3 Estado de susceptibilidad 21 11 con resumen
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1. 340 Biom dica 2012 32 333 43 socioculturales demogr ficas epidemiol gicas y entomol gicas para dengue con base en esta agregaci n geogr fica se establece el riesgo y se focalizan las estrategias de control Esta circunstancia determina las diferencias en la intensidad y el tiempo durante el cual las poblaciones evaluadas han estado presionadas por los insecticidas utilizados en los programas de control y por las mismas comunidades En estudios anteriores se ha asociado el incremento de las enzimas esterasas inespec ficas con resistencia fisiol gica a organosfostforados en diferentes especies de insectos incluido Ae aegypti 27 30 De manera particular a las esterasas a y f se les atribuye la p rdida de sensibilidad a temefos 31 33 No obstante se encontr que tres de las cuatro poblaciones de Ae aegypti correspondientes a Puerto L pez 1 Bucaramanga 17 y Villavicencio 7 que registraron susceptibilidad fisiol gica a este principio activo presentaron valores superiores al punto de corte para enzimas esterasas inespec ficas en tanto otras que mostraron resistencia fisiol gica a esta misma mol cula como Girardot 1 y 3 y La Mesa 2 registraron valores por debajo del punto de corte Lo anterior puede explicarse porque las pruebas bioqu micas se aplicaron en poblaciones de Ae aegyptide individuos adultos y no de larvas estadio usado para los bivensayos Algunos autores recomiendan aplicar las pruebas bioqu2. 0 008 0 003 38 0 009 0 003 34 0 008 0 003 39 0 007 0 003 50 0 010 0 003 29 0 010 0 003 31 0 427 0 013 3 1 0 385 0 036 9 4 0 256 0 013 5 0 0 434 0 035 8 2 0 569 0 013 2 3 0 508 0 035 7 0 0 484 0 014 2 8 0 523 0 037 7 1 0 570 0 013 2 3 0 507 0 035 7 0 0 419 0 014 3 4 0 650 0 060 9 2 X media DE desviaci n est ndar CV coeficiente de variaci n Dunnett 8 con un nivel de significancia de p 0 05 para acetilcolinesterasa modificada y CIP450 no se encontraron diferencias significativas Para las enzimas esterasas inespec ficas en cambio los municipios de Sabana de Torres 0 23 y Villavicencio 0 20 presentaron diferencias significativas entre valores de medias de densidad ptica con respecto a la cepa de referencia p 0 05 Discusi n Para el conjunto de las poblaciones colombianas del vector del dengue Ae aegypti evaluadas en este estudio se encontr susceptibilidad fisiol gica al carbamato propoxur y al organofosforado malati n Los resultados de susceptibilidad de las poblaciones de adultos de Ae aegypti al malati n obtenidos en este estudio coinciden con los estudios anteriores para esta especie en Cuba Venezuela Panam Per y Colombia 20 25 Este hallazgo reviste gran importancia teniendo en cuenta que la aplicaci n espacial de este insecticida es la medida m s utilizada en Colombia para interrumpir la transmisi n del dengue durante los brotes o epidemias De manera particular si se tiene
3. a las diferencias de selecci n de resistencia de las enzimas esterasas inespec ficas entre larvas y adultos Lo anterior se podr a corroborar aplicando pruebas bioqu micas o de sinergias sobre los estadios larvales de las poblaciones de Ae aegypti que revelaron disminuci n de la sensibilidad en este estudio Para las poblaciones de adultos pertenecientes a La Mesa 1 Villavicencio 5 y 7 Sabana de Torres 1 y 2 y Bucaramanga 17 evaluadas por los autores en otro estudio se encontr asociaci n entre las enzimas esterasas inespec ficas elevadas y la resistencia fisiol gica a lambdacialotrina 25 por lo que no se podr a descartar la posibilidad de encontrar resistencia cruzada entre piretroides y organofosforados ambos de amplio uso para el control del insecto en estas poblaciones En larvas de Ae aegypti de Cuba se observ resistencia a piretroides por presi n con malati n 35 y en Brasil se encontr una resistencia fisiol gica elevada de adultos a los piretroides y una baja resistencia al temefos 28 La resistencia cruzada a temefos con piretroides como deltametrina y cipermetrina y con el organofosforado malati n se comprob en condiciones controladas de laboratorio 32 En Colombia estos insecticidas son los autorizados para el control de dengue y de malaria y tambi n son de amplio uso en agricultura lo que conlleva a plantear la necesidad implementar esquemas de vigilancia estricta de rotaci n de insectici
4. cepa de referencia sensible como control positivo Para el larvicida temefos se observ resistencia en el 70 de las poblaciones evaluadas lo cual se explica porque este ha sido el insecticida de elecci n para el tratamiento focal de formas inmaduras del vector en reas end micas en Colombia A pesar de que en Colombia la resistencia de Ae aegypti al temefos se ha demostrado en diferentes estudios los registros de resistencia al malati n son escasos 7 9 Gonz lez J Rey G Olano V Brochero H Informe t cnico Ministerio de la Protecci n Social 2005 Convenio 043 p 60 Sin embargo en un estudio reciente en Brasil se demostr resistencia a los dos inseciticidas en el nordeste de este pa s lo cual se asoci con el uso de organofosforados en estado de larva y de adulto 26 Lo anterior indica que a pesar de los resultados de sensibilidad para la mayor a de poblaciones de Ae aegypti de Colombia evaluadas para el malati n se debe mantener la vigilancia de la resistencia a esta mol cula particularmente si se contin a con su uso en forma sistem tica Los resultados de las pruebas bioqu micas demostraron comportamientos diferenciales entre comunas pertenecientes a un mismo municipio Estas diferencias se explican por la heterogeneidad misma de las poblaciones evaluadas las cuales correspondieron a comunas diferentes de cada municipio Las comunas consisten en agrupaciones de barrios con caracter sticas similares
