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APTIMA Neisseria gonorrhoeae Assay Package Insert

1. Esp cime Local N PV FP NV FN pl xa MI desse p pid 1 226 12 2 212 0 53 100 735 100 99 96 7 99 9 857 100 2 197 29 3 164 1 152 96 7 82 8 99 9 982 94 8 99 6 906 994 3 14 4 1 10 O 35 100 398 100 991 950 100 80 0 100 4 260 5 1 254 0 19 100 478 100 99 6 978 100 833 100 Esfrega o 5 199 2 1 196 O 10 100 158 100 995 972 100 667 100 6 294 19 5 269 1 68 950 75 1 99 9 982 958 994 792 996 7 102 0 O 102 O 090 N A 100 964 100 N A 100 8 48 1 0 47 O 24 100 25 100 100 925 100 100 100 Tudo 1 440 72 13 1 353 2 51 97 3 90 6 99 7 990 98 4 99 5 847 999 Feminino 1 227 1 2 213 1 53 91 7 61 5 99 8 99 1 96 7 99 9 846 99 5 2 198 30 0 167 1 157 968 833 999 100 978 100 100 994 3 13 4 0 109 0 35 100 398 100 100 967 100 100 100 4 265 5 O 260 0 149 100 478 100 100 986 100 100 100 Urina 5 49 2 0 197 O 140 100 158 100 100 98 1 100 100 100 6 296 16 1 275 4 68 800 563 943 996 980 100 941 986 7 102 0 0 102 0 090 N A 100 964 100 N A 100 8 49 1 0 48 O 20 100 25 100 100 926 100 100 100 Tudo 1449 69 3 1 371 6 52 920 834 97 0 99 8 994 100 958 99 6 1 70 5 1 64 0 71 100 478 100 985 917 100 833 100 2 46 7 1 38 O 152 100 590 100 974 86 5 99 9 87 5 100 3 45 2 0 43 0 44 100 158 100 100 91 8 100 100 100 Colhigo sfrega o 4 152 1 0 151 0 07 100 25 100 100 976 100 100 100 z pela os 5 130 1 0 129 0 08 100 25 100 100 972 100
2. d An t Sint sintom tico Assint assintom tico N A esp cime n o obtido ou dispon vel para an lise O s mbolo de igual representa resultados equ vocos ou indeterminados ap s repeti o do teste EF esfrega o endocervical feminino UF urina feminina Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 56 502185PT Rev E Desempenho cl nico nos Sistemas DTS Tabela 7d Resultados de esfrega os vaginais de participantes infectados ou n o infectados com N gonorrhoeae de acordo com o estado de infec o do paciente NAAT 1 ME Sdo Ensaio APTIMA COMBO 2 NAAT 2 Ensaio APTIMAGC Estado sintom tico is paciente EF UF EF UF PVS cvs Sint Assint Infectado 43 15 58 Infectado 1 0 1 Infectado 1 0 1 Infectado N A 0 1 1 Infectado 2 2 4 Infectado N A 1 0 1 Infectado 1 1 2 Infectado 1 1 2 Infectado 1 0 1 Infectado 2 1 3 Infectado 1 0 1 Infectado 0 1 1 Infectado 0 1 1 Infectado 1 0 1 N o infectado 5 1 6 N o infectado 1 0 1 N o infectado 1 0 1 N o infectado 5 2 7 N o infectado 0 1 1 N o infectado 2 1 3 N o infecta
3. 305 39 2 264 0 128 100 91 0 100 299 2 97 3 99 9 95 1 100 207 12 0 195 0 5 8 100 73 5 100 100 98 1 100 100 100 NA N A N A N A N A N A N A N A N A N A Tudo 1 321 180 9 1 130 2 13 8 298 9 96 1 99 9 99 2 98 5 99 6 95 2 99 8 1 2 3 N A N A N A N A N A N A N A N A N A N A 4 N A N A N A N A N A N A N A N A N A N A Esfrega o 5 49 7 1 41 O 14 3 100 59 0 100 97 6 87 4 99 9 87 5 100 6 150 37 1 112 0 247 100 90 5 100 99 1 95 2 100 97 4 100 7 54 12 0 42 O 222 100 73 5 100 100 91 6 100 100 100 8 N A N A N A N A N A N A N A N A N A N A Tudo 575 171 10 393 1 299 994 96 8 100 97 5 95 5 98 8 94 5 99 7 Masculino 1 252 53 1 198 O 21 0 100 93 3 100 99 5 97 2 100 98 1 100 2 353 68 3 280 2 198 971 90 1 99 7 989 96 9 99 8 95 8 99 3 3 4 0 0 4 0 0 0 N A 100 39 8 100 N A 100 4 N A N A N A N A N A N A N A N A N A N A Urina 5 200 8 3 189 0 40 100 63 1 100 298 4 95 5 99 7 72 7 100 6 7 8 Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 51 502185PT Rev E Desempenho cl nico nos Sistemas DTS Tabela 6 Sensibilidade especificidade e valores preditivos do ensaio APTIMA GC relativamente ao estado de infec o do paciente por local cl nico e global para esfrega os uretrais masculinos urina masculina esfrega os endocervicais femininos urina feminina esfrega os vaginais colhidos por pacientes assintom ticas e esfrega os vaginais colhidos pelo m dico continua
4. 265 93 351 20 4 71 354 46 4 32 199 150 30 200 46 2 32 198 166 33 199 0 0 0 4 0 0 0 4 44 5 114 35 4 113 36 411 35 4 113 N A N A 2 3 6 266 19 5 270 22 6 267 3 0 8 269 55 11 200 55 11 200 45 3 199 40 2 99 10 2 99 40 2 199 44 5 44 30 434 41 305 82 24 204 5 7 17 2060 83 24 200 75 22 295 N o a BIO N 5 8 12 207 58 12 207 00 0 102 o o 0 102 oo 0102 oo 0 02 8 N A N A 20 149 20 149 214 148 20 1 51 Tudo 16 2 214 1 318 14 3 189 1 322 5 9 85 1 452 49 72 1 459 58 83 1 434 58 84 1 458 EM esfrega o uretral masculino UM urina masculina EF esfrega o endocervical feminino UF urina feminina PVS esfrega o vaginal colhido por paciente CVS esfrega o vaginal colhido pelo m dico Tabela 1a Preval ncia de N gonorrhoeae por local cl nico e global determinada a partir dos resultados do ensaio APTIMA GC utilizando esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt Local n positivos n testado 1 5 0 5 100 2 0 8 1 124 3 0 8 4 475 4 1 4 4 287 5 0 0 0 297 6 0 5 2 364 Tudo 1 0 16 1 647 Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 45 502185PT Rev E Valores esperados dos Sistemas DTS Valores preditivos positivos e negativos para taxas de preval ncia hipot ticas na Am rica do Norte Os valores preditivos positivos e negativos estimados PPV e NPV para diferentes taxas de pr
5. Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 10 502185PT Rev E Sistemas DTS A caixa refrigerada cont m tamb m os seguintes artigos tabuleiro de armazenamento armazenar entre 2 C e 30 C ap s recep o S mbolo Componente Quantidade AR Solu o de reconstitui o de amplifica o APTIMA para GC 1x9 3 mL Solu o aquosa contendo conservantes ER Solu o de reconstitui o para reagente enzim tico APTIMA 1x 3 3 mL Solu o tamp o HEPES contendo um surfactante e glicerol PR Solu o de reconstitui o de sonda APTIMA para GC 1x12 4 mL Solu o tamponada de succinato contendo lt 5 de detergente S Reagente de selec o APTIMA 1x31mL Solu o tamponada com borato a 600 mM contendo surfactante Colarinho de Reconstitui o 3 Cart o de Selagem 1 embalagem Caixa APTIMA Neisseria gonorrhoeae de temperatura ambiente Caixa 2 de 2 armazenar entre 15 C e 30 C ap s recep o S mbolo Componente Quantidade TCR Reagente de captura do alvo APTIMA para GC 1x22mL Solu o salina tamponada contendo fase s lida e olig meros de captura W Solu o de Lavagem APTIMA 1 x 402 mL Solu o tamponada com HEPES a 10 mM contendo 2 de detergente DF Tamp o para o fluido de desactivac o APTIMA 1x402 mL 800 mM soluc o tamponada de bicarbonato 0 Reagente a leo APTIMA 1 x 24 6 mL leo de Silicone Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 11 502185PT Rev E Sistemas DTS
6. Um total de 6 amostras negativas foi verificado como inv lido e exclu do do c lculo Uma an lise separada foi executada numa divis o da popula o do estudo composta das amostras negativas que imediatamente seguiram um alvo alto positivo A taxa de transmiss o para este subgrupo da popula o foi em m dia de 0 95 4 422 Relativamente aos falsos positivos neste subgrupo a taxa de transmiss o variou entre 0 e 2 16 entre os tr s Sistemas TIGRIS DTS Estes resultados demonstram que a contamina o de transmiss es minimizada no Sistema TIGRIS DTS Tabela 15 Resumo da transmiss o global no Sistema TIGRIS DTS n testes o 0 Instrumento negativos Ei total de resultados S Resultados Intervalos de confian a IC de 95 zs positivos falsos GC positivos falsos GC v lidos TIGRIS 1 787 0 0 00 0 00 0 38 TIGRIS 2 791 de 0 13 0 00 0 70 TIGRIS 3 792 4 0 51 0 14 0 29 pague 2 370 5 0 21 0 07 0 49 instrumentos ES XH J a O Sistema TIGRIS DTS 1 n o apresentou resultados positivos falsos para GC directamente ap s um positivo de alvo elevado b O Sistema TIGRIS DTS 2 apresentou um resultado positivo falso para GC directamente ap s um positivo de alvo elevado c O Sistema TIGRIS DTS 3 apresentou tr s resultados positivos falsos para GC directamente ap s um positivo de alvo
7. Materiais necess rios mas dispon veis separadamente Nota Excepto indica o em contr rio as refer ncias de cat logo dos materiais disponibilizados pela Gen Probe s o mencionadas Ref Cat Lumin metro LEADER HC 104747 01 Sistema de captura do alvo Target Capture System TCS 104555 GEN PROBE Incubadoras e v rtex 2 Misturadoras em v rtex multi tubo 102160 3 Banhos de gua com circula o 104586 62 C 1 42C t1 62 CHIC 3 Espa adores para banhos de gua 104627 OU 2 Banhos de calor seco V rtexes SB100 105524 Podem ser necess rios mais banhos SB100 se o volume de testes aumentar Kit de auto detec o APTIMA 301048 2 pipetas eppendorf Repeater Plus 105725 2 pipetas 1 000 uL RAININ PR1000 901715 Pipeta eppendorf 20 uL a 200 uL 105726 Pontas para pipeta de repeti o 2 5 mL 21 381 329 Pontas para pipeta de repeti o 5 0 mL 21 381 330 Pontas para pipeta de repeti o 25 0 mL 21 381 115 Pontas P1000 Style 105049 ponta de di metro especial apenas dispon vel na Gen Probe Pontas de pipeta 20 uL a 200 uL 705512 Fisher Unidades de dez tubos Ten Tube Units TTU TU0022 Cassetes de dez pontas Ten Tip Cassettes TTC 104578 Kit Unissexo APTIMA de Colheita de Esp cimes de Esfrega o para 301041 Esp cimes de Esfrega o Endocervical e da Uretra Masculina Kit APTIMA de colheita de esp cimes de urina para esp cimes 301040 de urina masculinos e femininos Tubos de transporte APTIMA para esp cimes
8. Reagentes e materiais fornecidos Kit do ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 100 testes 2 caixas e 1 kit de controlos Ref Cat 302927 Caixa refrigerada do ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae Caixa 1 de 2 armazenar entre 2 C e 8 C ap s recep o S mbolo Componente Quantidade A Reagente de amplificac o APTIMA para GC 1 frasco cidos nucleicos n o infecciosos secos em solu o tamponada contendo lt 5 de agente de volume E Reagente enzim tico GC APTIMA 1 frasco Transcriptase reversa e RNA polimerase secos em solu o tamponada HEPES contendo lt 10 de reagente de volume P Reagente de sonda APTIMA para GC 1 frasco Sondas de DNA quimioluminescentes n o infecciosas secas em solu o tamponada com succinato contendo lt 5 de detergente TCR B Reagente B de captura do alvo GC APTIMA 1x0 30 mL cidos nucleicos n o infecciosos numa solu o tamp o contendo lt 5 de detergente Caixa APTIMA Neisseria gonorrhoeae de temperatura ambiente Caixa 2 de 2 armazenar entre 15 C e 30 C ap s recep o S mbolo Componente Quantidade AR Solu o de reconstitui o de amplifica o APTIMA para GC 1x11 9mL Solu o aquosa contendo conservantes ER Solu o de reconstitui o para reagente enzim tico GC APTIMA 1x6 3mL Solu o tamp o HEPES contendo um surfactante e glicerol PR Solu o de reconstitui o de sonda APTIMA para GC 1x15 2 mL Solu o tamp
9. o erecta e n o de cabe a para baixo l Contamina o do Ensaio 1 A introdu o de materiais contaminantes pode ocorrer se n o for tido o cuidado suficiente durante o protocolo de ensaio 2 As TTU t m de ser descontaminadas com fluido de desactiva o conforme descrito em Detec o N o volte a utilizar as TTU 3 Realize regularmente uma descontamina o do equipamento e das superf cies de trabalho conforme descrito na sec o Notas ao procedimento Descontamina o 4 Como em qualquer sistema de reagente o excesso de p em algumas luvas pode causar a contamina o de tubos abertos recomendada a utiliza o de luvas sem p J Protocolo de Monitoriza o de Contamina o Laboratorial para Sistemas DTS Existem muitos factores espec ficos do laborat rio que podem contribuir para a contamina o incluindo volume de testes fluxo de trabalho predom nio de doen as e v rias outras actividades laboratoriais Esses factores devem ser considerados ao estabelecer se a frequ ncia da monitoriza o de contamina o Os intervalos para a monitoriza o de contamina o devem ser estabelecidos com base nas pr ticas e procedimentos de cada laborat rio Para monitorizar a contamina o laboratorial o seguinte procedimento deve ser executado usando o Kit Unissexo APTIMA de Colheita de Esp cimes de Esfrega o para Esp cimes de Esfrega o Endocervical e da Uretra Masculina 1 Etiquete os tubos de transporte d
10. que a mistura no frasco de TCR B se transfira de volta para o frasco de TCR GC Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 28 502185PT Rev E Sistema TIGRIS DTS j Coloque a tampa no frasco de TCR GC e agite suavemente a solu o para misturar os conte dos Evite formar espuma durante este passo k Registe as iniciais do operador e a data actual na etiqueta Registe o n mero de lote de TCR B l Elimine o frasco e a tampa de TCR B Elimine a pipeta de transfer ncia 4 Prepare o reagente de selec o a Verifique o n mero do lote no frasco de reagente para se certificar de que corresponde ao n mero de lote na folha de c digo de barras do lote principal b Registe as iniciais do operador e a data actual na etiqueta Nota Misture bem invertendo todos os reagentes antes de os carregar no sistema Evite formar espuma durante a invers o dos reagentes C Prepara o de reagentes para reagentes previamente reconstitu dos 1 Os reagentes de amplifica o GC enzim tico e de sonda GC previamente reconstitu dos t m de atingir a temperatura ambiente 15 C a 30 C antes do in cio do ensaio 2 Se o reagente de sonda GC reconstitu do contiver um precipitado que n o volte a solubilizar se temperatura ambiente aque a o frasco tapado a uma temperatura que n o superior a 62 C durante 1 a 2 minutos Ap s este passo de aquecimento o reagente de sonda GC pode ser utilizado mesmo que reste algum precipitado residual Mist
11. solu o de lavagem APTIMA tamp o para o fluido de desactiva o APTIMA e reagente a leo APTIMA Kit de auto detec o APTIMA 301048 Kit de conservantes dos fluidos do ensaio APTIMA 302380 Pontas 1 000 uL condutoras com sensores de l quido 10612513 Tecan Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 25 502185PT Rev E Sistema TIGRIS DTS Ref Cat Kit de execu o do Sistema TIGRIS DTS contendo 301191 Unidades multitubos Multi tube Units MTU 104772 02 Kit de saco de pontas usadas de MTU 900907 Deflectores do recipiente de res duos de MTU 900931 Tampas do recipiente de res duos de MTU 105528 Kit de transfer ncia de esp cimes APTIMA 301154C para utiliza o com esp cimes em solu o PreservCyt Kit APTIMA de colheita de esfrega os vaginais 301162 Kit Unissexo APTIMA de Colheita de Esp cimes de Esfrega o para 301041 Esp cimes de Esfrega o Endocervical e da Uretra Masculina Kit APTIMA de colheita de esp cimes de urina para esp cimes 301040 de urina masculinos e femininos Tubos de transporte APTIMA para esp cimes de urina para 105575 esp cimes de urina masculinos e femininos Lix via solu o de hipoclorito de s dio 5 a 7 0 7 M a 1 0M gua para o Sistema TIGRIS DTS consulte o TIGRIS DTS System Operator s Manual Manual do Operador do Sistema TIGRIS DTS para obter as especifica es Luvas descart veis Padr o de calibra o SysCheck 301078 Tampas penetr veis APTIMA 105668 Tampas
12. C 1 C para amplifica o e um terceiro banho de gua a 62 C 1 C para HPA Se o banho de calor seco v rtex SB100 estiver a ser utilizado consulte a SB100 Dry Heat Bath Vortexer Application Sheet Ficha de aplica o do Banho de calor seco v rtex SB100 SB100 Application Sheet Ficha de aplica o do SB100 2 Antes do in cio do ensaio limpe as superf cies de trabalho e pipetas com solu o de hipoclorito de s dio de 2 5 a 3 5 0 35 M a 0 5 M Deixe a solu o de hipoclorito de s dio em contacto com as superf cies e pipetas durante pelo menos 1 minuto enxaguando as depois com gua N o deixe secar a solu o de hipoclorito de s dio Cubra a superf cie da bancada onde os testes ser o realizados com capas absorventes para bancadas de laborat rios com forro pl stico 3 Coloque um n mero suficiente de Dez Cassetes de Pontas no Sistema de Captura de Alvo TCS Assegure se de que o frasco de lavagem do TCS esteja cheio com a Solu o de Lavagem APTIMA e que o distribuidor de aspirado esteja conectado bomba de v cuo Consulte o Target Capture System Operator s Manual Manual do Operador do Sistema de Captura de Alvo B Reconstitui o de Reagentes Nota A reconstitui o dos reagentes deve ser feita antes de se iniciar a transfer ncia de esp cimes 1 Para reconstituir os reagentes de amplifica o GC enzim tico e de sonda GC combine os frascos do reagente liofilizado com a solu o de reconsti
13. cimes de esfrega os vaginais recolhidos pela paciente s o uma op o para efectuar o rastreio de mulheres quando um exame p lvico n o for indicado de outro modo P A aplica o a esfrega os vaginais colhidos pela paciente limita se a institui es de sa de que disponham de apoio aconselhamento para explicar os procedimentos e as precau es Q O ensaio APTIMA GC n o foi validado para utiliza o em esfrega os vaginais colhidos em casa pelas pacientes R O desempenho dos esfrega os vaginais n o foi avaliado em gr vidas S O desempenho dos esp cimes de esfrega os endocervicais vaginais uretrais masculinos e dos esp cimes de urina feminina e masculina assim como dos esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt n o foi avaliado em adolescentes com menos de 16 anos de idade T O teste de esfrega os uretrais de homens assintom ticos n o recomendado devido ao baixo valor preditivo do resultado positivo obtido nesta popula o no ensaio cl nico U O desempenho do Sistema TIGRIS DTS n o foi determinado a altitudes acima dos 2240 m 7355 p s Realizar se o verifica es volum tricas adicionais e estudos espec ficos para os ensaios antes ou como parte do processo de instala o e aceita o em laborat rios acima dos 2240 m 7355 p s de altitude V O desempenho do Sistema PANTHER n o foi determinado a altitudes acima dos 2000 m 6561 p s W N o h evid ncias de degrada o de cidos nu
14. 1353 2 973 906 997 990 98 4 99 5 Feminino E Sintom tico 810 48 2 755 5 906 793 969 997 9900 100 rina Assintom tico 639 21 1 616 1 95 5 77 2 99 9 99 8 994 100 Tudo 1449 69 3 1371 6 920 834 970 998 994 100 Colhido Eefrendcd pela 9 0 Assintom tico 629 21 4 64 o0 100 83 9 100 993 98 3 99 8 y vaginal Paciente Colhido pee Sintom tico 809 52 7 749 1 98 1 89 9 100 991 98 1 99 6 pelo vadis 2 Assintom tico 637 21 4 61 1 95 5 77 2 99 9 993 98 3 99 8 Medico Tudo 1446 73 11 1360 2 97 3 90 7 99 7 992 98 6 99 6 DE Ecc Ei LL LLVLLOILLZ LLIILOALILILAAKGLILOLILLCLOOOIkAALALL ULULLTOGELELLLLLLOLOLLLLLULILOUEeO OXLLOA GALA ZERRCILUGN EV K dRMAREOAEEEEROQlqsCEEAIOLLULILULLEIENLUEUARLE LDAMMD IU QIAR ME EGEERRLOAMEMH ERE MILD PV positivo verdadeiro FP falso positivo NV negativo verdadeiro FN falso negativo Resultados do ensaio APTIMA COMBO 2 para GC n resultados positivos n esp cimes testado a 2 10 b 1 4 c 1 5 d 2 9 e 5 8 f 2 5 g 7 13 h 1 2 i 1 1 j 2 3 k 3 4 I 8 11 m 6 7 n 3 4 o 9 11 Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 49 502185PT Rev E Desempenho cl nico nos Sistemas DTS Estudo de esp cimes cl nicos usando esp cimes citol gicos l quidos em PreservCyt Foi realizado um estudo cl nico multic ntrico prospectivo para avaliar a utiliza o do meio de transporte PreservCyt um componente do ThinPrep 2000 System como meio alternativo para esp cimes
15. 3 2 8 87 8 Th 12 5 96 3 460 100 0 0 195 84 5 7 11327 3 3 207 53 6 307 8 9 rina 125 96 6 047 100 158 67 2 6 170 32 2 8 0 0 206 24 3 4 311 5 1 1 250 96 6 737 100 218 35 32 23849 3 5 66 22 1 176 72 2 6 374 4 5 6 0 95 6 100 1 9 33 6 0 0 0 54 9 5 5 96 105 2 6 3 111 2 12 5 96 3 358 100 257 9 7 7 0 0 0 0 485 45 14 5 549 7 16 4 PreservCyt 125 96 5 272 100 243 09 4 6 201 89 3 8 0 0 751 72 14 3 8154 15 5 1 250 96 5 945 100 355 95 6 51 06 0 9 0 0 759 35 12 8 8402 14 1 Nota A variabilidade proveniente de alguns factores pode ser numericamente negativa o que pode ocorrer se a variabilidade devido a esses factores for muito pequena Quando isto ocorre DP 0 e CV 0 o n de 95 indicou um replicado inv lido em 96 que n o foi repetido Especificidade Anal tica A especificidade anal tica n o foi testada no instrumento PANTHER Consulte a sec o Desempenho anal tico no Sistema TIGRIS DTS para obter o Estudo de Equival ncia de Especificidade Anal tica Estudos de Equival ncia de Subst ncias Interferentes Sangue comummente encontrado em esp cimes urogenitais pode interferir em alguns ensaios de amplifica o Foi utilizando sangue total para estabelecer o grau de interfer ncia do sangue no Sistema PANTHER relativamente a este potencial interferente Adicionou se sangue fresco a conjuntos cl nicos de esfrega os vaginais esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt p s processados ou esp cimes de urina que depois foram tes
16. 5 5 100 95 95 1 Negativo 0 0 0 95 5 0 47 8 100 96 2 100 100 100 Total 5 0 0 95 Positivo 1 0 0 0 100 1 1 100 123 123 2 Negativo 0 0 0 123 0 8 2 5 100 97 0 100 100 100 Total 1 0 0 123 Positivo 4 0 0 0 80 0 4 5 100 470 470 3 Negativo 1 0 0 470 1 1 28 4 99 5 99 2 100 100 99 8 Total 5 0 0 470 Positivo 1 0 0 3 100 1 1 99 0 283 286 4 Negativo 0 0 3 280 0 3 2 5 100 97 0 99 8 25 0 100 Total 1 0 3 283 Positivo 0 0 0 0 100 297 297 5 Negativo 0 0 0 297 0 0 N A 98 8 100 N A 100 Total 0 0 0 297 Positivo 1 0 1 0 100 1 1 99 7 362 363 6 Negativo 0 0 2 360 0 3 2 5 100 98 5 100 50 0 100 Total 1 0 3 360 Positivo 12 0 1 3 7 92 3 12 13 99 8 1 630 1 634 TODOS Negativo 1 0 5 1 625 0 8 64 0 99 8 99 4 99 9 75 0 99 9 Total 13 0 6 1 628 EE N A n o aplic vel Resultado positivo em esfrega o endocervical no ensaio APTIMA COMBO 2 Resultado positivo em esfregaco endocervical no ensaio APTIMA GC Resultado positivo em esfrega o endocervical no ensaio APTIMA COMBO 2 Resultado negativo em esfrega o endocervical no ensaio APTIMA GC Resultado negativo em esfrega o endocervical no ensaio APTIMA COMBO 2 Resultado positivo em esfregaco endocervical no ensaio APTIMA GC Resultado negativo em esfrega o endocervical no ensaio APTIMA COMBO 2 Resultado negativo em esfrega o endocervical no ensaio APTIMA GC Um esp cime teve um resultado discordante Resultado
17. Ap s este passo de aquecimento o Reagente de Reconstitui o de Sonda pode ser usado mesmo se ainda houver precipitado residual Ap s a nova suspens o misture o frasco invertendo suavemente com cuidado para n o induzir a forma o de espuma D Temperatura 1 Os passos de captura de alvo amplifica o hibridiza o e selec o dependem da temperatura Assim torna se imperativo que os banhos de gua sejam mantidos nos intervalos de temperatura especificados 2 Considera se que a temperatura ambiente a compreendida entre 15 C e 30 C 3 Os passos de detec o do ensaio t m de ser realizados a uma temperatura entre 18 C e 28 C E Tempo Os passos de captura de alvo amplifica o hibridiza o e selec o dependem do tempo Cumpra os tempos especificados no Procedimento de Teste dos Sistemas DTS F Utiliza o do v rtex importante que a mistura no v rtex seja bem feita para que o ensaio APTIMA GC seja bem sucedido Quando se atinge um movimento de v rtex adequado a suspens o gira a uma velocidade que eleva a solu o para a parte superior do tubo Esta manipula o v rtex mantida por per odos de tempo espec ficos Para fazer o v rtex de reac es defina a velocidade de misturador do v rtex multitubos para a posi o mais baixa fixe o suporte e ligue a corrente el ctrica Aumente a velocidade lentamente at que o l quido suba at metade do tubo Sujeite ao v rtex durante 10 segundo
