Hoefer TE22 - Hoefer Inc
Contents
1. comprimida Mol culas n o migram de gel Aumentar a intensidade do campo Aumente o per odo de transfer ncias Tente dobrando lo N o utilizar colorac o ou de fixac o agentes sobre o gel antes da transferencia Utilizar um diluente gel Reduzir a concentrac o de acrilamida gel Verificar se o pH pr ximo de tamp o para o pH pretendido A maio ria dos buffers n o deve ser titulada fazer tamp o fresco Use 3 5 mM de SDS 0 1 no tamp o de transfer ncia Evitar incluindo metanol no tamp o de transfer ncia ou reduzir a quantidade de no m nimo absoluto Use reagentes de qualidade anal tica Aumentar a dura o do tempo de Southern blots s o depurinated Aumentar a carga l quida na prote na mudando para um tamp o de transfer ncia com um pH diferente PH mais baixo lt 6 7 aumenta a carga positiva no prote nas pH mais elevado gt 6 7 aumenta a carga negativa sobre as prote nas o pll problema soluc o Difusas padr es de bandas Transferencia imediatamente ap s a separac o electrofor tica Se equilibrar antes da transfer ncia reduzir ou eliminar o tempo de equilibrio ou mover o gel para o quarto frio durante eguilibrio Se tamp o de transferencia contem metanol gt 10 equilibrar o gel em tamp o de transfer ncia durante 30 minutos para permitir que ele encolher antes da montagem da pilha Nota Como metanol faz com que o gel para encolher ligeiramente as mol culas grandes pode2. tre jet s comme les ordures m nag res non tri es et doivent tre collect s s par ment Contactez un repr sentant agr du fabricant pour obtenir des informations sur la mise au rebut de votre quipement Dieses Symbol kennzeichnet elektrische und elektronische Ger te die nicht mit dem gew hnlichen unsortierten Hausm ll entsorgt werden d rfen sondern separat behandelt werden m ssen Bitte nehmen Sie Kontakt mit einem autorisierten Beauftragten des Herstellers auf um Informationen hinsich tlich der Entsorgung Ihres Ger tes zu erhalten Questo simbolo indica che i rifiuti derivanti da apparec chiature elettriche ed elettroniche non devono essere smaltiti come rifiuti municipali indifferenziati e devono invece essere raccolti separatamente Per informazioni relative alle modalita di smantellamento delle apparecchiature fuori uso contattare un rappresentante autorizzato del fabbricante Este simbolo indica que el equipo el ctrico y electr nico no debe tirarse con los desechos dom sticos y debe tratarse por separado Contacte con el representante local del fabricante para obtener mas informaci n sobre la forma de desechar el equipo e pvii Func o de transferencia de eletroforese e descric o O Hoefer TE22 unidade de transfer ncia do tanque transfere rapidamente proteinas ADN ou ARN a partir de at quatro poliacrilamida formato de pequena ou g is de agarose para uma membrana de Os g is e membrana
3. Applications Anal Biochem 131 1 15 1983 Gibson W Protease facilitated transfer of high mole cular weight proteins during electrotransfer to nitrocellulose Anal Biochem 118 1 1981 p20 Lin W and Kasamatsu H On the electrotransfer of polypeptides from gels to nitrocellulose membra nes Anal Biochem 128 302 311 1983 Matsudaira P Sequence from Picomole Quantities of Proteins Electroblotted onto Polyvinylidene Difluo ride Membranes J Biol Chem 262 10035 1987 Ohmsted J B Affinity purification of antibodies from diazotized paper blots of heterogeneous protein samples J Biol Chem 256 11955 1981 Renart Reiser J and Stark G R Transfer of proteins from gels to DBM paper and detection with anti sera a method for studying antibody specificity and structure Proc Natl Acad Sci USA 76 3116 1979 Sambrook J and Russell D W Molecular Cloning A Laboratory Manual Cold Spring Harbor Labora tory Press A1 17 2001 Southern E M Detection of specific sequences among DNA fragments separated by gel electrophoresis J Molec Biol 98 3 503 517 1975 Stellway E J and Dahlberg A E Electrophoretic transfer of DNA RNA and protein onto DBM paper Nucleic Acids Res 8 299 1980 Symington J Green M and Brackmann K Immu nological detection of proteins after electrophore tic transfer from gels to diazo paper analysis of adenovirus encoded proteins Proc
4. Natl Acad Sci USA 78 177 181 1981 Towbin H Staehelin T and Gordon J Electro phoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets procedure and some applications Proc Natl Acad Sci USA 76 4350 4354 1979 e p21 Informac es sobre pedidos produto quantidade c digo Hoefer TE22 Unidade de Transfer ncia de Tank 1 TE22 Inclui 4 cassetes de gel 8 esponjas de espuma 3 mm de espessura 4 esponjas de espuma de 6 mm de espessura 25 folhas de papel mata borr o Acess rios e pecas de reposic o Cassete de gel 2 esponjas de espuma 3 mm de espessura 1 TE24 e uma esponja de espuma 6 mm de espessura Esponjas de espuma 9x 10 5 cm 6 mm de espessura 4 TE25 Esponjas de espuma 9x 10 5 cm 3 mm de espessura 4 TE25F 1 8 Painel de eletrodo 1 TE23 Tampa de seguranca com cabos 1 TE29 A alta tens o leva par SE6056 HV Quick corpo em forma de acoplamento femea 2 QF3 8 para se encaixar 9 5 mm tubulac o ID Quick corpo em forma de engate masculino 2 QFX3 8 para atender 9 5 mm tubulac o ID Papel mata borrao Blotter de papel folhas 9x 10 5 centimetros 50 TE26 Produtos associados Hoefer Alimentac o PS2A200 200 V 2A 1 PS2A200 Hoefer Alimentac o PS200HC 200 V 2A 1 PS200HC Hoefer Alimentac o PS300B 300 V 0 5A 1 PS300B e p22 Hoefer Inc 84 October Hill Road Holliston MA 01746 Toll Free 1 800 227 4750 Telefone 1 508 893 8999 Fax 1 508 893 0176 E mail suppor
5. calor se for assim equiparam N o ligue o exchanger de calor a uma torneira de gua nem qualquer fonte de refrigerante onde a press o de gua n o regulado Nunca introduz anticongelante nem qualquer org nico solvente em qualquer parte do instru mento Org nico solvente causar agress o irrepar vel unidade N o opera com temperaturas de buffer acima do m ximo especificou especificac es t cnicas Super aquecer causar agress o irrepar vel a unidade Dulezit Informace Czech Pokud by toto za zen je pou ito zp sobem kter nen podle Hoefer Inc ochrana poskytovan na z klad za zen m e b t naru ena Tento n stroj je ur en pro vnit n pou it v laborato i pouze Pouze p slu enstv a sti schv len nebo poskyt nut ch Hoefer Inc mohou b t pou ity pro provoz dr bu a dr b tohoto v robku zdroj nap jen pou vaj jen e je opat en ozna en m CE osv d ena nebo bezpe nost vnitrost tn uznan mi zku ebn mi laborato Bezpe nosti lid musi b t zavedena p ed p ipojen m nap jec zdroj nap jen vede k Turn ve ker nap jen kontroly vypnuto a odpojit p ed odb rem energie vede bezpe nostn v ko Rozeslat pouze voda nebo 50 50 voda ethyleng lykolu prost ednictv m v m n k tepla je li to vybav ena Nemaj p ipojen v m n k tepla s vodn mi set epn nebo jak koli chladic kapaliny zdroje kde tlak v
