HoeferTE42 e TE62
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1. Hoefer2. Trasferimento elettroforetico pu migliorare l efficienza di trasferimento elettroforetico su non blotting specialmente per le proteine ma non tecnica di trasferimento quantitativa stata ancora sviluppata a causa della complessit delle reazioni Recupero quantitativo non effetti vamente necessario per la maggior parte degli scopi perch macromolecole associazione ad una membrana aumenta la sensibilit dei metodi di rilevazione come autoradiografia e consente il rile vamento di proteine specifiche mediante anticorpi o etichette affinit e di specifici acidi nucleici mediante ibridazione con filamenti complementari di RNA o DNA Il tampone pu essere scelto per determinare un trasferimento o verso il catodo e l anodo Il pH deve essere tale che tutte le specie di interesse sono cariche e migrano nella stessa direzione La forza ionica non dovrebbe essere troppo alto poich ci provocherebbe una corrente eccessiva e calore Per questo motivo le condizioni di sale utilizzate da Southern blotting per capillare di DNA non pu essere utilizzato I sistemi tampone pi utilizzati sono quelli di Towbin et al per il trasferimento di proteine e di Bittner et al per il trasferimento di acidi nucleici Sistemi tampone per il trasferimento di ogni tipo di campione sono elencati pi avanti in questa sezione o p17 o p18 Fattori che influenzano il trasferimento Parametri guali le caratteristiche del campione il tipo
3. dal sistema tampone per elettroforesi il gel deve essere equilibrata con tampone di trasferimento prima del trasferimento a garantire gonfiore o contrazione si verifica prima che i contatti gel la membrana di trasferimento Se questo passaggio viene saltato distorsione banda o la perdita di risoluzione potrebbe causare Strumento linee guida Raffreddamento Notevole il calore Joule generato durante il trasferimento a causa della alta corrente impiegata il raffreddamento in modo attivo si raccomanda soprattutto per i trasferimenti che richiedono pi di un ora i trasferimenti in cui l attivit biologica delle proteine devono essere conservati o il trasferimento degli acidi nucleici Valta conducibilit del tampone fosfato usato da Bittner et al 1980 porta ad un aumento di temperatura relativamente rapido Buffer temperatura non deve superare i 45 C perch le cassette e dei supporti elettrodi possono defor marsi Utilizzare un bagno circolatore impostato a 10 C se si utilizza l acqua come refrigerante possibile utilizzare un valore inferiore se il liquido di raffreddamento 50 50 glicole etile nico acqua Non lasciare mai l apparecchio incustodito per pi di un ora in condizioni di alta potenza gt 0 5 A Regolazione della potenza Se si utilizza un alimentatore che pu essere impostato sia in modalit a tensione costante o corrente costante si raccomanda di essere impostato per operare in
4. di acidi nucleici sono caricate negativamente e anche migrare verso l anodo Il raffreddamento fortemente raccomandato Qualsiasi impostazione che si traduce in supe riori a 5 W di potenza genera calore sufficiente a richiedere il controllo attivo di calore Un bagno circolatore refrigerato deve essere impostato raffreddare fino a circa 10 C Se si utilizza 50 50 etilene glicole acqua la temperatura pu essere inferiore Tampone gelido prima dell uso se possibile Impostazioni di potenza consigliate La maggior parte dei trasferimenti sono state completate nel giro di un ora ma molecole pi grandi o pi spessi gel possono richiedere i tempi di trasfe rimento pi lunghi il tempo di trasferimento ottimale per ogni sistema deve essere determinato empiricamente Trasferimenti lasciato correre durante la notte dovrebbe essere impostata su un valore di corrente costante non superiore a 0 1 A Parametri di trasferimento tipici Parametri per il vostro campione e sistema tampone deve essere determinato empiricamente proteina acidi nucleici Buffer Towbin 1X TBE o TAE 1X Corrente A 0 8 1 0 0 9 1 0 Tensione V 70 80 50 Tempo di trasferimento 1 ora 1 ora Temperatura liquido 10 C 10 C o meno di raffreddamento Nota Le due calotte rosse sul coperchio ospitare i connettori a banana sullo scambiatore di calore SE600 modello immergibile a prescindere dall orientamento o plo TE42 e TE62 0 Installa
5. essere utilizzata per la rilevazione di anticorpi o altri metodi di sovrapposizione di identificazione proteina Una sintesi di tipo a membrana e la concentrazione di metanolo raccomandato segue Tipo di membrana Metanolo Nylon caricato 0 Nitrocellulosa lt 20 PVDF lt 15 Alcuni lavoratori hanno riferito che ci una bassa concentrazione di SDS 0 1 migliora il trasferimento della proteina da un gel di SDS Burnette 1981 e Symington et al 1981 hanno studiato l effetto del peso molecolare della proteina Gibson 1981 descrive un metodo per aumentare il grado di trasferimento di proteine grandi mediante clivaggio con pronasi limitata durante il trasferimento Proteina di trasferimento buffer Utilizzare un tampone con bassa resistenza ionica ad esempio i due indicati di seguito per evitare il surriscaldamento Utilizzare il tampone CAPS alternativo quando Tris non possono essere utilizzati come in sequenziamento peptide CAPS puo migliorare il trasferimento a causa del suo effetto sulla carica della proteina vedi Matsudaira 1987 Per le proteine native suggeriamo di utilizzare il buffer di elettroforesi per il trasferimento pure Utilizzare il buffer Towbin di trasferire SDS denaturate le proteine verso Panodo Towbin tampone 25 mM Tris 192 mM glicina 20 v v di metanolo pH 8 3 2 litri Tris FW 121 1 25 mM 6 0 g Glycina FW 75 07 192 mM 28 8 g SDS FW 288 4 0 1 3 5 mM 2 0 g Sciogliere in 1 5
6. in prossimita del serbatoio estrarre una cassetta alla volta e farlo scivolare in una serie di feritoie verticali Non gettare il buffer nel vassoio 2 Una volta sul posto toccare ogni cassetta leggermente fino a quando la maggior parte delle bolle d aria sono sloggiato Piccole bolle nelle spugne amp improbabile che interferisca con il trasferimento Controllare il livello del buffer Aggiungere o rimuovere tampone come richiesto in modo che il livello scende tra le linee di buffer minimo e massimo livello Buffer sopra la linea di massimo livello del buffer possono causare corrosione dei contatti elettrici Trasferire Fare attenzione a orientare tutte le componenti del sistema in modo che il campo elettrico appli cato fa s che tutte le specie a migrare verso la membrana La direzione di migrazione dipende sia dalle caratteristiche del campione e il pH del tampone di trasferimento Se le specie di interesse caricato negativamente in tampone di trasferimento e la pila viene montata in modo che la membrana pi vicino al lato grigio della Importante Non permettere mai che la temperatura del tampone superare i 45 C II calore eccessivo provoca l unit a deformarsi cassetta allora questo lato si affaccia Panodo La maggior parte delle proteine migrare verso Panodo nella Tris glicina sistema tampone Towbin metanolo indipendente dalla presenza di SDS e nella maggior parte delle condizioni
