Inserto MULTIVYSION PGT
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1. SpectrumAqua fluorescentes contaminan la se al en el conjunto de filtros de paso de banda simple azul y las se ales fluorescentes SpectrumBlue brillantes contaminan la se al en el conjunto de filtros de paso de banda simple aguamarina Las se ales fluorescentes SpectrumGold brillantes pueden contaminar la se al d bilmente en los conjuntos de filtros de paso de banda simple verde o los conjuntos de filtros de paso de banda doble verde rojo Observe los resultados de la hibridaci n como sigue 1 Encuentre la c lula diana con un microscopio de contraste de fase con poco aumento 100 aumentos usando las coordenadas que se registraron anteriormente 2 Una vez que la c lula se ha localizado sin mover la escala del microscopio cambie a luz fluorescente usando el conjunto de filtros de paso de banda simple aguamarina y localice de nuevo la c lula con poco aumento 100 aumentos Una vez que la c lula se ha localizado de nuevo con fluorescencia cambie a un aumento mayor 1000 aumentos para analizar Si se usa el conjunto de filtros de paso de banda doble aguamarina azul para el an lisis de las sondas marcadas con SpectrumAqua y SpectrumBlue localice y analice como sigue Localice la c lula usando un conjunto de filtros de paso de banda simple aguamarina Analice cada una de las otras sondas usando la siguiente secuencia de filtros 1 paso de banda doble aguamarina azul 2 paso de banda doble verde roja 3 paso de banda simpl2. sonda MultiVysion PGT del congelador a 20 C y deje que alcance la temperatura ambiente En caso de que los portaobjetos de muestras est n almacenados s quelos del congelador a 20 C y deje que alcancen la temperatura ambiente 4 Coloque el portaobjetos de muestras en la superficie del HYBrite Si quedan aperturas vac as rell nelas con portaobjetos en blanco 5 Aplique 3 pl de soluci n de sondas MultiVysion al rea del portaobjetos que contiene la c lula 6 Ponga un cubreobjetos de 12 mm de di metro sobre el rea diana inmediatamente despu s de aplicar la soluci n de sondas Ponga con cuidado el cubreobjetos sobre la soluci n de sondas primero un borde para evitar que se creen burbujas de aire 7 Corte un trozo de adhesivo Parafilm del tama o del portaobjetos y col quelo sobre el portaobjetos y el cubreobjetos ste impide que la sonda se seque durante la hibridaci n 8 Cierre la tapa del sistema HYBrite y ponga en marcha el programa de hibridaci n fusi n El programa iniciar la fase de fusi n y seguir con el proceso de 43 horas de hibridaci n T Nota El tiempo m ximo recomendado de hibridaci n son 8 horas no obstante 4 horas son lo ptimo Tiempos de hibridaci n mayores pueden tener como consecuencia una tinci n nuclear alta lo que puede ocultar las se ales de la sonda Lavado de los portaobjetos 9 Durante la hibridaci n llene una jarra de Coplin con 0 4X SSC 0 3 NP 40 y col quelo en un
3. usuario de este instrumento Procedimiento Materiales necesarios e Vysis MultiVysion PGT Multi color Probes sondas Materiales necesarios pero no suministrados HCI 12N para el ajuste del pH de las soluciones de lavado NaOH 1N para el ajuste del pH de las soluciones de lavado Jarras de Coplin de vidrio Term metro calibrado Pinzas Probeta graduada de 1000 ml Agitador magn tico Etanol Microcentrifuga Puntas de pipeta 1 ul a 10 pl Micropipetas 1 ul a 10 yl Pehach metro Portaobjetos limpios de vidrio para microscopio Agua purificada Temporizador Mezclador V rtex Ba o de agua 73 C Microscopio de fluorescencia Adhesivo Parafilm Antifade II Metanol cido ac tico glacial Citrato de sodio Seroalb mina bovina 20X SSC NP 40 Calentador de portaobjetos Elecci n de los par metros del sistema HYBrite Si desea m s informaci n sobre la utilizaci n del sistema HYBrite consulte la Gu a del usuario de este instrumento 1 Humedezca dos toallas de papel con agua y col quelas en los surcos laterales de la superficie caliente del HYBrite No vierta agua directamente en el surco 2 Encienda el HYBrite Programe la temperatura de fusi n Melt Temp a 73 C y el tiempo de fusi n Melt Time a 5 minutos Fije la temperatura de hibridaci n Hyb Temp a 37 C y el tiempo de hibridaci n Hyb Time a 4 horas Deje que el sistema HYBrite alcance la temperatura de 37 C Hibridaci n 3 Saque la
