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1. calibradores LIAISON BAP OSTASE deben dividirse en partes despu s de la reconstituci n si el an lisis no se realiza inmediatamente Los calibradores de BAP han demostrado ser estables durante 8 horas cuando se almacenan a temperatura ambiente Los calibradores reconstituidos que no se utilicen deber an dividirse en partes con un m nimo de 350 pl y congelarse Pueden utilizarse despu s de 3 ciclos de congelaci n descongelaci n durante un m ximo de 2 meses Una vez mezclados los calibradores dest pelos y col quelos en la gradilla de muestras del LIAISON Analyzer con el c digo de barras hacia fuera y deslice la gradilla hasta la zona de muestras del analizador Siga las instrucciones del manual del analizador para cargar las muestras e iniciar el ensayo es310970 38058 6 12 4 11 PROCEDIMIENTO DE ENSAYO Para obtener unas prestaciones anal ticas ideales hay que respetar estrictamente las instrucciones del manual operativo del instrumento LIAISON Analyzer Cada par metro del test es identificado mediante el c digo de barras en la etiqueta del integral de reactivos Si el lector del c digo de barras no funciona correctamente el integral no puede ser usado y debe descartarse H gase referencia al manual operativo del instrumento para una informaci n m s detallada LIAISON XL Analyzer Cada par metro del test es identificado mediante informaciones codificadas en el Tag para identificaci n de radiofrecuencia Radio Frequency IDent2. 3 20 0 T 1 0 20 40 60 80 100 120 140 160 Concentraci n de BAP esperada ug l 16 7 Especificidad La reactividad cruzada del ensayo LIAISON BAP OSTASE con la fosfatasa alcalina hep tica LAP se compar con un m todo de referencia utilizado frecuentemente La reactividad cruzada con la LAP en muestras de suero enriquecidas con LAP enriquecidas con gt 50 de LAP es comparable al m todo de referencia con la ecuaci n valores de LAP de LIAISON BAP 0 85 valores de LAP del m todo de referencia 3 39 R 0 967 Las muestras con altas elevaciones de LAP pueden arrojar resultados elevados en el ensayo LIAISON BAP OSTASE Comparaci n de m todos de fosfatasa alcalina hep tica LAP N 23 y 0 85x 3 39 R 0 967 60 80 100 E A lt m e Z O 9 lt pa kz A lt M o kz m 3 he 2 q gt Valores de LAP del m todo de referencia ug l es310970 38058 6 12 8 16 8 Recuperaci n Se analizaron cinco muestras cl nicas enriquecidas de alta concentraci n y cinco muestras cl nicas de baja concentraci n Las muestras utilizadas para determinar el porcentaje de recuperaci n se preparan mezclando proporciones definidas de las muestras de alta y baja concentraci n y realizando an lisis en series de cinco ug l ug l ug l recuperaci n Muestra con concentraci n alta 1 HS1 1286 To o J y O AAA so al aa e MA A AN 700 77 A TE IAN ERE o o
3. 70 EN EA Muestra con concentraci n baja 1 181 150 _____ ______l _____ Muestra con concentraci n alta 2 HS2 972 Jo o Jo y poo y asza f 7o2 68 9 poo y asza S ses e2 08 A a e 442 Muestra con concentraci n baja 2 LS2 183 J Muestra con concentraci n alta 3 HS3 998 J po Cl ases 718 va loo sets si eo po sees 425 443 Muestra con concentraci n baja 3 LS3 143 J Muestra con concentraci n alta 4 HS4 1129 __ _____ PERS wasa ES o S oa A a poo onsa e s 106 po Cl salsa 1 457 o Muestra con concentraci n baja 4 LS4 103 _ ____ ______ _______ Muestra con concentraci n alta 5 HS5 1119 _____ ______ _______ IS NE AN E 7 0 EN E lo tmssjdtiss 6 es 105 poo y wass 41 a 107 Muestra con concentraci n baja 5 LS5 107 Jo o o o S y A S INE TE PEE OOOO Poo S S Media aisi i i A lio e ll A ala en olojo o A Jolo A 16 9 Efecto de gancho a concentraciones altas No se ha observado efecto de gancho con concentraciones de BAP de hasta 2 000 ug l 16 10 Diluci n de la muestra con concentraci n alta gt 120 ug l Las muestras con lecturas superiores a 120 ug l deber n diluirse con el diluyente de muestras LIAISON BAP OSTASE 1 2 Una diluci n recomendada ser a una de 125 pl de diluyente 125 ul de muestra de paciente Mezcle bien la diluci n repita el an lisis y calcule la co
