Anti-A e Anti-B - WAMA Diagnóstica Produtos para Laboratórios
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1. Anti A Anti B PROVA REVERSA SUSPENS O GRUPOS E B SANGU NEOS A B AB o ESPECIFICIDADE DO TESTE O desempenho do Imuno HEMATO Anti A e Anti B foi avaliada em 1125 amostras colhidas com os anticoagulantes recomendados A avalia o demonstrou especificidade de 100 de cada reagente quando comparados com os resultados de um Kit utilizado no mercado PRECIS O DO TESTE a Precis o Intra Ensaio Foram selecionadas 4 amostras do controle de qualidade 1 para cada tipo sanguineo para realizar o teste de repetibilidade Foram feitas 10 repeti es do teste com mesmo operador no mesmo dia De acordo com os testes realizados foi verificado que o kit Familia Imuno Hemato Anti A e Anti B repetiu de maneira satisfat ria os resultados com as amostras testadas nas mesmas condi es b Precis o Inter Ensaio Foram selecionadas 4 amostras do controle de qualidade 1 para cada tipo sangu neo para realizar o teste de reprodutibilidade foram realizados 20 testes com as mesmas amostras em dias e operadores diferentes De acordo com os testes realizados foi verificado que o kit Fam lia Imuno Hemato Anti A e Anti B reproduz de maneira satisfat ria os resultados com as amostras testadas mesmo em diferentes condi es LIMITA ES DE USO Resultados falso positivos e negativos podem ocorrer por contamina o dos materiais do ensaio concentra o inadequada das suspens es de c lulas te2. If they do not correlate other investigations should be carried out Redblood cells coated with alloantibodies or auto antibodies with specificity equal or similar to the reagent which is cells that are positive in the direct antiglobulin test Coombs test can give weak responses In extreme cases false negative results may occur PRECAUTIONS AND WARNINGS 1 The reagents should be kept between 2 8 C 2 The expiry date refers to the last day of the month indicated on the labels of the vial and of the kitbox 3 Avoid exposing the reagents to high temperatures and direct sunlight 4 Donotfreeze the reagent as this may cause irreversible damage 5 The Imuno HEMATO Anti A and Anti B from WAMA though derived from animal source cannot assume to be free of infectious agents Therefore it is recommended to treat all reagents as potentially infectious as well as having the care in disposing of these materials 6 Allow the reagents to reach the room temperature 20 25 C before starting the test 7 The reagents must be capped immediately after use 8 Donotuse the reagent after the expiration date 9 The procedures are only for manual testing When using automatic or semi automatic instruments procedure contained in the operator s manual provided by the instrument manufacturer must be followed 10 Discard the material following local regulations 11 Use the Good Laboratory Practices GLPs in storage handling and dispos
3. e 1 gota 50 ul de sangue total a ser testado 2 Homogeneizar uniformemente o reagente e as c lulas sangu neas usando uma vareta misturadora sobre uma rea de aproximadamente 2 5 cm de di metro 3 Com leves movimentos de rota o e de inclina o da l mina verificar a forma o de aglutina o dentro de 1 minuto na presen a de antigeno A a rea o se inicia em segundos Rea o inespec fica pode ocorrer devido secagem da mistura de rea o ou se a l mina aquecida II T CNICA EM TUBO 1 Preparar uma suspens o a 5 de hem cias lavadas a ser testada em solu o salina fisiol gica lavar as hem cias 3 vezes em salina a 0 85 ou 0 9 e em um tubo de ensaio 12 x 75 mm pipetar 50 ul das hem cias lavadas 1 ml de salina Outros volumes podem ser usados 2 Em um tubo de ensaio 10 x 75 mm ou 12 x 75 mm marcado pipetar 50 ul da suspens o de hem cias a 5 3 Pipetar no mesmo tubo 50 ui do anti soro Anti A ou Anti B 1 4 Homogeneizar atrav s de leve agita o e incubar a temperatura ambiente 15 30 C por 1 a15 minutos 5 Centrifugar a 1 000 RPM 100 a 1259 por 1 minuto 6 Ressuspender delicadamente o bot o de hem cias e examinar a presenca ou n o de aglutinac o III T CNICA EM MICROPLACA 1 Preparar uma suspens o a 2 3 de hem cias lavadas a ser testada em soluc o salina fisiol gica lavar as hem cias 3 vezes em salina a 0 85 ou 0 9 e em um tubo de ensaio 12 x 75 mm pipetar 25
4. igual ou semelhante ao reagente isto c lulas que s o positivas no teste direto de antiglobulina teste de Coombs Direto podem dar rea es fracas Em casos extremos resultados falso negativos podem ocorrer PRECAU ES E ADVERT NCIAS 1 Os reagentes devem ser conservados entre 2 8 C 2 Adata de validade corresponde ao ltimo dia do m s assinalado nos r tulos dos frascos e da caixa do kit 3 Deve ser evitado expor os reagentes a temperaturas elevadas bem como diretamente ao sol 4 N o congelar nenhum reagente pois isto causar deteriora o irrevers vel 5 O Imuno HEMATO Anti A e Anti B da WAMA embora seja derivado de fonte animal n o se pode afirmar que esteja isento de agentes infecciosos Portanto recomenda se tratar todos os reagentes como materiais potencialmente infecciosos bem como ter o mesmo cuidado no descarte destes materiais 6 Deixar os reagentes adquirir a temperatura ambiente 20 25 C antes de iniciar os testes 7 Os reagentes devem ser tampados imediatamente ap s o uso 8 N o usar reagentes ap s a data de validade 9 Os procedimentos informados s o apenas para testes manuais Ao usar instrumentos autom ticos ou semiautom ticos deve ser seguido o procedimento que est contido no manual do operador fornecido pelo fabricante do instrumento 10 Descartar o material conforme regulamenta es locais 11 Utilizar a Boas Pr ticas de Laborat rios BPLs na conserva o manuseio e de