7. 3 mm di spessore 4 spugne schiuma di 6 mm di spessore 25 fogli di carta assorbente Accessori e pezzi di ricambio Glass scambiatore di calore per TE42 1 TE47 Elettrodo pannello nero 1 TE43BK Elettrodo pannello grigio 1 TE43GY Gel cassetta 2 spugne schiuma di 3 mm di spessore 1 spugna di schiuma di 6 mm di spessore 1 TE44H Serbatoio di accumulo inferiore per TE42 1 TE56 Serbatoio di accumulo inferiore con scambiatore di calore per TE62 1 TE67 Spugne Dacron 6 mm di spessore 2 TE45 Spugne schiuma 6 mm di spessore 4 TE45F Spugne schiuma 3 mm di spessore 4 TE45F 1 8 Coperchio con cavi per TE42 e TE62 1 TE49 Alta tensione porta coppia SE6056 HV Quick fit corpo accoppiatore femmina per adattarsi 9 5 mm tubo ID 2 QF3 8 Quick fit corpo accoppiatore maschio per adattarsi 9 5 mm tubo ID 2 QFX3 8 Blotter di carta Blotter carta fogli 9x 10 5 cm 50 TE26 Blotter carta fogli 14 5x21 5 cm 50 TE46 Companion prodotti Hoefer PS2A200 Power Supply 200 V 2A 1 PS2A200 Hoefer PS200HC Power Supply 200 V 2A 1 PS200HC Hoefer PS300B Power Supply 300 V 0 5A 1 PS300B p26 Hoefer Inc 84 October Hill Road Holliston MA 01746 Numero verde 1 800 227 4750 Telefono 1 508 893 8999 Fax 1 508 893 0176 E mail support hoeferinc com Web www hoeferinc com Hoefer amp un marchio registrato di Hoefer Inc Contrad Decon 70 e 90 sono marchi registrati di Decon Lab 2012 Hoefer Inc Tutti i diritti riservati Stampato negli USA
8. cz ci zatwierdzone lub dostarc zone przez Hoefer Inc moga by wykorzystane do eksploatacji utrzymania i obstugi tego produktu korzystac jedynie zasilacza ze jest noszace ozna kowanie CE lub bezpieczenstwa uwierzytelnione przez uznane na poziomie krajowym laboratorium badawcze Bezpieczenstwo lid musi by w miejsce przed podtaczeniem zasilania prowadzi do zasilania Zas wszystkie r d a zasilania urz dzenia steruj ce off i od czy moc prowadzi przed odbiorem bezpiecze stwa lid Kr tylko wody lub wody 50 50 ethylene glycol wymiennik ciep a poprzez je li tak wyposa one Nie nale y po czy wymiennik ciep a woda z kranu lub jakimkolwiek ch odziwo r d a je eli ci nienie wody jest nieuregulowanych Nigdy nie wprowadza rozpuszczalnika organ icznego przeciw zamarzaniu lub jakichkolwiek na dowoln cz dokumentu Rozpuszczalniki organiczne spowoduje nieodwracalne szkody dla jednostki Nie dzia aj w buforze temperatury powy ej maksymalnego okre lone specyfikacje techniczne Przegrzania spowoduje nieodwracalne szkody dla jednostki Informa es Importantes Portuguese Se este equipamento usado numa maneira nao especificada por Hoefer Inc que a protecc o forne cida pelo equipamento pode ser comprometida Este instrumento projectado para uso de interior de laborat rio s S acess rios e partes aprovaram ou forneceu por Hoefer Inc pode ser us
9. litri di acgua distillata Aggiungere metanolo come richiesto Portare a 2 litri con acqua distillata Non regolare il pH che deve essere compresa tra 8 2 e 8 4 Optional Chill prima dell uso Optional Aggiunta di SDS pu migliorare l efficienza di trasferimento PA seconda del tipo di membrana selezionato l aggiunta di metanolo pu migliorare i risultati di trasferimento si veda la discussione e tabella sopra Perch tamponi contenenti metanolo pu deteriorarsi se conservata per lunghi periodi aggiungere metanolo come richiesto appena prima del trasferimento Tampone CAPS 1X 10 CAPS mM pH 11 0 5 litri CAPS FW 221 3 10 mM 11 1 g 3 cyclohexylamino 1 propanesulfonic acid Sciogliere in 4 5 litri di acgua distillata regolare a pH 11 0 con conc NaOH Regolare il volume di 5 0 litri o p21 p22 Trasferimenti di acido nucleico Gli acidi nucleici devono di norma essere trasfe riti in forma denaturata per Passociazione pit efficiente RNA normalmente denaturato con gliossale prima della separazione o separati in denaturazione gel contenenti formaldeide o mercurio metile Tuttavia DNA a doppio filamento denaturata solitamente in gel con NaOH L alcali deve essere neutralizzata e il gel equilibrata in tampone di trasferimento prima electrotransfer Sia per DNA e RNA gel ogni SDS deve anche essere rimosso per assicurare vincolante efficiente Bittner et al 1980 wash gel tre volte 20 minuti ci
10. modalit di corrente costante Conducibilit tampone aumenta con la temperatura Durante blotting in una camera non raffreddato il riscaldamento Joule e condu cibilit aumento pu provocare un surriscalda mento pericoloso se l alimentazione destinata a mantenere tensione costante Se una tensione di alimentazione costante deve essere utilizzato controllare e regolare la tensione di mantenere una corrente pari o inferiore a 1 A o pl9 e p20 Proteine trasferimenti Sommari Gershoni e Palade 1982 hanno studiato i fattori che influenzano il recupero delle proteine da gel SDS su nitrocellulosa o carta DBM Secondo i loro risultati metanolo nel sistema tampone Towbin amp necessario per conseguire legame efficienti per nitrocellulosa Metanolo migliora obbligatorio in parte eliminando legato alle proteine SDS In assenza di metanolo etichettati albumina di siero bovino BSA passa attraverso almeno cinque strati di membrane Il metanolo pu causare un gel a ridursi comunque cos il tasso di eluizione diminuisce Utilizzando una membrana catio nico ad esempio nylon che lega le proteine pi efficiente e omettendo metanolo dal buffer di trasferimento e Gershoni Palade ottenuto un trasferimento pi quantitativa Lo svantaggio di membrana cationico che macchie proteiche anche legano bene in modo che la colorazione di fondo tende ad essere molto elevato Corret tamente spenta tuttavia questo documento pu
11. SDS Verificare che la quantit ottimale di metanolo richiesto per il tipo di membrana e controllare la soluzione tampone Aggiungere 10 20 metanolo al buffer di trasferimento per migliorare legame nitrocellulosa Membrana parametri Indossare i guanti quando si maneggiano le membrane Membrane Conservare a temperatura ambiente dalla luce solare diretta per mantenere le membrane attivato Utilizzare una membrana con dimensione dei pori inferiore 0 10 0 20 um se le proteine passano attraverso la membrana o utilizzare un diverso tipo di membrana Inserire una membrana sia sopra che sotto il gel se si sospetta una proteina si muove nella direzione opposta dalla maggior parte delle proteine Controllare entrambe le membrane per la proteina s Verificare campione troppo disponibile per la superficie legame applicando due membrane invece di uno Se soffiare si verifica ridurre il carico campione Per ulteriori suggerimenti di risoluzione dei problemi fare riferimento alla Bjerrum O J et al 1988 e p16 Electrotransfer note Vantaggi trasferimento elettroforetico Trasferimento elettroforetica di proteine e acidi nucleici molto pi veloce rispetto ai metodi blotting prima descritti da Southern per il DNA Alwine et al Per URNA o Renart et al per le proteine Il metodo di trasferimento serbatoio utilizza corrente elevata per ridurre il tempo di trasfe rimento della maggior parte dei campioni per 45 60 minuti