4. 8 8 DE ug l 0 61 1 92 0 23 0 73 0 53 0 73 1 19 2 08 0 76 CV 4 6 2 5 3 4 5 0 2 4 1 9 2 5 2 5 2 6 Reproducibilidad 1 2 3 4 5 6 7 8 9 N 80 80 80 80 80 80 80 80 80 Media ug l 13 1 78 2 6 83 14 5 22 4 37 9 47 8 84 6 28 8 DE ug l 0 73 2 79 0 27 0 92 0 72 1 25 1 66 2 31 0 79 CV 5 6 3 6 3 9 6 4 3 2 3 3 3 5 2 7 2 7 diluido 1 2 con diluyente de muestras 16 5 Correlaci n de pacientes Se analiz un total de 139 muestras cl nicas con LIAISON BAP OSTASE y con otro m todo automatizado seg n el EP7 A2 de CLSI y se obtuvo la comparaci n siguiente LIAISON BAP 1 01 m todo de referencia 1 37 R 0 979 Correlaci n de m todos de pacientes N 139 160 y 1 01x 1 37 140 R 0 979 120 E Oo 100 n lt q 3 80 60 o lt m 40 3 ke 5 20 gt 0 0 20 40 60 80 100 120 140 160 Valor de BAP del m todo de referencia ug l es310970 38058 6 12 7 16 6 Linealidad del ensayo Se diluyeron tres muestras de pacientes y se analizaron con el LIAISON BAP OSTASE siguiendo el EP6 A de CLSI Los resultados se analizaron mediante la regresi n lineal de la concentraci n de BAP observada en funci n de la concentraci n de BAP esperada La ecuaci n de regresi n resultante es BAP observada 1 03 BAP esperada 4 96 R 0 99 Linealidad del ensayo por diluci n 160 a y 1 03x 4 96 lt 140 R 0 99 Ss 120 D 23 100 0 19 38 80 o 60 O 7 oS 40
5. AS MUESTRAS Debe utilizarse suero humano La sangre debe extraerse as pticamente por punci n venosa y dejarse coagular el suero ha de separarse del co gulo lo antes posible Para mantener la integridad de la muestra no se requieren aditivos ni conservantes Las muestras que presentan part culas turbidez lipemia o detritus de eritrocitos pueden necesitar clarificaci n por filtraci n o centrifugaci n antes de la prueba No deben analizarse las muestras muy hemolizadas o lip micas ni las que contengan part culas o presenten una evidente contaminaci n microbiana Antes del ensayo compruebe si hay burbujas de aire y elim nelas Las muestras son estables durante 72 horas a 2 8 C si se necesita m s tiempo gu rdelas congeladas a 20 C o menos para el almacenamiento a corto plazo o a 70 C para el almacenamiento a largo plazo Las muestras pueden almacenarse en viales de vidrio o pl stico El volumen m nimo requerido es de 250 pl Si las muestras se guardan congeladas m zclelas bien antes del ensayo cuando las descongele Evite ciclos repetidos de congelaci n descongelaci n 9 CALIBRACI N Cada integrador de reactivos de LIAISON BAP OSTASE tiene una etiqueta de c digo de barras con informaci n espec fica sobre la calibraci n del lote de integrador de que se trate El an lisis de los calibradores espec ficos para el ensayo permite ajustar a la curva maestra asignada los valores RLU detectados Cada soluci n de calibraci n permi
6. DiaSorin DiaSorin Inc 1951 Northwestern Ave Stillwater MN 55082 USA C Tel 1 651 439 9710 Fax 1 651 351 5669 Preste atenci n a los cambios LIAISON BAP OSTASE 310970 1 FINALIDAD DEL ENSAYO El ensayo LIAISON BAP OSTASE de DiaSorin es un inmunoensayo por quimioluminiscencia de tipo s ndwich de adici n demorada de un solo paso indicado para la determinaci n cuantitativa de fosfatasa alcalina sea BAP en suero humano Este dispositivo est indicado para utilizarse como ayuda para el tratamiento de la osteoporosis y la enfermedad de Paget El ensayo debe realizarse en la serie de instrumentos LIAISONC 2 RESUMEN Y EXPLICACI N DEL TEST La fosfatasa alcalina sea BAP es un marcador s rico de la formaci n sea osteobl stica La concentraci n de BAP del suero humano est estrechamente relacionada con la tasa de formaci n sea osteobl stica esquel tica La medici n de la BAP es til para el diagn stico de la enfermedad de Paget y la osteoporosis as como para la vigilancia de la respuesta al tratamiento antirreabsortivo en estos pacientes La fosfatasa alcalina ALP fosfohidrolasa de mono ster ortofosf rico ptima en medio alcalino EC3 1 3 1 es una enzima altamente conservada distribuida ampliamente en la naturaleza En los humanos cuatro locus gen ticos codifican las isoenzimas de ALP TNALP tejido no espec fico intestinal l nea germinal y placentario La BAP y la fosfatasa