5. la muestra debe mantenerse refrigerada a una temperatura de 2 8 C De acuerdo con el anticoagulante usado las muestras deben ser probadas en los siguientes plazos e Heparina y Oxalato de Sodio 2D as e EDTAy Citrato de Sodio 14 D as ACDyCPD 28 D as El almacenamiento a largo plazo de la muestra puede provocar el deterioro de los ant genos y ocasionar a resultado de clasificaci n incorrecta MATERIAL NECESARIO PERO NO SUMINISTRADO e T cnica de l mina de vidrio laminas vidrio pipetas 50ul y puntas o pipeta Pasteur varilla de mezcla e T cnica de Tubo de ensayo tubos de ensayo 10 x75 mm o 12 x 75 mm micropipeta 50 uly puntas centrifuga soluci n salina isot nica 0 8500 9 Recipiente para descarte de material PROCEDIMIENTO Independientemente de la t cnica empleada deje que el reactivo y la muestra alcancen a temperatura ambiente antes de comenzar las pruebas LT CNICADE L MINA DE VIDRIO 1 En una l mina de vidrio gotear 1 gota 50 ul de antisuero anti A o anti B 1 y 1 gota 50 ul de sangre entera a ser probada 2 Mezclar uniformemente el reactivo y c lulas sangu neas usando una varilla de mezcla en un rea de aproximadamente 2 5 cm de di metro 3 Con suaves movimientos de rotaci n e inclinacion de la l mina de vidrio para verificar la formacion de aglutinaci n dentro de 1 minuto len la presencia de un ant geno la reacci n comienza en segundos Reacci n inespec fica puede presenta
6. n de botones de RBC Reacciones m s d biles ser n m s frecuentes con sangre almacenada que con sangre fresca Los ant genos ABO no est n totalmente desarrollados al nacer por lo tanto pueden ocurrir reacciones d biles cuando se utilizan gl bulos rojos de la sangre del cord n umbilical o de neonatos Muestras de cord n contaminadas con gelatina de Wharton puede dar resultados falsos positivos e Las muestras de sangre de subgrupos A y B pueden dejar a resultados falsos negativos o reacciones d biles Se recomienda que utilice control con gl bulos rojos sangu neos con presencia conocida de antigeno Ay RBC negativo diariamente antes de confirmar la reactividad y especificidad de los reactivos e Prueba inversa deber realizarse siempre para la b squeda de anticuerpos circulantes en personas mayores de 6 meses de edad con el fin de confirmar que los resultados de la prueba directa se correlaciona con la prueba inversa Si no se correlacionan otras investigaciones deben llevarse a cabo Los gl bulos rojos recubiertos con alo anticuerpos o auto anticuerpos con especificaciones igual o similar ao reactivo lo que es c lulas que son positivas en la prueba de antiglobulina directa prueba de Coombs pueden dar respuestas d biles En casos extremos pueden producirresultados falso negativos PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS 1 Los reactivos deben conservarse entre 2 8 C 2 La fecha de caducidad se refiere al ltimo d
7. 4 Mix by gentle agitation and incubate at room temperature 15 30 C for 1 to 15 minutes 5 Centrifuge at 1 000 RPM 100 to 125 g for 1 minute 6 Gently resuspend the button of erythrocytes and examine forthe presence of agglutination Ill MICROPLATE TECHNIQUE 1 Prepare a suspension of 2 3 of washed erythrocytes to be tested in physiological saline solution wash the cells 3 times in 0 85 or 0 9 saline solution and in a 12x 75 mm test tube pipette 25 ul of washed erythrocytes 1 mlofsaline other volumes can be used 2 In a microplate with U bottom pipette 50 ul of suspension at 2 5 in each cavity of the microtitre plate according to the number of samples to be tested and the distribution plan on board 3 Pipette in each cavity 50 ul of the anti A or anti B antiserum 1 4 Mix by gentle agitation preferably with a microplate shaker and incubate at room temperature 15 30 C for 15 minutes 5 Centrifuge the microplate 140 r c f for 1 minute 6 Gently resuspend the button of erythrocytes and examine for the presence of agglutination IMPORTANT gt Although the slide glass technique is used by many laboratories it is suggested to use the tube or microplate technique with direct and reverse test because such procedure avoids some interpretation errors when only the search of antigen is used INTERPRETATION OF THE RESULTS POSITIVE REACTION visible agglutination of erythrocytes indicating the presenc
8. Mezclar por agitaci n suave preferiblemente con un agitador de microplacas y incubar a temperatura ambiente 15 30 C por 15 minutos 5 Centrifugar la microplaca 140 r c f por 1 minuto 6 Resuspender suavemente el bot n de eritrocitos y examinar la presencia de aglutinaci n IMPORTANTE gt Aunque la t cnica en l mina de vidrio sea utilizada por muchos laboratorios se sugiere utilizar la t cnica de tubo o microplacas con pruebas directa e inversa tal procedimiento evita algunos errores de interpretaci n cuando s lo la b squeda de ant geno es utilizada INTERPRETACI N DE LOS RESULTADOS REACCI N POSITIVA Aglutinaci n de los eritrocitos lo que indica la presencia de ant geno Ao B or ambos en la muestra ensayada REACCI N NEGATIVA Ausencia de aglutinaci n de los eritrocitos lo que indica ausencia de ant geno Ay o B en la muestra ensayada REACCI N DISCREPANTES Si los resultados obtenidos en la prueba inversa no se correlacionan con la prueba directa es necesario realizar otras investigaciones INTERPRETACI N DE LA REACCI N PARA TIPAGEN SANGUINEO PRUEBA DIRECTA REACTIVO PRUEBA INVERSA SUSPENSI N TIPOS DE SANGRE ESPECIFICIDAD DELAPRUEBA El rendimiento de Imuno HEMATO Anti A e Anti B fue evaluada en 1125 muestras obtenidas con los anticoagulantes recomiendados La evaluaci n demuestra una especificidad del 100 de cada uno de los reactivos en comparaci n con los resultados de un
