Seraclone® Anti
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1. Handelsform 808 126 2 ml PRES Konserviert mit 0 1 NaNz Aktivit t Mindesttiter Reagenz zur In vitro Diagnostik Nur f r die Verwendung durch geschultes Laborpersonal Der ist dem Etikett zu entnehmen Symbole werden entsprechend der Norm DIN EN 980 verwendet In DIN EN 980 nicht enthaltene Symbole sind im weiteren Text erkl rt Verwendungszweck Seraclone Anti k KEL2 wird zum Nachweis des Blutgruppenmerkmals k Cellano in der R hrchen Testmethode eingesetzt berblick Kell System Seit der Beschreibung des Antigens K in 1946 durch Coombs et al und seiner k Allele in 1949 durch Levine et al zeigte sich dass das Kell Blutgruppensystem sehr komplex ist und mittlerweile mehr als 20 mit dem Kell System assoziierte Antigene bekannt sind Diese werden wahrscheinlich von einer Reihe eng verbundener Genloci kontrolliert die wie beim CDE des Rhesussystems als Haplotypen vererbt werden Die Antigene des Kell Systems sind weiterhin von Interesse da sie dazu tendieren entweder sehr h ufig oder relativ selten aufzutreten und sie zeigen erhebliche ethnische Variationen z B k KEL2 Kaukasier 99 8 Schwarze 100 und K KEL1 Kaukasier 9 Schwarze 2 Asiaten selten Araber etwa 25 Zur vollst ndigen Expression der Antigene werden Disulfidbr cken gebildet die durch die Behandlung mit Trypsin und Chymotrypsin zerst rt werden 186985 01 01 2015 Antik rper des Kell Systems k nnen h molytische Transfusionsreaktionen2. The expiry date is printed on the label Warning and precautions e Do not use damaged vials e Turbidity or other visible changes may indicate bacterial contamination Do not use if turbid e All handling techniques are to be performed according to the manufacturer s instructions Each deviation from these instructions is the sole responsibility of the user and needs to be validated by the user e Used tests must be discarded as hazardous material Waste information is provided in the safety data sheet e Because of biotechnological manufacturing of monoclonal antibodies the risk of contamination with infectious agents can be considered as insignificant Nevertheless all test reagents must be regarded as potential infectious Appropriate safety precautions are recommended e The packaging of this product contains natural rubber latex which may cause allergic reactions e The product contains sodium azide NaN3 which may react with lead or copper plumbing to form explosive azides If discarded in the sink flush with large amounts of water to prevent the build up of explosive metal azides References 1 Technical Manual 17 edition Section 1 American Association of Blood Banks 2 The Blood Group Antigen Facts Book 3 edition Marion Reid Christine Lomas Francis and Martin L Olsson Key Underline Addition or significant change lt Deletion of text Seraclone Anti k KEL2 Zum Nachweis des erythrozytaren Antigens k
3. The blood type k is defined by presence or absence of the k characteristic on red cells The antigen k reacts specifically with the corresponding antibody in Seraclone Anti k KEL2 by direct agglutination The reagent is used in tube testing Reagent As reactive component Seraclone Anti k KEL2 contains a murine monoclonal antibody of the immunoglobulin class IgM which is derived from hybridoma cell lines created by fusing mouse antibody producing B lymphocytes with mouse myeloma cells and demonstrate consistent specificity and reproducibility characteristic for monoclonal antibodies Antibodies are diluted in citrate buffer pH 5 2 to 5 3 with bovine albumin and macromolecular potentiators Seraclone Anti k KEL2 clone Lk1 Materials required but not provided Pipettes volume 50 ul Phosphate Buffered Saline PBS pH 7 3 0 2 or isotonic saline Glass tubes Laboratory centrifuge Specimen collection Fresh samples of clotted EDTA or citrate anticoagulated whole blood collected following general blood sampling guidelines are acceptable The specimen should be tested as soon as possible after collection If testing is delayed specimens should be stored at 2 to 8 C Blood specimens exhibiting gross hemolysis or contamination should not be used Clotted samples or those collected in EDTA may be tested within 14 days from collection Donor blood stored in citrate anticoagulant may be tested until the expiration date of the
