Lysesatz Equipo BD GeneOhm™ Lysis Kit di lisi BD GeneOhm
Contents
1. La trousse BD GeneOhm Lysis kit est congue pour la lyse rapide de cellules et de spores provenant de diff rents types d chantillons Reactifs Trousse BD GeneOhm Lysis Kit 100 r actions Tampon d chantillon Sample Buffer 120 X 1 mL Tampon Tris EDTA Tube de lyse Lysis tube 100 tubes Billes de verre Pr cautions Ne pas utiliser la trousse si le sceau de s curit sur la boite ext rieure a t bris Ne pas utiliser les r actifs si la pochette de protection est ouverte ou endommag e lors de sa r ception Refermer les pochettes protectrices au moyen de la fermeture a glissi re apr s chaque emploi Ne pas utiliser les r actifs apr s la date de p remption Ne pas changer les capuchons des r actifs entre eux puisqu ils peuvent tre contamin s et fausser les r sultats du test Il est recommand d utiliser des micropipettes munies d embouts filtre d placement direct st riles jetables Utiliser un nouvel embout pour chaque chantillon ou r actif Toujours manipuler les chantillons comme s ils taient infectieux et appliquer les pr cautions d usage telles que d crites dans Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories et dans le document M29 du CLSI Porter des v tements de protection et des gants jetables pour la manipulation des r actifs Se laver soigneusement les mains apr s utilisation Ne pas pipeter avec la bouche Ne pas fumer boire ou ma2. 2 Vortexer haute vitesse pendant 5 minutes La dur e peut varier selon le type d chantillon Pour le traitement de plusieurs chantillons un adaptateur a positions multiples peut tre utilis 3 Cenirifuger le tube de lyse a faible vitesse pendant 2 a 5 secondes pour faire descendre le contenu au fond du tube 4 Chauffer 95 2 C pendant deux 2 minutes Utiliser un bloc chauffant a sec ou un bain marie 5 Placer le tube de lyse sur la glace ou sur un bloc r frig rant Notes 1 Dilution du lysat Pour diluer un lysat ajouter le volume appropri de tampon d chantillon au tube de lyse et placer sur la glace ou sur un bloc r frig rant 2 Entreposage du lysat Le lysat peut tre congel 20 5 C pour usage ult rieur si n cessaire Un cycle de cong lation d cong lation peut liminer l effet inhibiteur de certaines substances sur la PCR P0015 02 9 BD Diagnostics R sultats Tableau 1 Rendements attendus Trousse de lyse BD GeneOhm Esp ce Type d chantillon ECO eco Streptococcus agalactiae Ecouvillon vaginal anal 98 8 Staphylococcus aureus Suspension bact rienne x gt 99 Bacillus anthracis cellules vegetatives Ecouvillon nasal S gt 99 Bacillus anthracis spores Poudre de silice 0 24mg gt 99 Bacillus subtilis spores Suspension de spores 98 8 UFC unit s formatrices de colonies La lyse r alis
3. KFE g 75 4 C difficile Faeces N A 1 5 10 KFE g Faeces Faeces fl ssiger Stuhl S 9 M smegmatis Suspendierung 2 4 x10 KFE mL 100 1 2500 1 9 6 KFE rx S epidermidis Suspendierung 2 4 x10 KFE mL 100 1 10000 1 24 KFE rx 10 KFE g 100 5 E coli Faeces N A 1 5 10 KFE g Faeces Faeces fl ssiger Stuhl A 9 E coli Suspendierung 10 KFE mL 100 1 100000 1 1 KFE rx E faecium Suspendierung 8 x10 KFE mL 100 1 100000 1 lt 8 KFE rx C albicans Suspendierung 10 KFE mL 10 1 10000 1 lt 10 KFE rx P0015 02 14 BD Diagnostics Equipo BD GeneOhm Lysis Espanol Indicaciones de uso El equipo BD GeneOhm Lysis se utiliza para la lisis rapida de c lulas y esporas de distintos tipos de muestras Reactivos Equipo BD GeneOhm Lysis 100 reacciones Tampon de muestras Sample Buffer 120 x 1 mL Soluci n tamp n Tris EDTA Tubo de lisis Lysis tube 100 tubos Perlas de vidrio Precauciones e No utilizar el kit si el precinto de seguridad de la caja exterior est roto e No utilizar los reactivos si las bolsas protectoras est n abiertas o desgarradas a su llegada e Cierre las bolsas protectoras con el cierre deslizante despu s de cada uso e No utilice los reactivos despu s de la fecha de caducidad e No intercambie tapas entre los reactivos ya que puede producirse contaminaci n que altere los resultados de la prueba e Se recomienda el uso de puntas de pipeta desechables y est ril
4. e avec la trousse BD GeneOhm Lysis kit entra ne la lib ration des composantes intracellulaires tel que d montr par l amplification des acides nucl iques pr sents dans les lysats 7 8 9 Tableau 2 UFC d tect es par r action PCR Calcul x Type Esp ce 54 a d chantillon I Volume ajout Volume l Concentration a tube de Dilution ajout au Concentration initiale lyse uL du lysat tube de finale yse H r action uL S 2 3 1 4x10 UFC mL 50 N A 1 lt 1 4 UFC rx saprophyticus Urine S i P E 75 10 UFC g de C difficile F ces 10 UFC g de f ces faces liquides MAP 1 5 a M smegmatis Suspension 2 4x10 UFC mL 100 1 2500 1 9 6 UFC rx S epidermidis Suspension 2 4 x10 UFC mL 100 1 10000 1 24 UFC rx 8 8 E 100 10 UFC g de E coli F ces 10 UFC g de f ces f ces liquides N Ap 1 5 TA E coli Suspension 10 UFC mL 100 1 100000 1 1 UFC rx E faecium Suspension 8 x10 UFC mL 100 1 100000 1 lt 8 UFC rx C albicans Suspension 10 UFC mL 10 1 10000 1 lt 10 UFC rx P0015 02 10 BD Diagnostics BD GeneOhm Lysesatz Vorgesehene Anwendung BD GeneOhm M Lysesatz zur raschen Lyse von Zellen und Sporen aus verschiedenen Probetypen Reagenzien BD GeneOhm Lysesatz 100 Reaktionen Probenpuffer Sample Buffer 120 X 1 mL Tris EDTA Puffer Lyser hrchen Lysis tube 100 R hrchen Glasperlen Vorsichtsm
5. B for specimen concentration if needed ii Proceed with point C for specimen dilution if needed ili Proceed with point D for specimen washing if needed iv Proceed directly with point E Lysis Method if the type of sample requires no treatment prior to lysis P0015 02 Sr BD Diagnostics BD GeneOhm Lysis kit B Concentration Method 1 2 3 4 5 Transfer a maximum of 1000 uL of sample to the Lysis tube close tightly and centrifuge at high speed between 14 000 x g and 21 000 x g for 5 minutes at room temperature Remove the supernatant and discard it Use a sterile transfer pipet take care not to touch the pellet Use a new transfer pipet for each sample If necessary repeat steps 1 and 2 as many times as needed If not proceed with step 4 Add 50 uL to 100 uL of sample buffer to the Lysis tube close tightly If a washing step is necessary proceed with point D Continue with step 2 of the Lysis Method E C Dilution Method 1 2 Use the sample buffer to dilute a concentrated sample Continue with Step 1 of the Lysis Method E D Washing Method 1 2 3 4 5 Centrifuge the Lysis tube containing a maximum of 1000 uL of sample at high speed between 14 000 x g and 21 000 x g for 5 minutes at room temperature Remove the supernatant and discard it Use a sterile transfer pipet take care not to touch the pellet Use a new transfer pipet for each sample Add 50