9. a del mes indicado en las etiquetas del frasco y de la caja del kit 3 Evite la exposici n de los reactivos a altas temperaturas y la luz solar directa 4 No congele el reactivo ya que esto puede causar da os irreversibles 5 El Imuno HEMATO Anti A e Anti B de WAMA aunque derivados de origen animal no puede dar por sentado que sea libre de agentes infecciosos Por lo tanto se recomienda tratar todos los reactivos como material potencialmente infeccioso as como tener cuidado al deshacerse a su cargo el cuidado de deshacerse de estos materiales 6 Dejar que los reactivos adquieran la temperatura ambiente 20 25 C antes de iniciar los tests 7 Los reactivos deben taparse inmediatamente despu s de su uso 8 Noutilice el reactivo despu s de la fecha de caducidad 9 Los procedimientos son s lo para prueba manual Al usar instrumentos autom ticos o semiautom ticos procedimiento que figura en el manual del operador proporcionado porel fabricante del instrumento debe ser seguido 10 Desechar el material siguiendo regulaciones locales 11 Utilice las Buenas Pr cticas de Laboratorio BPL en el almacenamiento la manipulaci n y eliminaci n de los materiales T RMINO DE GARANT A WAMA Diagn stica garantiza el cambio del kit de diagn stico siempre que est dentro de la fecha de caducidad y que ha sido probado por su apoyo t cnico que no hubo errores t cnicos en la ejecuci n la manipulaci n y el almacenamiento d
10. in incorrect classification MATERIAL REQUIRED BUT NOT PROVIDED Glass slide Technique glass slide 50 ul pipettor and tips or Pasteur pipette mixing rod Test Tube Technique test tubes 10 x 75 mm or 12 x 75 mm 504 micropipette and tips centrifuge isotonic 0 85 or 0 9 saline solution Container for material disposal PROCEDURE Regardless of the technique used let the reagent and the sample reach room temperature before starting the tests 1 GLASS SLIDE TECHNIQUE 1 On a clean glass slide drip 1 drop 50 ul of Anti A or Anti B antiserum 1 and 1 drop 50 ul of whole blood to be tested 2 Mix evenly the reagent and blood cells using a mixing rod over an area of approximately 2 5 cm in diameter 3 With gentle rotation movements and tilt of the glass slide check for the formation of agglutination within 1 minute in the presence of antigen A the reaction starts in seconds Nonspecific Reaction can occur due to drying of the reaction mixture or if the blade is heated Il TUBE TECHNIQUE 1 Prepare a suspension in 5 of washed erythrocytes to be tested in physiological saline solution wash the cells 3 times in 0 85 or 0 9 saline solution pipette 50 ul of washed erythrocytes 1 ml of saline into a 12 x 75 mmtesttube Other volumes can be used 2 In a labeled 10 x 75 mm or 12 x 75 mm test tube pipette 50 ul of 5 erythrocytes suspension 3 Pipette in the same tube 50 ul of the Anti A or Anti B antiserum
11. para n testes Quantity sufficient for n tests O contenido es suficiente para n testes Data limite de utiliza o Expiry Date Fecha de la caducidad Produto diagn stico in vitro In vitro diagnostic Produto diagn stico in vitro N mero do lote Lot Number N mero del lote N mero do cat logo Catalog Number N mero del cat logo Limite de temperatura Temperature Limite de temperatura Consultar instru es para uso EE Proteger do calor Refer to user s instructions SS Keep away from sunlight Consultar las instrucciones para el uso T Proteger del calor Fabricado por Manufactured by Fabricado por Edi o Rev 10 2012 El Representante Europeu ECJREP European Representative Representante Europeu
12. Kiten el mercado PRECISI N DEL TEST a Precisi n Intraensayo Se seleccionaron 4 muestras de control de calidad 1 para cada tipo de sangre para realizar la prueba de repetibilidad 10 repeticiones del test fueran corridas por el mismo t cnico en mismo dia De acuerdo a las pruebas realizadas se verific que el kit Imuno Hemato Anti A e Anti B repiti satisfactoriamente los resultados con las muestras analizadas en las mismas condiciones b Precisi n Interensayo Se seleccionarn 4 muestras de control de calidad 1 para cada tipo de sangre para realizarla prueba de reproducibilidad 20 pruebas se han llevado a cabo con las mismas muestras en d as y t cnicos diferentes De acuerdo a las pruebas realizadas se verific que el kit Imuno Hemato Anti A e Anti B repiti satisfactoriamente los resultados con las muestras de ensayo incluso bajo diferentes condiciones LIMITACIONES DEUSO e Resultados falso positivos y negativos pueden ocurrir debido a la contaminaci n de los materiales de ensayo concentraci n inadecuada de las suspensiones de c lulas tiempo de incubaci n y temperatura inadecuados o errores de procedimiento e Los tiempos de centrifugaci n mencionados son recomendaciones Un tiempo de centrifugaci n apropiado debe ser determinado por cada laboratorio y ser aquel quel produzce la reacci n m s fuerte del anticuerpo con el ant geno en las reacciones positivas y tambi n para permitir una f cil resuspensi