18. CDC para obter dados acerca de exames adicionais e do controlo dos pacientes ap s a realiza o de testes de rastreio positivos 1 Consulte a Tabela 3 para a distribui o dos resultados de RLU A magnitude das RLU n o indicativa do n vel de organismos no esp cime 3 Na gama dos positives baixos os dados sugerem que os resultados positivos devem ser interpretados com cautela tendo a no o de que a probabilidade de o positivo ser falso pode ser mais elevada do que a de o positivo ser verdadeiro B Resultados de Controlo de Qualidade e Aceitabilidade O controlo negativo para GC APTIMA rotulado CONTROL CT PCT CONTROL GC NGC e o controlo positivo para GC APTIMA rotulado CONTROL GC PGC CONTROL CT NCT actuam como controlos para os passos de captura do alvo amplifica o e detec o do ensaio De acordo com directrizes ou exig ncias de regulamentos locais estaduais e ou federais ou organiza es de acredita o controlos adicionais para lise celular e estabiliza o de RNA podem ser inclu dos O controlo positivo para GC rotulado CONTROL GC PGC CONTROL CT NCT cont m rRNA n o infeccioso de GC Caso o pretenda pode encomendar mais controlos em kit A prepara o correcta dos esp cimes confirmada visualmente pela presen a de uma nica zaragatoa de colheita APTIMA num tubo de transporte de esfrega os um volume final de urina situado entre as linhas pretas de enchimento num
19. Evite formar espuma durante a invers o dos reagentes 4 N o encha demasiado os frascos de reagentes O Sistema PANTHER reconhece e rejeita frascos que estejam demasiadamente cheios D Manuseamento de esp cimes 1 Deixe que os esp cimes e controlos alcancem a temperatura ambiente antes do processamento 2 N o agite os esp cimes no v rtex 3 Confirme visualmente se todos os tubos de esp cimes cumprem um dos seguintes crit rios a Presen a de uma nica zaragatoa de colheita azul APTIMA num tubo de transporte de esfrega os unissexo b Presen a de uma nica zaragatoa de colheita cor de rosa APTIMA num tubo de transporte de esfrega os vaginais c Volume final de urina entre as linhas de enchimento pretas dos tubos de transporte de esp cimes de urina d Aus ncia de zaragatoa no tubo de transporte de esp cimes APTIMA para esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt 4 Inspeccione os tubos de esp cimes antes de os carregar no suporte a Caso um tubo de esp cime contenha bolhas no espa o entre o l quido e a tampa centrifugue o tubo por 5 minutos com 420 RCF para eliminar as bolhas b Caso um tubo de esp cime apresente um volume menor do que o habitualmente observado quando se seguem as instru es de colheita centrifugue o tubo por 5 minutos com 420 RCF para garantir que o l quido n o fique retido na tampa c Seo n vel de l quido num tubo de esp cimes de urina n o estiver entre as duas linhas p
20. Rev E Concord ncia dos esp cimes cl nicos no Sistema TIGRIS DTS Tabela 12 Estudo de concord ncia de esp cimes cl nicos concord ncias positivas negativas e globais por estado sintom tico continua Concor Concor Concor e as a DTS DTS DTS DTS d ncia d ncia d ncia RM P TIGRIS TIGRIS TIGRIS TIGRIS positiva negativa global IC de 95 IC de 95 IC de 95 100 98 0 99 2 Mu E NE D 1 30 95 4 100 89 6 100 95 8 100 Rubus 100 100 100 Masculino 133 73 0 0 60 95 1 100 94 0 100 97 3 100 100 974 98 6 Tudo Feminino 72 33 0 1 38 89 4 100 86 5 99 9 92 5 100 anna 98 5 100 99 2 Masculino 130 65 1 0 64 91 8 100 94 4 100 95 8 100 PreservCyt Feminino 51 40 0 0 11 100 100 109 91 22 100 71 5 100 93 0 100 denota um resultado positivo um resultado negativo IC intervalo de confian a Amostras de esfrega os endocervicais e vaginais combinadas Uma discord ncia em esfrega o vaginal Estudo de Precis o O efeito de diversos factores sobre a variabilidade do desempenho do ensaio APTIMA GC no Sistema TIGRIS DTS foi avaliado utilizando pain is de reprodutibilidade de DST de 12 membros Os membros do painel continham O a 250 000 fg de rRNA de GC ensaio O painel incluiu membros do painel com concentra es de GC pr ximas da sensibilidade anal tica indicada de 250 fg de rRNA de GC ensaio Os pain is foram testados num
21. Rev E Desempenho cl nico nos Sistemas DTS Tabela 7c Resultados de esfrega os endocervicais feminino e urina de participantes infectados ou n o infectados com N gonorrhoeae de acordo com o estado de infec o do paciente NAAT 1 riae Ensaio APTIMA COMBO 2 NAAT 2 Ensaio APTIMA GC Estado sintom tico ad paciente EF UF EF UF EF UF Sint Assint Infectado 43 16 59 Infectado 2 0 2 Infectado 2 1 3 Infectado 0 1 1 Infectado N A 1 0 1 Infectado 1 1 2 Infectado 1 1 2 Infectado 1 0 1 Infectado 0 1 1 Infectado 2 0 2 Infectado 1 0 1 Infectado 0 1 1 Infectado 0 1 1 Infectado 1 0 1 N o infectado 4 1 5 N o infectado 1 0 1 N o infectado 1 0 1 N o infectado 1 0 1 N o infectado 5 2 7 N o infectado 2 2 4 N o infectado 1 2 3 N o infectado 1 0 1 N o infectado 718 589 1 307 N o infectado 1 0 1 N o infectado N A 2 3 5 N o infectado 11 11 22 N o infectado 1 1 2 N o infectado N A N A 1 1 2 N o infectado N A N A 5 4 9 N o infectado 1 1 2 Total 811 640 1 451 EEE TESE EEE E SETE SEE EFE
22. aureus Citrobacter freundii Morganella morganii Staphylococcus epidermidis Clostridium perfringens Mycobacterium smegmatis Streptococcus agalactiae Corynebacterium genitalium Mycoplasma genitalium Streptococcus bovis Corynebacterium xerosis Mycoplasma hominis Streptococcus mitis Cryptococcus neoformans meningitidis Serogroup A Streptococcus mutans Cytomegalovirus meningitidis Serogroup B Streptococcus pneumoniae Deinococcus radiodurans Streptococcus pyogenes Derxia gummosa meningitidis Serogroup D Streptococcus salivarius Eikenella corrodens meningitidis Serogroup Y Streptococcus sanguis Enterobacter aerogenes N N N meningitidis Serogroup C 4 N N N meningitidis Serogroup W135 Streptomyces griseinus Enterobacter cloacae Neisseria cinerea 4 Trichomonas vaginalis Entercoccus avium Neisseria dentrificans Ureaplasma urealyticum Entercoccus faecalis Neisseria elongata 3 Vibrio parahaemolyticus Entercoccus faecium Neisseria flava Yersinia enterocolitica Erwinia herbicola Neisseria flavescens 2 Erysipelothrix rhusiopathiae Neisseria lactamica 9 n n mero de estirpes testadas Todos os organismos testados deram resultados negativos no ensaio APTIMA GC Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 502185PT Rev E Desempenho anal tico nos Sistemas DTS Subst ncias I
23. de urina Foram colhidos esfrega os endocervicais esfrega os vaginais e esfrega os uretrais masculinos pelo m dico esfrega os vaginais colhidos pela paciente assim como esp cimes de urina de ambos os sexos colhidos pelos pacientes a 2 787 participantes sintom ticos e assintom ticos do sexo masculino e do sexo feminino utentes de cl nicas de OB GINEC doen as sexualmente transmiss veis DST adolescentes e planeamento familiar de oito locais cl nicos geograficamente distintos da Am rica do Norte Os participantes foram classificados como sintom ticos quando houve relato pelo participante de sintomas como corrimento dis ria e dor p lvica Os pacientes foram classificados como assintom ticos se n o relataram sintomas Dos 1 392 participantes assintom ticos inclu dos no estudo 2 tinham menos de 16 anos 237 tinham idades entre 16 e 20 423 tinham idades entre 21 e 25 e 730 tinham idade superior a 25 anos Dos 1 395 participantes sintom ticos inclu dos no estudo 211 tinham idades entre 16 e 20 494 tinham idades entre 21 e 25 e 690 tinham idade superior a 25 anos Foram colhidos tr s esp cimes de cada um dos 1 322 participantes eleg veis do sexo masculino Foram colhidos cinco esp cimes de cada um dos 1 465 participantes eleg veis do sexo feminino No caso dos sujeitos masculinos foram colhidos aleatoriamente dois esfrega os uretrais seguidos de um esp cime de urina No caso dos participantes do sexo feminino foi col
24. equ voco em esfrega o endocervical no ensaio APTIMA COMBO 2 Resultado positivo em esfrega o endocervical no ensaio APTIMA GC Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 53 502185PT Rev E Desempenho cl nico nos Sistemas DTS Tabela 7a Resultados de esfrega os uretrais masculinos de participantes sintom ticos infectados ou n o infectados com N gonorrhoeae de acordo com o estado de infec o do paciente NAAT 1 cado Ensaio APTIMA COMBO 2 NAAT 2 Ensaio APTIMA GC e paciente EM UM EM UM EM Infectado 164 Infectado E 1 Infectado gt 3 Infectado 1 Infectado E 2 Infectado d 4 1 N o infectado E E B E 2 N o infectado E z E 1 N o infectado z 1 1 N o infectado z a 1 N o infectado E 2 N o infectado amp 3 N o infectado E 4 2 N o infectado E E E B 386 N o infectado E E 1 N o infectado N A 1 N o infectado E E 1 N o infectado T E a f 1 N o infectado E x 2 Total 576 Vi e e e a a e e e a ad N A esp cime n o obtido ou dispon vel para an lise O s mbolo de igual representa resultados equ vocos ou indeterminados ap s repeti o do teste EM esfrega o uretral masculino sintom tico UM urina masculina Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 54 502185PT Rev E Desempenho cl nico nos Sistemas DTS Tabela 7b Resultados de
25. ginecol gicos destinados detec o de N gonorrhoeae pelo ensaio APTIMA GC Foram inclu dos e avaliados no estudo cl nico 1 647 participantes sintom ticos e assintom ticos utentes de cl nicas de OB GINEC planeamento familiar sa de p blica sa de da mulher e de DST Destes participantes 1 288 eram assintom ticos e 359 eram sintom ticos Tabela 7e Os sujeitos foram inclu dos a partir de locais com uma preval ncia de GC que variou entre 0 0 e 5 0 Tabela 6a Foram colhidos dois esp cimes por cada indiv duo eleg vel um esp cime citol gico em base l quida PreservCyt e um esfrega o endocervical Os esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt foram colhidos com a esp tula escova citol gica ou com um dispositivo de amostragem cervical semelhante a uma escova A distribui o dos dispositivos de amostragem cervical resumida na Tabela 5 por local de colheita do esp cime e a n vel geral Os esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt foram processados de acordo com o manual de instru es do ThinPrep 2000 Processor e de acordo com o folheto informativo do kit de transfer ncia de amostras APTIMA Ap s o processamento do esp cime citol gico em base l quida PreservCyt com o ThinPrep 2000 Processor o esp cime foi transferido para o kit de transfer ncia de esp cimes APTIMA para an lise com o ensaio APTIMA GC A sensibilidade e a especificidade do ensaio APTIMA GC em esp cimes citol gicos em base
26. iniciais do operador e a data de reconstituic o na etiqueta Figura 1 Passo 7 Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 14 502185PT Rev E Sistemas DTS j Elimine o colarinho de reconstitui o e o frasco Figura 1 Passo 8 3 4 SR V ar d Ua em 5 6 p 4 amp y SI t3 uj Figura 1 Processo de reconstituic o nos Sistemas DTS 2 Osreagentes de sonda GC amplificac o GC e enzim tico previamente reconstitu dos t m de atingir a temperatura ambiente 15 C a 30 C antes do in cio do ensaio Caso o Reagente de Sonda contenha precipitado que n o retorne solu o em temperatura ambiente aque a o a 62 C por 1 a 2 minutos Ap s este passo de aquecimento o Reagente de Sonda pode ser usado mesmo se ainda houver precipitado residual Ap s a nova suspens o misture invertendo suavemente com cuidado para n o induzir a forma o de espuma Nota Este passo de invers o deve ser executada a qualquer momento em que o precipitado seja levado solu o seja aquecendo o a 62 ou temperatura ambiente 3 Prepare o reagente de captura do alvo de trabalho GC Working Target Capture Reagent wTCR GC a Transfira 20 mL do TCR GC para um recipiente dedicado limpo e seco de tamanho adequado b Utilizando uma micropipeta adicione 200 uL de TCR B ao TCR GC Misture completamente a solu o com movimentos circulares Etiquete o recipiente Registe as inic
27. instru es de colheita centrifugue o tubo por 5 minutos a 420 RCF para garantir que o l quido n o fique retido na tampa Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 29 502185PT Rev E Sistema TIGRIS DTS c Seo n vel de l quido num tubo de esp cimes de urina n o estiver entre as duas linhas pretas indicadoras do r tulo o esp cime tem de ser rejeitado N o perfure um tubo demasiado cheio d Se um tubo de esp cimes de urina contiver precipitado aque a o esp cime a 37 C durante at 5 minutos Se o precipitado n o voltar a entrar em solu o certifique se visualmente de que o precipitado n o impede a distribui o do esp cime Nota Caso os Passos 4a c n o sejam seguidos pode haver descarga de l quido da tampa do tubo de esp cimes Nota Podem ser testadas at 3 al quotas distintas de cada tubo de esp cimes A tentativa de pipetar mais de 3 al quotas do tubo de esp cimes pode provocar erros por volume insuficiente E Prepara o do sistema Defina o sistema e a lista de trabalho de acordo com as instru es do TIGRIS DTS System Operator s Manual Manual do Operador do Sistema TIGRIS DTS e das Notas ao procedimento Notas ao procedimento A Controlos 1 Para trabalhar adequadamente com o software de Ensaio APTIMA para o Sistema TIGRIS DTS s o necess rios controlos frontais e finais O Controlo Positivo CT Controlo Negativo GC deve ocupar a primeira posi o e a pen ltima posi o de uma list
28. l quida PreservCyt foram calculadas comparando os resultados com o estado de infec o do paciente O algoritmo incluiu os resultados do ensaio APTIMA COMBO 2 e do ensaio APTIMA GC em esfrega os endocervicais Para estabelecer um estado de infec o do paciente positivo exigia se que ambos os NAAT de refer ncia dessem resultados positivos Para estabelecer um estado de infec o do paciente negativo exigia se que pelo menos um NAAT de refer ncia desse resultado negativo O nico resultado equ voco obtido de um NAAT de refer ncia foi considerado discordante com o ensaio de investiga o para efeitos do c lculo do desempenho tendo o estado de infec o do paciente sido assim categorizado como n o infectado n 1 A Tabela 7e resume a frequ ncia dos resultados do teste para os esfrega os endocervicais testados com o ensaio APTIMA COMBO 2 e com o ensaio APTIMA GC A Tabela 5a mostra as sensibilidades e as especificidades do ensaio APTIMA GC por estado sintom tico e a n vel geral A sensibilidade global foi de 92 3 12 13 Nos participantes sintom ticos e assintom ticos as sensibilidades foram de 100 7 7 e 83 3 5 6 respectivamente A especificidade global foi de 99 8 1 630 1 634 Nos participantes sintom ticos e assintom ticos as especificidades foram de 99 4 350 352 e 99 8 1 280 1 282 respectivamente A Tabela 6a mostra as sensibilidades e as especificidades do ensaio APTIMA GC por local de colheita dos esp ci
29. ncia ao cliente 1 800 523 5001 Assist ncia t cnica 1 888 484 4747 www gen probe com GEN PROBE GEN PROBE e desenho APTIMA APTIMA e desenho APTIMA COMBO 2 DTS LEADER PANTHER SB100 e TIGRIS s o marcas comerciais da Gen Probe Incorporated eppendorf estilizado e REPEATER s o marcas comerciais da Eppendorf AG PRESERVCYT e THINPREP s o marcas comerciais da Hologic Inc KOVA TROL uma marca registada da Hycor Biomedical Inc RAININ uma marca registada da Rainin Instrument LLC TECAN e FREEDOM EVO s o marcas comerciais da Tecan Group AG Qualquer outra marca que apare a neste documento pertence a seu respectivo propriet rio 2003 2013 Gen Probe Incorporated 502185PT Rev E 2013 05 Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 76 502185PT Rev E
30. nestes passos Consulte a sec o Avisos e precau es 1 Hibrida o a Retire o suporte do banho de gua e transfira o para a rea de HPA Utilizando a pipeta de repeti o adicione 100 pL do reagente de sonda GC reconstitu do a cada tubo de reac o Todas as reac es dever o agora ter a cor amarela b Cubra os tubos com um cart o de selagem e leve ao misturador v rtex multitubos Incube o suporte num banho de gua a 62 C x 1 C durante 20 5 minutos Retire o suporte do banho de gua e incube o temperatura ambiente durante 5 1 minutos Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 18 502185PT Rev E Sistemas DTS 2 Selec o a Utilizando a pipeta de repeti o adicione 250 uL do reagente de selec o a cada tubo de reac o Todas as reac es dever o agora ter a cor vermelha b Cubra os tubos com um cart o de selagem misture o suporte no v rtex durante 10 segundos ou at a cor ser uniforme e incube o suporte em banho de gua a 62 C 1 C durante 10 1 minutos c Retire o suporte do banho de gua 3 Detecc o A detec o tem de ser realizada entre 18 C e 28 C a Incube o suporte entre 18 C e 28 C durante 15 3 minutos Nota Este intervalo de temperatura cr tico para o desempenho do ensaio b Para utiliza o do LEADER HC Lumin metro e o software de ensaio APTIMA consulte o LEADER HC Luminometer Operator s Manual Manual do Operador LEADER HC Lumin metro e o A
31. o APTIMA 1x43 0mL 2x20mL Solu o tamponada com borato a 600 mM contendo surfactante TCR Reagente de captura do alvo APTIMA para GC 1 x 26 0 mL 2x17 mL Solu o tamponada salina contendo fase s lida e olig meros de captura Colarinho de Reconstitui o 3 Pipetas de transfer ncia 2 Folha de c digo de barras do lote principal 1 folha 1 folha Kit de controlos APTIMA armazenar entre 2 C e 8 C ap s recep o S mbolo Componente Quantidade PGC Controlo Positivo APTIMA GC Controlo Negativo CT 5x1 7 mL NCT cido nucleico de GC n o infeccioso em solu o tamponada contendo lt 5 de detergente Cada amostra de 400 uL cont m rRNA que se estima ser equivalente a 50 c lulas de GC 250 fg ensaio PCT Controlo Positivo APTIMA CT Controlo Negativo GC 5x1 7 mL NGC cido nucleico de CT n o infeccioso em solu o tamponada contendo lt 5 de detergente Cada amostra de 400 uL cont m rRNA que se estima ser equivalente a 1 unidade formadora de inclus es inclusion forming unit IFU de CT 5 fg ensaio Os equivalentes rRNA foram calculados com base no tamanho do genoma e a taxa estimada m dia c lula DNA RNA de cada organismo Materiais necess rios mas dispon veis separadamente Nota Excepto indica o em contr rio as refer ncias de cat logo dos materiais disponibilizados pela Gen Probe s o mencionadas Ref Cat Sistema TIGRIS DTS 105118 Kit de fluidos do ensaio APTIMA 302382
32. o mencionadas Sistema PANTHER Kit de fluidos do ensaio APTIMA solu o de lavagem APTIMA tamp o para o fluido de desactiva o APTIMA e reagente a leo APTIMA Kit de auto detec o APTIMA Unidades multitubos Multi tube Units MTU Kit de sacos de res duos PANTHER Tampa do recipiente de res duos do PANTHER Ou kit de teste PANTHER cont m MTU sacos de res duos tampas de recipientes de res duos fluidos do ensaio e l quidos Auto Detect Pontas 1 000 pL condutoras com sensores de l quido Kit de transfer ncia de esp cimes APTIMA para utiliza o com esp cimes em solu o PreservCyt Kit APTIMA de colheita de esfrega os vaginais Kit Unissexo APTIMA de Colheita de Esp cimes de Esfrega o para Esp cimes de Esfrega o Endocervical e da Uretra Masculina Kit APTIMA de colheita de esp cimes de urina para esp cimes de urina masculinos e femininos Tubos de transporte APTIMA para esp cimes de urina para esp cimes de urina masculinos e femininos Lix via solu o de hipoclorito de s dio 5 a 7 0 7 M a 1 0 M Luvas descart veis Ref Cat 303095 303014 1 000 testes 303013 1 000 testes 104772 02 902731 902714 303096 5 000 testes 10612513 Tecan 301154C 301162 301041 301040 105575 Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 33 502185PT Rev E Sistema PANTHER Padr o de calibra o SysCheck 301078 Tampas penetr veis APTIMA 105668 Tampas n o penetr veis de su
33. pelo sistema para que n o haja bolhas de ar na linha e que todos os dez bocais forne am um fluxo constante de l quido 18 Ligue a bomba de v cuo e desconecte o distribuidor de aspira o do primeiro conector entre o distribuidor de aspira o e o frasco de apreens o Assegure se de que o man metro de v cuo cumpre as especifica es do teste de fuga Pode demorar 15 segundos a obter esta leitura Reconecte o distribuidor de aspira o e assegure se de que o man metro de v cuo cumpre as especifica es do n vel de v cuo Deixe a bomba de v cuo ligada at que os passos de captura do alvo estejam conclu dos e a tubagem de aspira o esteja seca 19 Aplique firmemente o distribuidor de aspira o ao primeiro conjunto de pontas Aspire todo o l quido baixando as pontas na primeira TTU at as pontas entrarem brevemente em contacto com as partes inferiores dos tubos N o mantenha as pontas em contacto com as partes inferiores dos tubos 20 Ap s ter terminado a aspira o ejecte as pontas na TTC original Repita os passos da aspira o para as TTU restantes usando uma ponta dedicada para cada esp cime 21 Coloque o distribuidor sobre cada TTU e utilizando a bomba da esta o de distribui o distribua 1 0 mL de solu o de lavagem APTIMA por cada tubo da TTU 22 Cubra os tubos com um cart o de selagem e retire o suporte da base magn tica TCS Coloque uma vez no misturador v rtex de multitubos Consulte a sec o No
34. potencial interfer ncia no ensaio na aus ncia e na presen a de alvo de GC ao equivalente de rRNA estimado de 50 CFU GC ensaio 250 fg ensaio Os equivalentes rRNA foram calculados com base no tamanho do genoma e a taxa estimada m dia c lula DNA RNA de cada organismo Os esp cimes foram testados em dois Sistemas TIGRIS DTS Todas as amostras contendo cidos nucleicos alvo foram positivas quando testadas a uma concentra o de sangue de 10 em esp cimes de esfrega os esfrega os vaginais esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt e 30 de sangue em esp cimes de urina Todas as amostras que n o continham alvo deram resultados negativos para GC Estes resultados indicam que nos n veis testados improv vel que o sangue total afecte o resultado de GC no Sistema TIGRIS DTS Estudos de transmiss o com o Sistema TIGRIS DTS Para estabelecer que o Sistema TIGRIS DTS minimiza o risco de resultados positivos falsos causados por contamina o por transmiss o foi feito um estudo utilizando pain is misturados em tr s Sistemas TIGRIS DTS O estudo utilizou 20 de amostras GC de alvo alto contendo 1 0 x 10 c lulas reac o que foram aleatoriamente espa adas entre 80 de amostras negativas contendo meio de transporte de esfrega o No estudo 576 amostras de alvo elevado e 2 376 amostras negativas foram testadas com os tr s Sistemas TIGRIS DTS A Tabela 15 mostra que a m dia da taxa global de transmiss o foi de 0 21 5 2 370
35. reac o de amplifica o Ap s a conclus o dos passos da captura de alvo os esp cimes est o prontos para a amplifica o Os ensaios de amplifica o de alvo s o baseados na capacidade que os iniciadores oligonucle tidos complementares t m de efectuar hibrida o espec fica e permitem a amplifica o enzim tica das cadeias do cido nucleico alvo A reac o TMA da Gen Probe replica uma regi o espec fica do rRNA da subunidade 16S de GC atrav s de intermedi rios de DNA utilizado um conjunto exclusivo de iniciadores para a mol cula alvo A detec o das sequ ncias de produto da amplifica o de rRNA amplicon alcan ada com a utiliza o da hibridiza o do cido nucleico Uma sonda de DNA quimioluminescente de cadeia nica que complementar a uma regi o do produto de amplifica o alvo marcada com uma mol cula de ster de acrid nio A sonda de DNA marcada combina se com o produto de amplifica o para formar h bridos RNA DNA est veis O Reagente de selec o diferencia a sonda hibridizada da n o hibridizada eliminando a gera o de sinal da sonda n o hibridizada Durante o passo de detec o a luz emitida dos h bridos rotulados como RNA DNA medida como sinais de fot es num lumin metro e s o relatadas Unidades de luz relativa RLU Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 3 502185PT Rev E Informa es gerais Avisos e precau es A Para fins de diagn stico in vitro B Pa
