Anti-D (Rho) - WAMA Diagnóstica Produtos para Laboratórios
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1. ES E ADVERT NCIAS 1 Os reagentes devem ser conservados entre 2 8 C 2 A data de validade corresponde ao ltimo dia do m s assinalado nos r tulos dos frascos e da caixa do kit 3 Deve ser evitado expor os reagentes a temperaturas elevadas bem como diretamente ao sol 4 N o congelar nenhum reagente pois isto causar deteriora o irrevers vel 5 O Imuno HEMATO Anti D Rho da WAMA embora seja derivado de fonte animal n o se pode afirmar que esteja isento de agentes infecciosos Portanto recomenda se tratar todos os reagentes como materiais potencialmente infecciosos bem como ter o mesmo cuidado no descarte destes materiais 6 Deixar os reagentes adquirir a temperatura ambiente 20 25 C antes de iniciar os testes 7 Os reagentes devem ser tampados imediatamente ap s o uso 8 N o usar reagentes ap s a data de validade 9 Os procedimentos informados s o apenas para testes manuais Ao usar instrumentos autom ticos ou semiautom ticos deve ser seguido o procedimento que est contido no manual do operador fornecido pelo fabricante do instrumento 10 Descartar o material conforme regulamenta es locais 11 Utilizar a Boas Pr ticas de Laborat rios BPLs na conserva o manuseio e descarte dos materiais TERMO DE GARANTIA AWAMA Diagn stica garante a troca deste conjunto diagn stico desde que o mesmo esteja dentro do prazo de validade e que seja comprovado por sua assessoria t cnica que n o houve2. LIMITATIONS OF USE False positive and negative results can occur due to contamination of the test materials inadequate concentration of suspensions of cells inadequate incubation time or temperature or errors of procedure The centrifugation times mentioned are recommendations A appropriate eentrifugation time must be determined by each laboratory and will be the one that produces the strongest reaction of the antibody with the antigen in positive reactions and will also to allow for easy resuspension of RBC buttons Weaker reactions will occur more frequently with stored blood than with fresh blood e Positive and negative control should be used when carrying out the tests In the glass slide method weak D antigens and certain types of partial D may not be recognized Improper Storage affects the effectiveness of the reagent e Itis recommended to always use an Rh control to avoid false positive results Red blood cells coated with alloantibodies or auto antibodies whose cells are positive in the direct antiglobulin test Coombs test can give weak responses In extreme cases false negative results may occur The described procedures are for use with the Coombs sera of WAMA As a principle oombs sera from other manufacturers may be used but the Laboratory must follow the procedures of these manufacturers Also the laboratory must follow approved validation procedures to demonstrate the compatibility ofthese products PREC
3. Prepare a suspension of 2 3 of washed erythrocytes to be tested in physiological saline solution wash the cells 3 times in 0 85 or 0 9 saline solution and in a 12x 75 mm test tube pipette 25u of washed erythrocytes 1ml of saline other volumes can be used 2 In a microplate with U bottom pipette 50u of suspension at 2 3 in each cavity of the microtitre plate according to the number of samples to be tested and the distribution plan on board 3 Pipette in each cavity 50u of the anti D antiserum 4 Mix by gentle agitation preferably with a microplate shaker and incubate at room temperature 15 30 C for 15 minutes 5 Centrifuge the microplate 140 r c f for 1 minute 6 Gently resuspend the button of erythrocytes and examine for the presence of agglutination INTERPRETATION OF THE RESULTS POSITIVE REACTION visible agglutination of erythrocytes indicating the presence of D antigen in the tested sample NEGATIVE REACTION visible agglutination of erythrocytes indicating the presence of D antigen in the tested sample In this case the search for weak D antigen must be performed through the indirect Coombs test INDIRECT COOMBS TEST TO SEARCH FOR WEAK D If you are performing the technique in tube continue the search for the weak D in the same tube otherwise follow the procedure 1 Prepare a suspension in 5 of washed erythrocytes to be tested in physiological saline solution wash the cells 3 times in 0 8
4. tratar todos los reactivos como material potencialmente infeccioso as como tener cuidado al deshacerse de estos materiales 6 Dejar que los reactivos adquieran la temperatura ambiente 20 25 C antes de iniciar los tests 7 Los reactivos deben taparse inmediatamente despu s de su uso 8 Noutilice el reactivo despu s de la fecha de caducidad 9 Los procedimientos son s lo para prueba manual Al usar instrumentos autom ticos o semiautom ticos procedimiento que figura en el manual del operador proporcionado porel fabricante del instrumento debe ser seguido 10 Desechar el material siguiendo regulaciones locales 11 Utilice las Buenas Pr cticas de Laboratorio BPL en el almacenamiento la manipulaci n y eliminaci n de los materiales T RMINO DE GARANT A WAMA Diagn stica garantiza el cambio del kit de diagn stico siempre que est dentro de la fecha de caducidad y que ha sido probado por su apoyo t cnico que no hubo errores t cnicos en la ejecuci n la manipulaci n y el almacenamiento de este producto WAMA y sus distribuidores no se responsabiliza por fallas en el rendimiento de los kits enestas condiciones BIBLIOGRAFIA BIBLIOGRAPHY BIBLIOGRAF A 1 Levine P The discovery of Rh haemolytic disease Vox Sanguinis 47 187 190 1984 2 Jones J Scott M M and Voak D Monoclonal anti D specificity and Rh D structure criteria for selection of monoclonal anti D reagents for routine typing of patient