5. control positivo y la soluci n amortiguadora fosfato como control negativo Despu s de 10 minutos de incubaci n se agreg dianisidina Sigma compuesto que evidencia la formaci n de f naphtol Se ley la absorbancia utilizando el filtro de 570 nm Para determinar el incremento de las monooxige nasas del grupo citocromo P450 se utiliz per xido de hidr geno Microgen Chemicals como sustrato citocromo C Merck como control positivo soluci n amortiguadora fosfato como control negativo y 3 3 5 5 tetrametil bencidina TMBZ Sigma que evidencia la presencia de peroxidasas y per xido de hidrogeno por oxidaci n Se ley la absorbancia utilizando al tiempo 0 y 10 y el filtro de 630 nm La determinaci n de acetilcolinesterasa modificada consisti en utilizar una mezcla de acetilcolina Sigma m s propoxur Chem Service como sustrato acetilcolina iodada Sigma como control positivo soluci n amortiguadora fosfato como control negativo y DTNB 5 5 ditio bis 2 cido nitrobenzoico Sigma compuesto que reacciona con la tiocolina la cual es producto de la hidr lisis de la acetilcolina efectuada por la enzima colinesterasa Se ley la absorbancia al tiempo 0 y 10 utilizando el filtro de 410 nm En el caso particular de la CIP450 y la acetil colinesterasa modificada se rest el valor de Sensibilidad de vectores naturales del dengue en Colombia absorbancia del tiempo 0 al valor de absorbancia del tiempo 10 para
6. d as de emergidas con el prop sito de estandarizar la edad fisiol gica y utilizarlas para la evaluaci n de los posibles mecanismos de desintoxicaci n enzim tica asociados con resistencia A partir de las hembras F1 restantes y los machos de esta generaci n se obtuvo la cantidad suficiente de hembras F2 de tres a seis d as de nacidas utilizadas en los bioensayos Cuadro 1 Origen geogr fico a partir del cual se obtuvieron las poblaciones naturales de Aedes aegypti evaluadas Departamento Municipio Coordenadas Altitud msnm Comunas evaluadas Caquet Florencia 01 36 59 N 242 Florencia 75 36 00 W Cundinamarca Girardot 04 18117 N 289 Girardot 1 74 4803 W Girardot 2 La Mesa 04 38 09 N 1300 La Mesa 1 74 2759 W La Mesa 2 Guaviare San Jos del Guaviare 02 34 37 N 200 San Jos del Guaviare 72 38457 W Meta Villavicencio 040912 N 457 Villavicencio 7 73 3806 W Villavicencio 5 Puerto L pez 04 05 06 N 184 Puerto L pez 1 72 5719 W Puerto L pez 2 Santander Bucaramanga 0707 47 N 960 Bucaramanga 17 73 0733 W Sabana de Torres 07 23 53 N 234 Sabana de Torres 1 73 29 49 W Sabana de Torres 2 335 Santacoloma L Chaves B Brochero HL Determinaci n de la susceptibilidad en larvas Para la determinaci n de la susceptibilidad al larvicida organofosforado temefos se utiliz insecticida de grado t cnico 99 adquirido en Chem Service West Chester PA USA Se aplic la
7. metodolog a de la OMS 12 evaluando la dosis diagn stica obtenida por el PECET en el marco del proyecto nacional de resistencia a insecticidas la cual correspondi a 0 012 ppm 13 Cada prueba consisti de cuatro r plicas y un control Cada r plica as como los controles consisti en un vaso de vidrio provisto con 99 ml de agua sin cloro A cada uno de los vasos con los tratamientos se les agreg 1 ml de temefos a una concentraci n de 1 2 ppm para obtener una concentraci n final de 0 012 ppm A los vasos control se les agreg 1 ml de etanol absoluto libre de insecticida Se evaluaron 25 larvas entre el tercer estadio tard o y el cuarto temprano por r plica para un total de 100 larvas por prueba Se hicieron tres pruebas por poblaci n del insecto evaluado La lectura de mortalidad se hizo a las 24 horas Se consideraron larvas muertas aquellas con 1 ausencia de respuesta al ser estimuladas dorsalmente con una micropinza 2 incapacidad de ascender a la superficie y de llegar al fondo del vaso y 3 con presencia de necrosis de la epidermis 12 Determinaci n de la susceptibilidad en mosquitos adultos Para las evaluaciones de sensibilidad de las hembras adultas se utilizaron dos metodolog as estandarizadas correspondientes a papeles im pregnados de la OMS 1981 14 y botellas impregnadas de los Centers for Disease Control and Pravention CDC 1998 15 Tanto para la metodolog a de la OMS como la de los CDC s
8. 213 680 Susceptibility of natural populations of dengue vector to insecticides in Colombia Introduction Physiological resistance of natural population of Aedes aegyptito insecticides contribute to the decreased efficacy of chemical control as a main control strategy during dengue outbreaks Objective The susceptibility status of Ae aegypti was assessed for the carbamate propoxur the adulticide malathion and the larvicide temephos on 13 natural populations of Ae aegypti immature forms were taken from 8 Colombian localities These included the following Bucaramanga 1 Sabana de Torres 2 Girardot 2 La Mesa 2 Villavicencio 2 Puerto L pez 2 San Jos del Guaviare 1 and Florencia 1 Materials and methods Susceptibility tests mainly consisted of the standardized bioassay outlined by WHO 1981 and CDC bottles 1998 Colorimetric tests were undertaken to determine enzyme levels possibly responsible for the reduction of susceptibility to organophosphate and carbamate insecticides Contribuci n de los autores Liliana Santacoloma formulaci n del proyecto de investigaci n realizaci n del trabajo y redacci n del art culo Bernardo Chaves asesor a en el an lisis estad stico de los datos y sugerencias al art culo Helena Brochero direcci n del proyecto de investigaci n y correcci n del art culo 333 Santacoloma L Chaves B Brochero HL Biom dica 2012 32 333 43 Results All specimens demonstrated suscepti
9. 9 5 100 0 0 54 n 300 n 100 n 100 n 100 n 100 n 112 n 160 3 8 La Mesa 1 100 0 0 100 0 0 14 8 4 100 0 0 56 15 7 100 0 0 23 n 100 n 100 n 100 n 181 n 100 n 191 n 240 9 5 La Mesa 2 100 0 0 85 6 9 96 25 2 100 0 0 56 4 8 100 0 0 1 2 n 124 n 100 n 100 n 120 n 158 n 100 n 240 2 2 Caquet Florencia 98 4 0 100 0 0 100 0 0 100 0 0 57 18 0 100 0 0 n 117 n 159 n 293 n 120 n 100 n 100 Guaviare San Jos 98 3 7 100 0 0 95 4 9 100 0 0 1 t17 95 15 0 40 n 119 n 181 n 100 n 185 n 100 n 101 n 200 4 0 Meta Villavicencio 5 99 2 2 100 0 0 95 5 4 100 0 0 3 15 7 100 0 0 67 n 100 n 100 n 100 n 100 n 100 n 100 n 240 1 6 Villavicencio 7 100 0 0 100 0 0 90 4 5 100 0 0 4 3 4 100 0 0 84 n 100 n 100 n 100 n 100 n 100 n 100 n 240 1 2 Santander Puerto L pez 1 97 4 8 100 0 0 30 3 4 100 0 0 17 15 0 100 0 0 92 n 179 n 264 n 179 n 264 n 160 n 220 n 240 3 4 Puerto L pez 2 100 0 0 100 0 0 20 15 2 100 0 0 0 18 0 100 0 0 98 n 227 n 160 n 227 n 160 n 236 n 233 n 240 3 4 Bucaramanga 17 100 0 0 100 0 0 100 0 0 100 0 0 8 8 5 100 0 0 91 n 100 n 98 n 100 n 100 n 100 n 100 n 160 6 5 Sabana de 83 8 4 100 0 0 91 9 5 100 0 0 46 10 99 0 0 36 Torres 1 n 100 n 100 n 175 n 170 n 100 n 100 n 240 3 0 Sabana de 100 0 0 95 8 2 20 2 0 100 0 0 47 3 0 100 0 0 56 Torres 2 n 100 n 100 n 264 n 371 n 100 n 100 n 240 2 9 bioensayos no realizados n cantidad de individuos evaluados OMS metodolog a propuesta por la Organiza