36. semelhantes dados os resultados de concord ncia Tabela 12 Estudo de concord ncia de esp cimes cl nicos concord ncias positivas negativas e globais por estado sintom tico Concor Concor Concor Svmptom Esb cime Sexo n DTS DTS DTS DTS d ncia d ncia d ncia TUM P TIGRIS TIGRIS TIGRIS TIGRIS positiva negativa global IC de 95 IC de 95 IC de 95 A 100 100 100 Feminino 86 53 0 9 93 5 100 894 100 95 9 100 x 100 100 100 Masguling ps Se O a sd 94 6 100 87 2 100 96 1 100 o 100 100 100 Sint Feminino 47 24 0 0 23 85 8 100 85 2 100 92 5 100 us 98 4 100 98 6 Masculino 20 60 1 d 91 2 100 66 4 100 92 3 100 Y 100 100 100 PreservCyt Feminino 34 28 0 0 6 87 7 100 54 1 100 89 7 100 100 944 97 6 kemining q Ze p i Uu 852 100 72 7 99 9 87 1 99 9 ii 100 100 100 Masculinos Je g 3 33 59 0 100 89 4 100 91 2 100 T 100 93 8 96 0 Assint Feminino 25 9 0 1 15 664 100 69 8 99 8 79 6 99 9 npe 100 100 100 Masculino 269 d o d 47 8 100 93 5 100 94 0 100 PreservCyt Feminino 17 12 0 0 5 109 100 109 73 5 100 47 8 100 80 5 100 denota um resultado positivo um resultado negativo IC intervalo de confian a Amostras de esfrega os endocervicais e vaginais combinadas Uma discord ncia em esfrega o vaginal Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 66 502185PT
37. simult neas com outros agentes E O ensaio APTIMA GC n o tem por finalidade a avalia o de suspeita de abuso sexual ou para outras indica es m dico legais Para os pacientes que possam vir a sofrer um impacto psicossocial adverso por causa de um resultado falso positivo os CDC recomendam a realiza o de novos testes por um m todo que utilize uma tecnologia alternativa 1 F Resultados fi veis dependem da colheita adequada de esp cimes Como o sistema de transporte utilizado para este ensaio n o permite a avalia o microsc pica de adequa o do esp cime o treinamento de m dicos em t cnicas adequadas de colheita de esp cimes necess rio Consulte o folheto informativo do kit de colheita de esp cimes APTIMA adequado G O fracasso ou o sucesso terap utico n o podem ser determinados com o ensaio APTIMA GC pois os cidos nucleicos podem persistir ap s uma terap utica antimicrobiana adequada H Os resultados do ensaio APTIMA GC devem ser interpretados em conjunto com outros dados laboratoriais e cl nicos de que o m dico disponha I Um resultado negativo n o impede a poss vel infec o porque os resultados dependem da colheita adequada de esp cimes Os resultados de teste podem ser afectados por colheita inadequada de esp cimes erro t cnico mistura de esp cimes ou n veis do alvo abaixo do limite de detec o do ensaio J O ensaio APTIMA GC fornece resultados qualitativos Portanto n o se pode faze
38. solu o escoe do frasco de solu o para o frasco de vidro Figura 2 Passo 3 g Agite suavemente a solu o no frasco para misturar Evite a cria o de espuma enquanto agita o frasco Figura 2 Passo 4 h Aguarde que o reagente liofilizado entre em solu o e depois inverta novamente os frascos montados inclinando o a um ngulo de 45 para minimizar a forma o de espuma Figura 2 Passo 5 Deixe todo o l quido escoar de volta para o frasco de pl stico i Retirar o colarinho de reconstitui o e o frasco de vidro Figura 2 Passo 6 j Volte a colocar a tampa no frasco No caso dos frascos de 50 testes descole e elimine a etiqueta superior Anote as iniciais do operador a data de reconstitui o e o n mero do lote do reagente liofilizado na etiqueta remanescente Figura 2 Passo 7 No caso dos frascos de 100 testes anote as iniciais do operador e a data de reconstituic o directamente na etiqueta ver Figura 3 k Elimine o colarinho de reconstitui o e o frasco de vidro Figura 2 Passo 8 Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 27 502185PT Rev E Sistema TIGRIS DTS Aviso Evite formar espuma ao reconstituir os reagentes A espuma compromete o sensor de n vel no Sistema TIGRIS DTS Figura 2 Processo de reconstitui o nos Sistema TIGRIS DTS 2 Prepare o TCR GC de trabalho WTCR GC para o kit de 100 testes a b f g Emparelhe os frascos apropri
39. ver Estudos de estabilidade dos esp cimes b Caso se utilize o procedimento de remo o de al quotas de ThinPrep consulte o ThinPrep 2000 ou ThinPrep 3000 Processor Operator s Manual Addendum Adenda do Manual do operador do ThinPrep 2000 Processor ou do ThinPrep 3000 Processor Transfira 1 mL da al quota retirada para um tubo de transfer ncia de esp cimes APTIMA de acordo com as instru es do folheto informativo do kit de transfer ncia de esp cimes APTIMA c Caso analise o esp cime ap s o processamento no ThinPrep 2000 Processor processe o esp cime citol gico em base l quida PreservCyt de acordo com o ThinPrep 2000 Processor Operator s Manual Manual do operador do ThinPrep 2000 Processor e o folheto informativo do kit de transfer ncia de esp cimes APTIMA Transfira 1 mL do fluido restante no frasco de solu o PreservCyt para um tubo de transfer ncia de esp cimes APTIMA de acordo com as instru es do folheto informativo do kit de transfer ncia de esp cimes APTIMA d Depois de o esp cime citol gico em base l quida PreservCyt ser transferido para o tubo de transfer ncia de esp cimes APTIMA o esp cime tem de ser ensaiado com o ensaio APTIMA GC no espa o de 30 dias quando armazenado entre 2 C e 8 C ou de 14 dias quando armazenado entre 15 C e 30 C Caso seja necess rio um armazenamento mais prolongado congele a uma temperatura entre 20 C e 70 C durante at 12 meses ap s a transfer ncia v
40. 00 5 000 6 000 79 000 Positivos 45 10 13 23 21 116 408 totais Falsos positivos totais cvs Pvs EF EM UF UM Negativos 6422 54 24 416 8 totais 35 6 2 4 0 3 0 O c alnlo la m N O O gt o O O O O 0 0 0 0 oj ojoj o oj ojojoj ojo Falsos negativos 7 2 1 2 1 totais cvs PVS EF EM UF 1 UM 0 VS O SO SS i mate c cc ccr c cc r c c c s Q CVS esfrega o vaginal colhido pelo m dico PVS esfrega o vaginal colhido apenas por pacientes assintom ticas EF esfrega o endocervical feminino EM esfrega o uretral masculino apenas de participantes sintom ticos UF urina feminina UM urina masculina A coluna sombreada designa a zona equ voca 0 0 1 0 N w oj oj ojl N oj 090 o O oj 0 oj oj o oj O O gt 09 O 1 Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 47 502185PT Rev E Desempenho cl nico nos Sistemas DTS Desempenho cl nico nos Sistemas DTS Consulte a Concord ncia dos esp cimes cl nicos no Sistema TIGRIS DTS ap s a sec o Desempenho anal tico nos Sistemas DTS para obter o desempenho cl nico espec fico do Sistema TIGRIS DTS Estudo de esp cimes cl nicos em esfrega os endocervicais esfrega os uretrais masculinos esfrega os vaginais e esp cimes
41. 08 625 fg mL 324 5 5744 997 6172 11 1 1892 34 5181 93 3113 56 5274 95 Interm dio 6 082 fg mL 108 6 502 100 1388 2 1 0 00 4819 74 5148 79 5794 89 Elevado 324 6 7860 100 270 3 4 0 0 00 5813 86 4107 61 6471 95 12 500 fg mL DP desvio padr o CV coeficiente de varia o em percentagem Concd concord ncia percentual N A n o aplic vel para analitos negativos Nota A variabilidade de alguns factores pode ser numericamente negativa o que pode ocorrer se a variabilidade devida a esses factores for muito pequena Quando isto ocorre a variabilidade medida com DP e CV definida como zero 12 A precis o intralaboratorial dos esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt com o ensaio APTIMA GC foi determinada misturando aos frascos de PreservCyt 20 CFU de GC por frasco 0 1 CFU por reac o e 100 CFU de GC por frasco 0 5 reac o Os frascos contendo 10 000 CFU de GC por frasco 50 CFU por reac o e os frascos de PreservCyt n o misturados foram testados como controlos positivos e negativos Dez frascos misturados com cada n vel de CFU e dez frascos n o misturados foram divididos entre dois operadores Os operadores agitaram os frascos no v rtex e depois transferiram 14 al quotas 1 0 mL cada por frasco para 14 tubos de transfer ncia APTIMA conforme indica o folheto informativo do kit de transfer ncia de amostras APTIMA Os operadores desconheciam os t tulos das amostras Cada uma das amostras cit
42. 100 100 aciente n tica 6 735 5 2 68 O 67 100 4758 100 97 1 90 1 99 7 714 100 7 68 0 0 68 0 00 N A 100 94 7 7 100 N A 100 8 43 0 0 43 0 00 N A 100 91 8 100 N A 100 Tudo 629 21 4 64 O 33 100 839 100 99 3 98 3 99 8 840 100 1 227 12 2 213 0 53 100 735 100 99 1 96 7 99 9 857 100 2 497 30 3 163 1 157 968 833 999 982 94 8 99 6 909 994 3 413 4 0 10 O 35 100 398 100 100 967 100 100 100 Colhido psgega o 4 268 5 3 255 0 149 100 478 100 988 96 6 99 8 625 100 pelo bic 5 199 2 0 197 O 4140 100 158 100 100 981 100 100 100 M dico 6 295 19 3 272 1 68 95 0 75 1 99 9 989 96 8 99 8 864 996 7 102 0 0 10 0 090 N A 100 964 100 N A 100 8 50 1 0 49 0 20 100 25 100 100 927 100 100 100 2 Tudo 1 446 73 11 1 360 5 2 97 3 90 7 99 7 299 2 98 6 99 6 86 9 99 9 PV positivo verdadeiro FP falso positivo NV negativo verdadeiro FN falso negativo Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 52 502185PT Rev E Desempenho cl nico nos Sistemas DTS Tabela 6a Sensibilidade especificidade e valores preditivos do ensaio APTIMA GC relativamente ao estado de infec o do paciente por local cl nico e a n vel geral em esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt Resultados dos esp cimes Prev Sensibilidade Especificidade o o Local wol gicosem H a i IC de 95 IC de 95 PPMCA ZNPNOM base l quida PreservCyt Positivo 5 0 0 0 100
43. 3 12 National Committee for Clinical Laboratory Standards 1999 NCCLS EP5 A Evaluation of Precision Performance of Clinical Chemistry Devices Approved Guideline Vol 19 No 2 13 National Committee for Clinical Laboratory Standards 2002 NCCLS EP12 A User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance Approved Guideline for additional guidance on appropriate internal quality control testing practices 14 National Committee for Clinical Laboratory Standards 2004 NCCLS EP5 A2 Evaluation of Precision Performance of Quantitative Measurement Methods Approved Guideline 2nd edition Vol 24 No 25 15 Peterson E M V Darrow J Blanding S Aarnaes and L M de La Maza 1997 Reproducibility problems with the AMPLICOR PCR Chlamydia trachomatis test J Clin Microbiol 35 957 959 Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 75 502185PT Rev E Bibliografia 16 Schachter J 1985 Chlamydiae Psittacosis Lymphogranuloma Venereum Trachoma group p 856 862 In E H Lennette et al ed Manual of Clinical Microbiology 4 ed American Society for Microbiology Washington D C 17 Schachter J and M Grossman 1981 Chlamydial infections Ann Rev Med 32 45 61 18 Schachter J 1978 Medical progress chlamydial infections third of three parts NEJM 298 540 549 19 Schachter J E C Hill E B King V R Coleman P Jones and K F Meyer 1975 Chlamydial infection in women with cervical dysplasia Am J Obs
44. A 1 frasco 2 frascos Transcriptase reversa e RNA polimerase secos em solu o tamponada HEPES contendo lt 10 de reagente de volume P Reagente de sonda APTIMA para GC 1 frasco 2 frascos Sondas de DNA quimioluminescentes n o infecciosas secas em solu o tamponada com succinato contendo lt 5 de detergente TCR B Reagente de captura do alvo B APTIMA 1x030mL 2x0 143mL Acido nucleico n o infeccioso em solu o tamponada contendo 5 de detergente Colarinho de Reconstitui o 6 Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae Caixa de temperatura ambiente Embalagem 2 de 2 armazenar entre 15 C e 30 C ap s recep o Quantidade S mbolo Componente kit de 100 kit 2 x 50 testes testes AR Solu o de reconstitui o de amplifica o 1x 11 9 mL 2x 6 4 mL APTIMA para GC Solu o aquosa contendo conservantes ER Solu o de reconstitui o para reagente 1x 6 3 mL 2 x 3 3 mL enzim tico APTIMA Solu o tamp o HEPES contendo um surfactante e glicerol Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 24 502185PT Rev E Sistema TIGRIS DTS Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae Caixa de temperatura ambiente Embalagem 2 de 2 armazenar entre 15 C e 30 C ap s recep o Quantidade S mbolo Componente kit de 100 kit 2 x 50 testes testes PR Solu o de reconstitui o de sonda APTIMA para GC 1x15 2mL 2x77mL Solu o tamponada de succinato contendo lt 5 de detergente S Reagente de selecc
45. Anal tica Os pain is de sensibilidade em grupos de esfrega os endocervicais grupos de esp cimes vaginais grupos de esp cimes de urina e grupos de esp cimes citol gicos l quidos em PreservCyt foram preparados a uma concentra o de rRNA de GC de 250 fg ensaio tendo sido testados 60 replicados no Sistema TIGRIS DTS A percentagem de positividade IC de 95 no Sistema TIGRIS DTS para esfrega os endocervicais foi de 100 95 1 100 para esfrega os vaginais foi de 100 95 1 100 para esp cimes de urina foi de 100 95 1 100 e para esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt foi de 100 95 1 100 Estudo do painel cl nico misturado com rRNA de GC O estudo do painel cl nico misturado com rRNA de GC avaliou a concord ncia entre os dois sistemas utilizando seis pain is cl nicos de GC preparados na Gen Probe a que se misturou O a 250 000 fg rRNA de GC ensaio Os pain is cl nicos de GC foram criados a partir de esfrega os endocervicais esfrega os vaginais esfrega os uretrais urina masculina urina feminina e esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt que tinham apresentado resultados negativos com o ensaio APTIMA GC nos Sistemas DTS quando testados na Gen Probe Os esp cimes negativos foram agrupados por tipo de esp cime misturados ou n o com rRNA de GC e alioquotados como replicados de cada membro do painel Foram combinados replicados de membros de seis pain is com diferentes concentra es d
46. C est vel durante 60 dias quando armazenado entre 15 C e 30 C N o refrigere E Ap s a reconstitui o o reagente enzim tico o reagente de amplifica o para GC e o reagente de sonda para GC s o est veis durante 60 dias quando armazenado entre 2 C e 8 C F Elimine os reagentes reconstitu dos e wTCR n o utilizados ap s 60 dias ou depois de a data de validade do lote principal passar o que acontecer primeiro G Os controlos s o est veis at data indicada nos frascos H Os reagentes dos frascos de 50 testes armazenados no Sistema TIGRIS DTS t m uma estabilidade de 48 horas no instrumento I Os reagentes dos frascos de 100 testes armazenados no Sistema TIGRIS DTS t m uma estabilidade de 96 horas no instrumento J Os reagentes armazenados no Sistema PANTHER t m uma estabilidade de 72 horas no instrumento K O reagente de sonda para GC e o reagente de sonda para GC reconstitu do s o fotossens veis Armazene os reagentes ao abrigo da luz Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 7 502185PT Rev E Informa es gerais L Com o aquecimento temperatura ambiente alguns tubos de controlo podem parecer nublados ou apresentar precipita es A n voa ou precipita o associada aos controlos n o afecta o desempenho do controlo Os controlos podem ser usados mesmo que estejam nublados ou precipitados Caso se pretendam controlos l mpidos a solubiliza o pode ser agilizada incubando os no extremo sup
47. Desempenho anal tico no Sistema TIGRIS DTS Tabela 14 Estudo de concord ncia do painel cl nico misturado com rRNA de GC continua ge Membro do Concentra o S m Cone Ok ao Gon or Concordancia Esp cime Painel fg rRNA ensaio R plicas d ncia d ncia global entre TIGRIS TIGRIS DTS e DTS IC de 95 Sem alvo 0 12 100 100 Muito baixo 25 30 13 3 4 30 100 Estudo inicial Baixa 250 30 80 24 30 100 75 8 67 5 82 8 M dio 2 500 30 100 100 High 250 000 30 100 100 Sem alvo 0 18 100 100 Muito baixo 25 30 96 7 29 30 100 ud Seguimento 1 Baixa 250 30 100 100 99 3 96 0 100 M dio 2 500 30 100 100 High 250 000 30 100 100 Sem alvo 0 18 100 100 Muito baixo 25 30 90 27 30 100 Seguimento 2 Baixa 250 30 100 100 97 8 93 8 99 5 M dio 2 500 30 100 100 High 250 000 30 100 100 Sem alvo 0 12 100 100 Muito baixo 25 30 100 100 Citologia em base l quida Baixa 250 30 100 100 100 97 2 100 PreservCyt M dio 2 500 30 100 100 High 250 000 30 100 100 N o testado em ambos os sistemas devido a volume insuficiente de amostra Estudo de Equival ncia de Especificidade Anal tica Para um ensaio de amplificac o do cido nucleico a especificidade anal tica a respeito dos organismos individuais grandemente determinada mais pela qu mica do ensaio ex sequ ncias oligonuclet deas do que pela plataforma Dado que os reagentes para o ensaio APTIMA GC s o id
48. ELIOLCLL CLL OT CSLEUIBSZ ZISE OISLLLO LELGGLSQEELCELLDICLLULOIALULL O e Resultado positivo em esfrega o endocervical no ensaio APTIMA COMBO 2 Resultado positivo em esfregaco endocervical no ensaio APTIMA GC Resultado positivo em esfrega o endocervical no ensaio APTIMA COMBO 2 Resultado negativo em esfrega o endocervical no ensaio APTIMA GC Resultado negativo em esfrega o endocervical no ensaio APTIMA COMBO 2 Resultado positivo em esfregaco endocervical no ensaio APTIMA GC Resultado negativo em esfrega o endocervical no ensaio APTIMA COMBO 2 Resultado negativo em esfrega o endocervical no ensaio APTIMA GC Um esp cime teve um resultado discordante Resultado equ voco em esfrega o endocervical no ensaio APTIMA COMBO 2 Resultado positivo em esfrega o endocervical no ensaio APTIMA GC Tabela 6 Sensibilidade especificidade e valores preditivos do ensaio APTIMA GC relativamente ao estado de infec o do paciente por local cl nico e global para esfrega os uretrais masculinos urina masculina esfrega os endocervicais femininos urina feminina esfrega os vaginais colhidos por pacientes assintom ticas e esfrega os vaginais colhidos pelo m dico Prev Sensibilidade Especificidade PPV NPV Esp cime Local N PV FP NV FN IC de 95 IC de 95 145 49 0 96 0 338 3100 927 100 100 96 2 100 100 100 177 66 8 102 1 37 9 985 920 100 92 7 86 2 96 8 892 99 0
49. L 100 uL Consulte as sec es Notas ao procedimento e Pipetac o de Controlos e Esp cimenes para mais informa es Captura de Alvo Target Capture A utiliza o do Sistema de Captura de Alvo GEN PROBE descrito no Target Capture System Operator s Manual Manual do Operador do Sistema de Captura de Alvo Caso utilize o banho de calor seco v rtex SB100 consulte a SB100 Application Sheet Ficha de aplica o SB100 11 Cubra as TTU com cart es de selagem e agite o suporte manualmente com suavidade N o coloque os esp cimes no v rtex Incube o suporte a 62 C 1 C em banho de gua durante 30 5 minutos 12 Remova o suporte do banho de gua e seque a parte inferior dos tubos com material absorvente 13 Assegure se de que os cart es de selagem est o bem colocados Caso necess rio substitua os com novos cart es de selagem e sele bem as TTU 14 Agite o suporte no misturador v rtex multitubos durante 60 segundos Consulte a sec o Notas ao procedimento Utiliza o do v rtex para mais informa es Comece a agitar nos 2 minutos que se seguem retirada do suporte do banho de gua 15 Sem retirar os cart es de selagem incube o suporte temperatura ambiente durante 30 5 minutos 16 Coloque o suporte na base magn tica da unidade TCS durante 5 a 10 minutos 17 Prepare a linha da bomba da esta o de fornecimento bombeando a Solu o de Lavagem APTIMA atrav s do distribuidor Bombeie l quido bastante
50. M foram mantidas a 30 C 94 dos replicados deram resultados positivos para GC ao dia 35 Quando as amostras de UTM foram mantidas a 20 C 98 dos replicados deram resultados positivos para GC ao dia 109 Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 63 502185PT Rev E Desempenho anal tico nos Sistemas DTS B Esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt Os dados que sustentam as condi es recomendadas de envio e armazenamento de esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt foram gerados a partir de amostras negativas processadas e n o processadas de l quido citol gico Quanto s amostras n o processadas foram testados quatro grupos de amostras de solu o PreservCyt ap s serem armazenados no frasco de solu o PreservCyt Cytyc Cada grupo de esp cimes foi misturado com 50 100 CFU de GC ensaio mantido a 2 C 10 C e 30 C e depois testado no momento basal e aos dias 5 7 8 14 18 21 25 e 36 Todas as amostras misturadas deram resultados positivos para GC em todos os momentos e a todas as temperaturas Quanto s amostras processadas foram utilizados quatro grupos de amostras de solu o PreservCyt para determinar a estabilidade dos esp cimes processados entre 2 C e 30 C Cada grupo de amostras negativas foi misturado com 50 100 CFU de GC ensaio e depois testado no momento basal Antes do processamento as amostras em solu o PreservCyt foram conservadas a 30 C durante sete 7 dias para simular o inter
51. Manual Manual do Operador do Software de Ensaio APTIMA 8 Misture bem o wTCR GC Utilizando a pipeta de repeti o adicione 100 uL a cada tubo de reac o 9 O primeiro tubo de reac o do ensaio tem de conter o controlo negativo e o segundo tubo de reac o tem de conter o controlo positivo a O r tulo do controlo negativo para o ensaio APTIMA GC cor de rosa O texto do r tulo identifica o controlo negativo como CONTROL CT PCT CONTROL GC NGC O r tulo do controlo positivo para o ensaio APTIMA GC azul esverdeado O texto do r tulo identifica o controlo positivo como CONTROL GC PGC CONTROL CT NCT b Segure o tubo de controlo negativo tubo rotulado a rosa na m o ou mantenha o num suporte Com a utiliza o de uma micropipeta perfure a tampa tomando cuidado para n o chegar com a ponta ao fundo do tubo Adicione 400 uL do controlo negativo tubo rotulado a rosa ao primeiro tubo de reac o Da mesma forma e utilizando uma nova ponta de pipeta adicione 400 uL de controlo positivo tubo rotulado a azul esverdeado ao segundo tubo de reac o Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 16 502185PT Rev E Sistemas DTS 10 Continue o procedimento de prepara o do suporte adicionando 400 uL de cada esp cime aos tubos de reac o restantes Utilize uma nova ponta de pipeta para cada esp cime e controlo O volume de esp cime ou controlo aceit vel para adi o a um tubo de reac o de 400 u
52. Neisseria gonorrhoeae 69 502185PT Rev E Desempenho anal tico no Sistema TIGRIS DTS Tabela 14 Estudo de concord ncia do painel cl nico misturado com rRNA de GC pe Concor Concor Concord ncia Esp cime R C Nn Ai R plicas d ncia d ncia global entre TIGRIS TIGRIS DTS e DTS IC de 95 Sem alvo 0 12 100 100 Muito baixo 25 30 100 100 Endocervical Baixa 250 30 100 100 100 97 2 100 M dio 2 500 30 100 100 High 250 000 30 100 100 Sem alvo 0 12 100 100 Muito baixo 25 29 100 100 Esfrega o Vaginal Baixa 250 30 100 100 100 97 2 100 M dio 2 500 30 100 100 High 250 000 30 100 100 Sem alvo 0 12 100 100 Muito baixo 25 30 100 100 Uretral Baixa 250 30 100 100 100 97 2 100 M dio 2 500 30 100 100 High 250 000 30 100 100 Sem alvo 0 12 100 100 Muito baixo 25 30 63 3 19 30 100 Estudo inicial Baixa 250 30 100 100 91 7 85 6 95 8 M dio 2 500 30 100 100 High 250 000 30 100 100 Sem alvo 0 18 100 100 Muito baixo 25 30 100 100 Mum Seguimento 1 Baixa 250 30 100 100 100 97 4 100 M dio 2 500 30 100 100 High 250 000 30 100 100 Sem alvo 0 18 100 100 Muito baixo 25 30 100 100 Seguimento 2 Baixa 250 30 100 100 100 97 4 100 M dio 2 500 30 100 100 High 250 000 30 100 100 N o testado em ambos os sistemas devido a volume insuficiente de amostra Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 70 502185PT Rev E
