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Lambda Bio/Bio+ Manuale d`uso

1. Computer Bluetooth 13 Premere OK per salvare le impostazioni Accessori 115 Lambda Bio XLS Print Utility Lambda Bio XLS Print Utility comprende due applicazioni software Lambda Bio XLS Report Utility un applicazione che funziona separatamente sotto Windows XP e che consente il collegamento tra un cavo USB a un PC su cui installato il software dati che si trovano sul PC possono essere stampati direttamente su qualsiasi stampante collegata a quel PC o salvati Report Utility pu salvare i dati i possono essere salvati come file grafici Enhanced Metafile emf file di dati delimitati da virgole csv file di dati delimitati da tabulazioni txt o file Excel o nel formato dell utilit di stampa pvc per la visualizzazione con Lambda Bio XLS Report Viewer NOTA disponibile anche una stampante interna per lo strumento che viene fornita preinstallata nello strumento o come accessorio opzionale L7110230 Se disponibile questa opzione per ulteriori informazioni al riguardo consultare il manuale d uso dell utilit di stampa del Lambda Bio XLS Lambda Bio XLS Print Utility User s Guide L6050015 sul CD dei manuali d uso del Lambda Bio XLS Lambda Bio XLS User Manuals CD L6050018 116 Lambda Bio Bio Manuale d uso Manutenzione 118 Lambda Bio Bio Manuale d uso Manutenzione generale Modifiche e interventi di assistenza non autorizzati Non tentare di riparare o modificare
2. L intervallo disponibile compreso tra 0 01 e 9999 Immettere il volume del Diluente utilizzando i tasti numerici L intervallo disponibile compreso tra 0 01 e 9999 Premere OK D per calcolare il fattore di diluizione e ritornare alla schermata Parametri Selezionare On o Off per la correzione di Sfondo a 320 nm utilizzando i tasti freccia sinistra e destra quindi premere la freccia gi Selezionare le Unit di misura utilizzando i tasti freccia sinistra e destra quindi premere la freccia gi Le opzioni sono pg ml ng pl e pg pl Immettere il Fattore usando i tasti numerici L intervallo disponibile compreso tra 0 01 e 9999 12 Premere OK D per avviare le misurazioni Verr visualizzata la schermata dei risultati DNA A230 A260 Campione A280 A320 Concentrazione A260 A280 A260 A230 0A 13 Inserire il campione di riferimento e premere Ea Questa misurazione di riferimento sar utilizzata per tutti i campioni successivi finch sar ripetuta 14 Inserire il primo campione e premere gt Verr misurata l assorbanza a 260 nm e 280 nm corretta dal valore della lunghezza d onda di sfondo 320 nm se selezionata e viene calcolato il rapporto tra i due valori Metodi dello strumento di assorbanza La concentrazione viene calcolata in base all assorbanza a 260 nm A230 A260 0 1894 0 390 A Campione 1 A280 A320 0 090 A 0 00
3. Lo strumento si regola automaticamente in base alla tensione di esercizio corretta gt Collegare lo strumento alla presa elettrica con il cavo e l alimentatore forniti adeguati all area geografica Usare il cavo e l alimentatore forniti in dotazione con lo strumento NOTA se lo strumento fosse appena stato disimballato o fosse stato conservato in un ambiente freddo occorrerebbe attendere 2 3 ore affinch raggiunga l equilibrio termico nel laboratorio prima dell accensione In questo modo si evita un errore di calibrazione causato dalla formazione di condensa interna Connessione cavo USB Ingresso corrente di linea Figura 1 Connessioni posteriori sullo strumento Lambda Bio XLS L interruttore di accensione spegnimento si trova in altro a sinistra sulla tastiera 18 Lambda Bio Bio Manuale d uso Uso dello strumento 20 Lambda Bio Bio Manuale d uso Panoramica dello strumento Lo strumento Lambda Bio Bio uno spettrometro UV Visible facile da usare dotato di un rivelatore CCD 1024 pixel Per accedere alle cartelle e alle funzioni disponibili sullo strumento Lambda Bio Bio spostarsi nel display utilizzando i tasti alfanumerici e le frecce di spostamento sulla tastiera Pannello di visualizzazione Accensione spegni mento Opzioni di visualizzazion RE sualizzazione Tasti alfanumerici Tasti freccia Annulla Indietro Arresta Esegui OK Avanti Scansione 0A 100 T riferimento scansion
4. 5 too OD 600 Figura 3 Pagina iniziale del Lambda Bio Uso dello strumento 23 Uso del software La pagina iniziale contiene un elenco di cartelle e funzioni o metodi Ciascuna voce dell elenco numerata e per aprirla usare il numero corrispondente sulla tastiera L apertura di una cartella porta ad un altra schermata contenente ulteriori opzioni L apertura di un metodo visualizza la schermata dei parametri che consente di impostare i parametri necessari prima di utilizzare il metodo per effettuare le analisi Concentrazione Parametri Lunghezza d onda 260 nm Modalit Premere OK per Fattore salvare le l Premere Annulla per impostazioni cancellare le selezioni del metodo e ritornare alla i e schermata precedente passare alla schermata successiva BO nnula Figura 4 Contenuto di una schermata tipica relativa ai parametri Spostamento gt Per spostarsi tra le impostazioni usare le frecce su e gi Immissione dei parametri gt Per immettere i parametri usare i tasti numerici OPPURE Se la casella contenesse il simbolo E immettere un valore o premere il tasto opzioni e scegliere un opzione nella schermata successiva OPPURE Se la casella contenesse il simbolo della freccia utilizzare i tasti freccia sinistra e destra O per selezionare l impostazione necessaria 24 Lambda Bio Bio Manuale d uso Misurazioni Dopo aver immesso i parametri premere OK D
5. Fattore di diluzione 1 000 12 Premere OK D per avviare le misurazioni Verr visualizzata la schermata dei risultati Oligo A230 Campione A260 A280 A320 Concentrazione A260 A280 A260 A230 84 13 14 Lambda Bio Bio Manuale d uso 0A gra Inserire il campione di riferimento e premere MH Questa misurazione di riferimento sar utilizzata per tutti i campioni successivi finch non sar ripetuta Inserire il primo campione e premere gt A230 A260 0 189 A 0 390 A Campione 1 A280 0 140 A A320 0 010 A A260 A280 2 785 Concentrazione 12 54 A260 A230 2 069 Verr misurata l assorbanza a 260 nm e 280 nm corretta dal valore della lunghezza d onda di sfondo 320 nm se selezionata e viene calcolato il rapporto tra i due valori di assorbanza La concentrazione viene calcolata in base all assorbanza a 260 nm Ripetere il punto 14 per ciascun campione Metodi dello strumento 85 gt Premere per visualizzare le opzioni disponibili che possibile selezionare tramite i tasti numerici Parametri Viene visualizzata nuovamente la schermata Parametri Stampa Stampa tramite il metodo selezionato Grafico Attiva e disattiva la visualizzazione del grafico Il grafico mostra uno spettro dell intervallo compreso tr
6. utilizzata per tutti i campioni successivi finch Sar ripetuta 8 Inserire il primo campione e premere gt l Vengono visualizzati uno spettro e una tabella dei valori di assorbanza trasmissione percentuale in corrispondenza di ciascun picco Utilizzare i tasti freccia sinistra e destra per spostare il cursore lungo il grafico Quando si raggiunge un picco nella parte superiore della schermata vengono visualizzate l altezza e la larghezza del picco Per ingrandire la scala della lunghezza d onda usare il tasto freccia su Questo ridimensiona automaticamente l asse assorbanza trasmissione a seconda dell opzione Scalagrafico che rimane inalterato per le misurazioni successive Per ridurre la visualizzazione usare il tasto freccia gi 400 450 500 550 600 650 700 Spettro Altezza 0 4694 Larghezza 13 0nm f 0 5 i 0 4 i I 0 3 i I 0 2 Lai i 01 r I A 434 521 626 A 0 197 0 463 0 559 Campione 1 i i a 521nm A 0 463 A 50 Lambda Bio Bio Manuale d uso 9 Ripetere il punto 8 per ciascun campione gt Premere per visualizzare le opzioni disponibili che possibile selezionare tramite i tasti numerici Parametri Viene visualizzata nuovamente la schermata Parametri 1 2 Stampa i risultati tramite il metodo selezionato Passa dalla modalit Assorbanza alla modalit Trasmissione e viceversa Rilevamento Verr visualizzata la schermata Rilevamento picchi con le rel
7. L intervallo disponibile compreso tra 1 00 e 9999 OPPURE Se non si conoscesse il Fattore di diluizione premere Verr visualizzata la schermata Fattore di diluizione Fattore di diluzione 6 Immettere il Volume del campione utilizzando i tasti numerici quindi premere il tasto freccia gi L intervallo disponibile compreso tra 0 01 e 9999 7 Immettere il volume del Diluente utilizzando i tasti numerici L intervallo disponibile compreso tra 0 01 e 9999 8 Premere OK D per calcolare il fattore di diluizione e ritornare alla schermata Parametri Metodi dello strumento 83 9 Selezionare On o Off per la correzione di Sfondo a 320 nm utilizzando i tasti freccia sinistra e destra quindi premere la freccia gi 10 Selezionare le Unit di misura utilizzando i tasti freccia sinistra e destra quindi premere la freccia gi Le opzioni sono pg ml ng pl pg pl e pmol pl 11 Se le unit fossero ug ml ng pl ug pI immettere il Fattore utilizzando i tasti numerici L intervallo disponibile compreso tra 0 01 e 9999 OPPURE Se le unit fossero pmol pl il fattore si trasformerebbe in una tabella di selezione contenente i rapporti delle quattro basi nella struttura Immettere le proporzioni delle basi A C G e T presenti utilizzando i tasti numerici e spostarsi tra le caselle con i tasti freccia su e gi L intervallo disponibile compreso tra 0 e 9999 Oligo Parametri 10 mm
8. pai cineri Lunghezza d onda M Rapporto di e SR multipla ri Z assorbanza om Spettro ae Concentrazione e PA Curva Standard Metodi dello strumento 65 2 Premere 6 per aprire il metodo Dati cinetici Verr visualizzata la schermata Dati cinetici Parametri 1 Dati cinetici Parametri 1 1 Minuto 10 Secondi HO fnnulla 3 Impostare la Lunghezza d onda utilizzando i tasti numerici o i tasti freccia sinistra e destra quindi premere il tasto freccia gi Il valore predefinito 340 nm 4 Prima di effettuare le misurazioni immettere il Ritardo in secondi quindi premere il tasto freccia gi possibile immettere un valore massimo di 600 secondi 10 minuti 5 Immettere il tempo in minuti nell arco del quale vengono effettuate le misurazioni Durata quindi premere il tasto freccia gi possibile immettere un valore massimo di 60 minuti 6 Immettere l Intervallo in secondi tra le misurazioni utilizzando i tasti freccia sinistra e destra quindi premere il tasto freccia gi Le opzioni sono 1 2 5 10 15 20 30 o 60 secondi 7 Premere Avanti gt Verr visualizzata la schermata Dati cinetici Parametri 2 Dati cinetici Parametri 2 Modalit Delta A d 1 000 P OK HD indietro 66 Lambda Bio Bio Manuale d uso 8 Selezionare la Modalit di misurazione utilizzando i tasti freccia sinistra e destra quindi premere
9. Lambda Bio 5 Se si conoscesse il Fattore di diluizione immetterlo utilizzando i tasti numerici quindi premere il tasto freccia gi e passare al punto 9 L intervallo disponibile compreso tra 1 00 e 9999 OPPURE Se non si conoscesse il fattore di diluizione premere Opzioni per visualizzare la schermata Fattore di diluizione 10 11 12 13 Metodi dello strumento 89 Fattore di diluzione Immettere il Volume del campione utilizzando i tasti numerici quindi premere il tasto freccia gi L intervallo disponibile compreso tra 0 01 e 9999 Immettere il volume del Diluente utilizzando i tasti numerici L intervallo disponibile compreso tra 0 01 e 9999 Premere OK D per calcolare il fattore di diluizione e ritornare alla schermata Parametri Selezionare se utilizzare ON o meno OFF la correzione di Sfondo a 320 nm utilizzando i tasti freccia sinistra e destra quindi premere la freccia gi Immettere il Fattore A260 nm utilizzando i tasti numerici quindi premere il tasto freccia gi L intervallo disponibile compreso tra 0 e 9999 Immettere il Fattore A280 nm utilizzando i tasti numerici quindi premere il tasto freccia gi L intervallo disponibile compreso tra 1 00 e 9999 Selezionare le Unit di misura utilizzando i tasti freccia destra e sinistra Le opzioni sono pg ml ng pl e pg pl Premere OK D per avviare le misurazioni 90 Lambda Bio Bio Manuale d us
10. Lista Off La OK 2 Utilizzando i tasti freccia destra e sinistra scegliere se i Giochi debbano essere disponibili o meno Le opzioni sono S o No 3 Definire il Tema il layout delle cartelle sullo schermo Le opzioni sono Griglia o Lista 4 Selezionare la modalit Cronologia utilizzando i tasti freccia destra e sinistra Se si seleziona Off lo strumento non ricorda i parametri a meno che non vengano ripristinati come un nuovo metodo L impostazione predefinita Off 5 Scegliere se usare o meno la modalit di Standby automatico dopo periodi definiti Le opzioni sono 1 ora 2 ore Di notte o Off 6 Premere OK D per salvare le impostazioni e ritornare alla cartella Utilit Uso dello strumento 39 Contrasto La temperatura ambiente pu influire sul display La funzione di contrasto pu ottimizzare la visualizzazione in base alle condizioni locali Eseguire la procedura descritta di seguito 1 Premere 5 per selezionare Contrasto Verr visualizzata la schermata Contrasto Contrasto 2 Regolare la Luminosit utilizzando i tasti freccia destra e sinistra quindi premere il tasto freccia gi 3 Regolare il Contrasto utilizzando i tasti freccia sinistra e destra 4 Premere OK per salvare le impostazioni e ritornare alla cartella Utilit Informazioni su La schermata Informazioni su visualizza il numero di serie e la versione dello strumento 1 Premere 6 per selezio
11. Metodi 1 9 quindi premere il tasto freccia gi e immettere un nome per il metodo Premere Salva per salvare il metodo Stampa automatica Attiva e disattiva la stampa automatica gt Per chiudere le opzioni del metodo premere o O o attendere 20 secondi gt AI termine di tutte le misurazioni dei campioni premere O per ritornare alla cartella Proteina 98 Lambda Bio Bio Manuale d uso Misurazione dell assorbanza e della concentrazione NOTA questo metodo disponibile solo sul Lambda Bio Il metodo di misurazione Assorbanza Concentrazione ha due funzioni eseguire misurazioni dell assorbanza A sui campioni tramite la misurazione della quantit di luce che attraversa un campione in relazione a un riferimento che pu essere l aria eseguire semplici misurazioni della concentrazione sui campioni tramite la misurazione della quantit di luce che attraversa un campione in relazione a un riferimento che pu essere l aria La concentrazione si ottiene moltiplicando l assorbanza misurata a una lunghezza d onda specifica per un fattore II fattore pu essere noto in anticipo o pu essere calcolato dallo strumento misurando gli standard di concentrazione nota Eseguire la procedura descritta di seguito I 2 Premere 4 per selezionare il metodo Assorbanza Concentrazione Verr visualizzata la schermata Assorbanza Concentrazione Parametri Assorbanza Concentrazione Parametri Lungh
12. cartella Applicazioni 64 Lambda Bio Bio Manuale d uso Dati cinetici NOTA questo metodo disponibile solo sul Lambda Bio Utilizzando il metodo Dati cinetici possibile condurre tempestivamente studi cinetici dove la variazione in assorbanza deve essere seguita in funzione del tempo a una lunghezza d onda fissa I kit di test di reagenti vengono regolarmente utilizzati per la determinazione enzimatica dei composti negli alimenti nelle bevande e nei laboratori clinici misurando la conversione NAD NADH a 340 nm La variazione in assorbanza nell arco di un intervallo di tempo specificato pu essere usata per fornire informazioni utili quando si applica un fattore appropriato definito nel protocollo dei kit di reagenti Sarebbe possibile calcolare la velocit di reazione e l attivit enzimatica se il fattore usato tebnesse conto della differenza di assorbanza in funzione del tempo anzich solo della differenza in assorbanza Per questa ragione vengono visualizzati la variazione in assorbanza al minuto AA min la concentrazione AA min x fattore e il coefficiente di correlazione calcolato in base a una corrispondenza ottimale dei punti di dati che possono non essere rilevanti per esperimenti cinetici semplici Di seguito descritta la procedura per definire un nuovo metodo 1 Premere 1 per aprire la cartella Applicazioni Verr visualizzata la schermata Applicazioni Applicazioni fire donda D