5. ESTABILIDAD DE REACTIVOS ANTISUERO ANTI D Listo para usar Que contiene una mezcla de anticuerpos monoclonales de clase IgM e IgG ant geno anti D Estable a 2 8 C hasta la caducidad impresa en el envase Almacenamiento inadecuado afecta a la eficacia del reactivo Contiene azida de sodio lt 0 095 como conservante Tambi n contiene cloruro de sodio alb mina bovina macromoleculares y atenuantes Se suministra en frascos de goteo con un volumen de 50 por gota NO CONGELAR Para uso diagn stico in vitro Nota El kit mantiene el mismo rendimiento despu s de la primera utilizaci n y es estable hasta la fecha de vencimiento descrita en la etiqueta siempre que se mantenga ala temperatura indicada 2 8 C ESPEC MENES Utilice muestra de sangre fresca Evite muestras hemolizadas Si no es posible realizar las pruebas despu s de la recolecci n la muestra debe mantenerse refrigerada a una temperatura de 2 8 C De acuerdo con el anticoagulante usado las muestras deben ser probadas en los siguientes plazos e Heparina o oxalato de sodio 2D as Heparina o Citrato de sodio 14 D as ACDOCPD 28 D as Nota El almacenamiento a largo plazo de la muestra puede provocar el deterioro de los ant genos y resultado de clasificaci n incorrecta MATERIAL NECESARIO PERO NO SUMINISTRADO e T cnica de l mina de vidrio laminas vidrio micropipetas 50ul y puntas o pipeta Pasteur varilla de mezcla T cnica de Tubo de
6. compreende atualmente 48 ant genos onde os principais s o o D C c Ele O ant geno D o mais imunog nico embora todos os outros podem induzir a produ o de anticorpos que est o relacionados com a maioria dos problemas associados aloimuniza o por transfus o e gesta o Alguns indiv duos podem apresentar D negativo quando diretamente testados com anti soros anti D mas quando o teste prosseguido para a fase de antiglobulina humana Soro de Coombs ocorre uma aglutina o vari vel Esses indiv duos foram originalmente chamados de D positivo Atualmente o termo D foi substitu do por D fraco e eles devem ser considerados como indiv duos D Rh positivos Alguns indiv duos podem apresentar ant geno D parcial caracterizado pela aus ncia de algum de seus ep topos Essa categoria de ant genos D Rh parcial diferenciada uma das outras pela presen a ou aus ncia de um ou mais ep topos DII DIII DIV DV DVI DVII DFR DBT RoHar O anti soro Imuno HEMATO Anti D Rho da WAMA uma mistura blend de anticorpos monoclonais humanos preparados a partir do sobrenadante de cultura in vitro de c lulas de heterohibridoma onde uma linhagem de c lulas secreta anticorpos de classe IgG e outra linhagem secreta anticorpos de classe IgM que reagem especificamente com o ant geno correspondente oferecendo seguran a na determina o da presen a ou aus ncia do ant geno D em gl bulos vermelhos humanos O anticor
7. ensayo tubos de ensayo 10x 75 mmo 12 x75 mm micropipeta 50H y puntas centr fuga isot nica soluci n salina 0 85 0 0 9 T cnica de Microplacas microplacas en U agitador de microplacas centr fuga 50H micropipeta y puntas soluci n salina isot nica 0 85 0 0 9 Recipiente para descarte de material PROCEDIMIENTO Independientemente de la t cnica empleada deje que el reactivo y la muestra alcance la temperatura ambiente antes de comenzar las pruebas T CNICA DE L MINA DE VIDRIO 1 En una l mina de vidrio gotear 1 gota 504 de antisuero anti D 1 y 1 gota 50ul de sangre entera a ser probado 2 Mezclar uniformemente el reactivo y c lulas sangu neas usando una varilla de mezcla en un rea de aproximadamente 2 5 cm de di metro 3 Con suaves movimientos de rotaci n y inclina o la lamina de vidrio para verificar por formaci n de aglutinaci n dentro de 1 minuto la reacci n comienza en segundos Reacci n inespec fica puede presentarse debido al secado de la mezcla de reacci n o sila l mina se calienta ILT CNICADE TUBOS 1 Preparar una suspensi n en 5 de eritrocitos lavados para ser sometidos a ensayo en soluci n salina fisiol gica lavan las c lulas 3 veces en soluci n salina 0 85 o 0 9 pipetear 50ul de eritrocitos lavados 1 ml de soluci n salina en un tubo de ensayo 12x75 mm Otros vol menes pueden ser utilizados 2 En un tubo de ensayo etiquetado de 10 x 75 mm o 12 x 75 mm p