4. Vysis MultiVysion PGT Multi color FISH Probe Kit E CE es Vysis MultiVysion PGT Multi color FISH Probe Kit 8L69 10 B8L693 48 8472 R1 RE N mero de referencia LOT Producto sanitario para diagn stico in vitro 2 NE 20 C Almac nese a una temperatura inferior o igual a 20 C a REP Representante autorizado Fabricante legal A Clave de los s mbolos utilizados N mero de lote Fecha de caducidad Consulte las instrucciones de uso Precauci n cons ltense los documentos adjuntos Finalidad de uso Estas sondas para la hibridaci n in situ por fluorescencia FISH permiten detectar el n mero de copias de los cromosomas 13 18 21 X e Y Resumen y explicaci n del ensayo El diagn stico gen tico preimplantacional para el cribado de aneuploid as PGD AS mediante el uso de sondas marcadas con FISH multicolor se ha convertido en una herramienta de diagn stico potente para analizar el estado de la ploid a de varios cromosomas simult neamente Los estudios cl nicos indican que el PGD AS aumenta la tasa de implantaci n y disminuye los casos de aborto espont neo en mujeres con malos resultados despu s de una fecundaci n in vitro IVF edad materna avanzada AMA gt 35 a os fallos repetidos de fecundaci n in vitro RIF aborto espont neo repetido RSA 123 El PGD AS se puede practicar en cuerpos polares o blastocistos La aplicaci n sobre cuerpos polar
5. ba o de agua a 73 C Con un term metro calibrado compruebe la temperatura de la soluci n en el interior de la jarra antes de introducir los portaobjetos para lavarlos La soluci n deber estar a 73 C 1 C 10 Llene un segunda jarra con 2X SSC 0 1 NP 40 y d jela a temperatura ambiente 11 Una vez que finaliza el programa HYBrite saque los portaobjetos del HYBrite Retire el adhesivo Parafilm y los cubreobjetos del de los portaobjeto s 12 Coloque el los portaobjeto s en 0 4X SSC 0 3 NP 40 inmediatamente despu s de retirar el cubreobjetos Cuando todos los portaobjetos est n en la jarra 4 como m ximo inc belos durante 5 minutos Nota No lave m s de 4 portaobjetos a la vez en una misma jarra El hecho de colocar un portaobjetos en la jarra no debe llevar m s de unos segundos si tarda m s aseg rese de que no permanezca ning n portaobjetos en el tamp n de lavado m s de 5 minutos Tras retirar los portaobjetos espere a que la temperatura alcance los 73 C 1 C antes de lavar m s portaobjetos 13 Pasados 5 minutos retire el los portaobjeto s de la soluci n de lavado y col quelo s en la jarra de Coplin con 2X SSC 0 1 NP 40 a temperatura ambiente Incube durante 1 minuto 14 Retire el los portaobjeto s de la soluci n de lavado y col quelo s en posici n vertical en lugar oscuro como por ej un caj n sobre una toallita de papel hasta que est n completamente seco s 15 Dispense 3 ul de soluci n Anti
6. e amarilla Nota Se recomienda observar la muestra o la imagen formada en esta secuencia evitar que se extienda el fotoblanqueo Al seguir esta secuencia los fluor foros m s sensibles son los primeros en exponerse a la luz Bibliograf a 1 Munn S Sandalinas M Escudero T et al Improved implantation after preimplantation genetic diagnosis of aneuploidy Reprod Biomed Online 2003 7 1 91 7 Munn S Chen S Fischer J et al Preimplantation genetic diagnosis reduces pregnancy loss in women aged 35 years and older with a history of recurrent miscarriages Fertil Steril 2005 84 2 331 5 Bloechle M Marr S Guillot P et al P 698 