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1. BIOLABO pE www biolabo fr aa FABRICANTE Les Hautes Rives 02160 Maizv France BIOLABO REF 4500100 100 tests Ri 20mL R2 75mL R3 75mL R1 2x20mL R2 2x7 5mL R32x75mL R4 1x1 0mL R5 TPHA Test de hemaglutinaci n para la determinaci n cualitativa y semicuantitativa de los anticuerpos de Treponema pallidum en suero o plasma humano R4 1 0 mL R5 1 0mL 1x1 0mL 4500200 200 tests SOPORTE TECNICO Y PEDIDOS Tel 33 03 23 25 15 50 Fax 33 03 23 256 256 E O A O CE C SIGNIFICACION CLINICA 1 2 La S filis es una enfermedad ven rea causada por un microorganismo spirochaete Treponema pallidum Este microorganismo no puede ser cultivado en medio artificial por lo que el diagn stico de la s filis se basa sobre la correlaci n de los datos cl nicos y la detecci n de anticuerpos espec ficos por tests serol gicos Los tests de detecci n de la s filis utilizan la cardiolipina asociada a la lecitina como ant geno Son tests simples de emplear pero los falsos positivos son frecuentes debido a la naturaleza no trepon mica de los ant genos Los tests TPI Treponema pallidum Inmovilizaci n y FTA ABS Fluorescent Treponema Assay utilizan el Treponema pallidum pat geno como ant geno pero presentan algunas desventajas para los tests de rutina El test TPI necesita utilizar T pallidum pat geno vivo y el test FTA ABS requiere la utilizaci n de un microscopio de fluorescencia as como un n2. Distribuir 25 uL de diluyente vial R1 de los pozos B a H incluidos 2 Transferir 25 uL de suero diluido 1 20 del test de detecci n en los pozos A y B Mezclar bien el contenido del pozo B 3 Tomar 25 uL de suero diluido del pozo B y diluir en al cuotas de 25 uL de forma repetida de los pozos B a H incluidos rechazando 25 uL de la diluci n del pozo H 4 Asegurarse que las c lulas test est n bien puestas en suspensi n A adir 75 uL de c lulas test de los pozos A a H incluidos Esto conduce a una diluci n 1 80 en el pozo A hasta 1 10240 en el pozo H 5 Homogeneizar mec nicamente o manualmente el contenido de los pozos 6 Cubrir la placa y situarla protegida de la luz del calor y de cualquier fuente de vibraci n 7 Incubar 45 60 minutos a temperatura ambiente Leer los resultados 8 Los resultados son estables 24 horas si la placa est cubierta y si las precauciones aqu arriba son respetadas 9 Alfin del test tirar las placas utilizadas ver Precauciones Made in France Ultima Versi n www biolabo fr AAA INTERPRETACIONES DE LOS RESULTADOS Negativo M todo cualitativo CONTROL totalidad del fondo del pozo Ligeramente Velo de c lulas cubriendo No hay aglutinaci n del pozo Velo de c lulas con un agujero central bien visible bot n compacto bot n central habitualmente con bot n compacto un peque o centro claro Fuertemente Velo de c lulas cubriendo la No hay aglutinaci n Positivo bo
3. reactivos BIOLABO est n destinados a personal cualificado para uso in vitro e Verificar la integridad de los reactivos antes de su utilizaci n Utilizar equipos de protecci n bata guantes gafas e No pipetear con la boca e En caso de contacto con la piel o los ojos enjuagar abundantemente y consultar con un m dico Los reactivos contienen azida de sodio concentraci n lt 0 1 que puede reaccionar con metales como el cobre o el plomo de las tuber as Enjuagar con abundante agua Los controles se realizan a base de sueros humanos Cada suero humano utilizado en la fabricaci n de los controles ha sido analizado y ha dado resultados negativos para el ant geno de superficie de la hepatitis B HBsAg los anticuerpos de la hepatitis C anti HCV y del VIH 1 y VIH 2 Sin embargo como ning n test puede garantizar de forma absoluta la ausencia de cualquier agente infeccioso tratar este producto como potencialmente infeccioso e Para m s informaci n la ficha de datos de seguridad se puede obtener por petici n Eliminaci n de los deshechos respetar la legislaci n en vigor Los accesorios reutilizables deben ser esterilizados por un m todo apropiado despu s de su utilizaci n Los accesorios de uso nico deben ser considerados como deshechos potencialmente infecciosos e incinerados o autoclavados Vertidos accidentales de material potencialmente infeccioso deben ser eliminados y tratados como indicado aqu abajo La superfi