13. codice di accesso utilizzando i tasti numerici o i tasti freccia sinistra e destra 6 Premere Blocco D per bloccare il metodo Metodo di sblocco 1 Aprire la cartella Metodi appropriata 2 Premere per visualizzare le opzioni disponibili 3 Premere 3 per selezionare Metodo di sblocco Metodo di sblocco Nome del metodo 4 Lunghezza d onda singola Codice di accesso 1000 Be Sblocca E nnula 4 Selezionare il metodo da sbloccare utilizzando i tasti freccia sinistra e destra quindi premere il tasto freccia gi 5 Immettere un codice di accesso utilizzando i tasti numerici o i tasti freccia sinistra e destra 6 Premere Sblocca G per sbloccare il metodo Uso dello strumento 33 Metodi dello strumento Lambda Bio Bio Di seguito sono riportati i metodi predefiniti disponibili sullo strumento Lambda Bio Bio Applicazioni solo Lambda Bio e Lunghezza d onda singola e Lunghezza d onda multipla e Spettro e Concentrazione e Curva Standard e Daticinetici e Rapporto di assorbanza Acidi nucleici DNA RNA e Oligo Proteina e UV proteina BCA Bradford Lowry Biuret OD 600 Assorbanza e concentrazione solo Lambda Bio 34 Lambda Bio Bio Manuale d uso Lambda Bio Spectrometer Pura O ea Proteina O Pny fana o neoa ch Oligo O jums O xP Assorbanza Concentrazione e chi OD 800 8282 1 0 0 Figura 8 Pagina iniz
14. dalla legge PerkinElmer un marchio depositato di PerkinElmer Inc Sommario Introduzione i i iziiiiissrzrzitiiniziara n iena aandlaniniananaianadiniaienaiani assia sihan diasaan 5 Informazioni su questo manuale i 6 Convenzioni utilizzate in questo manuale 7 Note messaggi di attenzione e avvertenze 7 Informazioni sulla sicurezza rrrrr irene eee einen 9 Informazioni generali sulla SICUFEZza iii 10 Certificati di decontaminazione EEEa 11 Prodotti chimici e rie niet 11 Vapori tossici sata pali eretica 11 Smaltimento dei rifiuti 11 Apparecchiature protettive personali 12 UtilizZatore finale atan eea ae aa a eee E E Eia EEAS eaa EESE 12 Apertura della confezione e installazione 13 Installazione dello strumento 20rrrrsrierreniiie reni 15 Apertura della confezione kitt t ttrt t ttin trt n tn EEE EEEEEEEEEEEEE EEEE EE EE Ena 16 Collegamento all alimentazione elettrica di linea 17 Uso dello strumento 2 rrrrsrereee iii ieri einen 19 Panoramica dello Strumento 20 Accensione dello strumento tsitis intek nnn i EEEE EEE EE AEAEE EEEE EnEn 22 Uso del SoftWare iniaa aiaa a Giara 23 Met di e preferiti sie noina ina alia iaia 27 Opzioni cartella a dieta LL aL 27 Opzioni MECRO mranani aa ar ii aE aE iaia 31 Metodi dello strumento Lambda Bio Bio i 33 Utilitiata nia nen aan AE 35 Datas
15. l OD 600 previsto L OD 600 previsto viene determinato contando il numero di cellule con una tecnica alternativa ad esempio metodo dei vetrini per microscopi ed effettuando la conversione in OD 600 tenendo conto della regola generale che 1 OD 600 8 x 10 cellule ml per E Coli Lo strumento Lambda Bio Bio dotato di un ottica molto pi piccola rispetto agli spettrofotometri pi convenzionali e una maggiore quantit di luce viene trasmessa attraverso il rivelatore producendo valori OD 600 inferiori rispetto a quelli previsti risultati ottenuti confrontando l OD 600 misurato con l OD 600 previsto vedere sopra indica che necessario un fattore di correzione di 2 0 per rendere i dati paragonabili a quelli di strumenti pi grandi questo fattore incluso come valore predefinito nell impostazione ma pu essere modificato Si raccomanda l uso di celle monouso con cammino ottico di 10 mm per la misurazione della densit ottica di colture cellulari Aggiungere glicerolo al campione per evitare la sedimentazione troppo rapida della sospensione con un OD che cambia nel tempo Eseguire la procedura descritta di seguito 1 Premere 2 per aprire la cartella Scienze biologiche solo Lambda Bio 2 Se lo strumento fosse un Lambda Bio premere 5 per aprire la modalit OD 600 OPPURE Se lo strumento fosse un Lambda Bio premere 3 per selezionare la modalit OD 600 104 Lambda Bio Bio Manuale d uso Verr visualizzata la sc
16. le selezioni premere D per accettarle Aggiungi picco Elimina picco Aggiungi picco aggiunge manualmente una posizione di picco alla tabella dei picchi nella schermata dei risultati nella posizione stabilita dal cursore La voce nella tabella dei picchi viene quindi visualizzata con una colorazione inversa per distinguere tra picchi definiti dall utente e picchi rilevati automaticamente Se il cursore venisse posizionato su un picco definito dall utente nella parte superiore della scansione comparirebbe la dicitura Picco definito dall utente L opzione diventa quindi Elimina picco per consentire di rimuovere il picco Picco definito dall utente 600 650 700 L Campione 1 A 637nm A 0 230 A NOTA se a questo punto si salva un metodo vengono salvate queste lunghezze d onda definite dall utente pertanto ogni volta che si utilizza il metodo i valori di assorbanza vengono riportati a queste lunghezze d onda 52 Lambda Bio Bio Manuale d uso Scala grafico Numero campione Verr visualizzata la schermata Scala grafico con le relative impostazioni Questa schermata consente di impostare un grafico definito stabilendo i limiti nell asse xo yo in entrambi Off xi 400 nm T 2 500 nm los OK HO fnnulla Modalit zoom questa opzione definisce il funzionamento dei tasti di zoom tasti freccia su e gi La modalit asse x ingrandisce il disp
17. per lanciare le analisi Verr visualizzata la schermata dei risultati per il metodo Lunghezza d onda singola Campione 625 nm Risultato Figura 5 Schermata dei risultati tipica 0A 1 Inserire il campione di riferimento nel supporto dei campioni e premere 0A 100 T per effettuare la misurazione di riferimento 2 Inserire il primo campione e premere gt 3 Ripetere il punto 2 per ciascun campione Risultati Nella schermata vengono visualizzati i risultati NOTA risultati mostrati come indicano che la concentrazione non rientra nell intervallo ad esempio se si ottenesse un valore di assorbanza negativo Lunghezza d onda singola Campione 1 625 nm Risultato 0 131 Unit A Figura 6 La schermata dei risultati per il metodo Lunghezza d onda singola Uso dello strumento 25 Opzioni Nell ambito di ciascun metodo possibile selezionare varie opzioni che definiscono il modo in cui vengono trattati i risultati Queste opzioni possono essere specifiche del metodo e consentono di stampare i risultati o di visualizzare i parametri gt Premere Opzioni per visualizzare il menu Opzioni 1 Parametri Stampa ASET e 4 Stampa grafico o 18 Numero campione Salva metodo Stampa automatica v Nella tabella sottostante sono riportate le opzioni disponibili Opzione Testo Funzione 1 Parametri Viene visualizzata nuovam
18. presenza dell acido nucleico nella soluzione proteica pu avere un effetto significativo data la forte assorbanza nucleotidica a 280 nm Questa pu essere compensata misurando l assorbanza a 260 nm A260 e applicando l equazione di Christian e Warburg per la proteina enolasi fungina purificata Biochemische Zeitung 1941 310 384 Proteina mg ml 1 55 x A280 0 76 x A260 Ovvero Concentrazione proteica Fattore 1 x A280 Fattore 2 x A260 Questa equazione pu essere applicata ad altre proteine conoscendo i relativi fattori Lo strumento determina la concentrazione proteica a 280 nm e utilizza l equazione sopra come default fattori possono essere modificati e l utilizzo della correzione di sfondo a 320 nm opzionale Per personalizzare l equazione per una determinata proteina occorre determinare i valori di assorbanza a 260 e 280 nm a concentrazioni proteiche note per generare equazioni simultanee semplici La soluzione fornisce i due coefficienti Nei casi in cui il Fattore 2 risulta negativo deve essere impostato su zero poich significa che non vi contributo alla concentrazione proteica in conseguenza dell assorbanza a 260 nm Metodi dello strumento 87 Impostare Fattore 2 0 00 per la misurazione della proteina UV a 280 nm Il Fattore 1 si basa sul coefficiente di estinzione della proteina Se l albumina di siero bovino BSA uno standard accettabile l impostazione del Fattore 1 1 115 produrr risultat
19. prima che siano calcolati i rapporti della concentrazione o dell assorbanza Concentrazione 4260 A320 x Fattore Rapporto assorbanza 4260 4320 4280 4320 Rapporto assorbanza 4260 4320 4230 4320 Se il laboratorio in cui si opera non avesse mai usato prima la correzione di sfondo impostare questa opzione su Off DNA Eseguire la procedura descritta di seguito 1 Premere 2 per aprire la cartella Scienze biologiche solo Lambda Bio 2 Premere 1 per aprire la cartella Acidi nucleici solo Lambda Bio 3 Premere 1 per aprire il metodo DNA Verr visualizzata la schermata DNA Parametri DNA Parametri Cammino ottico Fattore di diluzione 1 000 4 Selezionare il Cammino ottico utilizzando i tasti freccia sinistra e destra quindi premere il tasto freccia gi Le opzioni sono 0 5 mm 5 mm o 10 mm Lambda Bio o 5 mm o 10 mm Lambda Bio 76 10 ll Lambda Bio Bio Manuale d uso Se si conoscesse il Fattore di diluizione immetterlo utilizzando i tasti numerici quindi passare al punto 9 L intervallo disponibile compreso tra 1 00 e 9999 OPPURE Se non si conoscesse il Fattore di diluizione premere Verr visualizzata la schermata Fattore di diluizione Fattore di diluzione n IE 0 000 OK HO nnula Immettere il Volume del campione utilizzando i tasti numerici quindi premere il tasto freccia gi
20. questo strumento o sostituire sue parti Lo strumento non contiene parti su cui l utilizzatore pu intervenire In caso di problemi accedere alla guida alla risoluzione dei problemi sul sito web di PerkinElmer e seguire le istruzioni fornite http www perkinelmer com LambdaBioXLSSupport Se non si avesse accesso alla guida alla risoluzione dei problemi o si verificassero ulteriori problemi rivolgersi all assistenza clienti per ulteriori informazioni consultare Appendice 2 Recapiti dell assistenza clienti a pagina 123 Prima di usare metodi di pulizia o decontaminazione diversi da quelli ATTENZIONE descritti qui consultare l assistenza clienti per verificare che il metodo proposto non danneggi l apparecchio Pulizia dello strumento Pulizia esterna Spegnere lo strumento e scollegare il cavo di alimentazione prima di pulire lo strumento Pulire l esterno dello strumento con un panno umido Se necessario si pu usare un detergente liquido neutro Fare una prova su una piccola area dello strumento prima di pulire l intero strumento Pulire immediatamente tutti i materiali versati dall area interessata e asciugarla con carta o con un panno che non sfilaccia Rimozione della camera delle celle per la pulizia La camera delle celle dei campioni pu essere rimossa per la pulizia 1 Allentare le viti sul coperchio del supporto dei campioni sulla base dello strumento ruotandole in senso antiorario Le viti rimangono attaccat
21. stampante 111 Installazione dell accessorio Bluetooth 112 Lambda Bio XLS Print Utility i 115 Manutenzione vsrrsssrreeresa ni inse ear e eee iii 117 Manutenzione generale 118 Pulizia dello strumento 118 Conservazione e spedizione ititi tt tttttitititirirrrene 120 Appendici 1xvrsss000sres ace ene esa i ee eee ieri 121 Appendice 1 Specifiche tecniche 122 Appendice 2 Recapiti dell assistenza Clienti 123 Introduzione 6 Lambda Bio Bio Manuale d uso Informazioni su questo manuale Il presente manuale d uso contiene le procedure di installazione e utilizzo dello spettrometro Lambda Bio Bio UV Vis Il manuale contiene le sezioni riportate di seguito e Introduzione e Informazioni sulla sicurezza e Installazione dello strumento e Uso dello strumento e Metodi strumentali e Accessori e Manutenzione e Appendici Introduzione 7 Convenzioni utilizzate in questo manuale Il testo normale viene utilizzato per fornire informazioni e istruzioni Il testo in grassetto si riferisce al testo che viene visualizzato sullo schermo Il testo in MAIUSCOLO ad esempio INVIO o ALT si riferisce ai tasti della tastiera del PC Il simbolo viene utilizzato per indicare che necessario premere due tasti contemporaneamente ad esempio ALT F Tutti i numeri con otto cifre sono part number di PerkinElm
22. standard per sostituire eventuali standard gi acquisiti 8 Se si selezionasse Standards premere il tasto freccia gi e immettere il numero di Repliche Questo determina il numero di standard da misurare e di cui calcolare la media in corrispondenza di ciascun punto di concentrazione standard Le opzioni sono Nessuno 1 2 0 3 NOTA se si selezionasse Manuale al punto 7 non si potrebbero inserire le repliche 94 Lambda Bio Bio Manuale d uso 9 Premere Avanti gt Verr visualizzata la schermata BCA Standard BCA Standard 1 400 BH indietro 10 Immettere i valori di concentrazione utilizzando i tasti numerici e i tasti freccia su e gi per spostarsi tra le caselle dei vari standard L intervallo disponibile compreso tra 0 001 e 9999 11 Premere Avanti Di Verr visualizzata la schermata BCA Calibrazione BCA Calibrazione 2 5 Lo 1000 o Sia oy oe oa LO La L4 E indietro NOTA se nella schermata Standard si effettuasse qualche errore di duplicazione premendo Avanti lo strumento emetterebbe un segnale acustico ed evidenzierebbe l immissione errata Metodi dello strumento 95 0A 12 Se si seleziona Standards inserire il campione di riferimento e premere Ea Questa misurazione di riferimento sar utilizzata per tutti i campioni successivi finch sar ripetuta OPPURE Se si seleziona Manuale immettere il valore
23. standard da misurare e di cui calcolare la media in corrispondenza di ciascun punto di concentrazione standard Le opzioni sono Nessuno 1 2 0 3 NOTA se si seleziona Manuale al punto 7 non si immettono le repliche 9 Premere Avanti gt Verr visualizzata la schermata Curva Standard Standard Curva Standard Standard E indietro 10 Immettere i valori di concentrazione per ciascuno standard utilizzando i tasti numerici e i tasti freccia su e gi per spostarsi tra le caselle dei vari standard L intervallo disponibile compreso tra 0 001 e 9999 11 Premere Avanti gt Verr visualizzata la schermata Curva Standard Calibrazione Curva Standard Calibrazione er HD indietro NOTA se nella schermata Standard si effettuasse qualche errore di duplicazione quando si preme Avanti lo strumento emette un segnale acustico ed evidenzia l immissione errata Metodi dello strumento 61 0A 12 Se si seleziona Standards inserire il campione di riferimento e premere Ea Questa lettura di riferimento sar utilizzata per tutti i campioni successivi finch non sar ripetuta OPPURE Se si seleziona Manuale immettere il valore di assorbanza noto per ciascuna concentrazione tramite la tastiera Passare al punto 15 L intervallo disponibile compreso tra 0 001 e 9999 13 Inserire il primo standard e premere gt Se vi fossero repliche premere Repliche D per v