Polar body analysis of 314 unfertilized oocytes what can we learn Fertil Steril 2006 86 3 Suppl 2 5392 3 Staessen C Platteau P Van Assche et al Comparison of blastocyst transfer with or without preimplantation genetic diagnosis for aneuploidy screening in couples with advanced maternal age a prospective randomized controlled trial Hum Reprod 2004 19 12 2849 58 Kahraman S Benkhalifa M Donmez E et al The results of aneuploidy screening in 276 couples undergoing assisted reproductive techniques Prenat Diagn 2004 24 4 307 11 Baart EB Martini E Van Opstal D Screening for aneuploidies of ten different chromosomes in two rounds of FISH a short and reliable protocol Prenat Diagn 2004 24 12 955 61 Verlinsky Y and Kuliev A eds Preimplantation Diagnosis of Genetic Diseases A New Tech
7. erivados de los peligros de la sustancia y frases S consejos de prudencia en relaci n con el uso de la sustancia T R61 Q S35 Elim nense los residuos del producto y sus recipientes con todas las precauciones posibles S45 En caso de accidente o malestar ac dase inmediatamente al m dico si es posible mu stresele la etiqueta S36 39 sense indumentaria adecuada y protecci n para los ojos la cara S53 Ev tese la exposici n rec bense instrucciones especiales antes del uso Riesgo durante el embarazo de efectos adversos para el feto Preparaci n de los reactivos Prepare las siguientes soluciones para la preparaci n de la c lula blastom rica y del ensayo MultiVysion PGT FISH Preparaci n de las soluciones de trabajo para la preparaci n de la c lula blastom rica Soluci n hipot nica BSA al 0 6 citrato de sodio al 1 para la preparaci n de la c lula blastom rica Mezcle 0 39 Seroalb mina bovina BSA 0 559 Citrato de sodio 50 ml Agua purificada Mezcle bien Filtre con un filtro de 0 2 um Almac nese a una temperatura entre 2 C y 8 C sela en el plazo de 1 mes Fijador de Carnoy Mezcle 25 ml de cido ac tico 75 ml de metanol Dispense en un frasco de vidrio con tapa Invierta el frasco suavemente varias veces para que se mezcle bien el contenido Almac nese a 20 C Uselo en el plazo de 2 horas Des chelo despu s del uso Metanol Dispense aproxi
8. es es menos invasiva pero no detecta las enfermedades hereditarias por v a paterna ni las alteraciones que se generan durante la primera fase del desarrollo embrionario Vysis MultiVysion PGT Multi color FISH Probe Kit son sondas DNA FISH complementarias dise adas para analizar el n mero de copias de los cromosomas en una sola c lula blastom rica Vysis MultiVysion PGT Multi color FISH Probe Kit detecta las siguientes aneuploid as cromos micas que cubren m s del 80 de todas las anomal as gen ticas en el feto cromosoma 13 s ndrome de Patau 18 s ndrome de Edward 21 s ndrome de Down y X Y p ejemplo s ndrome de Klinefelter y de Turner Vysis MultiVysion PGT Multi color FISH Probe Kit se ha usado en varios estudios 3 15 6 Staessen et al analizaron en un estudio amplio al azar y controlado 289 ciclos con recuperaci n de ovocitos de 400 pacientes ambulatorias elegidas al azar usando un procedimiento FISH de dos vueltas Evaluaron los cromosomas X Y 13 18 21 vuelta 1 y 16 22 vuelta 2 en dos blast meros MultiVysion PGT Kahraman et al 5 seleccionaron 276 parejas que se hab an sometido a fecundaci n in vitro incluyendo grupos AMA RIF RSA y AGCM morfolog a celular de gametos anormales usando MultiVysion PGT Debido a que se observaron tasas altas de aneuploid a en este grupo el estudio suger a que la AGCM se puede considerar como una de las principales indicaciones para hacer diagn stico gen tico preim