10. Biom dica 2012 32 333 43 doi http dx doi org 10 7705 biomedica v32i3 680 ART CULO ORIGINAL Estado de la susceptibilidad de poblaciones naturales del vector del dengue a insecticidas en trece localidades de Colombia Liliana Santacoloma Bernardo Chaves Helena Luisa Brochero 1 Laboratorio de Entomolog a Subdirecci n Red Nacional de Laboratorios Instituto Nacional de Salud Bogot D C Colombia 2 Facultad de Agronom a Universidad Nacional de Colombia Bogot D C Colombia Instituci n en la que se llev a cabo el trabajo Laboratorio de Entomolog a Instituto Nacional de Salud Bogot D C Colombia Introducci n La resistencia fisiol gica de las poblaciones naturales de Aedes aegypti a los insecticidas de uso en salud p blica disminuye la eficacia del control qu mico utilizado para interrumpir la transmisi n de dengue durante los brotes y epidemias Objetivo Determinar el estado de la susceptibilidad al carbamato propoxur a los organofosforados adulticidas malati n y fenitroti n y al larvicida temefos de 13 poblaciones naturales de Ae aegypti en ocho municipios una de Bucaramanga y dos de Sabana de Torres en el departamento de Santander dos de Girardot y dos de La Mesa en Cundinamarca dos de Villavicencio y dos de Puerto L pez en el Meta una de San Jos del Guaviare en Guaviare y una de Florencia en Caquet Materiales y m todos Las pruebas de susceptibilidad consistieron en bioensayos estandarizad
11. al Instituto Nacional de Salud por el apoyo institucional y la colaboraci n del personal t cnico y profesional en este trabajo Conflicto de intereses Los autores declaramos que no existen conflictos de intereses en la realizaci n y difusi n de este trabajo Financiaci n Este trabajo fue financiado por el Instituto Colombiano para el Desarrollo de la Ciencia y la Tecnolog a Francisco Jos de Caldas Colciencias c digo 219 2004 y el Instituto Nacional de Salud Referencias 1 Guzm n M Garc a G Kour G El dengue y el dengue hemorr gico prioridades de investigaci n Rev Panam Salud P blica 2006 19 204 15 http dx doi org 10 1590 S1020 49892006000300015 2 C ceres Manrique FM Vesga G mez C Perea Florez X Ruitort M Talbot Y Conocimientos actitudes y pr cticas sobre dengue en dos barrios de Bucaramanga Colombia Rev Salud P blica 2009 11 27 38 http dx doi org 10 1590 S0124 00642009000100004 3 World Health Organization WHO Special Programme for Research and Training in Tropical Diseases TDR Dengue guidelines for diagnosis treatment prevention and control Geneva WHO 2009 4 Instituto Nacional de Salud Subdirecci n de Vigilancia y Control en Salud P blica Bolet n epidemiol gico n mero 52 Bogot D C Instituto Nacional de Salud 2010 p 11 342 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Biom dica 2012 32 333 43 Wenceslao P Pedro
12. anizaci n Mundial de la Salud 1981 6 p Fonseca Gonz lez I Estatus de la resistencia a insecticidas de los vectores primarios de malaria y dengue en Antioquia Choc Norte de Santander y Putumayo Colombia tesis Medell n Universidad de Antioquia 2008 p 183 Organizaci n Mundial de la Salud Instructions for determining the susceptibility or resistance of adult mosquitoes to organoclorine organophosphorus and carbamate insecticides Establishment of the base line WHO VBC 81 805 Geneva Organizaci n Mundial de la Salud 1981 p 8 Brogdon W Mcallister J Simplification of adult mosquito bioassays through use of time mortality determinations in glass bottles J Am Mosq Control Assoc 1998 14 159 64 Ciba Geygi C mo realizar un bioensayo Manual de ensayos de campo Bogot Ciba Geygi 1973 p 215 Brogdon W Mosquito protein microssay Protein determinations from small portions of single mosquito homogenates Comp Biochem Physiol B 1984 79 457 9 Brogdon W Microassay of acetylcholinesterase activity in small portions of single mosquito homogenates Comp Biochem Physiol B 1984 96 339 42 Brogdon W McAllister J Vulule J Heme peroxidase activity measured in single mosquitoes identifies individuals expressing and elevated oxidases for insecticide resistance J Am Mosq Control Assoc 1997 13 233 7 Rodr guez MM Bisset JA Molina D Soca L Malathion resistance in Aedes aegypti and Culex quinquefasciatus aft
13. bility to malathion and propoxur insecticides Four of the 13 populations revealed susceptibility to the temephos larvicide Seven of 11 populations showed a limited increase in values for nonspecific esterase enzymes The Bucaramanga population was the only one which showed an increase in the cytochrome P450 monooxygenases enzymes Neither population was found with modified acetilcolinesterase Conclusions The widespread susceptibility to organophosphates used as adulticides indicated that malathion the most used insecticide in Colombia remains effective in interrupting the transmission of dengue Physiological resistance to insecticides occurring in communities of a single township proved to be a localized phenomenon Key words Vector control Aedes dengue insecticide resistance insecticides organophosphate carbamates doi http dx doi org 10 7705 biomedica v32i3 680 El dengue y su forma grave constituyen la enfermedad viral de transmisi n vectorial m s importante en los pa ses tropicales y subtropicales 1 En Am rica y en Colombia el n mero de casos graves y muertes por dengue ha aumentado en los ltimos a os 2 Durante 2001 a 2007 murieron 222 personas en Colombia a causa del dengue lo que represent el 75 de la mortalidad ocasionada por esta enfermedad para el conjunto de los pa ses andinos 3 y solo en el 2010 durante la epidemia de dengue m s grave que ha experimentado el pa s el n mero de muerte