4. ant geno El reactivo se podr emplear si s lo reacciona con los eritrocitos positivos Caracter sticas de funcionamiento y limitaciones del m todo e En los eritrocitos del fenotipo Kk Kp a b la expresi n del ant geno k es mucho m s d bil En presencia de formas de ant genos poco frecuentes como por ejemplo el s ndrome McLeod la antigenicidad de Kell y Celano puede debilitarse El s ndrome McLeod est ligado con el fenotipo McLeod que se caracteriza por una d bil expresi n del ant geno Kell y por la ausencia de expresi n del ant geno Km KEL20 y Kx e La agitaci n excesiva puede distorsionar la aglutinaci n d bil y producir resultados falsos negativos En caso de resultados confusos se recomienda lavar los eritrocitos al menos 2 veces Los eritrocitos almacenados pueden mostrar reacciones m s d biles Posibles causas de un resultado falso Contaminaci n de la muestra o de los reactivos empleados Almacenamiento inadecuado o preparaci n incorrecta de los eritrocitos Autoanticuerpos Anticuerpos contra antibi ticos Anticuerpos fr os Prueba de antiglobulina directa positiva CE 186985 01 01 2015 Muestras considerablemente lip micas o ict ricas En caso de resultados dudosos sin poder determinar la causa consultar al departamento de atencion al cliente Bio Rad tel 49 6103 3130 611 Vida til La temperatura adecuada de almacenamiento de Serclone Anti k KEL2 es d
5. con acqua abbondante per evitare il rischio di formazione di azoturi metallici Bibliografia di riferimento 1 Technical Manual 17 edition Section 1 American Association of Blood Banks 2 The Blood Group Antigen Facts Book 3 edition Marion Reid Christine Lomas Francis and Martin L Olsson Chiave Sottolineato Integrazione o modifica importante lt Testo eliminato Seraclone Anti k KEL2 Para determinar la presencia del ant geno eritrocitario k Forma comercial m REF 808 126 2 ml PRES Conservaci n 0 1 NaN3 ctividad t tulo m nimo ACT Actividad titul ini Reactivo para el diagn stico in vitro Destinado exclusivamente para uso profesional en laboratorio La actividad titulo minimo se indica en la etiqueta La simbologia utilizada corresponde con la norma DIN EN 980 Los simbolos que no se contemplen en la norma DIN EN 980 se explicaran en el texto Uso previsto Seraclone Anti k KEL2 se usa para determinar la caracteristica del grupo sanguineo k Celano mediante m todo de tubo de ensayo Descripci n del sistema Kell Desde que se describiera por primera vez el antigeno K en el a o 1946 por Coombs et al y el alelo k en el a o 1949 por Levine et al se ha demostrado que el sistema de grupo sangu neo Kell es mucho m s complejo y hoy en d a se conocen m s de 20 ant genos asociados al sistema Kell Estos ant genos son controlados probablemente por una serie de loci gen ticos interrel
6. de la responsabilit de l utilisateur qui devra le valider e Le mat riel d essai usag doit tre consid r comme mati re dangereuse Les consignes relatives l limination des d chets figurent sur la fiche de donn es de s curit En raison de la pr paration biotechnologique des anticorps monoclonaux le risque de contamination par des agents infectieux est quasiment exclu Toutefois tous les r actifs des essais doivent tre manipul s comme tant potentiellement infectieux Il est recommand de prendre les pr cautions de s curit qui s imposent L emballage de ce produit contient du latex naturel qui peut d clencher des r actions allergiques e Le produit contient de l azoture de sodium NaN qui peut r agir avec la tuyauterie en plomb ou en cuivre pour former des azotures explosifs En cas de rejet dans les conduits d vacuation rincer grande eau pour viter la formation d azotures m talliques explosifs Bibliographie 1 Technical Manual 17 edition Section 1 American Association of Blood Banks 2 The Blood Group Antigen Facts Book 3 edition Marion Reid Christine Lomas Francis and Martin L Olsson Cl Soulign compl ment ou modification importante lt texte supprim Ml Bio Rad Medical Diagnostics GmbH Industriestr 1 D 63303 Dreieich Germany Tel 49 6103 3130 0 Fax 49 6103 3130 724 www bio rad com techsupport bmd bio rad com Seraclone Anti k KEL2 Per la
7. dem Reagenzienetikett zu entnehmen Ml Bio Rad Medical Diagnostics GmbH Industriestr 1 D 63303 Dreieich Germany Tel 49 6103 3130 0 Fax 49 6103 3130 724 www bio rad com techsupport bmd bio rad com Warnhinweis und Vorsichtsma reglen e Besch digte Fl schchen d rfen nicht mehr verwendet werden e Eine Tr bung des Produktes kann ein Hinweis auf bakterielle Verunreinigung sein In diesem Fall darf das Produkt nicht eingesetzt werden e Alle Techniken sind nach den Vorgaben des Herstellers anzuwenden Jede Abweichung von den Vorgaben des Herstellers liegt in der Verantwortung des Anwenders und muss von diesem validiert werden e Gebrauchtes Testmaterial muss als Gefahrgut betrachtet werden Hinweise zur Entsorgung sind dem Sicherheitsdatenblatt zu entnehmen e Durch die biotechnologische Herstellung der monoklonalen Antik rper ist das Risiko einer Kontamination durch infekti se Krankheitserreger nahezu ausgeschlossen Trotzdem sollten alle Testreagenzien als potentiell infekti s gehandhabt und die entsprechenden Sicherheitsvorkehrungen getroffen werden e Die Verpackung dieses Produktes enth lt nat rliches Latex welches allergische Reaktionen ausl sen kann Das Produkt enth lt Natriumazid NaN welches mit Blei oder Kupferrohren zu explosiven Aziden reagieren kann Bei einer Entsorgung im Abfluss mit viel Wasser nachsp len um die explosive Verbindung von Metallaziden zu verhindern Literatur 1 Technical Manua
