 104 1 8 as 22 53 00 00 18 44 29 69 DJ 84 1241 63 50 00 00 48 39 79 64 DK 84
18. esenvolveram se ensaios de captura ou fixa o para a dete o de PR3 e MPO ANCA Contrariamente maioria dos ELISA PR3 e MPO ANCA os ensaios de captura e fixa o n o imobilizam o antig nio por absor o acreditando se portanto que demonstram um desempenho de ensaio superior devido a uma exposi o do antig nio ideal A preval ncia de PR3 e MPO ANCA nas suas doen as associadas depende do coorte do doente e da metodologia utilizada para detetar os anticorpos gt Observou se que o PR3 e o MPO ANCA est o correlacionados com a atividade da vasculite A maioria dos especialistas no campo da vasculite autoimune ainda recomenda a utiliza o do ensaio de imonofluoresc ncia com neutr filos humanos fixados com formalina e etanol para o rastreio inicial Baseando se na natureza de r pida progress o da vasculite dos vasos pequenos a dete o r pida de PR3 e MPO ANCA da m xima import ncia Princ pio do procedimento O MPO purificado nativo est revestido por esferas de l tex paramagn ticas que est o guardadas no cartucho de reagente em condi es que conservem o antig nio no seu estado reativo Quando o cartucho do ensaio est pronto para ser utilizado pela primeira vez invertido todo o cartucho v rias vezes at completa mistura dos reagentes O cartucho de reagente ent o carregado no instrumento BIO FLASH No instrumento dilui se previamente uma amostra de soro do doente utilizando tamp o de amost
19. na e conservante b Tampao de ensaio cor de rosa contendo tampao salino Tris Tween 20 estabilizadores proteicos e conservantes C Marcador IgG anticorpos IgG anti humanos marcados isoluminol contendo tamp o estabilizadores proteicos e conservante d Tamp o para dilui o da amostra cor de rosa contendo tamp o salino Tris Tween 20 estabilizadores proteicos e conservantes Advert ncias 1 O tamp o de ensaio cont m um qu mico 0 02 clorafenicol conhecido no Estado da Calif rnia por causar cancro A azida de s dio utilizada como conservante Este produto venenoso e pode ser t xico se for ingerido ou absorvido pela pele ou pelos olhos A azida de s dio pode reagir com componentes de chumbo ou cobre das canaliza es formando azidas met licas explosivas Por esta raz o ao deitar fora os restos de reagentes necess rio deixar correr gua em quantidade abundante para evitar a forma o destas subst ncias Usar equipamento de prote o pessoal apropriado para trabalhar com os reagentes Os salpicos de reagentes devem ser limpos imediatamente Observar todas as regulamenta es ambientais nacionais e locais relativas elimina o de res duos Precau es 1 Este produto destina se a utiliza o para diagn stico In Vitro Este ensaio destina se apenas a utiliza o com o instrumento BIO FLASH Uma vez aberto deve guardar se este cartucho de reagente no carrossel do reagente d
20. o instrumento Deve ter se cuidado para evitar entornar os reagentes quando se coloca pela primeira vez o cartucho reagente no instrumento A contamina o qu mica dos reagentes pode surgir devido a limpeza ou lavagem inadequada do instrumento Res duos de qu micos laboratoriais comuns como formalina lix via etanol ou detergente podem causar interfer ncia no ensaio Certifique se de que segue o procedimento de limpeza do instrumento recomendado conforme definido no manual do operador do BIO FLASH Precau es particulares de conserva o 1 Conserve os controlos por abrir a 2 8 C Nao congele Os reagentes permanecem estaveis at a data de validade indicada quando armazenados e manipulados conforme descrito no protocolo 2 Devem guardar se no instrumento os cartuchos de reagente abertos e permanecem est veis durante um total de 84 dias per odo ap s o qual devem eliminar se O software BIO FLASH monitoriza as datas de validade dos cartuchos colocados bem como dos lotes do cartucho reagente Colheita prepara o e manuseamento de amostras Este procedimento deve ser efetuado com uma amostra de soro As amostras de soro com contamina o microbiana que sofreram tratamento t rmico ou que cont m part culas vis veis n o devem ser utilizadas N o deve utilizar se soro muito hemolizado lip mico ou it rico Ap s a colheita o soro deve ser separado do co gulo O documento H18 A4 da CLSI recomenda as seguintes condi