24. tramite la porta USB Scheda di memoria SD o Computer Bluetooth a un computer tramite Bluetooth Le opzioni disponibili dipendono dal dispositivo installato nello strumento utilizzato NOTA Se selezionata la Scheda di memoria SD i dati vengono salvati come file pvc in una cartella che dipende dal numero di serie dello strumento lt Serial number gt PVC Il tipo di metodo salvato nel nome del file Per informazioni sulla visualizzazione dei risultati e sul salvataggio dei dati in altri formati consultare Lambda Bio XLS Report Utility Viewer nel manuale d uso dell utilit di stampa del Lambda Bio XLS Lambda Bio XLS Print Utility User s Guide L6050015 38 Lambda Bio Bio Manuale d uso NOTA Se una Scheda di memoria SD installata nello strumento il LED accanto alla scheda sar acceso durante la stampa dei dati sulla scheda Non rimuovere la scheda dallo strumento quando il LED acceso poich i dati potrebbero essere danneggiati Per alcuni metodi necessario chiudere il metodo per terminare la stampa Per ulteriori informazioni consultare la sezione Receiving Print Data nel manuale d uso dell utilit di stampa del Lambda Bio XLS Lambda Bio XLS Print Utility User s Guide L6050015 4 Premere OK D per salvare le impostazioni e ritornare alla cartella Utilit Preferenze 1 Premere 4 per selezionare Preferenze Verr visualizzata la schermata Preferenze Preferenze WE ET
25. 0 A Concentrazione A260 A280 4 333 19 50 A260 A230 Unit 2 063 ua ml 15 Ripetere il punto 14 per ciascun campione 77 78 Lambda Bio Bio Manuale d uso gt Premere per visualizzare le opzioni disponibili che possibile selezionare tramite i tasti numerici Parametri Viene visualizzata nuovamente la schermata Parametri Stampa Stampa tramite il metodo selezionato Grafico Attiva e disattiva la visualizzazione del grafico Il grafico mostra uno spettro dell intervallo compreso tra 220 nm e 320 nm con i cursori che indicano 230 nm 260 nm 280 nm e se selezionata la correzione di sfondo 320 nm Numero campione Aggiunge un prefisso al numero del campione e ripristina il numero ascendente al valore desiderato Salva metodo Usare i tasti freccia sinistra e destra per selezionare una cartella e salvare il metodo in Preferiti Metodi 1 9 quindi premere il tasto freccia gi e immettere un nome per il metodo Premere Salva per salvare il metodo Stampa automatica Attiva e disattiva la stampa automatica gt Per chiudere le opzioni del metodo premere o O o attendere 20 secondi gt Premere O per ritornare alla cartella Acidi nucleici solo Lambda Bio o alla pagina iniziale Lambda Bio RNA Eseguire la procedura descritta di seguito 1 Premere 2 per aprire la cartella Scienze biologiche solo Lambda Bio 2 Premere 1 per aprire la car
26. 10 5820 8166 Assistenza clienti India 022 6760 1700 Assistenza clienti Giappone 45 339 5889 Assistenza clienti Singapore 67799 539 124 Lambda Bio Bio Manuale d uso
27. 9 Premere OK D per calcolare il fattore di diluizione e ritornare alla schermata Parametri Selezionare le Unit di misura utilizzando i tasti freccia sinistra e destra quindi premere la freccia gi Le opzioni sono pg ml ng pl pg pl Immettere il Fattore utilizzando i tasti numerici quindi premere il tasto freccia gi L intervallo disponibile compreso tra 0 001 e 9999 Premere OK D per avviare le misurazioni Verr visualizzata la schermata Rapporto di assorbanza Rapporto di assorbanza Campione Aze0 A2830 Concentrazione ua ml 0A Inserire il campione di riferimento e premere Ea Questa misurazione di riferimento sar utilizzata per tutti i campioni successivi finch non sar ripetuta Inserire il primo campione e premere gt Verr misurata l assorbanza alle lunghezze d onda selezionate corretta dal valore della lunghezza d onda di sfondo se selezionata e verr calcolato il rapporto tra Lunghezza d onda 1 e Lunghezza d onda 2 72 Lambda Bio Bio Manuale d uso 18 Rapporto di assorbanza Campione 1 A2zg0 A250 56 4 Concentrazione 0 282 ug ml Ripetere il punto 17 per ciascun campione Premere per visualizzare le opzioni disponibili che possibile selezionare tramite i tasti numerici Parametri Viene visualizzata nuovamente la schermata Parametri Stampa Stampa tramite il metodo selezionato Graf
28. Accessori 109 Installazione e configurazione della stampante La stampante L7110230 un accessorio opzionale che consente di stampare i dati durante l analisi dei campioni direttamente dallo strumento Installazione della stampante 1 Spegnere l alimentazione e scollegare il cavo elettrico 2 Capovolgere lo strumento ed estrarre le due viti con la chiave esagonale da 3 mm fornita in dotazione Viti 3 Riportare lo strumento nella posizione normale e sollevare il coperchio degli accessori verticalmente verso l alto per rimuoverlo Rimuovere la fascetta che tiene il cavo avvolto 4 Capovolgere lo strumento e rimontare le viti 110 Lambda Bio Bio Manuale d uso 5 Inserire il cavo nella stampante Borchie di posizionamento Stampante Cavo 6 Abbassare la stampante sulle borchie di posizionamento e spingere con fermezza 7 Ricollegare il cavo di alimentazione Configurazione della stampante 1 Accendere lo strumento e aprire la cartella Utilit 2 Premere 3 per aprire la cartella Stampante 3 Utilizzando i tasti freccia selezionare Integrato come opzione per la stampante Stampante Stampa automatica Stampante Integrato E nnula 4 Premere OK per salvare le impostazioni Accessori 111 Caricamento o sostituzione della carta della stampante 1 Sollevare il coperchio della carta 2 Bloccare la piastra e ruotare la manopola per inserire la carta Rilascia il blocc
29. SPETTROSCOPI A UV VIS e LAMBDA BIiO BIO Manuale d uso P gt PerkinElmer Cronologia delle versioni L6050016 ae Gennaio 2014 Eventuali commenti relativi alla documentazione per questo prodotto devono essere indirizzati a User Assistance PerkinElmer Ltd Chalfont Road Seer Green Beaconsfield BUCKS HP9 2FX Regno Unito O via e mail all indirizzo info perkinelmer com Avvisi Le informazioni contenute nel presente documento sono soggette a modifiche senza obbligo di preavviso Salvo altrimenti specificato nei presenti termini e condizioni di vendita PerkinElmer non prevede garanzie di alcun tipo in relazione al presente documento incluse tra le altre garanzie tacite di commerciabilit e idoneit per l uso e garanzie per scopi particolari PerkinElmer non si riterr responsabile di errori contenuti nel presente documento o danni indiretti o conseguenti associati alla fornitura al funzionamento o all uso del presente materiale Informazioni sui diritti d autore Il presente documento contiene informazioni proprietarie protette dalla legge sui diritti d autore Tutti i diritti sono riservati proibito riprodurre qualsiasi parte della presente pubblicazione in qualunque forma senza previa autorizzazione scritta di PerkinElmer Inc Copyright 2014 PerkinElmer Inc Marchi I nomi i marchi registrati ecc utilizzati nel presente documento anche quando non espressamente segnalati come tali sono protetti
30. a 220 nm e 320 nm con i cursori che indicano 230 nm 260 nm 280 nm e se selezionata la correzione di sfondo 320 nm Numero campione Aggiunge un prefisso al numero del campione e ripristina il numero ascendente al valore desiderato Salva metodo Usare i tasti freccia sinistra e destra per selezionare una cartella e salvare il metodo in Preferiti Metodi 1 9 quindi premere il tasto freccia gi e immettere un nome per il metodo Premere Salva per salvare il metodo Stampa automatica Attiva e disattiva la stampa automatica gt Per chiudere le opzioni del metodo premere o O o attendere 20 secondi gt Premere O per ritornare alla cartella Acidi nucleici solo Lambda Bio o alla pagina iniziale Lambda Bio 86 Lambda Bio Bio Manuale d uso Determinazioni della proteina Il Lambda Bio Bio include cinque metodi per il dosaggio delle proteine Figura 13 Life Science Proteina 1 Luiz Proteina Uy el pus Oo 24 Lowry Z pue Figura 13 Schermata dei metodi Proteina Determinazione delle proteine a 280 nm La concentrazione della proteina pu essere determinata nell UV prossimo a 280 nm in conseguenza dell assorbanza da parte degli aminoacidi tirosina triptofano e fenil alanina L assorbanza a 280 nm varia notevolmente per proteine differenti a causa del loro contenuto di aminoacidi e pertanto occorre determinare il valore di assorbanza specifico per una particolare proteina La
31. ante Numero parte Descrizione L7110184 L7110186 Lambda Bio Bio se pertinente L7110185 L7110187 Lambda Bio Bio con stampante se pertinente L7110188 Lambda Bio con SD se pertinente L6050014 Manuale sulla sicurezza Lambda Bio XLS L6050018 CD della documentazione Lambda Bio XLS L7111023 Copricuvette antipolvere L7110231 Lambda Bio XLS Print Utility e cavo se pertinente L7110263 Cuvette micro UV pacchetto da 8 Cavo di alimentazione 2 Esaminare le componenti per verificare che non presentino danni causati durante la spedizione e Controllare l involucro esterno dello strumento per verificare che non presenti danni e assicurarsi che le uscite siano integre e Verificare che il vano campioni sia privo di polvere o altri residui NOTA se si rilevassero danni o parti mancanti accedere alla guida alla risoluzione dei problemi sul sito web di PerkinElmer all indirizzo http www perkinelmer com LambdaBioXLSSupport e seguire le istruzioni fornite Se non si avesse accesso al sito web rivolgersi all assistenza clienti vedere Appendice 2 Recapiti dell assistenza clienti a pagina 123 Installazione dello strumento 17 Collegamento all alimentazione elettrica di linea Rischi elettrici Per evitare potenziali lesioni alle persone e danni allo strumento effettuare eventuali collegamenti all interno del sistema prima di AVVERTENZA collegare lo strumento all alimentazione elettrica
32. ante e sono tipiche di una unit di produzione Ci riserviamo il diritto di modificare le specifiche tecniche senza preavviso Intervallo delle lunghezze 190 1100 nm d onda Intervallo di scansione delle 200 950 nm lunghezze d onda Calibrazione della lunghezza Automatica all accensione dello strumento d onda Larghezza di banda spettrale 3 nm Precisione della lunghezza 2 nm d onda d onda Da 0 300 a 2 500 A 0 a 199 T Linearit fotometrica 0 005 A o 1 della lettura a seconda di quale dei due valori maggiore a 546 nm Riproducibilit fotometrica 0 003 A 0 0 5 A 0 007 A 0 5 1 0 A Luce parassita lt 1 a 220 nm e 340 nm usando lt 0 5 a 220 nm e 340 nm usando NaNO NaNO Stabilit zero 0 01 A ora dopo un riscaldamento di 20 min a 340 nm Appendici 123 Appendice 2 Recapiti dell assistenza clienti NOTA se si verificano problemi relativi allo strumento prima di rivolgersi all assistenza clienti consultare la guida alla risoluzione dei problemi all indirizzo http www perkinelmer com LambdaBioXLSSupport Assistenza clienti USA 100 762 4000 Negli U S A 1 203 925 4602 Al di fuori degli U S A Assistenza clienti Europa 0800 40 858 Belgio 0805 111 333 Francia 0800 0 00 66 79 Germania 0800 90 66 42 Italia 800 099 164 Spagna 0800 896 046 UK Assistenza clienti Brasile 11 38 68 6200 Assistenza clienti Canada 800 561 4646 Assistenza clienti Cina
33. assero solventi volatili o sostanze tossiche necessario disporre di un sistema efficiente di ventilazione del laboratorio per rimuovere i vapori che si potrebbero generarsi quando si eseguono le analisi Smaltimento dei rifiuti contenitori per i rifiuti possono contenere soluzioni organiche o corrosive e piccole quantit delle sostanze analizzate Se questi materiali fossero tossici potrebbe essere necessario trattare gli effluenti raccolti come rifiuti pericolosi Per informazioni sulle corrette procedure di smaltimento fare riferimento alle norme locali in materia di sicurezza 12 Lambda Bio Bio Manuale d uso Apparecchiature protettive personali Sebbene non siano necessarie apparecchiature protettive personali per l utilizzo del dispositivo i campioni da analizzare potrebbero richiedere l uso di tali apparecchiature protettive personali In tal caso necessaria una valutazione dei rischi condotta dall utilizzatore o dall addetto alla salute e alla sicurezza Utilizzatore finale Questo strumento deve essere usato da individui esperti nell utilizzo degli spettrofotometri e che conoscono bene i rischi ad essi associati come descritti sopra Nel caso in cui si verifichi un guasto o si crei una situazione di pericolo l utilizzatore responsabile deve scollegare l unit dall alimentazione elettrica e isolare lo strumento per la decontaminazione con mezzi idonei in caso di versamenti di materiale a rischio biologico all intern
34. ative picchi impostazioni Rilevamento picchi Si 0 01 Lunghezza d onda Larghezza minima picco Indica picchi Snm No E DK HO nnula Auto Picchi attiva e disattiva il rilevamento picchi automatico Di seguito sono riportate le opzioni che determinano il modo in cui vengono rilevati i picchi Altezza minima picco affinch il picco sia rilevato l altezza minima del picco deve essere superiore al picco pi alto dei due minimi adiacenti Larghezza minima picco la larghezza minima del picco determinata dalla differenza in lunghezza d onda tra il pi alto dei due punti minimi adiacenti e l intersezione opposta di quel livello minimo pi alto e il suo opposto rispetto al picco Zoom Picchi determina la posizione dei picchi ricalcolandoli e tabulandoli quando si ingrandisce una regione dello spettro Se si seleziona No il rilevamento del picco rimane quello determinato prima dell ingrandimento Ordina picchi per determina la sequenza in cui vengono riportati i picchi Le opzioni sono Larghezza picco Lunghezza d onda e Altezza picco Metodi dello strumento 51 Indica picchi attiva o disattiva la visualizzazione dei cursori dei picchi cursori dei picchi si presentano sotto forma di linee tratteggiate verticali che visualizzano l altezza del picco misurata e le linee tratteggiate orizzontali mostrano la larghezza del picco gt Premere O per annullare
35. di assorbanza noto per ciascuna concentrazione tramite la tastiera Passare al punto 15 L intervallo disponibile compreso tra 0 001 e 9999 13 Inserire il primo standard e premere gt Se vi sono repliche premere Repliche D per visualizzarle quindi premere D per misurare ciascuna replica BCA Calibrazione 2 5 E indietro 14 Ripetere il punto 13 per tutti gli standard Durante le misurazioni un grafico visualizza i risultati e la regressione dati ad esempio regressione zero Durante le misurazioni un grafico visualizza i risultati e la regressione dati BCA Calibrazione 0200 0 009 A 0 5 04 oo 0 1034 DM 0 600 0 223 A 0 3 0 80 0 342 A 1000 0 460 A na 1400 0 576 A 0 4 06 D8 LO 1412 14 E indietro 96 Lambda Bio Bio Manuale d uso NOTA sarebbe possibile utilizzare i tasti freccia su e gi per selezionare uno standard da ripetere se si ottenesse una lettura insoddisfacente Premere per cancellare la lettura precedente prima della misurazione Se si selezionasse Repliche dopo la misurazione di tutte le repliche premere Avanti per ritornare alla schermata Standard BCA Calibrazione DE n 0 576 A 0 5 Ta a 0 576 A DAY n 3 I 1400 0 576 A DI ag o os oe ne Lo La LU y 0 4935 0 076 R 0 9810 MH indietro 15 Premere OK D per accettare la calibrazione Verr visualizzata la schermata dei risultati BCA Lunghezza d