13. MS 10310030159 Imuno Hemato Reagente de anticorpos monoclonais IgM para determina o qualitativa de Ant genos A e ou B nos eritr citos para determina o do grupo sangu neo humano em l mina tubo e microplaca por t cnica de aglutina o Monoclonal antibodies IgM reagents for qualitative determination of A and or B antigens in erythrocytes for determination of human blood group in glass slide tube and microplate by technique of agglutination Reactivos de Anticuerpos monoclonales IgM para la determinaci n cualitativa de ant genos A y o B en eritrocitos humanos para la determinaci n de grupo sangu neo en laminas de vidrio tubos y microplacas por t cnica de aglutinaci n 1054010 A 10ml anti A 1054050 A 50ml anti A 1054100 A 100ml anti A 1054010 B 10ml anti B 1054050 B 50ml anti B 1054100 B 100ml anti B Ml WAMA Diagn stica Rua Aldo Germano Klein 100 CEAT CEP 13573 470 S o Carlos SP Brasil Fone 55 16 3377 9977 Fax 55 16 3377 9970 www wamadiagnostica com br SAC 0800 772 9977 WAMA PORTUGU S IMPORT NCIA CL NICA O Sistema ABO foi descrito em 1900 por Landsteiner e permanece at hoje como o sistema mais importante dentro da pr tica transfusional A transfus o ABO incorreta pode resultar na morte do paciente com uma rea o hemol tica intravascular seguida de altera es imunol gicas e bioqu micas Adetermina o do grupo sangu neo consiste na identifica o d
14. aio baseado no princ pio da aglutina o onde c lulas vermelhas do indiv duo possuindo antigeno A e ou B em sua superf cie aglutinar o na presen a do anti soro anti A e ou anti B indicando um resultado positivo O teste considerado negativo quando n o aparece aglutina o APRESENTA O DO KIT Imuno Hemato Anti A 1054010 A 10ml anti A 1 Antisoro Anti A 1x 10 mL 2 Instru es para uso 1054050 A 50ml anti A 1 Antisoro Anti A 5x 10 mL 2 Instru es para uso 1054100 A 100ml anti A 1 Antisoro Anti A 10 x 10 mL 2 Instru es para uso Imuno Hemato Anti B 1054010 B 10ml anti B 1 AntisoroAnti B 1x 10 mL 2 Instru es para uso 1054050 B 50ml anti B 1 AntisoroAnti B 5x 10 mL 2 Instru es para uso 1054100 B 100ml anti B 1 AntisoroAnti B 10 x 10 mL 2 Instru es para uso PREPARA O E ESTABILIDADE DOS REATIVOS ANTISORO ANTI A pronto para uso Contendo anticorpos monoclonais de classe IgM anti antigenoA do Sistema ABO Reagente contendo corante azul Est vel entre 2 8 C at a data de vencimento impressa na etiqueta do frasco Armazenamento inadequado prejudica a efic cia do reagente Cont m NaN3 lt 0 095 como conservante N O CONGELAR Somente para uso in vitro ANTISORO ANTI B pronto para uso Contendo anticorpos monoclonais de classe IgM anti antigeno B do Sistema ABO Reagente contendo corante amarelo Est vel entre 2 8 C at a data de vencimento im
15. al of materials WARRANTY WAMA Diagn stica guarantees the exchange of the diagnostic kit provided it is within the expiration date and is proven by its technical support that there were no technical mistakes in the execution handling and storage of this product WAMA and its distributors are not liable for failures on the performance of the kits under these conditions ESPA OL IMPORTANCIA CL NICA El sistema ABO fue descrito en 1900 por Landsteiner y se mantiene hasta hoy como el sistema m s importante en la transfusi n de sangre La transfusi n equivocada de ABO puede provocar la muerte del paciente con una reacci n hemol tica intravascular seguida por cambios bioqu micos e inmunol gicos La determinaci n del grupo sangu neo consiste en la identificaci n de los ant genos del sistema ABO existentes en los eritrocitos y que est n determinados gen ticamente por 3 genes respectivamente los genesA By O Hay dos tipos de anticuerpos en el sistema sangu neo ABO los de presencia natural y los sistema inmunol gico Los de presencia natural comienzan a aparecer en el suero de tres a seis meses despu s del nacimiento aproximadamente Estes son anticorpos anti A en el grupo B anti B individuos en el grupo A anti A y Anti B individuos del grupo O y ausentes en los individuos del grupo AB Los anticuerpos naturales representan una mezcla con mayor cantidad de inmunoglobulinas de la clase M IgM que las inmunoglobulinas
16. de classe G IgG Los del sistema inmunol gico se producen por alloimmunization anteriores que pueden ser atraves de heteroimmunization mediante substancias de origen animal o bacteriana o por aloinmunizaci n durante el embarazo o transfusi n incompatible ABO Estos anticuerpos se denominan habitualmente hemolisinas y la mayor a de ellos son IgG Determinaci n del grupo sangu neo de una persona siempre se debe realizar a trav s de dos exc menes la directa y la inversa En el examen directo los antisueros se probados contra una suspensi n de 5 de gl bulos rojos de la persona cuyo objetivo es el de identificar los ant genos presentes en la superficie de los gl bulos rojos Los individuos del grupo A tienen los ant genos A en sus eritrocitos del grupo B ant geno B del grupo AB tienen los ant genos Ay B y del grupo O no tienen ni los ant genos Ani B en su superficie En la prueba inversa el objetivo es identificar los anticuerpos libres en el suero probando los sueros de los individuos contra una suspenci n de 5 de gl bulos rojos conocida uma de gl bulos rojos del tipo A Rh negativo y otra de tipo B Rh negativo Personas en el grupo A tendr n anticuerpos anti B en el grupo B tendr n anticuerpos anti A en el grupo AB no tendr n anticuerpos y e nel grupo O tendr n anticuerpos circulantes anti A y anti B Los sueros de los reci n nacidos a n no contienen los anticuerpos naturales anti A y anti B pudiendo incluso p