21. o dos seus pr prios procedimentos estabelecidos Sugere se que os resultados apresentados pelo laborat rio incluam a declara o Obtiveram se os resultados seguintes com o imunoensaio quimioluminescente INOVA QUANTA Flash MPO Valores obtidos com m todos de ensaio de diferentes fabricantes n o podem ser comparados A magnitude dos n veis de anticorpos descritos n o pode ser sempre correlacionada com um t tulo final Limita es do procedimento 1 Nem todos os doentes com poliangite microsc pica s o positivos para anticorpos MPO 2 Os resultados deste ensaio devem ser utilizados em conjunto com as conclus es cl nicas e outros testes serol gicos 3 A mistura inadequada dos reagentes antes da primeira utiliza o pode levar a resultados erroneos 4 As carateristicas de desempenho deste ensaio nao foram determinadas para outras matrizes al m do soro Valores esperados Para estabelecer os valores esperados testou se o soro de 400 dadores de sangue aparentemente saud veis A m dia foi lt 3 2 UQ e os 95 foram calculados como lt 3 2 UQ Recomenda se que cada laborat rio estabele a os seus pr prios intervalos de refer ncia para refletir a popula o de refer ncia Rastreabilidade Atualmente n o existe uma norma internacional reconhecida para a medi o de anticorpos anti MPO IgG Contudo testou se o soro de refer ncia internacional 152720 15 Anti MPO ANCA do Center of Disease Control and Prevention
22. oduto venenoso e pode ser t xico se for ingerido ou absorvido pela pele ou pelos olhos A azida de s dio pode reagir com componentes de chumbo ou cobre das canaliza es formando azidas met licas explosivas Por esta raz o ao deitar fora os restos de reagentes necess rio deixar correr gua em quantidade abundante para evitar a forma o destas subst ncias 3 Todo o material de origem humana utilizado na prepara o dos controlos deste produto foi testado e deu resultados negativos para m todos aprovados pela FDA para anticorpos de HIV HBsAg e HCV Contudo nenhum teste pode garantir com certeza absoluta a aus ncia de HIV HBV HCV ou outros agentes infeciosos Portanto devem manipular se os Calibradores QUANTA Flash MPO como se fossem qualquer material potencialmente infecioso Usar equipamento de prote o pessoal apropriado para trabalhar com os reagentes Os salpicos de reagentes devem ser limpos imediatamente Observar todas as regulamenta es ambientais nacionais e locais relativas elimina o de res duos Precau es 1 2 Este produto destina se a utiliza o para diagn stico In Vitro Os calibradores QUANTA Flash MPO destinam se a ser utilizados com o ensaio QUANTA Flash MPO N o transfira os reagentes calibradores para tubos secund rios O instrumento utiliza os c digos de barras nos tubos para combinar os calibradores com o tipo de ensaio adequado Ap s aberto um tubo calibrador mant m se
23. os aprovados pela FDA para anticorpos de HIV HBsAg e HCV Contudo nenhum teste pode garantir com certeza absoluta a aus ncia de HIV HBV HCV ou outros agentes infeciosos Portanto devem manipular se os Controlos QUANTA Flash MPO como se fossem qualquer material potencialmente infecioso Usar equipamento de prote o pessoal apropriado para trabalhar com os reagentes J Os salpicos de reagentes devem ser limpos imediatamente Observar todas as regulamenta es ambientais nacionais e locais relativas elimina o de res duos Precau es 1 2 Este produto destina se a utiliza o para diagn stico In Vitro Os Controlos QUANTA Flash MPO destinam se a ser utilizados com o ensaio QUANTA Flash MPO N o transfira os reagentes do controlo para tubos secund rios O instrumento utiliza os c digos de barras nos tubos para identificar o controlo Uma vez aberto cada tubo de controlo est em condi es de ser utilizado at 15 vezes com um tempo m ximo de 10 minutos inserido no instrumento por utiliza o A contamina o qu mica dos reagentes pode surgir devido a limpeza ou lavagem inadequada do instrumento Res duos de qu micos laboratoriais comuns como formalina lix via etanol ou detergente podem causar interfer ncia no ensaio Certifique se de que segue o procedimento de limpeza do instrumento recomendado conforme definido no manual do operador do BIO FLASH Precau es particulares de conserva o 1
24. ositivo Controlo Negativo Calibrador 1 Calibrador 2 Reciclar a caixa de papel Este lado para cima QUANTA Flash uma marca comercial registada da INOVA Diagnostics Inc BIO FLASH uma marca comercial registada da Biokit S A O 2012 Fabricado por INOVA Diagnostics Inc 9900 Old Grove Road San Diego CA 92131 Estados Unidos da Am rica Assist ncia T cnica apenas EUA e Canad 877 829 4745 Assist ncia T cnica Fora dos EUA 1 858 805 950 support inovadx com Representante Autorizado na UE Medical Technology Promedt Consulting GmbH Altenhofstrasse 80 D 66386 St Ingbert Alemanha Tel 49 6894 581020 Fax 49 6894 581021 www mt procons com 621130PRT Setembro 2012 Revisao 2
25. ra adicionado a uma tina pl stica descart vel Pequenas quantidades de soro dilu do do doente as esferas MPO e o tamp o de ensaio s o todos combinados numa segunda tina e misturados Incuba se esta tina a 37 C As esferas s o ent o magnetizadas e lavadas v rias vezes Adiciona se ent o tina o anticorpo IgG anti humano conjugado de isoluminol e incuba se a 37 C Mais uma vez as esferas s o magnetizadas e lavadas repetidamente O conjugado de isoluminol produz uma rea o luminescente quando se adicionam os reagentes Ativadores tina A luz produzida a partir desta rea o medida como Unidades Relativas de Luz URL pelo sistema tico BIO FLASH As URL s o proporcionais quantidade de conjugado de isoluminol ligado que por sua vez proporcional quantidade de autoanticorpos anti MPO IgG ligados ao MPO nas esferas O ensaio QUANTA Flash MPO utiliza uma Curva Modelo espec fica do lote predefinida que carregada no instrumento atrav s do c digo de barras do cartucho de reagente Baseando se no resultado da execu o de dois calibradores cria se uma Curva de Trabalho espec fica do instrumento que se utiliza para calcular unidades quimioluminescentes UQ a partir da URL obtida para cada doente Reagentes 1 O cartucho de reagente QUANTA Flash MPO contem os reagentes seguintes para 50 determina es a Esferas paramagn ticas revestidas MPO num l quido contendo tamp o estabilizadores de prote