8. el cual es producido por hibridomas creadas de la fusi n de linfocitos B productores de anticuerpos con c lulas de mieloma m rino y muestra la especificidad constante y la reproducibilidad caracter sticas de los anticuerpos monoclonales Los anticuerpos est n diluidos en un buffer de citrato con pH 5 2 a 5 3 que contiene alb mina bovina y potenciadores macromoleculares Seraclone Anti k KEL2 Clona Lk1 Reactivos y materiales adicionales e Pipetas volumen 50 ul e Buffer Salino de Fosfatos PBS pH 7 3 0 2 o soluci n salina isot nica e Probeta de vidrio e Tubos de laboratorio Muestras Se deben usar muestras frescas de sangre coagulada sangre anticoagulada con EDTA citrato colectadas siguiendo las gu as generales de obtenci n de muestras de sangre Si se prev un retraso del ensayo las muestras se han de almacenar a una temperatura de 2 8 C No usar muestras hemolizadas o contaminadas Las muestras de sangre reci n sacada y las muestras con EDTA se tienen que analizar dentro de los 14 d as siguientes a su obtenci n La sangre de donantes almacenada en citrato como anticoagulante puede ser analizada hasta la fecha de caducidad de la bolsa de sangre del donador Procedimiento del ensayo 1 Preparar una suspensi n de eritrocitos al 3 5 en soluci n salina isot nica o PBS 2 A adir una gota aproximadamente 50 ul de reactivo a un tubo apropiadamente rotulado 3 Agregar 1 gota aprox 50 ul de la suspen
9. lent des variations ethniques substantielles par exemple k KEL2 Caucasiens 99 8 Noirs 100 et K KEL1 Caucasiens 9 Noirs 2 Asiatiques rarement Arabes pr s de 25 Pour exprimer enti rement les antig nes des ponts disulfures se forment et seront d truits par un traitement par trypsine et chymotrypsine Les anticorps du syst me Kell peuvent d clencher des r actions transfusionnelles h molytiques et la maladie h molytique du nouveau n Principe du test Le principe du test consiste dans un test d h magglutination pour d tecter l antig ne rythrocytaire Le groupe sanguin k se d finit par la pr sence ou l absence du marqueur k sur les rythrocytes L antigene k r agit de mani re sp cifique avec l anticorps correspondant dans Seraclone Anti k KEL2 par une agglutination directe Le r actif est utilis dans la m thode d essai en prouvettes R actif Le r actif de Seraclone Anti k KEL2 contient un anticorps monoclonal murin de la classe d immunoglobulines IgM provenant d un hybridome issu de la fusion de lymphocytes B et de my lomes de cellules de souris dont les anticorps pr sentent une constante reproductibilit et sp cificit Les anticorps sont dilu s dans un tampon citrate de pH 5 2 5 3 contenant de l albumine de s rum bovin et des potentiateurs macromol culaires Seraclone Anti k KEL2 cl ne Lk1 Mat riel n cessaire non fourni e Pipettes volume 50 ul e Tampon
10. phosphate salin PBS pH 7 3 0 2 ou Solution saline isotonique prouvettes en verre e Centrifugeuse de laboratoire Echantillons Il est possible d utiliser des chantillons de sang frais total natif EDTA ou citrat provenant des proc d s de pr l vement courants Les chantillons de sang doivent tre test s le plus rapidement possible apr s le pr l vement Si la r alisation de l essai est retard e les chantillons doivent tre conserv s entre 2 8 C Il convient de ne pas utiliser les chantillons de sang h molys s ou contamin s Le sang natif et le sang EDTA doivent tre test s dans un d lai de 14 jours compter du pr l vement Les chantillons citrat s peuvent tre utilis s jusqu la date d expiration de la poche de sang 186985 01 01 2015 Mode op ratoire Faire une suspension d rythrocytes 3 5 dans une solution saline ou PBS Mettre 1 goutte environ 50ul de r actif dans une prouvette tiquet e Rajouter 1 goutte environ 50ul de suspension d rythrocytes et m langer Laisser incuber 5 a 10 minutes a temp rature ambiante Centrifuger a 20 secondes pour 800 1000 x g ou b pour une dur e et une vitesse correspondant au calibrage de la centrifugeuse 5 Agiter doucement et v rifier la pr sence d agglutinations macroscopiques BRON gt gt Interpr tation des r sultats La force de r action est valu e conform ment aux consignes du manuel technique T
