GlobalFiler Express PCR Amplification Kit
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1. bajas para su n mero de ciclos optimizados 3 Centrifugue la placa para asegurarse de que los discos se sumergen en el Prep n Go Buffer 4 Calcule el volumen de cada componente necesario para preparar las reacciones con ayuda de la tabla siguiente Componente de reacci n Volumen por reacci n Master Mix 6 0 pl Primer Set 6 0 pl Nota Incluya reacciones adicionales en los c lculos para compensar la p rdida que se produce durante las transferencias de reactivos IMPORTANTE Este kit ha sido optimizado para un volumen de reacci n PCR de 15 ul para superar la inhibici n de la PCR prevista al amplificar muestras sin purificar El uso de un volumen de reacci n PCR m s bajo puede reducir la capacidad de las caracter sticas qu micas del kit para generar perfiles completos de repeticiones cortas en t ndem 5 Prepare los reactivos Descongele el Master Mix y el Primer Set y a continuaci n agite durante 3 segundos y centrifugue brevemente antes de abrir los tubos o frascos IMPORTANTE La descongelaci n solo es necesaria durante el primer uso del kit Despu s del primer uso los reactivos se conservan a una temperatura de entre 2 a 8 C y por tanto no requieren su descongelaci n posterior No vuelva a congelar los reactivos 6 Pipetee los vol menes necesarios de los componentes en un tubo de polipropileno de tama o apropiado 7 Agite la mezcla de reacci n durante 3 segundos y luego centrif guel2. REFERENCIA R PIDA applied biosystems GlobalFiler Express PCR Amplification Kit oy h fescinaogis PCR Setup Untreated Paper Substrate Pub No 4481777 Rev A Translated from English Publication Number 4480705 Rev A Nota Si desea conocer las recomendaciones sobre seguridad y riesgos biol gicos consulte la secci n Seguridad en el documento GlobalFiler Express PCR Amplification Kit User Guide Pub no 4477672 Para cada uno de los productos qu micos consulte las fichas de seguridad SDS y siga las instrucciones de manipulaci n indicadas Use protectores oculares vestimenta protectora y guantes apropiados E pesunen del produciO iinopdedaiadabbli E E N E s 1 Ml EYerreqUisitOS mA AAA AA SEAR AAA AAN 1 E Pautas para la preparaci n de muestras oooooooccccrnn rr 1 E Preparaci n delas TEACCIONES huma coi A a E D 2 E Realice la reacci n en cadena de la polimerasa y la electroforesis CapilaT oooooccccoconccrrrccnr rro 3 E Garantia limitada de producto tind Ra EAN e A EEANN 3 Resumen del producto El GlobalFiler Express Kit 200 reacciones Part no 4476609 o 1000 reacciones Part no 4474665 es un ensayo multiplex de repeticiones cortas en t ndem que amplifica 21 loci de repetici n autos micos Amelogenina 1 locus de repeticiones cortas en t ndem Y y 1 locus de inserci n borrado Y indel Y Est optimizado para permitir la amplificaci n directa de los siguientes tipos de muestras de una sola
3. a brevemente 8 Dispense 12 ul de la mezcla de reacci n en cada pocillo de reacci n de un MicroAmpY Optical 96 Well Reaction Plate El volumen final en cada pocillo es 15 ul mezcla de reacci n m s Prep n Go Buffer y muestra o control positivo 9 Cierre herm ticamente la placa con MicroAmpY Clear Adhesive Film Part no 4306311 o MicroAmp Optical Adhesive Film Part no 4311971 2 Referencia r pida sobre el GlobalFiler Express PCR Amplification Kit PCR Setup Untreated Paper Substrate IMPORTANTE Recomendamos cerrar herm ticamente la placa con pel cula adhesiva para obtener un cierre uniforme de todos los pocillos y evitar la evaporaci n No utilice tapas pues puede que no ofrezcan un cierre uniforme en todos los pocillos IMPORTANTE Si utiliza el termociclador 9700 con bloque de plata o de plata chapado con oro ponga un MicroAmp9 Compression Pad Part no 4312639 en la parte superior de la placa para impedir todav a m s la evaporaci n durante el termociclado El Veriti Thermal Cycler no requiere una almohadilla de compresi n 10 Centrifugue la placa a 3000 rpm durante 20 segundos en una centr fuga de sobremesa con reposaplacas Realice la reacci n en cadena de la polimerasa y la electroforesis capilar Para realizar la amplificaci n de la PCR y la electroforesis capilar CE consulte los documentos GlobalFiler Express PCR Amplification Kit PCR Amplification and CE Quick Reference Card Pub n