12. ada para operar manter e servicing este produto S usa um estoque de poder que CE marcou ou seguranca registrada por um nacionalmente recon hecido testando laborat rio A tampa de seguran a deve estar em lugar antes de ligar o estoque de poder leva a um estoque de poder Desliga todos controlos de estoque de poder e desconecta os chumbos de poder antes de retirar a tampa de seguranca Circulam s agua ou 50 50 glicol de gua ethylene pelo exchanger de calor se for assim equiparam N o ligue o exchanger de calor a uma torneira de gua nem qualquer fonte de refrigerante onde a press o de gua n o regulado Nunca introduz anticongelante nem qualquer org nico solvente em qualquer parte do instru mento Org nico solvente causar agress o irrepar vel unidade N o opera com temperaturas de buffer acima do m ximo especificou especificac es t cnicas Super aguecer causar agress o irreparavel a unidade Informaci n Importante Spanish Si este equipo es utilizado en una manera no espe cificado por Hoefer Inc la protecci n proporcio nado por el equipo puede ser da ada Este instrumento es dise ado para el uso interior del laboratorio s lo S lo accesorios y partes aprobaron o suministraron o pv por Hoefer Inc puede ser utilizado para operar para mantener y para atender a este producto S lo utiliza una alimentaci n que es CE marc o la seguridad certifica
13. are le schede La cassetta raccolta deve tenere il gel a stretto contatto con la membrana senza comprimere il gel Se la pila sembra allentata aggiungere fogli di carta assorbente se lo stack sembra stretto sostituire la spugna superiore sul gel con un foglio di carta assorbente Se si rimuove la spugna basso sotto il gel sostituire almeno due fogli di carta assorbente per creare spazio tra la membrana e il pannello cassetta uno spugna 3 mm per gel gt 1 5 mm 0 un 6 spugna mm per gel lt 1 5 mm carta assorbente gel membrana carta assorbente uno 3 millimetri spugna pannelli a cassetta sono colorate nero in alto catodo lato grigio in basso lato anodo Montare la cassetta in un vassoio contenente buffer di trasferimento di circa 3 cm di profondita Installare la cassetta s o Il serbatoio contiene fino a quattro cassette se il trasferimento solo uno o due gel utilizzare le posizioni piu vicine al centro della cassetta Lo scambiatore di calore sommergibile se utilizzato in TE42 riempie i due slot centrali quindi solo due cassette possono essere collocati nelle scanalature esterne Le cassette devono essere orientati in modo che le cerniere affrontare e in modo che il lato nero di cias cuna cassetta affronta il pannello nero catodo L avorate rapidamente quando si sposta la cassetta s assemblatoal serbatoio di drenaggio per evitare le spugne Posizionare il vassoio con la cassetta s
14. ascuna per assicurare la completa rimozione dei denaturanti e detergenti Vedi Bittner et al per uno studio l efficienza di trasferimento di DNA di dimensioni diverse Il buffer di trasferimento Bittner contiene 25 mM sodio fosfato pH 6 5 Inoltre descritto un metodo per l introduzione di nick per azione limitato nucleasi per facilitare il trasferimento di frammenti di DNA pi grandi Buffer di DNA consigliati includono il tampone fosfato di sodio Bittner vedi riferimento e TBE Per RNA TAE raccomandato TBE e TAE ricette magazzino sono elencati di seguito Questi tamponi sono pi spesso diluiti a 1X ma la concentrazione pu variare fino a 0 1X Il raffred damento fortemente raccomandato per questi buffer specialmente alle alte concentrazioni EDTA solutiona 0 5 M EDTA pH 8 0 100 ml Na2EDTA 2H20 FW 372 2 0 5 M 18 6 g Sciogliere in 70 ml di acgua distillata Portare a pH 8 0 con NaOH 10 M circa 5 ml guindi aggiungere acgua distillata a 100 ml DNA buffer di trasferimento 10X 10X Tris borato EDTA TBE pH 8 2 1 litro Tris FW 121 1 900 mM 109 0 g Acido borico FW 61 83 900mM 55 6 g EDTA soluzione 0 5 M pH 8 0 20 mM 40 0 ml Acgua distillata a 1 0 litri Non regolare il pH Diluire a 1X prima dell uso per dare 90 mM Tris 90 mM di acido borico e 2 mM EDTA Questa diluizione viene comunemente usato ma diluizioni giu da 0 1X pud essere utilizzato gualora sia necessario diminuir
15. ction fourni par V guipement pourrait tre diminu e Cet instrument est con u pour l usage de labora toire int rieur seulement Seulement les accessoires et les parties ont approuv ou ont fourni par Hoefer Inc pourrait tre utilis pour fonctionner maintenir et entrete nir ce produit utilise Seulement une alimentation qui est CET a marqu ou la s curit certifi par un nationale ment reconnu essayant le laboratoire Le couvercle de s curit doit tre a sa place avant connecter l alimentation mene a une alimentation Tourner tous contr les d alimentation de et d brancher les avances de pouvoir avant enlever le couvercle de s curit Circuler seulement de l eau ou 50 50 glycol d eau thyl ne par l exchanger de chaleur si si quip Ne pas connecter l exchanger de chaleur a un robinet d eau ou a la source d agent de refroidissement ou la pression d eau est non r gul e Ne Jamais introduire d antigel ou du dissolvant organique dans n importe quelle partie de instrument Les dissolvants organiques causeront des dommages irr parables a l unit Ne pas fonctionner avec les temp ratures de tampon au dessus du maximum a sp cifi des sp cifications techniques La surchauffe causera des dommages irr parables a l unit Wichtige Informationen German Wenn diese Ausr stung gewisserma en nicht angegeben durch Hoefer Inc verwendet wird kann der durch die Ausr stung zur V
16. da por un nacionalmente reconocido probando el laboratorio La tapa de la seguridad debe estar en el lugar antes de conectar la alimentaci n lleva a una alimentaci n Apaga todos controles de alimentaci n y desco necta los plomos del poder antes de quitar la tapa de la seguridad Circula s lo agua o 50 50 glicol de agua etileno por el intercambiador de calor si se es el caso equiparon No conecte el intercambiador de calor a un toque de la agua ni cualquier fuente del l quido refrigerante donde la presi n del agua est libre Nunca introduce anticongelante ni alg n solvente org nico en cualquier parte del instrumento Los solventes org nicos causar n da o irreparable a la unidad No opera con temperaturas de b fer encima del m ximo especific especificaciones t cnicas Reca lentar causar da o irreparable a la unidad Viktig Information Swedish om denna utrustning anv nds i ett s tt som inte har specificeras av Hoefer Inc skyddet tillhan dah ll vid utrustningen kan skadas Detta instrument formges f r inomhuslaborato rium anv ndning bara Bara medhj lpare och delar godk nde eller lever erade vid Hoefer Inc kan anv ndas f r fungera underh lla och servicing denna produkt anv nder bara en kraft tillg ng som r CE markerade eller s kerhet intygade vid en nationellt erk nd testande laboratorium S kerheten locket m ste vara p platsen f re koppla kraft