6. kit di lisi BD GeneOhm utilizzato per la lisi rapida di cellule e spore di diversi tipi di campioni Reagenti Kit di lisi BD GeneOhm 100 reazioni Tampone Sample Buffer 120x1mL Soluzione tampone EDTA tris Provetta di lisi Lysis Tube 100 provette Perle di vetro Precauzioni e Non utilizzare il kit se rotta la chiusura di sicurezza sul contenitore esterno e Non utilizzare i reagenti se i sacchetti protettivi sono aperti o danneggiati alla consegna e Chiudere le buste protettive con chiusura a cerniera dopo ciascun utilizzo e Non utilizzare i reagenti dopo la relativa data di scadenza e Non scambiare i tappi tra i reagenti in quanto esiste la possibilit di contaminazione che comprometterebbe i risultati del test e Si consiglia l utilizzo di puntali per pipettatrice sterili monouso con blocco a filtro o a spostamento positivo e Utilizzare un nuovo puntale per ciascun campione o reagente e Trattare sempre i campioni come infettivi in conformit alle procedure sicure di laboratorio quali ad esempio quelle descritte in Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories e nel documento CLSI M29 e Indossare abbigliamento protettivo e guanti monouso quando si trattano reagenti del kit Lavare a fondo le mani dopo l uso e Non pipettare con la bocca e Non fumare bere n mangiare in aree in cui sono maneggiati i campioni e Smaltire i reagenti inutilizzati e i rifiuti in conformit alle normativ
7. 2 25 C Beutel Stabilitat Verfallsdatum Verfallsdatum Ge ffneter Temperatur 2 25 C 2 296 Beutel Stabilit t 2 Monate Verfallsdatum Falls der Beutel nach jedem Gebrauch richtig mit dem Reissverschluss verschlossen wird P0015 02 11 BD Diagnostics BD GeneOhm Lysesatz Materialien welche ben tigt jedoch nicht mitgeliefert werden e Vortex Genie 2 Fisher mit 1 5 mL Mikror hrchen Halter oder vergleichbarem Adapter mit mehrfachen Haltestellen kann zur Bearbeitung von mehrfachen Proben angewandt werden e Mikropipetten Genauigkeitsbereich zwischen 10 100 uL und 100 1000 uL e Sterile Mikropipettenspitzen mit Filterblockierung oder positiver Verdr ngung e Sterile berf hrungspipetten optional e Sterile R hrchen optional e Sterile Salzl sung 0 85 NaCl optional e Scheren optional e Gaze optional e Einweg Handschuhe e Mikrozentrifuge f r Zentrifugierung bei hoher muss 14 000 x g erreichen optional und niedriger Geschwindigkeit e Trockener Erhitzungsblock f r 1 5 mL R hrchen oder Wasserbad e Eis oder K hlblock f r 1 5 mL R hrchen e Stoppuhr oder Timer Gebrauchsanweisungen Hinweis Ein Lysis tube Lyser hrchen gelber Verschluss und mindestens ein Sample Buffer R hrchen Probenpuffer blauer Verschluss werden f r jede zu bereitende Probe ben tigt je nach dem Vorgang Die ben tigte Anzahl von R hrchen aus ihrem Schutzbeutel herausnehmen und die Beutel mit
8. 29 Refer to the latest edition 3 Martineau F et al Development of a rapid PCR Assay Specific for Staphylococcus saprophyticus and Application to Direct Detection from Urine Samples Journal of Clinical Microbiology Sept 2000 38 9 3280 3284 4 B langer S D et al Rapid Detection of Clostridium difficile in Feces by Real Time PCR Journal of Clinical Microbiology Feb 2003 41 2 730 734 5 BD Diagnostics Sainte Foy Qu bec Canada Package insert of BD GeneOhm MRSA Assay cat 441242 for 200 tests kit and 441244 for 48 tests kit 6 BD Diagnostics Sainte Foy Qu bec Canada Package insert of BD GeneOhmTM Strep B Assay cat 441240 7 Comparison of nine commercial kits for rapid nucleic acid extraction from microbial cultures M Dion C M nard F J Picard et al Abstr 99th Annual Meeting of ASM Chicago abstr C 481 1999 8 B langer S D et al Rapid Detection of Shiga Toxin Producing Bacteria in Feces by Multiplex PCR with Molecular Beacon on the SmartCycler Journal of Clinical Microbiology Apr 2002 40 4 1436 1440 9 Martineau F et al Species Specific and ubiquitous DNA Based Assays for Rapid Identification of Staphylococcus epidermidis Journal of Clinical Microbiology Dec 1996 34 12 2888 2893 P0015 02 23 BD Diagnostics BD GeneOhm Lysis kit Index of symbols Table des symboles Symbolindex indice de simbolos Indice dei simboli Symbol Symbole Simbolo Simbol
9. 3 Si n cessaire r p ter les tapes 1 et 2 autant de fois que requis Sinon passer l tape 4 4 Ajouter 50 uL 100 uL de tampon d chantillon au tube de lyse bien refermer Passer au point D pour laver l chantillon si n cessaire 5 Poursuivre avec l tape 2 de la m thode de lyse E C M thode de dilution 1 Utiliser le tampon d chantillon pour diluer un chantillon concentr 2 Poursuivre avec l tape 1 de la m thode de lyse E D M thode de lavage 1 Centrifuger le tube de lyse contenant au maximum 1000 uL d chantillon haute vitesse entre 14 000 x get 21 000 x g pendant 5 minutes a temp rature ambiante 2 Retirer le surnageant et le jeter Utiliser une pipette de transfert st rile pour retirer le surnageant du Lysis tube en prenant soin de ne pas toucher au culot Utiliser une nouvelle pipette de transfert pour chaque chantillon 3 Ajouter 50 uL 100 pL de tampon d chantillon au tube de lyse bien refermer Utiliser un nouvel embout pour chaque chantillon 4 R p ter les tapes 1 3 autant de fois que n cessaire 5 Poursuivre avec l tape 2 de la m thode de lyse E E M thode de lyse 1 Ajouter 50 uL 100 uL d chantillon au tube de lyse bien refermer Utiliser la micropipette appropri e et un nouvel embout pour chaque chantillon Identifier le tube de lyse sur le capuchon et ou sur l tiquette du tube Ne pas ajouter plus de 100 uL au tube de lyse