6. poziomie krajowym laboratorium badawcze Bezpiecze stwo lid musi by w miejsce przed pod czeniem zasilania prowadzi do zasilania Za wszystkie r d a zasilania urz dzenia steruj ce off i od czy moc prowadzi przed odbiorem bezpiecze stwa lid Kr tylko wody lub wody 50 50 ethylene glycol wymiennik ciep a poprzez je li tak wyposa one Nie nale y po czy wymiennik ciep a woda z kranu lub jakimkolwiek ch odziwo r d a je eli ci nienie wody jest nieuregulowanych Nigdy nie wprowadza rozpuszczalnika organ icznego przeciw zamarzaniu lub jakichkolwiek na dowoln cz dokumentu Rozpuszczalniki organiczne spowoduje nieodwracalne szkody dla jednostki Nie dzia aj w buforze temperatury powy ej maksymalnego okre lone specyfikacje techniczne Przegrzania spowoduje nieodwracalne szkody dla jednostki Informaci n Importante Spanish Si este equipo es utilizado en una manera no espe cificado por Hoefer Inc la protecci n proporcio nado por el equipo puede ser da ada Este instrumento es dise ado para el uso interior del laboratorio s lo S lo accesorios y partes aprobaron o suministraron por Hoefer Inc puede ser utilizado para operar para mantener y para atender a este producto S lo utiliza una alimentaci n que es CE marc o la seguridad certificada por un nacionalmente reconocido probando el laboratorio La tapa de la seguridad debe estar en el lugar ant
7. ser mais baixo Frio do tamp o antes da utilizac o se poss vel Tipicos par metros de transferencia Par metros para sua amostra e sistema tamp o deve ser determinada empiricamente proteina cidos nucleicos Tamp o Towbin 1X TBE ou 1X TAE Corrente A 0 4 0 3 Tens o V 100 50 Tempo transfer ncia 1 hora 1 hora Refrigerante temp 10 C 10 C ou menos o Nota uma boa id ia para corar o gel para determinar a integridade da transfer ncia Nota N o armazenar buffer utilizado com tangue de transfer ncia Tamp o frio a 10 C antes da reutilizac o Definir a fonte de alimentac o O modo de corrente constante recomendada Se o modo de tens o constante selecionado acompan har atentamente a atual efeito Joule aumento atual aumenta Se a corrente exceder 0 4 A diminuir a tens o Se disponivel definir o temporizador de alimentac o A maioria das transfer ncias s o completa dentro de uma hora mas mol culas maiores ou g is mais espes sas podem exigir tempos mais longos de transfer ncia o tempo de transfer ncia ptima para cada sistema deve ser determinada empiricamente Ap s a transfer ncia estiver completa Vire as configura es de tens o e corrente a zero e desligar a fonte de alimentac o Desconecte os fios dos jacks de alimentac o e Levante a tampa Use o gancho de pl stico arma zenada no suporte ao lado da unidade para levantar u
8. uboelig skade til enheden Driver ikke med stodpudetemperaturer over o pii maksimummet specificerede tekniske specifica tions Overheding vil forarsage uboelig skade til enheden Belangrijke Informatie Dutch Indien deze uitrusting in een manier wordt gebruikt die niet door Hoefer Inc is gespecificeerd de bescherming die door de uitrusting is verzorgd kan worden geschaad Dit instrument is voor binnenlaboratoriumgebruik enkel ontworpen Enkel onderdelen en delen keurden goed of leverden door Hoefer Inc kan voor het bedienen worden gebruikt handhavend en onderhouden van dit product gebruik Enkel een netvoeding die CE is markeerde of veiligheid die door een is gecertificeerd die nationaal is herkend testene laboratorium Het veiligheidsdeksel moet in plaats voor het verbinden van de netvoeding leidt tot een netvoeding zijn Doe alle netvoedingscontroles Uit en koppel los de machtleiding voor het verwijderen van het veiligheidsdeksel Circuleer enkel water of 50 50 water ethyleen glycol door de hitte exchanger zo ja uitrust Verbind de hitte exchanger naar een waterkraan of koelmiddelbron niet waar de waterdruk niet geregulariseerd is Stel Nooit antivriesmiddel of organische oplosmid delen in deel van het instrument voor Organische oplosmiddelen zullen onherstelbare schade aan de eenheid veroorzaken Bedien niet met buffertemperaturen boven het maximum specificeerde technische speci
9. A 1 CSA C22 2 1010 1 Certificado pela CE Esta declarac o de conformidade v lida apenas para o instrumento quando ele e utilizado em locais de laborat rio e usado como entregues a partir de Hoefer Inc exceto para alterac es descritas no manual do usu rio e e ligado a outros CE rotulados instrumentos ou produ tos recomendados ou aprovados por Hoefer Inc Fig 1 Tanque componentes de transfer ncia de unidade principal codificados por a cores leads Uma fonte de alimenta o capaz de fornecer at 100 V e 400 a 500 mA necess ria cobrir cassetes se encaixem nas Os pain is de fendas el ctrodos 2 parafuso eletrodo 3 gt 4 retenc o 2 Al preencher L os niveis gancho cassete Incluidos mas nao apresentados T e As Cassetes de gel 4 9 e As esponjas de espuma 6 mm de espessura 4 calor portas trocador 2 e As esponjas de espuma 3 mm de espessura 8 trocador de calor a press o da v lvula de seguranca e Papel mata borr o folhas 25 Nota Consulte a sec o Notas electrotransfer ncia para uma discuss o das membranas e tamp es Nota Para conex es rapidas e faceis instalar acess rios Quick fit acoplador com valvulas em linha Instru es de opera o Executar a transfer ncia o mais rapidamente poss vel ap s a electroforese para minimizar a difus o banda Cada passo descrito abaixo P
10. EDTA pH 8 0 100 ml Na2EDTA 2H20 FW 372 2 0 5 M 18 6 g Dissolver em 70 ml de agua destilada Ajustar a pH 8 0 com NaOH 10 M aproximadamente 5 ml em seguida adicionar agua destilada at 100 ml Tampao de DNA de transfer ncia 10X 10X Tris borato EDTA TBE pH 8 2 1 litro Tris FW 121 1 900 mM 109 0 g Acido b rico FW 61 83 900 mM 55 6 g EDTA soluc o 0 5 M pH 8 0 20mM 40 0 ml Agua destilada para 1 0 litros Nao ajustar o pH Diluir a 1X antes da utilizac o para se obter 90 mM de Tris 90 mM de acido b rico e 2 mM de EDTA Esta diluig o comumente utilizado mas diluic es para baixo para 0 1X pode ser utilizada caso seja necess rio para diminuir a quantidade de corrente no sistema a fim de controlar o sobreaquecimento RNA tamp o de transfer ncia 10X 10X Tris acetato EDTA TAE pH 8 4 1 litro Tris FW 121 1 400mM 484g Acido ac tico glacial 17 4 M 200 mM 11 4 ml EDTA soluc o 0 5 M pH 8 0 10mM 20 0 ml Agua destilada para 1 0 litros Nao ajustar o pH Diluir a 1X antes da utilizac o para se obter 40 mM de Tris 20 mM acetato e 1 mM de EDTA Esta diluig o comumente utilizado mas diluic es para baixo para 0 1X pode ser utilizada caso seja necess rio para diminuir a quantidade de corrente no sistema a fim de controlar o sobreaquecimento Current Protocols in Molecular Biology 1993 A 2 1 Sambrook J and Russell D W 2001 Molecular Cloning A Laboratory Man