7. REF 319100 LIAISON XL Waste Bags REF X0025 LIAISON Waste Bags REF 9450003 LIAISON XL Cuvettes REF X0016 LIAISON Module REF 319130 LIAISON XL Starter Kit REF 319200 LIAISON Starter Kit REF 319102 LIAISON XL Disposable Tips REF X0015 LIAISON XL Starter Kit REF 319200 LIAISON XL Disposable Tips REF X0015 LIAISON Cleaning Kit REF 310990 LIAISON Light Check REF 319101 Otros materiales requeridos LIAISON BAP OSTASE Control Set Cat No 310971 Material adicional recomendado LIAISON BAP OSTASE Diluent Cat No 310972 5 ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES SOLO PARA UTILIZAR EN DIAGN STICOS IN VITRO No debe utilizarse interna o externamente en seres humanos ni animales SEGURIDAD GENERAL Todas las muestras reactivos biol gicos y materiales utilizados en el ensayo deben ser considerados como transmisores potenciales de agentes infecciosos Evite el contacto con la piel los ojos y las membranas mucosas El ensayo debe realizarse respetando escrupulosamente las buenas pr cticas higi nicas industriales Abst ngase de comer beber fumar o aplicarse cosm ticos en el laboratorio de ensayos No pipetee las soluciones con la boca Evite el contacto directo con todos los materiales potencialmente infecciosos para ello se aconseja utilizar batas de laboratorio mascarillas y protectores oculares adem s de guantes desechables L vese las manos a fondo despu s de cada ensayo Evite las salpicadur
8. alcalina hep tica LAP se derivan de un locus de TNALP com n por lo que son 100 hom logas en cuanto a estructura primaria Las diferencias en la inmunorreactividad a la LAP y la BAP se derivan de grados diferenciales de modificaci n postranslacional en cinco lugares de N glucosilaci n N123 N213 N254 N286 y N413y comunes a ambas isoenzimas y en lugares de O glucosilaci n exclusivos de la BAP En suero humano normal las isoformas BAP y LAP constituyen aproximadamente el 95 de la actividad de la ALP s rica total y est n presentes en cantidades casi equivalentes La BAP act a como una ectoenzima que se une a la membrana celular de los osteoblastos a trav s de un anclaje de alucosilfosfatidilinositol GPI hidr fobo Estudios in vitro demuestran que la BAP participa en la iniciaci n de la mineralizaci n de la matriz sea donde se libera en forma tetram rica insoluble unida a las ves culas matriciales En el suero la BAP est presente en forma de homod mero dependiendo de las acciones combinadas de dos fosfolipasas end genas circulantes la GPI PLC y o la GPI PLD Estudios de hipofosfatasia inducida por mutaciones de cambio de amino cido del gen TNALP indican que la BAP desempe a un importante papel en el desarrollo y la mineralizaci n del esqueleto actuando como una pirofosfatasa La escisi n de la pirofosfatasa un potente inhibidor de la mineralizaci n fomenta el dep sito mineral in vivo La BAP se utiliza para vigila