10. 50 pL a 100 uL de la muestra al tubo de lisis tapa amarilla ci rrelo herm ticamente Utilice una micropipeta adecuada y una punta de pipeta nueva para cada muestra Identifique el tubo de lisis en la tapa y o la etiqueta del tubo No a ada m s de 100 uL al tubo de lisis Agite con vortex a alta velocidad durante 5 minutos El tiempo puede variar dependiendo del tipo de muestra que vaya a lisarse Para procesar m ltiples muestras puede usarse un adaptador con varios lugares de sujeci n Centrifugue el tubo de lisis a velocidad baja durante 2 a 5 segundos para que el contenido quede al fondo del tubo Cali ntelo a 95 2 C durante dos 2 minutos Utilice un bloque de calor seco o un ba o mar a Mantenga el tubo de lisis en hielo o en un bloque de enfriamiento Notas 1 Diluci n de lisado Para diluir un lisado a ada el volumen apropiado de tamp n de muestras al tubo de lisis y cons rvelo en hielo o en un bloque de enfriamiento 2 Conservaci n de lisado El lisado puede congelarse a 20 5 C para uso posterior si es necesario El ciclo de congelaci n descongelaci n puede eliminar tambi n las sustancias inhibidoras de PCR P0015 02 417 BD Diagnostics Equipo BD GeneOhm Lysis Resultados Tabla 1 Resultados previstos Especies Tipo de muestra ee niet ms la Streptococcus agalactiae Vaginal anal con torunda 98 8 Staphylococcus aureus Suspensi n bacterian
11. BD Diagnostics BD GeneOhm Lysis kit BD GeneOhm Lysis Kit Trousse de lyse BD GeneOhm BD GeneOhm Lysesatz Equipo BD GeneOhm Lysis Kit di lisi BD GeneOhm REF 441243 P0015 02 1 Date Datum Fecha Data 2014 05 BD Diagnostics BD GeneOhm Lysis kit Table of Contents Table des mati res Inhaltstabelle indice Indice EE Intended use Reagents PRECAUTIONS na EN a dE ne LE Se ee at shay arenes See ae O ee GaN vee eae Sate haa aan jh Materials pr EENS Storage handling and stability Materials required but not provided Instructions for use A Specimen preparation for lysis B Concentration Method 20210 A REESEN C Dilution Method ze RENE Method EE E EysisMethod s cartonato teee Rie ii i rie risi Resultss a2 a in bo Li ii hee ii iii i o Fra an ais nenon A cade Indication Rec EE PLECAUTIONS sas n a a O ere tee ere Re ATS Mat riel Fourni i Entreposage manutention et stabilit Mat riel requis mais non fourni iv M derd emploler rare e ct dens Re eg A Pr paration des chantillons pour la Ise 8 B M thode de concentration 9 C M thode de dilution 9 D Methode de lavage 9 E M thode de se citar A A nati 9 E A RN NO 10 Deutsch n Vorgesehene Anwendung tre EA iva DESERTA GE EE Kee ASA EE Gelhetertehateraleg o ss en eege NEES N
12. E M todo ANSE nn nn RE ORI eeh EAT AE 21 Risultati dee taxes cas 2 References References Referenzen Referencias Riferimenti see 23 Index of symbols Table des symboles Symbolindex ndice de s mbolos Indice dei simbalt 24 P0015 02 D BD Diagnostics BD GeneOhm Lysis kit English Intended use BD GeneOhm Lysis kit is for the rapid lysis of cells and spores from different sample types Reagents BD GeneOhm Lysis Kit 100 reactions Sample Buffer 120 X 1 mL Tris EDTA buffer Lysis tube 100 tubes Glass beads Precautions e Do not use the kit if the outer carton safety seal is broken e Do not use reagents if the protective pouches are open or torn upon arrival e Close protective pouches with the zip seal after each use e Do not use the reagents after their expiration date e Do not interchange caps among reagents as contamination may occur and compromise test results e The use of sterile disposable filter blocked or positive displacement pipettor tips is recommended e Use a new tip for each sample or reagent e Always handle specimens as if infectious in accordance with safe laboratory procedures such as those described in Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories and in the CLSI Document M29 e Wear protective clothing and disposable gloves while handling kit reagents Wash hands thoroughly after use e Do not pipet by mouth e Do not smoke drink or eat in areas where spe
13. EESS REESEN Lagerung Handhabung und Stabilitat Materialien welche ben tigt jedoch nicht mitgeliefert werden conc rro nn nonncon ani na nono ncnna rancia 12 Gebrauchsanweisungen ici td dadas 12 A Probevorbereitung fiir Lyse 2 12 B Konzentrierungs Methode 413 C Verdiinnungsmethode 219 Jr Waschmethode it A E 13 Es EEN EE 14 ANNO 14 ESpanol A EE 15 18 Tndicaciones EE 15 EE 15 Pr CAUCIONES 5 52 ch E EE 15 Material proVisto ii 15 Conservaci n manipulaci n y estabilidad 15 Material necesario pero no suministrado 16 elle TE EE 16 Az Preparaci n de muestras para Sis cicsco css cep eseccceceansseasesnssdguonedoustessud guoveicestoucgsdguanrdondpepegedgeodasiestosend ctenodsnssenessguorebccstonens 16 B M todo de concentraci n wa C Metodo de diluci n n snenensnee nase ideas D M todo deal ire iena Aaa A A RRA Resultados ana nur Se Re VR RE NES ve med ee Ia E Italiano ge TSO PLEVIStO EE REA GEIL asia nana ie Precauzioni Materiali forniti Conservazione trattamento e stabilita 19 Materiali necessari Mia MOM Om rer sarah RAEE ale RI ee TAO RATA ARIE IR 20 ISTITUZIONI PEL USO Henne uao dele eil di i led 20 A Preparazione del campione per la lisi 20 B Metodo di concentrazione na DAL C Metodo di diluizione 21 Da Metododilaya ttio ta RITI a rn une detre ne Ne PO RM RU eher A SR RE lettres 21 E
14. Lysis tube provetta di lisi tappo giallo e almeno una provetta di Sample Buffer tampone tappo blu devono essere preparate per ciascun campione a seconda della procedura Rimuovere il numero necessario di provette dalle rispettive buste protettive e chiudere le buste con la chiusura a cerniera Tempo di preparazione circa 15 minuti A Preparazione del campione per la lisi 1 La procedura seguente suggerita per colonie isolate i Colonie isolate risospese in soluzione salina sterile 0 85 NaCl ad una torbidit di 0 5 McFarland ii Procedere col punto C se necessaria la diluizione del campione Altrimenti procedere col punto D 2 La seguente procedura suggerita per il prelievo di campioni su un tampone i Collocare il dispositivo di prelievo tampone in una provetta di tampone tappo blu Identificare la provetta di tampone sull etichetta del tappo e o della provetta ii Rompere lo stelo del campione e chiudere saldamente la provetta Tenere il tampone per lo stelo in prossimit dell orlo della provetta utilizzare garza per ridurre al minimo i rischi di contaminazione Sollevare il tampone di qualche millimetro dal fondo e spingerlo contro il bordo della provetta per romperlo Metodo alternativo utilizzare forbici pulite per tagliare lo stelo Accertarsi che il tappo si chiuda saldamente iii Mescolare con moto vorticoso ad alta velocit per un minuto Il tempo potrebbe variare col tipo di campione Per