8. falhas na execu o manuseio e conserva o deste produto A WAMA e seus distribuidores n o se responsabilizar o por falhas no desempenho do kit sob essas condi es ENGLISH SUMMARY The Rh system was discovered by Wiener Landsteiner and Levine in 1940 when they were studying of sensitization in rabbits with red blood cells of Rhesus monkeys After the antigens of the ABO system A and B the D antigen Rho is the most important antigen in blood typing once it is related to the development of the perinatal hemolytic disease hemolytic transfusion reactions and autoimmune hemolytic anemias The phenotype D negative occurs in 15 of Caucasians and 9 to 10 of the blacks The Rh is a complex system and currently comprises of ff48 antigens where the main ones are the D C c Ele The D antigen is the most immunogenic although all others may induce the production of antibodies that are related with the majority of the problems associated with alloimmunization by transfusion and pregnancy Some individuals may present negative D when directly tested with anti D antisera but when the test continues to the human antiglobulin phase Coombs Serum variable agglutination occurs These individuals were originally called D positive Currently the term D was replaced by weak D and they should be considered as individuals D Rh positive Some individuals may have partial D antigen characterized by the absence of some of its epitopes Th
9. mero do lote Lot Number N mero del lote N mero do cat logo Catalog Number N mero del cat logo Limite de temperatura Temperature Limite de temperatura au ENS Fabricado por Manufactured by Fabricado por Edi o Rev 11 2012 Proteger do calor Keep away from sunlight Proteger del calor El
10. 2 Homogeneizar uniformemente o reagente e as c lulas sangu neas usando uma vareta misturadora sobre uma rea de aproximadamente 2 5 cm de di metro 3 Com leves movimentos de rota o e de inclina o da l mina verificar a forma o de aglutina o dentro de 1 minuto a rea o se inicia em segundos Rea o inespec fica pode ocorrer devido secagem da mistura de rea o ou se a l mina aquecida ILT CNICA EM TUBO 1 Preparar uma suspens o a 5 de hem cias lavadas a ser testada em solu o salina fisiol gica lavar as hem cias 3 vezes em salina a 0 85 ou 0 9 e em um tubo de ensaio 12 x 75 mm pipetar 50 ul das hem cias lavadas 1 ml de salina Outros volumes podem ser usados 2 Em um tubo de ensaio 10 x 75 mm ou 12 x 75 mm marcado pipetar 50 ul da suspens o de hem cias a5 3 Pipetar no mesmo tubo 50 ul do anti soro Anti D 1 4 Homogeneizar atrav s de leve agita o e incubar a temperatura ambiente 15 30 C por 1 a 15 minutos 5 Centrifugar a 1 000 RPM 100 a 1259 por 1 minuto 6 Ressuspender delicadamente o bot o de hem cias e examinar a presen a ou n o de aglutina o ILT CNICA EM MICROPLACA 1 Preparar uma suspens o a 2 3 de hem cias lavadas a ser testada em solu o salina fisiol gica lavar as hem cias 3 vezes em salina a 0 85 ou 0 9 e em um tubo de ensaio 12 x 75 mm pipetar 25 ul das hem cias lavadas 1 ml de salina outros volumes podem ser usados 2 Em uma micro
11. 5 or 0 9 saline solution pipette 50ul of washed erythrocytes 1ml of saline into a 12 x 75 mm test tube Other volumes can be used 2 In a labeled 10 x 75 mm or 12 x 75 mm test tube pipette 50ul of 5 erythrocytes suspension 3 Pipette in the same tube 50ul 1 drop of the anti D antiserum 1 4 Mix by gentle agitation and incubate at 37 C for 15 30 minutes 5 Wash the cells 3 times in 0 85 or 0 9 saline fill the tube with saline resuspending the cells mix well through gentle agitation centrifuge at 2 000 RPM 800 to 1 000 g for 1 minute and discard the supernatant Repeatthe washing 3 times 6 After discarding the supernatant in the last wash pipette 100uI 2 drops of the anti human polyspecific Coombs serum from WAMA mix and centrifuge at 2 000 RPM 800 to 1 000 g for 1 minute 7 Gently resuspend the button of erythrocytes and examine for the presence of agglutination INTERPRETATION visible agglutintion of erythrocytes indicates the presence of weak D antigen in the sample tested and must be reported as D Rho positive weak D Absence of agglutination of erythrocytes indicates absence of D antigen in the tested sample and therefore D Rho negative CAUTION to perform the test searching for Rh antigen and the Indirect Coombs for weak D an Rh control must always be used We recommend the use of the Rh serum control from WAMA The purpose for using serum control is to identify false positive reactions thr
12. AUTIONS AND WARNINGS 1 The reagents should be kept between 2 8 C 2 The expiry date refers to the last day of the month indicated on the labels of the vial and ofthe kit box 3 Avoid exposing the reagents to high temperatures and direct sunlight 4 Donotfreeze the reagent as this may cause irreversible damage 5 The Imuno HEMATO Anti D Rho from WAMA though derived from animal source cannot assume to be free of infectious agents Therefore it is recommended to treat all reagents as potentially infectious as well as having the care in disposing of these materials 6 Allow the reagents to reach the room temperature 20 25 C before starting the test 7 The reagents mustbe capped immediately after use 8 Do notuse the reagent after the expiration date 9 The procedures are only for manual testing When using automatic or semi automatic instruments procedure contained in the operator s manual provided by the instrument manufacturer mustbe followed 10 Discard the material following local regulations 11 Use the Good Laboratory Practices GLPs in storage handling and disposal of materials WARRANTY WAMA Diagn stica guarantees the exchange of the diagnostic kit provided it is within the expiration date and is proven by its technical support that there were no technical mistakes in the execution handling and storage of this product WAMA and its distributors are not liable for failures on the performance of the kits und