9. alyzer La precisi n del ensayo LIAISON BAP OSTASE se evalu seg n el EP5 A2 de CLSI Se analizaron por duplicado nueve muestras con diferentes concentraciones de analito dos veces al d a durante 20 d as de trabajo para determinar la repetibilidad y reproducibilidad del ensayo esto es su variabilidad intraensayo e interensayo Repetibilidad 1 2 3 4 5 6 7 8 9 N 80 80 80 80 80 80 80 80 80 Media ug l 14 5 25 7 56 6 64 7 87 4 6 5 12 2 53 3 31 6 DE ug l 0 47 1 01 1 85 2 78 3 46 0 22 0 52 2 08 1 26 CV 3 3 3 9 3 3 4 3 4 0 3 4 4 3 3 9 4 0 Reproducibilidad 1 2 3 4 5 6 7 8 9 N 80 80 80 80 80 80 80 80 80 Media ug l 14 5 25 7 56 6 64 7 87 4 6 5 12 2 53 3 31 6 DE ug l 1 18 1 69 4 06 5 18 5 33 0 42 0 98 3 56 2 37 CV 8 1 6 6 7 2 8 0 6 1 6 4 8 1 6 7 7 5 diluido 1 2 con diluyente de muestras es310970 38058 6 12 6 16 4 Precisi n con el LIAISON XL Analyzer La precisi n del ensayo LIAISON BAP OSTASE se evalu seg n el EP5 A2 de CLSI Se analizaron por duplicado nueve muestras con diferentes concentraciones de analito dos veces al d a durante 20 d as de trabajo para determinar la repetibilidad y reproducibilidad del ensayo esto es su variabilidad intraensayo e interensayo Repetibilidad 1 2 3 4 5 6 7 8 9 N 80 80 80 80 80 80 80 80 80 Media ug l 13 1 78 2 6 83 14 5 22 4 37 9 47 8 84 6 2
10. as o la formaci n de aerosoles cuando manipule diluya o transfiera muestras o reactivos Los reactivos derramados deben lavarse con una soluci n de lej a al 10 hipoclorito s dico al 0 5 y eliminarse como si se tratara de material potencialmente infeccioso La eliminaci n de los residuos debe efectuarse de conformidad con las disposiciones y normas generales establecidas por las autoridades con jurisdicci n sobre el laboratorio y con las leyes vigentes en cada pa s No utilice ning n kit o componente despu s de la fecha de caducidad indicada en la etiqueta Reactivos con material de origen humano Tr tense como potencialmente infecciosos Cada unidad de suero utilizada en la preparaci n de este producto ha sido verificada con un m todo aprobado por la FDA estadounidense y hallada no reactiva a la presencia de AgsHB ant geno de superficie de la hepatitis B anticuerpos de VHC y anticuerpos de VIH 1 2 Aunque estos m todos son altamente precisos no garantizan la detecci n de todas las unidades infectadas es310970 38058 6 12 2 Este producto tambi n puede contener otros materiales de origen humano para los cuales no existe prueba homologada Dado que ning n m todo de prueba conocido puede garantizar plenamente la ausencia del virus de la hepatitis B VHB del virus de la hepatitis C VHC del virus de inmunodeficiencia humana VIH o de otros agentes infecciosos todos los productos que contengan material de origen humano se d
11. das S60 Elim nense el producto y su no podr n sacarse del lugar de trabajo recipiente como residuos peligrosos P280 Llevar guantes prendas y gafas de protecci n P264 Lavarse las manos concienzudamente tras la manipulaci n P270 No comer beber ni fumar durante su utilizaci n 6 PREPARACI N DEL INTEGRADOR DE REACTIVOS Observe escrupulosamente las siguientes precauciones importantes para manipular los reactivos Resuspensi n de las part culas magn ticas Las part culas magn ticas deben estar completamente resuspendidas antes de colocar el integral en el instrumento Siga los pasos indicados a continuaci n para garantizar la suspensi n completa de las part culas Antes de quitar la protecci n de los contenedores gire hacia adelante y hacia atr s la ruedecilla dentada situada por debajo del contenedor de las part culas magn ticas hasta que la suspensi n adopte una coloraci n morena Agite horizontalmente el integral de reactivos con delicadeza y sumo cuidado para favorecer la suspensi n de las part culas magn ticas evite la formaci n de espuma Controle visualmente el fondo del contenedor de las part culas magn ticas para cerciorarse de que no hayan quedado part culas magn ticas sedimentadas Si es necesario repita el procedimiento hasta la completa resuspensi n de las part culas magn ticas Despu s de quitar la protecci n seque con sumo cuidado la superficie de cada pared para eliminar el l qui