15. a gt 99 Bacillus anthracis c lulas vegetativas Nasal con torunda e A o y gt 99 Bacillus anthracis Esporas Polvo de s lice 0 24mg gt 99 Bacillus subtilis Esporas Suspensi n de esporas 98 8 UFC Unidad formadora de colonia La lisis obtenida con el equipo BD GeneOhm Lysis Kit da como resultado la liberaci n de componentes intracelulares SEI demostr la amplificaci n de acidos nucleicos gen micos presentes en los lisados resultantes 8 Tabla 2 UFC detectada por reacci n de PCR Calculo x Typo de Especies muestra Volumen Diluci n Volumen Concentraci n a adido al de a adido al Concentraci n inicial tubo de lisis lisado tubo de final HL reacci n HL S _ 3 Orina 1 4x10 UFC mL 50 N Ap 1 lt 1 4 UFC rx saprophyticus C difficile Heces 7 75 10 UFC g de 10 UFC g de heces heces liquidas MEAD LE heces M smegmatis Suspensi n 2 4 x10 UFC mL 100 1 2500 1 9 6 UFC rx S epidermidis Suspensi n 2 4 x10 UFC mL 100 1 10000 1 24 UFC rx E 5 E coli Heces 10 UFC g de heces 100 N Ap 1 5 10 UFC g de heces liquidas heces E coli Suspension 10 UFC mL 100 1 100000 1 1 UFC rx E faecium Suspension 8 x108 UFC mL 100 1 100000 1 lt 8 UFC rx C albicans Suspension 10 UFC mL 10 1 10000 1 lt 10 UFC rx rx reacci n P0015 02 18 BD Diagnostics BD GeneOhm Lysis kit Uso previsto Il
16. assnahmen e Das Kit nicht verwenden wenn das Sicherheitssiegel an der u eren Verpackung gebrochen ist e Reagenzien nicht verwenden wenn der Schutzbeutel bei Ankunft ge ffnet oder besch digt ist e Schutzbeutel nach jedem Gebrauch mit dem Reissverschlusssiegel verschliessen e Die Reagenzien nicht nach dem Verfallsdatum anwenden e Verschlusskappen nicht unter Reagenzien auswechseln weil Verunreinigung stattfinden und Testergebnisse gef hrden k nnen e Der Gebrauch von sterilen Einweg Pipettenspitzen mit Filterblockierung oder positiver Verdr ngung wird empfohlen e Fur jede Probe oder Reagenz eine neue Spitze anwenden e Proben immer als infekti s behandeln im Einklang mit sicheren Labor Arbeitsverfahren wie z B in Biosafety in Microbiological und Biomedical Laboratories und im CLSI Dokument M29 beschrieben e Bei der Handhabung von Satzreagenzien Schutzkleidung und Einweghandschuhe tragen Nach dem Gebrauch gr ndlich die H nde waschen e Nicht mit dem Mund pipettieren e Nicht an Orten wo Proben bearbeitet werden rauchen trinken oder essen e Unverwendete Reagenzien und Abf lle laut Landes Bundes Provinz Staats und rtlichen Bestimmungen entsorgen Gelieferte Materialien e Probenpuffer Sample Buffer e Lyser hrchen Lysis tube Lagerung Handhabung und Stabilitat Sample Buffer Lysis tube Satz Komponent blauer Deckel gelber Deckel Versiegelter Temperatur 2 25 C
17. azul Identifique el tubo de tamp n de muestras en la tapa y o la etiqueta del tubo ii Rompa el palo de la torunda y cierre el tubo herm ticamente Sujete la torunda por el palo cerca del borde del tubo utilice gasa para minimizar los riesgos de contaminaci n Levante la torunda unos mil metros del fondo del tubo y emp jela contra el borde del tubo para romperla M todo alternativo use tijeras limpias para cortar el palo Aseg rese de cerrar la tapa herm ticamente ili Agite con vortex a alta velocidad durante un minuto El tiempo puede variar dependiendo del tipo de muestra Para procesar m ltiples muestras puede usarse un adaptador con varios lugares de sujeci n iv Pase al punto B para concentrar la muestra Pase al punto C para diluir la muestra v Pase al punto E M todo de lisis si no es necesario el paso iv 3 Se sugiere el siguiente procedimiento para otros tipos de muestras i Pase al punto B para la concentraci n de la muestra si es necesario ii Pase al punto C para la diluci n de la muestra si es necesario iii Pase al punto D para el lavado de la muestra si es necesario iv Pase directamente al punto E M todo de lisis si el tipo de muestra no requiere ning n tratamiento antes de la lisis P0015 02 16 BD Diagnostics Equipo BD GeneOhm Lysis B M todo de concentracion 1 2 3 4 5 Transfiera un maximo de 1000 uL de la muestra al tubo de lisis ci rrelo herm ticame
18. cimens are being handled e Dispose of unused reagents and waste in accordance with country federal provincial state and local regulations Materials provided e Sample Buffer e Lysis tube Storage handling and stability Sample Buffer Lysis Tube Kit Component blue cap yellow cap Temperature 2 25 C 2 25 C Sealed pouch Stability Expiration date Expiration date Temperature 2 25 C 2 25 C Opened pouch gt Stability 2 months Expiration date Provided that the pouch is properly closed with the zip seal after each use P0015 02 3 BD Diagnostics BD GeneOhm Lysis kit Materials required but not provided Vortex Genie 2 Fisher with 1 5 mL microtube holder or equivalent for processing multiple samples adapter with multiple holding sites can be used Micropipettors accurate range between 10 100 uL and 100 1000 uL Sterile filter blocked or positive displacement micropipettor tips Sterile transfer pipets optional Sterile tubes optional Sterile Saline 0 85 NaCl optional Scissors optional Gauzes optional Disposable gloves Microcentrifuge for high must reach 14 000 x g optional and low speed centrifugation Dry heating block for 1 5 mL tubes or water bath Ice or cooling block for 1 5 mL tubes Stopwatch or timer Instructions for use Note One Lysis tube yellow cap and at least one Sample Buffer tube blue cap are required for
19. coccus aureus Bacterial suspension Bacillus anthracis vegetative cells Nasal swab Bacillus anthracis Spores Silica powder 0 24 mg and 105 Bacillus subtilis Spores Spore suspension Between 10 98 8 gt 99 gt 99 gt 99 98 8 CFU Colony Forming Unit Lysis achieved with the BD GeneOhm Lysis kit results in the release of intracellular como ens as demonstrated by the amplification of genomic nucleic acids present in resulting lysates Table 2 CFU detected by PCR reaction Calculation gt Type of Species sample Volume Volume Initial added to Dilution of added to Final Concentration the Lysis lysate reaction concentration tube uL tube uL Sanel Urine 1 4x10 CFU mL 50 N Ap 1 lt 1 4 CFU rx saprophyticus e 75 10 CFU g of sees 2 PR 7 C difficile Feces 10 CFU g of feces liquid stool N Ap 1 5 faces M smegmatis Suspension 2 4 x10 CFU mL 100 1 2500 1 9 6 CFU rx S epidermidis Suspension 2 4 x10 CFU mL 100 1 10000 1 24 CFU rx 8 8 100 10 CFU g of E coli Feces 10 CFU g of feces liquid stool N Ap 1 5 faces E coli Suspension 10 CFU mL 100 1 100000 1 1 CFU rx E faecium Suspension 8 x10 CFU mL 100 1 100000 1 lt 8 CFU rx C albicans Suspension 10 CFU mL 10 1 10000 1 lt 10 CFU rx P0015 02 BE BD Diagnostics Trousse de lyse BD GeneOhm Indication