36. dicano 230 nm 260 nm 280 nm e se selezionata la correzione di sfondo 320 nm Numero campione Aggiunge un prefisso al numero del campione e ripristina il numero ascendente al valore desiderato Salva metodo Usare i tasti freccia sinistra e destra per selezionare una cartella e salvare il metodo in Preferiti Metodi 1 9 quindi premere il tasto freccia gi e immettere un nome per il metodo Premere Salva per salvare il metodo Stampa automatica Attiva e disattiva la stampa automatica gt Per chiudere le opzioni del metodo premere o O o attendere 20 secondi gt Premere O per ritornare alla cartella Acidi nucleici solo Lambda Bio o alla pagina iniziale Lambda Bio Oligonucileotidi Eseguire la procedura descritta di seguito 1 Premere 5 per aprire la cartella Scienze biologiche solo Lambda Bio 2 Premere 1 per aprire la cartella Acidi nucleici solo Lambda Bio 3 Premere 3 per aprire il metodo Oligo 82 Lambda Bio Bio Manuale d uso Verr visualizzata la schermata Oligo Parametri Oligo Parametri Cammino ottico Fattore di diluzione 1 000 4 Selezionare il Cammino ottico utilizzando i tasti freccia sinistra e destra quindi premere il tasto freccia gi Le opzioni sono 0 5 mm 5 mm o 10 mm Lambda Bio o 5 mm o 10 mm Lambda Bio 5 Se si conoscesse il Fattore di diluizione immetterlo utilizzando i tasti numerici quindi passare al punto 9
37. e Figura 2 Tastiera e display Tasto Azione Pannello di Visualizza le cartelle opzioni di menu che consentono di effettuare le analisi visualizzazione e di visualizzare i risultati Accende e spegne lo strumento A Usare le quattro frecce per spostarsi nel display e attivare l impostazione necessaria evidenziandola Il tasto Opzioni visualizza le opzioni per quel metodo Vedere Opzioni a pagina 25 per ulteriori informazioni Per le opzioni relative ad un determinato metodo vedere la sezione rilevante As Il tasto 0A 100 T imposta una misurazione di autozero per la soluzione di Me riferimento a 0 000 A o 100 T alla lunghezza d onda attuale Quando attiva la modalit di scansione viene eseguita una scansione di riferimento Tasto Uso dello strumento 21 Azione Il tasto Annulla Indietro Arresta annulla una selezione e ritorna alla cartella precedente torna alla schermata precedente in un metodo o arresta una misurazione Tasti alfanumerici Il tasto OK Avanti Esegui Scansione attiva o conferma una selezione passa alla schermata successiva o effettua una misurazione Consentono di accedere ai parametri di selezionare opzioni di menu e di scrivere descrizioni di testo ove pertinente Premere pi volte il tasto per minuscole numero maiuscole Attendere 1 secondo prima di immettere il carattere successivo Usare il tasto per cancellare il carattere a sinist
38. e alla piastra Manutenzione 119 2 Abbassare il supporto dei campioni ed estrarlo dallo strumento Viti ad alette Figura 14 Posizione delle viti del supporto delle celle 120 Lambda Bio Bio Manuale d uso Conservazione e spedizione Questa unit deve essere conservata o spedita nella confezione originale che quindi non va eliminata L unit deve essere custodita nella sua confezione in un ambiente asciutto senza condensa ed esente da polvere o sporcizia a una temperatura compresa tra 10 e 50 C Se occorresse restituire lo strumento a PerkinElmer sarebbe necessario un certificato di decontaminazione prima di spedire lo strumento certificati di decontaminazione possono essere ottenuti da PerkinElmer La guida alla risoluzione dei problemi che pu essere utile nel processo di reso disponibile presso http www perkinelmer com LambdaBioXLSSupport Se non si avesse accesso alla guida alla risoluzione dei problemi ci si poterbbe rivolgere anche all assistenza clienti per ulteriori informazioni consultare Appendice 2 Recapiti dell assistenza clienti a pagina 123 responsabilit dell utilizzatore eseguire un attenta valutazione dei rischi e se pertinente adeguate procedure di decontaminazione prima di restituire lo strumento Appendici 122 Lambda Bio Bio Manuale d uso Appendice 1 Specifiche tecniche Le specifiche si riferiscono a uno strumento che si sia riscaldato a temperatura ambiente cost
39. e un nome per il metodo Premere Salva per salvare il metodo Stampa Attiva e disattiva la stampa automatica automatica gt Per chiudere le opzioni del metodo premere o O o attendere 20 secondi gt AI termine di tutte le misurazioni dei campioni premere O per ritornare alla cartella Proteina 92 Lambda Bio Bio Manuale d uso BCA Bradford Lowry e Biuret NOTA qui viene descritto solo il metodo BCA La procedura per i metodi Bradford Lowry e Biuret identica diversa solo la lunghezza d onda delle misurazioni Per ulteriori informazioni vedere Determinazione delle proteine a 595 546 562 e 750 nm a pagina 87 Eseguire la procedura descritta di seguito 1 Premere 2 per aprire la cartella Scienze biologiche solo Lambda Bio 2 Se lo strumento fosse un Lambda Bio premere 6 per aprire la cartella Proteine OPPURE Se lo strumento fosse un Lambda Bio premere 2 per aprire la cartella Proteine 3 Premere 2 per aprire il metodo BCA Verr visualizzata la schermata BCA Parametri BCA Parametri Lunghezza d onda Regressione dati 562 nm Regressione Standards Nessuno HO full La Lunghezza d onda per questo metodo impostata a 562 nm 4 Immettere il numero di Standard 1 9 da usare nella curva utilizzando i tasti numerici o i tasti freccia sinistra e destra quindi premere il tasto freccia gi Metodi dello strumento 93 5 Immettere
40. ente la schermata Parametri per il metodo specifico Stampa Stampa i risultati N A Specifica del metodo Numero Definisce il numero di campione dal quale si desidera campione iniziare a effettuare le misurazioni Salva metodo Consente di salvare la schermata Parametri come nuovo metodo nella cartella Metodi o Preferiti oppure se installata in una Scheda di memoria SD possibile salvare fino a 9 metodi in ciascuna cartella NOTA In Lambda Bio non presente la cartella Preferiti NOTA possibile salvare i metodi da pi tipi di strumenti nella stessa Scheda di memoria SD Metodi vengono salvati nella scheda in una directory predefinita che dipende dal tipo di strumento lt Instrument type gt Methods Ad esempio Lambda XLS Methods Stampa Attiva e disattiva la stampa automatica L impostazione automatica predefinita off 26 Lambda Bio Bio Manuale d uso gt Per chiudere le opzioni del metodo premere o O o attendere 20 secondi tasti numerici possono fungere da tasti di scelta rapida per l opzione desiderata senza dover aprire il menu Opzioni Se si utilizzasse un metodo salvato precedentemente si consiglia di controllare che queste opzioni siano state definite correttamente per la sperimentazione specifica prima di analizzare i campioni NOTA se si impostasse il parametro Cronologia su On vedere Preferenze a pagina 37 lo strumento memorizza le ultime impostazion
41. er salvo altrimenti specificato Se non specificato diversamente nel presente manuale strumento si riferisce allo strumento Lambda Bio o Lambda Bio Note messaggi di attenzione e avvertenze Vengono anche utilizzati tre termini nei seguenti formati standard per mettere in evidenza circostanze e avvertenze speciali NOTA una nota indica informazioni aggiuntive importanti fornite con alcune procedure Il termine AVVERTENZA viene utilizzato per informare l operatore riguardo a situazioni che potrebbero causare lesioni personali all operatore o ad altre persone Le informazioni su tali circostanze sono contenute in un riquadro simile a questo AVVERTENZA Il termine ATTENZIONE viene utilizzato per informare l operatore ATTENZIONE guardo a situazioni che potrebbero causare gravi danni allo strumento o ad altre apparecchiature Le informazioni su tali circostanze sono contenute in un riquadro simile a questo 8 Lambda Bio Bio Manuale d uso Informazioni sulla sicurezza 10 Lambda Bio Bio Manuale d uso Informazioni generali sulla sicurezza Gli strumenti Lambda Bio XLS sono conformi alle prescrizioni della Direttiva bassa tensione 2006 95 CE della Direttiva EMC compatibilit elettromagnetica 2004 108 CE e della Direttiva IVD diagnostici in vitro 98 79 CE Standard a fronte dei quali viene dichiarata la conformit EN 61010 1 Prescrizioni di sicurezza per apparecchi elettrici di mi
42. err visualizzato uno spettro che copre l intervallo di lunghezze d onda con cursori che segnano le lunghezze d onda selezionate Verr visualizzata anche una tabella dei valori di assorbanza a quelle lunghezze d onda Lunghezza d onda multipla Campione no ar 4 280 300 320 340 360 380 400 420 9 Ripetere il punto 8 per ciascun campione Metodi dello strumento 47 Premere per visualizzare le opzioni disponibili che possibile selezionare tramite i tasti numerici Parametri Viene visualizzata nuovamente la schermata Parametri Stampa Stampa i dati nella schermata dei risultati la tabella di assorbanza tramite il metodo selezionato Stampa grafico Stampa il grafico Questa opzione visualizzata in grigio se non vi sono dati disponibili Numero Aggiunge un prefisso al numero del campione e ripristina il numero campione ascendente al valore desiderato Salva metodo Usare i tasti freccia sinistra e destra per selezionare una cartella e salvare il metodo in Preferiti Metodi 1 9 quindi premere il tasto freccia gi e immettere un nome per il metodo Premere Salva per salvare il metodo Stampa Attiva e disattiva la stampa automatica automatica Per chiudere le opzioni del metodo premere o O o attendere 20 secondi AI termine della misurazione di tutti i campioni premere O per ritornare alla cartella Applicazioni 48 Lambda Bio Bio Manuale d uso Spettro NOTA que
43. estra per selezionare una cartella e salvare il metodo in Preferiti Metodi 1 9 quindi premere il tasto freccia gi e immettere un nome per il metodo Premere Salva per salvare il metodo Stampa automatica Attiva e disattiva la stampa automatica gt Per chiudere le opzioni del metodo premere o O o attendere 20 secondi gt AI termine di tutte le misurazioni dei campioni premere O per ritornare alla pagina iniziale Metodi dello strumento 103 Misurazione di colture di cellule batteriche OD 600 Le colture di cellule batteriche vengono normalmente cresciute finch l assorbanza a 600 nm nota come OD 600 raggiunge circa 0 4 A prima dell induzione o della raccolta Esiste un rapporto lineare tra il numero di celle o densit e OD 600 fino a circa 0 6 A importante notare che per campioni torbidi come le colture cellulari l assorbanza misurata dovuta alla diffusione della luce e non il risultato nell assorbimento molecolare La quantit di diffusione influenzata dall ottica del sistema distanza tra il supporto delle celle e l apertura di uscita dello strumento la geometria di questa apertura e l ottica del monocromatore diversi tipi di spettrofotometro quindi producono risposte diverse per lo stesso campione torbido Per confrontare i risultati questi devono essere normalizzati mediante curve di calibrazione Una curva di calibrazione pu essere determinata confrontando l OD 600 misurato con
44. etora ear 36 Regionalen enni cei Lo nea 36 Stampante alta 37 PPEFErenze ie Ne a aerei 38 Contrasto aaa 39 Informazioni SW air irta 39 Gestione dei campioni eer alari ail aa 40 Metodi dello strumento s1s 220rrrs aeree een ee eine eine 41 Lunghezza d onda singola titr t rtrt ttnt r tn EnEn EEEEEEEEEEEE EEEE EE EEEa 42 Lunghezza d onda multipla i 45 Spettro srialalia e rl TOA a ai 48 Concentrazione anta ala iaia 53 Curva Standald 4s 5 asia aio lla oa 58 Dati cineticiisraace toe era 64 Rapporto di assorbanza i 69 Caratterizzazione del DNA dell RNA e degli oligonucleotidi 73 INtroduzione tsnratatatai rl E 73 DNA noel La olii 75 RNA eli 78 Oligonucleotidi 3 aporia iaia io AEAEE EEE Aia 81 Determinazioni della proteina iii 86 Determinazione delle proteine a 280 Nm i 86 Determinazione delle proteine a 595 546 562 e 750 nm 87 Metodi Proteina ctr ee aa a rica 88 Misurazione dell assorbanza e della concentrazione 98 Misurazione di colture di cellule batteriche OD 600 103 Accessontii iiiivi iii riciizi ne initiative 107 Accessori e prodotti di CONSUMO iinne 108 Installazione e configurazione della stampante 109 Installazione della stampante 109 Configurazione della stampante 110 Caricamento o sostituzione della carta della
45. ezza d onda Assorbanza HO full Impostare la Lunghezza d onda utilizzando i tasti numerici o i tasti freccia sinistra e destra quindi premere il tasto freccia gi Selezionare la Modalit utilizzando i tasti freccia sinistra e destra Le opzioni sono Assorbanza Fattore o Standard La modalit Assorbanza misura solo l assorbanza La modalit Fattore misura l assorbanza quindi calcola la concentrazione utilizzando un fattore noto La modalit Standard consente di determinare il fattore misurando una soluzione di concentrazione nota quindi di determinare la concentrazione Metodi dello strumento 99 4 Se si seleziona Assorbanza passare al punto 7 OPPURE Se si selezionasse Fattore immettere il fattore utilizzando i tasti numerici L intervallo disponibile compreso tra 0 001 e 9999 OPPURE Se si selezionasse Standard immettere la concentrazione utilizzando i tasti numerici L intervallo disponibile compreso tra 0 01 e 9999 5 Immettere le Unit quindi premere il tasto freccia gi possibile immettere un testo contenente massimo 8 caratteri tramite la tastiera o premere Opzioni per visualizzare la schermata Unit e accedere a un elenco di unit predefinite Auto b OK BO nnula R Nella schermata Unit usare i tasti freccia sinistra e destra per selezionare una delle opzioni disponibili Le opzioni sono pg ml ug pl pmol l mg dl mmol l pmol l g l mg l ug l U I
46. ficate Metodi dello strumento 55 7 Premere OK D per avviare le misurazioni Verr visualizzata la schermata dei risultati Concentrazione Concentrazione Parametri Lunghezza d onda 260 nm Modalit Fattore HO nnula 0A 8 Inserire il campione di riferimento e premere Ea Questa misurazione di riferimento sar utilizzata per tutti i campioni successivi finch sar ripetuta 9 Selezionando Misura standard inserire lo standard e premere OK gt Verr visualizzata la schermata Esegui Standard Esegui Standard Concentrazione 50 0 Esegui m Annulla OPPURE Selezionando Fattore passare al punto 11 56 Lambda Bio Bio Manuale d uso 10 Premere Esegui D per eseguire lo standard Il fattore viene calcolato e poi visualizzato Concentrazione Lunghezza d onda 260 nm Campione Standard Assorbanza Concentrazione 0 043 A Fattore 1163 11 Inserire il primo campione e premere gt Verr visualizzata la concentrazione del campione Concentrazione Lunghezza d onda 260 nm Campione 1 Assorbanza Concentrazione 0039 A Fattore 1 950 Unit ua ml 12 Ripetere il punto 11 per ciascun campione Metodi dello strumento 57 Premere per visualizzare le opzioni disponibili che possibile selezionare tramite i tasti numerici Parametri Viene v
47. hermata OD 600 Parametri OD 600 Parametri Lunghezza d onda 3 Impostare la Lunghezza d onda utilizzando i tasti numerici o i tasti freccia sinistra e destra quindi premere il tasto freccia gi Il valore predefinito 600 nm 4 Immettere il fattore di Correzione per compensare le diverse configurazioni ottiche tra questo strumento e altri quindi premere il tasto freccia gi 5 Selezionare le Unit Le opzioni sono OD o cellule ml 6 Se si seleziona cellule ml immettere il Fattore usato 0 000 9999 e il Moltiplicatore x 1000 o x 1000 000 7 Premere OK D per avviare le misurazioni Verr visualizzata la schermata dei risultati OD 600 Di seguito riportata la schermata dei risultati per le unit cellule ml Lunghezza d onda Campione 800 nm Assorbanza cellule ml Moltiplicatore 1000 0A 8 Inserire il campione di riferimento e premere oz Questa misurazione di riferimento sar utilizzata per tutti i campioni successivi finch sar ripetuta Metodi dello strumento 105 9 Inserire il primo campione e premere gt Vengono visualizzati la lunghezza d onda l assorbanza e l OD 600 o cellule ml Lunghezza d onda Campione 635 nm 1 Assorbanza cellule mi 200 Moltiplicatore 1000 10 Ripetere il punto 9 per ciascun campione gt Premere per visualizzare le opzioni disponibili che possibile seleziona