17. delkilde hvor vandtrykket er unregulated Introducerer Aldrig antifreeze eller noget organisk opl sningsmiddel ind i nogen del af instrumentet Organiske oplosningsmidler vil for rsage uboelig skade til enheden Driver ikke med stodpudetemperaturer over o pii maksimummet specificerede tekniske specifica tions Overheding vil forarsage uboelig skade til enheden Belangrijke Informatie Dutch Indien deze uitrusting in een manier wordt gebruikt die niet door Hoefer Inc is gespecificeerd de bescherming die door de uitrusting is verzorgd kan worden geschaad Dit instrument is voor binnenlaboratoriumgebruik enkel ontworpen Enkel onderdelen en delen keurden goed of leverden door Hoefer Inc kan voor het bedienen worden gebruikt handhavend en onderhouden van dit product gebruik Enkel een netvoeding die CE is markeerde of veiligheid die door een is gecertificeerd die nationaal is herkend testene laboratorium Het veiligheidsdeksel moet in plaats voor het verbinden van de netvoeding leidt tot een netvoeding zijn Doe alle netvoedingscontroles Uit en koppel los de machtleiding voor het verwijderen van het veiligheidsdeksel Circuleer enkel water of 50 50 water ethyleen glycol door de hitte exchanger zo ja uitrust Verbind de hitte exchanger naar een waterkraan of koelmiddelbron niet waar de waterdruk niet geregulariseerd is Stel Nooit antivriesmiddel of organische oplosmid delen in deel van
18. di membrana dimensione dei pori gel e il buffer di trasferimento utilizzato tutti contribu iscono alla trasferibilit delle macromolecole e dovrebbe essere tenuto in considerazione durante lo sviluppo di un protocollo Specie molecolari molto piccole per esempio passare rapidamente ma spesso non si legano come pure molecole di dimensioni maggiori grandi molecole impegnare in modo pit efficiente ma non eluire dal gel pit rapidamente La velocita di eluizione anche influenzato dalla dimensione dei pori del gel e Porientamento delle molecole Inoltre il grado in cui molecole si legano alla membrana amp influenzato dalle caratteristiche membrana come dimensione dei pori e il tipo e le caratteristiche tampone come tipo di sale di pH e la concentrazione e la presenza di detergenti guali sodio dodecil solfato SDS Le condizioni necessarie per eluizione efficace pu non coincidere con le condizioni ottimali per il legame Per trovare le condizioni ottimali per il trasferimento del campione bilanciare questi effetti se la frequenza di campionamento di eluizione lento un periodo pi lungo di trasfe rimento pu essere richiesto Nella nostra espe rienza i trasferimenti a bassa tensione per lunghi periodi non offrono molto miglioramento Se binding campione inadeguato provare diverse condizioni del tampone Per una rassegna completa vedere Gershoni e Palade 1983 Se il sistema tampone di trasferimento diverso
19. e disin serisce i piombi di potere prima di togliere il coper chio di sicurezza Circola solo l acqua o 50 50 glicole di acqua etilene attraverso lo scambiatore di calore se cos equipag giato Non collegare lo scambiatore di calore a un rubinetto di acqua o qualunque fonte di refriger ante dove la pressione di acqua sregolata Non introduce mai l antigelo o qualunque solvente organico in qualunque parte dello strumento solventi organici causeranno il danno irreparabile all unit Non opera con le temperature di tampone al di sopra del massimo ha specificato le descrizioni tecniche Il surriscaldamento causer il danno irreparabile all unit Dulezit Informace Czech Pokud by toto zarizeni je pouzito zp sobem ktery neni podle Hoefer Inc ochrana poskytovana na z klad za zen m e byt naru ena Tento n stroj je ur en pro vnit n pou it v laborato i pouze Pouze p slu enstv a sti schv len nebo poskyt nut ch Hoefer Inc mohou b t pou ity pro provoz dr bu a dr b tohoto v robku e zdroj nap jen pou vaj jen e je opat en ozna en m CE osv d ena nebo bezpe nost vnitrost tn uznan mi zku ebn mi laborato Bezpe nosti lid mus b t zavedena p ed p ipojen m nap jec zdroj nap jen vede k Turn ve ker nap jen kontroly vypnuto a odpojit p ed odb rem energie vede bezpe nostn v ko Rozeslat pouze voda nebo 50 50 voda
20. e la guantita di corrente nel sistema per controllare il surriscaldamento RNA di trasferimento del buffer 10X 10X Tris acetato EDTA TAE pH 8 4 1 litro Tris FW 121 1 400mM 484g Acido acetico glaciale 17 4 M 200 mM 11 4 ml EDTA soluzione 0 5 M pH 8 0 10mM 20 0 ml Acgua distillata a 1 0 litri Non regolare il pH Diluire a 1X prima dell uso per dare 40 mM Tris 20 mM acetato e 1 mM EDTA Questa diluizione viene comunemente usato ma diluizioni gi da 0 1X pu essere utilizzato qualora sia necessario diminuire la quantit di corrente nel sistema per controllare il surriscaldamento Current Protocols in Molecular Biology 1993 A 2 1 PSambrook J and Russell D W 2001 Molecular Cloning A Laboratory Manual A1 17 o p23 _ Bibliografia Alwine J C Kemp D J and Stark G R Method for detection of specific RNAs in agarose gels by tran sfer to DBM paper and hybridization with DNA probes Proc Natl Acad Sci USA 74 5350 5354 1977 Bittner M Kupferer P and Morris C F Electropho retic transfer of proteins and nucleic acids from slab gels to diazobenzyloxymethyl cellulose or nitrocellulose sheets Anal Biochem 102 459 471 1980 Bjerrum O J Larsen K and Heegaard N CRC Handbook of Immunoblotting of Proteins Vol 1 Section 7 CRC Press 1988 Burnette W N Western blotting electrophoretic transfer of proteins from sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gels
21. en tillgangen blyen till en kraft tillg ng Vander sig alla kraft tillg ng kontroller av och kopplar bort kraften blyen f re flytta s kerheten locket Cirkulerar bara vatten eller 50 50 vatten ethylene glycol genom varmen exchanger i sa utrustad fall Inte kopplar varmen exchanger till en vatten kran eller n got kylmedel k lla dar vattnet trycket ar unregulated Inf r aldrig kylv tska eller n got organiska l sningsmedel in i nagon del av instrumentet Organiskt l sningsmedel ska orsaka irreparable skada till enheten Anv nd inte med buffert temperaturer ver det h gsta angivna tekniska specifikationerna Overhettning skulle orsaka irreparabla skador p enheten o pvi Italiano X English E French 134 German A HH Spanish 134 Swedish A Rifiuti di apparecchiature elettriche ed elettroniche RAEE Questo simbolo indica che i rifiuti derivanti da apparec chiature elettriche ed elettroniche non devono essere smaltiti come rifiuti municipali indifferenziati e devono invece essere raccolti separatamente Per informazioni relative alle modalita di smantellamento delle apparecchiature fuori uso contattare un rappresentante autorizzato del fabbricante This symbol indicates that the waste of electrical and elec tronic eguipment must not be disposed as unsorted municipal waste and must be collected separately Please contact an authorized representative of the manufacturer for informat