13. D Rh parciales se diferencia uno de los otros por la presencia o ausencia de uno o m s ep topos DII DIII y DIV DV DVI DVII DFR DBT RoHar El antisuero Imuno HEMATO Anti D Rho de WAMA es una mezcla de anticuerpos monoclonales humanos preparado a partir del sobrenadante del cultivo in vitro de c lulas heterohibridoma donde una cepa de c lulas secretan anticuerpos IgG y otra cepa secreta anticuerpos IgM que reaccionan especificamente con el ant geno correspondiente lo que garantiza en la determinaci n de la presencia o ausencia del ant geno D de gl bulos rojos en humanos El anticuerpo reacciona negativamente con eritrocitos que tienen ant geno D parcial categor a DVI con anticuerpos IgM y positivamente con los anticuerpos IgG en las pruebas de Coombs indirecta PRINCIPIO DEL M TODO El procedimiento del ensayo se basa en el principio de aglutinaci n donde las c lulas rojas de los individuos que poseen ant geno D en su superficie aglutinar n en presencia del antisuero anti D endicando un resultado positivo La prueba se considera negativa cuando no aparece ninguna aglutinaci n En tales casos la prueba debe continuar con la b squeda de ant geno D d bil PRESENTACI N DEL KIT 1055010 D 10ml 1 Antisuero Anti D 1x 10 ml 2 Instrucciones de uso 1055050 D 50ml 1 Antisuero Anti D 5x 10 ml 2 Instrucciones de uso 1055100 D 100ml 1 Antisuero Anti D 10 x 10 ml 2 Instrucciones de uso PREPARACI NY
14. MS 10310030161 Imuno Hemato Reagente de anticorpos monoclonais IgG IgM Blend para determina o qualitativa de Ant genos D Rho fator Rh nos eritr citos humanos em l mina tubo e microplaca por t cnica de aglutinag o Monoclonal antibodies IgG IgM Blena reagent for qualitative determination of D Rho Antigens Rh factor in human erythrocytes in slide tube and microplate by agglutination technique Monoclonal antibodies IgG IgM Blend reagent for qualitative determination of D Rho Antigens Rh factor in human erythrocytes in slide tube and microplate by agglutination technique 1055010 D 10m 1055050 D 50m 1055100 D 100ml Ml WAMA Diagn stica Rua Aldo Germano Klein 100 CEAT CEP 13573 470 S o Carlos SP Brasil Fone 55 16 3377 9977 Fax 55 16 3377 9970 www wamadiagnostica com br SAC 0800 772 9977 WAmaA PORTUGU S IMPORT NCIA CL NICA O sistema Rh foi descoberto por Wiener Landsteiner e Levine em 1940 quando faziam estudos de sensibilizag o em coelhos com hem cias de macacos Rhesus Depois dos ant genos do sistema ABO A e B o ant geno D Rho o mais importante ant geno nas rotinas de tipagem sangu nea uma vez estar ele relacionado ao desenvolvimento da doen a hemol tica perinatal s rea es transfusionais hemol ticas e s anemias hemol ticas autoimunes O fen tipo D negativo ocorre em 15 dos indiv duos brancos e 9 a 10 dos negros O Rh um sistema complexo e
15. ar 50ul da suspens o de hem cias a5 3 Pipetar no mesmo tubo 504 1 gota do anti soro Anti D 1 4 Homogeneizar atrav s de leve agita o e incubar a 37 C por 15 30 minutos 5 Lavar as c lulas 3 vezes em salina a 0 85 ou 0 9 encher o tubo com salina ressuspendendo as c lulas misturar bem atrav s de leve agita o centrifugar a 2 000 rpm 800 a 1 000 g por 1 minuto e desprezar o sobrenadante Repetir a lavagem 3vezes 6 Ap s desprezar o sobrenadante da ltima lavagem pipetar 100u 2 gotas do soro anti humano poliespec fico de Coombs da WAMA misturar e centrifugar a 2 000 RPM 800 a 1 000 g por 1 minuto 7 Ressuspender delicadamente o bot o de hem cias e examinar a presen a ou n o de aglutina o INTERPRETA O vis vel aglutina o dos eritr citos indica a presen a de ant geno D fraco na amostra testada e deve ser reportado como D Rho positivo D fraco Aus ncia de aglutina o dos eritr citos indica aus ncia de ant geno D na amostra testada e portanto D Rho negativo ATEN O para a realiza o do teste de pesquisa de ant geno Rh e do Coombs Indireto para D fraco deve sempre ser usado um controle Rh Recomendamos o uso do soro controle Rh da WAMA Afinalidade do uso do soro controle identificar rea es falso positivas pela presen a de anticorpos autoimunes aglutininas frias ou forma o de roleaux A rea o falso positiva detectada na fase de antiglobulina huma
16. centra o inadequada das suspens es de c lulas tempo de incuba o ou temperatura inadequados ou por erros de procedimento Os tempos de centrifuga o mencionados s o meras sugest es Um tempo de centrifuga o adequado deve ser determinado por cada laborat rio e ser aquele que produz a mais forte rea o do anticorpo com o ant geno nas rea es positivas mas tamb m que permita a ressuspens o f cil do bot o de hem cias Rea es mais fracas podem ser observadas com sangue armazenado do que com sangue fresco Controle positivo e negativo deveria ser usado quando da realiza o dos testes No m todo em l mina ant genos D fraco e categorias de D parcial podem n o ser reconhecidas Armazenamento inadequado prejudica a efic cia do reagente Recomenda se sempre usar um controle Rh para evitar falsos resultados positivos Gl bulos vermelhos revestidos com aloanticorpos ou auto anticorpos cujas c lulas s o positivas no teste direto de antiglobulina teste de Coombs Direto podem dar rea es fracas Em casos extremos resultados falso negativos podem ocorrer Os procedimentos descritos s o para uso com o soro de Coombs da WAMA A princ pio soro de Coombs de outros fabricantes pode ser usado mas o Laborat rio deve seguir os procedimentos desses fabricantes Tamb m o Laborat rio deve seguir procedimentos de valida o aprovados para demonstrar a compatibilidade desses produtos PRECAU