48. i e immettere un nome per il metodo Premere Salva per salvare il metodo Attiva e disattiva la stampa automatica gt Per chiudere le opzioni del metodo premere o O o attendere 20 secondi gt AI termine della misurazione dei campioni premere O per ritornare alla cartella Applicazioni Metodi dello strumento 69 Rapporto di assorbanza NOTA questo metodo disponibile solo sul Lambda Bio Il metodo Rapporto di assorbanza consente di eseguire misurazioni della concentrazione semplici tramite la misurazione della quantit di luce che attraversa un campione in relazione a un bianco che pu essere l aria a due lunghezze d onda Eseguire la procedura descritta di seguito 1 Premere 1 per aprire la cartella Applicazioni Verr visualizzata la schermata Applicazioni Applicazioni fire donda ba cinetici Lunghezza d onda M Rapporto di fa a multipla Z assorbanza A mM Spettro S 4 Le Concentrazione e Z Curva Standard 2 Premere 7 per selezionare il metodo Rapporto di assorbanza Verr visualizzata la schermata Rapporto di assorbanza Lunghezze d onda Rapporto di assorbanza Lunghezze d onda Lunghezza d onda 1 260 nm Lunghezza d onda 2 280 nm HO nnula 3 Immettere la Lunghezza d onda 1 utilizzando i tasti numerici o i tasti freccia sinistra e destra quindi premere il tasto freccia gi 4 Immettere la Lunghezza d onda 2 c
49. i definite Se si impostasse il parametro Cronologia su Off tutti i parametri e le opzioni ritornano ai valori predefiniti quando si lascia il metodo a meno che non siano stati salvati come parte di un metodo Uso dello strumento 27 Metodi e preferiti La cartella Metodi consente di memorizzare i metodi definiti dall utente in base ai metodi predefiniti dello strumento che possono essere salvati mediante il menu Opzioni possibile salvare fino a 9 metodi in ciascuna cartella Per recuperare i metodi salvati precedentemente premere il numero corrispondente sulla tastiera per accedere alla cartella Metodi inoltre possibile esportare backup metodi in una scheda SD o importare ripristino metodi da una Scheda di memoria SD Metodi 9 Figura 7 Cartella Metodi Opzioni cartella gt Premere per visualizzare le opzioni disponibili nella cartella Metodi che possibile selezionare tramite i tasti numerici Opzione Testo Funzione Nomi di cartelle Consente di assegnare un nuovo nome alla cartella Metodi Blocca cartella Consente all utente di bloccare la cartella Sblocca cartella Consente all utente di sbloccare la cartella Scheda di Consente all utente di aprire la scheda SD Questa opzione memoria SD applicabile solo qualora nello strumento sia installato un SD 28 Lambda Bio Bio Manuale d uso Nomi di cartelle 1 Aprire la cartella Metodi 2 Premere per visua
50. i lineari da una proteina compresa tra 0 e 0 8 mg ml Proteina mg ml 1 115 x A280 Le misurazioni rapide di questo tipo a 280 nm sono particolarmente utili dopo l isolamento di proteine e peptidi da miscele usando colonne spin e HiTrap rispettivamente mediante centrifugazione e gravit Determinazione delle proteine a 595 546 562 e 750 nm Il metodo di Bradford si basa sulla quantizzazione del legame di un colorante blu brillante Coomassie a una proteina sconosciuta e dal confronto di questo legame con quello di concentrazioni note diverse di una proteina standard a 595 nm solitamente l albumina di siero bovino BSA Il metodo di Biuret si basa sulla reazione tra ioni cuprici e legami peptidici in una soluzione di alcali che genera la formazione di un complesso assorbente a 546 nm Anche il metodo BCA si basa sulla reazione tra ioni rameici e legami peptidici ma in aggiunta combina questa reazione con il rilevamento di ioni rameosi in una soluzione di alcali che genera la formazione di un complesso assorbente a 562 nm Il processo BCA meno sensibile alla presenza di detergenti utilizzati per rompere le pareti delle celle Il metodo di Lowry si basa sulla quantificazione del colore ottenuto da una reazione del reagente fenolico Folin Ciocalteu con i residui di tirosina di una proteina sconosciuta e dal confronto con quelli derivati da una curva standard di una proteina standard a 750 nm solitamente la BSA e Con questi k
51. iale del Lambda Bio Lambda Bio Spectrometer 1 H aopiicazioni LT Metodi e EA Utilit 8282 Y1 0 0 Figura 9 Pagina iniziale del Lambda Bio Uso dello strumento 35 Utilit La cartella Utilit consente di modificare l impostazione dello strumento gt Premere il tasto numerico appropriato per accedere alla cartella Utilit Verr visualizzata la schermata Utilit Utilit ou Data e ora O 1 Informazioni su o FE feson E z5 Giochi OCs 4 Preferenze e Contrasto Figura 10 Schermata Utilit Nella tabella sottostante sono riportate le utilit disponibili Data e ora Impostare la data e l ora corrette Regionale Selezionare CLAUDI O le preferenze per la lingua e il formato dei numeri Stampante Opzioni stampante output Preferenze Selezionare il layout della schermata temi e la cronologia Contrasto Regolare il contrasto e la luminosit dello schermo Informazioni su Numero di serie e versione del software Giochi Spectro Blocks Sudoku 36 Lambda Bio Bio Manuale d uso Data e ora 1 Premere 1 per selezionare Data e ora Verr visualizzata la schermata Data e ora Data e ora 2 Immettere il giorno il mese l anno l ora e i minuti mediante i tasti alfanumerici o i tasti freccia sinistra e destra 3 Premere OK D per salvare le impostazioni e ritornare alla cartella Utilit secondi vengono azzerati qua
52. ico Attiva e disattiva la visualizzazione del grafico Il grafico mostra uno spettro dell intervallo delle lunghezze d onda misurate che sono contrassegnate da cursori Numero campione Aggiunge un prefisso al numero del campione e ripristina il numero ascendente al valore desiderato Salva metodo Usare i tasti freccia sinistra e destra per selezionare una cartella e salvare il metodo in Preferiti Metodi 1 9 quindi premere il tasto freccia gi e immettere un nome per il metodo Premere Salva per salvare il metodo Stampa automatica Attiva e disattiva la stampa automatica Per chiudere le opzioni del metodo premere o O o attendere 20 secondi AI termine della misurazione dei campioni premere O per ritornare alla cartella Applicazioni Metodi dello strumento 73 Caratterizzazione del DNA dell RNA e degli oligonucleotidi Introduzione Il Lambda Bio Bio include tre metodi per la quantificazione degli acidi nucleici Life Science Acidi nucleici of of i Oligo Figura 11 Schermata Acidi nucleici del Lambda Bio Quantificazioni degli acidi nucleici Gli acidi nucleici possono essere quantificati a 260 nm perch noto che una soluzione di DNA o RNA in una cella con cammino ottico di 10 mm con una densit ottica pari a 1 0 ha una concentrazione rispettivamente di 50 ug ml o 40 ug ml Gli oligonucleotidi hanno un corrispondente fattore di 33 ug ml sebbene questo vari con la composi
53. il tasto freccia gi Le opzioni sono Delta A la variazione in assorbanza nel corso della durata della misurazione o nel periodo selezionato Finale A l assorbanza al termine della durata della misurazione o tempo selezionato e Pendenza la velocit di variazione dell assorbanza nel corso della durata della misurazione o periodo selezionato Immettere le Unit quindi premere il tasto freccia gi possibile immettere una stringa di testo di massimo 8 caratteri Per accedere a un elenco di unit predefinite nella schermata Unit premere Opzioni 22 quindi utilizzare i tasti freccia sinistra destra le opzioni sono pg ml pg pIi pmol pI mg dl mmol l mol l g l mg l ug l U I ppm ppb conc o nessuna Queste unit possono ancora essere modificate dopo aver selezionato OK La schermata Unit consente inoltre di selezionare il numero dei punti decimali DP visualizzati Le opzioni sono Auto 0 1 e 2 NOTA il risultato sar sempre fissato a 5 cifre significative indipendentemente dal numero di punti decimali selezionato quindi 98768 2 visualizzato come 98768 anche con 1 punto decimale selezionato 10 1l P OK HO fnnulla Premere OK per salvare le opzioni e ritornare alla schermata Applicazioni Le unit possono ancora essere modificate Utilizzando i tasti freccia sinistra e destra impostare il Fattore per il quale il risultato viene moltiplicato per gene
54. in base a un campione di calibrazione Fattore nei casi in cui si immette un fattore negativo noto 5 Se si seleziona Fattore o Fattore immettere il Fattore o Fattore utilizzando i tasti numerici quindi premere il tasto freccia gi L intervallo disponibile compreso tra 0 01 e 9999 OPPURE Se si seleziona Standard immettere la Concentrazione utilizzando i tasti numerici quindi premere il tasto freccia gi L intervallo disponibile compreso tra 0 001 e 9999 6 Immettere le Unit quindi premere il tasto freccia gi possibile immettere un testo contenente massimo 8 caratteri tramite la tastiera o premere Opzioni per visualizzare la schermata Unit e accedere a un elenco di unit predefinite b OK HO nnula Nella schermata Unit usare i tasti freccia sinistra e destra per selezionare una delle opzioni disponibili Le opzioni sono pg ml pg pl pmol pi mg dl mmol I pmol l g l mg l ug l U I ppm ppb conc o nessuna La schermata Unit consente inoltre di selezionare il numero dei punti decimali DP visualizzati Le opzioni sono Auto 0 1 e 2 NOTA il risultato sar sempre fissato a 5 cifre significative indipendentemente dal numero di punti decimali selezionato quindi 98768 2 visualizzato come 98768 anche con 1 punto decimale selezionato Premere OK D per salvare le opzioni e ritornare alla schermata Applicazioni Le unit possono ancora essere modi
55. isualizzarle quindi premere D per misurare ciascuna replica Curva Standard Calibrazione HD indietro 14 Ripetere il punto 13 per tutti gli standard Durante le misurazioni un grafico visualizza i risultati e la regressione dati ad esempio regressione zero Curva Standard Calibrazione BEL 0 020 A ao 0 129 A ano 0 252 A 620 0 377 A HD indietro 62 Lambda Bio Bio Manuale d uso NOTA possibile utilizzare i tasti freccia su e gi per selezionare uno standard da ripetere se si ottenesse una lettura insoddisfacente Premere per cancellare la lettura precedente prima della misurazione Se si selezionasse Repliche dopo la misurazione di tutte le repliche premere Avanti per ritornare alla schermata Standard Curva Standard Calibrazione BE i o 0 377 A DE CA 0 377 A EN i iD 20 30 O SO soi y 0 0064 R 0 9766 Avanti MH indietro 15 Premere OK D per accettare la calibrazione Verr visualizzata la schermata dei risultati Esegui Standard Curva Standard Lunghezza d onda Campione 430 nm Riferimento Assorbanza Concentrazione 0 000 A Regressione dati Regressione zero 0A 16 Se si selezionasse Manuale inserire il campione di riferimento e premere e Questa misurazione di riferimento sar utilizzata per tutti i campioni successivi finch sar ripetuta OPPURE Se si selezionasse Standards pa
56. isualizzata nuovamente la schermata Parametri Stampa Stampa i risultati tramite il metodo selezionato Grafico Esegui Standard Attiva e disattiva la visualizzazione del grafico L intervallo di lunghezza d onda del grafico 20 nm rispetto alla lunghezza d onda selezionata che contrassegnata dal cursore Viene visualizzata nuovamente la schermata Esegui Standard Numero campione Salva metodo Aggiunge un prefisso al numero del campione e ripristina il numero ascendente al valore desiderato Usare i tasti freccia sinistra e destra per selezionare una cartella e salvare il metodo in Preferiti Metodi 1 9 quindi premere il tasto freccia gi e immettere un nome per il metodo Premere Salva per salvare il metodo Stampa automatica Attiva e disattiva la stampa automatica Per chiudere le opzioni del metodo premere o O o attendere 20 secondi Al termine della misurazione di tutti i campioni premere O per ritornare alla cartella Applicazioni 58 Lambda Bio Bio Manuale d uso Curva Standard NOTA questo metodo disponibile solo sul Lambda Bio Questo metodo consente la costruzione di una curva di calibrazione a pi punti in base a standard di concentrazione nota che pu essere usata per quantificare i campioni noti Questo strumento ha il vantaggio di poter salvare la curva come metodo utilizzando fino a un massimo di nove standard Se si desiderasse che vi sia uno s
57. isurano campioni di RNA il rapporto A260 A230 deve essere gt 2 0 un rapporto inferiore solitamente indica la presenza di contaminazione con guanidina tiocianato un reagente utilizzato comunemente nella purificazione dell RNA che assorbe a un intervallo superiore a 230 260 nm Per i campioni di RNA particolarmente utile una scansione della lunghezza d onda metodi dell acido nucleico visualizzano i rapporti A260 A280 e A260 A230 compensano la diluizione e l uso di celle che non hanno un cammino ottico di 10 mm possibile immettere il fattore di diluizione e il cammino ottico della cella Metodi dello strumento 75 Uso della correzione di sfondo La correzione di sfondo a una lunghezza d onda completamente separata dai picchi degli acidi nucleici e delle proteine rispettivamente a 260 e 280 nm viene talvolta utilizzata per compensare gli effetti dell assorbanza di sfondo La lunghezza d onda utilizzata di 320 nm e pu tenendo conto degli effetti di torbidit soluzione tampone ad assorbanza elevata e l uso di celle ad apertura ridotta L uso della correzione di sfondo pu anche rimuovere la variabilit dovuta agli effetti dell uso di celle monouso a basso volume metodi degli acidi nucleici consentono di utilizzare la correzione di sfondo L impostazione della correzione di Sfondo su On produrr risultati diversi da quelli generati con la correzione su Off poich l assorbanza a 320 nm sottratta dall assorbanza a 280 e 230 nm
58. it di dosaggio sono forniti protocolli dettagliati che devono essere seguiti rigorosamente per garantire risultati accurati e Si raccomanda l uso di celle in plastica monouso Per usare uno standard di concentrazione zero includerlo nel numero di standard da inserire e immettere 0 00 per la concentrazione e usarlo quando viene richiesto di immettere lo standard 1 e Viene eseguita un analisi di regressione lineare dei punti di dati dello standard di calibrazione e viene stampato il risultato insieme al coefficiente di correlazione Un coefficiente di correlazione compreso tra 0 95 e 1 00 indica una buona retta 88 Lambda Bio Bio Manuale d uso Metodi Proteina Proteina UV Questo metodo si avvale del dosaggio Christian e Warburg Eseguire la procedura descritta di seguito 1 Premere 2 per aprire la cartella Scienze biologiche solo Lambda Bio 2 Se lo strumento fosse un Lambda Bio premere 6 per aprire la cartella Proteine OPPURE Se lo strumento fosse un Lambda Bio premere 2 per aprire la cartella Proteine 3 Premere 1 per aprire il metodo Proteina UV Verr visualizzata la schermata Proteina UV Parametri Proteina UY Parametri Fattore di diluzione Fattore A280 1 000 1 550 ua ml On a OK HO nnula 4 Selezionare il Cammino ottico utilizzando i tasti freccia sinistra e destra quindi premere il tasto freccia gi Le opzioni sono 0 5 mm 5 mm o 10 mm Lambda Bio o 5 mm o 10 mm
59. la NOTA questo metodo disponibile solo sul Lambda Bio Il metodo Lunghezza d onda multipla pu fornire i valori dell assorbanza fino a 5 lunghezze d onda Eseguire la procedura descritta di seguito 1 Premere 1 per aprire la cartella Applicazioni Verr visualizzata la schermata Applicazioni Applicazioni 1 perdona Tomca O Dati cinetici O Alegere don eA Raono d Spettro o Ri Concentrazione 5 V Curva Standard 2 Premere 2 per aprire il metodo Lunghezza d onda multipla Verr visualizzata la schermata Lunghezza d onda multipla Parametri Lunghezza d onda multipla Parametri Lunghezze d onda 3 Selezionare il numero di Lunghezze d onda quindi premere il tasto freccia gi Le opzioni sono tra 2 e 5 4 Impostare la prima lunghezza d onda 21 utilizzando i tasti numerici o i tasti freccia sinistra e destra quindi premere il tasto freccia gi 5 Ripetere il punto 4 per ciascuna lunghezza d onda 46 Lambda Bio Bio Manuale d uso 6 Premere OK D per avviare le misurazioni Verr visualizzata la schermata dei risultati Lunghezza d onda multipla Lunghezza d onda multipla Campione 280 300 320 340 360 380 400 420 0A 7 Inserire il campione di riferimento e premere fio Questa misurazione di riferimento sar utilizzata per tutti i campioni successivi finch non sar ripetuta 8 Inserire il primo campione e premere V