22. erf gung gestellte Schutz verschlechtert werden Dieses Instrument wird fiir den Innenlaborge brauch nur daf r entworfen Nur Zus tze und Teile genehmigten oder lieferten durch Hoefer Inc kann f r das Funktionieren das Aufrechterhalten und die Wartung dieses Produk tes verwendet werden Verwenden Sie nur eine Energieversorgung die CE gekennzeichnet oder durch ein national anerkanntes Probelaboratorium bescheinigte Sicherheit ist Der Sicherheitsdeckel muss im Platz vor dem AnschlieBen der Energieversorgung sein f hrt zu einer Energieversorgung Alle Energieversorgungssteuerungen abdrehen und die Macht trennen f hrt vor dem Entfernen des Sicherheitsdeckels Nur Wasser oder 50 50 Glykol des Wassers Athylens durch den Warmeaustauscher wenn so ausgestattet in Umlauf setzen Verbinden Sie den W rmeaustauscher mit einem Wasserklaps oder jeder K hImittel Quelle nicht wo der Wasserdruck ungeregelt wird F hren Sie nie Frostschutzmittel oder jedes organische L sungsmittel in jeden Teil des Instru mentes ein Organische L sungsmittel werden nicht wiedergutzumachenden Schaden der Einheit verursachen Mit Puffertemperaturen Uber angegebenen technischen Spezifizierungen des Maximums nicht funktionieren Die Uberhitzung wird nicht wiedergutzumachenden Schaden der Einheit verursachen Viktig Informasjon Norwegian Hvis dette utstyret blir brukt i en m te ikke spesi fisert ved Hoefer Inc be
23. ethyleng lykolu prost ednictv m v m n k tepla je li to vybav ena Nemaj p ipojen v m n k tepla s vodn mi set epn nebo jak koli chladic kapaliny zdroje kde tlak vody je neregulo Nikdy zav st prost edek proti zamrznut nebo jak koli organick rozpou t dla do jak koli sti z tohoto n stroje Rozpustidl m zp sob nenapravi teln po kozen jednotka Nejsou provozov na s pufru teplot ch nad maxim ln stanovenou technick mi specifika cemi P eh t zp sob nenapraviteln po kozen jednotka Vigtig Information Danish Hvis dette udstyr bruges i en made ikke specifice ret ved Hoefer Inc den beskyttelse som er blevet forsynet af udstyret kan m ske sv kkes Dette instrument er designet for indendors labora toriumbrug bare Bare tilbeh r og del godkendede eller forsynede ved Hoefer Inc kan m ske bruges for drive funk tionsfejl og betjening dette produkt bruger Bare en str mforsyning der er CE markerede eller sikkerhed som er blevet attesteret af en som nationalt er blevet anerkendt prove laboratorium Sikkerhedlaget m v re pa plads for forbinding stromforsyningsblyet til en stromforsyning Drejer alle stromforsyningskontroller af og afbryder kraftblyet for fjerning sikkerhedlaget Cirkulerer bare vand eller 50 50 vand ethylene glykol gennem varmeveksleren i sa fald udrustet Forbind ikke varmeveksleren til en vandhane eller nogen kolemid
24. gamenti con le fascette Luogo non cadere un agitatore magnetico nel serba toio tampone Eliminazione di oggetti sulla piastra di allumina nella TE62 pu causare la piastra per rompere Impostare l unit su un agitatore magnetico Riempire il trasferimento del buffer per la linea Start livello di riempimento Questo richiede circa 3 8 litri Impostare l agitatore alla medio bassa che crea la circolazione del buffer senza forzare tampone attra verso cassette assemblate Nota Indossare sempre guanti quando si maneggiano le membrane per evitare di lasciare impronte su di loro Importante Fare molta attenzione a rimuovere le bolle d aria ad ogni passo perch la presenza di bolle d aria in particolare tra la membrana e il gel il trasferimen o blocchi Montare la cassetta di trasferimento o Pre wet nitrocellulosa o membrane di nylon con acgua distillata Prelavaggio PVDF o altre membrane idrofobe in metanolo Poi assorbire tutti i tipi di membrane in buffer di trasferimento per 2 5 minuti Aprire la cassetta rilasciando entrambe le linguette aggancio lungo il bordo opposto alle cerniere Posizionare la cassetta aperta in un vassoio pieno di almeno 3 cm di tampone di trasferimento Montare la pila di trasferimento in modo che le mole cole migreranno verso la membrana Per macromole cole cariche negativamente come gli acidi nucleici e la maggior parte delle pro
25. het instrument voor Organische oplosmiddelen zullen onherstelbare schade aan de eenheid veroorzaken Bedien niet met buffertemperaturen boven het maximum specificeerde technische specificaties Oververhittend zal onherstelbare schade aan de eenheid veroorzaken Important Information English If this equipment is used in a manner not speci fied by Hoefer Inc the protection provided by the equipment may be impaired This instrument is designed for indoor laboratory use only Only accessories and parts approved or supplied by Hoefer Inc may be used for operating main taining and servicing this product Only use a power supply that is CE marked or safety certified by a nationally recognized testing laboratory The safety lid must be in place before connecting the power supply leads to a power supply Turn all power supply controls off and disconnect the power leads before removing the safety lid Circulate only water or 50 50 water ethylene glycol through the heat exchanger if so equipped Do not connect the heat exchanger to a water tap or any coolant source where the water pressure is unregulated Never introduce antifreeze or any organic solvent into any part of the instrument Organic solvents will cause irreparable damage to the unit Do not operate with buffer temperatures above the maximum specified technical specifications Overheating will cause irreparable damage to the unit T
26. inare tutte le bolle d aria Ridurre la velocit di agitazione per evitare turbolenze Process una sola striscia o la membrana in ciascun vassoio o cassetta per evitare sovrapposizioni Utilizzare tampone con una forza inferiore onica Continuit elettrodo Check Durante il trasferimento un flusso continuo di gas viene rilasciato lungo l intera lunghezza degli elettrodi Se non si formano bolle tutta la lunghezza dell elettrodo sostituire l elettrodo Se cassette sono piegato quando vuoto sostituire Riempiendo eccessivamente la cassetta la fa a piegarsi vedi le istruzioni di montaggio raccomandate a pagina 6 Aggiungere altri fogli di carta assorbente per aumentare la distanza tra il pannello cassetta e il gel Fare attenzione a non overstuff la cassetta il gel deve essere tenuto saldamente e in modo uniforme tra le spugne ma non cos strettamente che si spremuto Aumentare l intensit del campo Aumentare periodo di trasferimento Prova raddoppio Non utilizzare la colorazione o il fissaggio agenti sul gel prima del trasferimento Utilizzare un gel sottile Ridurre la concentrazione di acrilamide gel Verificare che il pH tampone vicino al pH desiderato La maggior parte dei buffer non deve essere titolato fare tampone fresco Utilizzare 3 5 mM SDS 0 1 nel tampone di trasferimento Evitare di inserire metanolo nel buffer di trasferimento o ridurre la quantit al minimo assoluto Utilizzare il reagen