9. ezcle bien Ajuste el pH de 7 0 a 7 5 con NaOH 1N con ayuda de un pehach metro con electrodo pH de vidrio Filtre la soluci n con filtro de 0 45 um de poro Vierta 70 ml en una jarra de Coplin y mant ngala a temperatura ambiente Almacene la soluci n no utilizada en un recipiente cerrado a temperatura ambiente hasta 6 meses Deseche la soluci n utilizada en los ensayos al final de la jornada o a ada agua purificada hasta alcanzar un volumen de 1000 ml despu s de ajustar el pH Preparaci n de c lulas blastom ricas humanas para hibridaci n in situ por fluorescencia Este procedimiento se lleva a cabo una vez que se ha realizado la biopsia de blast meros La biopsia de blast meros individuales se hace por disecci n mec nica Procedimiento Extraiga la c lula blastom rica e introd zcala en una microgota de medio de cultivo en una placa de Petri de 35 mm 1 Prepare soluci n hipot nica 2 Prepare la jarra de Coplin con metanol 3 Grabe un peque o c rculo en el fondo de la placa de Petri de 35 mm x 10 mm y a ada 3 ml de soluci n hipot nica El c rculo identifica el rea diana sobre la que colocar la c lula blastom rica lo que permite una relocalizaci n m s sencilla 4 Anote los datos identificativos y la informaci n correspondiente de la muestra en la cara de vidrio esmerilado del portaobjetos Limpie previamente el portaobjetos con fijador de Carnoy y un pa o sin pelusas 5 Caliente la punta de una p
10. fade Il sobre el rea diana y tape la soluci n Antifade Il con un cubreobjetos de 12 mm de di metro Evite que se formen burbujas de aire No a ada tinci n de contraste DAPI ya que sta borrar la se al de la sonda marcada con SpectrumBlue La c lula o cromosomas pueden localizarse con el conjunto de filtros de paso de banda simple Aqua puesto que el DNA HP marcado con fluor foro SpectrumAqua que contiene la mezcla de sondas permite identificar la c lula y determinar los l mites entre las distintas c lulas Nota En caso de que se desee usar otro tipo de tinci n de contraste general con fines de identificaci n y localizaci n de la c lula se recomienda usar tinci n de contraste de ioduro de propidio diluido La tinci n de contraste de ioduro de propidio de Vysis N de referencia 7J06 01 se debe diluir 1 parte a 6 partes volumen volumen de Vysis Antifade II N de referencia 6J29 01 Mezcle bien y apl quela al rea diana Utilice un conjunto de filtros de paso de banda simple naranja para localizar la c lula 16 Observe los portaobjetos con un microscopio de fluorescencia y conjuntos de filtros adecuados v ase m s abajo 17 Las muestras hibridadas se pueden almacenar hasta un mes a una temperatura de 20 C sin que se produzca deterioro relevante de las se ales fluorescentes de la sonda Observaci n de los resultados La observaci n y el an lisis correctos de la hibridaci n de MultiVysion PGT depende e
11. fluorescente y el m nimo ruido de fondo y proporcionan las se ales fluorescentes mejor diferenciadas Adem s las se ales superpuestas que son el resultado de la posici n del DNA diana dentro del n cleo celular se distinguen de forma ptima con los conjuntos de filtros de paso de banda simple Este m todo de an lisis proporciona la interpretaci n de la se al m s sencilla y certera Las im genes de la sonda se pueden obtener tambi n usando los 5 filtros de paso de banda simple individuales Nota Si usa los conjuntos de filtros de paso de banda simple para observar o formar la imagen la se al de la sonda SpectrumBlue debe ser observada o formada la imagen en primer lugar Esta secuencia se recomienda para evitar que se extienda el fotoblanqueo observando primero los fluor foros m s sensibles Si se prefiere el filtro de paso de banda simple para la observaci n o formaci n de la imagen se deben usar los conjuntos de filtros de paso de banda simple como sigue 1 Conjunto de paso de banda simple azul para SpectrumBlue 2 Conjunto de paso de banda simple aguamarina para SpectrumAqua 3 Conjunto de paso de banda simple verde para SpectrumGreen 4 Conjunto de paso de banda simple amarillo para SpectrumGold 5 Conjunto de paso de banda simple rojo para SpectrumRed Nota Es posible apreciar contaminaci n bleed through de fluorescencia en los conjuntos de filtros de paso de banda simple Las se ales de