14. cada una de las muestras Para determinar el incremento en el nivel de enzimas esterasas inespec ficas y CIP450 y el n mero de individuos con acetilcolinesterasa modificada se establecieron puntos de corte con la cepa de referencia Rockefeller de Ae aegypti 18 Los promedios de las densidades pticas de las poblaciones de campo iguales o inferiores a este valor se consideraron como normales y los valores superiores como incrementos en el nivel de las enzimas esterasas inespec ficas y CIP450 o presencia de acetilcolinesterasa modificada Para el an lisis estad stico de los datos se aplicaron las pruebas de 1 Shapiro Wilk intervalo de confianza IC para determinar la normalidad 2 an lisis de varianza 1C para comparar las densidades pticas entre poblaciones 3 la prueba de comparaci n m ltiple de Dunnett IC para comparar las densidades pticas entre poblaciones y Rockefeller 18 Los promedios de mortalidad para los resultados de las pruebas biol gicas as como el an lisis de resultados de las pruebas bioqu micas se obtuvieron con el programa estad stico SAS versi n 9 1 SAS Institute Cary NC USA Resultados Determinaci n de la susceptibilidad En el cuadro 2 se registra el promedio aritm tico de los porcentajes de mortalidad de Ae aegypti de 13 comunas correspondientes a cinco departamentos del centro oriente colombiano evaluadas para los insecticidas malati n fenitroti n pro
15. ci n Mundial de la Salud 1981 CDC metodolog a propuesta por los Centers for Disease Control and Prevention CDC Atlanta 1998 demostrativos de resistencia Para el larvicida temefos solo 4 12 poblaciones correspondientes a Puerto L pez 1 y 2 Bucaramanga 17 y Villavicencio 7 registraron valores de susceptibilidad Mecanismos enzim ticos de resistencia En el cuadro 3 se presentan los valores de las densidades pticas obtenidos para las tres enzimas evaluadas Para la acetilcolinesterasa modificada ninguna de las poblaciones present valores superiores al punto de corte de 0 02 Para las enzimas esterasas inespec ficas 7 11 poblaciones registraron valores de la media de densidad ptica superiores al punto de corte de 0 408 Sabana de Torres 1 con 0 54 registr el valor m s alto representando el 85 51 60 de los individuos evaluados y Villavicencio 5 con 0 58 representando el 81 49 60 de los individuos evaluados Para el complejo enzim tico de oxidasas de funci n mixta 338 CIP450 monooxigenasas el valor de densidad ptica que represent el punto de corte fue de 0 67 La poblaci n de Ae aegypti de Bucaramanga 17 registr el 43 26 60 de los individuos con valores superiores al punto de corte Una vez comprobada la normalidad de los datos los an lisis de varianza ANOVA correspondientes a los valores de las densidades pticas de las pruebas colorim tricas mostraron que en general todas las enzi
16. das y reas con disminuci n en la presi n de selecci n con estas mol culas Teniendo en cuenta esto se debe considerar que la supresi n de la presi n con insecticidas puede revertir la resistencia lo cual se ha corroborado en condiciones controladas de laboratorio 32 La ausencia de individuos con acetilcolinesterasa modificada en las poblaciones de Ae aegypti evaluadas en este estudio concuerda con estudios en los cuales no se ha encontrado este mecanismo asociado con resistencia a organofosforados en esta especie 32 33 Sin embargo se requiere hacer pruebas bioqu micas para determinar los niveles de acetilcolinesterasa modificada en las poblaciones de larvas con el prop sito de conocer Sensibilidad de vectores naturales del dengue en Colombia la responsabilidad de este mecanismo en la resistencia al temefos en poblaciones de Colombia Para Bucaramanga 17 la asociaci n entre los resultados de las pruebas biol gicas y bioqu micas no es muy clara Esta poblaci n revel susceptibilidad a todos los insecticidas evaluados Sin embargo tambi n mostr incre mentos significativos en las enzimas CIP450 monooxigenasas enzimas esterasas inespec ficas y la presencia de una proporci n de individuos con acetilcolinesterasa modificada modificada En este sentido se puede interpretar que esta poblaci n puede potencialmente desarrollar resistencia a insecticidas de cualquier grupo qu mico aspecto relevante si se tiene e
17. e hicieron tres pruebas por cada insecticida Cada prueba estuvo conformada por cuatro r plicas del tratamiento y un control Una r plica consisti en un tubo OMS o botella CDC dentro del cual se colocaron entre 20 y 25 hembras del mosquito F2 entre tres y seis d as de nacidas y alimentadas con agua azucarada al 10 En los bioensayos OMS se utilizaron papeles impregnados a una concentraci n de 0 1 para propoxur de 5 0 para malati n y de 1 0 para fenitroti n Los controles consistieron en papeles impregnados con aceite de oliva solvente utilizado para estos principios activos Los papeles impregnados y los controles para los bivensayos OMS fueron adquiridos en Malasia de acuerdo con las recomendaciones de la Organizaci n 336 Biom dica 2012 32 333 43 Mundial de la Salud 14 El criterio de mortalidad consisti en la evaluaci n de individuos evidente mente muertos a las 24 horas despu s de la exposici n 14 Los bioensayos CDC requirieron de la determinaci n previa de los tiempos y dosis diagn sticas para cada mol cula insecticida evaluada los cuales se obtuvieron con la cepa de referencia Rockefeller por el PECET de la Universidad de Antioquia 13 Las dosis diagn sticas utilizadas en los bivensayos CDC correspondieron a 12 5 ug ml por 30 minutos para el carbamato propoxur a 100 ug ml por 30 minutos para malati n y a 75 ug ml por 45 minutos para fenitroti n 13 Las botellas control se impregnar
18. enitroti n temefos lambdacialotrina deltametrina permetrina propoxur y DDT 2003 Biom dica 2003 23 Supl 1 35 6 Teniendo en cuenta la necesidad de contar con una l nea base de susceptibilidad de Ae aegypti a los insecticidas de uso en salud p blica y establecer un programa de vigilancia de la resistencia a Biom dica 2012 32 333 43 insecticidas que aporte informaci n para la toma de decisiones relacionadas con las medidas de control durante el 2005 al 2007 se llev a cabo el proyecto Evaluaci n del estado actual de la resistencia a insecticidas en los principales vectores de malaria dengue y fiebre amarilla urbana en Colombia e iniciaci n de la Red Nacional de Vigilancia de la Resistencia a Insecticidas en Colombia En este proyecto participaron el Centro de Entrenamiento e Investigaciones M dicas CIDEIM el Programa de Estudio y Control de Enfermedades Tropicales de la Universidad de Antioquia PECET el Instituto Nacional de Salud y la Universidad Nacional de Colombia con el apoyo de las secretar as departamentales de salud y la financiaci n de Colciencias Los resultados que aqu se presentan hacen parte de una serie de estudios del Instituto Nacional de Salud en trece localidades seleccionadas en el marco de dicho proyecto Materiales y m todos Sitios de estudio En cada uno de los cinco departamentos de Colombia incluidos en el estudio se seleccionaron uno o dos municipios con mayor incidenc