4. arris Micro Punch no toque el mbolo presione suavemente y gire 1 4 de vuelta y a continuaci n expulse el disco dentro del pocillo correspondiente en la placa de reacci n e Para perforaci n autom tica consulte la gu a del usuario del instrumento de perforaci n de disco autom tico o semiautom tico para obtener las instrucciones pertinentes technologies Preparaci n de las reacciones 1 A ada Prep n Go Buffer Part no 4467079 a la placa de reacci n A este estos pocillo s de una MicroAmpC Optical 96 Well Des Reaction Plate Anadir Control negativo 3 pl de Prep n Go Buffer Muestras de test 3 ul de Prep n Go Buffer Control positivo e Para 25 y 26 ciclos 0 ul de Prep n Go Buffer e Para 27 ciclos 1 ul de Prep n Go Buffer e Para 28 ciclos 2 ul de Prep n Go Buffer 2 A ada muestras a la placa de reacci n A este estos pocillo s de una MicroAmp Optical 96 Well Reaction z ai Plate Anadir Control negativo Disco en blanco 1 2 mm Muestras de test Disco de muestras 1 2 mm Control positivo e Para 25 y 26 ciclos 3 ul de Control DNA 007 IMPORTANTE No a ada un disco en blanco al pocillo de control e Para 27 ciclos 2 pl de Control DNA 007 positivo e Para 28 ciclos 1 ul de Control DNA 007 Nota Los vol menes de control positivo son cantidades sugeridas y pueden ajustarse si las alturas de los picos son demasiado altas o demasiado
5. ento son propiedad de Life Technologies Corporation o de sus respectivos titulares Headquarters o 5791 Van Allen Way Carlsbad CA 92008 USA Phone 1 760 603 7200 Toll Free in USA 800 955 6288 For support visit lifetechnologies com support technologies Uifetechnologies com October 2012
6. fuente e Muestras de sangre o de mucosa yugal recogidas en sustratos de papel tratado descrito en el documento de referencia r pida Pub no 4481768 e Muestras de sangre o de mucosa yugal recogidas en sustratos de papel sin tratar y tratadas con Prep n Go Buffer descrito en este documento de referencia r pida e Muestras de mucosa yugal recogidas en sustratos de torunda y tratadas con Prep n Go Buffer descrito en el documento de referencia r pida Pub no 4481759 Prerrequisitos Antes de comenzar coloque esta gu a en el rea del laboratorio donde se realicen las reacciones en cadena de la polimerasa PCR Pautas para la preparaci n de muestras e Siest procesando una muestra de sangre recogida en un sustrato de papel sin tratar perfore tan cerca del centro de la muestra como sea posible para garantizar una intensidad de pico ptima Si aumenta el tama o de la perforaci n puede producirse inhibici n durante la amplificaci n de la PCR e Si est utilizando un Bode Buccal DNA Collector perfore tan cerca de la punta del dispositivo Bode Buccal Perforetan de recogida de ADN como sea posible para garantizar una intensidad de pico ptima Si aumenta DNA cerca de la el tama o de la perforaci n puede producirse inhibici n durante la amplificaci n de la PCR Collector punta como sea posible e Para perforaci n manual coloque la punta de un Harris Micro Punch de 1 2 mm en la tarjeta sujete el ca n del H
7. o 4481786 y GlobalFiler Express PCR Amplification Kit User Guide Pub no 4477672 Garant a limitada de producto Life Technologies Corporation y o sus filiales garantizan sus productos conforme a lo expuesto en los t rminos y condiciones generales de venta de Life Technologies expresados en el sitio web de Life Technologies en www lifetechnologies com termsandconditions Si tiene cualquier duda p ngase en contacto con Life Technologies en www lifetechnologies com support Limitado al uso forense o a las pruebas de paternidad La informaci n contenida en esta gu a est sujeta a cambios sin previo aviso EXENCI N DE RESPONSABILIDADES LIFE TECHNOLOGIES CORPORATION Y O SUS FILIALES NO OTORGAN NINGUNA GARANT A CON RESPECTO AL PRESENTE DOCUMENTO SEA EXPRESA O IMPLICITA LO QUE INCLUYE ENTRE OTRAS GARANT AS DE COMERCIABILIDAD DE ADECUACI N A UNA FINALIDAD CONCRETA O DE AUSENCIA DE INFRACCIONES EN LA MEDIDA PERMITIDA POR LA LEY EN NING N CASO SE PODR EXIGIR A LIFE TECHNOLOGIES Y O SUS FILIALES NINGUNA RESPONSABILIDAD CONTRACTUAL EXTRACONTRACTUAL DERIVADA DE NINGUNA GARANT A O DE NINGUNA LEY NI BAJO NING N OTRO SUPUESTO POR DA OS ESPECIALES INDICENTALES INDIRECTOS PUNITIVOS M LTIPLES O CONSECUENTES EN RELACI N CON O DERIVADOS DEL PRESENTE DOCUMENTO LO QUE INCLUYE ENTRE OTRAS POSIBILIDADES EL USO DEL MISMO O 2012 Life Technologies Corporation Reservados todos los derechos Las marcas mencionadas en el presente docum
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