11. Hoefer Inc kann fur das Funktionieren das Aufrechterhalten und die Wartung dieses Produk tes verwendet werden Verwenden Sie nur eine Energieversorgung die CE gekennzeichnet oder durch ein national anerkanntes Probelaboratorium bescheinigte Sicherheit ist Der Sicherheitsdeckel muss im Platz vor dem AnschlieBen der Energieversorgung sein fiihrt zu einer Energieversorgung Alle Energieversorgungssteuerungen abdrehen und die Macht trennen fiihrt vor dem Entfernen des Sicherheitsdeckels Nur Wasser oder 50 50 Glykol des Wassers Athylens durch den Warmeaustauscher wenn so ausgestattet in Umlauf setzen Verbinden Sie den W rmeaustauscher mit einem Wasserklaps oder jeder Kuhl mittel Quelle nicht wo der Wasserdruck ungeregelt wird F hren Sie nie Frostschutzmittel oder jedes organische Losungsmittel in jeden Teil des Instru mentes ein Organische L sungsmittel werden nicht wiedergutzumachenden Schaden der Einheit verursachen Mit Puffertemperaturen Uber angegebenen technischen Spezifizierungen des Maximums nicht funktionieren Die Uberhitzung wird nicht wiedergutzumachenden Schaden der Einheit verursachen Informazioni Importanti Italian Se quest apparecchiatura usata in un modo specificato da Hoefer Inc la protezione fornito dall apparecchiatura potrebbe essere indebolita Questo strumento disegnato per l uso di labora torio interno solo Solo gli accessori e le parti hanno approva
12. a das condic es os cidos nucleicos s o carregadas negativamente e tamb m migram para o nodo Importante Nunca permitir que a temperatura de tamp o para exceder 45 C O calor excessivo o aparelho para deformar A montagem final ea transfer ncia Instale a tampa As cassetes s o codificados por cores para combi nar com os fios na tampa Para transferir para o anodo orientar a tampa de modo que a meia cinza da cassete de frente para o nodo ou chumbo vermelho preto e da metade da cassete de frente para o c todo ou chumbo preto Certifique se que a banana plugues assento nos conectores na tampa e Use apenas um fornecimento de energia aprovadas tais como o Hoefer PS2A200 PS200HC ou PS300B Certifique se que a alimentac o est desligada e todos os controles estao definidas para zero Conecte os cabos codificados por cor da tampa da unidade de transfer ncia para o fornecimento de energia a fio vermelho no vermelho tomada de sa da eo fio preto no preto tomada de sa da Na maioria dos sistemas o chumbo vermelho o nodo ea ponta de preto o c todo A refrigerac o fortemente recomendado Qualquer definic o que resulta em maior do que 5 W de pot ncia ira gerar calor suficiente para exigir controle de calor ativo Um banho circulador refriger ado com agua deve ser ajustado para cerca de 10 C Se usando glicol 50 50 de etileno gua a tempera tura pode
13. a cima n o puxe o painel para cima pelo plug banana Tome cuidado para n o esticar ou quebrar o fio de platina ao manusear o painel Soluc o de problemas problema soluc o Transfer ncia incompleta Areas em branco na membrana Remover todas as bolsas de ar aprisionadas na montagem de pilha de transfer ncia montar a pilha enguanto ele est submerso em tamp o de transferencia pressione suavemente em cada esponja como ele adicionado a pilha e rolar uma pipeta de vidro ou tubo de ensaio sobre a membrana eo gel para eliminar todas as bolhas de ar Reduzir a velocidade de agitac o para evitar a turbul ncia Processo de apenas uma faixa ou membrana em cada bandeja ou cassete para evitar sobreposic es Utilize uma soluc o tamp o com menor forca i nica Continuidade eletrodo Check Durante a transfer ncia um fluxo cont nuo de g s libertado ao longo de todo o comprimento dos el ctrodos Se n o formam bolhas ao longo de todo o comprimento do el ctrodo substituir o el ctrodo Se cassetes se curvam quando vazias substitua Excesso de embala gem da fita faz com que ele se curvar ver as instruc es de montagem recomendadas na p gina 6 Padr o de grade na membrana Adicionar folha adicional do papel mata borr o para aumentar a folga entre o painel de cassete e do gel Tome cuidado para n o overstuff a cassete o gel deve ser mantido firme e uniformemente entre as esponjas mas n o com tanta for a que ela
14. anol rotulados albumina de soro bovino BSA passa atrav s de pelo menos cinco camadas de membranas Metanol pode causar um gel para encolher no entanto assim que a taxa de eluig o diminui Ao utilizar uma membrana cati nica tais como nylon que se liga s prote nas de forma mais eficiente e omitindo metanol a partir do tamp o de transfer ncia Gershoni e Palade obtida uma transfer ncia muito mais quantitativa A desvantagem de membrana cati nica a de que as manchas de prote nas tamb m se ligam bem de modo que o fundo de colorac o tende a ser muito elevada Adequada mente temperada no entanto este artigo pode ser usado para a detecc o de anticorpo ou m todos de sobreposic o de identificac o de prote nas Um resumo do tipo de membrana ea concentrac o de metanol recomendada segue Tipo de membrana Metanol Nylon carregada 0 Nitrocellulose lt 20 PVDF lt 15 Alguns trabalhadores relataram nos que uma baixa concentrac o de SDS 0 1 melhora a transfer ncia de prote nas a partir de um gel de SDS Burnette 1981 e Symington et al 1981 investigaram o efeito do peso molecular da prote na Gibson 1981 descreve um m todo para aumentar a extens o da transfer ncia de grandes prote nas por clivagem limitada com pronase durante a transfer ncia Transferencia de buffers de proteina Use um tamp o com baixa forca i nica tais como a dois listados abaixo para evitar o sobre aquecimento Use o tam