60. lay attorno all asse x del punto del cursore la modalit asse y ingrandisce il display attorno all asse y del punto del cursore e la modalit assi x e y espande entrambi gli assi nell area circostante il punto del cursore Con i limiti dell asse xo y impostati su on la riduzione permessa solo all interno dei limiti stabiliti Limiti dell asse x limiti dell asse y impostando questa opzione su On si attivano i punti di inizio e fine del grafico desiderato su definito dall utente lunghezze d onda specifiche e o valori di assorbanza gt Premere O per annullare le selezioni premere D per accettarle e visualizzare il grafico desiderato Aggiunge un prefisso al numero del campione e ripristina il numero ascendente al valore desiderato Salva metodo Usare i tasti freccia sinistra e destra per selezionare una cartella e salvare il metodo in Preferiti Metodi 1 9 quindi premere il tasto freccia gi e immettere un nome per il metodo Premere Salva per salvare il metodo Stampa automatica Applicazioni Attiva e disattiva la stampa automatica Per chiudere le opzioni del metodo premere o O o attendere 20 secondi AI termine della misurazione di tutti i campioni premere O per ritornare alla cartella Metodi dello strumento 53 Concentrazione NOTA questo metodo disponibile solo sul Lambda Bio Il metodo Concentrazione consente di eseguire misurazioni della concentrazione tramite la mi
61. le Unit quindi premere il tasto freccia gi possibile immettere un testo contenente massimo 8 caratteri tramite la tastiera o E premere Opzioni 5 per visualizzare la schermata Unit e accedere a un elenco di unit predefinite Auto Il P OK HB Annulla Nella schermata Unit usare i tasti freccia sinistra e destra per selezionare una delle opzioni disponibili Le opzioni sono pg mi pg pl pmol pIi mg dl mmol I pmol l g l mg l ug l U I ppm ppb conc o nessuna La schermata Unit consente inoltre di selezionare il numero dei punti decimali DP visualizzati Le opzioni sono Auto 0 1 e 2 NOTA il risultato sar sempre fissato a 5 cifre significative indipendentemente dal numero di punti decimali selezionato quindi 98768 2 visualizzato come 98768 anche con 1 punto decimale selezionato Premere OK per salvare le opzioni e ritornare alla schermata Applicazioni Le unit possono ancora essere modificate 6 Selezionare il tipo di Regressione dati utilizzando i tasti freccia sinistra e destra quindi premere il tasto freccia gi Le opzioni sono Regressione regressione lineare Regressione zero la retta viene fatta passare per l origine Interpolazione interpolazione lineare o Spline cubica 7 Selezionare la modalit di Calibrazione Le opzioni sono Standards per misurare gli standard preparati o Manuale immissione dei valori di assorbanza tramite la tastiera o Nuovi
62. lizzare le opzioni disponibili 3 Premere 1 per selezionare Nomi di cartelle Nomi di cartelle Cartella Nuovo nome RI b OK BO gnnulla 4 Selezionare la Cartella alla quale si desidera assegnare un nuovo nome utilizzando i tasti freccia sinistra e destra quindi premere il tasto freccia gi 5 Immettere un Nuovo nome per la cartella mediante i tasti alfanumerici 6 Premere OK D per assegnare un nuovo nome alla cartella Blocca cartella 1 Aprire la cartella Metodi 2 Premere per visualizzare le opzioni disponibili 3 Premere 2 per selezionare Blocca cartella 4 Selezionare la Cartella da bloccare utilizzando i tasti freccia sinistra e destra quindi premere il tasto freccia gi Blocca cartella Cartella Codice di accesso 1000 B gt Blocco EB Annulla Uso dello strumento 29 5 Immettere un Codice di accesso per la cartella mediante i tasti alfanumerici o i tasti freccia sinistra e destra 6 Premere Blocco i per bloccare la cartella Sblocca cartella 1 Aprire la cartella Metodi 2 Premere per visualizzare le opzioni disponibili 3 Premere 3 per selezionare Sblocca cartella Sblocca cartella Cartella Codice di accesso 1000 Bo Sblocca m Annulla 4 Selezionare la Cartella da sbloccare utilizzando i tasti freccia sinistra e destra quindi premere il tasto freccia gi 5 Immettere il Codice di accesso per la cartella mediante i tasti alfanumerici
63. lla Nella schermata Unit usare i tasti freccia sinistra e destra per selezionare una delle opzioni disponibili Le opzioni sono pg mi pg pl pmol pIi mg dl mmol I pmol l g l mg l ug l U I ppm ppb conc o nessuna La schermata Unit consente inoltre di selezionare il numero dei punti decimali DP visualizzati Le opzioni sono Auto 0 1 e 2 NOTA il risultato sar sempre fissato a 5 cifre significative indipendentemente dal numero di punti decimali selezionato quindi 98768 2 visualizzato come 98768 anche con 1 punto decimale selezionato Premere OK D per salvare le opzioni e ritornare alla schermata Applicazioni Le unit possono ancora essere modificate 6 Selezionare il tipo di Regressione dati utilizzando le frecce sinistra e destra quindi premere la freccia gi Le opzioni sono Regressione zero la retta viene fatta passare dall origine Regressione regressione lineare Interpolazione interpolazione lineare o Spline cubica 7 Selezionare la modalit Calibrazione utilizzando i tasti freccia destra e sinistra Le opzioni sono Standards per misurare gli standard preparati o Manuale immissione dei valori di assorbanza tramite la tastiera o Nuovi standard per sostituire eventuali standard gi acquisiti 60 Lambda Bio Bio Manuale d uso 8 Se si selezionasse Standards premere il tasto freccia gi e immettere il numero di Repliche Questo determina il numero di
64. lo strumento non riconoscer la cartella che non verr quindi ripristinata La funzione Ripristina tutte le cartelle pu anche essere utilizzata per impostare pi strumenti dello stesso tipo affinch abbiano la stessa struttura di metodi e cartelle Accedere a Esplora risorse nella cartella lt Serial Number gt BACKUP che contiene i metodi che si desidera utilizzare quindi rinominare la cartella lt Instrument Type gt BACKUP quindi possibile eseguire il ripristino normalmente Per sottoporre a backup o ripristinare le cartelle 1 Aprire la cartella Metodi 2 Premere per visualizzare le opzioni disponibili 3 Premere 4 per selezionare Scheda di memoria SD Verr visualizzata la schermata Scheda di memoria SD Scheda di memoria SD Funzionamento Cartella di backup gt Cartella Preferiti E OK HO gnnulla 4 Selezionare la modalit di Funzionamento utilizzando i tasti freccia sinistra e destra quindi premere il tasto freccia gi Le opzioni disponibili sono Esegui backup della cartella Esegui backup di tutte le cartelle Ripristina cartella o Ripristina tutte le cartelle 5 Selezionare la Cartella utilizzando i tasti freccia destra e sinistra 6 Premere OK Di NOTA LED accanto alla scheda si accender durante il salvataggio dei metodi nella scheda Non rimuovere la scheda quando il LED acceso poich potrebbe danneggiare i metodi Per alcuni metodi necessario chiudere il metodo per
65. nare Informazioni su Verr visualizzata la schermata Informazioni su per lo strumento utilizzato 2 Premere OK D per chiudere la finestra e ritornare alla cartella Utilit 40 Lambda Bio Bio Manuale d uso Gestione dei campioni II fascio luminoso viene diretto da DESTRA a SINISTRA attraverso la camera a celle come indicato dalle frecce bianche sull involucro esterno dello strumento Verificare che la cella venga inserita con l allineamento corretto e supporto delle celle fornito con lo strumento accetta celle standard in quarzo vetro o plastica con cammino ottico di 10 mm e L altezza ottica di 15 mm e il volume minimo che pu essere usato di circa 10 pl in una cella ultra micro NOTA quando si utilizzano filtri per calibrazione standard inserirli in modo che la superficie piatta sia rivolta in direzione opposta all estremit a molla del supporto delle celle NOTA per mantenere il vano dei campioni esente da polvere e residui fornito un coperchio Quando lo strumento in funzione conservare il coperchio antipolvere in un luogo sicuro nei pressi dello strumento stesso Metodi dello strumento 42 Lambda Bio Bio Manuale d uso Lunghezza d onda singola NOTA questo metodo disponibile solo sul Lambda Bio Il metodo Lunghezza d onda singola consente di eseguire le misurazioni dell assorbanza A e della trasmittanza percentuale T sui campioni tramite la misurazio
66. ndo si preme OK Regionale 1 Premere 2 per selezionare Regionale Verr visualizzata la schermata Regionale Regionale Formato numero 999 9 HO nnula 2 Selezionare una lingua utilizzando i tasti freccia sinistra e destra quindi premere il tasto freccia gi Le opzioni disponibili sono cinese francese inglese tedesco italiano giapponese o spagnolo Uso dello strumento 37 3 Selezionare il Formato numero il tipo di separatore decimale utilizzando i tasti freccia destra e sinistra Le opzioni sono o 4 Premere OK D per salvare le impostazioni e ritornare alla cartella Utilit Stampante 1 Premere 3 per selezionare Stampante Verr visualizzata la schermata Stampante Stampante Computer USB HO nnula 2 Selezionare On o Off per la stampa automatica utilizzando i tasti freccia sinistra e destra quindi premere la freccia gi Se si attivasse On la Stampa automatica i risultati verrebbero stampati automaticamente quando si effettua una misurazione o quando si esce dall applicazione a seconda del metodo Nell angolo in alto a destra della schermata dei risultati dei metodi verr visualizzata l icona appropriata per l opzione della stampante Se si disattivasse Off la stampa automatica la stampa dovrebbe essere avviata manualmente 3 Selezionare la modalit di invio dei dati Le opzioni sono Integrato la stampante interna Computer USB a un computer
67. ne della quantit di luce che attraversa un campione in relazione a un riferimento che pu essere l aria Eseguire la procedura descritta di seguito 1 Premere 1 per aprire la cartella Applicazioni Verr visualizzata la schermata Applicazioni Applicazioni fur donda O Dati cinetici e x Lunghezza d onda 7 A Rapporto di X multipla Z assorbanza m Spettro o Le Concentrazione e A Curva Standard 2 Premere 1 per aprire il metodo Lunghezza d onda singola Verr visualizzata la schermata Lunghezza d onda singola Parametri Lunghezza d onda singola Parametri Lunghezza d onda Assorbanza HO nnula 3 Impostare la Lunghezza d onda utilizzando i tasti numerici o i tasti freccia sinistra e destra quindi premere il tasto freccia gi 4 Selezionare la Modalit utilizzando i tasti freccia destra e sinistra Le opzioni sono Assorbanza o Trasmissione Metodi dello strumento 43 5 Premere OK D per avviare le misurazioni Verr visualizzata la schermata dei risultati Lunghezza d onda singola Lunghezza d onda singola Campione 625 nm Risultato 0A 6 Inserire il campione di riferimento e premere oz Questa misurazione di riferimento sar utilizzata per tutti i campioni successivi finch non sar ripetuta 7 Inserire il primo campione e premere gt Nella schermata viene visualizzato il risultato alla lunghezza d onda selezionata Utilizzare i
68. o Verr visualizzata la schermata dei risultati Proteina UV Proteina UY Campione Risultato 14 Inserire il campione di riferimento e premere MW Questa misurazione di riferimento sar utilizzata per tutti i campioni successivi finch non sar ripetuta 15 Inserire il primo campione e premere Verr misurata l assorbanza a 260 nm e 280 nm corretta dal valore della lunghezza d onda di sfondo 320 nm se selezionata e viene calcolata la concentrazione della proteina Proteina UY Campione 1 Risultato 16 Ripetere il punto 15 per ciascun campione Metodi dello strumento 91 gt Premere per visualizzare le opzioni disponibili che possibile selezionare tramite i tasti numerici Parametri Viene visualizzata nuovamente la schermata Parametri punto 1 sopra Stampa Stampa il risultato tramite il metodo selezionato Grafico Attiva e disattiva la visualizzazione del grafico Il grafico mostra uno spettro dell intervallo compreso tra 250 nm e 330 nm con i cursori che indicano 230 nm 260 nm 280 nm e se selezionata la correzione di sfondo 320 nm Numero Aggiunge un prefisso al numero del campione e ripristina il numero campione ascendente al valore desiderato Salva metodo Usare i tasti freccia sinistra e destra per selezionare una cartella e salvare il metodo in Preferiti Metodi 1 9 quindi premere il tasto freccia gi e immetter
69. o della piastra 3 Bloccare la piastra e ruotare la manopola per inserire la carta 4 Inserire la carta Talvolta aiuta se si rilascia il blocco della piastra Bloccare la piastra 5 Rimontare il coperchio 112 Lambda Bio Bio Manuale d uso Installazione dell accessorio Bluetooth 1 Rimuovere il cavo elettrico dallo strumento 2 Capovolgere lo strumento ed estrarre le due viti con la chiave esagonale da 3 mm fornita in dotazione Viti 3 Riportare lo strumento nella posizione normale e sollevare il coperchio degli accessori verticalmente verso l alto per rimuoverlo 4 Rimuovere la fascetta che tiene il cavo avvolto Accessori 113 5 Inserire il cavo dell accessorio nel modulo Bluetooth are 6 Inserire le due alette aggetti sul modulo Bluetooth negli alloggiamenti interni nella base dell involucro 7 Abbassare il coperchio dell accessorio verticalmente verso il basso sullo strumento incastrando la scheda dei circuiti stampati negli alloggiamenti interni del coperchio degli accessori Interni del coperchio degli accessori 8 Capovolgere lo strumento e rimontare le viti 9 Collegare il cavo di alimentazione 114 Lambda Bio Bio Manuale d uso 10 Accendere lo strumento e aprire la cartella Utilit 11 Premere 3 per aprire la cartella Stampante 12 Utilizzando i tasti freccia selezionare Computer Bluetooth come opzione per la stampante Stampante Stampa automatica of
70. o e il valore di assorbanza presso punti di dati misurati Utilizzare i tasti freccia su e gi per ingrandire o ridurre 68 Lambda Bio Bio Manuale d uso gt Premere per visualizzare le opzioni disponibili che possibile selezionare tramite i tasti numerici Parametri Viene visualizzata nuovamente la schermata Parametri Stampa Stampa i dati nella schermata dei risultati tramite il metodo selezionato Stampa dati Stampa tutti i dati Posizionare il cursore SU to Posizionare il cursore SU tn Imposta la posizione to il punto d inizio della pendenza e dei calcoli dA nella posizione attuale del cursore Il valore viene memorizzato per i campioni successivi Imposta la posizione t il punto d inizio della pendenza e dei calcoli dA nella posizione attuale del cursore Il valore viene memorizzato per i campioni successivi Pendenza Attiva e disattiva la visualizzazione della pendenza calcolata Numero campione NOTA se i punti di dati racchiusi tra to e t non rientrassero nell intervallo dello strumento ovvero gt 2 5 A o lt 0 3 A questa opzione apparirebbe in grigio non disponibile Aggiunge un prefisso al numero del campione e ripristina il numero ascendente al valore desiderato Salva metodo Stampa automatica Usare i tasti freccia sinistra e destra per selezionare una cartella e salvare il metodo in Preferiti Metodi 1 9 quindi premere il tasto freccia g