11. Seraclone Anti k KEL2 For the detection of red blood cell characteristic k Tradeform 808 126 2ml Preservative 0 1 NaN Activity Min titer Diagnostic reagent for in vitro use only To be used by trained laboratory personnel only The is printed on the label Symbols are used according to standard DIN EN 980 Symbols not contained in standard DIN EN 980 are described Intended use Seraclone Anti k KEL2 is used for the determination of the k Cellano antigen of red blood cells using the tube test Summary Kell System Since the description of the antigen K in 1946 by Coombs et al and its allele k in 1949 by Levine et al the Kell blood group system has been shown to be increasingly complex and over 20 antigens are now known to be associated with the system These are probably controlled from a series of closely linked loci so that Kell antigens like CDE in the Rh system are inherited as haplotype The antigens of the Kell blood group system are of further interest in that they tend to occur either very frequently or relatively infrequently and show considerable ethnic variation e g k KEL2 Caucasians 99 8 Blacks 100 and K KEL1 Caucasians 9 Blacks 2 Asians rare Arabs as high as 25 Kell system antibodies are capable of causing hemolytic transfusion reactions and hemolytic disease of the newborn Test principle The test principle is a hemagglutination test to detect the respective red cell antigens
12. acionados que se heredan en forma de haplotipos como sucede en el complejo CDE del sistema Rhesus Los ant genos del sistema Kell resultan muy interesantes ya que tienden a aparecer seg n el caso con frecuencia elevada o raramente detect ndose variaciones tnicas significativas en una poblaci n p ej k KEL2 habitantes del C ucaso 99 8 negros 100 y K KEL1 habitantes del C ucaso 9 negros 2 asi ticos raramente rabes aprox 25 Para la plena expresi n de los ant genos se forman puentes disulfuro que se destruyen con el tratamiento de tripsina y quimotripsina Ml Bio Rad Medical Diagnostics GmbH Industriestr 1 D 63303 Dreieich Germany Tel 49 6103 3130 0 Fax 49 6103 3130 724 www bio rad com techsupport bmd bio rad com Los anticuerpos del sistema Kell pueden provocar reacciones hemol ticas a una transfusi n y la enfermedad hemol tica neonatal Principio de ensayo El principio del ensayo consiste en una prueba de hemaglutinaci n para determinar el ant geno eritrocitario correspondiente El grupo sangu neo k se define por la presencia o ausencia del car cter k en los eritrocitos El ant geno k reacciona espec ficamente con el correspondiente anticuerpo contenido en Seraclone Anti k KEL2 por aglutinaci n directa El reactivo se utiliza en la prueba en tubo Reactivo Seraclone Anti k KEL2 contiene como componente reactivo un anticuerpo monoclonal murino de la clase de inmunoglobulina IgM
13. di risultati dubbi per cause non chiare disponibile il servizio Bio Rad Tel 49 6103 3130 611 per chiarimenti Stabilit La temperatura di conservazione di Seraclone Anti k KEL2 2 8 C Una volta aperto il reagente il prodotto pud essere utilizzato fino alla scadenza indicata se conservato in modo appropriato La scadenza indicata sull etichetta del reagente Avvertenze e precauzioni e Non utilizzare flaconcini danneggiati L intorbidimento del prodotto pu indicare una contaminazione batterica Non utilizzare il prodotto torbido Applicare tutte le tecniche secondo le indicazioni del produttore Qualsiasi variazione dalle indicazioni del produttore avviene sotto la responsabilit dell utilizzatore e dovr essere da questi validata ll materiale di prova usato deve essere considerato come pericoloso La scheda di sicurezza contiene le indicazioni per lo smaltimento Con la produzione biotecnologica di anticorpi monoclonali si esclude quasi del tutto il rischio di una contaminazione tramite agenti infettivi Ciononostante tutti i reagenti devono essere considerati come potenzialmente infettivi Pertanto occorrer prendere le misure di sicurezza necessarie La confezione di questo prodotto contiene lattice naturale che pu causare reazioni allergiche Il prodotto contiene sodio azide NaN che pu reagire con tubature di piombo O rame per formare azoturi esplosivi Per smaltirlo sciacquare lo scarico
14. donor unit Test procedure 1 Prepare a 3 to 5 suspension of red blood cells to be tested in saline or PBS 2 Place one drop approximately 50 ul reagent into an appropriately labelled tube 3 Add one drop approximately 50 ul of red blood cell suspension into the tube and mix 4 Incubate for 5 to 10 minutes at room temperature 5 Centrifuge for a 20 seconds at 800 to 1000 x g or b at a time and speed appropriate for the centrifuge calibration 6 Gently dislodge the red blood cell button and observe for macroscopic agglutination Interpretation of results Evaluation of the reaction strength should be carried out according to the Technical Manual Reaction strength Agglutination 4 One single agglutinate 3 Several large agglutinates 2 Medium size agglutinates clear background 1 Small agglutinates turbid background Barely visible agglutination turbid background No agglutination Stability of the reaction Following centrifugation all tube tests should be read immediately and results interpreted without delay Time delays may cause a dissociation of the antigen antibody complexes resulting to false negative or more often weak positive reactions Quality control The reactivity of all blood typing reagents should be confirmed on each day of use To confirm the reactivity or specificity of Bio Rad monoclonal Seraclone Anti k KEL2 Blood Grouping Reagent should be tested wi