19. er its use in Aedes aegypti control programs J Am Mosq Control Assoc 2000 16 324 30 Biom dica 2012 32 333 43 21 22 23 24 25 26 27 28 29 Molina D Bisset J Rodr guez M Gonz lez J Salas O Barazarte H et al Estudio de la susceptibilidad a insecticidas organofosforados y piretroides en cepas de Aedes aegypti Linn de cinco estados de Venezuela Bol Dir Malariol y San Amb 1995 35 85 95 Bisset J Rodr guez M C ceres L Niveles de resistencia y sus mecanismos en 2 cepas de Aedes aegypti de Panam Rev Cubana Med Trop 2003 55 191 5 Valderrama E Gonz lez O Jaramillo G Evaluaci n de la susceptibilidad de Aedes aegypti L Diptera Culicidae a un insecticida organofostorado y un piretroide en cuatro poblaciones del Valle del Cauca mediante dos tipos de bioensayos Bolet n del Museo de Entomolog a de la Universidad del Valle 2008 9 1 11 Bisset J Rodr guez M De Armas Y Comparaci n de dos poblaciones de mosquitos Aedes aegypti de Santiago de Cuba con diferente conducta de reposo Rev Cubana Med Trop 2005 57 143 50 Santacoloma L Chaves B Brochero HL Susceptibilidad de Aedes aegypti a DDT deltametrina y lambdacialotrina en Colombia Rev Panam Salud P blica 2010 27 66 73 http dx doi org 10 1590 51020 49892010000100010 Macoris M Andrighetti M Garbeloto C Carvalho L Junior A Brogdon W Association of insecticide use and alteration on Aedes aegypti susceptibility
20. ia de dengue En cada municipio se escogieron dos localidades o comunas de acuerdo con historia de ndices de Breteau superiores a 5 y el registro sistem tico de intervenciones qu micas para el control de casos de dengue De cada comuna seleccionada que consisti en una agrupaci n Sensibilidad de vectores naturales del dengue en Colombia de barrios con caracter sticas socio demogr ficas similares se recolectaron las 13 poblaciones naturales de Ae aegypti evaluadas En el cuadro 1 se registran los sitios de estudio Material biol gico En cada comuna se recolectaron larvas de Ae aegypti siguiendo la metodolog a estandarizada por la Organizaci n Panamericana de la Salud OPS para el levantamiento de ndices de infestaci n a dica 11 El material de campo se llev al laboratorio y se mantuvo en condiciones controladas con una temperatura de 24 4 C 70 de humedad y un fotoperiodo de 12 12 horas Las larvas se dispusieron en bandejas pl sticas de 30 x 30 cm con agua sin cloro y se alimentaron diariamente con Rodentina0 pulverizada para obtener adultos los cuales se alimentaron con soluci n azucarada al 10 para facilitar la postura de huevos las hembras se alimentaron cada tercer d a con sangre de rat n de la especie Mus muscullus siguiendo los protocolos de manejo de vertebrados del Instituto Nacional de Salud Una fracci n de hembras F1 aproximadamente 200 individuos se almacenaron a 70 C a los dos
21. mas presentaron diferencias significativas entre municipios acetilcolinesterasa modificada p 0 0009 CIP450 p lt 0 0001 enzimas esterasas inespec ficas p lt 0 0001 y entre comunas acetilcolinesterasa modificada p 0 0262 CIP450 p lt 0 0001 enzimas esterasas inespec ficas p lt 0 0001 Sin embargo al comparar cada municipio con relaci n a la cepa de referencia Rockefeller mediante la prueba de rango m ltiple de Biom dica 2012 32 333 43 Sensibilidad de vectores naturales del dengue en Colombia Cuadro 3 Puntos de corte valores promedio de densidades pticas desviaci n est ndar y coeficiente de variaci n para actividad enzim tica de acetil colinesterasa modificada ACEM esterasas inespec ficas ENE y oxidasasde funci n mixta CIP450 evaluadas para 11 poblaciones naturales de Aedes aegypti y la cepa de referencia Rockefeller Colombia 2006 2007 Enzimas evaluadas ACEM ENE CIP450 Puntos de corte 0 02 0 40 0 67 Poblaci n X DE CV X DE CV X DE CV Rockefeller 0 011 0 004 41 0 298 0 019 6 4 0 423 0 052 12 3 Bucaramanga 17 0 015 0 003 20 0 450 0 013 2 9 0 709 0 035 5 0 Girardot 1 0 025 0 003 15 0 194 0 015 7 9 0 567 0 042 7 5 Girardot 3 0 005 0 004 83 0 292 0 019 6 4 0 268 0 051 19 0 La Mesa 1 0 014 0 003 22 0 455 0 013 2 9 0 308 0 046 15 1 La Mesa 2 0 003 0 004 13 0 220 0 016 7 3 0 364 0 045 12 4 Puerto L pez 1 Puerto L pez 2 Sabana de Torres 1 Sabana de Torres 2 Villavicencio 5 Villavicencio 7
22. mb 2008 01 004 343
23. micas sobre el estado de desarrollo que se pretende controlar debido a que los mecanismos de resistencia no necesariamente se encuentran en todos los estadios de desarrollo del insecto 34 Estas diferencias relacionadas con el estado de desarrollo se han confirmado en otros estudios En Brasil se encontraron diferencias en la expresi n del nivel de las enzimas CIP450 monooxigenasas relacionadas con el estado de desarrollo 28 y en Cuba un estudio en el cual se evalu la resistencia a malati n en larvas y adultos revel diferencias en la susceptibilidad para los dos estadios de desarrollo 35 Evidentemente la expresi n gen tica de la especie se desarrolla en concordancia con el nicho que ocupa por lo cual la desintoxicaci n de xenobi ticos est determinada por la fisiolog a del estado de desarrollo en el cual se encuentre el insecto y de manera particular para las enzimas esterasas inespec ficas asociadas con procesos naturales de desintoxicaci n las cuales tambi n incrementan su expresi n con la longevidad de los individuos Biom dica 2012 32 333 43 En este sentido a pesar de la imposibilidad de establecer una asociaci n directa entre los resultados de resistencia a temefos encontrados con pruebas biol gicas y los resultados de las pruebas bioqu micas no se puede descartar que las enzimas esterasas inespec ficas constituyan el mecanismo bioqu mico responsable de la resistencia a este insecticida debido