17. ealizar la prueba de repetibilidad 20 repeticiones del test fueran corridas por el mismo t cnico en mismo dia De acuerdo a las pruebas realizadas se verific que el kit Imuno Hemato Anti D Rho repiti satisfactoriamente los resultados con las muestras del ensayo en las mismas condiciones b Precisi n Interensayo Se seleccionarn 20 muestras de control de calidad 16 positivos y 4 negativos para realizar la prueba de reproducibilidad 3 pruebas se han llevado a cabo con las mismas muestras en d as y t cnicos diferentes y con dos lotes diferentes De acuerdo a las pruebas realizadas se verific que el kit Imuno Hemato Anti D Rho repiti satisfactoriamente los resultados con las muestras de ensayo incluso bajo diferentes condiciones LIMITACIONES DEUSO Resultados falso positivos y negativos pueden ocurrir debido a la contaminaci n de los materiales de ensayo concentraci n inadecuada de las suspensiones de c lulas insuficiente tiempo de incubaci n o temperatura o errores de procedimiento Los tiempos de centrifugaci n mencionadas son recomendaciones Un tiempo de centrifugaci n apropiado debe ser determinado por cada laboratorio y ser el que produce la reacci n m s fuerte del anticuerpo con el ant geno en las reacciones positivas y tambi n para permitir una f cil resuspensi n de botones de RBC Reacciones m s d biles ser n m s frecuentes con sangre almacenada que con sangre fresca Control positi
18. ente el bot n de eritrocitos y examinar la presencia de aglutinaci n INTERPRETACI N aglutinaci n visible de los eritrocitos indica la presencia del ant geno d bil D en la muestra ensayada y debe ser declarada como D Rho positivo d bil D Ausencia de aglutinaci n de los eritrocitos indica ausencia de ant geno D en la prueba de la muestra y por lo tanto D Rho negativo PRECAUCI N Para realizar la prueba en busca de ant geno Rh y Coombs indirecto para d bil D un control de Rh debe utilizarse siempre Recomendamos el uso del suero de control Rh de WAMA Lo prop sito para el uso de suero de control es identificar reacciones falso positivos a trav s de la presencia de anticuerpos autoinmunes aglutininas fr as o formaci n de roleaux La reacci n falsa positiva detectada en la fase antiglobulina humana suero de Coombs generalmente indica que los gl bulos rojos son positivos en el test de Coombs directo Para la correcta interpretaci n de los ensayos de control de Rh consulte el prospecto del reactivo ESPECIFICIDAD DELAPRUEBA El rendimiento de Imuno HEMATO Anti D Rho fue evaluada en 1125 muestras obtenidas con los anticoagulantes recomiendados La evaluaci n demuestra una especificidad del 100 de cada uno de los reactivos en comparaci n con los resultados de un Kiten el mercado PRECISI N DEL TEST a Precisi n Intraensayo Se seleccionaron 2 muestras de control de calidad 1 positivo y 1 negativo para r
19. er these conditions ESPANOL IMPORTANCIACL NICA El sistema Rh fue descubierto por Wiener Landsteiner y Levine en 1940 cuando estaban estudiando sensibilizaci n en conejos con gl bulos rojos de monos Rhesus Despu s de los ant genos del sistema ABO A y B el ant geno D Rho es el ant geno m s importante en tipo de sangre una vez que se relaciona con el desarrollo de la enfermedad hemol tica perinatal reacciones de transfusi n hemol ticas y anemias hemol ticas autoinmunes El fenotipo D negativo se produce en 15 de los cauc sicos y 9a 10 de los negros El Rh es un sistema complejo y comprende actualmente 48 ant genos donde los principales son la D C c E e El ant geno D es el m s inmunog nico aunque todos los otros pueden inducir la producci n de anticuerpos que se relacionan con la mayor parte delos problemas asociados con la aloinmunizaci n por transfusi n y el embarazo Algunos individuos pueden presentar D negativo cuando se prueban directamente con Antisueros anti D pero cuando la prueba contin a a la fase antiglobulina humana suero de Coombs se produce aglutinaci n la variables Estos individuos fueron originalmente llamados D positivo Actualmente el t rmino D fue sustituido por d bil D y que deben ser considerados como individuos D Rh positivo Algunos individuos pueden tener ant geno D parcial que se caracteriza por la ausencia de algunos de sus ep topos Esta categor a de ant genos
20. iliza o e est vel at a data de validade descrita no r tulo desde que mantido na temperatura indicada 2 8 C AMOSTRAS Usar amostra de sangue fresco Evitar amostras hemolizadas Se n o for poss vel realizar os testes ap s a coleta a amostra deve ser conservada refrigerada entre 2 8 C De acordo com o anticoagulante utilizado as amostras deveriam ser testadas dentro dos seguintes prazos Heparina ou Oxalato de S dio 2dias EDTAou Citrato de S dio 14 dias ACD ou CPD 28 dias OBS O armazenamento prolongado da amostra pode causar deteriora o do ant geno e resultar em classifica o incorreta MATERIAL NECESS RIO MAS N O FORNECIDO e T cnica em L mina l mina de vidro micropipeta de 50u l e ponteiras ou pipeta Pasteur vareta misturadora T cnica em Tubo tubos testes 10 x 75 mm ou 12 x 75 mm micropipeta de 50ul e 1000 ponteiras centr fuga solu o salina isot nica 0 85 ou 0 9 e T cnica em Microplaca microplaca fundo em U agitador de placa centr fuga de microplaca micropipeta de 504 e ponteira solu o salina isot nica 0 85 ou 0 9 Recipiente para descarte de material PROCEDIMENTO Independente da t cnica adotada deixar o reagente e as amostras atingir a temperatura ambiente antes de iniciar os testes 1 T CNICA EM L MINA 1 Sobre uma l mina de vidro limpa pingar 1 gota 50 ul do anti soro Anti D 1 e 1 gota 50 ul de sangue total a ser testado
