- LIATEST® D-DI
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1. Gn LIATEST D DI Determinaci n inmunoturbidim trica del d mero D e Contenido del kit 6 viales de Reactivo 1 Buffer 6 viales de Reactivo 2 Latex CE Espa ol 6 REF 00515 Agosto 2012 1 UTILIZACI N DEL KIT El kit STA Liatest D Di est dise ado para la determinaci n cuantitativa del d mero D en el plasma por el m todo de inmunoturbidim trico 9 en los analizadores STA R STA Compact y STA Satellite El ensayo STA Liatest D Di puede ser usado como ayuda en el diagn stico de las trombosis venosas profundas TVP y el tomboembolismo pulmonar TEP 12 16 18 2 SUMARIO e Fibrin lisis La degradaci n espec fica de la fibrina e de respuesta a la formaci n de fibrina 1 La plasmina es la enzima fibrinol tica derivada del plasmin geno inactivo El plasmin geno es convertido en plasmina por los activadores plasminog nicos Los principales activadores plasminog nicos son el activador del plasmin geno de tipo tisular tPA y la pro urokinasa que es activada en uroquinasa UK por diferentes sistemas entre ellos el sistema de contacto de la coagulaci n 2 En el torrente sangu neo la plasmina es r pida y espec ficamente neutralizada por la ap antiplasmina 2 restringiendo as su actividad fibrinogenol tica y localizando la fibrinolisis sobre el co gulo de fibrina En el co gulo de fibrina la plasmina degrada la fibrina en varios productos para los cua2. animal Cuando se ha utilizado plasma humano en la preparaci n de estos reactivos se excluye previamente la presencia del ant geno HBs de los anticuerpos anti HCV anti HIV 1 y anti HIV 2 con los correspondientes an lisis Sin embargo ning n test puede garantizar de manera absoluta la ausencia de agentes infecciosos Por eso estos reactivos de origen biol gico han de ser manipulados con las precauciones habituales ya que se trata de productos potencialmente infecciosos 5 PRECAUCIONES El estuche intacto se debe conservar a 2 8 C S lo para uso diagn stico in vitro Estos reactivos s lo deben ser utilizados por personal autorizado del laboratorio Utilizar nicamente reactivos de un mismo kit o de un mismo lote Los residuos se eliminar n con arreglo a la reglamentaci n local vigente El estuche STA Liatest D Di esta dise ado para los aparatos de la l nea STA que pueden utilizar estos reactivos Antes de cualquier utilizaci n leer con atenci n el Manual del Operador del instrumento utilizado Tener cuidado en el manejo de estos reactivos y las muestras 6 OBTENCI N Y TRATAMIENTO DE LA MUESTRA La obtenci n de la muestra debe ajustarse a las recomendaciones para las puebras de hemostasia e Obtenci n 9 vol de sangre por 1 vol de citrato tris dico 0 109 M e Centrifugaci n 15 minutos a 2000 2500 g e Conservaci n del plasma 8 horas a 20 5 C 1 mes a 20 C Atemperar la muestra a 37 C el ti
3. A2 Interference testing in clinical chemistry approved guideline Second Edition 25 27 2005 Los cambios significativos son indicados por las l neas punteadas en el margen DIAGNOSTICA STAGO S A S 9 rue des Fr res Chausson 7 92600 Asni res sur Seine France 33 0 1 46 88 20 20 Stago webmaster stago com Las informaciones y o las im genes contenidas en este documento est n protegidas por copyright y otros derechos de propiedad intelectual O 2012 Diagnostica Stago todos derechos reservados Los logotipos y o los nombres de los productos de Diagnostica Stago son marcas registradas Espa ol