15. de temperatura n o deve exceder 45 C porque as cassetes e suportes de el ctrodos pode defor mar Utilizar um banho circulador ajustado para 10 C se utilizando a gua como um l quido de arrefecimento Voc pode usar uma configura c o mais baixa se o refrigerante 50 50 etileno glicol gua Nunca deixe o aparelho sem vigi lancia por mais de uma hora em condic es de alta pot ncia gt 250 mA Configurac o de poder Se estiver usando uma fonte de alimentac o que pode ser definido como modo de tens o constante ou corrente constante n s recomenda mos que ser configurado para operar em modo de corrente constante Condutividade tamp o aumenta com a temperatura Durante blotting em uma c mara n o resfriado aquecimento Joule e condutividade crescente pode resultar em superaquecimento perigoso se a alimentac o est definido para manter a tens o constante Se uma fonte de energia constante de tens o deve ser usado monitorar e ajustar a tens o para manter uma corrente igual ou inferior a 400 mA o p15 o pl6 Transferencias de proteina Resumos de estudos Gershoni e Palade 1982 investigaram os fatores que afetam a recuperac o de prote nas de g is SDS para nitrocelulose ou papel DBM De acordo com as suas descobertas metanol no sistema tamp o Towbin necess rio para atingir ligac o eficientes para nitrocelulose Metanol melhora obrigat rio em parte removendo a prote nas SDS Na aus ncia de met
16. dic es necess rias para a eluig o eficiente pode n o coincidir com as condi es ideais para a ligac o Para encontrar as condic es ideais para a transfer ncia de sua amostra equili brar esses efeitos Se a taxa de eluic o da amostra lenta um per odo mais longo de transfer ncia pode ser necess ria Em nossa experi ncia baixa tens o transfer ncias para per odos mais longos n o oferecem melhora muito Se vinculativo da amostra inadequada tente condi es de buffer diferentes Para uma revis o abrangente ver Gershoni e Palade 1983 Se o sistema tamp o de transfer ncia diferente do sistema de tamp o de electroforese o gel deve ser equilibrada com o tamp o de trans fer ncia antes da transfer ncia para assegurar incha o ou encolhimento ocorre antes dos contactos de gel da membrana de transfer ncia Se este passo ignorado a distor o banda ou perda de resolu o pode resultar Diretrizes de instrumentos Resfriamento Calor Joule consider vel gerado durante a transfer ncia por causa da alta corrente utili zada o arrefecimento tao ativo recomendado especialmente para as transfer ncias que exijam mais de uma hora as transfer ncias de proteinas onde a atividade biol gica devem ser mantidos ou transfer ncia de cidos nucleicos A condu tividade elevada do tamp o de fosfato utilizado por Bittner et al 1980 conduz a um aumento de temperatura relativamente r pida Tamp o
17. es de conectar la alimentaci n lleva a una alimentaci n Apaga todos controles de alimentaci n y desco necta los plomos del poder antes de quitar la tapa de la seguridad Circula s lo agua o 50 50 glicol de agua etileno por el intercambiador de calor si se es el caso equiparon No conecte el intercambiador de calor a un toque de la agua ni cualquier fuente del liquido refrigerante donde la presi n del agua esta libre Nunca introduce anticongelante ni alg n solvente org nico en cualquier parte del instrumento Los solventes org nicos causar n da o irreparable a la unidad No opera con temperaturas de b fer encima del m ximo especific especificaciones t cnicas Reca lentar causar da o irreparable a la unidad Viktig Information Swedish om denna utrustning anv nds i ett s tt som inte har specificeras av Hoefer Inc skyddet tillhan dah ll vid utrustningen kan skadas Detta instrument formges f r inomhuslaborato rium anv ndning bara Bara medhj lpare och delar godk nde eller lever erade vid Hoefer Inc kan anv ndas f r fungera underh lla och servicing denna produkt anv nder bara en kraft tillg ng som r CE markerade eller s kerhet intygade vid en nationellt erk nd testande laboratorium S kerheten locket m ste vara p platsen f re koppla kraften tillgangen blyen till en kraft tillg ng Vander sig alla kraft tillg ng kontroller av och kopplar bort kraf
18. ez de uma Se soprar atrav s ocorre reduzir a carga de amostra Para mais dicas de resoluc o de problemas consulte a Bjerrum O J et al 1988 e pl2 Notas electrotransferencia Eletrofor ticos vantagens de transferencia Transfer ncia electrofor tica de prote nas e cidos nucleicos muito mais r pido do que os m todos descritos por blotting primeiro Southern de DNA Alwine et ai Para RNA ou et Renart al para as prote nas O m todo de transfer ncia tanque utiliza corrente de alta para reduzir o tempo de transfer ncia da maioria das amostras para 45 60 minutos Transfer ncia electrofor tica pode melhorar a efici ncia de transfer ncia de mais de n o electrofor tica blotting especialmente para as prote nas mas nenhuma t cnica de transfer ncia quantitativa foi ainda desenvolvido devido a complexidade das reacc es Recuperac o quanti tativa n o amp realmente reguerida para a maioria dos fins porque macromol culas de ligac o para uma membrana aumenta a sensibilidade dos m todos de detecc o tais como auto radiograf ia e permite a detecc o de prote nas espec ficas por anticorpos ou r tulos de afinidade e de cidos nucleicos espec ficos por hibridac o com cadeias complementares de RNA ou DNA O tamp o pode ser escolhida para provocar uma transfer ncia para qualquer c todo ou o nodo O pH deve ser tal que todas as esp cies de interesse est o carregadas e migrar na mesma d
19. ficaties Oververhittend zal onherstelbare schade aan de eenheid veroorzaken Important Information English If this equipment is used in a manner not speci fied by Hoefer Inc the protection provided by the equipment may be impaired This instrument is designed for indoor laboratory use only Only accessories and parts approved or supplied by Hoefer Inc may be used for operating main taining and servicing this product Only use a power supply that is CE marked or safety certified by a nationally recognized testing laboratory The safety lid must be in place before connecting the power supply leads to a power supply Turn all power supply controls off and disconnect the power leads before removing the safety lid Circulate only water or 50 50 water ethylene glycol through the heat exchanger if so equipped Do not connect the heat exchanger to a water tap or any coolant source where the water pressure is unregulated Never introduce antifreeze or any organic solvent into any part of the instrument Organic solvents will cause irreparable damage to the unit Do not operate with buffer temperatures above the maximum specified technical specifications Overheating will cause irreparable damage to the unit T rke Tietoa Finnish Jos t t varusteita k ytet n tavassa ei m ritetty Hoefer Inc suojelu ehk isty varusteille saattaa olla avuton T m v line suunnitellaan si