21. ipetear 50ul de suspensi n de eritrocitos a 5 3 Pipetear en el mismo tubo 50H del antisuero anti D 4 Homogeneizar por agitaci n suave e incubar a temperatura ambiente 15 30 C por 1a15 minutos 5 Centrifugar a 1 000 RPM 100 a 1259 durante 1 minuto 6 Resuspender suavemente el bot n de eritrocitos y examinar la presencia de aglutinaci n lll T CNICA DE MICROPLACAS 1 Preparar una suspensi n de 2 3 de eritrocitos lavados para ser sometidas a ensayo en soluci n salina fisiol gica lavan las c lulas 3 veces en soluci n salina 0 85 o 0 9 en un tubo de 12 x 75 mm pipetear 25H de eritrocitos lavados 1ml de soluci n salina otros volumen pueden ser usados 2 En una microplaca con fondo U pipetear 50ul de la suspensi n de 2 3 en cada cavidad de la placa de microtitulaci n seg n el n mero de muestras que deber n ser probadas y el plan de distribuci n a bordo 3 Pipeta en cada cavidad 5011 del antisuero anti D 4 Mezcla por agitaci n suave preferentemente con un agitador de microplacas e incuba a temperatura ambiente 15 30 C por 15 minutos 5 Centrifugar la microplaca 140 r c f por 1 minuto 6 Resuspender suavemente el bot n de eritrocitos y examinar la presencia de aglutinaci n INTERPRETACI N DE LOS RESULTADOS REACCI N POSITIVA Aglutinaci n de los eritrocitos lo que indica la presencia de ant geno D en la muestra ensayada REACCI N NEGATIVA Aglutinaci n de los eritrocit
22. is category of partial D Rh antigens is differentiated one from others by the presence or absence of one or more epitopes DII DIII and DIV DV DVI DVII DFR DBT RoHar The antiserum Imuno HEMATO Anti D Rho from WAMA mixture of human monoclonal antibodies prepared from the supernatant of in vitro culture of heterohibridoma cells where a strain of cells secrete IgG antibodies and another strain secretes IgM antibodies which react specifically with the corresponding antigen providing assurance in the determination of the presence or absence ofthe D antigen on human red blood cells The antibody reacts negatively with erythrocytes that have partial D antigen category DVI with the IgM antibodies and positively with the IgG antibodies in indirect Coombs tests PRINCIPLE OF THE METHOD The procedure of the assay is based on the principle of agglutination where red blood cells of individuals possessing D antigen on their surface will agglutinate in the presence of anti D antiserum indicating a positive result The test is considered negative when no agglutination appears In such cases the test should continue to search for antigen weak D KIT PRESENTATION 1055010 D 10ml 1 Anti D antiserum 1x 10 ml 2 Instructions for use 1055050 D 50m 1 Anti D antiserum 5 x 10 ml 2 Instructions for use 1055100 D 100mil 1 Anti D antiserum 10 x 10 ml 2 Instructions for use REAGENT PREPARATION AND STABILITY ANTISERUM ANTI D read
23. na Soro de Coombs indica geralmente que as hem cias apresentam o teste de Coombs Direto positivo Para a correta interpreta o do teste com Controle Rh vide bula do reagente ESPECIFICIDADE DO TESTE O desempenho do Imuno HEMATO Anti D Rho foi avaliada em 1125 amostras colhidas com os anticoagulantes recomendados A avalia o demonstrou especificidade de 100 de cada reagente quando comparados com os resultados de um Kitutilizado no mercado PRECIS O DO TESTE a Precis o Intra Ensaio Foram selecionadas 2 amostras do controle de qualidade 1 positiva e 1 negativa para realizar o teste de repetibilidade Foram feitas 20 repeti es do teste com mesmo operador no mesmo dia De acordo com os testes realizados foi verificado que o kit Imuno Hemato Anti D Rho repetiu de maneira satisfat ria os resultados com as amostras testadas nas mesmas condi es b Precis o Inter Ensaio Foram selecionadas 20 amostras do controle de qualidade 16 positivas e 04 negativas para realizar o teste de reprodutibilidade foram realizados 03 testes com as mesmas amostras em dias e operadores diferentes e com dois lotes diferentes De acordo com os testes realizados foi verificado que o kit Imuno Hemato Anti D Rho reproduz de maneira satisfat ria os resultados com as amostras testadas mesmo em diferentes condi es LIMITA ES DE USO Resultados falso positivos e negativos podem ocorrer por contamina o dos materiais do ensaio con