4. VORKIAN J FRANCIS C W MARKHAM R E MARDER V pathologic thrombi Blood 63 5 1216 1224 1984 BACHMANN F Fibrinolysis in Thrombosis and Haemostasis Verstraete M Vermylen J Lijnen H R Arnout J Leuven International Society on Thrombosis and Haemostasis and Leuven University Press 227 265 1987 SORIA C SORIA J MIRSHAHI Mc MIRSHAHI M LU H FAIVRE R NEUHART E BOUCHEIX C La mesure des D dim res et son int r t Sang Thromb Vaiss 5 1 305 310 1989 HARRISON K A HAIRE W D PAPPAS A A PURNELL G L PALMER S HOLDEMAN K P FINK L M DALRYMPLE G V Plasma D dimer a useful tool for evaluating suspected pulmonary embolus J Nucl Med 34 6 896 898 1993 BOUNAMEAUX H DE MOERLOOSE P PERRIER A REBER G Plasma measurement of D dimer as diagnostic aid in suspected venous thromboembolism an overview Thromb Haemostasis 71 1 1 6 1994 GIANSANTE C FIOTTI N CATTIN L DA COL PG Fibrinogen D dimer and thrombin antithrombin complexes in a random population sample relationships with other cardiovascular risk factors Thromb Haemostasis 71 5 581 586 1994 FRANCALANCI I COMEGLIO P ALESSANDRELLO LIOTTA A CELLAI A P FEDI S PARRETTI E MELLO G PRISCO D ABBATE R D dimer concentrations during normal pregnancy as measured by ELISA Thromb Res 78 5 399 405 1995 BOUNAMEAUX H Biological markers of acute venous thrombosis and pulmonary
5. embolism in Hypercoagulable states Seghatchian M J Samama M M Hecker S P Boca Raton CRC Press 129 137 1996 OGER E LEROYER C BRESSOLLETTE L NONENT M LE MOIGNE E BIZAIS Y AMIRAL J GRIMAUX M CLAVIER J ILL P ABGRALL J F MOTTIER D Evaluation of a new rapid and quantitative D dimer test in patients with suspected pulmonary embolism Am J Resp Crit Care Med 158 1 6 1998 Demonstration of in situ fibrin degradation in gt APARICIO C MAZOYER E BONNIN P DUET M WARNET A ELKHARRAT D BEAUFILS P DROUET L SORIA J SORIA C A new clinical interest for D dimers determination follow up of patients with deep vein thrombosis Thromb Haemostasis abstract P725 suppl July 2001 1 LECOURVOISIER C TOULON P Int r t du dosage des D dim res dans le diagnostic d exclusion de l embolie pulmonaire Ann Biol Clin 59 6 693 700 2001 12 AGUILAR C MARTINEZ A MARTINEZ A DEL RIO C VASQUEZ M RODRIGUEZ F J Diagnostic value of D dimer in patients with a moderate pretest probability of deep venous thrombosis Br J Haematol 118 275 277 2002 13 BUCEK R A KOCA N REITER M HAUMER M ZONTSICH T MINAR E Algorithms for the diagnosis of deep vein thrombosis in patients with low clinical pretest probability Thromb Res 105 43 47 2002 14 COUTURAUD F KEARON C BATES S M GINSBERG J S Decrease in sensitivity of D dim
6. empo necesario y suficiente para que la descongelaci n sea completa 7 PREPARACI N Y CONSERVACI N DE LOS REACTIVOS e Preparaci n Dejar que los Reactivos 1 y 2 se estabilicen durante 15 minutos a temperatura ambiente 18 25 C Antes de utilizarlos homogenizarlos suavemente evitando que se formen burbujas Poner un STA mini Reducer nuevo REF 00797 y la c psula operculada e Conservaci n Conservados a 2 8 C en su embalaje original los reactivos son estables hasta la fecha de caducidad indicada en el estuche Una vez abiertos los Reactivos 1 y 2 con un STA mini Reducer y la c psula operculada son estables 15 d as en STA R STA Compact y STA Satellite 8 REACTIVOS Y MATERIALES AUXILIARES STA Owren Koller REF 00360 STA Liatest Control N P REF 00526 STA R STA Compact o STA Satellite e STA mini Reducer REF 00797 e Equipamiento habitual en los laboratorios de an lisis cl nicos Dl 9 PROCEDIMIENTO 9 1 Calibraci n Los reactivos est n precalibrados esta calibraci n previa es v lida para todos los estuches de un mismo lote Para introducir la curva de calibraci n en el aparato pasar el c digo de barras impreso en la hoja por delante del lector de c digos de barras del aparato Una vez realizada la dosificaci n del d mero D de dos controles uno normal STA Liatest Control N y otro anormal STA Liatest Control P la calibrac
