Reactivos para Microbiología
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1. An lisis Microbiol gicos Anexo Pr ticas Medios de Cultivo y afines para Microbiolog a Medio VPRM caldo de Clark y Lubs para los ensayos de RM y V P MS MA 7 Dextrosa EEE A RR se GO AE pH del medio apunto de uso 7 0 aproximac Soluci n yodo yodurada seg n AOAC para el caldOte rationato bilis verde brillante Cantidad PRA Yoduro pot sico Agua destilada Soluci n yodo yodurada seg n B O E para el caldo tetrationato bilis verde brillante Cantidad NET gt DUO Yoduro pot sico AAA OA Agua destilada SAA ASA P gina 8 Salvador Camacho Garrido An lisis Microbiol gicos Anexo Pr ticas Medios de cultivo deshidratados agares NOMBRE USUAL SIGLA OTROS NOMBRES OBSERVACIONES Recuento en placa PCA Nutritivo _ gt _ gt __ Levine EMB sinaazuld metileno gt Eo TS MS A Citrato de Simmons s REP AA Klinger KIA 4 _ ff AltemmativaaTSI_ _ Rojo bilis violeta glucosa______VRBBG a Alternativ a McConkey Rojo bilis violeta lactosa VRBL Da falt rmativoaMcConkey Suito polimiina sltadiaci a SP5 OI Atejnativa alison lar res E nekon 1 t Verde brillante _ BGA AA ____ _Baird Parker_________ B P _ Aparteyemahuevotelurito _ Sabouraud CeNAM_ _ _ CSS Aparteoxitetraciclina ea O O O O a e OTROS NOMBRE USUAL SIGLA NOMBRES OBSERVACIONES Agua de peplona A de peptona Agua de peptona tamponada peptona AROSA CA2. Reactivos para Microbiolog a Desinfectantes Soluci n de hipoclorito para inmersi n Cantidad Lej a comercial A 4 E 0521 mL Seadet A O E o Soluci n de fenol para aspersi n Compuesto Cantidad EA A y E Agua destilada mr 100 mL P gina 6 Salvador Camacho Garrido An lisis Microbiol gicos Anexo Pr ticas Reactivos para Microbiolog a Pruebas Bioqu micas Rojo de Metilo Rojo de metio gt Mg Etandal95 o A d S y oO Amadestlaa _ pu r N y vn Reactivo para el Indol Compuesto Alcohol am lico o isoam lico Acido clorh drico c c Se disuelve el aldeh do en el alcohol en ba o de agua a 60 C se A y se a ade el cido gota a gota Se conserva en refrigerador Reactivo Kovacs para la oxidasa Compuesto Cantidad Cloruro de tetrametil p fenilendiamina 0 1 g Agua destilada Pa 10 mL Acido asc rbico como a PAS 0 01 g Se conserva en frascg oscuro y en re Reactivo A de Barrit para la prueba de V E rigerador Compuesto Cantidad Hidr xido pot sico AAA AAA 16 g ES SN A 100 mL Reactivo B de Barrit para la prueba de Voges Proskauer Compuesto Cantidad a naftol Etanol al 95 AA tasa para la prue mai Compuesto id pas RI a NAAA E T A rueba de la catalasa Compuesto Cantidad Agua oxigenada concentrada Agua 100 mL P gina 7 Salvador Camacho Garrido
3. Categor a N 1 A 0 3 _ A JS _Re A po o o A _ XA A lt D 1 93 l l Y p lt b T E aNMP 4 68 gt resultados que contienen los tuBOs tivo y negativos las Categor as 1 2 el 91 y las categor as 1 2 3 el 99 de los resultados La Categor a 4 y las combinaciones que no figuran son muy improbables P gina 12 Salvador Camacho Garrido An lisis Microbiol gicos Anexo Pr ticas USO DE CRIOTECA CRIOTECA Una crioteca no es m s que un conjunto de viales dise ados para facilitar la inoculaci n manipulaci n y conservaci n de cepas microbianas Cada vial contiene unos 25 aros de 1dr10 porosi adherencia microbiana y l quido criog nigo Existen 5 tipos de criotecas 1 Cl sica general Levaduras y mohos Marina Skim Milk m o dif ciles Anaerotecas anaerobios qu micamente trat SN MODO DE EMPLEO OBTENCI N 1 Introduzca una suspensi n espesa de cultivo o una colonia en el vial Idealmente se debe partir de cultivos frescos 18 14 h de vida en Agar Sangre TSA BHI o TSB para bacterias y en SDA SDB o YMB par hongos incubados a 35 C En caso de utilizar caldos es preferible centrifugar decantar la zona enos espesa y utilizar el fondo 5 Congele el vial entre 2 RECUPERACI N ne 1 Extraiga el vial del congelador y con golpes secos separe los aros 2 Extraiga un aro con un palillo est ril 3 Haga rodar el