20. dem Reissverschluss verschliessen Vorbereitungszeit etwa 15 Minuten A Probevorbereitung f r Lyse 1 Der folgende Vorgang wird f r isolierte Kolonien vorgeschlagen i Isolierte Kolonien in steriler Salzl sung 0 85 NaCl erneut suspendieren bis zu einer Tr bung von 0 5 McFarland ii Zu Punkt C weitergehen falls die Probe verd nnt werden muss Falls nicht zu Punkt D weitergehen 2 Der folgende Vorgang wird f r eine Probe vorgeschlagen welche auf einem Tupfer genommen wurde i Das Sammelger t den Tupfer in ein Probenpuffer R hrchen blauer Verschluss geben Das Probenpuffer R hrchen auf dem Verschluss oder dem R hrchen Etikett identifizieren P0015 02 12 BD Diagnostics BD GeneOhm Lysesatz 3 ii Das Tupferst bchen brechen und das R hrchen fest verschliessen Den Tupfer am Stab nahe am R hrchenrand halten Gaze anwenden um das Risiko der Verunreinigung auf ein Mindestmass zu halten Den Tupfer ein paar Millimeter vom Boden abheben und gegen den Rand des R hrchens biegen um ihn zu brechen Alternative Methode Den Stab mit einer sauberen Schere durchschneiden Sicherstellen dass der Verschluss fest zugeht iii Vortex bei hoher Geschwindigkeit f r eine Minute Die Zeit kann je nach der Probe variieren Zum Bearbeiten von mehreren Proben kann man einen Adapter mit mehrfachen Haltestellen anwenden iv Zu Punkt B gehen um die Probe zu konzentrieren Zu Punkt C gehen um die Probe zu
21. e nazionali regionali provinciali e locali Materiali forniti e Tampone Sample Buffer e Provettadilisi Lysis tube Conservazione trattamento e stabilita Sample Buffer Lysis tube Componenti del kit tappo blu tappo giallo Temperatura 2 25 C 2 25 C Busta sigillata A Stabilita Data di scadenza Data di scadenza Temperatura 2 25 C 2 25 C Busta aperta q E Stabilita 2 mesi Data di scadenza Purch la sacca sia correttamente chiusa con la chiusura a cerniera dopo ciascun utilizzo P0015 02 19 BD Diagnostics BD GeneOhm Lysis kit Materiali necessari ma non forniti Vortice Genie 2 Fisher con supporto per microprovette da 1 5 mL o equivalente per trattare pi campioni possibile utilizzare un adattatore con pi siti di mantenimento Micropipettatrici intervallo accurato 10 100 uL e 100 1000 uL Puntali per micropipettatrice sterili con blocco a filtro o a spostamento positivo Pipette di trasferimento sterili opzionali Provette sterili opzionali Soluzione salina sterile 0 85 NaCl opzionale Forbici opzionali Garze opzionali Guanti monouso Microcentrifuga per la centrifuga ad alta deve raggiungere 14 000 x g opzionale e bassa velocit Blocco di riscaldamento a secco per provette da 1 5 mL o bagno d acqua Ghiaccio o blocco di raffreddamento per provette da 1 5 mL Cronometro o timer Istruzioni per l uso Nota Una
22. e un adaptador con varios lugares de sujeci n Micropipetas margen preciso entre 10 100 uL y 100 1000 uL Puntas de pipeta est riles de desplazamiento positivo o con filtro Pipetas de transferencia est riles opcional Tubos est riles opcional Solucion salina est ril 0 85 NaCl opcional Tijeras opcional Gasas opcional Guantes desechables Microcentrifuga para centrifugaci n de alta debe alcanzar 14 000 x g opcional y baja velocidad Bloque de calor seco para tubos de 1 5 mL o ba o maria Hielo o bloque de enfriamiento para tubos de 1 5 mL Cron metro o minutero Modo de empleo e Nota Dependiendo del procedimiento se necesitan un Lysis tube tubo de lisis tapa amarilla y al menos un tubo de Sample Buffer tamp n de muestras tapa azul para preparar cada muestra Saque el n mero necesario de tubos de su bolsa protectora y cierre las bolsas con el cierre deslizante Tiempo de preparaci n aproximado 15 minutos A Preparaci n de muestras para lisis 1 Se sugiere el siguiente procedimiento para colonias aisladas i Suspender las colonias aisladas en soluci n salina est ril 0 85 NaCl a una turbidez de 0 5 McFarland ii Pase al punto C si se necesita la diluci n de la muestra De lo contrario pase al punto D 2 Se sugiere el siguiente procedimiento para muestras obtenidas con una torunda i Coloque el dispositivo de obtenci n de muestras torunda en un tubo de tamp n de muestras tapa
23. each sample to be prepared depending on the procedure Remove the required number of tubes from their protective pouch and close the pouches with the zip seal Preparation time approx 15 min A Specimen preparation for lysis 1 The following procedure is suggested for isolated colonies i Resuspend isolated colonies in sterile saline 0 85 NaCl to a turbidity of 0 5 McFarland ii Proceed with point C if specimen dilution is needed If not proceed with point D 2 The following procedure is suggested for sample collected on a swab i Place the collection device swab in a Sample Buffer tube blue cap Identify the Sample Buffer tube on the cap and or the tube label ii Break the swab stem and close the tube tightly Hold the swab by the stem near the rim of the tube use gauze to minimize risks of contamination Lift the swab a few millimeters from the bottom and push it against the edge of the tube to break it Alternative method use clean scissors to cut the stem Make sure the cap will close tightly ili Vortex at high speed for one minute Time may vary with the type of sample For processing multiple samples an adapter with multiple holding sites can be used iv Proceed with point B to concentrate the specimen Proceed with point C to dilute the specimen v Proceed with point E Lysis Method if step iv is not required 3 The following procedure is suggested for other types of sample i Proceed with point
24. er las instrucciones de utilizacion Consultare le instruzioni per l uso a ey Y DJ D GeneOhm Sciences Canada Inc 2555 boul du Parc Technologique Qu bec QC Canada G1P 455 Helping all people live healthy lives Customer Service Service a la Client le Kundendienst Servicio de Atencion al Cliente Servizio Assistenza 1 888 436 3646 www bd com ds Australian Representative ne Becton Dickinson Pty Ltd Pottery Road 4 Research Park Drive Dun Loaghaire Macquarie University Research Park Co Dublin Ireland North Ryde NSW 2113 Australia BD BD Logo and all other trademarks are property of Becton Dickinson and Company 2014 BD P0015 02 24 Printed in Canada Imprim au Canada Printed in Kanada Impreso en Canad Stampato in Canada