15. e 2 8 C Despu s de abrir el reactivo se puede conservar el producto hasta su fecha de caducidad siempre y cuando se almacene correctamente La fecha de caducidad aparece en la etiqueta del reactivo Advertencias y precauciones No emplear el producto en caso de que el frasco estuviera da ado e Turbidez otros cambios visibles podr an indicar contaminaci n bacteriana No utilizar en caso de turbidez Atenerse siempre a las indicaciones del fabricante Cualquier divergencia de las especificaciones del fabricante ser responsabilidad del usuario y tendr que ser validada por el mismo El material de ensayo empleado se deber considerar material peligroso La ficha de datos de seguridad contiene indicaciones para desechar el material adecuadamente El riesgo de una contaminaci n debida a agentes infecciosos queda pr cticamente descartado gracias a la fabricaci n biotecnol gica de los anticuerpos monoclonales No obstante todos los reactivos destinados al ensayo se deber an manejar como si fueran potencialmente infecciosos adem s de adoptar las correspondientes medidas de seguridad El envase de este producto contiene l tex natural que puede generar reacciones al rgicas El producto contiene azida de sodio NaN3 que puede formar azidas explosivas con metales como cobre y plomo En caso de desechar el producto por el desag e dejar correr mucho agua para evitar la combinaci n explosiva de azidas met licas L
16. echnical Manual 1 Force de r action Agglutination 4 Une seule agglutination 3 Plusieurs grosses agglutinations 2 Agglutinations moyennes fond clair 1 Petites agglutinations fond trouble Agglutinations peine visibles fond trouble Pas d agglutination Stabilit de la r action Apr s centrifugation toutes les prouvettes doivent tre lues et interpr t es imm diatement sans d lai Tout d lai peut entra ner une dissociation du complexe antig ne anticorps entra nant des r actions faussement n gatives ou plus souvent des r actions faiblement positives Contr le de qualit Il convient d examiner la r activit de tous les r actifs pour la d termination du groupe sanguin le jour de leur utilisation Pour confirmer la r activit et la sp cificit de Seraclone Anti k KEL2 il convient d effectuer des essais avec des rythrocytes antig nes positifs de pr f rence de cellules h t rozygotes et des rythrocytes antig nes n gatifs Le r actif peut tre utilis s il r agit uniquement aux rythrocytes antig nes positifs Caract ristiques et limites de la m thode e Les rythrocytes du ph notype Kk Kp a b montrent une expression affaiblie de l antigene k e L antig nicit Kell et Cellano peut tre affaiblie dans les tr s rares cas de variations antig niques tels que le syndrome de McLeod Le syndrome de McLeod est associ a
17. iteratura 1 Technical Manual 17 edition Section 1 American Association of Blood Banks 2 The Blood Group Antigen Facts Book 3 edition Marion Reid Christine Lomas Francis and Martin L Olsson Clave Subrayado Adici n o cambio significativo lt Texto borrado Ml Bio Rad Medical Diagnostics GmbH Industriestr 1 D 63303 Dreieich Germany oO Tel 49 6103 3130 0 Fax 49 6103 3130 724 www bio rad com techsupport bmd bio rad com CE 186985 01 01 2015
18. izzare campioni di sangue emolitici o contaminati campioni di sangue coagulato o raccolto in EDTA possono essere testati entro 14 giorni campioni di sangue con citratato di donatori possono essere testati fino alla data di scadenza della sacca Esecuzione del test Preparare una sospensione di eritrociti al 3 5 in soluzione salina o PBS Inserire 1 goccia ca 50ul di reagente in una provetta etichettata Aggiungere 1 goccia ca 50pl di sospensione di eritrociti e miscelare Incubare per 5 10 minuti a temperatura ambiente Centrifugare a 20 secondi a 800 1000 x g oppure b per un tempo e ad una velocit che corrispondono alla calibrazione della centrifuga 6 Scuotere leggermente per verificare l agglutinazione macroscopica PN Interpretazione dei risultati La valutazione delle forze di reazione avviene secondo le indicazioni del Technical Manual 1 Forza di reazione Agglutinazione 4 Agglutinato singolo 3 Diversi grandi agglutinati 2 Agglutinati medi sfondo chiaro 1 Agglutinati piccoli sfondo torbido Agglutinati appena visibili sfondo torbido Nessun agglutinato Stabilita della reazione Dopo la centrifugazione tutte le provette devono essere lette immediatamente e i risultati interpretati subito Ritardi nella lettura potrebbero causare una dissocaizione dei complessi antigene anticorpo portando a risultati falso negativi o pi spesso a reazioni debolmente p