27. ion concerning the decommissioning of your eguipment Ce symbole indique que les d chets relatifs a l quipement lectrique et lectronique ne doivent pas tre jet s comme les ordures m nag res non tri es et doivent tre collect s s par ment Contactez un repr sentant agr du fabricant pour obte nir des informations sur la mise au rebut de votre quipement Dieses Symbol kennzeichnet elektrische und elektronische Ger te die nicht mit dem gew hnlichen unsortierten Haus mill entsorgt werden d rfen sondern separat behandelt werden m ssen Bitte nehmen Sie Kontakt mit einem auto risierten Beauftragten des Herstellers auf um Informationen hinsichtlich der Entsorgung Ihres Ger tes zu erhalten Este s mbolo indica que el equipo el ctrico y electr nico no debe tirarse con los desechos dom sticos y debe tratarse por separado Contacte con el representante local del fabricante para obtener m s informaci n sobre la forma de desechar el equipo Denna symbol anger att elektriska och elektroniska utrust ningar inte far avyttras som osorterat hushallsavfall och maste samlas in separat Var god kontakta en auktoriserad tillverkarrepresentant f r information angaende avyttring av utrustningen O pvii Transfer Unit funzione di elettroforesi e la descrizione Il Hoefer TE42 e TE62 unit di trasferimento di trasferire rapidamente proteine DNA RNA o fino a quattro poliacrilammide o gel di agaro sio su una me
28. mbrana Gel e membrane sono assemblati in una cassetta e sommersa in una vasca riempita con tampone di trasferimento Gli elettrodi nel serbatoio sono collegati ad una alimentazione esterna I TE62 contiene uno scambiatore di calore nella base Buffer amp separato dal refrigerante da un conducibilita termica piastrina di allumina Il TE42 non dotato di un sistema di raffredda mento tampone Se il raffreddamento amp neces sario uno scambiatore di calore immergibile possono essere ordinati separatamente Transphor modelli e caratteristiche built in scambiatore di compatibile con calore per raffreddare alimentazione esterna TEA2 Y TE62 Y Y Disimballaggio Scartare tutti i pacchetti con attenzione e comparare contenuti con le informazioni packing list o ordinare assicurandosi che tutti gli elementi arrivato Se una parte amp presente rivolgersi Hoefer Inc Controllare tutti i compo nenti per i danni che possono essersi verificati mentre l unit era in transito Se una parte risulta danneggiata contattate immediatamente Essere sicuri di mantenere tutto il materiale di imballaggio per richieste di risarcimento danni o per reimballaggio che si renderanno necessarie per restituire l unit Specificazioni Tutti i modelli vasca TE42 e TE62 Gel taglia Max potenza Max tensione Max amperage Max temperatura Buffer necessaria Condizioni operative ambientali Uso interno Umidita fino a Altit
29. nstallare raccordi a sgancio rapido con valvole Nota Anche se non richiesto di raffreddamento per il vostro sistema il buffer deve essere fatto circolare con un agitatore per evitare l esaurimento del buffer in corrispondenza degli elettrodi TE42 Abbassare lo scambiatore di calore da ordinare sepa ratamente oppure utilizzare lo scambiatore di calore fornito con l unit Gel Electrophoresis Hoefer SE600 se ne avete uno nella camera inferiore di montare le porte nelle tacche del cerchio Preparare due lunghe zze di 10 12 mm i d vinile o un tubo di silicone per il circuito di raffreddamento e passare a Collegare il tubo di seguito TE62 Prima Collegare il tubo alla valvola rossa riduzione della pressione tra l ingresso dell acqua e le porte di uscita e inserire estremita libera nella vasca da bagno o in altri contenitori o scarico di troppo pieno per catturare qualsiasi pressione Preparare due lunghezze di vinile 9 mm o tubo in silicone e vedere Collegare il tubo di seguito per le istruzioni sul montaggio per i porti dello scambiatore di calore nella base dell unita Collegare il tubo Far scorrere le fascette 4 in totale su ogni estremita di due lunghezze di tubo Attaccare un estremita di ciascun tratto di tubo a una porta scambiatore di calore Fissare le estremita libere di ciascun tratto di tubazione per porte bagno i circolatori uno per l ingresso e l altra alla presa Fissare i colle
30. nto alla sezione Electrotransfer Note per una discussione di membrane e tamponi Nota Per le connessioni facili e veloci installare Quick fit accoppiamento con valvole in linea Istruzioni per l uso Eseguire il trasferimento appena possibile dopo elettroforesi per minimizzare la diffusione banda Ogni passaggio descritto di seguito Preparare il tampone di Preparare un minimo di 5 litri di tampone di trasferimento adeguato Raffreddare il buffer prima dell uso se possibile Preparare l unit o Sciacquare il serbatoio di trasferimento e cassette con acqua distillata Raffreddamento attivo amp facoltativa ma fortemente raccomandato Se nessun raffreddamento attivo sara utilizzato passare al punto 3 Nota Collegare lo scambiatore di calore ad un bagno di circolatore come il RCB20 PLUS Circolare solo acqua o 50 50 di acqua glicole etilenico per evitare di danneggiare l unit Il circolatore non deve generare una pressione maggiore di 0 7 bar 10 psi sopra della pressione atmosferica Impostare la temperatura a 10 C o superiore se solo acqua circolante Se si utilizza 50 50 etilene glicole acqua la temperatura pu essere inferiore Avviare il bagno circolatore al tempo stesso il trasferimento Nota La valvola si apre quando la pressione nello scambiatore di calore superiore a 0 7 bar 10 psi sopra della pressione atmosferica Nota Per le connessioni facili e veloci i
31. o Sollevare il coperchio Utilizzare il gancio di plastica memorizzato nel supporto a lato della macchina per sollevare una cassetta quanto basta per poter afferrare e posizionarlo in un vassoio Aprire ogni cassetta con attenzione e rimuovere i gel e le membrane Contrassegnare ciascuna membrana e indicano il lato campione Sollevare membrana s con pinze smussate e aria secca o seguire le istruzioni che accompagnano il protocollo o Eliminare la carta assorbente ma riutilizzare le spugne Sciacquare immediatamente l apparecchio dopo l uso Vedi il capitolo Manutenzione e manutenzione della pagina successiva o pll Utilizzare lt 20 di metanolo alcool metilico in buffer di trasferimento l unica eccezione o pl2 Cura e manutenzione Pulizia e Non sterilizzare in autoclave o riscaldare qual siasi parte superiore a 45 C e Non esporre ad alcoli o solventi organici e Non utilizzare detergenti abrasivi e Se si utilizza reagenti radioattivi decon taminare l unit con un detergente come Conrad 70 o Decon 90 Sciacquare il serbatoio cassette e spugne con acqua distillata immediatamente dopo ogni utilizzo Attendere che Punit di asciugare completamente Periodicamente lavare con una soluzione diluita di un detergente delicato Quando si pulisce Punita lasciare i pannelli di elettrodi in posizione Se deve essere acceso non raccomandato fare molta attenzione pe
32. r non allungare o rompere il filo di platino tirare con cautela il pannello in avanti quanto basta per cancellare il labbro di tenuta lt 5 mm Con una mano afferrare il supporto spina a banana non la banana e con Paltra mano afferrare il pannello in un punto ben lontano dal filo Solle vare il pannello fuori Fig 3 Il modulo di alimentazione si trova sul pannello posteriore Importante Fusibili proteggere le attrezzature scollegando carichi troppo grandi per la progettazione del circuito dello strumento per cui imperativo che i fusibili vengono sostituiti solo con fusibili di identico punteggio II modulo di alimentazione di rete situata nella parte posteriore del coperchio potenza contiene due fusibili di ingresso 115 V modello T 3A 250 V 5x20 mm 230 V modello T 1 6A 250 V 5x20 mm Accensione del modulo inserire il cacciavite in questa tacca per aprire il coperchio inserire il cacciavite dietro la freccia per estrarre completa mente il cassetto interruttore di rete coperchio incernierato Attenzione Spegnere l alimentazione di rete spegnere e staccare il cavo di alimentazione prima di sostituire i fusibili di ingresso Aprire il vano fusibili inserendo un piccolo cacciavite a lama piatta nella fessura nella parte superiore del modulo di potenza Ruotare il cacciavite 1 8 di giro per sbloccare il coperchio quindi estrarre il vano cerniera che si apre Inse