24. n cuenta que este municipio aporta la mayor carga de casos de dengue cl sico y dengue grave para el departamento de Santander y por ende las poblaciones naturales del mosquito vector son fuerte y frecuentemente presionadas con insecticidas qu micos Es urgente entonces ampliar los estudios de susceptibilidad a otras localidades urbanas de Bucaramanga y de los municipios cercanos a su rea de influencia Las diferencias en el nivel de enzimas obedecen a diferencias locales en cuanto a la presi n de selecci n a partir del control qu mico implementado para el control del dengue y a la variabilidad gen tica propia de cada poblaci n La resistencia fisiol gica a insecticidas constituye un fen meno localizado de manera espec fica en espacio y tiempo y por consiguiente las particularidades que presentaron algunas de las poblaciones de Ae aegypti evaluadas en este estudio deben tenerse en cuenta para el establecimiento de un programa de vigilancia y prevenci n de la resistencia Ante la posibilidad de que exista resistencia cruzada a lambdacialotrina causada por presi n de selecci n por uso continuo de temefos se sugiere mantener vigilancia sistem tica de la resistencia a estas mol culas y disminuir la presi n de selecci n con estos insecticidas en el pa s mediante el fortalecimiento de otras medidas de control del vector como la destrucci n de criaderos el control f sico el uso insecticidas biol gicos la rotaci n co
25. n en cuenta los hallazgos de p rdida de susceptibilidad al piretroide lambdacialotrina para las mismas poblaciones incluidas en este estudio 25 este organofosforado contin a siendo de elecci n Los resultados obtenidos para el insecticida fenitroti n revelaron susceptibilidad en la mayor a de las poblaciones evaluadas 9 13 con bioensayos OMS y CDC Las cuatro poblaciones restantes mostraron porcentajes de mortalidad con OMS entre 14 y 30 y por lo tanto indicativos de resistencia en contraste con los resultados de 100 de mortalidad utilizando la metodolog a CDC En un estudio con Ae aegypti en el Valle del Cauca tambi n se hab an encontrado incongruencias para estas dos metodolog as cuando se evalu el insecticida malati n lo cual se asoci con problemas de calidad en los papeles impregnados OMS 24 Es de aclarar que aunque ambas pruebas expresan los resultados en porcentajes de mortalidad responden a interrogantes distintos En general los bioensayos CDC miden el tiempo que tarda el principio activo a una dosis espec fica en llegar al sitio blanco de acci n entre m s tiempo tarde la mol cula en actuar en el insecto se entiende que se puede estar desarrollando un mecanismo fisiol gico de desintoxicaci n en ste 16 En este contexto la dosis evaluada se expresa en microgramos por mililitro que para el caso de fenitroti n en este estudio correspondi a 75 ug ml por 45 minutos En los bivensayo
26. n otras mol culas qu micas y particularmente mediante la implementaci n de estrategias de acci n participaci n de la comunidad que ha mostrado resultados favorables en varios pa ses 36 En este mismo contexto debe incorporarse a la vigilancia nacional de la resistencia a insecticidas la evaluaci n de enzimas glutati n S transferasa las cuales se han asociado como mecanismo de desintoxicaci n del DDT 37 y recientemente 341 Santacoloma L Chaves B Brochero HL como mecanismo de resistencia fisiol gica al temefos 32 Colombia ha descentralizado las actividades de control de la transmisi n del dengue las cuales han sido asumidas por las autoridades municipales de salud Se sabe que la exposici n a dosis subletales de insecticidas qu micos induce la expresi n de sistemas de desintoxicaci n fisiol gica en las poblaciones naturales de insectos 38 por lo que se requiere tambi n establecer procesos de capacitaci n regular para los procesos de aplicaci n de insecticidas tales como dosis tama o de gota y hora de aplicaci n entre otros Evidentemente los hallazgos de resistencia fisiol gica deben complementarse con estudios sobre la gen tica de las poblaciones naturales del mosquito y la susceptibilidad que presenten a la infecci n por arbovirus de tipo dengue Agradecimientos Los autores expresan los agradecimientos a las secretar as de salud de Caquet Cundinamarca Guaviare Santander y Meta y
27. ni E An lisis costo beneficio del control de vectores en la transmisi n potencial de dengue Rev Panam Salud P blica 2008 24 113 9 http dx doi org 10 1590 51020 49892008000800005 Mancheno M Kroeger A lvarez G Manual t cnico para el control de malaria dengue leishmaniosis y oncocercosis Bogot D C Servi Offset Ltda 1998 p 264 Ocampo C Salazar M Mina N McAllister J Brogdonc W Insecticide resistance status of Aedes aegypti in 10 localities in Colombia ActaTrop 2011 2611 1 8 http dx doi org 10 1016 j actatropica 2011 01 007 Busvine J Coker W Resistance patterns in DDT resistant Aedes aegypti Bull World Health Organ 1958 18 651 6 Maestre R Rey G De las Salas J Vergara C Santacoloma L Goenaga S et al Susceptibilidad de Aedes aegypti Diptera Culicidae a temefos en Atl ntico Colombia Revista Colombiana de Entomolog a 2009 35 202 5 Mazzari M Revisi n del estado actual de la resistencia en Aedes aegypti a insecticidas utilizados en salud p blica Bolet n de la Direcci n de Malariolog a y Saneamiento Ambiental 2005 35 90 5 Organizaci n Panamericana de la Salud OPS Dengue y dengue hemorr gico en las Am ricas gu as para su prevenci n y control Washington D C Organizaci n Panamericana de la Salud 1995 p 108 Organizaci n Mundial de la Salud Instructions for determining the susceptibility or resistance of mosquitoes larvae to insecticide WHO VBC 81 807 Geneva Org