19. l 17 edition Section 1 American Association of Blood Banks 2 The Blood Group Antigen Facts Book 3 edition Marion Reid Christine Lomas Francis and Martin L Olsson Schl ssel Unterstrichen Zusatz oder wichtige nderung lt Entfernter Text Seraclone Anti k KEL2 Pour la d tection de l antigene rythrocytaire k Presentation 808 126 2 ml PRES Conserv avec 0 1 NaNz Activit Titre minimum R actif de diagnostic in vitro Peut uniquement tre utilis par un personnel qualifi L ACT figure sur l tiquette Les symboles utilis s sont conformes la norme DIN EN 980 Les symboles non pr vus par la norme DIN EN 980 seront expliqu s dans le texte Usage Seraclone Anti k KEL2 est utilis dans la m thode d essai en prouvettes pour d tecter le marqueur du groupe sanguin k cellano Aper u du syst me Kell Depuis la description de l antig ne k par Coombs et al en 1946 et de son all le k par Levine et al en 1949 le syst me de groupes sanguins Kell a r v l son extr me complexit et plus de 20 antig nes associ s au syst me Kell sont d sormais connus Ceux ci sont probablement contr l s par une s rie de loci g n tiques troitement li s qui comme le CDE du syst me rh sus sont transmis sous forme d haplotypes Les antig nes du syst me Kell sont tr s int ressants puisqu ils ont tendance appara tre soit tr s fr quemment soit relativement rarement et ils r v
20. n sollten nicht verwendet werden Nativblute und EDTA Blute sollten innerhalb 14 Tagen nach Abnahme getestet werden Citratproben von Spendern k nnen bis zum Verfallsdatum der Konserve verwendet werden Testdurchf hrung 1 Eine 3 5 ige Erythrozytensuspension in Kochsalz oder PBS erstellen 2 1 Tropfen ca 50ul Reagenz in ein entsprechend beschriftetes R hrchen vorlegen 3 1 Tropfen ca 50ul Erythrozytensuspension dazugeben und mischen 4 5bis 10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren 5 Zentrifugieren a 20 Sekunden bei 800 1000 x g oder b bei einer Zeit und Geschwindigkeit die der Zentrifugen Kallibrierung entspricht 6 Unter leichtem Aufsch tteln auf makroskopische Agglutination pr fen Interpretation der Ergebnisse Die Bewertung der Reaktionsst rken erfolgt analog den Vorgaben des Technical Manual 1 Reaktionsst rke Agglutinationsbild 4 Ein einziges Agglutinat 3 Mehrere gro e Agglutinate 2 Mittelgro e Agglutinate klarer Hintergrund 1 Kleine Agglutinate tr ber Hintergrund Gerade noch sichtbare Agglutinate tr ber Hintergrund Keine Agglutinate Qualit tskontrolle Die Reaktivitat aller Blutgruppenreagenzien sollte an jedem Tag der Verwendung berpr ft werden Um die Reaktivit t und Spezifit t von Seraclone Anti k KEL2 zu best tigen sollte mit Antigen positiven vorzugsweise von heterozygoten Zellen und Antigen negativen Erythrozyten getestet
21. ositive CE 186985 01 01 2015 Controllo di qualit La reattivit di tutti i reagenti dei gruppi sanguigni deve essere verificata ogni giorno di utilizzo Per confermare la reattivit e la specificita di Seraclone Anti k KEL2 il reagente deve essere testato con eritrociti positivi all antigene preferibilmente da cellule eterozigoti e negativi Il reagente pu essere impiegato se reagisce solo con gli eritrociti positivi per l antigene Caratteristiche prestazionali e limiti del metodo e Gli eritrociti del fenotipo Kk Kp a b mostrano un espressione indebolita dell Antigene k e L antigenicit di Kell e Cellano pu essere indebolita in caso di varianti rare di antigeni come ad es la sindrome McLeod La sindrome McLeod amp associata al fenotipo McLeod per cui gli antigeni Kell sono espressi in modo debole mentre Km KEL20 e Kx mancano Un agitazione troppo forte pu portare a risultati negativi errati in caso di agglutinati deboli In caso di risultati non chiari si consiglia di lavare 2 volte gli eritrociti e Gli eritrociti conservati possono mostrare reazioni pi deboli Possibili cause di un risultato errato contaminazione del campione o del reagente utilizzato conservazione o preparazione degli eritrociti non corrette autoanticorpi anticorpi contro gli antibiotici anticorpi freddi test antiglobulina diretto positivo campioni fortemente lipemici o itterici In caso