12. do residual si fuera necesario Formaci n de espuma en los reactivos Para garantizar las mejores prestaciones del integral se recomienda evitar la formaci n de espuma en los reactivos Observe las recomendaciones siguientes para evitarla Antes de usar el integral controle visualmente los reactivos para excluir la presencia de espuma Si se observa la presencia de espuma despu s de la resuspensi n de las part culas magn ticas coloque el integral en el instrumento y deje que se disuelva la espuma El integral est listo para el uso cuando se ha dejado descansar en el instrumento las part culas magn ticas han sido mantenidas en agitaci n autom tica y se ha disuelto la espuma Cargar el integral en el rea de los reactivos del instrumento LIAISON Analyzer Coloque el integral de reactivos en el rea de los reactivos del instrumento con la etiqueta de los c digos de barras situada a la izquierda y d jelo agitar durante 30 minutos antes del uso Durante este tiempo las part culas magn ticas ser n mantenidas en agitaci n autom ticamente para garantizar una resuspensi n completa H gase referencia al manual operativo del instrumento para cargar las muestras e iniciar el ensayo LIAISON XL Analyzer El instrumento LIAISON XL Analyzer est dotado de un dispositivo magn tico interno en estado s lido que favorece la dispersi n de las micropart culas antes de colocar un integral de reactivos en el rea de los reactivos del ins
13. eber n manejar de acuerdo con las pr cticas de laboratorio correctas utilizando las precauciones adecuadas que se describen en el manual Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories de los Centros para el Control y la Prevenci n de Enfermedades y los Institutos Nacionales de Salud Centers for Disease Control and Prevention National Institutes of Health 4 ed mayo de 1999 Los reactivos que contienen azida s dica Algunos reactivos contienen azida s dica como conservante La azida s dica puede formar azidas explosivas en las ca er as de plomo y cobre por lo que es recomendable enjuagar a fondo los desag es con abundante agua tras eliminar soluciones con contenido de azida s dica Los reactivos que contienen ProClin 300 Los reactivos que contienen ProClin 300 se clasifican como irritantes seg n las Directivas Europeas aplicables 67 548 CEE 1999 45 CE CE No 1272 2008 2001 60 CE CLASIFICACI N DELA Irritante Sensibilizaci n cut nea categor a 1 SUSTANCIA PALABRA DE NA Atenci n ADVERTENCIA PICTOGRAMA Xi Irritante GHS07 Signo de exclamaci n INDICACI N DE R43 Posibilidad de sensibilizaci n en H317 Puede provocar una reacci n al rgica PELIGRO contacto con la piel en la piel CONSEJOS DE S24 Ev tese el contacto con la piel P261 Evitar respirar la niebla o el aerosol PRUDENCIA S37 Usense guantes adecuados P272 Las prendas de trabajo contamina
14. es proporcional a la concentraci n de BAP presente en calibradores controles o muestras es310970 38058 6 12 1 4 MATERIAL SUMINISTRADO Integrador de reactivos Part culas magn ticas recubiertas con anticuerpos monoclonales de Part culas SORB rat n anti BAP ASB tamp n fosfato surfactante y azida s dica a magn ticas lt 01 Conjugado Anticuerpo monoclonal de rat n conjugado con un derivado de jug CONJ isoluminol en tamp n MES monohidrato de cido 2 N morfolino etanosulf nico ASB surfactante IgG de rat n y ProClin 300 al 0 1 Tamp n Tamp n MES ASB surfactante cloruro s dico IgG de rat n y ProClin de ensayo BUF AS 300 al 0 1 N mero de ensayos 100 Todos los reactivos suministrados est n listos para su uso Incluidos con el integrador Suero humano ProClin 300 al 0 2 y BAP a Reconstituya con 1 ml de agua destilada o desionizada Divida en partes y guarde el calibrador reconstituido a 20 C Calibrador 2 Suero humano ProClin 300 al 0 2 y BAP liofilizado Reconstituya con 1 ml de agua destilada o desionizada Divida en partes y guarde el calibrador reconstituido a 20 C ProClin 300 es una marca comercial registrada de Rohm and Haas Co Materiales requeridos pero no suministrados relacionados con el sistema LIAISON XL Analyzer LIAISON Analyzer LIAISON Wash System Liquid REF 319100 LIAISON Wash System Liquid