4. vida que est basada en la segunda Bey de laLermodin mica lawcual dice que el universo siempre incrementa su entrop a o deserden Esta teor dw dice que los sistemas vivos son regiones localizadas donde se produce un continuo incremento de Grden sin intervenci n externa Tal vez sea la m s segura en estos momentos para defini qu es la vida O tal vez debamos cambiar nuestro concepto del universo en una forma radical P gina 2 Salvador Camacho Garrido An lisis Microbiol gicos Anexo Pr ticas FLORA HABITUAL Nuestros cuerpos alojan normalmente gran n mero de microorganismos diversos especialmente bacterias normal pueden transformarse en pat genos individuo se altera la virulencia del organis pat genos y producen algunos nutrientes esenciales par producida por la flora del intestino Flora Normal de Piel Staphylooccus epidermidis o coag Staphylococcus aureus Diphteroides Coynebacterium sp Propionibacterium Flora Normal de Boda Streptococcus mitis y sa Diphteroides Anaerobios F usobacterium Staphylococcus epidermidis O coag ba Espiroquetas Flora Normal de Nasofarimge Staphylococcus epidermidis Staphylococcus aureus Streptococcus pneumoniae y pyogenes Hemophylus Neisseriae Lactobacilus Anaerobios Gran negativo Enterococcus Enterobacteri ceas Mycobacteria P gina 3 Salvador Camacho Garrido An lisis Microbiol gicos Anexo Pr ticas Flora Normal del Intes
5. A ZIT lactosado LB A Caldo enterobacterias PCa S SS Caldo biliado lactosado al verde brillante BGBL J O Caldo etil violeta azida_ EVA Litsky __3_3 o062 o cl AA _Caldo tetrationato bilis verde brillante Aparte soluci n yodo yodurada Alternativo a selenito cistina gt Taylor Caldo selenito verde brillante sulfamida Caldo lisina descarboxilasa P gina 9 Salvador Camacho Garrido An lisis Microbiol gicos Anexo Pr ticas MEDIOS DE CULTIVO DESHIDRATADOS PARA AGARES Agar polvo Cetrimide Rosa de bengala con cloranfenicol mm A 6 Desoxicolato citrato Hynes gt gt gt gt Ss AA Hierro sulfito gt gt gt YA A AO Klinger KID Y __h_ __ _ M M coliformes fecales M FC A 20 MEDIOS DE CULTIVOS DESHIDRATADOS PARA CALDOS C 1 Lactosado B a A NI Nutritivo OA CCA As 2335 MEDIOS DE CULTIVO ss raza o A Agua de peptona PW AA YY o Y OWA Agua de peptona tamponada BPW ROO CMA REACTIVOS Y COLORANTES Extracto de levadura Rs KH2P04 dihidr genofosfato de potasio O Z o O o S OR O ECTE E SI AI RENGTIVOSEN FRIGOR FICO X _Emulsi meyema de huevo tefito eN Fa OxitetraciRL A d O f k Tetracielina To OB Urea soluci n al 40 fa P gina 10 Salvador Camacho Garrido An lisis Microbiol gicos Anexo Pr ticas E M B Agar Este medio tambi n denominado E A M es utilizado para
6. An lisis Microbiol gicos Anexo Pr ticas Qu es la vida La vida es una gran trampa ling stica se utiliza como si fuera un nombre pero ser a m s adecuado considerarla como un verbo Lynn Margulis en Darwin era lamarckista La vida es algo que absorbe energ a y la convierte en estructura en orde ganizaci n John Gribbin en Redes 256 Dios no juega a los dados Lo m s importante es que la c lula vivano es unt erid m gica sino un superordenador Se trata de un sistema de procesamiento y reproducci n de informaci n tan av nzado que nuestros ordenadores resultan pat ticos en comparaci n La naturaleza ha producido una m quina de procesamiento de informaci n inigualable la C lula viva Paul Davis en Redes 359 Vida extraterrestre Realmente somos un caldo de genes que est n en la poblaci n y cada uno de nosotros es s lo un contenedor temporal de esos genes En el marco hist rico el individuo no es importante los genes son los que contin an David Bainbridge en Redes 328 Vivir en el tero de la madre un ingeniero familiarizado solamente con m quinas de vapor estar preparado despu s de examinar la construcci n de un motor el ctrico para descubrir que ste funciona basado en principios que l todav a no entiende El ve el cobre que le es familiar por su uso en calderas usado aqu bajo forma de largos hilos enrollados formando bobinas el hierro que le es fami