25. es de desplazamiento positivo o con filtro e Utilice una nueva punta para cada muestra o reactivo e Manipule siempre las muestras como si fueran infecciosas de acuerdo con los procedimientos de seguridad de laboratorio como los descritos en Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories y el Documento M29 de CLSI e Lleve ropa protectora y guantes desechables cuando manipule los reactivos del equipo L vese las manos bien despu s de su utilizaci n e No utilice las pipetas con la boca e No fume beba o coma en reas donde se manipulen muestras e Deshagase de los reactivos no utilizados y de los desechos de acuerdo con el reglamento del pais federal provincial estatal y local Material provisto e Tampon de muestras Sample Buffer e Tubo de lisis Lysis tube Conservaci n manipulaci n y estabilidad Sample Buffer Lysis tube Componente del equipo tapa azul tapa amarilla Temperatura 2 25 C 2 25 C Bolsa cerrada Estabilidad Fecha de caducidad Fecha de caducidad Temperatura 2 25 C 2 25 C Bolsa abierta 7 Estabilidad 2 meses Fecha de caducidad 1 Siempre que la bolsa est bien cerrada con el cierre deslizante despu s de cada uso P0015 02 15 BD Diagnostics Equipo BD GeneOhm Lysis Material necesario pero no suministrado Vortex Genie 2 Fisher con portamicrotubo de 1 5 mL o equivalente para procesar multiples muestras puede usars
26. inweise 1 Verd nnung des Lysats Um ein Lysat zu verd nnen das entsprechende Volumen des Probenpuffers zum Lyser hrchen hinzugeben und auf Eis oder auf einem K hlblock aufbewahren 2 Aufbewahrung des Lysats Das Lysat kann bei 20 5 C zum sp teren Gebrauch gefroren werden falls n tig Der Gefrier und Tauzyklus eliminiert auch eventuell PCR hemmende Substanzen Ergebnisse Tabelle 1 Erwarteter Ertrag Spezies Probetyp ee Lyse Effizienz Streptococcus agalactiae Vaginaler analer Tupfer 98 8 Staphylococcus aureus Bakterielle Suspendierung gt 99 Bacillus anthracis vegetative Zellen Nasentupfer e i Sei gt 99 Bacillus anthracis Sporen Silikapulver 0 24mg gt 99 Bacillus subtilis Sporen Sporen suspendierung 98 8 1 KFE Kolonie formende Einheit Lyse mit dem BD GeneOhm Lysesatz f hrt zur Freisetzung von intrazellularen Bestandteilen wie durch wird Tabelle 2 CFU durch PCR Reaktion festgestellt die Verst rkung der genomischen Nukleins uren in den resultierenden Lysaten 4 gt 9 8 9 demonstriert Berechnung dia Probet Zum Zum ezies robe i P yp Anfangs Lyser hrchen Verd nnung Reaktionsr hrchen lEndkonzentration Konzentration hinzugegebenes des Lysats hinzugegebenes Volumen uL Volumen uL S 3 saprophyticus Urin 1 4x10 KFE mL 50 N Ap 1 lt 1 4 KFE rx SCH 10
27. n passaggio di lavaggio procedere col punto D Continuare col passaggio 2 del metodo di lisi E Metodo di diluizione Utilizzare la tampone per diluire un campione concentrato Continuare col passaggio 1 del metodo di lisi E Metodo di lavaggio Centrifugare la provetta di lisi contenente un massimo di 1000 uL di campione ad alta velocit tra 14 000 x g e 21 000 x g per 5 minuti a temperatura ambiente Rimuovere il supernatante e scartarlo Utilizzare una pipetta di trasferimento sterile prestare attenzione a non toccare la pastiglia Utilizzare una nuova pipetta di trasferimento per ciascun campione Aggiungere da 50 uL a 100 uL di tampone alla provetta di lisi chiudere saldamente Utilizzare un nuovo puntale per pipettatrice per ogni campione Ripetere i passaggi da 1 a 3 per il numero di volte necessario Continuare col passaggio 2 del metodo di lisi E E Metodo di lisi 1 2 3 4 5 Aggiungere da 50 uL a 100 uL di campione alla provetta di lisi tappo giallo chiudere saldamente Utilizzare una micropettatrice appropriata e un nuovo puntale per pipettatrice per ogni campione Identificare la provetta di lisi del campione sull etichetta del tappo e o della provetta Non aggiungere oltre 100 uL alla provetta di lisi Mescolare con moto vorticoso ad alta velocit per 5 minuti Il tempo potrebbe variare col tipo di campione da lisare Per trattare pi campioni possibile utilizzare un adat
28. nger dans les zones de manipulation des chantillons et des r actifs Jeter les r actifs non utilis s et les d chets conform ment a la r glementation nationale f d rale provinciale ou locale Mat riel Fourni Tampon d chantillon Sample Buffer Tube de lyse Lysis tube Entreposage manutention et stabilite Sample buffer Lysis tube Composante de la trousse capuchon bleu capuchon jaune Pochette Temp rature 2 25 C 2 25 C scell e Stabilit Date de p remption Date de p remption Pochette Temp rature 2 25 C 2 25 C ouverte Stabilit 2 mois Date de p remption condition que la pochette soit bien ferm e avec la fermeture glissi re apr s chaque utilisation P0015 02 7 BD Diagnostics Trousse de lyse BD GeneOhm Materiel requis mais non fourni e Vortex Genie 2 Fisher muni d un portoir pour microtubes de 1 5 mL ou mat riel quivalent pour le traitement de plusieurs chantillons un adaptateur a positions multiples peut tre utilis e Micropipettes plage de pr cision 10 100 uL et 100 1000 uL e Embouts filtre ou d placement direct st riles e Pipettes de transfert st riles facultatif e Tubes st riles facultatif e Solution saline st rile NaCl 0 85 facultatif e Ciseaux facultatif e Gazes facultatif e Gants jetables e Microcentrifugeuse haute doit atteindre 14 000 x g facultatif et faible
29. nte y centrif guelo a alta velocidad entre 14 000 x g y 21 000 x g durante 5 minutos a temperatura ambiente Quite el sobrenadante y des chelo Utilice una pipeta de transferencia est ril tenga cuidado de no tocar el sedimento Utilice una nueva pipeta de transferencia para cada muestra Repita los pasos 1 y 2 tantas veces como sea necesario De lo contrario continue con el paso 4 A ada de 50 uL a 100 uL de tamp n de muestras al tubo de lisis ci rrelo herm ticamente Si es necesario una etapa de lavado pase al punto D Contin e con el paso 2 del M todo de lisis E C M todo de diluci n 1 2 Use el tamp n de muestras para diluir una muestra concentrada Contin e con el paso 1 del M todo de lisis E D M todo de lavado 1 2 3 4 5 Centrifugue el tubo de lisis con un m ximo de 1000 uL de la muestra a alta velocidad entre 14 000 x g y 21 000 x g durante 5 minutos a temperatura ambiente Quite el sobrenadante y des chelo Utilice una pipeta de transferencia est ril tenga cuidado de no tocar el sedimento Utilice una nueva pipeta de transferencia para cada muestra A ada de 50 uL a 100 uL de tamp n de muestras al tubo de lisis ci rrelo herm ticamente Utilice una punta de pipeta nueva para cada muestra Repita los pasos 1 a 3 tantas veces como sea necesario Contin e con el paso 2 del M todo de lisis E E M todo de lisis 1 2 3 4 5 A ada de