15. ification transponder RFID Tag en el integral de reactivos Si el RFID Tag no funciona correctamente el integral no puede ser usado y debe descartarse H gase referencia al manual operativo del instrumento para una informaci n m s detallada Si no es posible leer los c digos de barras externos del calibrador es posible introducir manualmente en el instrumento de la serie LIAISON Analyzer los datos que figuran en las etiquetas externas del calibrador debajo del c digo de barras H gase referencia al manual operativo del instrumento para una informaci n m s detallada Las operaciones del analizador son las siguientes 1 Dispensar la muestra las part culas magn ticas del calibrador o del control y el tamp n de ensayo en el m dulo de reacci n Incubar Dispensar el conjugado en el m dulo de reacci n Incubar Lavar con l quido de lavado sistema Agregar los reactivos iniciadores y medir la emisi n de luz DARN Los resultados del inmunoensayo pueden verse afectados por los cambios de temperatura Los usuarios deben tener en cuenta las variaciones en el entorno del laboratorio puede que sea necesario utilizar los controles con m s frecuencia y realizar la recalibraci n subsiguiente 12 CONTROL DE CALIDAD Es necesario que se realice el control de calidad cada d a de trabajo o conforme a lo estipulado en las normas y requisitos de los reglamentos locales o de entidades acreditadas Se recomienda consultar la doc
16. lcula autom ticamente la concentraci n de BAP en la muestra Esta concentraci n se expresa en pg l Los calibradores y los controles pueden dar resultados de RLU unidades relativas de luz y de dosis distintos en LIAISON y LIAISON XL pero los resultados con respecto al paciente son equivalentes 14 LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO Para obtener resultados fiables son imprescindibles una t cnica experta y el estricto cumplimiento de las instrucciones La contaminaci n bacteriana de las muestras o los ciclos repetidos de congelaci n descongelaci n pueden afectar a los resultados del ensayo Los resultados del ensayo deben utilizarse junto con otros datos cl nicos y de laboratorio para ayudar al m dico a decidir qu tratamiento aplicar a cada paciente Los integrales no se deben intercambiar entre diferentes tipos de analizadores LIAISON y LIAISON XL Despu s de introducir un integral en uno de los instrumentos deber usarse siempre en l hasta que se haya acabado Debido a los problemas de trazabilidad resultantes de la indicaci n anterior los seguimientos del paciente no podr n efectuarse entre diferentes tipos de analizadores Estos deben realizarse en un analizador en concreto LIAISON o LIAISON XL es310970 38058 6 12 5 15 VALORES PREVISTOS Se evalu un panel de muestras de hombres y mujeres sin osteoporosis enfermedad de Paget insuficiencia renal cr nica o cualquier otra enfermedad que pudiera ocasionar problema
17. ncentraci n final multiplicando por el factor de diluci n Precisi n La precisi n se evalu con una muestra diluida seg n el EP5 A2 de CLSI 8 16 3 16 4 es310970 38058 6 12 9 16 11 Sustancias interferentes Estudios controlados de sustancias potencialmente interferentes realizados con dos niveles de BAP no mostraron interferencias a la concentraci n m s alta de cada una de las sustancias enumeradas a continuaci n en el ensayo LIAISON BAP OSTASE Las pruebas se basaron en el EP7 A2 de CLSI Concentraci n Sustancia probada mg dl Hemoglobina 200 Bilirrubina 20 Triglic ridos 3 000 Colesterol 500 Paracetamol 35 Alendronato 8 cido acetilsalic lico 50 Calcitonina salm n 112 Ul dl Calcio 40 Estradiol 10 Etidronato 105 Ibuprofeno 40 Pamidronato 18 Progesterona 25 Risedronato 6 Raloxifeno 12 Vitamina D2 80 500 Ul dl Vitamina D3 80 500 Ul dl Anticuerpos humanos antirrat n 30 ng ml DiaSorin Inc dias Sra 1951 Northwestern Avenue laSorin S p A ssl P O Box 285 EJEA 13040 Saluggia VC Italy Stillwater MN 55082 0285 es310970 38058 6 12 10