22. rilevazione dell antigene eritrocitario k Forma commerciale 808 126 2 ml PRES Conservato con 0 1 NaN3 ACT Attivita Titolo minimo ACT Reagente per diagnostica in vitro Solo per Putilizzo da parte di personale di laboratorio addestrato Per l ACT far riferimento all etichetta simboli vengono utilizzati ai sensi della norma DIN EN 980 simboli non contenuti nella DIN EN 980 sono descritti nel testo Uso previsto Il Seraclone Anti k KEL2 viene impiegato per la rilevazione della caratteristica del gruppo sanguigno k Cellano col metodo in provetta Cenni sul sistema Kell Sin dalla descrizione dell antigene k nel 1946 da parte di Coombs et al e del suo Allele k nel 1949 di Levine et al il sistema del gruppo sanguigno Kell si dimostrato molto complesso attualmente sono oltre 20 gli antigeni associati al sistema Kell Questi vengono probabilmente controllati da una serie di loci strettamente collegati cosi che gli antigeni Kell come per CDE del sistema Rhesus vengono ereditati come aplotipi Gli antigeni del sistema Kell sono di ulteriore interesse in quanto tendono a comparire sia molto spesso che piuttosto raramente e mostrano variazioni etniche rilevanti es k KEL2 caucasici 99 8 neri 100 e K KEL1 caucasici 9 neri 2 asiatici di rado arabi circa 25 Per l espressione completa degli antigeni vengono formati ponti disolfuro distrutti nel trattamento con tripsina e chimotripsina Gli anticorpi del si
23. si n de eritrocitos y mezclar 4 Incubar de 5 a 10 minutos a temperatura ambiente 5 Centrifugar a 20 segundos a 800 1000 x g o b durante el tiempo y a la velocidad que corresponda al calibrado de la centr fuga 6 Deshacer suavemente el bot n de c lulas y observar la aglutinaci n macrosc pica Interpretaci n de los resultados La evaluaci n de la intensidad de la reacci n se efect a de manera an loga a lo especificado en el manual t cnico 1 Intensidad de la Cuadro de aglutinaci n reacci n 4 Un nico aglutinado 3 Diversos aglutinados grandes 2 Aglutinados medianos fondo claro 1 Aglutinados peque os fondo turbio Aglutinados todav a visibles fondo turbio Sin aglutinados Estabilidad de la reacci n Despu s de la centrifugaci n todos los tubos de ensayo deben ser leidos inmediatamente y los resultados interpretados sin ning n retraso El retraso en la lectura puede causar una disociaci n de los complejos ant geno anticuerpo dando resultados falsos negativos m s frecuentemente dando reaccciones d biles positivas Control de calidad Controlar la reactividad de los reactivos de grupos sangu neos todos los d as antes de su utilizaci n Para confirmar la reactividad especificidad del reactivo Seraclone Anti k KEL2 se debe probar con eritrocitos positivos al ant geno preferentemente con c lulas heterocigotas y eritrocitos negativos para el
24. stema Kell sono in grado di causare reazioni trasfusionali emolitiche e la malattia emolitica del neonato Principio del test Il test si basa sul principio di emoagglutinazione per rilevare il rispettivo antigene eritrocitario Il gruppo sanguigno k definito dalla presenza o assenza della caratteristica k sugli eritrociti L antigene k reagisce in modo specifico con l anticorpo corrispondente nel Seraclone Anti k KEL2 tramite agglutinazione diretta Il reagente viene utilizzato col metodo in provetta Reagente Seraclone Anti k KEL2 contiene come componente reattiva un anticorpo monoclonale murino di classe immunoglobulinica IgM che deriva da linee di coltura cellulare e dimostra la specificit e la riproducibilit costanti caratteristiche degli anticorpi monoclonali Gli anticorpi sono diluiti in tampone citrato con pH 5 2 5 3 con albumina bovina e potenziatori macromolecolari Seraclone Anti k KEL2 Clone Lk1 Ulteriori materiali richiesti e Pipette volume 50 pl e Tampone fosfato salino PBS pH 7 3 0 2 o soluzione fisiologica e Provette di vetro e Centrifuga da laboratorio Raccolta di campioni ammesso l utilizzo di campioni freschi di sangue nativo o raccolto in EDTA o citratato ottenuto secondo le procedure di raccolta generalmente valide campioni devono essere testati appena possibile dopo la raccolta Se l esecuzione del test viene ritardata i campioni devono essere conservati a 2 8 C Non util
25. th antigen positive preferably from heterozygous individuals and antigen negative red blood cells The reagent is acceptable for use if it reacts only with antigen positive red blood cells Performance characteristics and limitations of the method e Red cells from individuals of the Kell phenotype Kk Kp a b show a substantially weakened expression of the k antigen e The Kell and Cellano antigenicity can be weakened in case of antigen variants which occur rarely for example the McLeod syndrome The McLeod syndrome is associated with the McLeod phenotype whereby the Kell antigens are slightly expressed and Km KEL20 and Kx are missing Excessive agitation may disrupt weak agglutination and produce false negative results e In case of ambiguous results it is recommended to wash red blood cells at least 2 times e Stored red blood cells may exhibit weaker reactions e _ Some conditions that may cause false results are Contamination of sample or reagent Improper storage or preparation of red blood cells Autoantibodies Antibodies to antibiotics Cold antibodies Positive Direct Anti Globulin Test Strongly lipemic or icteric samples In case of questionable results of unknown origin our Bio Rad Service will assist you phone 49 6103 3130 611 Shelf life Storage temperature of Seraclone Anti k KEL2 is 2 8 C After opening the reagent the product can be stored until its expiry date under proper storage conditions