30. o Meaning Signification Bedeutung Significado Significato REF IVD D E ha ro lt Catalog number US Catalogue number UK R f rence du Catalogue Katalognummer Numero de Catalogo Numero di catalogo In Vitro Diagnostic use Aux fins de Diagnostic In Vitro In vitro Diagnostika Para fines de Diagn stico in Vitro Uso diagnostico In Vitro Manufacturer Fabricant Hersteller Fabricante Produttore Authorized european representative Repr sentant europ en autoris Bevollm chtigter in der Europ ischen Gemeinschaft Representante europeo autorizado Rappresentante europeo autorizzato Contains sufficient for n tests Contenu suffisant pour n tests Inhalt ausreichend f r n Pr fungen Contiene cantidad sufficiente para n pruebas Il contenuto sufficiente per n test Batch code Code de lot Chargenbezeichnung C digo de lote Codice del lotto Use by Utiliser avant Verwendbar bis Fecha de caducidad Data di scadenza Temperature limitation Limites de temp rature Temperaturbegrenzung Limites de temperatura Limiti di temperatura Reseal bag after use Refermer le sac apr s utilisation Beutel nach Gebrauch wieder verschlie en Volver a cerrar la bolsa despu s de la utilizacion Richiudere la sacca dopo l uso Consult instructions for use Se r f rer aux instructions d utilisation Gebrauchanweisung beachten V
31. r Geschwindigkeit zwischen 14 000 x g und 21 000 x g f r 5 Minuten bei Zimmertemperatur zentrifugieren Den Uberstand entfernen und verwerfen Eine sterile Transferpipette anwenden Sorge tragen den Niederschlag nicht zu ber hren F r jede Probe eine neue Transferpipette anwenden 50 uL bis 100 pL des Probenpuffers zu dem Lyser hrchen hinzugeben fest verschliessen Fur jede Probe eine neue Pipettenspitze anwenden Schritte 1 bis 3 so oft wie ben tigt wiederholen Mit Schritt 2 der Lysemethode E weitermachen P0015 02 13 BD Diagnostics E Lysemethode 1 verschliessen BD GeneOhm M Lysesatz 50 uL bis 100 pL der Probe zu dem Lyser hrchen gelber Verschluss hinzugeben fest F r jede Probe die richtige Mikropipette und eine neue Pipettenspitze anwenden Das Lyser hrchen auf dem Verschluss und oder dem Rohrchenetikett identifizieren Nicht mehr als 100 uL zum Lyser hrchen hinzugeben 2 Vortex bei hoher Geschwindigkeit f r 5 Minuten Die Zeit kann mit der lysierten Probe variieren Um mehrere Proben zu bearbeiten kann man einen Adapter mit mehrfachen Haltestellen anwenden 3 4 5 Das Lyser hrchen auf Eis oder auf einem K hlblock halten Das Lyser hrchen bei niedriger Geschwindigkeit f r 2 bis 5 Sekunden zentrifugieren um den Inhalt zum Boden des Rohrchens zu bringen Bei 95 2 C fur zwei 2 Minuten erhitzen Einen trockenen Erhitzungsblock oder ein Wasserbad verwenden H
32. r des ciseaux propres pour couper la tige S assurer que le capuchon se refermera compl tement Vortexer haute vitesse pendant 1 minute La dur e peut varier selon le type d chantillon Pour le traitement de plusieurs chantillons un adaptateur a positions multiples peut tre utilis Passer au point B pour la concentration de l chantillon Passer au point C pour la dilution de l chantillon Passer au point E M thode de lyse si l tape iv n est pas n cessaire 3 Cette proc dure est sugg r e pour les autres types d chantillons iv P0015 02 Passer au point B pour la concentration de l echantillon si n cessaire Passer au point C pour la dilution de l chantillon si n cessaire Passer au point D pour le lavage de l chantillon si n cessaire Passer directement au point E M thode de lyse si le type d chantillon ne requiert aucun traitement avant la lyse BD Diagnostics Trousse de lyse BD GeneOhm B M thode de concentration 1 Transf rer au maximum 1000 uL d chantillon dans le tube de lyse capuchon jaune bien refermer et centrifuger haute vitesse entre 14 000 x g et 21 000 x g pendant 5 minutes temp rature ambiante 2 Retirer le surnageant et le jeter Utiliser une pipette de transfert st rile pour retirer le surnageant du tube de lyse en prenant soin de ne pas toucher au culot Utiliser une nouvelle pipette de transfert pour chaque chantillon
33. tatore con pi siti di mantenimento Centrifugare la provetta di lisi a bassa velocit per 2 5 secondi per portare il contenuto al fondo della provetta Riscaldare a 95 2 C per due 2 minuti Utilizzare un blocco di riscaldamento a secco o un bagno d acqua Mantenere la provetta di lisi su ghiaccio o su un blocco di raffreddamento Note 1 Diluizione di lisato per diluire un lisato aggiungere il volume appropriato di tampone alla provetta di lisi e conservare su ghiaccio o su un blocco di raffreddamento 2 Conservazione di lisato il lisato potrebbe essere congelato a 20 5 C per l utilizzo successivo se necessario Cicli di congelamento e scongelamento potrebbero anche eliminare sostanze inibitorie di PCR P0015 02 21 BD Diagnostics BD GeneOhm Lysis kit Risultati Tabella 1 Rese previste e Quantitativo Efficienza Specie Tipo di campione UFC mL della lisi Streptococcus agalactiae Tampone vaginale anale 98 8 Staphylococcus aureus Sospensione batterica gt 99 Bacillus anthracis cellule vegetative Tampone nasale Tra 10 e 10 gt 99 Bacillus anthracis spore Polvere di silice 0 24 mg gt 99 Bacillus subtilis spore Sospensione di spore 98 8 1 UFC unit di formazione della colonia Una lisi ottenuta col kit di lisi BD GeneOhm comporta il rilascio di componenti intracellulari come dimostrato dall amplificazione di acidi n