17. e este producto WAMA y sus distribuidores no se responsabiliza por fallas en el rendimiento de los kits en estas condiciones BIBLIOGRAFIA BIBLIOGRAPHY BIBLIOGRAF A 1 Levine P The discovery of Rh haemolytic disease Vox Sanguinis 47 187 190 1984 2 Jones J Scott M M and Voak D Monoclonal anti D specificity and Rh D structure criteria for selection of monoclonal anti D reagents for routine typing of patients and donors Transfusion Medicine 5 171 184 1995 3 Avent N D and Reid M E The Rh blood group system a review Blood 95 375 387 2000 4 Zallen D T Christie D A and Tansey E M The Rhesus Factor and Disease Prevention Witness Seminar held by the Wellcome Trust Centre for the History of Medicine at UCL London June 2003 5 Scott M L The complexities of the Rh system Vox Sanguinis 87 58 62 2004 6 Westhoff C M The Rh blood group system in review A new face for the next decade Transfusion 44 1663 1673 2004 7 Moulds M K Review monoclonal reagents and detection of unusual or rare phenotypes or antibodies Immunohematology 22 2 52 63 2006 8 Van Kim C Colin Y and Cartron J Rh proteins key structural and functional components of the red cell membrane Blood Reviews 20 93 110 2006 9 Westhoff C M The structure and function of the Rh antigen complex Seminars in Hematology 44 42 50 2007 SIMBOLOGIA SIMBOLS SIMBOLOGIA O conte do suficiente
18. e of A or B antigen or both in the tested sample NEGATIVE REACTION Absence of agglutination of erythrocytes indicating absence of antigenAand orB in the tested sample DISCREPANT REACTION if the results obtained in the reverse test do not correlate with the direct test itnecessary to perform other investigations INTERPRETATION OF REACTION FOR BLOOD TYPING REVERSE TEST SUSPENSION Anti A Anti B A1 E B A B AB o TEST SPECIFICITY The performance of the Imuno HEMATO Anti B and Anti B was evaluated in 1125 samples collected with the recommended anticoagulants The evaluation showed 100 specificity for each reagent when compared with the results of a Kit used on the market PRECISION OF THE TEST a Intra Assay Precision 4 samples were selected from quality control 1 for each blood type to perform the repeatability test 10 repetitions of the test was done by the same operator on the same day According to the tests carried out it was verified that the kit Imuno Hemato Anti A and Anti B Family repeated satisfactorily the results with the samples tested under the same conditions b Inter Assay Precision 4 samples were selected from quality control 1 for each blood type to perform the test of reproducibility 20 tests were performed with the same samples in different days and with differenttechnicians According to the tests carried out it was verified that the kit Imuno Hema
19. esults The use of direct and reverse test leads to correct results and prevent complications such as the presence of subgroups Aand B that can produce weak or negative reactions in direct test The anti serum Imuno HEMATO Anti A and Anti B from WAMA are monoclonal IgM class antibodies prepared from the supernatant of in vitro cell line culture of hybridized mouse secreting immunoglobulins The anti serum offers specificity antigenicity potency titer and avidity quickness to establish the agglutination equal to or greater than the international reference standards ensuring optimum quality in the identification of A and B antigens on the blood typing tests PRINCIPLE OF THE METHOD The procedure of the assay is based on the principle of agglutination where red blood cells of individuals possessing A and or B antigen on their surface will agglutinate in the presence of anti A and or anti B antiserum indicating a positive result The test is considered negative when no agglutination appears KIT PRESENTATION Imuno Hemato Anti A 1054010 A 10ml anti A 1 Anti Aantiserum 1x10 mL 2 Instructions for use 1054050 A 50ml anti A 1 Anti Aantiserum 5x10 mL 2 Instructions for use 1054100 A 100ml anti A 1 Anti Aantiserum 10x 10 mL 2 Instructions for use Imuno Hemato Anti B 1054010 B 10ml Anti B 1 Anti B antiserum 1x 10 mL 2 Instructions for use 1054050 B 50ml Anti B 1 Anti B antiserum 5x 10 mL 2 Instr
20. ich can be through heteroimmunization through substances of animal or bacterial origin or through alloimmunization through pregnancy or ABO incompatible transfusion These antibodies are usually referred to as hemolysins and most of them are IgG Blood typing of an individual should always be performed through two tests the direct and the reverse In the directtest the antisera is tested against 5 suspension of red blood cells ofthe individual whose objective is to identify the antigens present on the surface of the red blood cell Individuals from the group A will have antigens A in their erythrocytes from group B will have antigen B from AB group will have antigens A and B and from group O does not have either antigens A or B on its surface In the reverse test the objective is to identify the free antibodies in the serum testing the sera of individuals against a 5 suspension of known red blood cells one of red blood cell of type A negative Rh and another of type B Rh negative Individuals in group A will have anti B antibodies in group B will have anti A antibodies in AB group will not have antibodies and in the group O will have anti A and anti B circulating antibodies The sera of newborns does not yet contain the natural antibodies anti A and anti B and can also have the presence of maternal anti A and anti B antibodies and therefore the reverse test should not be performed in this age group because it will lead to incorrect r