53. O ensaio APTIMA GC combina as tecnologias de captura de alvo TMA e HPA Os esp cimes s o colhidos e transferidos em seus respectivos tubos de transporte de esp cimes A solu o de transporte contida nestes tubos liberta o rRNA alvo e protege o da degrada o durante o armazenamento Quando o ensaio APTIMA GC realizado em laborat rio as mol culas de rRNA alvo s o isoladas dos esp cimes utilizando olig meros de captura atrav s de uma captura de alvos que utiliza micropart culas magn ticas O olig mero de captura cont m uma sequ ncia complementar a uma regi o espec fica da mol cula alvo assim como uma cadeia de res duos de desoxiadenosina Durante o passo de hibrida o a regi o espec fica para a sequ ncia do olig mero de captura liga se a uma regi o espec fica da mol cula alvo O olig mero de captura o complexo alvo ent o capturado da solu o ao reduzir a temperatura da sala de reac o para temperatura ambiente Esta redu o de temperatura permite que a hibridiza o ocorra entre a regi o de desoxiadenosina no olig mero de captura e as mol culas de poli desoxitimidina que s o ligadas de forma covalente s part culas magn ticas As micropart culas incluindo as mol culas alvo capturadas a elas ligadas s o arrastadas por mans para o lado do recipiente de reac o sendo o sobrenadante aspirado As part culas s o lavadas para remover matrizes de esp cimes residuais que podem conter inibidores da
54. PTIMA Assay Software Operator s Manual Manual do Operador do Software de Ensaio APTIMA c Assegure se de que existem volumes suficientes de Auto Detect 1 e 2 para completar os testes d Prepare o LEADER HC Lumin metro colocando uma TTU vazia na posi o 1 da cassete e execute o protocolo Wash lavagem e Carregue as TTU no lumin metro f Inicie sess o no computador Clique em New Run Novo teste escolha APTIMA GC Assay Protocol Protocolo do ensaio APTIMA GC e introduza o n mero de tubos controlos e esp cimes Clique em Next Seguinte para iniciar a execu o Nota O teste deve ser terminado num per odo de 2 horas a partir do final da incuba o do passo de selec o g Prepare o fluido de desactiva o misturando volumes iguais de solu o de hipoclorito de s dio 5 a 7 0 7 M a 1 0 M e tamp o para fluido de desactiva o APTIMA num recipiente de pl stico com tampa grande Coloque a etiqueta e escreva a data de validade no recipiente de pl stico O Fluido de Desactiva o fica est vel durante 4 semanas temperatura ambiente Elimine o Fluido de Desactiva o ap s 4 semanas ou ap s 100 amostras processadas terem sido desactivadas o que vier primeiro h Ap s remover as TTU usadas do lumin metro coloque as no recipiente de Fluido de Desactiva o Deixe que as TTU estabilizem no recipiente durante pelo menos 15 minutos antes de serem eliminadas M todos apropriados para manuseamento e descar
55. Po qa 4 GEN PROBE APT MA Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae Para fins de diagn stico in vitro Exclusivamente para exporta o dos EUA Informa es gerais cciiiissoo 2 Utiliza o pretendida cccccccccc 2 Resumo e explica o do teste ccciiiiiic 2 Princ pios do procedimento llllslllls ellen 3 Avisos e precaug es lslilllllle ses 4 Requisitos de armazenamento e manuseamento dos reagentes 7 Colheita e armazenamento de esp cimes llilllusu 8 Interpreta o do teste controlo de qualidade resultados do paciente 39 LIMITA ES alias asas a N nica al Ra 42 Resultados de Estudos Cl nicos cccisscsso 44 Valores esperados dos Sistemas DTS iiloiiiluusuu 45 Desempenho cl nico nos Sistemas DTS lllllsuuus 48 Concord ncia dos esp cimes cl nicos no Sistema TIGRIS DTS 65 Desempenho anal tico no Sistema TIGRIS DTS ussus 69 Desempenho anal tico no Sistema PANTHER L 73 Bibliografia sese et p RELIER SEQ Espa d m es 75 DTS a TIGRIS do Sistemas D T9 oiii e iore cerei cecus ea De De ceras 10 Sistema TIGRIS DTS esses 24 Reagentes e materiais fornecidos 10 Reagentes e materiais fornecidos 24 Materiais necess rios mas dispon veis separadamente 12 Materiais nece
56. Quando isto ocorre a variabilidade medida com DP e CV definida como zero 12 N A n o aplic vel para membros do painel negativos Operador teste As amostras com resultados discordantes foram inclu das na an lise de variabilidade de sinal Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 60 502185PT Rev E Desempenho anal tico nos Sistemas DTS Desempenho anal tico nos Sistemas DTS Consulte Desempenho anal tico no Sistema TIGRIS DTS ap s a sec o Concord ncia dos esp cimes cl nicos no Sistema TIGRIS DTS para obter o desempenho anal tico espec fico do Sistema TIGRIS DTS Consulte Desempenho anal tico no Sistema PANTHER para obter o desempenho anal tico espec fico do Sistema PANTHER Sensibilidade Anal tica A sensibilidade anal tica para N gonorrhoeae limites de detec o foi determinada por compara o directa entre dilui es de 51 isolados cl nicos distintos em cultura celular e no ensaio APTIMA GC A sensibilidade cl nica indicada para o ensaio de 50 CFU ensaio 362 CFU esfrega o 250 CFU mL urina e 487 5 CFU mL de esp cime citol gico em base l quida PreservCyt Especificidade Anal tica No total foram avaliados 154 isolados de cultura utilizando o ensaio APTIMA GC Estes isolados inclu ram 86 organismos que podem ser isolados das vias urin rias e 68 organismos adicionais que representam uma sec o transversal filogen tica dos organismos Os organismos testados inclu ram bact rias fungos
57. a quando se cumpre uma das duas condi es seguintes a Est a ser actualmente processado pelo sistema um par de controlos b S o registados no sistema resultados v lidos para os controlos 2 Depois de os tubos de controlo terem sido pipetados e estarem a ser processados para um kit de reagente espec fico os esp cimes dos pacientes podem ser testados com o kit de reagentes associado durante at 24 horas excepto se a Os controlos forem inv lidos b O kit de reagente do ensaio associado for retirado do sistema c O kit de reagente do ensaio associado tiver excedido os limites de estabilidade 3 Cada tubo de controlo APTIMA pode ser testado uma vez A tentativa de pipetar mais de uma vez do tubo pode provocar erros de processamento B Temperatura Considera se que a temperatura ambiente a compreendida entre 15 C e 30 C C P das Luvas Como em qualquer sistema de reagente o excesso de p em algumas luvas pode causar a contamina o de tubos abertos E recomendada a utiliza o de luvas sem p D Protocolo de monitoriza o de contamina o laboratorial para o Sistema PANTHER Existem muitos factores espec ficos do laborat rio que podem contribuir para a contamina o incluindo volume de testes fluxo de trabalho predom nio de doen as e v rias outras actividades laboratoriais Esses factores devem ser considerados ao estabelecer se a frequ ncia da monitoriza o de contamina o Os intervalos para
58. a de trabalho A etiqueta deste controlo cor de rosa O texto da etiqueta CONTROL CT PCT CONTROL GC NGC O Controlo Positivo GC Controlo Negativo CT deve ocupar a segunda posi o e a ltima posi o de uma lista de trabalho A etiqueta deste controlo azul esverdeada O texto da etiqueta CONTROL GC PGC CONTROL CT NCT 2 Cada tubo de controlo APTIMA pode ser testado uma vez A tentativa de pipetar mais de uma vez do tubo de esp cimes pode provocar erros por volume insuficiente B Temperatura Considera se que a temperatura ambiente a compreendida entre 15 C e 30 C C P das Luvas Como em qualquer sistema de reagente o excesso de p em algumas luvas pode causar a contamina o de tubos abertos E recomendada a utiliza o de luvas sem p D Protocolo de Monitoriza o de Contamina o Laboratorial para o Sistema TIGRIS DTS Existem muitos factores espec ficos do laborat rio que podem contribuir para a contamina o incluindo volume de testes fluxo de trabalho predom nio de doen as e v rias outras actividades laboratoriais Esses factores devem ser considerados ao estabelecer se a frequ ncia da monitoriza o de contamina o Os intervalos para a monitoriza o de contamina o devem ser estabelecidos com base nas pr ticas e procedimentos de cada laborat rio Para monitorizar a contamina o laboratorial o seguinte procedimento deve ser executado usando o Kit Unissex
59. a monitoriza o de contamina o devem ser estabelecidos com base nas pr ticas e procedimentos de cada laborat rio Para monitorizar a contamina o laboratorial o seguinte procedimento deve ser executado usando o Kit Unissexo APTIMA de Colheita de Esp cimes de Esfrega o para Esp cimes de Esfrega o Endocervical e da Uretra Masculina 1 Etiquete os tubos de transporte dos esfrega os com n meros correspondentes s reas a serem testadas 2 Remova o esfrega o de colheita de esp cimesnes esfrega o com haste azul e impress o verde de sua embalagem humede a o no meio para transporte de esfrega o e esfregue a rea designada com um movimento circular Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 37 502185PT Rev E Sistema PANTHER 3 Insira imediatamente o esfrega o no tubo de transporte 4 Quebre com cuidado a haste da zaragatoa na linha marcada tendo o cuidado de evitar que o conte do salpique 5 Tape novamente o tubo de transporte de esfrega os bem apertado 6 Repita os Passos 2 a 5 em cada rea a amostrar com a zaragatoa Caso os resultados de GC sejam positivos ou inconclusivos consulte Interpreta o do teste controlo de qualidade resultados do paciente Para mais informa es sobre a monitoriza o de contamina es espec ficas do Sistema PANTHER contacte a assist ncia t cnica da Gen Probe Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 38 502185PT Rev E Interpreta o do teste controlo de qualidade
60. acte a assist ncia t cnica da Gen Probe para aux lio com controlos fora dos intervalos nos Sistemas DTS 4 Um par metro do Sistema TIGRIS DTS permite que cada local especifique uma frequ ncia de suporte de controlo pela qual conjuntos adicionais de controlos podem ser colocados em intervalos definidos dentro da lista de trabalho Caso este par metro seja especificado o Sistema TIGRIS DTS exigir que um conjunto de controlos seja aplicado ap s o n mero definido de esp cimes no suporte de controlo O Sistema TIGRIS DTS avalia automaticamente cada controlo na lista de trabalho de acordo com os crit rios acima e invalidar todos os esp cimes no s suporte s de controlo s afectados caso os crit rios de controlos n o seja atendido Consulte o TIGRIS DTS System Operator s Manual Manual do Operador do Sistema TIGRIS DTS para obter mais detalhes 5 Controlos negativos podem n o ser efectivos na monitoriza o de transmiss o aleat ria Consulte as Desempenho anal tico no Sistema TIGRIS DTS para obter os resultados de um estudo de transmiss o anal tica de alto alvo que se realizou para demonstrar o controlo da transmiss o no Sistema TIGRIS DTS Consulte as Desempenho anal tico no Sistema PANTHER para obter os resultados de um estudo de transmiss o anal tica de alto alvo que se realizou para demonstrar o controlo da transmiss o no Sistema PANTHER C Controlo da prepara o de esp cimes opcional O controlo negativo
61. ados inclinando o a um ngulo de 45 para minimizar a forma o de espuma Figura 3 Passo 5 Deixe todo o l quido escoar de volta para o frasco de pl stico i Retire o colarinho de reconstitui o e o frasco de vidro Figura 3 Passo 6 j Coloque a tampa no frasco de pl stico Registe as iniciais do operador e a data de reconstitui o no r tulo Figura 3 Passo 7 k Elimine o colarinho e o frasco Figura 3 Passo 8 Aviso Evite formar espuma ao reconstituir os reagentes A espuma compromete o sensor de n vel no Sistema PANTHER 1 AS hb 3 i 4 m Nip Ci lc t3 N IN 5 f6 iz 8 amp E L I G YA TS 1 U aO 1L aO Figura 3 Processo de reconstituic o no Sistema PANTHER 2 Prepare o reagente de captura do alvo de trabalho GC Working Target Capture Reagent wTCR GC a Emparelhe os frascos apropriados de TCR GC e TCR B b Verifique os n meros do lote na Ficha de C digo de Barras do Lote Principal para garantir que os reagentes adequados no kit estejam emparelhados c Abra o frasco de TCR GC e coloque a tampa numa superf cie de trabalho limpa e coberta d Abra o frasco de TCR B e verta todo o seu conte do para o frasco de TCR GC Espere que uma pequena quantidade de l quido permane a no frasco de TCR B e Coloque a tampa no frasco de TCR GC e agite suavemente a solu o para misturar os conte dos Evite formar espuma durante es
62. ados de TCR GC e TCR B Verifique os n meros do lote na Ficha de C digo de Barras do Lote Principal para garantir que os reagentes adequados no kit estejam emparelhados Abra o frasco de TCR GC e coloque a tampa numa superf cie de trabalho limpa e coberta Abra o frasco de TCR B e verta todo o seu conte do para o frasco de TCR GC Espere que uma pequena quantidade de l quido permane a no frasco de TCR B Coloque a tampa no frasco de TCR GC e agite suavemente a solu o para misturar os conte dos Evite formar espuma durante este passo Anote as iniciais do operador e a data actual na etiqueta Elimine o frasco e a tampa de TCR B 3 Prepare o TCR GC de trabalho WTCR GC para o kit de 50 testes a b Emparelhe os frascos apropriados de TCR GC e TCR B Verifique os n meros do lote na Ficha de C digo de Barras do Lote Principal para garantir que os reagentes adequados no kit estejam emparelhados Abra o frasco de TCR GC e coloque a tampa numa superf cie de trabalho limpa e coberta Abra o frasco de TCR B e coloque a tampa numa superf cie de trabalho limpa e coberta Retire a pipeta de transfer ncia da sua embalagem Transfira aproximadamente 2 mL de TCR GC para o frasco de TCR B N o elimine a pipeta de transfer ncia neste passo Volte a colocar a tampa do frasco de TCR B e misture por invers o Transfira o wTCR GC do frasco de TCR B de volta para o frasco de TCR GC Repita o Passo h diversas vezes at
63. aio provenientes de kits com n meros de lote diferentes Os controlos e fluidos do ensaio APTIMA podem apresentar n meros de lote diferentes Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 5 502185PT Rev E Informa es gerais Espec ficos dos Sistemas DTS X Pontas com encaixes hidrof bicos devem ser usadas No m nimo necess rio dedicar duas pipetas de repeti o ao uso com este ensaio uma para utilizar nos passos de captura do alvo e amplifica o e outra para utilizar nos passos de HPA necess rio dedicar duas micropipetas ao uso com este ensaio uma para utilizar na transfer ncia de esp cimes e outra para utilizar na prepara o de reagentes Todas as pipetas t m de ser limpas regularmente da forma descrita em Procedimento de Teste dos Sistemas DTS Notas ao procedimento Y Ao utilizar pipetas de repeti o para adi o de reagentes n o toque o tubo com a ponta da pipeta para evitar a passagem de um tubo para outro Z A mistura adequada necess ria para alcan ar resultados acurados nos ensaios Para obter todos os dados consulte o Procedimento de Teste dos Sistemas DTS Notas ao procedimento AA necess rio dedicar banhos de gua separados para os passos de captura do alvo amplifica o e HPA do ensaio AB A reprodutibilidade foi estabelecida utilizando meio de transporte de esfrega os misturado com rRNA A reprodutibilidade ao testar os esp cimes de esfrega os contendo o organismo alvo n o foi determi
64. base l quida PreservCyt Ver Notas abaixo a Resultados iniciais Pos para GC Positivo para GC rRNA Neg para GC Presumidamente negativo para GC rRNA Equiv para GC A amostra deve ser testada novamente Inv lido A amostra deve ser testada novamente b Resultados do Novo Teste Pos para GC Positivo para rRNA de GC Neg para GC Presumidamente negativo para GC rRNA Indeterminado um novo esp cime deve ser Equiv para GC recolhido Indeterminado um novo esp cime deve ser Inv lido f recolhido Os resultados de esp cimes com valores de RLU positivos baixos est o inclu dos nesta categoria Consulte a sec o Interpreta o do teste controlo de qualidade resultados do paciente acima Notas O primeiro resultado v lido e n o equ voco para cada analito o resultado que deve ser relatado Recomenda se que sejam cuidadosamente ponderados os dados de desempenho aquando da interpreta o dos resultados do ensaio APTIMA GC em participantes assintom ticos ou em quaisquer participantes de popula es de preval ncia baixa Um resultado negativo n o exclui a presen a de infec o por GC pois os resultados dependem de uma correcta colheita dos esp cimes da aus ncia de inibidores e da detec o de rRNA suficiente Os resultados do teste podem ser afectados por uma colheita incorrecta dos esp cimes armazenamento inadequado dos esp cimes erro t cnico mistura de esp cimes ou
65. bstitui o 103036A Tampas suplentes para os kits de 100 testes Solu es de reconstitui o para os reagentes de amplifica o enzim tico e de sonda CL0041 100 tampas TCR e reagente de selec o 501604 100 tampas Materiais Opcionais Ref Cat Kit de controlos APTIMA 301110 Refor o de lix via GEN PROBE 302101 para a limpeza de rotina de superf cies e equipamento Procedimento de teste do Sistema PANTHER Nota Consulte o PANTHER System Operator s Manual Manual do Operador do Sistema PANTHER para mais informa es sobre procedimentos do Sistema PANTHER A Prepara o da rea de trabalho 1 Limpe as superf cies de trabalho onde os reagentes e amostras ser o preparados Limpe as superf cies de trabalho com solu o de hipoclorito de s dio de 2 5 a 3 5 0 35 M a 0 5 M Deixe a solu o de hipoclorito de s dio em contacto com as superf cies durante pelo menos 1 minuto enxaguando as depois com gua N o deixe secar a solu o de hipoclorito de s dio Cubra a superf cie da bancada onde os reagentes e as amostras ser o preparados com capas absorventes para bancadas de laborat rios com forro pl stico B Reconstitui o dos reagentes Prepara o de um novo kit Nota A reconstitui o dos reagentes deve ser realizada antes de come ar qualquer trabalho no Sistema PANTHER 1 Para reconstituir os reagentes de amplifica o GC enzim tico GC e de sonda GC combine os frascos de reagente liofi
66. charea Aerococcus viridans Haemophilus ducreyi Paracoccus denitrificans Aeromonas hydrophila Haemophilus influenzae Peptostreptococcus anaerobius Agrobacterium radiobacter Herpes simplex virus Peptostreptococcus productus Alcaligenes faecalis Herpes simplex virus Il Plesiomonas shigelloides Bacillus subtilis Papilomav rus humano 16 Propionibacterium acnes Bacteriodes fragilis Kingella dentrificans Proteus mirabilis Bacteriodes ureolyticus Kingella kingae Proteus vulgaris Bifidobacterium adolescentis Klebsiella oxytoca Providencia stuartii Bifidobacterium brevi Klebsiella pneumoniae Pseudomonas aeruginosa Branhamella catarrhalis Lactobacillus acidophilus Pseudomonas fluorescens Brevibacterium linens Lactobacillus brevis Pseudomonas putida Campylobacter jejuni Lactobacillus jensonii Rahnella aquatilis Candida albicans Lactobacillus lactis Rhodospirillum rubrum Candida glabrata Legionella pneumophila 2 Saccharomyces cerevisiae Candida parapsilosis Leuconostoc paramensenteroides Salmonella minnesota Candida tropicalis Listeria monocytogenes Salmonella typhimurium Chlamydia pneumoniae Micrococcus luteus Serratia marcescens Chlamydia psittaci 2 Moraxella lacunata Staphylococcus saprophyticus Chromobacterium violaceum Moraxella osloensis Staphylococcus
67. cimes para cada tipo com resultados negativos em que 30 esp cimes foram misturados com GC a 50 CFU por reac o 30 esp cimes foram misturados com GC a 5 CFU por reac o respectivamente e 30 esp cimes n o foram misturados Os esp cimes foram armazenados a 20 C e testados aos dias 0 200 e 400 Todos os esp cimes misturados atingiram o crit rio de aceita o de 95 de concord ncia com os resultados esperados Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 64 502185PT Rev E Concord ncia dos esp cimes cl nicos no Sistema TIGRIS DTS Concord ncia dos esp cimes cl nicos no Sistema TIGRIS DTS Concord ncia do Sistema TIGRIS DTS A concord ncia entre os resultados do ensaio APTIMA GC gerados no Sistema TIGRIS DTS totalmente automatizado e nos Sistemas DTS semi automatizados foi avaliada testando esfrega os endocervicais esfrega os uretrais masculinos urina feminina e masculina esfrega os vaginais e esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt Todos os esp cimes cl nicos foram testados individualmente com o ensaio APTIMA GC no Sistema TIGRIS DTS e nos Sistemas DTS na Gen Probe A ordem de an lise n o foi aleat ria Os esp cimes identificados para inclus o foram testados no Sistema TIGRIS DTS e depois nos Sistemas DTS Estudo de concord ncia de esp cimes cl nicos esfrega os endocervicais esfrega os uretrais masculinos urina feminina e masculina esfrega os vaginais e esp cimes citol gicos em base l q
68. cl icos em Solu o PreservCyt Se um esp cime citol gico em base l quida PreservCyt apresentar um n mero baixo de material celular de GC pode ocorrer uma distribui o n o homog nea deste material celular Al m disso quando comparado com amostras directas de Meio de Transporte de Esfrega os APTIMA o volume adicional de solu o PreservCyt resulta em maior dilui o do material de amostra Esses factores podem afectar a habilidade de detectar pequena quantidade de organismos no material colhido Se resultados negativos dos esp cimes n o se encaixarem na impress o cl nica um novo esp cime pode ser necess rio X Clientes devem validar um processo de transfer ncia LIS independentemente Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 43 502185PT Rev E Resultados de Estudos Cl nicos Resultados de Estudos Cl nicos As caracter sticas de desempenho do ensaio APTIMA GC foram estabelecidas em duas investiga es cl nicas realizadas na Am rica do Norte A primeira investiga o cl nica estabeleceu a sensibilidade a especificidade e os valores preditivos do ensaio APTIMA GC utilizando esfrega os colhidos pelo m dico de origem endocervical vaginal e uretral masculina esfrega os vaginais colhidos pela paciente e esp cimes de urina de ambos os sexos Al m disso a primeira investiga o avaliou tamb m a precis o do ensaio APTIMA GC quando realizado de acordo com as Orienta es do NCCLS 12 A segunda investiga o cl n
69. contendo 2 500 fg de rRNA de GC ensaio a concord ncia com os resultados esperados foi de 99 8 Os valores de CV foram iguais ou inferiores a 9 096 Estes dados indicam uma boa reprodutibilidade do ensaio APTIMA GC com o Sistema TIGRIS DTS Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 67 502185PT Rev E Tabela 13 Dados de Precis o do Sistema TIGRIS DTS Concord ncia dos esp cimes cl nicos no Sistema TIGRIS DTS gt Entre Entre listas de Intra lista de Conc fg rRNA RLU Fntre Locais Operadores Pntre Lotes trabalho trabalho por n m dia Concd x1 000 o DP DP o DP o DP o ensaio x1 000 cV x1 000 cV x1 000 CV x1 000 cV x1 000 CV 0 859 4 6 100 1 7 N A 0 0 N A 0 3 N A 0 7 N A 2 7 N A 250 429 4 148 100 236 5 7 170 4 1 212 5 1 94 9 2 3 222 5 3 2 500 429 5 361 99 8 275 5 1 145 2 7 273 5 1 25 1 0 5 482 9 0 25 000 430 5 871 100 325 5 5 163 2 8 303 5 2 106 1 8 176 3 0 250 000 431 6 037 100 317 5 2 167 2 8 303 5 0 126 2 1 186 3 1 Concd concord ncia Conc concentra o CV coeficiente de varia o N A n o aplic vel a amostras negativas RLU unidades relativas de luz Relative Light Units DP desvio padr o Os valores do DP e do CV est o definidos como 0 e 0 0 respectivamente de acordo com o modelo de efeitos aleat rios se a variabilidade devido a esta fonte relativamente a erros aleat rios e ou varia o de outras fontes for numericamente negativa 4 amost
70. da gera o Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 2 502185PT Rev E Informa es gerais que utiliza tecnologias de captura de alvo amplifica o mediada por transcri o Transcription Mediated Amplification TMA e um ensaio de protec o da hibrida o Hybridization Protection Assay HPA para aperfei oar o processamento do esp cime ampliar o rRNA alvo e detectar produtos da amplifica o respectivamente Os estudos que compararam o desempenho e inibi o de esp cimes de v rios sistemas de amplifica o demonstraram os benef cios da captura de alvo da TMA e do HPA 4 7 De acordo com as Orienta es para o Rastreio de Chlamydia trachomatis e Neisseria gonorrhoeae de 2002 os CDC recomendam diversas op es para o seguimento de testes de rastreio positivos se for de esperar um valor preditivo positivo baixo ou se um resultado positivo falso acarretar consequ ncias psicossociais ou legais graves 1 Uma destas op es de an lise adicional pode consistir num teste de amplifica o de cidos nucleicos diferente aprovado pela FDA que utilize um alvo distinto do alvo do teste inicial O ensaio APTIMA GC e o ensaio APTIMA COMBO 2 t m ambos como alvo a subunidade 16S de rRNA para a captura e detec o A sonda de captura a mesma para ambos os ensaios mas o ensaio APTIMA GC reconhece para detec o uma regi o da subunidade 16S de rRNA diferente da reconhecida pelo APTIMA COMBO 2 Princ pios do procedimento