33. re il coperchio di sicurezza Le cassette e pannelli di elettrodi sono colorati per abbinare i cavi del coperchio Orientare il coperchio in modo che la meta delle cassette grigio e il grigio volto pannello anodo l anodo o piombo rosso nero e la meta delle cassette e il nero volto pannello catodo il catodo o piombo nero o Utilizzare solo un alimentatore approvato come Hoefer PS2A200 PS200HC o PS300B Assicurarsi che l alimentazione spento e tutti i controlli sono impostati a zero Collegare il cavo rosso nel jack di uscita rosso e il filo nero nel jack di uscita nero Nella maggior parte dei sistemi il cavo rosso l anodo e il cavo nero il catodo Impostare l alimentatore Modalit di corrente costante raccomandato Se la modalit di tensione costante selezionata monitorare attentamente la corrente aumento della corrente di riscaldamento Joule aumenta Se la corrente supera 1 A diminuire la tensione Se disponi bile impostare il timer alimentazione per non pi di due ore Nota una buona idea per colorare il gel per determinare la completezza del trasferimento Nota Non conservare buffer utilizzato con serbatoio di trasferimento Freddo del tampone a 10 C prima di riutilizzarli Dopo il trasferimento stato completato o Girare le impostazioni di tensione e corrente a zero e spegnere l alimentazione Scollegare i cavi dalle prese di alimentazione O
34. rire il cacciavite sopra la freccia su una cassetta dei fusibili vedere la fine cassetta e lentamente scivolare completamente al di fuori del modulo o pl3 o e pl4 Estrarre il fusibile dalla sua cassetta e controllare Se l elemento fusibile bruciato o rotto sostituire il fusi bile con un tipo identico Se il fusibile sembra essere intatto controllare con un multimetro Una lettura di 1 Q o inferiore indica il fusibile ancora utilizzabile Dopo aver posizionato un fusibile buona nel cassetto far scorrere il modulo di potenza assicurandosi che la freccia sulla cassetta a destra nella stessa direzi one delle frecce guida sulla parte interna della porta della cella Ripetere i passaggi da 3 a 5 per la seconda cassetta o Chiudere il coperchio del vano fusibili e premere deli catamente nel modulo di potenza finch non siblocca Collegare il cavo di alimentazione all unit e accend ere l alimentazione di rete interruttore Risoluzione dei problemi problema soluzione Trasferimento incompleto Aree vuote sulla membrana Griglia su membrana Molecole non migrano di gel Rimuovere tutte le sacche d aria intrappolate nel gruppo impilato trasferimento assemblare lo stack mentre amp immerso in tampone di trasferimento premere delicatamente su ogni spugna come amp aggiunto alla pila e rotolare una pipetta di vetro o provetta sulla membrana e gel di elim
35. rke Tietoa Finnish Jos t t varusteita k ytet n tavassa ei m ritetty Hoefer Inc suojelu ehk isty varusteille saattaa olla avuton T m v line suunnitellaan sis laboratoriok yt lle vain Vain lis varusteet ja osat hyv ksyiv t tai toimitti Hoefer Inc oheen voi k ytt k ytt miselle valvoalle ja servicing t m tuote Vain k ytt k ytt j nnitett joka on CE merkitsi tai turvallisuus joka on todistanut aidoksi ohi joka on kansallisesti tunnustettnut testaaminen labo ratoriota Turvallisuuskansi t ytyy olla paikallaan ennen yhdist minen k ytt j nnitelyijyj k ytt j nnit teeseen Kiert kaikki k ytt j nnitevalvonnat ja irrottaa valtalyijyt ennen poistaminen turvallisuuskantta Kiert vain vesi tai 50 50 vesi ethylene glycol siin tapauksessa varustetun l mm nvaihtimen l pi l yhdist l mm nvaihdinta vesinapautuk seen eik j hdytysnestel hteeseen miss vesi paine on unregulated o piii Pakkasneste eik orgaaninen liuotin v lineen osassa ei esitele Koskaan Orgaaniset liuottimet aiheuttavat korvaamattoman vahingon yksikk n Ei k yt puskuria yll olevia l mp tiloja enint n m ritetyill teknisill t smennyksill Ylikuumen eminen aiheuttaa korvaamattoman vahingon yksikk n Information Importante French Si cet quipement est utilis dans une mani re pas sp cifi par Hoefer Inc la prote
36. s from gels to DBM paper and detection with anti sera a method for studying antibody specificity and structure Proc Natl Acad Sci USA 76 3116 1979 Sambrook J and Russell D W Molecular Cloning A Laboratory Manual Cold Spring Harbor Labora tory Press A1 17 2001 Southern E M Detection of specific sequences among DNA fragments separated by gel electrophoresis J Molec Biol 98 3 503 517 1975 Stellway E J and Dahlberg A E Electrophoretic tran sfer of DNA RNA and protein onto DBM paper Nucleic Acids Res 8 299 1980 Symington J Green M and Brackmann K Immu nological detection of proteins after electrophore tic transfer from gels to diazo paper analysis of adenovirus encoded proteins Proc Natl Acad Sci USA 78 177 181 1981 Towbin H Staehelin T and Gordon J Electro phoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets procedure and some applications Proc Natl Acad Sci USA 76 4350 4354 1979 p25 Informazioni per l ordine prodotto quantit codice TE42 Transfer Unit elettroforesi 1 TE42 Include coperchio di sicurezza con i cavi di alimentazione 2 cassette di gel 4 spugne schiuma di 3 mm di spessore 2 spugne schiuma di 6 mm di spessore 25 fogli di carta assorbente TE62 raffreddato Elettroforesi Transfer Unit 1 TE62 Include coperchio di sicurezza con i cavi di alimentazione 4 cassette gel 8 spugne schiuma di
37. skyttelsen som ha blitt git av utstyret kan bli svekket Dette instrumentet er utformet for innend rs labo ratoriumbruk bare Bare tilbehor og deler godkjente eller forsynte ved Hoefer Inc kan bli brukt for drive vedlikeholde og betjene dette produktet bruker Bare en kraftforsyning som er CE merket eller sikkerhet som ha blitt sertifisert av et som nasjonalt ha blitt anerkjent prover laboratorium Sikkerheten lokket m v re p plass for forbinding o piv kraftforsyningene blyene til en kraftforsyning Vender all kraftforsyningsstyring av og frakopler kreftene blyene for fjerning sikkerheten lokket Sirkulerer bare vann eller 50 50 vann ethylene glykol gjennom oppvarmingen veksleren i s fall utstyrer Ikke forbind oppvarmingen veksleren til en vanntapp eller noe kjalemiddelkilde hvor vannet trykket er unregulated Introduserer Aldri antifreeze eller noe organisk losemiddel inn i noe del av instrumentet Organi ske losemiddler vil for rsake irreparabel skade p enheten Driver med buffertemperaturer over maksimum ikke spesifiserte teknisk spesifikasjoner overop pheting vil for rsake irreparabel skade p enheten Wazne Informacje Polish Jezeli ten sprzet jest wykorzystywany w spos b nie okreslone przez Hoefer Inc do ochrony przewid zianej przez urz dzenie moze zosta obni ony Instrument ten jest przeznaczony do uzytku w laboratoriach kryty tylko Tylko akcesori w i