7. er for acute venous thromboembolism after starting anticoagulant therapy BloodCoag Fibrinolysis 13 241 246 2002 15 SCHUTGENS R E G HAAS F J L M GERRITSEN W B M VAN DER HORST F NIEUWENHUIS H K BIESMA D H The usefulness of five D dimer assays in the exclusion of deep venous thrombosis J Thromb Haemostasis 1 976 981 2003 16 KULSTAD E B KULSTAD C E LOVELL E O A rapid quantitative turbimetric D dimer assay has high sensitivity for detection of pulmonary embolism in the ED American Journal of emergency medicine 22 2 111 114 2004 17 PALUD L LAURENT M GUERET P MEUNIER C GARIN E BENOIT P O BELLEGUIC C 2 2 BERNARD DU HAUT CILLY F ALMANGE C DAUBERT J C Int r t de l association du dosage des D dim res et de l valuation de la probabilit clinique dans une strat gie diagnostique non invasive de V embolie pulmonaire Arch Mal Coeur 97 2 93 99 2004 8 RATHBUN S W WHITSETT T L RASKOB G E Negative D dimer result to exclude recurrent deep venous thrombosis a management trial Ann Intern Med 141 11 839 846 2004 9 CLSI Document EP5 A2 Evaluation of precision performance of quantitative measurement methods approved guideline Second Edition 24 25 2004 0 CLSI Document EP17 A Protocols for determination of limits of detection and limits of quantitation approved guideline First Edition 24 34 2004 1 CLSI Document EP7
8. i n ser valida para todo el lote La curva de calibraci n se puede ver en la pantalla del instrumento con la ayuda del men Calibraci n ver el Manual del Operador 9 2 Plasmas a analizar Los plasmas a testar han de estar sin diluir Introducirlos en el instrumento ver el Manual del Operador del instrumento utilizado Seleccionar el los test s a efectuar en los plasma de pacientes 9 3 Controles Los controles son necesarios para verificar la exactitud y la reproducibilidad de los resultados Utilizar el kit STA Liatest Control N P Preparar estos controles y transferir la informaci n contenida en los c digos de barras impreso en su respectivo inserto al instrumento Estos controles se utilizan han de estar sin diluir 9 4 Dosificaci n Para la realizaci n de la dosificaci n seguir uno de los dos protocolos descritos en los Standardized Operating Procedures del instrumento El aparato lleva a cabo autom ticamente la dosificaci n del D mero D de los plasmas a probar a 540 nm a medida que se van introduciendo las muestras Si cualquiera de los resultados del paciente queda fuera del rango de trabajo de la dosificaci n el instrumento revalora autom ticamente la muestra empleando una diluci n apropiada siempre que esta opci n haya sido introducida en la configuraci n de la prueba ver el Manual del Operador 10 RESULTADOS El n
9. ivel de d mero D ug ml de las muestras analizadas aparece en tiempo real en la pantalla del aparato ver el Manual del Operador El resultado debe interpretarse en funci n del estado cl nico y biol gico del paciente Los niveles de d mero D se expresan en unidades equivalentes de fibrin geno FEU Por definici n una FEU es la cantidad de fibrin geno inicialmente presente que lleva al nivel observado de d mero D La cantidad actual de d mero D es aproximadamente la mitad de un FEU Por ejemplo un valor de 0 50 ug ml FEU es aproximadamente 0 25 ug ml d mero D actual Si el aparato se ala que los resultados obtenidos para los controles se sit an fuera del intervalo de valores indicado en la hoja incluida en el estuche es preciso asegurarse del buen funcionamiento de todo el sistema condiciones de ensayo reactivos plasmas en los que se efect a el test calibraci n etc Si es necesario repetir las muestras 11 LIMITACIONES e Es posible que se subestime el nivel de d mero D de los plasmas especialmente turbios el valor de la absorbancia a 540 nm del plasma diluido al 1 6 en STA Owren Koller debe ser inferior a 0 35 Las concentraciones de productos de degradaci n del fibrin geno Mayores de 15 ug ml pueden llevar a una sobre estimaci n de los niveles de d mero D e La presencia del factor reumatoide a concentraciones superiores a 50 Ul ml puede hacer que se sobrestime el nivel de d mero D Se ha demos