18. r la formaci n sea en pacientes con trastornos renales ya que es uno de los pocos marcadores que no se ven influidos por las variaciones de la funci n renal La BAP est experimentando una creciente utilidad cl nica en la discriminaci n entre la enfermedad sea adin mica bajo recambio seo y la osteitis fibrosa alto recambio seo cuando las pruebas actuales de hormona paratiroidea de segunda generaci n no son diagn sticas La BAP tambi n es til para vigilar la eficacia de las intervenciones terap uticas realizadas en pacientes con enfermedad de Paget tratados con bisfosfonatos o en mujeres osteopor ticas tratadas con bisfosfonatos o con sustituci n de estr genos 3 PRINCIPIO DEL PROCEDIMIENTO El inmunoensayo LIAISON BAP OSTASE es un ensayo directo tipo s ndwich en dos lugares que emplea dos anticuerpos monoclonales de rat n purificados por afinidad para capturar y detectar la BAP El ensayo utiliza 50 pl de muestra de suero humano incubada con part culas paramagn ticas recubiertas con un anticuerpo monoclonal anti BAP Tras la incubaci n se a ade a la reacci n un segundo anticuerpo monoclonal conjugado con isoluminol y se deja incubar brevemente Despu s de la incubaci n el material libre se elimina en un ciclo de lavado A continuaci n se agregan los reactivos iniciadores y tiene lugar una reacci n quimioluminiscente r pida La se al luminosa se mide en unidades lum nicas relativas con un fotomultiplicador y
19. s relacionados con el recambio seo En este estudio se descartaron las muestras con valores anormales de 25 OH Vitamina D y PTH intacta definidos como lt 32 ng ml y gt 58 pg l respectivamente con niveles de calcio y fosfato fuera del intervalo de referencia del laboratorio e ndice de filtraci n glomerular estimado lt 60ml min 1 73m o Media proporcional BAP Rango del 95 observado Poblaci n n ug ug Hombres 120 10 8 5 5 22 9 Mujeres premenop usicas 120 10 4 4 9 26 6 Mujeres posmenop usicas 120 10 8 5 2 24 4 Puesto que no se observ ninguna diferencia estad stica entre las 3 poblaciones los datos se combinaron Adultos 360 10 7 5 5 24 6 Estos l mites deben considerarse meramente orientativos Cada laboratorio deber a establecer sus propios intervalos de referencia 16 CARACTER STICAS DEL ENSAYO 16 1 Sensibilidad anal tica Siguiendo un m todo adaptado del EP17 A de CLSI la sensibilidad anal tica del ensayo LIAISON BAP OSTASE definida como la dosis m nima detectable y distinguible de cero por dos desviaciones est ndar es lt 0 1 ug l 16 2 Sensibilidad funcional Siguiendo un m todo adaptado del EP17 A de CLSI la sensibilidad funcional del ensayo LIAISON BAP OSTASE se define como la concentraci n en la que el de CV es superior al 20 La sensibilidad funcional derivada del an lisis de regresi n del perfil de precisi n es de 1 5 ug l 16 3 Precisi n con el LIAISON An