71. de urina para 105575 esp cimes de urina masculinos e femininos Kit APTIMA de colheita de esfrega os vaginais 301162 Kit de transfer ncia de esp cimes APTIMA 301154C Padr o de calibra o SysCheck 301078 Lix via solu o de hipoclorito de s dio 5 a 7 0 7 M a 1 0M Recipientes padr o para colheita de urina sem conservantes Recipiente pl stico com tampa grande Tampas penetr veis APTIMA 105668 Tampas n o penetr veis de substitui o 103036A Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 12 502185PT Rev E Sistemas DTS Materiais Opcionais Ref Cat Kit de controlos APTIMA 301110 Fluidos do ensaio APTIMA 302002C Solu o de lavagem APTIMA tamp o para o fluido de desactivac o APTIMA e reagente a leo APTIMA Refor o de lix via GEN PROBE 302101 para a limpeza de rotina de superf cies e equipamento Painel de compet ncia de DST 102325 Pontas 1 000 uL condutoras com sensor de l quido 10612513 Tecan TECAN Freedom EVO 100 4 contendo 900932 Sistemas DTS 800 APTIMA COMBO 2 Placa do tabuleiro 105200 Reservat rio de reagentes quarto de m dulo de 40 mL 104765 Reservat rio de reagentes dividido quarto de m dulo de 19 mL x 2 104763 Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 13 502185PT Rev E Sistemas DTS Procedimento de Teste dos Sistemas DTS A Prepara o do Equipamento 1 Ajuste um banho de gua a 62 C 1 C para captura do alvo e hibrida o do iniciador um segundo banho de gua a 42
72. dedicada deve estar afastada das reas de prepara o de reagentes captura de alvo e de amplifica o I Para ajudar a evitar a contamina o das reas laboratoriais com produtos da amplifica o a rea laboratorial deve ser disposta de forma a ter um fluxo de trabalho unidireccional da prepara o dos reagentes at ao HPA Esp cimes equipamentos e reagentes n o devem ser devolvidos rea onde um passo anterior tenha sido executado Al m disso o pessoal n o deve voltar para reas de trabalho anteriores sem cumprir as devidas medidas de protec o contra contamina o Relacionado com os esp cimes J Para a colheita de esfrega os endocervicais e uretrais masculinos utilize apenas o kit APTIMA de colheita de esfrega os endocervicais e uretrais masculinos Para a colheita de esp cimes de urina utilize apenas o kit APTIMA de colheita de esp cimes de urina para esp cimes de urina masculinos e femininos Para esfrega os vaginais colhidos pela paciente e pelo m dico utilize apenas o kit APTIMA de colheita de esfrega os vaginais K As datas de validade listadas nos kits de colheita referem se ao local de colheita e n o instala o de testes As amostras colhidas em qualquer momento antes da data de validade do kit de colheita e transportadas e armazenadas de acordo com o folheto da embalagem s o v lidas para testes mesmo que a data de validade no tubo de colheita tenha passado Ensaio APTIMA Neisseria gonor
73. do 2 1 3 N o infectado 3 1 4 N o infectado 3 1 4 N o infectado 696 577 1 273 N o infectado N A 0 1 1 N o infectado 0 1 1 N o infectado N A 16 9 25 N o infectado N A N A 1 0 N o infectado N A 2 2 4 N o infectado N A N A 0 1 1 N o infectado 11 10 21 N o infectado N A 0 1 1 N o infectado 1 1 2 N o infectado N A 0 1 1 N o infectado N A N A N A 0 1 N o infectado N A 5 4 9 N o infectado 1 2 Total 811 640 1 451 EE NA GNE LCS cc UR SU E TS coc ER SET SS Sint sintom tico Assint assintom tico N A esp cime n o obtido ou dispon vel para an lise O s mbolo de igual representa resultados equ vocos ou indeterminados ap s repeti o do teste EF esfrega o endocervical feminino UF urina feminina PVS esfrega o vaginal colhido por paciente CVS esfrega o vaginal colhido pelo m dico Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 57 502185PT Rev E Desempenho cl nico nos Sistemas DTS Tabela 7e Resultados do estado de infec o de pacientes ap s estudo cl nico de esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt para N gonorrhoeae Esfrega o endocervical Estado sintom tico Estado de infec o do paciente Rice cat ada o rn Sintom tico Assintom tico Infectado Positivo Positivo 7 6 N o infectado Nega
74. doen a inflamat ria p lvica DIP PID pode se manifestar como endometrite salpingite peritonite p lvica abcessos tubo ovarianos Uma percentagem menor de pessoas com infec es gonoc cicas pode adquirir infec o gonoc cica disseminada IGD 8 11 O diagn stico convencional das infec es por GC exige que o organismo seja isolado em meio selectivo ou a observa o de diplococos em esfrega os ap s colora o de Gram 9 M todos de culturas podem ter boa sensibilidade cl nica mas s o altamente dependentes do manuseamento adequado dos esp cimes O armazenamento e o transporte impr prios de esp cimes podem resultar na perda de viabilidade do organismo e gerar resultados negativos incorrectos Al m disso o uso de m s t cnicas de amostragem materiais de amostragem t xicos e a inibi o do crescimento por componentes das secre es corporais podem tamb m acarretar resultados negativos falsos 3 10 Os m todos que n o envolvem culturas habitualmente utilizados na detec o de GC incluem testes de sondas de DNA e testes de amplifica o de cidos nucleicos nucleic acid amplification tests NAAT Os NAAT de primeira gera o para GC apresentam problemas tecnol gicos que limitaram o seu desempenho Estes problemas incluem um processamento de esp cimes inc modo e a inibi o de esp cimes que podem originar resultados negativos falsos 6 O ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae ensaio APTIMA GC um NAAT de segun
75. e rRNA misturado para criar um painel cl nico para cada tipo de esp cime Cada painel continha um total de 132 replicados Os dados iniciais em urina masculina e feminina mostram que alguns membros de pain is que continham rRNA a uma concentra o inferior sensibilidade anal tica indicada deram resultados negativos inesperados no Sistema TIGRIS DTS Foram realizados dois estudos de seguimento para demonstrar e confirmar a concord ncia com os resultados esperados em pain is de urina masculina ou feminina com mistura de rRNA O desenho original do estudo combinava amostras negativas num s grupo principal O desenho do estudo de seguimento para esp cimes de urina masculina e feminina foi alterado Os esp cimes foram aliquotados em minigrupos negativos confirmados para formar os pain is positivos e negativos Para cada painel foram criados 138 replicados A Tabela 14 mostra as concord ncias percentuais para cada n vel de rRNA nos esfrega os endocervicais vaginais uretrais em urina masculina em urina feminina e nos esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt respectivamente com os resultados de GC esperados para o Sistema TIGRIS DTS e para os Sistemas DTS A concentra o entre 1 ordem de grandeza abaixo a 3 ordens de grandeza acima de 250 fg de rRNA de GC ensaio A Tabela 14 indica tamb m as concord ncias percentuais globais do estudo do painel cl nico entre o Sistema TIGRIS DTS e os Sistemas DTS Ensaio APTIMA
76. elevado Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 72 502185PT Rev E Desempenho anal tico no Sistema PANTHER Desempenho anal tico no Sistema PANTHER Estudo de concord ncia do painel cl nico misturado Esp cimes de urina negativos individuais foram misturados com GC para criar um painel de 120 positivos para GC Os membros do painel de positivos para GC foram misturados com organismos a 12 5 CFU mL 125 CFU mL ou 1 250 CFU mL 25 fg ensaio 250 fg ensaio ou 2 500 fg ensaio Al m disso foram colhidos 120 esp cimes de urina negativos para GC Os pain is positivos e negativos foram testados em tr s Sistemas PANTHER e em tr s Sistemas TIGRIS DTS A concord ncia percentual positiva entre o Sistema PANTHER e o Sistema TIGRIS DTS foi de 100 com um intervalo de confian a inferior a 95 de 98 9 A concord ncia percentual negativa entre o Sistema PANTHER e os Sistemas TIGRIS DTS foi de 100 com um intervalo de confian a inferior a 95 de 98 9 Os resultados do estudo s o apresentados na Tabela 16 Tabela 16 Estudo de concord ncia do painel cl nico misturado concord ncia com os resultados esperados para GC Concentra o TIGRIS PANTHER Membro do Painel R plicas KORP om CFU mL fglensaio Concord ncia Concord ncia Positivo muito baixo 12 5 25 117 100 100 Positivo baixo 125 250 120 100 100 Positivo m dio 1 250 2 500 120 100 100 Negativo 0 0 360 100 100 Concord ncia percentual geral de positivos e
77. er Estudos de estabilidade dos esp cimes C Armazenamento de esp cimes ap s o teste 1 Os esp cimes que foram testados devem ser armazenados em posi o vertical num suporte 2 Os tubos de transporte de esp cimes devem ser cobertos com uma pel cula pl stica nova e limpa ou com folha de alum nio 3 Caso as amostras testadas precisem ser congeladas ou despachadas remova a tampa perfur vel e coloque novas tampas n o perfur veis nos tubos de transporte de esp cimes Caso os esp cimes precisem ser despachados para teste em outro local as temperaturas recomendadas dever o ser mantidas Antes de destapar amostras anteriormente testadas e novamente tapadas os tubos de transporte de esp cimes devem ser centrifugados por 5 minutos a 420 RCF for a centr fuga relativa para levar todo o l quido para o fundo do tubo Evite salpicos e contamina o cruzada Nota Os esp cimes t m de ser transportados de acordo com os regulamentos de transporte nacionais e internacionais em vigor Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 9 502185PT Rev E Sistemas DTS Sistemas DTS Os reagentes do ensaio APTIMA GC s o indicados abaixo para os Sistemas DTS Os S mbolos para Identifica o dos Reagentes tamb m s o listados junto ao nome do reagente DTS 53s Reagentes e materiais fornecidos Kit do ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 100 testes 2 caixas Ref Cat 301091 Caixa refrigerada do ensaio APTIMA Neisseria gonorrh
78. erior do intervalo de temperatura ambiente 15 C a 30 C M N o congele os reagentes Colheita e armazenamento de esp cimes O ensaio APTIMA GC foi concebido para detectar a presen a de GC em esfrega os colhidos pelo m dico de origem endocervical vaginal e uretral masculina esfrega os vaginais colhidos pela paciente esp cimes de urina de ambos os sexos e esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt N o foi avaliado o desempenho com outros esp cimes que n o os colhidos com os seguintes kits de colheita Kit Unissexo APTIMA de Colheita de Esp cimes de Esfrega o para Esp cimes de Esfrega o Endocervical e da Uretra Masculina Kit APTIMA de Colheita de Esp cimes de Urina para Esp cimes de Urina Masculina e Feminina Kit APTIMA de colheita de esfrega os vaginais Kit de transfer ncia de esp cimes APTIMA para utiliza o com amostras ginecol gicas colhidas em solu o PreservCyt A Instru es de colheita Consulte o folheto da embalagem do respectivo kit de colheita de esp cimes para instru es de colheita B Transporte e armazenamento de esp cimes antes do teste 1 Esp cimes de esfrega o a Ap s a colheita transporte e armazene os esfrega os no tubo de transporte de esfrega os a uma temperatura entre 2 C e 30 C at an lise Os esp cimes t m de ser analisados com o ensaio APTIMA GC no espa o de 60 dias ap s a colheita Caso seja necess rio um armazenamento mais pro
79. es conclusivas de status de infec o Os resultados destes participantes n o foram inclu dos em quaisquer c lculos do desempenho Dos 7 704 resultados do ensaio APTIMA GC 22 esp cimes 0 29 apresentaram inicialmente resultados do ensaio inv lidos ou equ vocos Quando se voltou a testar estes esp cimes 4 continuaram a ser equ vocos e foram exclu dos das an lises Os restantes 18 esp cimes produziram resultados v lidos no teste ap s a sua repeti o e foram utilizados nos c lculos do desempenho cl nico Tabela 4 Sensibilidade e especificidade do ensaio APTIMA GC relativamente ao estado de infec o do paciente por estado sintom tico e global para esfregacos uretrais masculinos urina masculina esfrega os endocervicais femininos urina feminina esfrega os vaginais colhidos por pacientes assintom ticas e esfrega os vaginais colhidos pelo m dico in Estado Sensibilidade Especificidade Esp cime sintom tico N PY FP NV FN IC de 95 IC de 95 Esfrega o Sintom tico 575 171 10 393 1 994 96 8 100 97 5 95 5 98 8 Masculino Sintom tico 576 171 4 400 1 994 96 8 100 990 97 5 99 7 rina Assintom tico 745 9 5 730 1 90 0 55 5 99 7 993 984 99 Tudo 1 321 180 9 1130 2 989 961 999 992 98 99 Sintom tico 805 52 8 744 1 98 1 89 9 100 989 97 9 99 5 Esfrega o Assintom tico 635 20 5 609 1 952 76 2 99 9 992 98 1 99 7 Tudo 1440 72 13
80. eval ncia hipot ticas com a utiliza o do ensaio APTIMA GC s o apresentados na Tabela 2 Estes c lculos baseiam se em taxas de preval ncia hipot ticas e na sensibilidade e na especificidade globais estimadas a partir do estado de infec o do paciente A sensibilidade e a especificidade globais para GC foram de 97 6 e 99 3 respectivamente Tabela 2 Os valores reais de PPV e NPV para esfrega os endocervicais esfrega os vaginais e esfrega os uretrais masculinos colhidos pelo m dico esfrega os vaginais colhidos pelas pacientes e esp cimes de urina de ambos os sexos s o indicados na Tabela 6 para cada local cl nico e a n vel global Os valores reais de PPV e NPV em esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt s o indicados na Tabela 6a Tabela 2 Valores preditivos positivos e negativos para taxas de preval ncia hipot ticas na Am rica do Norte Taxa de preval ncia hipot tica Sensibilidade 76 Especificidade PPV NPV 1 97 6 99 3 58 7 100 0 2 97 6 99 3 74 1 100 0 5 97 6 99 3 88 1 99 9 10 97 6 99 3 94 0 99 7 15 97 6 99 3 96 1 99 6 20 97 6 99 3 97 2 99 4 25 97 6 99 3 97 9 99 2 30 97 6 99 3 98 4 99 0 Distribuic o de RLU no ensaio APTIMA GC A Figura 4 mostra a distribui o de RLU para o ensaio APTIMA GC relativamente aos seguintes tipos de esp cimes analisados no estudo cl nico de participantes sintom ticos esfrega os endocervicais esfrega os vaginais e esfre
81. feminina 70 de urina masculina e 34 esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt inclu dos para an lises de compara o provinham de indiv duos sintom ticos Os esp cimes com resultados iniciais inv lidos ou equ vocos foram depois testados utilizando o mesmo sistema que tinha gerado o resultado Tr s esp cimes de urina feminina 1 esfrega o vaginal e 1 esfrega o uretral masculino apresentaram resultados iniciais equ vocos nos Sistemas DTS ap s repeti o do teste todos deram resultados v lidos Um esp cime de urina masculina e outro de urina feminina apresentaram resultados iniciais inv lidos no Sistema TIGRIS DTS ap s repeti o do teste ambos os resultados foram v lidos A Tabela 12 mostra as concord ncias positivas negativas e globais para todos os resultados emparelhados para cada tipo de esp cime por estado sintom tico Os esfrega os femininos esfrega os endocervicais e vaginais combinados est o desequilibrados relativamente a amostras positivas e negativas de participantes sintom ticas mas a concord ncia global para participantes sintom ticas foi de 100 para participantes assintom ticas foi de 97 6 40 41 e para todas sintom ticas e assintom ticas combinadas a concord ncia global foi de 99 2 128 129 Quanto aos esfrega os uretrais masculinos a concord ncia global para participantes sintom ticos assintom ticos e todos foi de 100 Relativamente aos esp cimes de urina femini
82. ga os uretrais masculinos colhidos pelo m dico assim como esp cimes de urina de ambos os sexos colhidos pelo paciente de participantes assintom ticos esfrega os endocervicais e vaginais colhidos pelo m dico assim como esfrega os vaginais e esp cimes de urina de ambos os sexos colhidos pelos pacientes A Tabela 3 indica a distribui o de RLU para os resultados positivos totais e negativos totais bem como os resultados positivos falsos e negativos falsos para estes tipos de esp cimes relativamente ao estado de infec o do paciente Entre certos tipos de esp cimes verifica se uma tend ncia para o aumento da propor o de positivos verdadeiros quando os valores de RLU aumentam Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 46 502185PT Rev E Valores esperados dos Sistemas DTS 7 000 6 122 6 000 eo o 5 000 o E Negativo Equivoco Positivo baixo Positivo 8 de RLU 4 000 o o e E 3 000 z 2 000 1 000 408 4 4 16 4 45 1 13 23 21 116 E 0 zo bio ME DO 34 9 DA o o o o o o S2 h p B 2 SS 4 e tv 2 Da e P ix P SP Ly o x e 5 x 4 9 g E e Es E S 3 o RLU x1 000 Figura 4 Frequ ncia da distribui o de RLU do ensaio APTIMA GC Tabela 3 Distribui o de RLU no ensaio APTIMA GC RLU x1 000 0 10 20 30 40 50 100 1 000 2 000 3 000 4 000 5 000 10 20 30 40 50 100 lt 1 000 lt 2 000 lt 3 000 4 0
83. hido um esp cime de urina seguido por um esfrega o vaginal colhido pela paciente um esfrega o vaginal colhido pelo m dico e dois esfrega os endocervicais aleat rios Foram gerados resultados pelo ensaio APTIMA GC e pelo ensaio APTIMA COMBO 2 para os dois esfrega os vaginais um esfrega o endocervical um esfrega o uretral masculino e uma al quota de urina masculina e outra feminina Os restantes esfrega os endocervicais esfrega os uretrais masculinos e uma al quota de urina masculina e outra feminina foram testados com outros NAAT dispon veis no mercado Os esp cimes de esfrega o endocervical esfrega o uretral masculino e urina masculina e feminina testados com o ensaio APTIMA COMBO 2 e com o outro NAAT dispon vel no mercado foram utilizados como NAAT de refer ncia para determinar o estado de infec o de cada participante O teste de esp cimes foi conduzido ou no local do registo do paciente ou em um local de teste externo Todos os c lculos do desempenho se basearam no n mero total de resultados obtidos no ensaio APTIMA GC para esfrega os endocervicais vaginais e uretrais masculinos colhidos pelo m dico e esp cimes de urina masculina e feminina em compara o com um algoritmo de estado de infec o do paciente para cada sexo No algoritmo a designa o de um participante como infectado ou n o infectado com GC teve como base os resultados dos esfrega os e esp cimes de urina obtidos com o ensaio APTIMA COMBO 2 dispon
84. iada em dois centros cl nicos externos e na Gen Probe A precis o do ensaio APTIMA GC foi avaliada entre tr s lotes de kits de ensaio APTIMA GC tr s locais de estudo seis operadores e 108 testes do ensaio APTIMA GC Dois operadores em cada um dos tr s locais de ensaio realizaram um total de seis testes do ensaio APTIMA GC por lote de kit num total de 36 testes por lote de kit Cada teste foi constitu do por um painel de precis o de 12 membros contendo O to 2433 fg ensaio de rRNA de GC A reprodutibilidade foi estabelecida utilizando meio de transporte de esfrega os misturado com rRNA A reprodutibilidade ao testar os esp cimes de esfrega os contendo o organismo alvo n o foi determinada A Tabela 9 apresenta os dados de precis o de RLU em termos de m dia desvio padr o coeficiente de varia o CV e concord ncia percentual com os resultados esperados para c lculos de variabilidade entre locais entre operadores entre lotes entre testes e intrateste Tabela 9 Dados de precis o do ensaio APTIMA GC utilizando um painel de precis o de 12 membros contendo O to 2 433 fg ensaio de rRNA de GC Entre Intrateste Entre Locais Entre Lotes Entre Testes RLU Operadores 3 2 o Concentra o N m dia Concd DP m DP Eu DP ey DP eu DP eu x1 000 RLU y RLU o RIU qj RIU uy RIU q x1 000 x1 000 x1 000 x1 000 x1 000 Neg 0 fg mL 540 11 7 99 8 2333 N A 0 N A 0 NA 43 N A 0 N A Baixo 6
85. iais do operador data de prepara o e ambos n meros de lote Nota Para um n mero menor de reac es esp cimes e controlos utilize os seguintes dados para calcular os volumes de TCR GC e TCR B Volume de TCR mL n mero de reac es 5 reac es extra x 0 1 mL Volume de TCR B mL Volume de TCR mL 100 C Captura de Alvo Target Capture A pipeta de repeti o usada na captura de alvo e amplifica o deve ser dedicada para utiliza o somente nestes passos Consulte a sec o Avisos e precau es para mais informa es Prepara o dos Suportes 1 Deixe que os esp cimes e controlos alcancem a temperatura ambiente antes do processamento 2 N o agite os esp cimes no v rtex Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 15 502185PT Rev E Sistemas DTS 3 Confirme visualmente se todos os tubos de esp cimes cumprem um dos seguintes crit rios a Presen a de uma nica zaragatoa de colheita azul APTIMA num tubo de transporte de esfrega os unissexo b Presen a de uma nica zaragatoa de colheita cor de rosa APTIMA num tubo de transporte de esfrega os vaginais c Volume final de urina entre as linhas de enchimento pretas dos tubos de transporte de esp cimes de urina d Aus ncia de zaragatoa no tubo de transporte de esp cimes APTIMA para esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt 4 Inspeccione os tubos de esp cimes antes de os perfurar a Caso um tubo de esp cime contenha b
86. ica estabeleceu a sensibilidade especificidade e os valores preditivos do ensaio APTIMA GC utilizando meio de transporte PreservCyt componente do ThinPrep 2000 System Os esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt foram tamb m avaliados quanto precis o intralaboratorial com o ensaio APTIMA GC Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 44 502185PT Rev E Valores esperados dos Sistemas DTS Valores esperados dos Sistemas DTS Preval ncia A preval ncia de GC nas popula es de pacientes depende de factores de risco como a idade o sexo a presen a de sintomas o tipo de cl nica e o m todo de teste O resumo da preval ncia de GC na Am rica do Norte por tipo de esp cime e determinada pelo ensaio APTIMA GC apresentado nas Tabelas 1 e 1a para duas investiga es cl nicas Consulte as sec es Estudo de esp cimes cl nicos em esfrega os endocervicais esfrega os uretrais masculinos esfrega os vaginais e esp cimes de urina e Estudo de esp cimes cl nicos usando esp cimes citol gicos l quidos em PreservCyt na sec o de Desempenho cl nico nos Sistemas DTS para obter uma descri o das caracter sticas de desempenho dos esp cimes cl nicos Tabela 1 Preval ncia de N gonorrhoeae por local cl nico e global determinada a partir dos resultados do ensaio APTIMA GC n positivos n testado Local EM UM EF UF PVS cvs 1 214 54 252 214 54 252 6 1 14 229 5 7 13 230 64 14 219 6 1 14 230