21. l anti A 1 Antisuero Anti A 10 x 10 ml 2 Instrucciones de uso Imuno Hemato Anti B 1054010 B 10ml Anti B 1 Antisuero Anti B 1 x 10 ml 2 Instrucciones de uso 1054050 B 50ml Anti B 1 Antisuero Anti B 5 x 10 ml 2 Instrucciones de uso 1054100 B 100ml Anti B 1 AntisueroAnti B 10 x 10 ml 2 Instrucciones de uso PREPARACI N Y ESTABILIDAD DE REACTIVOS e ANTISUERO ANTI A Listo para usar Contiene anticuerpos monoclonales IgM ant geno anti A del Sistema ABO Reactivo con colorante azul Estable a 2 8 C hasta la fecha de vencimiento impresa en el envase Almacenamiento inadecuado afecta la eficacia del reactivo Contiene NaN3 lt 0 095 como conservante NO CONGELAR Para uso diagn stico in vitro ANTISUERO ANTI B Listo para usar Contiene anticuerpos monoclonales IgM ant geno anti B del Sistema ABO Reactivo con colorante amarillo Estable a 2 8 C hasta que fecha de vencimiento impresa en el envase Almacenamiento inadecuado afecta a la eficacia del reactivo Contiene NaN3 lt 0 095 como conservante NO CONGELAR Para uso diagn stico in vitro Nota El kit mantiene el mismo rendimiento despu s de la primera utilizaci n y es estable hasta la fecha de vencimiento descrita en la etiqueta siempre que se mantenga ala temperatura indicada 2 8 C ESPEC MENES Utilice muestra de sangre fresca Evite muestras hemolizadas Si no es posible realizar las pruebas despu s de la recolecci n
22. mpo de incuba o ou temperatura inadequados ou por erros de procedimento Os tempos de centrifuga o mencionados s o meras sugest es Um tempo de centrifuga o adequado deve ser determinado por cada laborat rio e ser aquele que produz a mais forte rea o do anticorpo com o ant geno nas rea es positivas mas tamb m que permita a ressuspens o f cil do bot o de hem cias Rea es mais fracas podem ser observadas com sangue armazenado do que com sangue fresco Ant genos ABO n o est o completamente desenvolvidos ao nascimento portanto rea es fracas podem ocorrer quando se usa c lulas vermelhas do cord o umbilical ou de neonatos Amostras de cord o contaminadas com geleia de Wharton podem dar resultados falso positivos Amostras de sangue de subgrupos A ou B podem dar origem a resultados falso negativos ou rea esfracas Recomenda se usar um controle com hem cias com ant geno A sabidamente presentes e hem cias negativas diariamente antes de iniciar os testes para confirmar a reatividade e especificidade do reagente Deveria ser sempre realizada prova reversa para pesquisa de anticorpos circulantes em indiv duos maiores de 6 meses de idade no sentido de se confirmar que os resultados da prova direta se correlaciona com os da reversa Se eles n o se correlacionam outras investiga es devem ser realizadas Gl bulos vermelhos revestidos com aloanticorpos ou auto anticorpos com a especificidade
23. os ant genos do sistema ABO existentes nos eritr citos e que s o geneticamente determinados por 3 genes respectivamente os genesA Be O Existem dois tipos de anticorpos no sistema sangu neo ABO os de ocorr ncia natural e os imunes Os de ocorr ncia natural come am a aparecer no soro cerca de tr s a seis meses ap s o nascimento Eles s o anticorpos anti A em indiv duos do grupo B anti B em indiv duos do grupo A anti A e anti B em indiv duos do grupo O e ausentes em indiv duos do grupo AB Os anticorpos naturais representam uma mistura com maior quantidade de imunoglobulinas da classe M IgM do que imunoglobulinas da classe G IgG J os imunes ocorrem por aloimuniza es pr vias que podem ser atrav s de heteroimuniza o por subst ncias de origem animal ou bacteriana ou por aloimuniza o por gesta o ou transfus o ABO incompat vel Esses anticorpos s o usualmente referidos como hemolisinas sendo a maioria da classe IgG A tipagem sangu nea de um indiv duo deve ser sempre realizada atrav s de duas provas a direta e a reversa Na prova direta testa se os antisoros contra uma suspens o de hem cias a 5 do indiv duo cujo objetivo identificar os ant genos presentes na superf cie do gl bulo vermelho Indiv duos do grupo A ter o ant genos A em seus eritr citos do grupo B ter o ant genos B do grupo AB ter o ant genos Ae B e do grupo O n o ter o nem ant genos A nem B em sua superf cie Na p