20. irecc o A forca i nica nao deve ser demasiado elevado uma vez que este ir produzir corrente excessiva e calor Por esta raz o as condic es salinas elevadas utilizadas por Southern blotting para capilar de DNA n o pode ser usado Os sistemas tamp o mais amplamente utilizados s o aqueles de Towbin et ai para a transfer ncia de prote nas e de Bittner et al para a transfer ncia de cidos nucleicos Os sistemas tamp o para a transfer ncia de cada tipo de amostra s o lista das mais adiante nesta secc o e pl3 o pl4 Fatores que afetam a transferencia Parametros tais como caracteristicas da amostra tipo de membrana tamanho dos poros gel eo tamp o de transfer ncia usada todos contribuem para a transfer ncia de macromol culas e deve ser mantido em mente ao desenvolver um proto colo Muito pequenas esp cies moleculares por exemplo migram rapidamente mas muitas vezes n o se ligam bem como mol culas maiores gran des mol culas se ligam de forma mais eficiente mas n o eluir a partir do gel t o rapidamente A taxa de eluic o tamb m afectada pelo tamanho dos poros do gel e da orientac o das mol culas Al m disso o grau em que as mol culas de se ligar A membrana influenciado pelas caracter s ticas da membrana tais como o tamanho do poro e do tipo e caracter sticas do tamp o tais como pH tipo de sal e concentrac o e na presenga de detergentes tais como dodecilsulfato de s dio SDS Con
21. liberando as duas abas trava ao longo da borda oposta as dobradicas Coloque a cassete aberto para um tabuleiro de preenchido com pelo menos 3 cm de tamp o de transfer ncia Montar a pilha de transfer ncia de modo que as mol culas ira migrar para a membrana Para macro mol culas carregados negativamente tais como cidos nucleicos ea maioria das prote nas construir a pilha sobre a meia cinza da cassete e em seguida depois posicionar a tampa de modo que o lado cinza enfrenta o chumbo vermelho ou nodo Fig 2 Transferir a montagem de pilha A pilha orientado de modo que as mol culas carregadas nega tivamente migrar para o anodo cinzento Importante Nao overstuff a cassete Nota Tente colocar o gel corre tamente na primeira vez porque as prote nas podem comecar a transferir imediatamente quando a transfer ncia ja comecou movendo se o gel vai distorcer os resultados ou causar faixas de sombra sobre a mancha Os pain is de gaveta s o codifica dos por cores preto em cima lado do c todo cinza parte infe rior lado do nodo AMANHA AMANHA N ZS E P AE ZS A AMANHA AMANHA p Coloque uma esponja de espuma de 3 mm de espessura na cassete aberta submersa e pressione suavemente at que todo o ar expelido Coloque uma folha de papel mata borrao sobre a esponja e em seguida colocar a membrana sobre o papel absorvente Colocar o gel que cont m
22. m migrar mais lentamente Tomar cuidado para gue o gel 6 mantido firmemente contra a membrana e que n o se desloque uma vez contacto feito Se aquecimento excesso ocorre durante a transfer ncia baixar a temperatura do fluido de arrefecimento no permutador de calor Verificar se a superficie de ligac o preferida da membrana se houver contacta com a gel Ligac o ineficiente para membrana Os parametros quimicos Fixar ou reticular a mol cula para a membrana de acordo com os requisitos do acido nucleico proteina ou do tipo membrana Prepare buffer de transfer ncia de proteinas sem SDS Verifique a quantidade ptima de metanol requerido para o tipo de membrana e verificar a soluc o tamp o Adicionar metanol 10 20 para o tamp o de transfer ncia para melhorar a ligac o para nitrocelulose Par metros de membrana Usar luvas ao manusear membranas Membranas Loja temperatura ambiente longe da luz solar direta para manter as membranas ativado Use uma membrana com um menor tamanho dos poros 0 10 0 20 um se as prote nas passam atrav s da membrana ou utilizar um tipo de membrana diferente Local de uma membrana de ambos sobre e sob o gel se suspeitar que uma prote na a avancar na direcc o oposta a partir da maioria das prote nas Verifique ambas as membranas para a prote na s Verificar se a amostra em excesso dispon vel para a rea de super f cie de ligac o atrav s da aplicac o de duas membranas em v
23. ma cassete de apenas o suficiente para ser capaz de agarr lo e coloc lo em cada bandeja Abra cada cassete cuidadosamente e remover os g is e as membranas Rotular cada membrana e indicar o lado da amostra Levante membrana s com uma pinca sem corte e secar o ar ou siga as instruc es que acompanham o seu protocolo Descarte o papel mata borr o mas reutilizar as esponjas Lavar o eguipamento imediatamente ap s o uso Veja a sec o Cuidado e manutenc o na p gina seguinte Use lt 20 de metanol alcool metilico em buffers de transfer ncia 6 a Unica excec o e plo Cuidados e manutenc o Limpeza e Nao aguecer em autoclave ou qualquer parte acima de 45 C e N o exponha a lcool ou solventes org ni cos e Nunca use detergentes abrasivos e Se o uso de reagentes radioativos descontami nar a unidade com um agente de limpeza tais como Contrad 70 ou Decon 90 Lave o tanque cassetes e esponjas com gua destilada imediatamente ap s cada utilizac o Deixe o aparelho secar ao ar completamente Periodicamente lava se com uma soluc o dilu da de um detergente suave Removendo o painel el ctrodo s Para uma limpeza mais profunda ou para subs tituir os eletrodos danificadas remove cada painel eletrodo soltando o parafuso de retenc o suficiente para permitir que o painel de deslize para fora Use o gancho no painel lateral para puxar o painel de eletrodo par
24. mbranas para evitar impress es digitais sobre eles Importante T m um grande cuidado na remoc o de todas as bolhas de ar em cada passo porque a presenca de bolhas de ar especialmente entre a membrana eo gel transfer ncia de blocos Prepare dois comprimentos de 9 mm de vinil ou tubo de silicone Grampos de slides mangueira 4 total em cada extremidade de dois comprimentos de tubulac o Conecte uma extremidade de cada pedaco de tubo a uma porta trocador de calor Anexar a livre extremi dades de cada comprimento de tubagem para as portas de banho circuladores Uma para a entrada ea outra para a sa da segura as liga es com as bracadei ras de mangueira Lugar n o deixe cair uma barra de agita o magn tica no tanque de buffer Soltando objectos para o tanque pode quebrar a placa de alumina Coloque o aparelho sobre um agitador magn tico e encher tamp o de transfer ncia para o Iniciar n vel de enchimento linha na parte da frente do tanque Isto requer aproximadamente 0 7 litros Defina o agitador de baixa m dia gue realiza a circula c o de tamp o sem forcar tamp o atrav s das Cassetes Montar a cassete de transfer ncia Pr molhado nitrocelulose ou membranas de nylon com agua destilada Pr molhado PVDF ou outras membranas hidrof bicos em metanol Em seguida embeber todos os tipos de membranas em tamp o de transfer ncia durante 2 5 minutos e Abra a gaveta