87. las entrarem em contacto com o esp cime Q Caso o laborat rio receba um tubo de transporte de esfrega os que n o contenha o esfrega o contenha dois esfrega os um esfrega o de limpeza ou um esfrega o que n o tenha sido fornecido pela Gen Probe o esp cime dever ser rejeitado Antes de rejeitar um tubo de transporte de esfrega os sem o esfrega o verifique se n o um Tubo APTIMA de Transfer ncia de Esp cimes pois este n o deve conter qualquer esfrega o R No caso de esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt fa a a colheita de acordo com as instru es do fabricante As al quotas subsequentemente retiradas do frasco PreserCyt para teste com o ensaio APTIMA GC devem ser processadas utilizando apenas o kit de transfer ncia de esp cimes APTIMA S Ap s a perfura o o l quido pode vazar das tampas dos tubos de transporte APTIMA sob certas condi es Siga as instru es do Procedimento de teste adequado para impedir que isto aconte a Relacionados com o ensaio T O desempenho dos esfrega os vaginais n o foi avaliado em gr vidas U O desempenho dos esp cimes de esfrega os endocervicais vaginais uretrais masculinos e dos esp cimes de urina feminina e masculina assim como dos esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt n o foi avaliado em adolescentes com menos de 16 anos de idade V N o utilize este kit ap s a data de validade W N o troque misture ou combine reagentes de ens
88. leveduras parasitas e v rus Todos os organismos excepto C psittaci C pneumoniae U urealyticum e os v rus foram testados a 1 0 x10 c lulas ensaio em meio de transporte de urina KOVA Trol e 60 organismos foram testados em meio de transporte de esfrega os Os organismos Chlamydia e Neisseria foram testados em meios de solu o PreservCyt C psittaci VR601 foi testado a 8 0 x 10 c lulas ensaio e C psittaci VR125 foi testado a 1 0 x 10 c lulas ensaio C pneumoniae foi testado a 4 0 x 10 c lulas ensaio e U urealyticum foi testado a 6 7 x 10 c lulas ensaio Os virus foram testados da seguinte forma a v rus herpes simplex I 2 5 x 10 TCIDso ensaio b v rus herpes simplex Il 6 0 x 10 TCIDsg ensaio c papilomav rus humano 16 2 9 x 10 c pias de DNA ensaio e d citomegalov rus 4 8 x 10 c lulas ensaio A lista dos organismos testados indicada na Tabela 11 Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 61 502185PT Rev E Desempenho anal tico nos Sistemas DTS Tabela 11 Especificidade Anal tica Organismo Organismo Organismo Achromobacter xerosis Escherichia coli Neisseria mucosa 3 Acinetobacter calcoaceticus Flavobacterium meningosepticum Neisseria sicca 3 Acinetobacter Iwoffi Fusobacterium nucleatum Neisseria subflava 14 Actinomyces israelii Gardnerella vaginalis Neisseria perflava Actinomyces pyogenes Gemella haemolysans Neisseria polysac
89. lizado com a solu o de reconstitui o Se estiverem refrigeradas deixe que as solu es de reconstitui o atinjam a temperatura ambiente antes de utiliz las a Emparelhe cada solu o de reconstitui o com seu reagente liofilizado Certifique se de que a a solu o de reconstitui o e o reagente t m cores de etiqueta correspondentes antes de aplicar o colarinho de reconstitui o b Verifique os n meros do lote na Ficha de C digo de Barras do Lote Principal para garantir que os reagentes adequados sejam emparelhados c Abra o frasco de reagente liofilizado e insira com firmeza a extremidade ranhurada do colarinho de reconstitui o na abertura do frasco Figura 3 Passo 1 d Abra a solu o de reconstitui o correspondente e coloque a tampa sobre uma superf cie de trabalho limpa e coberta e Enquanto segura o frasco da solu o de reconstitui o na bancada insira firmemente a outra extremidade do colarinho de reconstitui o no frasco Figura 3 Passo 2 Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 34 502185PT Rev E Sistema PANTHER f Inverta lentamente os frascos montados Permita que a solu o escoe do frasco de solu o para o frasco de vidro Figura 3 Passo 3 g Agite suavemente a solu o no frasco para a misturar Evite a cria o de espuma durante a agita o do frasco Figura 3 Passo 4 h Aguarde que o reagente liofilizado entre em solu o e depois inverta novamente os frascos mont
90. local de teste externo e na Gen Probe utilizando dois lotes de reagentes do ensaio APTIMA GC Na Gen Probe 2 operadores realizaram cada um 3 listas de trabalho v lidas por lote de reagentes em cada um de 2 instrumentos do Sistema TIGRIS DTS No local de teste externo 2 operadores realizaram cada um 3 listas de trabalho v lidas por lote de reagentes em 1 instrumento do Sistema TIGRIS DTS Uma lista de trabalho consistiu em controlos do teste e seis pain is de 12 membros As amostras com resultados iniciais inv lidos ou equ vocos de listas de trabalho de ensaios v lidos n o voltaram a ser testadas Onze amostras apresentaram resultados finais inv lidos e foram exclu das das an lises de reprodutibilidade A reprodutibilidade foi determinada calculando a concord ncia entre os resultados finais do ensaio e os resultados esperados para cada membro do painel A reprodutibilidade foi tamb m avaliada calculando o DP e o coeficiente de varia o CV do sinal relativamente a locais operadores lotes e listas de trabalho N o se calcularam os CV para membros do painel negativos para GC devido exist ncia de valores baixos do sinal que poderiam em teoria ser iguais a zero A Tabela 13 mostra os resultados da reprodutibilidade Todos os resultados do ensaio APTIMA GC no Sistema TIGRIS DTS concordaram com os resultados esperados para os membros do painel contendo 0 250 25 000 e 250 000 fg de rRNA de GC ensaio No caso dos membros do painel
91. longado congele a uma temperatura entre 20 C a 70 C durante at 12 meses ap s a colheita ver Estudos de estabilidade dos esp cimes 2 Esp cimes de urina a As amostras de urina que permane am ainda no recipiente prim rio de colheita t m de ser transportadas para o laborat rio a uma temperatura entre 2 C e 30 C Transfira a amostra de urina ao tubo de transporte de esp cimes de urina APTIMA em at 24 horas ap s a colheita Armazene a uma temperatura entre 2 C e 30 C e teste nos 30 dias posteriores colheita b Ap s a colheita transporte os esp cimes de urina processada no tubo de transporte APTIMA de esp cimes de urina a uma temperatura entre 2 C e 30 C e armazene a 2 C e 30 C at an lise Os esp cimes de urina processados devem ser analisados com o ensaio APTIMA GC no espa o de 30 dias ap s a colheita Caso seja necess rio um armazenamento mais prolongado congele a uma temperatura entre 20 C a 70 C durante at 12 meses ap s a colheita ver Estudos de estabilidade dos esp cimes Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 8 502185PT Rev E Informa es gerais 3 Esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt a Os esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt destinados a an lise de GC t m de ser processados para citologia e ou transferidos para um tubo de transfer ncia de esp cimes APTIMA no espa o de 30 dias ap s a colheita quando armazenados entre 2 C e 30 C
92. mes e a n vel geral As sensibilidades variaram entre 80 0 e 100 As especificidades variaram entre 99 0 e 100 Tabela 5 Distribui o do dispositivo de amostragem cervical utilizado em esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt Local de Colheita Cl nica Dispositivo de amostragem cervical Total utilizado 1 2 3 4 5 Esp tula Cytobrush 0 124 475 287 57 364 1 307 Dispositivo tipo escova 100 0 0 0 240 0 340 Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 50 502185PT Rev E Desempenho cl nico nos Sistemas DTS Tabela 5a Sensibilidade e especificidade do ensaio APTIMA GC relativamente ao estado de infec o do paciente por estado sintom tico e a n vel geral em esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt Resultados dos esp cimes citol gicos Sensibilidade Especificidade Symptom l em base l quida IC de 95 IC de 95 PreservCyt Positivo 7 0 0 2 m 7 100 7 7 99 4 350 352 Sintom tico Negativo 0 0 0 350 59 0 100 98 0 99 9 Total 7 0 0 352 Positivo 5 0 1 1 i A 83 3 5 6 99 8 1 280 1 282 Assintom tico Negativo 1 0 5 1 275 85 9 99 6 99 4 100 Total 6 0 6 1 276 Positivo 12 0 1 3 92 3 12 13 99 8 1 630 1 634 Tudo Negativo 1 0 9 1625 64 0 99 8 99 4 99 9 Total 13 0 6 1 628 J A CSIRLLIALI ILLLCELLDGIGCALLLLULLELLL LCOUBGAL CRCLL O ILLISI CBIRGLEOCEO CLLLELILLLGILELLOLEICLEORIELE ALLOUIL LLC CCE CLL CO CE
93. n o penetr veis de substitui o 103036A Tampas suplentes para os kits de 100 testes Solu es de reconstitui o para os reagentes de amplifica o enzim tico e de sonda CL0041 100 tampas TCR e reagente de selec o 501604 100 tampas Tampas suplentes para os kits de 50 testes Solu es de reconstitui o para os reagentes de amplifica o enzim tico e de sonda 501608 100 tampas TCR e reagente de selec o 501604 100 tampas Materiais Opcionais Ref 2 Cat Kit de controlos APTIMA 301110 Refor o de lix via GEN PROBE 302101 para a limpeza de rotina de superf cies e equipamento Procedimento de Teste do Sistema TIGRIS DTS Nota Consulte o TIGRIS DTS System Operator s Manual Manual do Operador do Sistema TIGRIS DTS para mais informa es sobre procedimentos do Sistema TIGRIS DTS Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 26 502185PT Rev E Sistema TIGRIS DTS A Prepara o da rea de trabalho Limpe as superf cies de trabalho onde os reagentes e amostras ser o preparados Limpe as superf cies de trabalho com solu o de hipoclorito de s dio de 2 5 a 3 5 0 35 M a 0 5 M Deixe a solu o de hipoclorito de s dio em contacto com as superf cies durante pelo menos 1 minuto enxaguando as depois com gua N o deixe secar a solu o de hipoclorito de s dio Cubra a superf cie da bancada onde os reagentes e as amostras ser o preparados com capas absorventes para bancadas de laborat rios c
94. na a concord ncia global para participantes sintom ticas foi de 100 para participantes assintom ticas foi de 96 0 24 25 e para todas foi de 98 6 71 72 Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 65 502185PT Rev E Concord ncia dos esp cimes cl nicos no Sistema TIGRIS DTS Relativamente aos esp cimes de urina masculina a concord ncia global para participantes sintom ticos foi de 98 6 69 70 para participantes assintom ticos foi de 100 e para todos foi de 99 2 129 130 Quanto aos esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt a concord ncia global para participantes sintom ticos assintom ticos e todos foi de 100 Devido ao n mero relativamente mais baixo de esp cimes de participantes assintom ticos estes resultados podem n o ser generaliz veis ao teste com o ensaio APTIMA GC no Sistema TIGRIS DTS com esp cimes de participantes assintom ticos Consulte a Tabela 4 para obter as estimativas de desempenho do APTIMA GC relativamente a esfrega os endocervicais esfrega os vaginais esfrega os uretrais masculinos e esp cimes de urina de ambos os sexos e a Tabela 5a para esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt testados nos Sistemas DTS Seria de esperar que as estimativas do desempenho cl nico no Sistema TIGRIS DTS com esfrega os endocervicais esfrega os vaginais esfrega os uretrais masculinos urina masculina e feminina e esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt fossem
95. na amplifica o e detec o de rRNA de GC pelo ensaio APTIMA GC Estudos de estabilidade dos esp cimes A Esfrega os e esp cimes de urina Os dados que sustentam as condi es recomendadas de envio e armazenamento de esfrega os endocervicais uretrais e vaginais foram gerados a partir de amostras de esfrega os negativos agrupados As amostras agrupadas foram misturadas com GC a uma concentra o final de aproximadamente 50 CFU por reac o As amostras misturadas foram mantidas a 70 C 20 C 4 C e 30 C As amostras foram testadas em duplicado nos dias 0 20 77 e 117 Todas as condi es de teste deram resultados positivos para GC em todos os momentos e a todas as temperaturas Os dados que sustentam as condi es recomendadas de envio e armazenamento de amostras de urina foram gerados a partir de amostras negativas de urina de ambos os sexos As amostras de urina foram misturadas com GC a uma concentra o final de aproximadamente 100 CFU por reac o As amostras foram mantidas a 30 C durante 24 horas antes de ser adicionadas ao meio de transporte de urina Urine Transport Medium UTM As amostras de UTM foram depois mantidas entre 4 C e 30 C e testadas em triplicado aos dias 1 14 32 e 35 As amostras de UTM foram tamb m armazenadas a 20 C e 70 C e testadas em triplicado aos dias 1 35 e 109 Todos os replicados deram resultados positivos para GC com as amostras de UTM a 4 C e 70 C Quando as amostras de UT
96. nada AC Os cart es de selagem devem ser eliminados em recipientes para res duos imediatamente ap s remov los dos tubos de reac o Devem sempre utilizar se cart es de selagem novos estes nunca dever o ser reutilizados de passos anteriores Os cart es de selagem devem ser fixados firmemente ao topo de todos os tubos de reac o Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 6 502185PT Rev E Informa es gerais Requisitos de armazenamento e manuseamento dos reagentes A Os seguintes reagentes s o est veis quando armazenados entre 2 C e 8 C refrigerados Reagente de amplifica o APTIMA para GC Reagente enzim tico APTIMA Reagente de sonda APTIMA para GC Reagente de captura do alvo B APTIMA Controlo Positivo APTIMA GC Controlo Negativo CT Controlo Positivo APTIMA CT Controlo Negativo GC B Os seguintes reagentes s o est veis quando armazenados entre 2 C e 30 C Solu o de reconstitui o de amplifica o APTIMA para GC Solu o de reconstitui o para reagente enzim tico APTIMA Solu o de reconstitui o de sonda APTIMA para GC Reagente de selec o APTIMA C Os seguintes reagentes s o est veis quando armazenados entre 15 C e 30 C temperatura ambiente Reagente de captura do alvo APTIMA para GC Solu o de Lavagem APTIMA Tamp o para o fluido de desactiva o APTIMA Reagente a leo APTIMA D O reagente de captura do alvo de trabalho para GC Working Target Capture Reagent GC wTCR G
97. ncorrectas durante v rios passos no ensaio ou ao permitir que o tempo de selec o no passo de selec o dure mais do que o recomendado 2 Antecedentes altos podem ocorrer se o tempo de selec o no passo de selec o for abreviado a temperatura de selec o n o estiver correcta ou ocorrer mistura insuficiente ap s adicionar o Reagente de selec o 3 Seo controlo negativo para GC APTIMA rotulado CONTROL CT PCT CONTROL GC NGC for positivo ou equ voco para GC consulte Notas ao procedimento Contamina o do Ensaio para mais informa es Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 23 502185PT Rev E Sistema TIGRIS DTS Sistema TIGRIS DTS Os reagentes do ensaio APTIMA GC s o indicados abaixo para os C 2 Sistema TIGRIS DTS Os S mbolos para Identifica o dos Reagentes tamb m s o listados junto ao nome do reagente Reagentes e materiais fornecidos Kit do ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 100 testes 2 caixas e 1 kit de controlos Ref Cat 303092 2 x 50 testes 2 caixas e 1 kit de controlos Ref Cat 302225 Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae Caixa refrigerada Embalagem 1 de 2 armazenar entre 2 C e 8 C ap s recep o Quantidade S mbolo Componente kit de 100 kit 2 x 50 testes testes A Reagente de amplificac o APTIMA para GC 1 frasco 2 frascos cidos nucleicos n o infecciosos secos em solu o tamponada contendo lt 5 de agente de volume E Reagente enzim tico APTIM
98. nfluence False Negative Rates in the LCx Assay but Not in the APTIMA Combo 2 Assay When Testing for Inhibitors J Clin Microbiol 41 778 782 CUMITECH 31 Verification and Validation of Procedures in the Clinical Microbiology Laboratory ASM PRESS FEBRUARY 1997 6 Farrel D J 1999 Evaluation of AMPLICOR Neisseria gonorrhoeae PCR using cppB nested PCR and 168 rRNA PCR J Clin Microbiol 37 386 390 7 Gaydos C A T C Quinn D Willis A Weissfeld E W Hook D H Martin D V Ferraro and J Schachter 2003 Performance of the APTIMA Combo 2 Assay for Detection of Chlamydia trachomatis and Neisseria gonorrhoeae in Female Urine and Endocervical Swab Specimens J Clin Microbiol 41 304 309 8 Holmes K K H H Handsfield S P Wang B B Wentworth M Turck J B Anderson and E R Alexander 1975 Etiology of nongonococcal urethritis NEJM 292 1199 1205 9 Hooklll E W and H H Handsfield 1999 Gonococcal Infections in the Adult p 458 In K Holmes et al eds Sexually Transmitted Diseases McGraw Hill New York N Y 10 Krauss S J R C Geller G H Perkins and D L Rhoden 1976 Interference of Neisseria gonorrhoeae growth by other bacterial species J Clin Microbiol 4 288 295 11 Masi A T and B Eisenstein 1981 Disseminated Gonococcal Infections DGI and Gonococcal Arthritis GCA II Clinical Manifestations Diagnosis Complications Treatment and Prevention Semin Arthritis Rheum 10 17
99. nho anal tico no Sistema PANTHER Estudo de reprodutibilidade A precis o do ensaio APTIMA GC foi avaliada entre tr s Sistemas PANTHER e dois lotes de kits de ensaio APTIMA GC durante um per odo de 24 dias Os pain is foram efectuados misturando rRNA de GC em STM nas concentra es indicadas na Tabela 17 Os operadores realizaram dois testes por dia analisando cada membro do painel em duplicado por teste Foi calculada a concord ncia com o resultado esperado e a precis o foi estimada de acordo com as Orienta es EP5 A2 do NCCLS 14 O n mero de replicados de cada painel foi de 96 A Tabela 17 apresenta os dados de precis o de RLU em termos de m dia desvio padr o coeficiente de varia o CV concord ncia percentual com os resultados esperados e c lculos de variabilidade entre instrumentos entre lotes entre testes e intrateste Tabela 17 Precis o do Sistema PANTHER para o ensaio APTIMA GC M dia Eng Entre Lotes Entre Testes Intrateste Total GC instrumentos Matriz CFU mL n de RLU C d CFU mL 1 000 COncd pp cv DP CV DP CV DP Cv DP CV x1 000 x1 000 x1 000 x1 000 9e x1 000 96 0 96 3 100 0 0 0 0 0 0 2 01 72 8 2 72 5 12 5 96 3 951 100 215 14 54 0 0 0 0 568 24 14 4 607 6 15 4 125 95 5 839 100 370 17 6 3 0 0 0 0 772 58 13 2 856 7 14 7 1 250 96 6 207 100 33825 5 4 0 0 0 0 787 64 12 7 857 2 13 8 0 95 3 100 0 69 21 6 0 81 25 5 0 77 24 2 2 43 76
100. nterferentes Foram introduzidas em esfrega os esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt e ou esp cimes de urina as seguintes subst ncias interferentes 10 sangue geleia contraceptiva espermicida hidratante anest sico hemorroidal leo de corpo p creme antif ngico lubrificantes vaginais spray feminino e leuc citos 1 0 x 10 c lulas mL Foram introduzidas em esp cimes de urina as seguintes subst ncias interferentes 30 de sangue analitos de urina prote nas glucose cetonas bilirrubina nitrato urobilinog nio pH 4 cido pH 9 alcalino leuc citos 1 0 x 10 c lulas mL restos celulares vitaminas minerais paracetamol cido acetilsalic lico e ibuprofeno Todos foram testados quanto a uma potencial interfer ncia no ensaio na aus ncia e na presen a de GC a um equivalente de rRNA estimado em a 50 c lulas de GC ensaio 250 fg ensaio Os equivalentes rRNA foram calculados com base no tamanho do genoma e a taxa estimada m dia c lula DNA RNA de cada organismo Nenhuma interfer ncia foi observada com nenhuma das subst ncias testadas N o foram observados inibidores da amplifica o no ensaio APTIMA GC Recupera o Adicionou se Escherichia coli Gardnerella vaginalis Lactobacillus acidophilus Bacteroides ureolyticus e Staphylococcus epidermidis 1 0 x 10 c lulas ensaio a amostras contendo rRNA equivalente a aproximadamente 50 c lulas de GC 250 fg Estas adi es n o interferiram
101. nticos entre o Sistema TIGRIS DTS e os Sistemas DTS foram concebidas experi ncias de especificidade anal tica no Sistema TIGRIS DTS dedicadas aos isolados de culturas mais complicados Estes organismos inclu ram aqueles conhecidos por efectuarem reac o cruzada em outros ensaios de amplifica o Foram seleccionados 24 isolados de culturas do painel de organismos da Tabela 11 incluindo 17 organismos mais intimamente relacionados com GC Todos os organismos testados deram resultados negativos excep o de um 1 648 resultado falso positivo Isto foi observado com C pneumoniae em que 1 replicado de 27 testados deu um resultado falso A repeti o do teste n o confirmou a reactividade cruzada com este organismo C pneumoniae pois n o foram observados testes positivos com 6 replicados do teste adicionais Estudos de Equival ncia de Subst ncias Interferentes O sangue total uma subst ncia encontrada com frequ ncia em esp cimes urogenitais e que se sabe interferir com alguns ensaios de amplifica o foi utilizado para estabelecer que o Sistema TIGRIS DTS tolera n veis de subst ncias potencialmente interferentes semelhantes aos tolerados pelos Sistemas DTS Foi adicionado sangue total a esfrega os Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 71 502185PT Rev E Desempenho anal tico no Sistema TIGRIS DTS cl nicos esfrega os vaginais urina e grupos de esp cimes citol gicos l quidos em PreservCyt tendo se depois testado a
102. ntre Sistema TIGRIS DTS e Sistema PANTHER IC de 95 100 98 9 100 Concord ncia percentual geral de negativos entre Sistema TIGRIS DTS e Sistema PANTHER IC de 95 100 98 9 100 Estudo de sensibilidade anal tica A sensibilidade anal tica do ensaio APTIMA GC foi testada utilizando tr s matrizes de amostras representativas Estas foram urina processada com meio de transporte para urina Urine Transport Medium UTM solu o citol gica l quida PreservCyt dilu da com meio de transporte para esfrega os Swab Transport Medium STM e STM Foi misturado rRNA de GC a grupos destas tr s matrizes nas seguintes concentra es 25 fg ensaio 250 fg ensaio e 2 500 fg ensaio equivalentes de rRNA de 12 5 CFU mL 125 CFU mL ou 1 250 CFU mL Os equivalentes de rRNA foram calculados com base no tamanho do genoma e na raz o DNA RNA c lula de cada organismo Estes pain is foram testados em tr s instrumentos PANTHER utilizando dois lotes de reagentes em replicados de 96 A concord ncia positiva com o resultados esperado foi calculada A concord ncia com os resultados esperados foi de 100 IC de 95 96 2 100 para todos os pain is de urina 100 IC de 95 96 2 100 para todos os pain is de esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt e de 100 IC de 95 96 1 100 para todos os pain is de STM A sensibilidade anal tica para o ensaio de 125 CFU mL Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 73 502185PT Rev E Desempe
103. o APTIMA de Colheita de Esp cimes de Esfrega o para Esp cimes de Esfrega o Endocervical e da Uretra Masculina 1 Etiquete os tubos de transporte dos esfrega os com n meros correspondentes s reas a serem testadas Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 30 502185PT Rev E Sistema TIGRIS DTS 2 Remova o esfrega o de colheita de esp cimesnes esfrega o com haste azul e impress o verde de sua embalagem humede a o no meio para transporte de esfrega o e esfregue a rea designada com um movimento circular 3 Introduza imediatamente a zaragatoa num tubo de transporte 4 Quebre com cuidado a haste da zaragatoa na linha marcada tendo o cuidado de evitar que o conte do salpique 5 Tape novamente o tubo de transporte de esfrega os bem apertado 6 Repita os Passos 2 a 5 em cada rea a amostrar com a zaragatoa Caso os resultados para GC sejam positivos ou equ vocos consulte Interpreta o do teste controlo de qualidade resultados do paciente Para obter mais informa es de monitoriza o de contamina es espec ficas para o sistema TIGRIS DTS consulte o TIGRIS DTS System Operator s Manual Manual do Operador do Sistema TIGRIS DTS Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 31 502185PT Rev E Sistema PANTHER Sistema PANTHER A Ea PA E Os reagentes do ensaio APTIMA GC s o indicados abaixo para os Sistema PANTHER Os S mbolos para Identificac o dos Reagentes tamb m s o listados junto ao nome do reagente