71. o i tasti freccia sinistra e destra 6 Premere Sblocca D per sbloccare la cartella Scheda di memoria SD Se nello strumento installata una Scheda di memoria SD possibile accedere alla cartella delle opzioni della Scheda di memoria SD Le opzioni Esegui backup della cartella o Esegui backup di tutte le cartelle consentono di copiare una cartella dei metodi o tutte le cartelle dei metodi rispettivamente nel proprio strumento o nella Scheda di memoria SD I metodi da pi strumenti possono essere salvati nella stessa scheda metodi vengono salvati in una directory predefinita lt Serial Number gt BACKUP Ad esempio 1000 BACKUP METHODS Methods 1 La Scheda di memoria SD pu essere inserita nel lettore di schede collegato al PC possibile rinominare i metodi fino a un massimo di 24 caratteri e spostarli da una cartella all altra Le opzioni Ripristina cartella o Ripristina tutte le cartelle consentono di ripristinare il contenuto della cartella o quello della directory di backup della Scheda di memoria SD Se si seleziona Ripristina cartella oppure Ripristina tutte le cartelle tutti i metodi nella cartella saranno sovrascritti Se stata rinominata la cartella di uno strumento il nome della cartella verr sovrascritto con quello della directory di backup della Scheda di memoria SD 30 Lambda Bio Bio Manuale d uso NOTA Se si rinomina una cartella nella Scheda di memoria SD e poi si prova a ripristinarne il contenuto
72. o o vicini dello strumento Informazioni sulla sicurezza 13 Apertura della confezione e installazione e Questa apparecchiatura progettata per essere installata in conformit con il Canadian Electrical Code CEC Parte 1 CSA C22 1 e CSA C22 2 No 0 e Controllare lo strumento per verificare che non presenti danni causati durante il trasporto Se si rilevassero danni accedere alla guida alla risoluzione dei problemi sul sito web di PerkinElmer all indirizzo http www perkinelmer com LambdaBioXLSSupport e seguire le istruzioni fornite Se non si avesse accesso al sito web rivolgersi all assistenza clienti see Appendice 2 Recapiti dell assistenza clienti a pagina 123 e Verificare che il sito di installazione previsto sia conforme alle condizioni ambientali per l utilizzo sicuro Solo per uso in interni Intervallo di temperatura compreso tra 5 C e 35 C Umidit relativa massima dell 80 fino a 31 C con riduzione lineare al 50 a 40 C NOTA se si utilizzasse lo strumento in una stanza soggetta a variazioni estreme di temperatura durante il giorno potrebbe essere necessario ripetere la calibrazione spegnendo e riaccendendo lo strumento finch non si stabilisce l equilibrio termico 2 3 ore Se lo strumento fosse appena stato disimballato o fosse stato conservato in un ambiente freddo occorrerebbe attendere 2 3 ore che raggiunga l equilibrio termico nel laboratorio prima dell accensione In questo modo si evi
73. ome sopra quindi premere il tasto freccia gi 70 8 10 Lambda Bio Bio Manuale d uso Utilizzando i tasti freccia sinistra e destra selezionare se applicare una correzione di Sfondo a entrambe le lunghezze d onda 1 e 2 Se si attivasse la correzione di sfondo impostandola su On immettere la Lunghezza d onda 3 dalla quale ottenere la correzione di fondo Premere Avanti gt Verr visualizzata la schermata Rapporto di assorbanza Parametri Rapporto di assorbanza Parametri Cammino ottico 1 000 Fattore di diluzione 1 000 HB indietro Selezionare il Cammino ottico utilizzando i tasti freccia sinistra e destra quindi premere il tasto freccia gi Le opzioni sono 5 mm o 10 mm Conoscendo il Fattore di diluizione immetterlo utilizzando i tasti numerici quindi premere il tasto freccia gi e passare al punto 12 L intervallo disponibile compreso tra 1 00 e 9999 OPPURE Non conoscendo il fattore di diluizione premere Opzioni per visualizzare la schermata Fattore di diluizione Fattore di diluzione 0 000 Immettere il Volume del campione utilizzando i tasti numerici quindi premere il tasto freccia gi L intervallo disponibile compreso tra 0 01 e 9999 11 12 13 14 15 16 17 Metodi dello strumento 71 Immettere il volume del Diluente utilizzando i tasti numerici L intervallo disponibile compreso tra 0 01 e 999
74. omparto campioni durante la misurazione degli stessi In condizioni di utilizzo normale questo fascio contenuto all interno dell unit e si verifica l emissione di radiazioni UV dal sistema Tuttavia occorre prestare attenzione a che non vengano posti oggetti riflettenti nel fascio durante la misurazione dei campioni per evitare che il fascio venga riflesso al di fuori del sistema L esposizione prolungata al fascio pu causare danni oculari permanenti Limitazioni identiche si applicano se il Supporto dei campioni viene rimosso dall unit per la pulizia Questa operazione deve essere eseguita solo con lo strumento scollegato dall alimentazione elettrica All interno dell unit sono presenti tensioni elevate Gli interventi di manutenzione e riparazione devono essere effettuati solo da personale esperto idoneo a intervenire su questi strumenti Informazioni sulla sicurezza 11 Sebbene con contenga materiali a rischio biologico l unit potrebbe tuttavia essere utilizzata con campioni a rischio biologico Data la natura per uso generale di questi strumenti e l ampia variet di impieghi ai quali sono esposti non possibile definire le esatte procedure di decontaminazione per i numerosi tipi di campioni analizzati Tali procedure devono essere stabilite dall utilizzatore o dall addetto alla salute e alla Sicurezza prima di usare lo strumento Indicazioni al riguardo sono reperibili nel documento M29 A3 Protection of Laborat
75. onda Campione 562 nm Riferimento Assorbanza Concentrazione 0 000 A Regressione dati Regressione 0A 16 Se si selezionasse Manuale inserire il campione di riferimento e premere e Questa misurazione di riferimento sar utilizzata per tutti i campioni successivi finch non sar ripetuta OPPURE Se si selezionasse Standards passare al punto 17 Metodi dello strumento 97 17 Inserire il primo campione e premere gt Verr misurata l assorbanza del campione quindi ne viene misurata e visualizzata la concentrazione Lunghezza d onda Campione 562 nm 1 Assorbanza Concentrazione pn 0 b 0 7 Regressione dati 9 Regressione Unit ua ml 18 Ripetere il punto 17 per ciascun campione gt Premere per visualizzare le opzioni disponibili che possibile selezionare tramite i tasti numerici Parametri Viene visualizzata nuovamente la schermata Parametri Stampa Stampa tramite il metodo selezionato Grafico Attiva e disattiva la visualizzazione del grafico cursori visualizzano i valori dell assorbanza e della corrispondente concentrazione relativi all ultimo campione misurato Numero campione Aggiunge un prefisso al numero del campione e ripristina il numero ascendente al valore desiderato Salva metodo Usare i tasti freccia sinistra e destra per selezionare una cartella e salvare il metodo in Preferiti
76. oni a 260 nm Quindi strumenti diversi dello stesso tipo o di tipo diverso possono generare rapporti leggermente diversi a causa delle variazioni nella precisione delle lunghezze d onda Tuttavia si pu prevedere che ciascuno strumento generi risultati coerenti al suo interno Abs PURE NUCLEIC ACID POLY dAdT 1 50 1 25 1 00 Wavee260 0 Abs 40 700 j 0 50 N Wave 200 0 Abs 0 383 e j x 025 ni x x uo _ 200 0 225 0 250 0 275 0 300 0 325 0 350 0 Wavalength Figura 12 Scansione spettrale dell acido nucleico Notare i seguenti punti nello spettro e assorbanza massima prossima a 260 nm e assorbanza minima prossima a 230 nm e picco piatto prossimo a 260 nm e pendenza accentuata a 280 nm e assorbanza molto bassa a 320 nm Anche la concentrazione della soluzione influisce sulla precisione delle letture A260 A280 Se una soluzione fosse troppo diluita le letture potrebbero essere al limite di rilevamento strumentale e i risultati potrebbero variare poich il picco a 260 nm e la pendenza a 280 nm potrebbero essere meno distinti dall assorbanza di fondo Questa una ragione per cui il valore A260 deve essere maggiore di 0 1 A per misurazioni precise Anche un assorbanza elevata a 230 nm pu indicare la presenza di impurit La lunghezza d onda di 230 nm prossima all assorbanza massima dei legami peptidici A questa lunghezza d onda EDTA e altri sali tampone si assorbono Quando si m
77. ory Workers from Occupationally Acquired Infections Approved Guidelines pubblicato dallo US Clinical and Laboratory Standards Institute Il vano dei campioni pu essere rimosso e pulito immergendolo per almeno 30 minuti in un disinfettante idoneo al rischio biologico cui stato esposto Il vano deve quindi essere sciacquato con acqua distillata sterile e fatto asciugare Analogamente possibile pulire le superfici esterne dell unit con un disinfettante adeguato utilizzando una salvietta o un panno morbido Eventuali versamenti interni devono essere puliti con materiale assorbente attraverso l apertura del vano campioni e ugualmente decontaminato il vano con salviette imbevute di disinfettante Certificati di decontaminazione Se occorresse restituire lo strumento necessario un certificato di decontaminazione certificati di decontaminazione sono disponibili al seguente indirizzo Web o forniti dall assistenza clienti http www perkinelmer com LambdaBioXLSSupport responsabilit dell utilizzatore garantire un ambiente operativo sicuro per il tecnico o per il personale con un adeguata valutazione dei rischi e se pertinente con adeguate procedure di decontaminazione prima dell inizio del lavoro Prodotti chimici Utilizzare conservare e smaltire i prodotti chimici necessari per le analisi in conformit con le raccomandazioni del produttore e delle norme locali in materia di sicurezza Vapori tossici Se si utilizz
78. ppm ppb conc o nessuna La schermata Unit consente inoltre di selezionare il numero dei punti decimali DP visualizzati Le opzioni sono Auto 0 1 e2 errer rreren areren rererere rrer reer ree NOTA il risultato sar sempre fissato a 5 cifre significative indipendentemente dal numero di punti decimali selezionato quindi 98768 2 visualizzato come 98768 anche con 1 punto decimale selezionato Premere OK D per salvare le opzioni e ritornare alla schermata Assorbanza Concentrazione Applicazioni Le unit possono ancora essere modificate 100 Lambda Bio Bio Manuale d uso 6 Premere OK per avviare le misurazioni Verr visualizzata la schermata dei risultati Assorbanza Concentrazione Di seguito riportata la schermata dei risultati per la modalit Fattore Assorbanza Concentrazione Lunghezza d onda Campione 260 nm Assorbanza Concentrazione Fattore 1 000 7 Inserire il campione di riferimento e premere Mi Questa misurazione di riferimento sar utilizzata per tutti i campioni successivi finch non sar ripetuta 8 Per le misurazioni in modalit Assorbanza e Fattore inserire il campione e premere gt quindi passare al punto 11 Verr visualizzata l assorbanza o la concentrazione del campione Assorbanza Concentrazione Lunghezza d onda Campione 260 nm 1 Assorbanza Concentrazione 0 037 A Fatto
79. ra del cursore Premere 1 per inserire uno spazio 22 Lambda Bio Bio Manuale d uso Accensione dello strumento NOTA se lo strumento fosse appena stato disimballato o fosse stato conservato in un ambiente freddo occorrerebbe attendere 2 3 ore affinch raggiunga l equilibrio termico nel laboratorio prima dell accensione In questo modo si evita un errore di calibrazione causato dalla formazione di condensa interna Non accendere e spegnere rapidamente lo strumento per evitare di ATTENZIONE danneggiare l alimentatore Attendere almeno 30 secondi prima di riavviare lo strumento gt Accendere lo strumento tramite l interruttore di accensione spegnimento sulla tastiera come mostrato nella Figura 3 Lo strumento esegue una serie di controlli diagnostici NOTA se durante la calibrazione fosse visualizzato un messaggio di errore permere il tasto OK per rilanciare la procedura Ad ogni modo dopo tre tentativi verr visualizzata la pagina iniziale consigliabile NOT utilizzare lo strumento Prendere nota del messaggio visualizzato e cercare nella guida Troubleshooting Guide sul sito PerkinElmer Dopo l accensione e la calibrazione viene visualizzata la pagina iniziale predefinita Per aprire un metodo o una cartella premere il numero corrispondente sulla tastiera Lambda Bio Spectrometer Pura O EA Proteina O Pny fana O pacs E Oligo 0 Es Utilit o x Assorbanza Concentrazione
80. rare la quantit nell intervallo prescelto L intervallo disponibile compreso tra 0 01 e 9999 Premere OK D per avviare le letture 12 13 gt gt Metodi dello strumento 67 Verr visualizzata la schermata dei risultati Dati cinetici 2 5 2 0 1 5 1 0 0 5 0 0 0 0 0 2 0 4 0 6 0 8 1 0 Ao An dA Pendenza ug ml R2 Inserire il campione di riferimento e premere MM Questa misurazione di riferimento sar utilizzata per tutti i campioni successivi finch non sar ripetuta Inserire il primo campione e premere D per avviare l analisi Il tempo di analisi viene visualizzato nella parte inferiore della schermata e i dati di assorbanza vengono tracciati sul grafico con il procedere della misurazione La tabella sotto il grafico visualizza Aq il valore di assorbanza a ty inizio del calcolo An il valore di assorbanza a tn fine del calcolo dA la variazione in assorbanza la Pendenza e il parametro di regressione R della pendenza calcolata La concentrazione viene calcolata con i parametri selezionati nella schermata Parametri 2 dA Finale A o Pendenza il nome della colonna della tabella dei Risultati dipende dalle unit prescelte 0 4 0 3 0 2 0 1 0 0 0 0 0 2 04 06 0 8 1 0 Ao An dA Pendenza Risultato R2 0 001 0 008 0 007 0 209 0 007 0 1924 Campione 2 Tempo 00 00 30 A 0 031 Utilizzare i tasti freccia sinistra e destra per spostare il cursore e visualizzare il temp
81. re 1 000 0 037 OPPURE Per le misurazioni Standard inserire lo standard e premere Unit ua mi Verr visualizzata la schermata Esegui Standard BO Esegui Esegui Standard EB fANnnula 9 Premere Esegui per eseguire lo standard Il fattore viene calcolato e poi visualizzato Assorbanza Concentrazione Lunghezza d onda 260 nm Campione Standard Assorbanza 0 066 A Fattore 758 Concentrazione 50 0 Unit ua ml 10 Inserire il primo campione e premere gt Verr visualizzata la concentrazione del campione Assorbanza Concentrazione Lunghezza d onda 400 nm Campione 1 Assorbanza Concentrazione 0 096 A Fattore 758 72 8 Unit ua ml 11 Ripetere il punto 10 per ciascun campione Metodi dello strumento 101 102 Lambda Bio Bio Manuale d uso gt Premere per visualizzare le opzioni disponibili che possibile selezionare tramite i tasti numerici Parametri Viene visualizzata nuovamente la schermata Parametri Stampa Stampa tramite il metodo selezionato Esegui Standard Viene visualizzata nuovamente la schermata Esegui Standard Numero campione Aggiunge un prefisso al numero del campione e ripristina il numero ascendente al valore desiderato Salva metodo Usare i tasti freccia sinistra e d
82. re tramite i tasti numerici Parametri Viene visualizzata nuovamente la schermata Parametri Stampa Stampa tramite il metodo selezionato Numero campione Aggiunge un prefisso al numero del campione e ripristina il numero ascendente al valore desiderato Salva metodo Usare i tasti freccia sinistra e destra per selezionare una cartella e salvare il metodo in Preferiti Metodi 1 9 quindi premere il tasto freccia gi e immettere un nome per il metodo Premere Salva per salvare il metodo Stampa automatica Attiva e disattiva la stampa automatica gt Per chiudere le opzioni del metodo premere o O o attendere 20 secondi gt AItermine di tutte le misurazioni premere O per ritornare alla pagina iniziale 106 Lambda Bio Bio Manuale d uso Accessori 108 Lambda Bio Bio Manuale d uso Accessori e prodotti di consumo Prodotti di consumo accessori e pari di ricambio possono essere ordinati direttamente da PerkinElmer Per ulteriori informazioni visitare il sito di PerkinElmer all indirizzo http www perkinelmer com Numero parte Accessori prodotti di consumo L7110230 Modulo stampante Lambda Bio XLS L7110231 Lambda Bio XLS Print Utility e cavo di stampa L7110232 Carta di ricambio per stampante Lambda Bio XLS 20 rotoli L7110233 Accessorio Bluetooth Lambda Bio XLS Presso PerkinElmer inoltre disponibile una gamma di celle e microcelle idonee per l uso con lo strumento Lambda Bio Bio