25. odos os pain is de negros das cassetes s o de frente para o mesmo lado da unidade de transferencia Trabalhar rapidamente guando se deslocam a cassete s de montado para o tangue de drenagem para evitar as esponjas Colocar a bandeja com a cassete s perto do tangue levante um cassete de cada vez e deslize lo em um conjunto de ranhuras verticais N o descarte o buffer e Uma vez no local toque na cassete at que as bolhas de ar s o a maioria dos desalojados Algumas peque nas bolhas nas esponjas n o s o suscept veis de inter ferir com a transfer ncia Inspecionar o nivel de buffer Adicionar ou remover o tamp o conforme necess rio para que o nivel cai entre as linhas de n vel m nimo e m ximo de tamp o Tamp o acima da linha m xima tamp o n vel pode causar corros o dos contactos el ctricos o p7 Nota Tome cuidado para orientar a tampa para que todas as esp cies migram para a membrana quando o campo el trico apli cado A direcc o da migrac o depende tanto as caracter sticas da amostra e do pH do tamp o de transfer ncia Se a esp cie de interesse carregada negativa mente no tamp o de transfer ncia ea pilha montada de modo a que a membrana mais pr ximo do lado de cinza da cassete ent o este faces laterais do nodo A maioria das prote nas migram para o nodo no sistema tamp o Towbin Tris glicina metanol independente da presenca de SDS e na maiori
26. ody je neregulo Nikdy zav st prost edek proti zamrznut nebo jak koli organick rozpou t dla do jak koli sti z tohoto n stroje Rozpustidl m zp sob nenapravi teln po kozen jednotka Nejsou provozov na s pufru teplot ch nad maxim ln stanovenou technick mi specifika cemi P eh t zp sob nenapraviteln po kozen jednotka Vigtig Information Danish Hvis dette udstyr bruges i en made ikke specifice ret ved Hoefer Inc den beskyttelse som er blevet forsynet af udstyret kan maske sv kkes Dette instrument er designet for indendors labora toriumbrug bare Bare tilbehor og del godkendede eller forsynede ved Hoefer Inc kan maske bruges for drive funk tionsfejl og betjening dette produkt bruger Bare en str mforsyning der er CE markerede eller sikkerhed som er blevet attesteret af en som nationalt er blevet anerkendt prove laboratorium Sikkerhedlaget m v re pa plads far forbinding stromforsyningsblyet til en stromforsyning Drejer alle stromforsyningskontroller af og afbryder kraftblyet for fjerning sikkerhedlaget Cirkulerer bare vand eller 50 50 vand ethylene glykol gennem varmeveksleren i sa fald udrustet Forbind ikke varmeveksleren til en vandhane eller nogen kolemiddelkilde hvor vandtrykket er unregulated Introducerer Aldrig antifreeze eller noget organisk oplosningsmiddel ind i nogen del af instrumentet Organiske oplosningsmidler vil for rsage
27. p o CAPS alternativa quando Tris n o pode ser usado como em seguenciac o de p ptidos CAPS pode melho rar a transfer ncia devido ao seu efeito sobre a carga da prote na ver Matsudaira 1987 Para as prote nas nativas sugerimos utilizando o tamp o de electroforese para a transfer ncia de t o bem Use o tamp o Towbin para transferir SDS desnaturado prote nas para o nodo Towbin tamp o 25 mM Tris 192 mM de glicina 20 de metanol v v pH 8 3 2 litros Tris FW 121 1 25 mM 6 0 g Glycina FW 75 07 192 mM 28 8 g SDS FW 288 4 0 1 3 5 mM 2 0 g Dissolve se em 1 5 litros de agua destilada Adicionar metanol conforme necess rio Traga a 2 litros com gua destilada N o ajustar o pH que deve ser entre 8 2 e 8 4 Opcional Chill antes da utilizac o Opcional Adicionando SDS pode melhorar a efici ncia de transfer ncia PDependendo do tipo de membrana seleccionada a adig o de metanol pode melhorar os resultados de transfer ncia ver discuss o e tabela acima Devido tamp es contendo metanol pode deteriorar se se for armazenado por longos per odos adicionar metanol como requerido apenas antes da transfer ncia CAPS tamp o 1X 10 CAPS mM pH 11 0 2 litros CAPS FW 221 3 10mM 444g 3 cyclohexylamino 1 propanesulfonic acid Dissolve se em 1 5 litros de gua destilada o pH ajustado a 11 0 com a concentrac o de NaOH Ajustar o volume para 2 0 litros e p17 e p18 Nucleicos tran
28. prouv ou ont fourni par Hoefer Inc pourrait tre utilis pour fonctionner maintenir et entrete nir ce produit utilise Seulement une alimentation qui est CET a marqu ou la s curit certifi par un nationale ment reconnu essayant le laboratoire Le couvercle de s curit doit tre a sa place avant connecter l alimentation mene a une alimentation Tourner tous contr les d alimentation de et d brancher les avances de pouvoir avant enlever le couvercle de s curit Circuler seulement de l eau ou 50 50 glycol d eau thyl ne par l exchanger de chaleur si si quip Ne pas connecter l exchanger de chaleur a un robinet d eau ou la source d agent de refroidissement ou la pression d eau est non r gul e Ne Jamais introduire d antigel ou du dissolvant organique dans n importe quelle partie de instrument Les dissolvants organigues causeront des dommages irr parables a l unit Ne pas fonctionner avec les temp ratures de tampon au dessus du maximum a sp cifi des sp cifications technigues La surchauffe causera des dommages irr parables a l unit Wichtige Informationen German Wenn diese Ausr stung gewisserma en nicht angegeben durch Hoefer Inc verwendet wird kann der durch die Ausriistung zur Verfigung gestellte Schutz verschlechtert werden Dieses Instrument wird fiir den Innenlaborge brauch nur daf r entworfen Nur Zusatze und Teile genehmigten oder lieferten durch
29. reparar o tamp o Prepara se uma dist ncia m nima de 1 5 litros do tamp o de transfer ncia apropriado Refrigere o buffer antes do uso se poss vel Preparar o aparelho Lave o tanque de transfer ncia e Cassetes com agua destilada e Resfriamento ativo opcional mas altamente reco mendavel Se nenhum de resfriamento ativo sera usado va para a etapa 3 Nota Ligue o permutador de calor para um banho de circulador tais como o RCB20 PLUS Circular a gua apenas ou 50 50 de gua etileno glicol para evitar danos para a unidade O circulador n o deve gerar uma press o maior do que 0 7 bar 10 psi acima da press o atmosf rica Regule a temperatura para 10 C ou superior se a circulac o de agua apenas Se usando glicol 50 50 de etileno gua a temperatura pode ser ajustada mais baixa Iniciar o banho circulador ao mesmo tempo como a transfer ncia Primeiro fixe tubulac o para a v lvula de al vio de press o vermelho entre a entrada de gua e portas de sa da e insira a extremidade livre dentro da banheira ou outro recipiente ou drenar para capturar qualquer estouro de al vio de press o A v lvula de al vio abre se a press o no interior do permutador de calor seja superior a 10 psi Nota Mesmo sem resfriamento necess rio para seu sistema o buffer deve circular com um agita dor para evitar o esgotamento de buffer para os eletrodos Nota Utilize sempre luvas ao manusear me