4. A ABS Interpretaciones de los resultados Reacciones fuertemente positivas pueden conducir a unos pliegues en el borde del velo celular Cuando el pozo Test es positivo tambi n se debe observar el pozo Control Las c lulas Control se aglutinan en un bot n compacto No deben servir en ning n caso de referencia tal como imagen de no reactividad porque las c lulas Control aparecen bajo la forma de un bot n mas compacto que las c lulas Test no reactivas Una aglutinaci n en el pozo de control indica la presencia de aglutininas no espec ficas en la muestra tal resultado debe considerarse como NO VALIDO Un suero que da este tipo de resultado debe ser adsorbido utilizando las c lulas Control como indicado en el Procedimiento en caso de adsorci n no espec fico Una reacci n dudosa con las c lulas Test se considera como INDETERMINADA Este resultado puede corresponder a un principio de Sffilis primaria o a un viraje Estas muestras deben ser testadas en un primer tiempo de nuevo con el m todo cualitativo y ulteriormente para verificar si el t tulo aumenta o no Tambi n se recomienda realizar un test de confirmaci n Reagina y o otro test FTA ABS para completar la tabla diagn stica BIBLIOGRAFIA 1 Rathlev T Haemagglutination tests utilizing antigens from pathogenic and apathogenic Treponema pallidum WHO VDT RES 1965 77 65 2 Tomizawa T Kasamatsu S Haemagglutination tests for diagnosis of syphilis A prelimina
5. cie potencialmente contaminada debe ser desinfectada con un desinfectante o alcohol a 70 Por medida de seguridad tratar toda muestra como potencialmente infecciosa en el respeto de las buenas pr cticas de laboratorio Respetar la legislaci n en vigor TOMA Y PREPARACION DE LA MUESTRA Suero Tomar una muestra de sangre de paciente y dejar coagular Centrifugar la sangre coagulada y separar el suero Trabajar de forma imperativa sobre suero reci n extraido Plasma Tomar una muestra de sangre de paciente en un vial de colecta de plasma Centrifugar la muestra y separar el plasma Trabajar de forma imperativa sobre suero reci n extraido No utilizar suero o plasma hemolizado contaminado o lip mico que sean susceptibles de interferir con el test El suero se puede conservar a 2 8 C por lo menos durante 7 d as Para un tiempo prolongado almacenar a 20 C una vez solamente Homogeneizar las muestras congeladas antes de utilizar As Gj No A Li a LOT Referencia del producto Consultar instrucciones Numero de lote Protegido de la luz Suficiente para Diluir con Versi n 18 09 2014 HS INTERFERENCIAS Los anticuerpos desarrollados en una S filis pueden persistir despu s de la curaci n Es la raz n por la cual el test TPHA positivo puede indicar una infecci n presente o pasada Al igual que otros tests de serodiagn stico el test TPHA no permite distinguir la s filis de otras infecciones trepon micas ej p
6. ian Los signos cl nicos se deben tomar en consideraci n Aunque el test TPHA sea muy espec fico resultados falsamente positivos han sido constatados en pacientes que sufren de la lepra mononucleosis infecciosa y turbias de tejido conjuntivo El test FTA ABS permite la diferenciaci n entre las IgG y las IgM m s precoces y puede ser entonces utilizado para confirmar el test TPHA Este test es tambi n muy til en el caso de S filis muy precoz donde el test de hemaglutinaci n puede dar resultados negativos A CONTROL DE CALIDAD Controles positivos y negativos incluidos en la caja Programa externo de control de