34. trattare pi campioni possibile utilizzare un adattatore con pi siti di mantenimento iv Procedere col punto B per concentrare il campione Procedere col punto C per diluire il campione v Procedere col punto E metodo di lisi se il passo iv non richiesto 3 La seguente procedura suggerita per altri tipi di campioni i Procedere col punto B per la concentrazione di campione se necessario ii Procedere col punto C per la diluizione di campione se necessario iii Procedere col punto D per il lavaggio di campione se necessario iv Procedere direttamente col punto E metodo di lisi se il tipo di campione non richiede alcun trattamento prima della lisi P0015 02 20 BD Diagnostics BD GeneOhm Lysis kit B Metodo di concentrazione 1 2 3 4 5 1 2 D 1 2 3 4 5 Trasferire un massimo di 1000 uL di campione alla provetta di lisi chiudere saldamente e centrifugare ad alta velocit tra 14 000 x g e 21 000 x g per 5 minuti a temperatura ambiente Rimuovere il supernatante e scartarlo Utilizzare una pipetta di trasferimento sterile prestare attenzione a non toccare la pastiglia Utilizzare una nuova pipetta di trasferimento per ciascun campione Se necessario ripetere i passaggi 1 e 2 per il numero di volte necessario Altrimenti procedere col passaggio 4 Aggiungere da 50 uL a 100 uL di tampone alla provetta di lisi chiudere saldamente Se necessario u
35. uL to 100 uL of sample buffer to the lysis tube close tightly Use a new pipettor tip for each sample Repeat steps 1 to 3 as many times as needed Continue with step 2 of the Lysis Method E E Lysis Method 1 2 3 4 5 Add 50 uL to 100 uL of sample to the Lysis tube yellow cap close tightly Use appropriate micropipettor and a new pipettor tip for each sample Identify the Lysis tube on the cap and or the tube label Do not add more than 100 uL to the Lysis tube Vortex at high speed for 5 minutes Time may vary with the type of sample to be lysed For processing multiple samples an adapter with multiple holding sites can be used Centrifuge the Lysis tube at low speed for 2 to 5 seconds to bring the content at the bottom of the tube Heat at 95 2 C for two 2 minutes Use a dry heating block or a water bath Keep the Lysis tube on ice or on a cooling block Notes 1 Dilution of lysate To dilute a lysate add the appropriate volume of sample buffer to the Lysis tube and store on ice or on a cooling block 2 Storage of lysate The lysate could be frozen at 20 5 C for later use if necessary Freeze thaw cycle may also eliminate PCR inhibitory substances P0015 02 5 BD Diagnostics Results Table 1 Expected yields BD GeneOhm Lysis kit Species Type of Sample Amount CFU mL Lysis efficiency Streptococcus agalactiae Vaginal anal swab Staphylo
36. ucleici genomici presenti nei lisati risultanti Tabella 2 CFU rilevato da reazione PCR 1 4 9 D By Calcolo Tipo di Volume Volume specie campione Concentrazione aggiunto alla Diluizione aggiunto alla Concentrazione iniziale provetta di di lisato provetta di finale lisi uL reazione pL S 3 saprophyticus Urina 1 4x10 UFC mL 50 N Ap 1 lt 1 4 UFC rx CIO e 10 UFC g di 75 4 ar C difficile Feci N Ap 1 5 10 UFC g di feci feci feci liquide M smegmatis Sospensione 2 4 x10 UFC mL 100 1 2500 1 9 6 UFC rx S epidermidis Sospensione 2 4 x1 0 UFC mL 100 1 10000 1 24 UFC rx 8 8 he 100 5 tai E coli Feci 10 UFC g di feci N Ap 1 5 10 UFC g di feci feci liquide E coli Sospensione 10 UFC mL 100 1 100000 1 1 UFC rx E faecium Sospensione 8 x10 UFC mL 100 1 100000 1 lt 8 UFC rx C albicans Sospensione 10 UFC mL 10 1 10000 1 lt 10 UFC rx rx reazione P0015 02 22 BD Diagnostics BD GeneOhm Lysis kit References R f rences Referenzen Referencias Riferimenti 1 Centers for disease Control and prevention Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories Richmond JY and McKinney RW eds 1993 HHS Publication number CDC 93 8395 2 Clinical and Laboratory Standards Institute Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections Approved Guidelines Second edition Document M
37. verdiinnen v Zu Punkt E Lysemethode gehen falls Schritt iv nicht ben tigt wird Der folgende Vorgang wird f r andere Probearten vorgeschlagen i Zu Punkt B gehen um die Probe zu konzentrieren falls n tig ii Zu Punkt C gehen um die Probe zu verd nnen falls n tig iii Zu Punkt D gehen um die Probe zu waschen falls n tig iv Direkt mit Punkt E Lysemethode weitermachen falls die Probeart vor der Lyse keine Behandlung braucht Konzentrierungs Methode 1 2 3 4 5 Maximal 1000 uL von der Probe in das Lyser hrchen transferieren fest zumachen und bei hoher Geschwindigkeit between 14000 x g und 21000 x g f r 5 Minuten bei Zimmertemperatur zentrifugieren Den Uberstand entfernen und verwerfen Eine sterile Transferpipette anwenden Sorge tragen den Niederschlag nicht zu ber hren F r jede Probe eine neue Transferpipette anwenden Falls n tig Schritte 1 und 2 so oft wie n tig wiederholen Falls nicht mit Schritt 4 weitermachen 50 uL bis 100 uL des Probenpuffers zu dem Lyser hrchen hinzugeben fest verschliessen Falls eine Waschmethode notwendig ist mit Punkt D weitermachen Mit Schritt 2 der Lysemethode E weitermachen Verdunnungsmethode 1 2 Den Probenpuffer anwenden um eine konzentrierte Probe zu verd nnen Mit Schritt 1 der Lysemethode E weitermachen Waschmethode 1 2 3 4 5 Das Lyser hrchen welches maximal 1000 uL der Probe enth lt bei hohe
38. vitesse e Bloc chauffant sec pour tubes de 1 5 mL ou bain marie e Glace ou bloc r frig rant pour tubes de 1 5 mL e Chronom tre ou minuterie Mode d emploi Note Un Lysis tube tube de lyse capuchon jaune et au moins un tube de Sample Buffer tampon d chantillon capuchon bleu sont requis pour chaque chantillon pr parer selon la proc dure Retirer le nombre n cessaire de tubes de leurs pochettes de protection et refermer avec la fermeture clair Temps de pr paration approximatif 15 min A Pr paration des chantillons pour la lyse 1 Cette proc dure est sugg r e pour des colonies isol es Resuspendre les colonies isol es dans une solution saline st rile NaCl 0 85 jusqu une turbidit de 0 5 McFarland Passer au point C si une dilution de l chantillon est n cessaire Dans le cas contraire passer au point D 2 Cette proc dure est sugg r e pour les chantillons pr lev s l aide d un couvillon V Placer l couvillon dans un tube de tampon d chantillon capuchon bleu Identifier le tube sur le capuchon et ou sur l tiquette du tube Casser la tige de l couvillon et bien refermer le tube Tenir la tige de l couvillon pr s du bord du tube utiliser une gaze pour minimiser les risques potentiels de contamination Soulever l couvillon de quelques millim tres mm du fond du tube et casser la tige contre la paroi du tube M thode alternative utilise
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