30. s laboratoriok yt lle vain Vain lis varusteet ja osat hyv ksyiv t tai toimitti Hoefer Inc oheen voi k ytt k ytt miselle valvoalle ja servicing t m tuote Vain k ytt k ytt j nnitett joka on CE merkitsi tai turvallisuus joka on todistanut aidoksi ohi joka on kansallisesti tunnustettnut testaaminen labo ratoriota Turvallisuuskansi t ytyy olla paikallaan ennen yhdist minen k ytt j nnitelyijyj k ytt j nnit teeseen Kiert kaikki k ytt j nnitevalvonnat ja irrottaa valtalyijyt ennen poistaminen turvallisuuskantta Kiert vain vesi tai 50 50 vesi ethylene glycol siin tapauksessa varustetun l mm nvaihtimen l pi l yhdist l mm nvaihdinta vesinapautuk seen eik j hdytysnestel hteeseen miss vesi paine on unregulated o piii Pakkasneste eik orgaaninen liuotin v lineen osassa ei esitele Koskaan Orgaaniset liuottimet aiheuttavat korvaamattoman vahingon yksikk n Ei k yt puskuria yll olevia l mp tiloja enint n m ritetyill teknisill t smennyksill Ylikuumen eminen aiheuttaa korvaamattoman vahingon yksikk n Information Importante French Si cet quipement est utilis dans une mani re pas sp cifi par Hoefer Inc la protection fourni par V guipement pourrait tre diminu e Cet instrument est con u pour l usage de labora toire int rieur seulement Seulement les accessoires et les parties ont ap
31. s s o mantidos por uma cassete que esta submersa dentro do tanque de transfer ncia Mol culas migram sob um campo el ctrico membrana onde eles est o ligados A temperatura de tamp o de transfer ncia pode ser controlada por circulac o de l quido arrefe cido atrav s do permutador de calor na base O tamp o separado do l quido de arrefecimento por uma placa condutora de calor de alumina Desempacotando Desembrulhe com cuidado todos os pacotes e comparar o conte do com a lista de embala gem certificando se todos os itens chegaram Se qualquer parte estiver faltando entre em contato Hoefer Inc Inspecione todos os componentes de danos que possam ter ocorrido quando o aparelho estava em tr nsito Se qualquer parte estiver danificado contate imediatamente a transportadora Certifique se de manter todo o material de embalagem para pedidos de indem nizac o ou de usar caso seja necess rio para devolver a unidade Especifica es Gel tamanho Pot ncia m xima Tens o m xima Amperagem m xima Temperatura m xima Buffer necess rio As condi es ambientais de opera o Uso interno Humidade at Altitude de at Categoria Instala o Grau de polui o Dimens es Lx Ax P Certificac es de produtos at quatro 9x10 cm de gel 50 W 100 V 500 mA 45 C 1 5 litros dependendo do n mero de cassetes no lugar 4 40 80 2000 m Il 2 14x24x16 5 cm EN 61010 1 UL 61010
32. sfer ncias de acido Os acidos nucleicos deve normalmente ser trans ferida em forma desnaturada para a ligac o mais eficiente O RNA normalmente desnaturado com glioxal antes da separac o ou separados em g is desnaturantes de formalde do que conte nham merc rio ou metilo No entanto DNA de cadeia dupla geralmente desnaturado no gel com NaOH O alcalino deve ser neutralizado eo gel equilibrada em tamp o de transfer ncia antes electrotransfer ncia Para ambos ADN e ARN g is qualquer SDS tamb m deve ser removido para assegurar ligac o eficiente Bittner et al 1980 lavagem gelifica tr s vezes 20 minutos cada para assegurar a remoc o completa de desnaturantes e detergentes Ver Bittner et al para um estudo da efici ncia de transfer ncia para o DNA de diferentes tama nhos O tamp o de transfer ncia Bittner cont m fosfato de s dio 25 mM pH 6 5 Tamb m descrito um m todo para a introdu o de entalhes por acc o limitada nuclease a fim de facilitar a transfer ncia de fragmentos maiores de ADN Buffers de ADN recomendados incluem o Bittner tampao fosfato de s dio ver refer ncia e TBE Para RNA TAE recomendada TBE e receitas TAE imagens s o listados abaixo Estes tamp es s o mais frequentemente dilu do para 1X mas a concentra o pode variar at 0 1X A refrigera o fortemente recomendado para estes amor tecedores especialmente em altas concentra es EDTA solutiona 0 5 M
33. t hoeferinc com Web www hoeferinc com Hoefer uma marca registrada da Hoefer Inc Contrad 70 e 90 Decon sao marcas registradas da Decon Lab 2012 Hoefer Inc Todos os direitos reservados Impresso nos EUA Hoefer
34. ten blyen f re flytta s kerheten locket Cirkulerar bara vatten eller 50 50 vatten ethylene glycol genom varmen exchanger i sa utrustad fall Inte kopplar varmen exchanger till en vatten kran eller nagot kylmedel kalla dar vattnet trycket ar unregulated Inf r aldrig kylv tska eller n got organiska l sningsmedel in i nagon del av instrumentet Organiskt l sningsmedel ska orsaka irreparable skada till enheten Anvand inte med buffert temperaturer ver det h gsta angivna tekniska specifikationerna Overhettning skulle orsaka irreparabla skador pa enheten o pvi Portugues English French German Italian Spanish La 134 D bt 1 1 Res duos de Equipamentos El ctricos e Electr nicos REEE Este s mbolo indica que os res duos de equipamentos el ctri cos e electr nicos n o devem ser eliminados como res duos urbanos indiferenciados e devem ser recolhidos separada mente Entre em contato com um representante autorizado do fabricante para obter informac es sobre o desmantelamento do seu equipamento This symbol indicates that the waste of electrical and elec tronic equipment must not be disposed as unsorted municipal waste and must be collected separately Please contact an authorized representative of the manufacturer for information concerning the decommissioning of your equipment Ce symbole indique que les d chets relatifs a l quipement lectrique et lectronique ne doivent pas