calidad Se recomienda controlar en los siguientes casos e Al menos un control por rutina e Al menos un control cada 24 horas e Cambio de vial del reactivo Cuando los resultados del control son incorrectos aplicar las siguientes acciones 1 Repetir la operaci n utilizando el mismo control 2 Si los resultados siguen incorrectos utilizar otro vial de control y repetir el test 3 Si los resultados siguen incorrectos utilizar otro vial de reactivo y repetir el test 4 Si los resultados siguen incorrectos contactar el servicio t cnico BIOLABO o el distribuidor local NAAA PRESTACIONES Especificidad Dos estudios independientes sobre 2900 sueros de donantes pertenecientes a una poblaci n de bajo riesgo han mostrado cada uno 100 de consenso con m todos pre existentes La tasa de reactividad inicial s
7. iendo del 0 1 y la tasa de reactividad repetida siendo del 0 Un estudio independiente sobre suero antenatal especificidad con 95 de confianza 98 04 100 Sensibilidad Un estudio interno realizado sobre 110 muestras determinadas como positivas dan el 100 de resultados positivos con el 95 de confianza 98 04 100 muestra 100 de NAAA E MODO DE EMPLEO TECNICA MANUAL METODO CUALITATIVO Prever 3 pozos de la placa de microtitraci n por muestra 1 Poner cada uno de los componentes a temperatura ambiente 2 A adir 190 uL de diluyente en el pozo 1 3 A adir 10 uL de suero en el pozo 1 4 Con la ayuda de una micropipeta mezclar el contenido del pozo 1 y transferir 25 uL de esta diluci n 1 20 en los pozos 2 y 3 5 Poner en suspensi n por inversiones las c lulas Test y Control 6 A adir 75 uL de c lulas Control en el pozo 2 7 A adir 75 uL de c lulas Test en el pozo 3 8 Homogeneizar mec nicamente o manualmente el contenido de los pozos 9 Cubrir la placa y situarla protegida de la luz del calor y de cualquier fuente de vibraci n 10 Incubar 45 60 minutos a temperatura ambiente Leer los resultados 11 Los resultados son estables 24 horas si la placa esta cubierta y si las precauciones aqu arriba son respetadas 12 Al fin del test tirar las placas utilizadas ver Precauciones METODO SEMICUANTITATIVO Prever 8 pozos de la placa de microtitraci n por muestra Identificarlas de A a H 1
8. ivel elevado de competencia El test TPHA es reconocido por su comodidad de utilizaci n y su especificidad para el diagn stico de las infecciones trepon micas Su especificidad es comparable a la del test TPI y su sensibilidad pr xima a la del test FTA ABS Solamente necesita un m nimo de instrumentos de laboratorio y es muy simple de realizar PRINCIPIO El test TPHA es un test de hemaglutinaci n indirecto IHA para la determinaci n de anticuerpos de T pallidum en el suero plasma humano Eritrocitos aviarios estabilizados son sensibilizados por componentes antig nicos de T pallidum pat geno cepa de Nichol C lulas test aglutinan en presencia de anticuerpos espec ficos de T pallidum y forman una imagen velo caracter stico en los pozos de una placa de microtitraci n Toda reacci n no espec fica se detecta por la utilizaci n de las c lulas Control que son eritrocitos aviarios no sensibilizados Los anticuerpos de treponema no pat genos son adsorbidos por un extracto de treponemas de Reiter incluido en la suspensi n de c lulas Test El resultado del test se obtiene en 45 60 minutos y el velo caracter stico de la aglutinaci n celular es f cilmente legible y persistente REACTIVOS Vial R1 Diluyente para la prediluci n de las muestras Vial R2 Suspensi n de c lulas Test Eritrocitos aviarios estabilizados sensibilizados con el ant geno de T pallidum Vial R3 Suspensi n de c lulas Contro