28. on con etanol absoluto El criterio de mortalidad consisti en mosquitos evidentemente muertos o con s ntomas de intoxicaci n como incapacidad de volar o posarse despu s de caer sobre el dorso 15 Los insecticidas de grado t cnico propoxur 99 malati n 98 y fenitroti n 99 5 utilizados tanto en la obtenci n de la dosis diagn stica como en las pruebas de sensibilidad se adquirieron en Chem Service West Chester PA USA Todos los bioensayos se llevaron a cabo a una temperatura ambiental de 18 a 20 C y una humedad relativa de 65 a 68 An lisis de resultados Tanto para los bioensayos OMS en adultos y larvas como en los bioensayos CDC con adultos se obtuvieron los promedios de las mortalidades expresadas en porcentajes de las tres pruebas por insecticida Cuando en una r plica control de una prueba se presentaron mortalidades inferiores a 20 los resultados de la mortalidad total se corrigieron utilizando la f rmula de Schneider y Orelli 16 Los bivensayos que presentaron mortalidad superior a este porcentaje se descartaron y la prueba se repiti Para los resultados con la metodolog a CDC 1998 la supervivencia al tiempo diagn stico se consider como p rdida de sensibilidad al insecticida evaluado En el caso de la metodolog a OMS 1981 las poblaciones con m s de 98 de mortalidad se consideraron susceptibles aquellas con menos de 80 resistentes y en aquellas con 80 a 98 se considera
29. os Mechanisms evolution and reversion in an Aedes aegypti laboratory strain from Brazil Acta Trop 2009 113 180 9 http dx doi org 10 1016 actatropica 2009 10 015 Rodr guez M Bisset J Fern ndez D P rez O Resistencia a insecticidas en larvas y adultos de Aedes aegypti prevalencia de la esterasa A4 asociada con la resistencia a temefos Rev Cubana Med Trop 2004 56 54 60 Symondson W Hemingway J Biochemical and molecular techniques En Dent DR Walton MP editors Methods in ecological and agricultural entomology New York Cab International 1997 p 293 350 Rodr guez M Bisset J Mila L Calvo E D az C Soca L Niveles de resistencia a insecticidas y sus mecanismos en una cepa de Aedes aegypti de Santiago de Cuba Rev Cubana Med Trop 1999 51 83 8 World Health Organization Prevention and control of dengue and dengue haemorrhagic fever Comprehensive guidelines New Delhi SEARO WHO Regional Publications 1999 p 134 Hemingway J Hawkes NJ McCarroll L Ranson H The molecular basis of insecticide resistance in mosquitoes Insect Biochem Mol Biol 2004 34 653 6 http dx doi org 10 1016 i0mb 2004 03 018 Poupardin R Reynaud S Strode C Ranson H Vontas J David JP Cross induction of detoxification genes by environmental xenobiotics and insecticides in the mosquito Aedes aegypti Impact on larval tolerance to chemical insecticides Insect Biochem Mol Biol 2008 38 540 51 http dx doi org 10 1016 j i1o
30. os de la Organizaci n Mundial de la Salud OMS 1981 y botellas de los Centers for Disease Control and Prevention CDC 1998 Se aplicaron pruebas colorim tricas para determinar los niveles de enzimas como posibles responsables de la reducci n de la susceptibilidad a insecticidas organofostforados y al carbamato propoxur Resultados Todas las poblaciones presentaron susceptibilidad a malati n y propoxur Para el temeftos solo cuatro de las trece localidades evaluadas registraron susceptibilidad Con respecto a los posibles mecanismos de desintoxicaci n enzim tica en siete de las once poblaciones naturales se registraron valores superiores al punto de corte para esterasas inespec ficas solamente en Bucaramanga se present un incremento en las enzimas monooxigenasas del citocromo P450 pero en ninguna poblaci n se registr acetilcolinestarasa modificada Conclusiones La susceptibilidad generalizada a los organofosforados adulticidas evaluados indica que el malati n el insecticida m s utilizado en Colombia para interrumpir la transmisi n del dengue sigue siendo eficaz Las particularidades de los resultados de la resistencia fisiol gica a insecticidas de las comunas de un mismo municipio evidenciaron un fen meno localizado de manera espec fica en espacio y tiempo Palabras clave control de vectores Aedes dengue resistencia a insecticidas insecticidas organofosforados carbamatos doi http dx doi org 10 7705 biomedica v3
31. poxur y el larvicida temefos Todas las poblaciones naturales de Ae aegypti presentaron susceptibilidad a malati n tanto en los bioensayos OMS como en los CDC Para el propoxur todas las poblaciones presentaron susceptibilidad con la metodolog a CDC en tanto que los valores de mortalidad con OMS fueron muy bajos en todas las poblaciones incluyendo la cepa de referencia Rockefeller no se presentan los datos Asumiendo un posible problema de estabilidad del compuesto en los papeles impregnados OMS solo se discuten los resultados obtenidos mediante bivensayos CDC Para el organofosforado fenitroti n todas las poblaciones mostraron susceptibilidad usando CDC en tanto que para OMS 4 13 poblaciones correspondientes a la Mesa 1 Puerto L pez 1 y 2 y Sabana de Torres evidenciaron porcentajes de mortalidad 337 Santacoloma L Chaves B Brochero HL Biom dica 2012 32 333 43 Cuadro 2 Mortalidad de Aedes aegypti en 13 localidades evaluadas para dosis diagn sticas de insecticidas adulticidas y larvicidas insecticidas Malati n Fenitroti n Propoxur Temefos Adulticida Adulticida Adulticida Larvicida organosfosforado organosfosforado carbamato organofosforado Metodolog as OMS CDC OMS CDC OMS CDC OMS Deptos Comunas DE DE DE DE DE DE SD Cundinamarca Girardot 1 100 0 0 100 0 0 90 1 9 100 0 0 15 17 6 100 0 0 48 2 3 n 300 n 175 n 100 n 100 n 100 n 100 n 160 Girardot 3 100 0 0 100 0 0 91 1 6 100 0 0 26 1
32. ron valores de vigilancia para los cuales se debe corroborar la presencia o ausencia de resistencia Teniendo en cuenta que cada poblaci n se evalu con ambas metodolog as OMS y CDC para cada insecticida los criterios de susceptibilidad se unificaron en los siguientes casos 1 poblaciones resistentes aquellas con p rdida de susceptibilidad en CDC y Biom dica 2012 32 333 43 resistencia en OMS y 2 poblaciones con p rdida de susceptibilidad las cuales presentaron p rdida de susceptibilidad en CDC y vigilancia en OMS Determinaci n de los mecanismos enzim ticos de resistencia Con el prop sito de determinar alteraciones de tipo enzim tico asociadas con la resistencia fisiol gica a los insecticidas organofosforados y el carbamato propoxur en las poblaciones evaluadas se aplicaron pruebas colorim tricas de acuerdo con la metodolog a propuesta 17 19 Utilizando un lector para la ELISA Thermo Labsystems se midieron las densidades pticas a longitudes de onda predeterminadas para determinar el incremento en el nivel de las enzimas esterasas inespec ficas y monooxigenasas del grupo citocromo P450 CIP450 Para la acetilcolinesterasa modificada se determin la proporci n de individuos de la poblaci n que no presentaban inhibici n de la enzima acetilcolinesterasa El incremento de las enzimas esterasas inespec ficas se determin utilizando ster B naphtil acetato Merck como sustrato B naphtol Merck como