26. u ph notype de McLeod caract ris par une expression affaiblie des antigenes Kell et l absence des antig nes Km KEL20 et Kx Une agitation trop vigoureuse peut fausser n gativement les r sultats en cas d agglutinations faibles e Si les r sultats sont ambigus il est recommand de laver deux fois les rythrocytes e _ Les Erythrocytes conserv s peuvent montrer des r actions plus faibles e Causes possibles de r sultats fauss s Contamination de l chantillon ou du r actif utilis Stockage ou pr paration impropre des rythrocytes Auto anticorps Anticorps contre les antibiotiques Anticorps froids Test direct l antiglobuline positif Echantillons tr s lip miques ou ict riques Si la cause des r sultats douteux n est pas claire il convient de contacter le service Bio Rad t l 49 6103 3130 611 Dur e de conservation Seraclone Anti k KEL2 doit tre conserv entre 2 8 C Apr s ouverture du r actif le produit conserv dans des conditions ad quates se conserve jusqu au terme de la dur e indiqu e La dur e figure sur l tiquette du r actif Avertissement et pr cautions e Ne pas utiliser d prouvettes endommag es La turbidit du produit peut indiquer une contamination bact rienne Dans ce cas ne pas utiliser le produit Toutes les techniques doivent tre utilis es conform ment aux instructions du fabricant Le non respect des instructions du fabricant rel ve
27. und Morbus haemolyticus neonatorum ausl sen Testprinzip Das Testprinzip ist ein H magglutinationstest zum Nachweis des entsprechenden Erythrozyten Antigens Die Blutgruppe k wird durch das Vorhandensein oder Fehlen des Merkmals k auf den Erythrozyten definiert Das Antigen k reagiert spezifisch mit dem korrespondierenden Antik rper in Seraclone Anti k KEL2 durch direkte Agglutination Das Reagenz wird in der R hrchen Testmethode eingesetzt Reagenz Seraclone Anti k KEL2 enth lt als reaktiven Bestandteil einen murinen monoklonalen Antik rper der Immunglobulinklasse IgM Er wird aus dem Zellkultur berstand gewonnen und weist die f r monoklonale Antik rper geltende konstante Spezifit t und Reproduzierbarkeit auf Die Antik rper sind in einem rinderalbuminhaltigen mit makromolekularen Verst rkern versetzten Citrat Puffer pH 5 2 bis 5 3 verd nnt Seraclone Anti k KEL2 Klon Lk1 Zus tzlich ben tigte Materialien e Pipetten Volumen 50 pl e Phosphate Buffered Saline PBS pH 7 3 0 2 oder physiologische Koch salzl sung e Glasr hrchen e Laborzentrifuge Probenmaterial Die Verwendung frischer Nativ EDTA oder Citrat Vollblutproben gewonnen nach den allgemein g ltigen Entnahmeverfahren ist zul ssig Die Blutproben sollten schnellstm glich nach der Entnahme getestet werden Verz gert sich die Testdurchf hrung sollten die Proben bei 2 8 C gelagert werden H molytische oder kontaminierte Blutprobe
28. werden Das Reagenz ist f r den Gebrauch geeignet wenn es nur mit den Antigen positiven Erythrozyten reagiert Leistungsmerkmale und Grenzen der Methode e Erythrozyten vom Phenotyp Kk Kp a b zeigen eine abgeschw chte Expression des k Antigens e Die Kell und Cellano Antigenit t kann im Fall von selten vorkommenden Antigenvarianten wie z B beim McLeod Syndrom abgeschw cht sein Das McLeod Syndrom ist assoziiert mit dem McLeod Ph notyp wobei die Kell Antigene schwach exprimiert sind und Km KEL20 ebenso wie Kx fehlen e Zu starkes Aufsch tteln kann im Falle von schwachen Agglutinaten zu falsch negativen Ergebnissen f hren e Bei unklaren Ergebnissen wird empfohlen die Erythrozyten 2 mal zu waschen e Aufbewahrte Erythrozyten k nnen schw chere Reaktionen zeigen e _ M gliche Ursachen f r ein falsches Ergebnis Kontamination der Probe oder des verwendeten Reagenzes Unzureichende Lagerung oder Vorbereitung der Erythrozyten Autoantik rper Antik rper gegen Antibiotika K lteantik rper Positiver Direkter Anti Globulin Test Stark lip mische oder ikterische Proben Bei zweifelhaften Ergebnissen unklarer Ursache steht der Bio Rad Service Tel 06103 3130 611 f r R ckfragen zur Verf gung Haltbarkeit Die Lagerungstemperatur von Seraclone Anti k KEL2 ist 2 8 C Nach ffnung des Reagenzes ist das Produkt bei sachgem er Lagerung bis zum Ende der angegebenen Laufzeit haltbar Die Laufzeit ist
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