24. os lo que indica la presencia de ant geno D en la muestra ensayada En este caso la b squeda de ant geno d bil D se debe realizar a trav s de la prueba de Coombs indirecta TEST DE COOMBS INDIRECTO ALA B SQUEDA DE DEBIL D Si se realiza la t cnica en el tubo contin e la b squeda de los d biles D en el mismo tubo en caso contrario siga este procedimiento 1 Preparar una suspensi n en 5 de eritrocitos lavados para ser sometidos a ensayo en soluci n salina fisiol gica lavan las c lulas 3 veces en soluci n salina 0 85 o 0 9 pipetear 50ul de eritrocitos lavados 1ml de soluci n salina en un tubo de ensayo 12x 75 mm Otros vol menes pueden ser utilizados 2 En un tubo de ensayo etiquetado de 10 x 75 mm o 12 x 75 mm pipetear 50ul de suspensi n de eritrocitos a 5 3 Pipetear en el mismo tubo 50 1 gota del antisuero anti D 1 4 Homogeneizar por agitaci n suave e incubar a 37 C por 15 30 minutos 5 Lave las c lulas 3 veces en soluci n salina al 0 85 o 0 9 llenar el tubo con soluci n salina resuspenda las c lulas mezclar bien a trav s de una suave agitaci n centrifugar a 2 000 RPM 800 a 1 000 g durante 1 minuto y desechar el sobrenadante Repita el lavado 3 veces 6 Despu s de descartar el sobrenadante en el ltimo lavado pipetear 100 pl 2 gotas de la anti humanos bajo suero de Coombs de WAMA mezclar y centrifugar a 2 000 RPM 800 a 1 000 g durante 1 minuto 7 Resuspender suavem
25. ough the presence of autoimmune antibodies cold agglutinins or formation of roleaux The false positive reaction detected in the human antiglobulin phase Coombs Serum generally indicates that the red blood cells are positive for in the Direct Coombs test For the correct interpretation of the test with Rh Control see the reagent package insert TEST SPECIFICITY The performance of the Imuno HEMATO Anti D Rho was evaluated in 1125 samples collected with the recommended anticoagulants The evaluation showed 100 specificity for each reagent when compared with the results of a Kitused on the market PRECISION OF THE TEST a Intra Assay Precision 2 samples were selected from quality control 1 positive and 1 negative to perform the repeatability test 20 repetitions of the test was done by the same operator on the same day According to the tests carried out it was verified that the kit Imuno Hemato Anti D Rho repeated satisfactorily the results with the samples to be tested under the same conditions b Inter Assay Precision 20 samples were selected from quality control 16 negatives and 4 negatives to perform the test of reproducibility 3 tests were performed with the same samples in different days and technicians and with two different lots According to the tests carried out it was verified that the kit Imuno Hemato Anti D Rho repeated satisfactorily the results with the samples to be tested even under different conditions
26. placa de fundo em U pipetar 50 ul da suspens o a 2 3 em cada cavidade da microplaca de acordo com o n mero de amostras a serem testadas e o plano de distribui o na placa 3 Pipetar em cada cavidade 50 ul do anti soro Anti D 1 4 Homogeneizar atrav s de leve agita o de prefer ncia com um agitador de microplaca e incubar a temperatura ambiente 15 30 C por 15 minutos 5 Centrifugar a microplaca a 140 r c f por 1 minuto 6 Ressuspender delicadamente o bot o de hem cias e examinar a presen a ou n o de aglutina o INTERPRETA O DOS RESULTADOS REA O POSITIVA vis vel aglutina o dos eritr citos indicando a presen a de ant geno D na amostra testada REA O NEGATIVA aus ncia de aglutina o dos eritr citos indicando prov vel aus ncia de ant geno D na amostra testada Neste caso a pesquisa de ant geno D fraco deve ser realizada atrav s do teste de Coombs indireto TESTE DE COOMBS INDIRETO PARA PESQUISA DE D FRACO Se estiver realizando a t cnica em tubo continuar no mesmo tubo a pesquisa de D fraco caso contr rio siga o seguinte procedimento 1 Preparar uma suspens o a 5 de hem cias lavadas a ser testada em solu o salina fisiol gica lavar as hem cias 3 vezes em salina a 0 85 ou 0 9 e em um tubo de ensaio 12 x 75 mm pipetar 50ul das hem cias lavadas 1 ml de salina Outros volumes podem ser usados 2 Em um tubo de ensaio 10 x 75 mm ou 12 x 75 mm marcado pipet
27. po reage negativamente com eritr citos que apresentam ant geno D parcial categoria DVI com os anticorpos de classe IgM e positivamente com os anticorpos de classe IgG nos testes de Coombs indireto PRINC PIO DO M TODO O procedimento do ensaio baseado no princ pio da aglutina o onde c lulas vermelhas do indiv duo possuindo ant geno D em sua superf cie aglutinar o na presen a do anti soro anti D indicando um resultado positivo O teste considerado negativo quando n o aparece aglutina o Nesses casos o teste deveria ser continuado para pesquisa de ant geno D fraco APRESENTA O DO KIT 1055010 D 10ml 1 Anti soro Anti D 1x 10 ml 2 Instru es para uso 1055050 D 50ml 1 Anti soro Anti D 5x 10 ml 2 Instru es para uso 1055100 D 100ml 1 Anti soro Anti D 10 x 10 ml 2 Instru es para uso PREPARA O E ESTABILIDADE DOS REATIVOS ANTI SORO ANTI D pronto para uso Contendo uma mistura blend de anticorpos monoclonais de classe IgM e IgG anti ant geno D Est vel entre 2 8 C at a data de vencimento impressa na etiqueta do frasco Armazenamento inadequado prejudica a efic cia do reagente Cont m azida s dica lt 0 095 como conservante Cont m tamb m cloreto de s dio albumina bovina e potencializadores macromoleculares Fornecido em frascos conta gotas com volume de 50 pl por gota N O CONGELAR Somente para uso in vitro Obs O kit mant m o mesmo desempenho ap s a primeira ut