104. oeae Caixa 1 de 2 armazenar entre 2 C e 8 C ap s recep o S mbolo Componente Quantidade A Reagente de amplifica o APTIMA para GC 1 frasco cidos nucleicos n o infecciosos secos em solu o tamponada contendo lt 5 de agente de volume E Reagente enzim tico APTIMA 1 frasco Transcriptase reversa e RNA polimerase secos em solu o tamponada HEPES contendo lt 10 de reagente de volume P Reagente de sonda APTIMA para GC 1 frasco Sondas de DNA quimioluminescentes n o infecciosas secas em solu o tamponada com succinato contendo lt 5 de detergente TCR B Reagente de captura do alvo B APTIMA 1x0 35 mL cido nucleico n o infeccioso em solu o tamponada contendo lt 5 de detergente PGC Controlo Positivo APTIMA GC Controlo Negativo CT 3x1 7 mL NCT cido nucleico de GC n o infeccioso em solu o tamponada contendo 5 de detergente Cada amostra de 400 uL cont m rRNA que se estima ser equivalente a 50 c lulas de GC 250 fg ensaio PCT Controlo Positivo APTIMA CT Controlo Negativo GC 3x 1 7 mL NGC cido nucleico de CT n o infeccioso em solu o tamponada contendo lt 5 de detergente Cada amostra de 400 uL cont m rRNA que se estima ser equivalente a 1 unidade formadora de inclus es inclusion forming unit IFU de CT 5 fg ensaio Os equivalentes rRNA foram calculados com base no tamanho do genoma e a taxa estimada m dia c lula DNA RNA de cada organismo
105. ol gicas em STM foi testada uma vez no ensaio APTIMA GC Realizou se um total de cinco testes ao longo de um per odo de cinco dias para 140 resultados nos n veis de 0 1 0 5 e 50 CFU Verificaram se 136 resultados v lidos e 4 resultados inv lidos para o painel de controlo negativo Os resultados inv lidos deveram se a uma m coloca o de uma TTU no Leader HC Os resultados s o apresentados na Tabela 10 Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 59 502185PT Rev E Desempenho cl nico nos Sistemas DTS Tabela 10 Dados de precis o intralaboratorial do ensaio APTIMA GC para PreservCyt utilizando um painel de precis o de 4 membros contendo O to 500 CFU mL de c lulas de GC RLU Intraoperador Entre dias entro Total Membro CFU mL CFU Concor a Operadores do Painel PreservCyt rxn daram Concd m dia DP DP DP DP x1 000 9 9 0 o x1 000 cV x1 000 CV x1 000 cV x1 000 CV A 1 0 1 140 39 27 9 313 7 758 3 241 7 1325 422 0 0 0 0 769 8 2454 B 5 0 5 140 113 80 7 1 211 1 1 031 3 85 2 169 8 14 0 150 4 124 1 0560 87 2 c 500 50 140 140 100 5 636 8 220 7 39 1357 2 4 0 0 0 0 259 4 6 D 0 0 1936 136 100 1 2 0 5 N A 0 N A 0 3 N A 0 6 N A CEOTTO TTTT D TS Verificaram se quatro resultados inv lidos devido a uma m coloca o de uma TTU no Leader HC Nota A variabilidade de alguns factores pode ser numericamente negativa o que pode ocorrer se a variabilidade devida a esses factores for pequena
106. olhas no espa o entre o l quido e a tampa centrifugue o tubo por 5 minutos com 420 RCF para eliminar as bolhas b Caso um tubo de esp cime apresente um volume menor do que o habitualmente observado quando se seguem as instru es de colheita centrifugue o tubo por 5 minutos com 420 RCF para garantir que o l quido n o fique retido na tampa c Seo n vel de l quido num tubo de esp cimes de urina n o estiver entre as duas linhas pretas indicadoras do r tulo o esp cime tem de ser rejeitado N o perfure um tubo demasiado cheio d Se um tubo de esp cimes de urina contiver precipitado aque a o esp cime a 37 C durante at 5 minutos Se o precipitado n o voltar a entrar em solu o certifique se visualmente de que o precipitado n o impede a distribui o do esp cime Nota Caso os Passos 4a c n o sejam seguidos pode haver descarga de l quido da tampa do tubo de esp cimes 5 Caso pretenda testar esp cimes com tampas convencionais tampas n o penetr veis necess rio centrifug los por 5 minutos a 420 RCF for a centr fuga relativa para levar todo o l quido para o fundo do tubo antes de o destapar Evite salpicos e contamina o cruzada 6 Nos suportes TTU coloque TTU suficientes para acomodar os calibradores controlos e esp cimes 7 Caso uma lista de trabalho seja desejada crie a neste ponto Para instru es sobre a cria o de uma lista de trabalho consulte o APTIMA Assay Software Operator s
107. om ticos esfrega os colhidos pelo m dico de origem endocervical e vaginal esfrega os vaginais colhidos pela paciente e esp cimes de urina de ambos os sexos Este ensaio destina se tamb m a ser utilizado na an lise de esp cimes ginecol gicos de pacientes sintom ticas e assintom ticas Estes esp cimes cervicais colhidos nos frascos de solu o PreservCyt podem ser testados antes ou depois do processamento citol gico O teste de esp cimes j submetidos a processamento citol gico est limitado a esp cimes processados apenas com o ThinPrep 2000 System Os esfrega os vaginais colhidos pelas pacientes constituem uma op o para o rastreio de mulheres quando n o existem outras indica es para exame p lvico O kit de colheita de esp cimes de esfrega o vaginal n o para utiliza o domiciliar Resumo e explica o do teste A infec o por Neisseria gonorrhoeae uma das mais comuns infec es sexualmente transmiss veis em todo o mundo S nos Estados Unidos em 2010 estima se que tenham sido notificadas aos Centers for Disease Control 309 341 100 8 por 100 000 habitantes novos casos de GC 2 A N gonorrhoeae o agente causador da gonorreia As Neisseria s o diplococos n o m veis e gram negativos A maioria das infec es gonorreicas s o infec es descomplicadas do tracto genital inferior e devem ser assintom ticas Contudo se as infec es nas mulheres n o forem tratadas podem ascender e provocar
108. om forro pl stico B Reconstitui o dos reagentes Prepara o de um novo kit Nota A reconstitui o dos reagentes deve ser realizada antes de come ar qualquer trabalho no Sistema TIGRIS DTS 1 Para reconstituir os reagentes de amplifica o GC enzim tico e de sonda GC para os kits de 100 testes e de 50 testes combine os frascos de reagente liofilizado com a solu o de reconstitui o Se estiverem refrigeradas deixe as solu es de reconstitui o alcan ar a temperatura ambiente antes de serem utilizadas a Emparelhe cada solu o de reconstitui o com seu reagente liofilizado Certifique se de que a solu o de reconstitui o e o reagente liofilizado tenham cores de etiqueta correspondentes antes de aplicar o colarinho de reconstitui o b Verifique os n meros do lote na Ficha de C digo de Barras do Lote Principal para garantir que os reagentes adequados sejam emparelhados c Abra o frasco de reagente liofilizado e insira com firmeza a extremidade ranhurada do colarinho de reconstitui o na abertura do frasco Figura 2 Passo 1 d Abra o frasco da solu o de reconstitui o correspondente e deposite a tampa sobre uma superf cie de trabalho limpa e coberta e Enquanto segura o frasco da solu o de reconstitui o na bancada insira firmemente a outra extremidade do colarinho de reconstitui o na abertura do frasco Figura 2 Passo 2 f Inverta lentamente os frascos montados Permita que a
109. onada de succinato contendo lt 5 de detergente S Reagente de selecc o GC APTIMA 1x43 0 mL Solu o tamponada com borato a 600 mM contendo surfactante TCR Reagente de captura do alvo APTIMA para GC 1 x 26 0 mL Solu o tamponada salina contendo fase s lida e olig meros de captura Colarinho de Reconstitui o 3 Folha de c digo de barras do lote principal 1 folha Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 32 502185PT Rev E Sistema PANTHER Kit de controlos APTIMA armazenar entre 2 C e 8 C ap s recep o S mbolo Componente Quantidade PGC Controlo Positivo APTIMA GC Controlo Negativo CT 5x1 7mL NCT cido nucleico de GC n o infeccioso em soluc o tamponada contendo lt 5 de detergente Cada amostra de 400 uL cont m rRNA que se estima ser equivalente a 50 c lulas de GC 250 fg ensaio PCT Controlo positivo CT controlo negativo GC APTIMA 5x1 7 mL NGC cido nucleico de CT n o infeccioso em solu o tamponada contendo lt 5 de detergente Cada amostra de 400 uL cont m rRNA que se estima ser equivalente a 1 unidade formadora de inclus es inclusion forming unit IFU de CT 5 fg ensaio Os equivalentes rRNA foram calculados com base no tamanho do genoma e a taxa estimada m dia c lula DNA RNA de cada organismo Materiais necess rios mas dispon veis separadamente Nota Excepto indica o em contr rio as refer ncias de cat logo dos materiais disponibilizados pela Gen Probe s
110. os esfrega os com n meros correspondentes s reas a serem testadas 2 Remova o esfrega o de colheita de esp cimesnes esfrega o com haste azul e impress o verde de sua embalagem humede a o no meio para transporte de esfrega o e esfregue a rea designada com um movimento circular 3 Introduza imediatamente a zaragatoa num tubo de transporte 4 Quebre com cuidado a haste da zaragatoa na linha marcada tendo o cuidado de evitar que o conte do salpique 5 Tape novamente o tubo de transporte de esfrega os bem apertado Repita os Passos 2 a 5 em cada rea a amostrar com a zaragatoa 7 Teste o esfrega o utilizando o ensaio APTIMA GC de acordo com o Procedimento de Teste dos Sistemas DTS Se os resultados forem positivos ou equ vocos para GC consulte Interpreta o do teste controlo de qualidade resultados do paciente a superf cie pode estar D Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 22 502185PT Rev E Sistemas DTS contaminada e deve ser descontaminada tratando a com uma solu o de hipoclorito de s dio tal como recomendado no Procedimento de Teste dos Sistemas DTS Prepara o do Equipamento Nota Caso se suspeite de contamina o do banho de gua este pode ser testado utilizando o procedimento de teste para esp cimes de urina adicionando 2 0 mL de gua a um tubo de transporte de esp cimes de urina K Resolu o de Problemas 1 Valores de controlo positivo baixos podem ser causados por temperaturas i
111. ostras negativas Os testes inclu ram agregados de amostras fortemente positivas com agregados de amostras negativas assim como positivos fortes nicos dispersos segundo um padr o espec fico pelo teste As amostras de t tulo elevado foram preparadas utilizando rRNA de GC misturado em STM de forma a obter uma concentra o final de 5 x 10 fg rRNA reac o equivalente em rRNA de 2 5 x 10 CFU mL As an lises foram realizadas utilizando 5 testes em tr s Sistemas PANTHER num total de 2 923 amostras negativas A taxa de transmiss o global foi de 0 com um intervalo de confian a de 95 de O 0 1 No total 17 amostras negativas dos testes de t tulo elevado foram declaradas inv lidas e exclu das dos c lculos Bibliografia 1 Centers for Disease Control and Prevention 2002 Screening Tests to Detect Chlamydia trachomatis and Neisseria gonorrhoeae infections United States Morbid and Mortal Weekly Rep 51 RR 15 2 Centers for Disease Control and Prevention 2011 Sexually Transmitted Disease Surveillance 2010 Atlanta GA U S Department of Health and Human Services November 3 Ching S H Lee E W Hook IIl M R Jacobs and J Zenilman 1995 Ligase chain reaction for detection of Neisseria gonorrhoeae in urogenital swabs J Clin Microbiol 33 3111 3114 4 Chong S D Jang X Song J Mahony A Petrick P Barriga and M Chernesky 2003 Specimen Processing and Concentration of Chlamydia trachomatis Added Can I
112. para GC APTIMA rotulado CONTROL CT PCT CONTROL GC NGC e o controlo positivo para GC APTIMA rotulado CONTROL GC PGC CONTROL CT NCT actuam como controlos para os passos de captura do alvo amplifica o e detec o do ensaio e t m de ser inclu dos em cada teste do ensaio Se assim o pretender os controlos para a lise celular e estabiliza o de RNA podem ser testados de acordo com as exig ncias das ag ncias de acredita o adequadas ou com os procedimentos de cada laborat rio Esp cimes positivos conhecidos podem servir como controlos sendo preparados e testados em conjunto com esp cimes desconhecidos Os esp cimes usados como controlos de prepara o devem ser armazenados manipulados e testados de acordo com o folheto da embalagem Os controlos de prepara o de esp cimes devem ser interpretados da mesma forma descrita para esp cimes de testes de Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 40 502185PT Rev E Interpreta o do teste controlo de qualidade resultados do paciente pacientes Consulte a sec o Interpreta o do teste controlo de qualidade resultados do paciente Resultados de Testes de Pacientes D Resultados de Testes de Pacientes 1 Se os controlos em qualquer execu o n o gerarem os resultados esperados os resultados de testes em esp cimes de pacientes na mesma execu o n o devem ser reportados 2 Resultados de esfrega os esp cimes de urina e esp cimes citol gicos em
113. para evitar o escape de vapores no laborat rio e Tape o frasco de res duos e agite gentilmente o conte do at que se misturem completamente f Deixe o frasco de res duos repousar por 15 minutos e ent o elimine o conte do res duos g Enxag e o frasco de res duos com gua para remover qualquer res duo restante h Tape o frasco de res duos vazio e coloque o no compartimento de apreens o de v cuo Aplique os encaixes de desconex o r pida unidade TCS Elimine cuidadosamente ambas as luvas Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 21 502185PT Rev E Sistemas DTS 4 Unidade TCS Limpe as superf cies da unidade TCR do distribuidor de aspira o e das pontas do ejector do tamp o de lavagem com toalhetes de papel humedecidos em solu o de hipoclorito de s dio de 2 5 a 3 5 0 35 M a 0 5 M Ap s o passo de limpeza com hipoclorito de s dio enxague com gua e em seguida seque totalmente as superf cies com toalhetes de papel 5 Suportes Mergulhe os suportes em solu o de hipoclorito de s dio 2 5 a 3 5 0 35 M a 0 5 M assegurando que ficam cobertos pela solu o de hipoclorito de s dio Mantenha os suportes mergulhados por 10 minutos Uma exposi o mais prolongada danificar os suportes Lave bem os suportes com gua coloque os sobre uma superf cie absorvente limpa e permita que os suportes sequem ao ar completamente Para prolongar a vida til dos suportes permita que eles sequem em posi
114. r uma correla o entre a magnitude de um sinal positivo de ensaio e o n mero de organismos em um esp cime K No caso de estudos cl nicos de esp cimes de esfrega os vaginais esfrega os endocervicais esfrega os uretrais masculinos e esp cimes de urina o desempenho da detec o de GC deriva de popula es de preval ncia elevada Os resultados positivos em popula es de baixa preval ncia devem ser interpretados com cautela tendo a no o de que a probabilidade de o positivo ser falso pode ser mais elevada do que a de o positivo ser verdadeiro Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 42 502185PT Rev E L Para os ensaios cl nicos de esp cimes citol gicos em base l quida PreserCyt o desempenho do ensaio APTIMA GC na detec o de GC obtido sobretudo de popula es de baixa preval ncia N o obstante resultados positivos em popula es de baixa preval ncia devem ser interpretados cuidadosamente levando em considera o que a probabilidade de um falso positivo podem ser mais alta do que um positivo verdadeiro M O desempenho do kit de transfer ncia de esp cimes APTIMA n o foi avaliado quanto an lise do mesmo esp cime citol gico l quido em solu o PreservCyt antes e ap s o processamento citol gico ThinPrep N Os esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt processados em outros instrumentos al m do ThinPrep 2000 Processor n o foram avaliados quanto utiliza o com ensaios APTIMA O Os esp
115. ra mais avisos precau es e procedimentos para controlo de contamina o para o TIGRIS DTS System consulte o TIGRIS DTS System Operator s Manual Manual do Operador do Sistema TIGRIS DTS C Para mais avisos precau es e procedimentos de controlo da contamina o para o Sistema PANTHER consulte o PANTHER System Operator s Manual Manual do Operador do Sistema PANTHER Relacionado com o Laborat rio D Utilize apenas artigos de laborat rio descart veis fornecidos ou especificados E Adopte precau es de laborat rio de rotina N o coma beba ou fume em reas de trabalho designadas Utilize luvas sem p descart veis culos de protec o e batas de laborat rio quando manusear esp cimes e reagentes do kit Lave bem as m os ap s manusear os esp cimes e os reagentes do kit F Aviso irritantes corrosivos Evitar o contacto de Auto Detect 1 e Auto Detect 2 com a pele os olhos e as membranas mucosas Lave com gua se estes fluidos entrarem em contacto com a pele ou os olhos Se estes fluidos se derramarem dilua o derrame com gua antes de secar com um pano G As superf cies de trabalho pipetas e outros equipamentos t m de ser regularmente descontaminados com solu o de hipoclorito de s dio de 2 5 a 3 5 0 35 M a 0 5 M Espec ficos dos Sistemas DTS H Recomenda se vivamente a utiliza o de uma rea separada para o HPA para minimizar a contamina o dos produtos de amplifica o no ensaio Esta rea
116. ras foram exclu das desta an lise devido a resultados finais inv lidos Al m disso faltou numa lista de trabalho 1 replicado de cada um dos membros de um painel negativo para GC 3 amostras foram exclu das desta an lise devido a resultados finais inv lidos 2 amostras foram exclu das desta an lise devido a resultados finais inv lidos Ademais faltou em duas listas de trabalhos 1 replicado de cada um dos membros de um painel com 2 500 fg rRNA de GC ensaio e uma lista de trabalho incluiu um replicado adicional de um membro do painel com 2 500 fg rRNA de GC ensaio 2 amostras foram exclu das desta an lise devido a resultados finais inv lidos Al m disso uma lista de trabalho incluiu 1 replicado adicional de um membro de um painel com 25 000 fg rRNA de GC ensaio Na mesma lista de trabalho faltou 1 replicado de outro membro de um painel com 25 000 fg rRNA de GC ensaio Numa lista de trabalho faltou 1 replicado de um membro de um painel com 250 000 fg rRNA de GC ensaio Nota As amostras com resultados inv lidos no teste foram exclu das A an lise da variabilidade do sinal inclui amostras com resultados discordantes Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 68 502185PT Rev E Desempenho anal tico no Sistema TIGRIS DTS Desempenho anal tico no Sistema TIGRIS DTS Consulte Desempenho anal tico no Sistema PANTHER para obter o desempenho anal tico espec fico do Sistema PANTHER Estudo de Equival ncia de Sensibilidade
117. re toda a Solu o de Lavagem restante na malga de prepara o da esta o de distribui o de Solu o de Lavagem Tire o distribuidor do caminho b Coloque pelo menos 100 mL de solu o de hipoclorito s dio entre 0 5 a 0 7 0 07 Ma 0 1 M ou se preferir 2 5 a 3 5 0 35 M a 0 5 M na malga de prepara o Aspire toda a solu o com o distribuidor de aspira o c Coloque pelo menos 100 mL de gua desionizada na malga de prepara o Aspire toda a gua com o distribuidor de aspira o d Ejecte as pontas no TTC original e Deixe a bomba de v cuo ligada at que o distribuidor esteja seco para evitar o refluxo f Descontamine as superf cies do distribuidor de aspira o da forma descrita na Unidade TCS 3 Recipiente de res duos TCS Quando o frasco de res duos estiver 25 cheio ou semanalmente remova o frasco de res duos do Sistema de Captura de Alvo a Desligue a bomba de v cuo e permita que a press o do v cuo seja equalizada b Libere os encaixes de desconex o r pida entre o frasco de res duos e o frasco de recolha de l quido e o frasco de res duos e o distribuidor de aspira o Remova o frasco de res duos do compartimento de apreens o de v cuo Retire a tampa e adicione cuidadosamente 400 mL de solu o de hipoclorito de s dio 5 a 7 0 7 M a 1 0 M ao frasco ou 1 L se estiver a utilizar um frasco de res duos de 10 L Nota Isto pode ser feito numa cobertura de vapores
118. resultados do paciente Interpreta o do teste controlo de qualidade resultados do paciente A Interpreta o do Teste Os resultados dos ensaios s o automaticamente interpretados pelo software do ensaio APTIMA utilizando o protocolo para GC O resultado de um teste pode ser negativo equ voco positivo ou inv lido de acordo com a determina o a partir das RLU totais no passo de detec o ver abaixo O resultado de um teste pode ser inv lido por os valores de RLU estarem fora dos intervalos normais esperados Os resultados de testes iniciais d bios e inv lidos devem ser testados novamente Interpreta o do Teste Total de RLU x1 000 Negativo 0 a 50 Equ voco 50 a 100 RLU fracamente positivas 100 a lt 2 000 Positivo 2 000 a lt 12 000 Inv lido 0 ou gt 12 000 ESTE SWP E lt P EE E E E PEA Um resultado de zero para 0 x 1 000 RLU no relat rio do teste representa um valor entre zero e 999 RLU Valores de RLU inferiores a 160 nos Sistemas DTS ou a 690 no Sistema TIGRIS DTS ou no Sistema PANTHER constar o no relat rio como inv lidos De acordo com as orienta es dos CDC h que considerar a realiza o de exames de rotina adicionais em pessoas com resultados positivos nos testes de rastreio de CT ou GC quando as informa es acerca dos factores de risco ou pesquisas reais indicam que a preval ncia baixa resultando num menor PPV p ex lt 90 Consulte as orienta es dos
119. retas indicadoras do r tulo o esp cime tem de ser rejeitado N o perfure um tubo demasiado cheio d Se um tubo de esp cimes de urina contiver precipitado aque a o esp cime a 37 C durante at 5 minutos Se o precipitado n o voltar a entrar em solu o certifique se visualmente de que o precipitado n o impede a distribui o do esp cime Nota Caso os Passos 4a c n o sejam seguidos pode haver descarga de l quido da tampa do tubo de esp cimes Nota Podem ser testadas at 3 al quotas distintas de cada tubo de esp cimes A tentativa de pipetar mais de 3 al quotas do tubo de esp cimes pode provocar erros de processamento Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 36 502185PT Rev E Sistema PANTHER E Prepara o do sistema 1 Defina o sistema de acordo com as instru es do PANTHER System Operator s Manual Manual do Operador do Sistema PANTHER e das Notas ao procedimento Certifique se de que s o utilizados suportes de reagente e adaptadores de TCR de dimens o adequada 2 Carregue as amostras Notas ao procedimento A Controlos 1 Para funcionar correctamente com o software do ensaio APTIMA no Sistema PANTHER necess rio um par de controlos Os tubos de controlo positivo CT controlo negativo GC e de controlo positivo GC controlo negativo CT podem ser carregados em qualquer posi o do suporte ou em qualquer calha da zona de amostras do Sistema PANTHER A pipetagem de esp cimes do paciente come
120. rhoeae 4 502185PT Rev E Informa es gerais L A solu o PreservCyt foi validada como meio alternativo para o teste com o ensaio APTIMA GC Os esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt processados com o ThinPrep 3000 Processor ou outros instrumentos n o foram avaliados para teste da Neisseria gonorrhoeae utilizando o ensaio APTIMA GC M Ap s adicionar a urina ao tubo de transporte de urina o n vel de l quido tem de situar se entre as duas linhas pretas indicadoras no r tulo do tubo Caso contr rio o esp cime deve ser rejeitado N Mantenha condi es de armazenamento adequadas durante o envio do esp cime para garantir a integridade do mesmo A estabilidade do esp cime sob condi es de envio diferentes das recomendadas n o foi avaliada O Os esp cimes podem ser infecciosos Utilize Precau es Universais ao executar este ensaio M todos apropriados para manuseamento e descarte devem ser estabelecidos pelo director do laborat rio Apenas membros de equipa devidamente treinados no manuseamento de materiais infecciosos devem ter permiss o para realizar este procedimento diagn stico P Evite a contamina o cruzada durante os passos de manuseamento dos esp cimes Os esp cimes podem conter n veis extremamente altos de organismos Certifique se de que os recipientes de esp cimes n o contactam uns com os outros e elimine os materiais usados sem os passar por cima de recipientes abertos Troque de luvas se e