12. hibridaci n 14 Inmediatamente antes de la hibridaci n o almacenamiento del portaobjetos en caso de que la hibridaci n no se vaya a realizar ese mismo d a extraiga el portaobjetos de la soluci n de metanol y d jelo secar al aire 15 Con la escala Vernier del microscopio o la referencia England Finder localice y registre la posici n de la c lula en el portaobjetos Estas coordenadas ayudar n a la localizaci n de la c lula tras la hibridaci n 16 Grabe otro c rculo m s grande en el fondo del portaobjetos alrededor de la c lula con un marcador de carburo Defina el rea en la que se aplican los 3 ul de soluci n de sondas con un marcador permanente en el fondo del portaobjetos 17 Si el ensayo MultiVysion no se va a realizar de inmediato coloque el portaobjetos en una caja de portaobjetos con tapa y almac nelos a 20 C hasta su uso Uso de los portaobjetos de control Los portaobjetos de control deben procesarse al mismo tiempo que los portaobjetos de muestras para comprobar el rendimiento del ensayo Se recomienda procesar los portaobjetos de control cada d a que se realice el an lisis FISH Se recomiendan los portaobjetos de control no hibridados Vysis ProbeChek MultiVysion PGT N de referencia 5J07 01 Procedimiento de hibridaci n in situ con fluorescencia MultiVysion Elecci n de los par metros del sistema HYBrite Si desea m s informaci n sobre la utilizaci n del sistema HYBrite consulte la Gu a del
13. i n hipot nica en el portaobjetos a la vez que la observa constantemente en el microscopio invertido Observe con atenci n la c lula blastom rica hasta que casi se haya secado por completo Justo antes de que la soluci n hipot nica seque por completo aspire una peque a cantidad de soluci n fijadora aproximadamente 2 pl a 3 yl dentro de la misma pipeta atenuada y dispense la soluci n fijadora sobre la c lula blastom rica 11 Observe constantemente la c lula en el microscopio invertido mientras que la soluci n fijadora empieza a secar Justo antes de que se complete el proceso de secado coloque otra gota de soluci n fijadora de la pipeta atenuada sobre la c lula Repita el paso 11 varias veces hasta que el citoplasma que rodea la c lula se haya disuelto dejando nicamente el n cleo Nota Debe colocar una nueva gota de soluci n fijadora antes de que la primera se seque Para una correcta hibridaci n de la sonda es crucial que el citoplasma se disuelva por completo 12 Grabe con el punz n y sobre la superficie del portaobjetos dos c rculos alrededor del n cleo celular Grabe un c rculo ligeramente m s grande que el otro esto es un c rculo dentro de otro y la c lula en el centro del m s peque o El c rculo que rodea la c lula facilitar la localizaci n de sta tras el procedimiento de hibridaci n 13 Coloque el portaobjetos en la jarra de Coplin que contiene el metanol hasta que est listo para iniciar la
14. ipeta capilar de 25 ul con un soplete tipo Microtorch y tire a la vez de la punta de la pipeta caliente de forma que la extienda y cree una punta con un di metro interior de 60 um a 100 um Aseg rese de que la punta extendida de la pipeta tiene un corte plano y no afilado Si la punta es afilada hay riesgo de da ar la c lula blastom rica Rompa si fuera necesario de nuevo la punta para crear una punta lisa Antes de extraer el blast mero se debe revisar el tama o de la apertura de la pipeta para asegurar que sea m s grande que el del blast mero 6 Aspire una peque a cantidad aproximadamente 2 pul a 3 ul de soluci n hipot nica en la pipeta 7 Posicione con ayuda de un estereomicroscopio la c lula blastom rica en la placa de Petri 8 Aspire con suavidad el blast mero dentro de la pipeta y transfi ralo a la placa de Petri que contiene la