7. a suavemente Citrobacter spp tro oscuro con permite el ndidad permite Azul de metileno 0 065 z pH final E Siembra En superficie por estriado a partir de u En profundidad para favorecer el desarroll culo poco d S aisladas lg clamidosporas Incubaci n De 24 a 48 horas a 35 37 C en aerobiosis Resultados Microorganismos Tipo de Colonia Escherichia coli ATCC 25922 Verdosas con brillo met lico y centro negro azulado Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Mucosas rosa p rpura confluentes Proteus mirabilis ATCC 43071 Incoloras Enterococcus faecalis ATCC 29212 Incoloras peque as puntiformes Shigella flexneri ATCC 12022 Incoloras Salmonella typhimurium ATCC 14028 Incoloras Nacas pre La estugl j de metileno al color naranja El color p rpura se restaura por agitaci n La presencia erilizadoWs normal y no debe ser removido ya que es parte esencial del mismo Almacenamiento Medio deshidratado a 10 35 2 Medio preparado a 2 8 C Presentaci n x 1009 C digo B02 101 05 lx 5009 C digo B02 101 06 6 x 50 ml BO4 101 84 http www britanialab com ar esp productos b02 embagar htm P gina 11 Salvador Camacho Garrido An lisis Microbiol gicos Anexo Pr ticas Valores del NMP para 3 tubos inoculados con cada una de tres diluciones decimales sucesivas N mero de tubos positivos observados en cada diluci n NMP de microorganismos por mL de la primera diluci n
8. abajo durante 20 24 horas a 25 37 C 9 Registrar los resultados seg n el patr n o por comparaci n con uno no inoculado La reacci n ser considerada como negativa cuando no haya sufrido alteraci n alguna excepto en las pruebas de Voges Proskauer e Indol Para el indol se mantiene con la superficie plana P gina 14 Salvador Camacho Garrido An lisis Microbiol gicos Anexo Pr ticas DESARROLLO EN BGA Salmonella typhy Rojo Ria Salmonella typhimorium tt o RES Fl Ama llo A Amaron f St aureus DESARROLLO EN HECKTOEN MICROORGANISMO DESARROLLO lt COLOR COLON IA AA S a E coli E Salmonella enteriditis Azul verdoso centro negro Salmonella typhimorium Azul verdoso centro negro Enterococcus faecalis 2 DESARROLLO EN EMB A o a gt ESARROLLO pon COLONIA ma R S P rpura violeta con o sin brillo met lico verdoso o A Salmonella typhimorium A st corea Mlm ___ DESARROLLO EN BP A MICROORGANISMO DESARROLLO COLOR COLONIA Proteus mir bilis ATC 25933 _ _______ Marr n ___ E coli ATCC 25922 A A A A L o o o Jf aureus AT pH Negra con halos de lecitinasas P gina 15 Salvador Camacho Garrido
9. aro sobre un agar no selectivo como si realizase un agotamiento en estr as Si la cepa fuera de crecimiento dif cil es preferible incubarlo previamente en un caldo de cultivo general antes de pasarlo a la placa Si la cepa es de crecimiento f cil el cado de cultivo general incubado puede utilizarse directamente como fuente de la cepa 4 A por esterilizaci n tanto el palillo como el aro una vez utilizado y nunca lo va realice si mpre duplicados ita que el vial se atempere y gu rdelo inmediatamente en el Bajar con m o peligrosos fuales en el desecho de material contaminado P gina 13 Salvador Camacho Garrido An lisis Microbiol gicos Anexo Pr ticas USO DE BBL ENTERORUBE I BBL ENTEROTUBE H diferentes medios Agar M Conky Agar Endo EMB Agar Shigella y VRBG entre otros PROCEDIMIENTO 1 Quitar los capuchones de protecci n roscados Bajo el blanco se encuentra la punta de la aguja de inoculaci n ya est ril 2 Con dicha punta toca una colonia perfectamente aisla da y sin tocar el agar o 1 p 4 5 6 cula pl stica que recubre los orificios Mi lactosa arabinosa sorbitol Voges itir el crecimiento en aerobiosis Proskauer dulcitol fenilalanina urea 7 Enrosca de nuevo los dos capuchones 8 Incuba preferentemente en posici n vertical con el compartimento de la glucosa tap n roscado azul para arriba o tambi n en posici n horizontal con la pel cula de pl stico hacia