10. les se han desarrollado anticuerpos espec ficos que no reconocen el fibrin geno 3 La presencia de estos diversos productos de la degradaci n de la fibrina entre los cuales el dimero D es el producto terminal es probable que el sistema fibrinol tico esta en acci n como respuesta a la activaci n coagulatoria fibrin lisis es el mecanismo A A Plasmin geno Coagulaci n activo 9 je tPA Fiibrina Fibrina 000000 UK Fibrin geno 0 0 O 4 lt Plasmina d mero D O O Degradaci n del fibrin geno a d mero D e Aplicaciones Cl nicas Coagulaci n intravascular diseminada CID En la CID el sistema fibrinol tico es activado y consecuentemente aumenta el nivel de d mero D La dosificaci n del dimero D puede ayudar al diagn stico de CID 11 Trombosis Un nivel normal de D mero D es un elemento importante en el diagn stico de exclusi n de una trombosis venosa profunda o del tromboembolismo pulmonar 4 5 8 Sin embargo se recomienda efectuar la valoraci n del D mero D antes de iniciar cualquier tratamiento anticoagulante 14 Se ha reportado en diversos estudios que utilizan el STA Liatest D Di que con un valor umbral cut off de 0 50 ug ml FEU el valor predictivo negativo VPN de exclusi n de la trombosis var a entre 95 y 100 9 13 15 17 Resultados de dos estudios con TVP n mero total de pacientes estudiados 636 de los que 224 pacientes presentaron una TVP d
11. ocumentada por puntuaci n de probabilidad cl nica Sonograf a Doppler VPN 95 a 100 intervalo de confianza 95 Resultados de dos estudios con TEP n mero total de pacientes estudiados 590 de los cuales 233 pacientes presentaron un TEP documentada por puntuaci n de probabilidad cl nica escintigraf a y o angiograf a VPN 98 a 100 intervalo de confianza 95 En los estados tromb ticos tras suspender el tratamiento anticoagulante se puede observar un incremento de los niveles del d mero D Este aumento parece constituir un riesgo de reoclusi n especialmente en las trombosis idiop ticas As mismo ciertos autores consideran que hay que tener en cuenta la evoluci n de los niveles de d mero D en el seguimiento terap utico de dichos pacientes 10 Activaci n de estados de coagulaci n El nivel de d mero D aumenta durante la activaci n de estados la coagulaci n dado que dichos estados generan la producci n de trombina seguida por la formaci n de fibrina y llevan a la fibrin lisis siendo esta ltima con mayor frecuencia reactiva As el incremento de los niveles del d mero D se observa en las siguientes situaciones 11 periodos postoperatorios c ncer hemorragias patolog as infecciosas graves 3 PRINCIPIO DEL TEST Esta determinaci n se basa en el aumento de la turbidez de una suspensi n de micropart culas de l tex medida mediante fotometr a Cuando las microesferas de l tex sobre cuya su