24. pressa na etiqueta do frasco Armazenamento inadequado prejudica a efic cia do reagente Cont m NaN3 lt 0 095 como conservante N O CONGELAR Somente para uso in vitro Obs O kit mant m o mesmo desempenho ap s a primeira utiliza o e est vel at a data de validade descrita no r tulo desde que mantido na temperatura indicada 2 8 C AMOSTRAS Usar amostra de sangue fresco Evitar amostras hemolizadas Se n o for poss vel realizar os testes ap s a coleta a amostra deve ser conservada refrigerada entre 2 8 C De acordo com o anticoagulante utilizado as amostras deveriam ser testadas dentro dos seguintes prazos Heparina Oxalato de S dio 2dias EDTACitrato de S dio 14 dias ACD ou CPD 28 dias O armazenamento prolongado da amostra pode causar deteriora o do antigeno e resultar em classifica o incorreta MATERIAL NECESS RIO MAS N O FORNECIDO e T cnica em L mina l mina de vidro micropipeta de 50ul e ponteiras ou pipeta Pasteur vareta misturadora T cnica em Tubo tubos testes 10 x 75 mm ou 12 x 75 mm micropipeta de 50ul e 1000 ponteiras centrifuga solu o salina isot nica 0 85 ou 0 9 Recipiente para descarte de material PROCEDIMENTO Independente da t cnica adotada deixar o reagente e as amostras atingir a temperatura ambiente antes de iniciar os testes T CNICA EM L MINA 1 Sobre uma l mina de vidro limpa pingar 1 gota 50 pul do anti soro Anti A ou Anti B 1
25. resentar anticuerpos anti A y anti B maternos y por tanto la prueba inversa no se debe realizar en este grupo de edad porque dar lugar a resultados incorrectos El uso pruebas direta y inversa conduce a corregir los resultados y prevenir complicaciones tales como la presencia de subgrupos A y B que pueden producir reacciones debiles o negativas en prueba directa El anti suero Imuno HEMATO Anti A y Anti B de WAMA son anticuerpos monoclonales del tipo IgM preparados a partir del sobrenadante de cultivo in vitro de la l nea celular hibridadas inmunoglobulinas secretoras de rat n El anti suero ofrece especificidad antigenicidad potencia t tulo y avidez rapidez para establecer la aglutinaci n iguales o superiores a los valores internacionales de referencia asegurando la ptima calidad en la identificaci n de los ant genos A y Ben pruebas de tipificaci n de sangre PRINCIPIO DEL M TODO El procedimiento del ensayo se basa en el principio de aglutinaci n donde las c lulas rojas de los individuos que poseen ant geno A y o B en su superficie aglutinar n en presencia del antisuero anti A y o anti B que indica un resultado positivo La prueba se considera negativa cuando no aparece ninguna aglutinaci n PRESENTACI N DEL KIT Imuno Hemato Anti A 1054010 A 10ml anti A 1 Antisuero Anti A 1 x 10 ml 2 Instrucciones de uso 1054050 A 50ml anti A 1 Antisuero Anti A 5 x 10 ml 2 Instrucciones de uso 1054100 A 100m
26. rova reversa o objetivo identificar os anticorpos livres no soro testando o soro dos indiv duos contra uma suspens o de hem cias a 5 conhecidas uma de hem cias do tipo A Rh negativo e outra do tipo B Rh negativo Indiv duos do grupo A ter o anticorpos anti B os do grupo B ter o anticorpos anti A os do grupo AB n o ter o anticorpos e os do grupo O ter o anticorpos anti Ae anti B circulantes Os soros de rec m nascidos n o cont m ainda os anticorpos naturais anti A e anti B podendo inclusive ocorrer a presen a de anticorpos maternos anti A e anti B e portanto a prova reversa n o deve ser realizada nessa faixa et ria pois levar a resultados incorretos A utiliza o da prova direta e reversa permitem resultados seguros e evitam intercorr ncias como a presen a de subgrupos de A e B que podem apresentar rea es fracas ou negativas na classifica o direta O anti soro Imuno HEMATO Anti A e Anti B da WAMA s o anticorpos monoclonais de classe IgM preparados a partir do sobrenadante de cultura in vitro de linhagem de c lulas de rato hibridizadas secretando imunoglobulinas O anti soro oferece especificidade antigenicidade pot ncia t tulo e avidez rapidez para que se estabele a a aglutina o iguais ou superiores aos padr es de refer ncia internacionais assegurando tima qualidade na identifica o dos ant genos Ae B nas provas de tipagem sangu nea PRINC PIO DO M TODO O procedimento do ens
27. rse debido al secado de la mezcla de reacci n o sila l mina se calienta Il T CNICA DE TUBOS 1 Preparar una suspensi n en 5 de eritrocitos lavados para ser sometidas a ensayo en soluci n salina fisiol gica lavar las c lulas 3 veces en soluci n salina 0 85 0 0 9 pipetear 50 ul de eritrocitos lavados 1 ml de soluci n salina en un tubo de ensayo 12 x75 mm Otros vol menes pueden ser utilizados 2 En un tubo de ensayo etiquetado de 10 x 75 mm o 12 x 75 mm pipetas 50 pl de suspensi n de eritrocitos a 5 3 Pipeta en el mismo tubo 50 ul del antisuero anti Ao anti B 4 Homogeneizar por agitaci n suave e incubar a temperatura ambiente 15 30 C por 1a 15 minutos 5 Centrifugar a 1 000 RPM 100 a 1259 durante 1 minuto 6 Resuspender suavemente el bot n de eritrocitos y examinar la presencia de aglutinaci n Ill T CNICA DE MICROPLACAS 1 Preparar una suspensi n de 2 3 de eritrocitos lavados para ser sometidos a ensayo en soluci n salina fisiol gica lavar las c lulas 3 veces en soluci n salina 0 85 0 0 9 en un tubo de 12 x 75 mm pipetear 25 ul de eritrocitos lavados 1 ml de soluci n salina otros volumen pueden ser usados 2 En microplaca con fondo U pipetear 50 ul de la suspensi n de 2 5 en cada cavidad de la microplaca seg n el n mero de muestras que deber n ser probadas y el plan de distribuci n en la placa 3 Pipetear en cada cavidad 50 ul del antisuero anti Ao anti B 1 4