121. s durante o tempo indicado ou at a cor ficar uniforme De seguida rode a velocidade para o m nimo antes de desligar o misturador vort x multitubos e retirar o suporte As misturas de reac o n o devem nunca tocar nos cart es de selagem G Banhos de gua 1 O n vel da gua nos banhos de gua tem de ser mantido a uma profundidade de 1 5 polegadas a 2 0 polegadas 3 8 cm a 5 cm medidas desde o tabuleiro de metal de suporte no fundo do banho de gua at superf cie da gua Assim ficar assegurada uma transfer ncia de calor adequada 2 Para evitar contamina o cruzada os banhos de gua devem ser dedicados para um passo espec fico do ensaio Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 20 502185PT Rev E Sistemas DTS H Descontamina o 1 Superf cies e pipetas As superf cies das bancadas do laborat rio e as pipetas t m de ser regularmente descontaminadas com solu o de hipoclorito de s dio de 2 5 a 3 5 0 35 M a 0 5 M Deixe a solu o de hipoclorito de s dio em contacto com as superf cies durante pelo menos 1 minuto enxaguando as depois com gua N o deixe secar a solu o de hipoclorito de s dio As solu es com cloretos podem provocar corros o nos equipamentos e metais Enxag e bem o equipamento com gua para evitar a corros o 2 Distribuidor de Aspira o TCS a Coloque um TTC novo no suporte de TTC Active a bomba de v cuo Aplique o distribuidor de aspira o s pontas no TTC Aspi
122. seco v rtex SB100 consulte a SB100 Application Sheet Ficha de aplica o SB100 1 Utilizando a pipeta de repeti o adicione 75 pL do reagente de amplifica o GC reconstitu do a cada tubo de reac o Todas as misturas de reac o no suporte dever o estar de cor vermelha 2 Utilizando a pipeta de repeti o adicione 200 uL do reagente a leo a cada tubo de reac o 3 Cubra os tubos com um cart o de selagem e leve ao misturador v rtex multitubos 4 Incube o suporte num banho de gua a 62 C 1 C durante 10 5 minutos 5 Transfira o suporte para um banho de gua a 42 C 1 C e incube durante 5 2 minutos 6 Como suporte no banho de gua remova cuidadosamente o cart o de selagem e utilizando a pipeta de repeti o adicione 25 uL do reagente enzim tico reconstitu do a cada tubo de reac o Todas as reac es dever o agora ter a cor laranja 7 Cubra imediatamente os tubos com um cart o de selagem novo retire o suporte do banho de gua e misture os tubos de reac o agitando suavemente o suporte manualmente 8 Incube o suporte num banho de gua a 42 C 1 C durante 60 15 minutos E Ensaio de protec o da hibrida o Hybridization Protection Assay HPA Caso utilize o banho de calor seco v rtex SB100 consulte a SB100 Application Sheet Ficha de aplica o SB100 A pipeta de repeti o usada nos passos de hibridiza o e selec o deve ser dedicada para utiliza o somente
123. ss rios mas dispon veis separadamente 25 Materiais Opcionais a 13 Materiais Opcionais 26 Procedimento de Teste dos Sistemas DTS 14 Procedimento de Teste do Sistema TIGRIS DTS 26 Notas ao procedimento sssssssssese 19 Notas ao procedimento 30 mum PARISER Sistema PANTHER eren tenere 32 Reagentes e materiais fornecidos 32 Materiais necess rios mas dispon veis separadamente 33 Materiais Opcionais a Procedimento de teste do Sistema PANTHER Notas ao procedimento 1 502185PT Rev E Informa es gerais Informa es gerais Utiliza o pretendida O ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae um teste de sonda de cido nucleico alvo amplificado que utiliza a captura do alvo para a detec o qualitativa in vitro de RNA riboss mico rRNA de Neisseria gonorrhoeae GC para ajudar a diagnosticar doen as urogenitais gonoc cicas utilizando o Sistema TIGRIS DTS ou o Sistema PANTHER ou a instrumenta o semiautom tica dos Sistemas DTS conforme especificado O ensaio pode ser utilizado para testar os seguintes esp cimes de indiv duos sintom ticos esfrega os colhidos pelo m dico de origem endocervical vaginal e uretral masculina assim como esp cimes de urina de ambos os sexos O ensaio pode ser utilizado para testar os seguintes esp cimes de indiv duos assint
124. tados para detectar uma potencial interfer ncia com o ensaio na presen a e na aus ncia de alvo de GC Foi utilizado como concentra o alvo o equivalente em rRNA de 125 CFU de GC mL 250 fg ensaio pois este representa a sensibilidade anal tica do ensaio Os esp cimes foram testados no Sistema PANTHER Todas as amostras contendo cidos nucleicos alvo foram positivas quando testadas a uma concentra o de sangue de 10 v v em esfrega os ou em esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt ou de 30 v v Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 74 502185PT Rev E Bibliografia em esp cimes de urina Todas as amostras que n o continham alvo foram correctamente identificadas como negativas Estes resultados s o id nticos aos demonstrados para o Sistema TIGRIS DTS quando misturados com quantidades de sangue semelhantes O sangue adicionado a esfrega os PreservCyt e esp cimes de urina a concentra es muito superiores s que ser o de esperar numa colheita normal de esp cimes n o interferiu com os resultados no Sistema PANTHER Estudos de transmiss o com o Sistema PANTHER Para estabelecer que o Sistema PANTHER minimiza o risco de resultados positivos falsos causados por contamina o por transmiss o foi feito um estudo anal tico de m ltiplos testes utilizando pain is misturados em tr s Sistemas PANTHER A transmiss o foi avaliada utilizando aproximadamente 20 de amostras de GC de t tulo elevado dispersas entre am
125. tas ao procedimento Utiliza o do v rtex para mais informa es 23 Coloque o suporte na base magn tica da unidade TCS durante 5 a 10 minutos 1 Consulte a Ficha de Especifica es de V cuo do Sistema de Captura de Alvo localizada na parte posterior do Target Capture System Operator s Manual Manual do Operador do Sistema de Captura de Alvo ou contacte o Suporte T cnico Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 17 502185PT Rev E Sistemas DTS 24 Aspire todo o l quido como nos Passos 19 e 20 25 Ap s a aspira o final retire o suporte da base magn tica da unidade TCS e inspeccione visualmente os tubos para garantir que todo o l quido foi aspirado e que todos os tubos cont m pellets de part culas magn ticas Caso seja vis vel algum l quido volte a colocar o suporte na base magn tica da unidade TCS durante 2 minutos e repita a aspira o nessa TTU utilizando as mesmas pontas que utilizou anteriormente para cada esp cime Nota Se for vis vel qualquer gr nulo de part cula magn tica ap s ter terminado a aspira o o tubo pode ser aceite Se n o for vis vel qualquer gr nulo o esp cime deve ser testado novamente Se o mesmo esp cime n o contiver um gr nulo de part cula magn tica neste passo num teste posterior isto poder ser indica o de que existe um problema espec fico do esp cime Nesta situa o recomenda se uma nova colheita de esp cimes D Amplifica o Caso utilize o banho de calor
126. te devem ser estabelecidos pelo director do laborat rio Notas ao procedimento A Controlos Para trabalhar correctamente com o software do ensaio APTIMA o controlo negativo para GC rotulado CONTROL CT PCT CONTROL GC NGC tem de estar na primeira posi o da primeira TTU O controlo positivo para GC rotulado CONTROL GC PGC CONTROL CT NCT tem de estar na segunda posi o da primeira TTU A coloca o na posi o errada causar a falha do teste Quaisquer controlos adicionais dever o ser digitados como esp cimes de pacientes e monitorados pelo operador para aceitabilidade O controlo positivo para CT funciona como controlo negativo para o ensaio APTIMA GC Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 19 502185PT Rev E Sistemas DTS B Pipeta o de Controlos e Esp cimenes O volume de controlo ou esp cime adicionado ao tubo de reac o deve ser de 400 uL 100 uL Recomenda se a inspec o visual do volume pipetado para o tubo de reac o para assegurar uma transfer ncia adequada do volume necess rio um volume adequado de esp cime ou controlo para fornecer resultados precisos Se n o tiver sido pipetado o volume adequado volte a pipetar o wTCR GC e o controlo ou esp cime para num novo tubo de reac o C Reagentes A Solu o de Reconstitui o de Sonda pode precipitar durante o armazenamento Caso isto ocorra aque a a solu o de reconstitui o da sonda a 62 C durante 1 a 2 minutos
127. te passo f Registe as iniciais do operador e a data actual na etiqueta g Elimine o frasco e a tampa de TCR B 3 Prepare o reagente de selecc o a Verifique o n mero do lote no frasco de reagente para se certificar de que corresponde ao n mero de lote na folha de c digo de barras do lote principal b Registe as iniciais do operador e a data actual na etiqueta Nota Misture bem os reagentes de amplificac o GC enzim tico GC de sonda GC e de selecc o GC invertendo os suavemente antes de os carregar no sistema Evite formar espuma durante a invers o dos reagentes Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 35 502185PT Rev E Sistema PANTHER C Prepara o de reagentes para reagentes previamente reconstitu dos 1 Os reagentes de amplifica o enzim tico e de sonda previamente reconstitu dos t m de atingir a temperatura ambiente 15 C a 30 C antes do in cio do ensaio 2 Se o reagente de sonda GC reconstitu do contiver um precipitado que n o volte a solubilizar se temperatura ambiente aque a o frasco tapado a uma temperatura que n o superior a 62 C durante 1 a 2 minutos Ap s este passo de aquecimento o reagente de sonda GC pode ser utilizado mesmo que reste algum precipitado residual Misture o reagente de sonda GC por invers o tendo o cuidado de n o induzir a forma o de espuma antes de os carregar no sistema 3 Misture bem todos os reagentes invertendo os suavemente antes de os carregar no sistema
128. tet Gynecol 123 753 757 20 Stary A E Schuh M Kerschbaumer B Gotz and H Lee 1998 Performance of transcription mediated amplification and Ligase chain reaction assays for detection of chlamydial infection in urogenital samples obtained by invasive and noninvasive methods J Clin Microbiol 36 2666 2670 21 Toye B W Woods M Bobrowska and K Ramotar 1998 Inhibition of PCR in genital and urine specimens submitted for Chlamydia trachomatis testing J Clin Microbiol 36 2356 2358 22 Verkooyen R P A Luijendijk W M Huisman W H F Goessens J A J W Kluytmans J H Rijsoort Vos and H A Verbrugh 1996 Detection of PCR inhibitors in cervical specimens by using the AMPLICOR Chlamydia trachomatis assay J Clin Microbiol 34 3072 3074 23 Vincelette J J Schirm M Bogard A Bourgault D Luijt A Bianchi P C Van Voorst Vader A Butcher and M Rosenstraus 1999 Multicenter evaluation of the fully automated COBAS AMPLICOR PCR test for detection of Chlamydia trachomatis in urogenital specimens J Clin Microbiol 37 74 80 Mi CE Gen Probe Incorporated San Diego CA 92121 EMERGO EUROPE Informa es para contacto nos EUA e a n vel internacional Molenstraat 15 Assist ncia ao cliente 1 858 410 8002 2513 BH Hai customerservice 2gen probe com nmaa Pa ses Baixos Assist ncia t cnica 1 858 410 8511 technicalsupport gen probe com N mero de telefone gratuito nos EUA e Canad Assist
129. tivo Negativo 352 1 276 N o infectado Negativo Positivo 0 5 N o infectado Equ voco Positivo 0 1 Total 359 1 288 Distribuic o RLU de Controlos APTIMA A distribuic o de RLU para o controlo positivo APTIMA GC controlo negativo CT e o controlo positivo APTIMA CT controlo negativo GC de todos os testes do ensaio APTIMA GC executados durante os estudos cl nicos dos esp cimes apresentada na Tabela 8 Tabela 8 Distribui o de RLU dos controlos APTIMA durante os estudos de esp cimes cl nicos que inclu ram esfrega os endocervicais vaginais e uretrais masculinos esp cimes de urina masculina e feminina e esp cimes citol gicos l quidos em PreservCyt RLU x1 000 Estudo cl nico Estudo clinico Controlo Estat stica de esfrega os em esp cimes ie citol gicos e esp cimes dne d urina l quidos em PreservCyt N 193 218 M dia 5 048 4 561 DP 1 071 1 295 M xima 6 765 6 791 Controlo positivo GC Controlo negativo CT Percentil 75 5 763 5 450 Mediana 5 175 4 859 Percentil 25 4 645 3 804 M nima 229 158 N 193 218 M dia 2 15 2 60 DP 2 20 2 80 M xima 20 29 Controlo positivo CT Controlo negativo GC Percentil 75 2 3 Mediana 2 2 Percentil 25 1 2 M nima 0 1 Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 58 502185PT Rev E Desempenho cl nico nos Sistemas DTS Estudo de Precis o A precis o do ensaio APTIMA GC ou seja a reprodutibilidade foi aval
130. tubo de transporte de esp cimes de urina ou a aus ncia de qualquer zaragatoa num tubo de transfer ncia de esp cimes APTIMA para esp cimes citol gicos l quidos Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 39 502185PT Rev E Interpreta o do teste controlo de qualidade resultados do paciente Os Controlos Positivos devem produzir os seguintes resultados de testes Controlo Total de RLU x1 000 Resultado da GC Controlo positivo CT controlo negativo GC 0 e lt 50 Negativo Controlo positivo GC controlo negativo CT 100 es T2000 Positivo A Umresultado de zero para 0 x 1 000 RLU no relat rio do teste representa um valor entre zero e 999 RLU Valores de RLU inferiores a 160 nos Sistemas DTS ou a 690 no Sistema TIGRIS DTS ou no Sistema PANTHER constar o no relat rio como inv lidos 1 O Software de Ensaio APTIMA avalia os controlos de acordo com os crit rios acima e relatar o Status de Execu o como APROVADO PASS se os crit rios do controlo de execu o forem atendidos e REPROVADO FAIL se os crit rios do controlo de execu o n o forem atendidos 2 Se o Status de Execu o for REPROVADO FAIL todos os resultados de testes da mesma execu o ser o inv lidos e n o dever o ser relatados 3 Cada laborat rio deve implementar procedimentos de controlo adequados para atender aos requisitos dos regulamentos CLIA sec o 493 1256 Nota Consulte a sec o Resolu o de Problemas ou cont
131. tui o Se estiverem refrigeradas deixe as solu es de reconstitui o alcan ar a temperatura ambiente antes de serem utilizadas a Emparelhe a solu o de reconstitui o adequada com o reagente liofilizado As etiquetas s o codificadas por cores para serem correctamente emparelhadas b Abra o frasco de reagente liofilizado e insira com firmeza a extremidade ranhurada do colarinho de reconstitui o na abertura do frasco Figura 1 Passo 1 c Abra o frasco da solu o de reconstitui o correspondente e deposite a tampa sobre uma superf cie de trabalho limpa e coberta d Enquanto segura o frasco da solu o de reconstitui o na bancada insira firmemente a outra extremidade do colarinho de reconstitui o na abertura do frasco Figura 1 Passo 2 e Inverta lentamente o conjunto do frasco do reagente e do frasco de solu o Permita que a solu o escoe do frasco de solu o para o frasco de reagente Figura 1 Passo 3 f Agite suavemente a solu o no frasco para misturar Evite a cria o de espuma enquanto agita o frasco Figura 1 Passo 4 g Aguarde que o reagente liofilizado entre em solu o e depois inverta novamente o conjunto de frascos inclinando o a um ngulo de 45 para minimizar a forma o de espuma Figura 1 Passo 5 Permita que todo o l quido escoe para o frasco h Retire o colarinho de reconstitui o do frasco Figura 1 Passo 6 i Volte a colocar a tampa no frasco Anote as
132. uida PreservCyt Participantes do sexo feminino e masculino utentes de cl nicas de DST planeamento familiar e OB GINEC de oito locais geograficamente distintos com preval ncia baixa a elevada de GC contribu ram com esfrega os endocervicais esfrega os uretrais masculinos urina masculina e feminina esfrega os vaginais e esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt Os esp cimes foram transferidos directamente para a Gen Probe para an lise Na Gen Probe os esfrega os vaginais os esfrega os uretrais masculinos e os esp cimes de urina masculina e feminina foram primeiro rastreados com o ensaio APTIMA COMBO 2 no Sistema TIGRIS DTS Os esfrega os vaginais e os esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt foram rastreados primeiro com o ensaio APTIMA COMBO 2 nos Sistemas DTS Os esp cimes com resultados finais inv lidos ou equ vocos n o foram seleccionados no Estudo de concord ncia de esp cimes cl nicos em APTIMA GC Cento e vinte e nove esfrega os femininos 70 endocervicais e 59 vaginais 133 esfrega os uretrais masculinos 72 esp cimes de urina feminina 130 de urina masculina e 51 esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt com resultados positivos e negativos no ensaio APTIMA COMBO 2 foram seleccionados para an lises de compara o entre o Sistema TIGRIS DTS e os Sistemas DTS para o ensaio APTIMA GC A maioria dos esp cimes 88 esfrega os femininos 93 esfrega os masculinos 47 esp cimes de urina
133. ure o reagente de sonda GC por invers o tendo o cuidado de n o induzir a forma o de espuma antes de os carregar no sistema 3 Misture bem todos os reagentes invertendo os suavemente antes de os carregar no sistema Evite formar espuma durante a invers o dos reagentes 4 N o encha demasiado os frascos de reagentes O sistema TIGRIS DTS reconhece e rejeita frascos que estejam demasiadamente cheios D Manuseamento de esp cimes 1 Deixe que os esp cimes e controlos alcancem a temperatura ambiente antes do processamento 2 N o agite os esp cimes no v rtex 3 Confirme visualmente se todos os tubos de esp cimes cumprem um dos seguintes crit rios a Presen a de uma nica zaragatoa de colheita azul APTIMA num tubo de transporte de esfrega os unissexo b Presen a de uma nica zaragatoa de colheita cor de rosa APTIMA num tubo de transporte de esfrega os vaginais c Volume final de urina entre as linhas de enchimento pretas dos tubos de transporte de esp cimes de urina d Aus ncia de zaragatoa no tubo de transporte de esp cimes APTIMA para esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt 4 Inspeccione os tubos de esp cimes antes de os carregar no suporte a Caso um tubo de esp cime contenha bolhas no espa o entre o l quido e a tampa centrifugue o tubo por 5 minutos a 420 RCF para eliminar as bolhas b Caso um tubo de esp cime apresente um volume menor do que o habitualmente observado quando se seguem as
134. urina masculina de participantes infectados ou n o infectados com N gonorrhoeae de acordo com o estado de infec o do paciente NAAT 1 me aade Ensaio APTIMA COMBO 2 N ii ce ra kin ondtcs zd paciente EM UM EM UM UM Sint Assint Infectado 164 8 172 Infectado 1 0 1 Infectado 3 1 4 Infectado 1 0 1 Infectado 2 0 2 Infectado 1 1 2 N o infectado 0 1 1 N o infectado 2 13 15 N o infectado 1 0 1 N o infectado 1 0 1 N o infectado 0 1 1 N o infectado 1 1 2 N o infectado 2 2 4 N o infectado 3 1 4 N o infectado 2 1 3 N o infectado 0 3 3 N o infectado 386 691 1 077 N o infectado 1 2 3 N o infectado N A 1 4 5 N o infectado 1 4 5 N o infectado 1 1 2 N o infectado 0 1 1 N o infectado N A 0 1 1 N o infectado 2 6 8 N o infectado 0 2 2 Total 576 745 1 321 EE SSSSSDL TRE PRKM TR E SE FE E E E EE Sint sintom tico Assint assintom tico N A esp cime n o obtido ou dispon vel para an lise O s mbolo de igual representa resultados equ vocos ou indeterminados ap s repeti o do teste EM esfrega o uretral masculino UM urina masculina Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 55 502185PT
135. valo de tempo entre a colheita das amostras o procedimento citol gico e o envio para um laborat rio de an lises microbiol gicas Ap s sete dias a 30 C foram transferidas al quotas de 1 mL de cada conjunto para um tubo de transfer ncia de esp cimes APTIMA que foram testadas no momento basal antes de as colocar a 2 C 10 C e 30 C As amostras processadas foram depois testadas aos 17 dias armazenadas a 30 C e aos 36 dias armazenadas entre 2 C e 10 C Todas as amostras misturadas deram resultados positivos para GC em todos os momentos e a todas as temperaturas Os dados que sustentam condi es de armazenamento mais prolongadas foram gerados a partir de quatro grupos de amostras de solu o PreservCyt processadas negativas testadas a temperaturas inferiores da congela o Cada grupo foi misturado com 50 100 CFU de GC ensaio e depois testado no momento basal Cada grupo foi primeiro colocado a 30 C durante 14 dias e depois armazenado a 20 C ou 70 C durante 106 dias Todas as amostras misturadas deram resultados positivos para GC em todos os momentos e a todas as temperaturas C Estudo Adicional de Estabilidade de Esp cimes Congelado a 20 C Os dados que sustentam as condi es recomendadas de armazenamento a 20 C para esfrega os endocervicais esfrega os uretrais esfrega os vaginais urina feminina urina masculina e esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt foram geradas utilizando 90 esp
136. valores alvo abaixo do limite de detec o do ensaio Recomendam se os testes de esp cimes endocervicais para pacientes femininas sobre as quais h suspeitas cl nicas de haver infec es por clam dia ou gonoc cicas Se forem recolhidos esfrega os citol gicos e endocervicais o esp cime citol gico l quido em solu o PreservCyt tem de ser recolhido antes do esp cime do esfrega o endocervical Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 41 502185PT Rev E Limita es A A utiliza o deste ensaio se limita ao pessoal que foi treinado no procedimento N o seguir as instru es dadas no folheto desta embalagem pode levar a resultados errados B Os efeitos do uso de tamp es irriga o vaginal e vari veis relativas colheita de esp cimes n o foram avaliados quanto ao seu impacto sobre a detec o de GC C A presen a de muco nos esp cimes endocervicais n o interfere na detec o de GC pelo ensaio APTIMA GC Contudo para assegurar uma correcta colheita de amostras endocervicais h que remover o muco em excesso D A amostragem de esp cimes de urina esfrega os vaginais e esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt n o foi concebida para substituir os exames ao colo do tero e a colheita de esp cimes endocervicais para o diagn stico de infec es urogenitais femininas Os pacientes podem ter cervicite uretrite infec es do tracto urin rio ou infec es vaginais devido a outras causas ou infec es
137. vel no mercado e com o outro NAAT dispon vel no mercado Os participantes foram considerados infectados por GC se dois dos quatro esp cimes de esfrega o e urina deram resultados positivos com o ensaio APTIMA COMBO 2 e com o outro NAAT de refer ncia um esp cime com teste positivo em cada NAAT Os pacientes foram considerados n o infectados se menos de dois resultados NAAT de refer ncia tiveram resultado positivo N o se utilizaram culturas como teste de refer ncia Ensaio APTIMA Neisseria gonorrhoeae 48 502185PT Rev E Desempenho cl nico nos Sistemas DTS No total foram utilizados 7 653 resultados do ensaio APTIMA GC para calcular a sensibilidade e a especificidade A sensibilidade e a especificidade para GC por sexo tipo de esp cime e estado sintom tico conforme o caso s o apresentadas na Tabela 4 A Tabela 6 mostra a sensibilidade a especificidade e os valores preditivos do ensaio APTIMA GC em compara o com o estado de infec o do paciente para cada institui o cl nica e no geral As Tabelas 7a 7e resumem o n mero de resultados de participantes sintom ticos e assintom ticos designados como infectados ou n o infectados com GC de acordo com o algoritmo de estado de infec o do paciente Dos 2 787 participantes inclu dos o estado de infec o por GC era desconhecido em 15 Os pacientes foram designados com um estado de infec o do paciente desconhecido se havia falta de resultados que evitassem determina

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