26. te de res duos s lidos e elimine as tinas usadas adequadamente Substitua o recipiente de res duos s lidos feche a gaveta dos res duos e clique em Yes na janela Empty Waste Drawer Para substituir os ativadores clique no bot o Bulks Inventory F9 superior direito a No ecr Inventory Bulks clique no bot o Triggers esquerda Aparecer uma janela nova intitulada Add Triggers Remove old bottles b Abra e retire a gaveta dos res duos no instrumento BIO FLASH Elimine quaisquer tinas na gaveta de res duos secos Clique em Yes na janela Empty Waste Drawer Retire as garrafas ativadoras dos respetivos suportes e clique no bot o Next Desaperte as tampas das garrafas antigas de ativadores e substitua por ativadores novos Certifique se de que as coloca uma de cada vez com as tampas coloridas correspondentes branca com branca e vermelha com vermelha c Siga as instru es na janela nova Add Triggers Add Trigger 2 bottle Quando o c digo de barras tiver sido aceite coloque o Ativador 2 no suporte branco Clique em Next d Siga as instru es na janela Add Triggers Add Trigger 1 bottle Quando o c digo de barras tiver sido aceite coloque o Ativador 1 no suporte vermelho Clique em Finish Substitua a gaveta dos res duos e feche a Para substituir o recipiente da Lavagem do Sistema clique no bot o Bulks Inventory F9 canto superior direito No ecr Inventory Bulks clique no bot o Sys Rinse Na janela
27. til Digitalize ou escreva o nome da amostra selecione o tipo de amostra o tipo de recipiente tubo ta a e selecione MPO a partir do painel do ensaio Repita estes passos para todas as amostras 3 Carregue as amostras nas posi es selecionadas no rack de amostras e carregue o rack no carrossel de amostras do instrumento 4 Se todos os materiais necess rios estiverem colocados no instrumento o cone iniciar estar dispon vel a verde na parte superior do ecr Pressione o icone Start F4 para iniciar o ensaio Controlo de qualidade Os Controlos QUANTA Flash MPO vendidos em separado INOVA N mero de ltem 701132 cont m os Controlos MPO Positivos e Negativos Consulte a se o intitulada QUANTA Flash MPO Controls 701132 deste Folheto de Instru es relativamente a instru es pormenorizadas sobre como introduzir o valor da unidade e o desvio padr o de cada controlo no software bem como sobre o funcionamento dos controlos Recomenda se que se testem os controlos pelo menos uma vez nos dias em que se utiliza o ensaio no entanto os utilizadores tamb m dever o considerar os requisitos regulamentares locais nacionais C lculo dos resultados Para cada lote novo de QUANTA Flash MPO produz se na INOVA uma Curva Modelo de seis pontos Esta curva log stica de quatro par metros est codificada no c digo de barras de cada cartucho de reagente Assim que o cartucho de reagente tenha sido calibrado a curva de trabalho espec
28. valiar a precis o e a exatid o do ensaio com n veis de anticorpo muito baixos O Controlo Positivo destina se a avaliar a precis o e a exatid o do ensaio com n veis de anticorpo desde moderados a elevados Reagentes 1 Controlo Negativo do QUANTA Flash MPO Dois 2 tubos marcados com c digo de barras com tamp o contendo anticorpos de soro humano para MPO dilu dos previamente prontos a utilizar 0 5 ml cor r sea contendo tamp o estabilizadores proteicos e conservantes 2 Controlo Positivo do QUANTA Flash MPO Dois 2 tubos marcados com codigo de barras com tamp o contendo anticorpos de soro humano para MPO dilu dos previamente prontos a utilizar 0 5 ml cor r sea contendo tamp o estabilizadores proteicos e conservantes Advert ncias 1 Os controlos cont m um qu mico 0 02 clorafenicol conhecido no Estado da California por causar cancro 2 A azida de s dio utilizada como conservante Este produto venenoso e pode ser t xico se for ingerido ou absorvido pela pele ou pelos olhos A azida de s dio pode reagir com componentes de chumbo ou cobre das canaliza es formando azidas met licas explosivas Por esta raz o ao deitar fora os restos de reagentes necess rio deixar correr gua em quantidade abundante para evitar a forma o destas subst ncias 3 Todo o material de origem humana utilizado na prepara o dos controlos deste produto foi testado e deu resultados negativos para m tod
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