33. s OMS se eval a la respuesta de las poblaciones naturales de los mosquitos a la dosis de ingrediente activo que deber a ser eficaz en condiciones de campo En este estudio se utilizaron papeles impregnados al 10 para fenitroti n Para una misma poblaci n natural de Ae aegypti se espera que si se encuentra susceptibilidad utilizando las dosis y tiempos diagn sticos del bivensayo CDC se 339 Santacoloma L Chaves B Brochero HL encuentre tambi n susceptibilidad con el bioensayo OMS Sin embargo los resultados obtenidos para estas cuatro localidades requieren de verificaci n De acuerdo con la incongruencia en los resultados OMS y CDC para propoxur y fenitroti n debe tenerse en cuenta que debido a que los papeles impregnados deben adquirirse en Malasia nico centro autorizado por OMS pueden existir dificultades durante el proceso de env o y almacenamiento hasta su uso los que puedan afectar la estabilidad de algunas mol culas insecticidas Adem s los procesos administrativos de importaci n pueden llegar a incrementar los tiempos entre el env o y el uso de los papeles impregnados lo que determina en muchos casos que los bioensayos se utilicen cerca a las fechas de vencimiento En los programas de vigilancia de la resistencia a insecticidas nacionales es importante establecer si se aplican los bioensayos OMS y CDC para una misma poblaci n natural de vectores o si solo se aplica una sola metodolog a utilizando la
34. s confirmadas fue de 217 4 Ante la ausencia de una vacuna que proteja la poblaci n en riesgo el control vectorial es la medida m s importante para la prevenci n e interrupci n de la transmisi n en caso de epidemia 5 Como medidas de prevenci n se realizan campa as educativas dirigidas a la comunidad con el fin de eliminar los criaderos del vector lo cual se complementa con la aplicaci n de larvicidas en criaderos de dif cil eliminaci n 3 y dep sitos de agua potable de uso dom stico Los larvicidas autorizados por el Programa Nacional de Enfermedades Transmitidas por Vectores del Ministerio de Salud y Protecci n Social para el control focal son la bacteria Bacillus thurigiensis variedad i sraelensis 6 los reguladores de crecimiento y el organofosforado temefos este ltimo ha sido el m s utilizado en el pa s durante los ltimos a os dada su mayor capacidad residual y compatibilidad con los programas de control social En los casos de epidemia las poblaciones Correspondencia Liliana Santacoloma Laboratorio de Entomolog a Instituto Nacional de Salud Avenida calle 26 N 51 60 Bogot D C Colombia Tel fono 220 7700 extensiones 1342 y 1343 lisantacoloma Wgmail com IsantacolomaOins gov co Recibido 15 03 11 aceptado 15 03 12 334 de adultos se controlan mediante aspersiones con insecticidas qu micos El organofosforado malati n ha sido la mol cula m s utilizada en el pa s desde los a o
35. s ochenta 7 seguido en menor proporci n por los piretroides lambdacialotrina y deltametrina La aparici n de resistencia es una de las causas del fracaso del control de vectores En Colombia el hallazgo en 1956 de resistencia al DDT en una poblaci n de Aedes aegypti Linnaeus 1762 de C cuta Norte de Santander 8 y la consecuente reinfestaci n por el vector conllevaron a la utilizaci n de los organosforados como el larvicida temefos y posteriormente el adulticida malati n 9 Sin embargo desde 1990 a o del primer reporte de resistencia al temefos en Cali Su rez M Gonz lez R Morales C Temephos resistance to Aedes aegypti in Cali Colombia Am J Trop Med Hyg 1996 55 Suppl 257 la detecci n de resistencia a esta mol cula en diferentes estudios con poblaciones de Ae aegypti de campo ha sido frecuente 7 9 Gonz lez J Rey G Olano V Brochero H Informe t cnico Ministerio de la Protecci n Social 2005 Convenio 043 p 60 Los registros de resistencia al malati n adulticida m s utilizado en el control de Ae aegypti en Colombia son escasos Con el primero de ellos en 1995 en una poblaci n de Antioquia 10 y posteriormente en el 2003 se evidenci p rdida de susceptibilidad en una poblaci n de Barrancabermeja Santander Rojas W G nz lez J Amud M Qui ones M V lez Evaluaci n de la susceptibilidad de Aedes aegypti del municipio de Barrancabermeja Santander a los insecticidas malati n f
36. status Mem Inst Oswaldo Cruz 2007 102 895 900 http dx doi org 10 1590 S0074 02762007000800001 Karunaratne S Hemingway J Malathion resistance and prevalence of the malathion carboxylesterase mechanism in populations of mosquito vectors of disease in Sri Lanka Bull World Health Organ 2001 79 1060 79 http dx doi org 10 1590 50042 96862001001100010 Macoris M Andrighetti M Takaku L Glasser C Garbeloto V Bracco J Resistance of Aedes aegypti from the state of S o Paulo Brazil to organophosphates insecticides Mem Inst Oswaldo Cruz 2003 98 703 8 http dx doi org 10 1590 50074 02762003000500020 Rodr guez M Bisset J Mila L Calvo E Diaz C Soca L Niveles de resistencia a insecticidas y sus mecanismos en una cepa de Aedes aegypti de Santiago de Cuba Rev Cubana Med Trop 1999 51 83 8 30 31 32 33 34 35 36 37 38 Sensibilidad de vectores naturales del dengue en Colombia Bisset J Rodr guez M Molina D D az C Soca A Esterasas elevadas como mecanismo de resistencia a insecticidas organofosforados en cepas de Aedes aegypti Diptera Culicidae Rev Cubana Med Trop 2001 53 37 43 Ch vez G Rold n J Vargas F Niveles de resistencia a dos insecticidas en poblaciones de Aedes aegypti D ptera Culicidae del Per Revista Colombiana Entomolog a 2005 31 75 8 Melo Santos MA Varjal Melo JJ Ara jo AP Gomes TC Paiva MH Regis LN et al Resistance to the organophosphate temeph
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