83. ssare al punto 17 Metodi dello strumento 63 17 Inserire il primo campione e premere gt Verr misurata l assorbanza del campione quindi ne viene misurata e visualizzata la concentrazione Curva Standard Lunghezza d onda Campione 1 Assorbanza Concentrazione zE 2 0 1 Regressione dati 9 Regressione zero Unit ua ml 18 Ripetere il punto 17 per ciascun campione gt Premere per visualizzare le opzioni disponibili che possibile selezionare tramite i tasti numerici Parametri Viene visualizzata nuovamente la schermata Parametri Stampa i dati nella schermata dei risultati tramite il metodo selezionato Grafico Attiva e disattiva la visualizzazione del grafico cursori visualizzano i valori dell assorbanza e della corrispondente concentrazione relativi all ultimo campione misurato Numero campione Aggiunge un prefisso al numero del campione e ripristina il numero ascendente al valore desiderato Salva metodo Usare i tasti freccia sinistra e destra per selezionare una cartella e salvare il metodo in Preferiti Metodi 1 9 quindi premere il tasto freccia gi e immettere un nome per il metodo Premere Salva per salvare il metodo Stampa automatica Attiva e disattiva la stampa automatica gt Per chiudere le opzioni del metodo premere o O o attendere 20 secondi gt AI termine della misurazione di tutti i campioni premere O per ritornare alla
84. sto metodo disponibile solo sul Lambda Bio Il metodo Spettro consente di acquisire uno spettro e di determinare le altezze massime e le posizioni Eseguire la procedura descritta di seguito 1 Premere 1 per aprire la cartella Applicazioni Verr visualizzata la schermata Applicazioni Applicazioni fue oa ba cinetici Lunghezza d onda M Rapporto di e a multipla Z assorbanza A mM Spettro o Le Concentrazione e A Curva Standard 2 Premere 3 per aprire il metodo Spettro Verr visualizzata la schermata Spettro Parametri Spettro Parametri unghezza d onda iniziale Lunghezza d onda finale 500 nm Assorbanza OK 3 Impostare la lunghezza d onda Iniziale utilizzando i tasti numerici o i tasti freccia sinistra e destra quindi premere il tasto freccia gi 4 Impostare la lunghezza d onda Finale utilizzando i tasti numerici o i tasti freccia sinistra e destra quindi premere il tasto freccia gi Metodi dello strumento 49 5 Selezionare la Modalit utilizzando i tasti freccia sinistra e destra quindi premere il tasto freccia gi Le opzioni sono Assorbanza o Trasmissione 6 Premere OK D per avviare le misurazioni Verr visualizzata la schermata dei risultati Spettro 400 450 500 550 600 650 700 fi A adm A Campione i j A 550nm 7 Inserire il campione di riferimento e premere MSi Questa misurazione di riferimento sar
85. sura controllo e per utilizzo in laboratorio e EN 61010 2 101 Prescrizioni particolari per apparecchiature mediche per la diagnosi in vitro e BS EN 591 Istruzioni per l uso relative a strumenti per diagnosi in vitro ad uso professionale e BS EN 13612 Valutazione delle prestazioni di dispositivi medici per la diagnosi in vitro e EN 61326 2 3 Compatibilit elettromagnetica standard sulle emissioni generiche di apparecchi elettrici di misura controllo e per utilizzo in laboratorio e EN 61326 Compatibilit elettromagnetica standard sulle emissioni generiche di apparecchi elettrici di misura controllo e per utilizzo in laboratorio Classificati come Classe B per emissioni condotte e irradiate Questo dispositivo reca la marcatura WEEE Waste Electrical and Electronic Equipment ai sensi della Direttiva europea 2002 96 CE relativa allo smaltimento delle apparecchiature elettriche ed elettroniche Per ulteriori informazioni consultare il manuale sulla sicurezza Lambda Bio XLS Safety Manual L6050014 Sullo strumento sono presenti numerose etichette e simboli di avvertenza volti a informare l utilizzatore dell esistenza di potenziali pericoli o della necessit di particolari cautele Prima di dare avvio all installazione esaminare questi simboli e il relativo significato Lo strumento soggetto ai rischi riportati di seguito La fonte UV contenuta all interno dell unit genera un fascio di luce che attraversa il c
86. surazione della quantit di luce che attraversa un campione in relazione a un riferimento che pu essere l aria La concentrazione viene determinata misurando l assorbanza a una lunghezza d onda specifica quindi moltiplicando per un fattore Se si conoscesse il fattore in anticipo lo si potrebbe inserire nel metodo Se non si conoscesse il fattore sarebbe possibile misurare uno standard di concentrazione nota e il fattore verrebbe successivamente calcolato dallo strumento Eseguire la procedura descritta di seguito 1 Premere 1 per aprire la cartella Applicazioni Verr visualizzata la schermata Applicazioni Applicazioni ir Jonda O Dati cinetici Lunghezza d onda V Rapporto di e a multipla t Z assorbanza AN Spettro o Le Concentrazione ok 2 Premere 4 per aprire il metodo Concentrazione Verr visualizzata la schermata Concentrazione Parametri Curva Standard Concentrazione Parametri Lunghezza d onda 260 nm Fattore HO nnula 3 Immettere la Lunghezza d onda utilizzando i tasti numerici o i tasti freccia sinistra e destra quindi premere il tasto freccia gi 54 Lambda Bio Bio Manuale d uso 4 Selezionare la Modalit utilizzando i tasti freccia sinistra e destra quindi premere il tasto freccia gi Le opzioni sono Fattore nei casi in cui si immette un fattore noto Standard nei casi in cui il fattore viene calcolato
87. ta un errore di calibrazione causato dalla formazione di condensa interna Lo strumento deve essere collocato su un piano stabile e uniforme in grado di sostenerne il peso circa 4 5 kg con uno spazio libero circostante sufficiente per la circolazione dell aria Questo strumento deve essere collegato alla presa elettrica con il cavo e l alimentatore in dotazione Pu essere usato a 100 240 V 50 60 Hz Lo strumento deve essere posizionato in modo che il cavo elettrico possa essere facilmente scollegato dall unit nel caso in cui si verifichi un guasto o si crei una situazione di pericolo Collocare lo strumento in un atmosfera esente da polvere e vapori corrosivi Prima dell uso leggere per intero il manuale d uso Accendere lo strumento tramite il pulsante ON OFF sulla tastiera dopo il collegamento alla presa elettrica Lo strumento eseguir una serie di controlli autodiagnostici Se l apparecchiatura non venisse utilizzata nel modo specificato dal presente documento la protezione interna alla stessa potrebbe essere compromessa e annullare la garanzia AVVERTENZA 14 Lambda Bio Bio Manuale d uso Installazione dello strumento 16 Lambda Bio Bio Manuale d uso Apertura della confezione Prestare molta attenzione durante l installazione dello strumento e ATTENZIONE SEguire le procedure descritte nel presente manuale 1 Controllare che siano disponibili gli articoli riportati nella tabella sottost
88. tandard di concentrazione zero occorrerebbe includerlo nel numero di standard da inserire e immettere 0 00 per la concentrazione quindi quando viene richiesto usare un controllo negativo per includere lo standard zero Eseguire la procedura descritta di seguito 1 Premere 1 per aprire la cartella Applicazioni Verr visualizzata la schermata Applicazioni Applicazioni jr donda O Dati cinetici Lunghezza d onda ri Rapporto di yA multipla d assorbanza ba Spettro 4 FP Concentrazione e Curva Standard 2 Premere 5 per aprire il metodo Esegui Standard Verr visualizzata la schermata Esegui Standard Parametri Curva Standard Parametri Lunghezza d onda Regressione dati 430 nm Regressione zero Standard Calibrazione Standards Repliche Nessuno HO full Metodi dello strumento 59 3 Immettere la Lunghezza d onda desiderata utilizzando i tasti numerici o i tasti freccia sinistra e destra quindi premere il tasto freccia gi 4 Immettere il numero di Standard da usare nella curva degli standard quindi premere il tasto freccia gi Le opzioni sono 1 9 5 Immettere le Unit quindi premere il tasto freccia gi possibile immettere un testo contenente massimo 8 caratteri tramite la tastiera o premere Opzioni per visualizzare la schermata Unit e accedere a un elenco di unit predefinite Auto b OK HO Annu
89. tasti freccia sinistra e destra per spostare il cursore e visualizzare il valore nella posizione del cursore 20 nm dalla lunghezza d onda impostata Lunghezza d onda singola Campione 1 625 nm Risultato 0 131 Unit A 8 Ripetere il punto 7 per ciascun campione 44 Lambda Bio Bio Manuale d uso gt Premere per visualizzare le opzioni disponibili che possibile selezionare tramite i tasti numerici Parametri Viene visualizzata nuovamente la schermata Parametri Stampa Stampa i risultati tramite il metodo selezionato A T Passa dalla modalit Assorbanza alla modalit Trasmissione e viceversa Stampa grafico Stampa il grafico Questa opzione visualizzata in grigio se non vi sono dati disponibili Numero campione Salva metodo Aggiunge un prefisso al numero del campione e ripristina il numero ascendente al valore desiderato Usare i tasti freccia sinistra e destra per selezionare una cartella e salvare il metodo in Preferiti Metodi 1 9 quindi premere il tasto freccia gi e immettere un nome per il metodo Premere Salva per salvare il metodo Stampa automatica Attiva e disattiva la stampa automatica gt Per chiudere le opzioni del metodo premere o O o attendere 20 secondi gt AI termine della misurazione di tutti i campioni premere O per ritornare alla cartella Applicazioni Metodi dello strumento 45 Lunghezza d onda multip
90. tella Acidi nucleici solo Lambda Bio 3 Premere 2 per aprire il metodo RNA Metodi dello strumento 79 Verr visualizzata la schermata RNA Parametri RNA Parametri Cammino ottico 10 mm Fattore di diluzione 1 000 4 Selezionare il Cammino ottico utilizzando i tasti freccia sinistra e destra quindi premere il tasto freccia gi Le opzioni sono 0 5 mm 5 mm o 10 mm Lambda Bio o 5 mm o 10 mm Lambda Bio 5 Se si conoscesse il Fattore di diluizione immetterlo utilizzando i tasti numerici quindi passare al punto 9 L intervallo disponibile compreso tra 1 00 e 9999 OPPURE Se non si conoscesse il Fattore di diluizione premere Verr visualizzata la schermata Fattore di diluizione Fattore di diluzione 6 Immettere il Volume del campione utilizzando i tasti numerici quindi premere il tasto freccia gi L intervallo disponibile compreso tra 0 01 e 9999 7 Immettere il volume del Diluente utilizzando i tasti numerici L intervallo disponibile compreso tra 0 01 e 9999 8 Premere OK D per calcolare il fattore di diluizione e ritornare alla schermata Parametri 80 10 11 12 13 14 Lambda Bio Bio Manuale d uso Selezionare se utilizzare o meno la correzione di Sfondo a 320 nm utilizzando i tasti freccia sinistra e destra quindi premere la freccia gi Selezionare le Unit di misura utilizzando i tasti freccia sinis
91. terminare la stampa Per ulteriori informazioni consultare il manuale d uso dell utilit di stampa del Lambda Bio XLS Lambda Bio XLS Print Utility User s Guide L6050015 Opzioni metodo Uso dello strumento 31 gt Premere per visualizzare le opzioni disponibili nella cartella Metodi che possibile selezionare tramite i tasti numerici Opzione Testo Funzione Elimina metodo Elimina il metodo Metodo di blocco Consente all utente di bloccare il metodo Metodo di sblocco Elimina metodo Consente all utente di sbloccare il metodo 1 Aprire la cartella Metodi appropriata 2 Premere per visualizzare le opzioni disponibili 3 Premere 1 per selezionare Elimina metodo 4 Selezionare il metodo da eliminare utilizzando i tasti freccia sinistra e destra Elimina metodo Nome del metodo Lunghezza d onda singola gt P B gt Elimina HO nnula 5 Premere Elimina D per eliminare il metodo Metodo di blocco 1 Aprire la cartella Metodi appropriata 2 Premere per visualizzare le opzioni disponibili 32 Lambda Bio Bio Manuale d uso 3 Premere 2 per selezionare Metodo di blocco Metodo di blocco Nome del metodo 4 Lunghezza d onda singola Codice di accesso 1000 ie Blocco HO Annulla 4 Selezionare il metodo da bloccare utilizzando i tasti freccia sinistra e destra quindi premere il tasto freccia gi 5 Selezionare un
92. tra e destra quindi premere la freccia gi Le opzioni sono pg ml ng pl e pg pl Immettere il Fattore usando i tasti numerici L intervallo disponibile compreso tra 0 01 e 9999 Premere OK per avviare le misurazioni Verr visualizzata la schermata dei risultati RNA A230 Campione A260 A280 A320 Concentrazione A260 A280 A260 A230 Inserire il campione di riferimento e premere MMi Questa misurazione di riferimento sar utilizzata per tutti i campioni successivi finch sar ripetuta Inserire il primo campione e premere gt Verr misurata l assorbanza a 260 nm e 280 nm corretta dal valore della lunghezza d onda di sfondo 320 nm se selezionata e viene calcolato il rapporto tra i due valori di assorbanza La concentrazione viene calcolata in base all assorbanza a 260 nm A230 0 185A Campione A260 0 386 A 1 A280 0 007 A l A320 0 000 A Concentrazione mm 15 44 5 514 A260 A230 2 086 Metodi dello strumento 81 15 Ripetere il punto 14 per ciascun campione gt Premere per visualizzare le opzioni disponibili che possibile selezionare tramite i tasti numerici Parametri Viene visualizzata nuovamente la schermata Parametri Stampa Stampa tramite il metodo selezionato Grafico Attiva e disattiva la visualizzazione del grafico Il grafico mostra uno spettro dell intervallo compreso tra 220 nm e 320 nm con i cursori che in
93. zione delle basi questo pu essere calcolato conoscendo la sequenza delle basi Concentrazione A260 x Fattore Lo strumento utilizza fattori 50 40 e 33 come valori predefiniti rispettivamente per DNA RNA e oligonucleotidi e compensa la diluizione e l uso di celle che non hanno un cammino ottico di 10 mm possibile immettere il fattore di diluizione e il cammino ottico della cella Nel metodo Oligo possibile calcolare il fattore dalle basi composite immettendo le proporzioni delle 4 basi Controlli di purezza degli acidi nucleici necessaria una purificazione di ampia portata per separare le impurit delle proteine dagli acidi nucleici estratti dalle cellule Il rapporto A260 A280 fornisce un indicazione della purezza Tuttavia si tratta solo di un indicazione e non di una valutazione definitiva Preparati di DNA ed RNA puri presentano rapporti attesi rispettivamente 1 8 e 2 0 eventuali deviazioni da questi valori indicano la presenza di impurit nel campione ma occorre essere cauti nell interpretazione dei risultati 74 Lambda Bio Bio Manuale d uso La lettura di 260 nm viene rilevata in prossimit della parte superiore di un picco ampio nello spettro dell assorbanza per gli acidi nucleici La lettura di 280 nm viene rilevata su una pendenza accentuata dove piccole variazioni della lunghezza d onda causano grandi variazioni dell assorbanza e quindi hanno un maggiore effetto sul rapporto A260 A280 rispetto alle variazi

Lambda Bio/Bio+ Manuale d`uso

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