20. te realizar 2 calibraciones La recalibraci n por triplicado es obligatoria siempre que se d al menos una de las siguientes situaciones e Con cada nuevo lote de reactivos integrador de reactivos o reactivos iniciadores e Cada 28 d as 4 semanas e Despu s de una tarea de reparaci n o mantenimiento del LIAISON Analyzer e Si los resultados del control de calidad est n fuera del rango aceptable Rango de medida El ensayo LIAISON BAP OSTASE de DiaSorin mide entre 1 5 ug l y 120 ug l El valor m nimo presentable es 1 5 ug l Los valores inferiores a 1 5 ug l deben presentarse como lt 1 5 ug l El m ximo valor presentable sin diluci n es120 g l Las muestras que superen el rango presentable deben diluirse usando el diluyente de muestras LIAISON BAP OSTASE de DiaSorin 310972 y someterse de nuevo a an lisis y c lculo V ase el apartado 16 10 10 CALIBRADORES DE NIVEL 1 Y 2 Los calibradores LIAISON BAP OSTASE se suministran liofilizados Reconstituya cada vial con 1 ml de agua destilada o desionizada Deje reposar los viales durante 5 minutos a temperatura ambiente y mezcle suavemente por inversi n durante 30 minutos antes de utilizarlos Transfiera un m nimo de 350 pl calibradores triplicados a un tubo de vidrio o pl stico para muestras Adhiera al tubo la etiqueta de c digo de barras que corresponda y col quelo en el LIAISON Analyzer Calibre el an lisis como se describe en el manual del operador de LIAISONC Los
21. trumento H gase referencia al manual operativo del instrumento para los detalles t cnicos Coloque el integral de reactivos en la ranura espec fica es310970 38058 6 12 3 Deje descansar el integral de reactivos en el dispositivo magn tico en estado s lido por al menos 30 segundos hasta varios minutos Si es necesario repita la operaci n Luego coloque el integral de reactivos en el rea de los reactivos del instrumento con la etiqueta situada a la izquierda y d jelo agitar durante 15 minutos antes del uso Durante este tiempo las part culas magn ticas ser n mantenidas en agitaci n autom ticamente para garantizar una resuspensi n completa H gase referencia al manual operativo del instrumento para cargar las muestras e iniciar el ensayo 7 CONSERVACI N Y ESTABILIDAD DEL INTEGRADOR DE REACTIVOS A su recepci n almacene el integrador de reactivos boca arriba para facilitar la resuspensi n de las part culas magn ticas Si el integrador se almacena sin abrir los reactivos permanecen estables a 2 8 C hasta la fecha de caducidad No lo congele El integrador de reactivos no debe utilizarse despu s de la fecha de caducidad indicada en el equipo y en las etiquetas correspondientes Despu s de utilizarse el integrador de reactivos debe cerrarse con la cinta proporcionada en el kit y volverse a guardar a 2 8 C Una vez abierto puede usarse en 4 semanas si se guarda en las debidas condiciones 8 OBTENCI N Y PREPARACI N DE L
22. umentaci n de CLSI C24 A2 y 42 CFR 493 1256 c para conocer las pr cticas de control de calidad adecuadas El juego de controles LIAISON BAP OSTASE 310971 permite determinar los requisitos de control de calidad de este ensayo Los controles LIAISON BAP OSTASE permiten detectar cualquier s ntoma importante de deterioro del reactivo Los controles LIAISON se deben analizar individualmente para evaluar las prestaciones del test Si los valores de control entran en los rangos previstos en el certificado de an lisis la prueba es v lida Si los valores de control quedan fuera de los rangos previstos la prueba no es v lida y los resultados de las pruebas cl nicas no pueden publicarse El ensayo tiene que calibrarse si se observa un fallo del control en cuyo caso deben repetirse los controles y las muestras del paciente Antes de utilizar otros controles es preciso evaluar su efectividad para comprobar su compatibilidad con este ensayo Deber n establecerse rangos de valores apropiados para todos los materiales de control de calidad utilizados Siempre que los resultados de control est n fuera de los rangos previstos ser necesario repetir la calibraci n y volver a analizar los controles El intervalo de las concentraciones para cada control est impreso en el certificado de an lisis e indica los l mites definidos por DiaSorin para los valores de los controles obtenidos con test fiables 13 ESTANDARIZACI N El LIAISON Analyzer ca
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