38. te di grado sostanze chimiche Aumentare la durata del tempo sono depurinated Southern blot Aumentare la carica netta sulla proteina modificando ad un buffer di trasferimento con un pH diverso PH inferiore lt 6 7 aumenta la carica positiva di proteine pH superiore gt 6 7 aumenta la carica negativa sulle proteine epl5 problema soluzione Modelli di banda diffusa Transfer immediatamente dopo la separazione elettroforetica Se equilibrante prima del trasferimento ridurre o eliminare il tempo di equilibrio o spostare il gel alla sala freddo durante equilibrio Se buffer di trasferimento contiene metanolo gt 10 equilibrare il gel in tampone di trasferimento per 30 minuti per consentire a compattare prima di assemblare la pila Nota Poich il metanolo provoca il gel a ridursi leggermente molecole di grandi dimensioni possono migrare pi lentamente Prelevare il gel viene tenuto fermamente contro la membrana e che esso non si sposti quando avviene il contatto Se riscaldamento eccesso si verifica durante il trasferimento abbas sare la temperatura del fluido di raffreddamento nello scambiatore di calore Verificare che la superficie preferita legame della membrana even tuale contatta il gel Binding inefficiente alla membrana Parametri chimico Fissare o reticolare la molecola sulla membrana secondo le esigenze del acidi nucleici proteine o di tipo a membrana Preparare il trasferimento tampone proteica senza
39. teine costruire la pila sulla met grigio della cassetta e poi posizionare il coper chio in modo che il lato grigio affronta il cavo rosso o anodo Mettere una 3 mm di spessore spugna schiuma sulla cassetta aperto sommersa e premere delicatamente fino a tutta l aria viene espulsa Mettere un foglio di carta assorbente sulla spugna e quindi posizionare la membrana sulla carta assorbente Porre il gel che contiene un campione che stato separato elettro foreticamente e equilibrata se richiesto con tampone di trasferimento sulla membrana Delicatamente roto lare una pipetta di vetro o provetta sul gel di espellere aria intrappolata tra la membrana e il gel Coprire il gel con un foglio di carta assorbente e quindi posizionare una spugna dello spessore adeguato vedi schema sottostante ancora una volta una leggera pressione per espellere l aria intrappolata Fig 2 Trasferire gruppo impilato Lo stack amp orientato in modo che le molecole caricate nega tivamente migrare verso anodo grigio Importante Non overstuff a cassetta Nota Prova a mettere il gel corret tamente la prima volta perch le proteine pu iniziare a trasferire immediatamente volta che il trasferimento iniziato spostando il gel alterare i risultati o causare bande ombra sul blot N ZS O A A 4 O O E NY ZS E 2 E I SZ ZS O E HA W O O E A N 5 o Chiudere la cassetta e premere leggermente per bloc c
40. to unmodified nitrocellulose and radiographic detection with antibody and radioiodinated protein A Anal Biochem 112 195 1981 Gallagher S Winston S E Fuller S A and Hurrell J G R Immunoblotting and Immunodetection In Current Protocols in Molecular Biology 10 8 1 10 8 17 Greene Publishing and Wiley Interscience NY 1993 Gershoni J M Davis EE and Palade G E Protein blotting in uniform or gradient electric fields Anal Biochem 144 32 40 1985 Gershoni J M and Palade G E Electrophoretic tran sfer of proteins from sodium dodecyl sulfate polya crylamide gels to a positively charged membrane filter Anal Biochem 124 396 405 1982 Gershoni J M and Palade G E Protein Blotting Principles and Applications Anal Biochem 131 1 15 1983 Gibson W Protease facilitated transfer of high mole cular weight proteins during electrotransfer to nitrocellulose Anal Biochem 118 1 1981 o p24 Lin W and Kasamatsu H On the electrotransfer of polypeptides from gels to nitrocellulose membra nes Anal Biochem 128 302 311 1983 Matsudaira P Sequence from Picomole Quantities of Proteins Electroblotted onto Polyvinylidene Difluo ride Membranes J Biol Chem 262 10035 1987 Ohmsted J B Affinity purification of antibodies from diazotized paper blots of heterogeneous protein samples J Biol Chem 256 11955 1981 Renart Reiser J and Stark G R Transfer of protein
41. uale utente Italiano Hoefer TE42 e TE62 Unita di trasferimento di elettroforesi mv TE42 IM Italian Rev G0 07 12 Atto e fe r Indice Informazioni Importanti pg ii Rifiuti di apparecchiature elettriche ed elettroniche RAEE sssecccccsesnsisssorsaensdeceesssanaesas vii Transfer Unit funzione di elettroforesi e la descrizione msn 1 SPSCIHIGAZ ON sicsccssacaticntavacsacacaaecedacsadadavecessacacadecess 2 Istruzioni per MUSO arca 4 Gura Manutenzione 12 Accensione del MOdUlO sesi n 13 Risoluzione dei problemi eee 15 Electrotransfer note iscicsscccesssesesseesccttsessasadeonsennssne 17 Bibliografia ainia 24 Informazioni per V ordine eee 26 Informazioni Importanti Italiano Se quest apparecchiatura usata in un modo specificato da Hoefer Inc la protezione fornito dall apparecchiatura potrebbe essere indebolita Questo strumento disegnato per l uso di labora torio interno solo Solo gli accessori e le parti hanno approvato o hanno fornito da Hoefer Inc potrebbe essere usato per operare per mantenere e per revisionare questo prodotto usa Solo un alimentatore che CE ha marcato o la sicurezza certificato da un nazionalmente ricon osciuto testando il laboratorio Il coperchio di sicurezza deve essere nel luogo prima di collegare i piombi di alimentatore a un alimentatore Spegne tutto i controlli di alimentatore
42. udine fino a Categoria di installazione Grado di inquinamento Dimensioni Lx Px A Certificazioni di prodotto fino a quattro gel 15x21 cm o fino a sedici 7x10 cm mini gel 200 W 100 V 2A 45 C 4 5 litri a seconda del numero di cassette in luogo 4 40 C 80 2000 m Il 2 TE42 28x 13x 30 5 cm TE62 28x 16 5x 32 cm EN61010 1 UL3101 1 CSA C22 2 1010 1 CE Questa dichiarazione di conformit valida solo per lo strumento quando e utilizzato in ambienti di laboratorio e utilizzati cos come forniti dal Hoefer Inc salvo alterazioni descritte nel manuale d uso e e collegato ad altri marcati CE strumenti o prodotti raccomandati o approvati da Hoefer Inc Fig 1 Transphor componenti TE42 e TE62 principali coperchio color coded Inclusi ma non mostrato TE42 Cassette Gel 2 Spugne schiuma 6 mm di spessore 2 Spugne schiuma 3 mm di spessore 4 Carta assorbente fogli 25 Livelli dei serbatoi di riempimento TE62 colorati Cassette Gel 4 pannelli di Spugne schiuma 6 mm di elettrodi 2 spessore 4 Spugne schiuma 3 mm di spessore 8 Carta assorbente fogli 25 Nota Uno scambiatore di calore immergibile Cifra nr TE47 possono essere ordinati separatamente per la TE42 TE62 valvola di sicurezza del liquido N di raffreddamento e cassette gancio le porte del liguido di e supporto raffreddamento 2 gt Nota Fare riferime
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