12. perficie se han fijado por covalentemente anticuerpos espec ficos del dimero D se mezcla con el plasma cuyo nivel de d mero D se desea estudiar la reacci n ant geno anticuerpo que ocurre provoca la aglutinaci n de las microesferas Este fen meno conduce al aumento de la turbidez de la mezcla de reacci n y por lo tanto a un aumento de la absorbancia del medio La magnitud de este aumento es funci n de la cantidad del d mero D contenida en el plasma en estudio 4 COMPOSICI N DEL KIT Cada estuche de STA Liatest D Di contiene una hoja con c digo de barras Este c digo de barras contiene las siguientes informaciones n mero de lote referencia del kit referencia de los reactivos fecha de caducidad par metros para la calibraci n de la dosificaci n e Reactivo 1 vial de 5 ml de tamp n Tris e Reactivo 2 vial de 6 ml de suspensi n de micropart culas de l tex recubiertas con dos tipos de anticuerpos monoclonales de rat n anti d mero D humano 8D2 y 2 1 16 y posteriormente estabilizados con alb mina bovina Estos reactivos contienen azida s dica lt 1 g l como conservante Es preciso eliminar con precauci n los reactivos que contienen azida s dica Si estas soluciones se vierten en el desagile del lavabo enjuagar con abundante agua para evitar la formaci n de azidas met licas que si est n concentradas pueden provocar explosiones Algunos reactivos de este kit contienen productos de origen humano y o
13. raron por encima del l mite del rango de trabajo del ensayo de 4 ug ml e j gt 20 ug ml debido a la diluci n Especificidad La valoraci n STA Liatest D Di no es sensible al fibrin geno y al fragmento E Una actividad cruzada se observa con el fragmento D Sin embargo este no tiene efecto debido a que in vivo en condiciones fisiol gicas la presencia de a antiplasmina se opone a la producci n del fragmento D a partir del fibrin geno Precisi n Se desarrollaron estudios de precisi n seg n la gu a EP5 A2 de la CLS 19 20 d as 2 corridas por d a en el STA R Se obtuvieron los siguientes resultados Repetibilidad Precisi n intra laboratorio Muestra 1 Muestra 2 Muestra 1 Muestra 2 X ug ml 0 67 2 20 0 67 2 20 SD ug ml 0 042 0 049 0 049 0 085 Comparaci n de datos Un estudio de correlaci n en 53 plasmas en los cuales el nivel de dimero D estaba en el rango lt 0 27 3 09 ug ml FEU se ha llevado a cabo con los kits STA Liatest D Di y Asserachrom D Di este ltimo kit de referencia para exclusi n de trombosis Los resultados obtenidos son los siguientes r 0 98 pendiente 1 08 e intercepto 0 088 A D mero D 3 50 ug ml FEU 3 00 y 2 50 4 2 00 y 1 50 4 STA Liatest D Di 1 00 4 0 50 D mero D ug ml FEU r gt 0 00 y 0 00 0 50 1 00 1 550 200 250 3 00 3 50 Asserachrom D Di BIBLIOGRAF A 10 KE
14. trado que la hemoglobina la bilirrubina conjugada la bilirrubina non conjugada las heparinas no fraccionadas y las heparinas de bajo peso molecular no interfieren con la determinaci n si sus concentraciones son inferiores respectivamente a 2 g l 290 mg l 200 mg l 2 Ul ml y 2 UI anti Xa ml An lisis efectuados conforme a la gu a EP7 A2 de CLSI 21 e La presencia de anticuerpos anti alb mina bovina y o anti rat n en ciertos sujetos puede hacer que se sobrestime el nivel de d mero D 12 VALORES NORMALES Generalmente el valor plasm tico del d mero D en el adulto es inferior a 0 50 ug ml FEU 6 Con la edad y durante el embarazo se observa un aumento del valor de d mero D 6 7 11 13 CARACTER STICAS DEL M TODO Umbral de detecci n El l mite de detecci n se estableci seg n la gu a EP17 A de la CLSI 20 El l mite de detecci n en el STA R STA Compact y STA Satellite es de 0 27 ug ml FEU Intervalo de medici n El intervalo de medici n de este m todo esta entre 0 27 y 4 00 ug ml FEU Sin embargo en caso de uso del procedimiento con diluci n autom tica de la muestra el rango de ensayo corregido es en efecto hasta 20 ug ml FEU Si el procedimiento sin diluci n es usado el rango de ensayo es 0 27 a 4 00 ug ml Efecto Hook No se ha observado efecto Hook Los niveles de d mero D de todos los plasmas analizados conteniendo niveles de d mero D tan altos como 500 ug ml FEU se encont
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