9. l Eritrocitos aviarios estabilizados Vial R4 Suero de control Positivo prediluido al 1 20 Suero humano que contiene anticuerpos contra T pallidum Listo para el uso El test cuantitativo da un resultado equivalente a un t tulo de 1 640 a 1 2560 Vial R5 Suero de control Negativo prediluido al 1 20 Suero humano exento de anticuerpos contra T pallidum Tamp n de diluci n PREPARACION DE LOS REACTIVOS Los reactivos est n listos para el uso tl a IVD K Fabricante Fecha de caducidad Uso in vitro Temperatura de conservaci n Made in France Ultima Versi n www biolabo fr USO IN VITRO REACTIVOS Y MATERIAL COMPLEMENTARIOS 1 Pipeta de precisi n adecuada para distribuir 10 25 75 190 uL 2 Placa de microtitraci n con fondo en U ESTABILIDAD Y CONSERVACION Almacenar a 2 8 C protegido de la luz e En ausencia de contaminaci n almacenada en el vial de origen y utilizada como se indica en las instrucciones de uso los reactivos son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta de la caja Los viales que contienen los reactivos deben ser almacenados de pie e Rechazar cualquier reactivo contaminado o que no d resultados correctos con los sueros de control No utilizar los reactivos despu s de la fecha de caducidad Los reactivos contenidos en cada caja han sido standarizados para producir la reacci n esperada y no deben ser intercambiados con otros lotes AAA AAA PRECAUCIONES Los
10. ry report Japan J Med Sci Biol 19 305 308 1966 3 Rathlev T Haemagglutination test utilizing pathogenic Treponema pallidum for the serodiagnosis of syphilis Br J Vener Dis 1967 43 181 5 4 Tomizawa T Kasamatsu S Yamaya S Usefulness of the haemagglutination test using Treponema pallidum antigen TPHA for the serodiagnosis of syphilis Jap J Med Sci Biol 1969 22 341 50 5 Sequeira P J L Eldridge A E Treponemal Haemagglutination test Br J Vener Dis 1973 49 242 8 6 Larsen S A Hambie E A et coll Specificity sensitivity and reproducibility among the fluorescent treponemal antibody absorption test the microhemagglutination assay for Treponema pallidum antibodies and the hemagglutination treponemal test for syphilis J Clin Microbiol 1981 14 441 445 7 Paris Hamelin A Dreux P et coll Tr pon matoses biologiques Feuill Biol 1991a 23 88 89 8 Houng H Syphilis new diagnostic directions Intern J STD and AIDS 1992 3 391 413 9 Sluis J J Van Der Laboratory Techniques in the diagnosis of syphilis a review Genitourin Med 1992 68 413 9 10 Daguet G L Diagnostic Biologique de la Syphilis Technique et Biologie 1995 120 5 30 11 North ML et Guntz Ph S rodiagnostic de la syphilis La Revue Fran aise des Laboratoires 1997 294 51 58 aspects cliniques et Versi n 18 09 2014
11. t n compacto aproximadamente 1 3 del fondo C lulas compactadas en un No hay aglutinaci n M todo cuantitativo Negativo 1 80 1 160 1 320 1 640 1 1280 1 2560 1 5120 El t tulo corresponde a la m s fuerte diluci n que conduce a una aglutinaci n Cualquier muestra que da una aglutinaci n inferior a es negativa Cualquier muestra que da una aglutinaci n superior a debe ser considerada de forma provisoria como positiva Se debe repetir el test en duplicado a adiendo las c lulas Control en la primera serie de pozos y las c lulas test en la otra serie Si la aglutinaci n en la serie de c lulas test es m s fuerte que en la serie de c lulas Control la muestra contiene anticuerpos antitrepon micos y ser sometida a otros tests de confirmaci n Si la aglutinaci n en la serie de c lulas Control es superior o igual a la de serie de c lulas test el modo de empleo aqu abajo para adsorci n no espec fica debe aplicarse Modo de empleo en caso de adsorci n no espec fica 1 Transferir 100 uL de suero para testar en un peque o tubo y a adir 400 uL de c lulas Control Mezclar bien y dejar incubar una hora 2 Centrifugar 15 minutos a 1000 rpm y testar el sobrenadante con el m todo cualitativo Nota La muestra es as diluida al 1 5 esto debe ser tomado en consideraci n para preparar las diluciones Si el resultado es de nuevo no espec fico repetir el test con otro m todo ej Reagina o FT
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