35. tjene dette produktet bruker Bare en kraftforsyning som er CE merket eller sikkerhet som ha blitt sertifisert av et som nasjonalt ha blitt anerkjent pr ver laboratorium Sikkerheten lokket m v re p plass f r forbinding kraftforsyningene blyene til en kraftforsyning Vender all kraftforsyningsstyring av og frakopler kreftene blyene for fjerning sikkerheten lokket Sirkulerer bare vann eller 50 50 vann ethylene glykol gjennom oppvarmingen veksleren i s fall utstyrer Ikke forbind oppvarmingen veksleren til en vanntapp eller noe kjolemiddelkilde hvor vannet trykket er unregulated Introduserer Aldri antifreeze eller noe organisk losemiddel inn i noe del av instrumentet Organi ske losemiddler vil for rsake irreparabel skade pa enheten Driver med buffertemperaturer over maksimum ikke spesifiserte teknisk spesifikasjoner A overop pheting vil for rsake irreparabel skade p enheten Wazne Informacje Polish Je eli ten sprz t jest wykorzystywany w spos b nie okre lone przez Hoefer Inc do ochrony przewid zianej przez urz dzenie mo e zosta obni ony Instrument ten jest przeznaczony do u ytku w laboratoriach kryty tylko Tylko akcesori w i cz ci zatwierdzone lub dostarc zone przez Hoefer Inc mog by wykorzystane do eksploatacji utrzymania i obs ugi tego produktu korzysta jedynie zasilacza e jest nosz ce ozna kowanie CE lub bezpiecze stwa uwierzytelnione przez uznane na
36. to o hanno fornito da Hoefer Inc potrebbe essere usato per operare per mantenere e per revisionare questo prodotto usa Solo un alimentatore che CE ha marcato o la sicurezza certificato da un nazionalmente ricon osciuto testando il laboratorio O piv Il coperchio di sicurezza deve essere nel luogo prima di collegare i piombi di alimentatore a un alimentatore Spegne tutto i controlli di alimentatore e disin serisce i piombi di potere prima di togliere il coper chio di sicurezza Circola solo l acqua o 50 50 glicole di acqua etilene attraverso lo scambiatore di calore se cosi equipag giato Non collegare lo scambiatore di calore a un rubinetto di acqua o qualunque fonte di refriger ante dove la pressione di acqua sregolata Non introduce mai l antigelo o qualunque solvente organico in qualunque parte dello strumento solventi organici causeranno il danno irreparabile all unit Non opera con le temperature di tampone al di sopra del massimo ha specificato le descrizioni tecniche Il surriscaldamento causer il danno irreparabile all unit Viktig Informasjon Norwegian Hvis dette utstyret blir brukt i en mate ikke spesi fisert ved Hoefer Inc beskyttelsen som ha blitt git av utstyret kan bli svekket Dette instrumentet er utformet for innend rs labo ratoriumbruk bare Bare tilbeh r og deler godkjente eller forsynte ved Hoefer Inc kan bli brukt for drive vedlikeholde og be
37. ual A1 17 e pl9 ec Bibliografia Alwine J C Kemp D J and Stark G R Method for detection of specific RNAs in agarose gels by trans fer to DBM paper and hybridization with DNA probes Proc Natl Acad Sci USA 74 5350 5354 1977 Bittner M Kupferer P and Morris C F Electropho retic transfer of proteins and nucleic acids from slab gels to diazobenzyloxymethyl cellulose or nitrocellulose sheets Anal Biochem 102 459 471 1980 Bjerrum O J Larsen K and Heegaard N CRC Handbook of Immunoblotting of Proteins Vol 1 Section 7 CRC Press 1988 Burnette W N Western blotting electrophoretic transfer of proteins from sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gels to unmodified nitrocellulose and radiographic detection with antibody and radioiodinated protein A Anal Biochem 112 195 1981 Gallagher S Winston S E Fuller S A and Hurrell J G R Immunoblotting and Immunodetection In Current Protocols in Molecular Biology 10 8 1 10 8 17 Greene Publishing and Wiley Interscience NY 1993 Gershoni J M Davis EE and Palade G E Protein blotting in uniform or gradient electric fields Anal Biochem 144 32 40 1985 Gershoni J M and Palade G E Electrophoretic trans fer of proteins from sodium dodecyl sulfate polya crylamide gels to a positively charged membrane filter Anal Biochem 124 396 405 1982 Gershoni J M and Palade G E Protein Blotting Principles and
38. ual do usuario Portugu s Hoefer TE22 Unidade de transfer ncia de tanque mu TE22 IM Portuguese Rev G0 07 12 H O e fe r Conte do Informa es Importantes AAA ji Residuos de Equipamentos El ctricos e Electr nicos REEE a 887 o AAA PARA AA vii Func o de transfer ncia de eletroforese Ee NEE 1 ESPECITI CACOGS muussa isa a EW awk s n 2 Instru es de opera o sum aaa o A AAAA 4 Cuidados e manuteng o s eea asanesaa2 10 Solu o de problemaes AAA 11 Notas elecirotranster ncla nimenneen 13 Elle tere EE 20 Informa es sobre pedidos nn 22 Informac es Importantes Portugu s Se este equipamento usado numa maneira nao especificada por Hoefer Inc que a protecc o forne cida pelo equipamento pode ser comprometida Este instrumento projectado para uso de interior de laborat rio s S acess rios e partes aprovaram ou forneceu por Hoefer Inc pode ser usada para operar manter e servicing este produto S usa um estoque de poder que CE marcou ou seguranca registrada por um nacionalmente recon hecido testando laborat rio A tampa de seguran a deve estar em lugar antes de ligar o estoque de poder leva a um estoque de poder Desliga todos controlos de estoque de poder e desconecta os chumbos de poder antes de retirar a tampa de seguranca Circulam s gua ou 50 50 glicol de gua ethylene pelo exchanger de
39. uma amostra que foi separado electroforeticamente e equilibrada se necess rio com tamp o de transfer ncia na membrana Suavemente rolar uma pipeta de vidro ou de tubo de ensaio sobre o gel para expelir o ar aprisionado entre a membrana eo gel Cobrir o gel com uma folha de papel mata borr o e depois colocar uma esponja da espessura adequada ver no diagrama abaixo novamente pressionando levemente para expelir o ar aprisionado Feche a gaveta e pressione levemente para bloguear as guias A cassete montada deve segurar o gel em contato firme com a membrana sem apertar o gel Se a pilha parece solto adicionar folhas de papel mata borr o se a pilha parece apertado substituir a esponja de topo sobre o gel com uma folha de papel mata borr o Se remover a esponja inferior abaixo do gel substituir pelo menos duas folhas de papel mata borr o para criar o espaco entre a membrana eo painel de cassete uma esponja de 3 mm para g is de gt 1 5 mil metros Ou uma esponja de 6 mm para g is de lt 1 5 mm papel mata borrao gel membrana papel mata borrao uma esponja de 3 mm Montar a cassete na bandeja que cont m um tampao de transfer ncia de cerca de 3 cm de profundidade Instalar a cassete s Se a transfer ncia de apenas um ou dois g is escol her as posic es mais pr ximas do centro da gaveta As cassetes deve ser orientado de modo gue o lado da dobradica est virada para cima e t
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