10. el aislamiento selectivo de bacilos Gram negativos de r pido desarrollo y escasas exigencias nutricionales Permite el desarrollo de todas las especies de la familia Enterobacteriaceae Fundamento Este medio combina las f rmulas de Holt Ha rendimiento en el aislamiento selectivo de e La diferenciaci n entre organismos capaces incapaces de hacerlo est dada por los indica inhibitorio sobre muchas bacterias Gram positiva presentan un caracter stico brillo met lico Las cepa periferia azulada o rosada mientras que las que no lo h crecimiento de Candida spp como colonias rosadas y punti el desarrollo de clamidosporas en C albicans Enterococcus spp C como colonias puntiformes y transparentes mientras que Acinetobacter spp y otras bac idativas pueden dar colonias de color azul lavanda esto puede ocurrir aunque las cepas no sean capaces de acidificar a partir de lactosa al 0 5 y ello se debe a la incorporaci n de azul de metileno a sus membranas En este medio se obtiene adem s un buen desarrollo de especies de Salmonella y Shigella F rmula en gramos por litro Instrucciones Peptona 10 0 Lactosa 50 Suspender 36 g del polvo en un litro de agua destilada Reposar 5 Sacarosa 5 0 minutos mezclar calentando a ebullici n durante 1 o 2 minutos Fosfato dipot sico 2 0 hasta su disoluci n Esterilizar en autoclave a no m s de 121 C Agar 13 5 durante 15 minutos Enfriar a 45 C y distribuir agitando MESA AN Eosin
11. liar ingeniero no pensar que el motar el ctrico comienza a girar cuando Seqacciona Uni Schr dinger What is Life Cambridge University Press 1992 Definici n biol gica Dada la confusi n a la hora de definir vida se opt por definirla en funci n a los resultados que se obtienen tras el desarrollo completo del ADN y no en base al potencial mismo de esa mol cula as se establecieron algunas caracter sticas comunes 1 Los seres vivos requieren energ a Es decir se alimentan 2 Los seres vivos crecen y se desarrollan P gina 1 Salvador Camacho Garrido An lisis Microbiol gicos Anexo Pr ticas Definici n metab lica Un sistema vivo es un objeto con una frontera definida que continuamente intercambia sustancias con el medio circundante sin alterarse Definici n bioqu mica Todo organismo vivo contiene informaci n hereditaria mi d ados Definici n gen tica La vida es todo sistema capaz de evolucionar por selec Definici n termodin mica Los sistemas vivos son regiones localizadas donde se produce un continuo incremento de orden sin intervenci n externa Especulaciones recientes VIDA ES UN ESTADO DE LA ENERG A CU NTICA EN ALGUNOS SISTEMAS TERMODIN MICOS CUASI ESTABLES QUE DETERMINA UNA SERIE DE INTERVALOS QUE DEMORAN SU DIFUSI N O DISPERSI N ESPONT NEA HACIA M S MICROESTADOS POTENCIALES _ Y Existe una teor a final la cutl_para algures es laveonclusi n definitiva de
12. tino Grueso Anaerobios estrictos Bacteroides sp cocos Gram negativos anerobios Clostridium Enterobacteri ceas E coli Enterococos Flora Normal Tracto Urogenital Ambos Sexos Flora de piel en uretra dist Mujeres Adultas Vagina Lactobacilli Diphteroides Anaerobios Levaduras Candida sp P gina 4 Salvador Camacho Garrido An lisis Microbiol gicos Anexo Pr ticas Reactivos para Microbiolog a Colorantes Azul de metileno de Loeffler para tinciones simples ff QQ Cantidad Soluci n de Hidr xido pot sico al 1 AN QU Um Azul de metileno sol Saturada en etanol de 95 MY AY Agua destilada NN a A n 100 mL Safranina para tinci n de Gram Y Compuesto Cantidad ETE O S 0 25 y Agua destilada AS 100 mL Lugol para tinci n de Gram Compuesto Cantidad Yodo 0 33 g Yoduro pot sico 0 66 g Agua destilada 100 mL Violeta cristal par JEG m Cantidad Violeta cristal Violeta de gen iana _ OOOO O NS ASS S 053 Agua destilada y 100 mL Fucsina b sica para tinci n de Es Compuesto Cantidad Fucsina fenicada 6 6 mL Agua destilada 100 mL Fucsina fenicada para tinci n PA Fucsina b sica a e AAA E o AR EE TT Fenol al S AA TA 5 9 ex soluci n acuosa Verde de quita filtros de membrana Cantidad Verde malaquita Agua destilada 100 mL P gina 5 Salvador Camacho Garrido An lisis Microbiol gicos Anexo Pr ticas
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