soluci n hipot nica coloc ndolo en el c rculo grabado 9 Deje que la c lula blastom rica permanezca en la soluci n hipot nica durante 5 minutos Retire el blast mero de la soluci n hipot nica aspir ndola con una peque a cantidad de soluci n hipot nica dentro de la pipeta atenuada Procure no empujar la c lula blastom rica demasiado al fondo de la pipeta Transfiera la c lula a un portaobjetos junto con la peque a cantidad de soluci n hipot nica 10 Transfiera el portaobjetos al microscopio invertido Deje que la c lula blastom rica empiece a secarse en la gota de soluc
15. madamente 70 ml de metanol absoluto en una jarra de Coplin Usese inmediatamente Tape la jarra de Coplin siempre que no la use Preparaci n de las soluciones de trabajo para el ensayo MultiVysion 20X SSC pH 5 3 Mezcle 66 y 20X SSC 200 ml Agua purificada 250 ml Volumen final Mezcle bien Mida el pH a temperatura ambiente con un pehach metro Ajuste el pH a 5 3 con HCI concentrado si fuera necesario Obtenga un volumen total de 250 ml Filtre con un filtro de 0 45 um Almacene la soluci n en un recipiente cerrado a temperatura ambiente un m ximo de 6 meses 0 3 NP 40 en 0 4X SSC Soluci n de lavado poshibridaci n Mezcle 950 ml Agua purificada 20 ml 20X SSC pH 5 3 3 ml NP 40 1000 ml Volumen final A ada agua purificada hasta conseguir un volumen total de 1000 ml Mezcle bien Ajuste el pH de 7 0 a 7 5 con NaOH 1N con ayuda de un pehach metro con electrodo pH de vidrio si fuese necesario Filtre la soluci n con filtro de 0 45 um de poro Almacene la soluci n no utilizada en un recipiente cerrado a temperatura ambiente hasta 6 meses Deseche la soluci n utilizada en los ensayos al final de la jornada o a ada agua purificada hasta alcanzar un volumen de 1000 ml despu s de ajustar el pH 0 1 NP 40 en 2X SSC Soluci n de lavado poshibridaci n Mezcle 100 ml 20XSSC pH 5 3 899 ml Agua purificada 1 ml NP 40 1000 ml Volumen final A ada agua purificada hasta conseguir un volumen total de 1000 ml M
16. n gran medida del uso de los conjuntos de filtros ptimos y de que los microscopios de fluorescencia est n bien ajustados Puede que su laboratorio no disponga de todos los conjuntos de filtros necesarios para observar o formar la imagen de los resultados MultiVysion PGT Para m s informaci n sobre las especificaciones de los conjuntos de filtros p ngase en contacto con el Departamento de Asistencia T cnica de Abbott Molecular Todos los conjuntos de filtros se pueden obtener a trav s de Abbott Molecular Inc Para observar los resultados de MultiVysion PGT se recomienda como m nimo disponer de los siguientes conjuntos de filtros 1 Conjunto de paso de banda doble Blue Aqua 2 Conjunto de paso de banda doble Green Red 3 Conjunto de paso de banda simple Yellow 4 El conjunto de paso de banda simple Aqua opcional para la aclaraci n de se ales que se observan en el conjunto de paso de banda doble azul aguamarina cuando la agudeza visual para distinguir el azul y el aguamarina es deficiente o si la intensidad de la se al aguamarina de la sonda no es ptima Los conjuntos de filtros de paso de banda simple est n tambi n disponibles para cada una de las cinco sondas marcadas con fluorescencia SpectrumBlue SpectrumAqua SpectrumGreen SpectrumGold y SpectrumRed para una aclaraci n m xima de cada una de las se ales FISH por separado Los conjuntos de filtros de paso de banda simple proporcionan m xima intensidad de brillo