28. roplate centrifuge 50l pipette and tips 0 85 or 0 9 isotonic saline solution Container for material disposal PROCEDURE Regardless of the technique used let the reagent and the sample reach room temperature before starting the tests GLASS SLIDE TECHNIQUE 1 On a clean glass slide drip 1 drop 504 of Anti D antiserum 1 and 1 drop 504 of whole blood to be tested 2 Mix evenly the reagent and blood cells using a mixing rod over an area of approximately 2 5 cm in diameter 3 With gentle rotation movements and tilt of the glass slide check for the formation of agglutination within 1 minute the reaction starts in seconds Nonspecific Reaction can occur due to drying of the reaction mixture or ifthe blade is heated Il TUBE TECHNIQUE 1 Prepare a suspension in 5 of washed erythrocytes to be tested in physiological saline solution wash the cells 3 times in 0 85 or 0 9 saline solution pipette 50ul of washed erythrocytes 1 ml of saline into a 12 x 75 mm test tube Other volumes can be used 2 In a labeled 10 x 75 mm or 12 x 75 mm test tube pipette 50ul of 5 erythrocytes suspension 3 Pipette in the same tube 501l of the anti D antiserum 4 Mix by gentle agitation and incubate at room temperature 15 30 C for 1 to 15 minutes 5 Centrifuge at 1 000 RPM 100 to 125 g for 1 minute 6 Gently resuspend the button of erythrocytes and examine for the presence of agglutination Ill MICROPLATE TECHNIQUE 1
29. s and donors Transfusion Medicine 5 171 184 1995 3 Avent N D and Reid M E The Rh blood group system a review Blood 95 375 387 2000 4 Zallen D T Christie D A and Tansey E M The Rhesus Factor and Disease Prevention Witness Seminar held by the Wellcome Trust Centre for the History of Medicine at UCL London June 2003 5 Scott M L The complexities of the Rh system Vox Sanguinis 87 58 62 2004 6 Westhoff C M The Rh blood group system in review A new face for the next decade Transfusion 44 1663 1673 2004 7 Moulds M K Review monoclonal reagents and detection of unusual or rare phenotypes or antibodies Immunohematology 22 2 52 63 2006 8 Van Kim C Colin Y and Cartron J Rh proteins key structural and functional components of the red cell membrane Blood Reviews 20 93 110 2006 9 Westhoff C M The structure and function of the Rh antigen complex Seminars in Hematology 44 42 50 2007 SIMBOLOGIA SIMBOLS SIMBOLOGIA O conte do suficiente para n testes Quantity sufficient for n tests O contenido es suficiente para n testes Data limite de utiliza o Expiry Date Fecha de la caducidad Produto diagn stico in vitro In vitro diagnostic Produto diagn stico in vitro Consultar instru es para uso Refer to user s instructions Consultar las instrucciones para el uso Representante Europeu ECJREP European Representative Representante Europeu N
30. vo y negativo se debe utilizar en la realizaci n de las pruebas Enel metodo de laminas de vidrio ant genos d bil D y categor as de D parciales puede no serreconocida Almacenamiento inadecuado afecta a la eficacia del reactivo Se recomienda utilizar siempre un control de Rh para evitar resultados falsos positivos Los gl bulos rojos recubiertos con alo anticuerpos o auto anticuerpos cuyas c lulas son positivas en la prueba de antiglobulina directa prueba de Coombs pueden dar respuestas d biles En casos extremos pueden producir resultados falso negativos Los procedimientos descritos son para su uso con los sueros de Coombs de WAMA Como principio suero Coombs de otros fabricantes puede ser utilizado pero el laboratorio deben seguir los procedimientos de estos fabricantes Tambi n el laboratorio debe seguir los procedimientos de validaci n aprobados para demostrar la compatibilidad de estos productos PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS 1 Los reactivos deben conservarse entre 2 8 C 2 La fecha de caducidad se refiere al ltimo d a del mes indicado en las etiquetas del frasco y de la caja del kit 3 Evite la exposici n de los reactivos a altas temperaturas y la luz solar directa 4 No congele el reactivo ya que esto puede causar da os irreversibles 5 Lo Imuno HEMATO Anti D Rho de WAMA aunque derivados de origen animal no puede dar por sentado que se libre de agentes infecciosos Porlo tanto se recomienda
31. y to use Containing a blend of IgM and IgG anti antigen D monoclonal antibodies Stable at 2 8 C until expiration date printed on the bottle Improper Storage affects the effectiveness of the reagent Contains sodium azide lt 0 095 as preservative Also contains sodium chloride bovine albumin and extenuating macromolecular architecture Supplied in dropper bottles with a volume of 50u per drop DO NOT FREEZE For in vitro diagnostic use only Note The kit has the same performance after first use and is stable until the expiration date described on the label if itis keptin the indicated temperature 2 8 C SPECIMENS Use fresh blood sample Avoid hemolyzed samples If it is not possible to perform the tests after collection the sample must be kept refrigerated at 2 8 C In accordance with the anticoagulant used the samples should be tested within the following time limits Heparin or Sodium Oxalate 2days EDTAor Sodium Citrate 14days ACDorCPD 28 days Note The long term storage of the sample may cause deterioration of the antigen and resultin incorrect classification MATERIAL REQUIRED BUT NOT PROVIDED Glass slide Technique glass slide 50pl pipettor and tips or Pasteur pipette mixing rod Test Tube Technique test tubes 10 x 75 mm or 12 x 75 mm 50ul and 1000pl micropipette and tips centrifuge isotonic 0 85 or 0 9 saline solution e Microplate Technique microplate bottom in U plate shaker mic
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