28. scarte dos materiais TERMO DE GARANTIA AWAMA Diagn stica garante a troca deste conjunto diagn stico desde que o mesmo esteja dentro do prazo de validade e que seja comprovado por sua assessoria t cnica que n o houve falhas na execu o manuseio e conserva o deste produto A WAMA e seus distribuidores n o se responsabilizar o por falhas no desempenho do kit sob essas condi es ENGLISH SUMMARY The ABO System was described in 1900 by Landsteiner and remains until today as the most important system in blood transfusion The wrong ABO transfusion can result in death of the patient with an intravascular hemolytic reaction followed by biochemical and immunological changes The determination of blood group consists in the identification of the antigens of the ABO system existing in erythrocytes and that are genetically determined by 3 genes respectively thegenesA Band O There are two types of antibodies in ABO blood system the natural occurrence and the immune The natural occurrence begins to appear in serum approximately three to six months after the birth They are the anti A individuals in the group B anti B individuals in the group A anti A and anti B individuals in the group O antibodies and absent in individuals of group AB The natural antibodies represent a mixture with higher amount of immunoglobulins of class M IgM than the immunoglobulins class G IgG The immune occur through prior alloimmunizations wh
29. to Anti A and Anti B Family repeated satisfactorily the results with the samples to be tested even under different conditions LIMITATIONS OF USE False positive and negative results can occur due to contamination of the test materials inadequate concentration of suspensions of cells inadequate incubation time or temperature orerrors ofprocedure The centrifugation times mentioned are recommendations A appropriate centrifugation time must be determined by each laboratory and will be the one that produces the strongest reaction of the antibody with the antigen in positive reactions and will also to allow for easy resuspension ofRBC buttons e Weaker reactions will occur more frequently with stored blood than with fresh blood ABO antigens are not fully developed at birth therefore weak reactions can occur when using red blood cells from the umbilical cord or of neonates Cord Samples contaminated with Wharton s jelly can give false positive results Blood Samples of subgroups Aand B may letto false negative results or weak reactions Itis recommended to you use control with red blood cells with knowingly present antigen A and negative RBCs daily before starting the tests to confirm the reactivity and specificity ofthe reagent Reverse test ahould always be performed to search for circulating antibodies in individuals older than 6 months of age in order to confirm that the results of the direct test correlates with the reverse
30. uctions for use 1054100 B 100ml Anti B 1 Anti B antiserum 10x 10 mL 2 Instructions for use REAGENT PREPARATION AND STABILITY ANTISERUM ANTI A ready to use Contains monoclonal IgM antibodies anti A antigen of the ABO System Reagent containing blue dye Stable at 2 8 C until expiration date printed on the bottle Improper Storage affects the effectiveness of the reagent Contains NaN3 lt 0 095 as a preservative DO NOT FREEZE For in vitro diagnostic use only ANTISERUM ANTI B ready to use Contains monoclonal IgM antibodies anti B antigen of the ABO System Reagent containing yellow dye Stable at 2 8 C until expiration date printed on the bottle Improper Storage affects the effectiveness of the reagent Contains NaN3 lt 0 095 as a preservative DO NOT FREEZE For in vitro diagnostic use only Note The kit has the same performance after first use and is stable until the expiration date described on the label ifitis keptin the indicated temperature 2 8 C SPECIMENS Use fresh blood sample Avoid hemolyzed samples Ifitis not possible to perform the tests after collection the sample must be kept refrigerated at 2 8 C In accordance with the anticoagulant used the samples should be tested within the following time limits Heparine or Oxalate Sodium 2days EDTA or Sodium Citrate 14days ACDorCPD 28 days The long term storage of the sample may cause deterioration of the antigen and result
31. ul das hem cias lavadas 1 ml de salina outros volumes podem ser usados 2 Em uma microplaca de fundo em U pipetar 50 ul da suspens o a 2 5 em cada cavidade da microplaca de acordo com o n mero de amostras a serem testadas e o plano de distribui o na placa 3 Pipetar em cada cavidade 50 pl do anti soro Anti A ou Anti B 1 4 Homogeneizar atrav s de leve agita o de prefer ncia com um agitador de microplaca e incubar a temperatura ambiente 15 30 C por 15 minutos 5 Centrifugar a microplaca a 140 r c f por 1 minuto 6 Ressuspender delicadamente o bot o de hem cias e examinar a presen a ou n o de aglutina o IMPORTANTE Embora a t cnica em l mina seja utilizada por muitos laborat rios sugere se a utiliza o da t cnica em tubo ou microplaca com prova direta e reversa uma vez que tal procedimento evita alguns erros de interpreta o quando somente a pesquisa do ant geno utilizada INTERPRETA O DOS RESULTADOS REA O POSITIVA vis vel aglutina o dos eritr citos indicando a presen a de ant geno A ou B ou ambos na amostra testada REA O NEGATIVA aus ncia de aglutina o dos eritr citos indicando aus ncia de ant geno Ae ou B na amostra testada REA O DISCREPANTE se os resultados obtidos na prova reversa n o se correlacionam como da prova direta tornando se necess rias outras investiga es INTERPRETA O DAS REA ES PARA TIPAGEM SANGU NEA PROVA DIRETA REAGENTE
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