17. nique for Assisted Reproduction New York Wiley Liss 1994 Si desea m s informaci n o hacer alg n pedido p ngase en contacto con Datos del fabricante Abbott Molecular Inc 1300 East Touhy Avenue Des Plaines IL 60018 N mero de tel fono en los EE UU 800 553 7042 N mero de tel fono desde fuera de los EE UU 001 224 361 7000 Fax 001 224 361 7522 Correo electr nico help abbottmolecular com Direcci n del representante autorizado ABBOTT Max Planck Ring 2 65205 Wiesbaden Alemania Tel fono 49 6122 580 Correo electr nico help abbottmolecular com MultiVysion ProbeChek SpectrumRed SpectrumBlue SpectrumGold SpectrumAqua SpectrumGreen SpectrumOrange SpectraVysion HYBrite CEP LSI y Vysis son marcas comerciales de Abbott Molecular Inc en varios pa ses Patente de EE UU n 5 447 841 con autorizaci n exclusiva para Vysis por la Universidad de California incluye DNA bloqueante y sondas de secuencia nica como sondas LSI de Vysis Las sondas de fluorescencia de marcado directo LSI CEP y WCP de Vysis est n protegidas por la patente de EE UU n 5 491 224 Los m ltiples productos de sondas de DNA de marcado directo para FISH de Vysis est n protegidos por la patente de EE UU 5 663 319 Abbott Molecular Inc EC REP ABBOTT Des Plaines IL 60018 USA Max Planck Ring 2 65205 Wiesbaden Germany 49 6122 580 2009 Abbott Laboratories www abbottmolecular com Agost
18. o 2009 c Abbott
19. plantacional PGD M s all el estudio determin el PGD AS con la ayuda de MultiVysion PGT como una herramienta til para incrementar la posibilidad de xito de la fecundaci n in vitro en parejas con un mal pron stico sometidas a t cnicas de reproducci n asistida 5 Descripci n de la sonda Vysis MultiVysion PGT Multi color Probes son una combinaci n de cinco sondas de DNA de cinco colores hom logas a regiones espec ficas en los cromosomas 13 18 21 X e Y Cada una de las sondas est marcada directamente con uno de los fluor foros de Vysis La mezcla de sondas se compone de LSI 13 sonda de DNA que abarca el gen RB1 13q14 marcada con SpectrumRed c Abbott CEP 18 sonda de DNA sat lite alfa D18Z1 18p11 1 q11 1 marcada con SpectrumAqua LSI 21 sonda de DNA que corresponde al locus D21S5341 D21S342 D21S339 EGR y D218338 21q22 13 21q22 2 marcada con SpectrumGreen CEP X sonda de DNA sat lite alfa DXZ1 que corresponde a Xp11 1 q11 1 marcada con SpectrumBlue CEP Y sonda de DNA sat lite alfa DYZ3 que corresponde a Yp11 1 q11 1 marcada con SpectrumGold El DNA de placenta humana marcado con fluor foro SpectrumBlue SpectrumAqua SpectrumOrange tambi n se incluye en la mezcla de sondas para proporcionar una tinci n nuclear que no interfiera con la se al fluorescente de la sonda Las sondas tambi n incluyen el DNA bloqueante sin marcar para suprimir secuencias contenidas en los locus diana que son comunes a ot
20. ros cromosomas Reactivos Vysis MultiVysion PGT Multi color Probes sondas N de referencia 30 111080 30 yl 10 ensayos Sondas de DNA marcadas con fluor foros para los cromosomas 13 18 21 X e Y premezcladas en el tamp n de hibridaci n que contienen sulfato de dextrano formamida y SSC Almacenamiento 20 C Vysis MultiVysion PGT Multi color FISH Probe Kit debe 1 almacenarse a una temperatura igual o inferior a 20 C protegido de la luz La fecha de caducidad aparece en el exterior del envase y en el vial Descomposici n Los fluor foros son fotosensibles Para limitar esta descomposici n maneje las soluciones y los portaobjetos que contengan fluor foros en condiciones de luz reducida Lleve a cabo todos los pasos que no requieran luz periodos de incubaci n lavados etc en la oscuridad Condiciones para el transporte Vysis MultiVysion PGT Multi color FISH Probe Kit se transporta en nieve carb nica Si recibe alg n reactivo que no cumple con las recomendaciones de la etiqueta o est da ado p ngase en contacto con el Servicio de Asistencia T cnica de Abbott Molecular Advertencias y precauciones IVD Producto sanitario para diagn stico in vitro Para uso exclusivo en diagn stico in vitro Vysis MultiVysion PGT Multi color FISH Probes ha sido clasificada seg n las directivas de la Comunidad Europea CE como T xica T A continuaci n se indican las frases R que indican los riesgos espec ficos d
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