Uso de Trichoderma spp para control del complejo
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1. Uso de Trichoderma spp para control del complejo Moniliasis Escoba de Bruja del cacao en Ecuador Karina Solis Hidalgo amp Carmen Su rez Capello Instituto Nacional Aut nomo de Investigaciones Agropecuarias Estaci n Experimental Tropical Pichilingue Departamento Nacional de Protecci n Vegetal PO Box 24 Quevedo Los R os Ecuador carinasolis a yahoo com protveg aAhotmail com Resumen Especies del g nero Trichoderma T koningiopsis y T stromaticum aisladas en el h bitat donde se desarrollan las enfermedades del cacao se presentan z n vitro como supresores de la Moniliasis Moniliophthora rorer y Escoba de bruja Crimipellis perniciosa Para evaluar estos agentes a nivel de campo e integrar el componente biol gico al manejo integrado del cultivo se realizaron dos experimentos aplicando conidias de T koningiopsis y T stromaticum 10 esp mL solos y en mezcla en comparaci n con xido Cuproso 3 0 g 1a rbol y Azoxystrobina 0 75 mL p c rbol Las aplicaciones se hicieron quincenal y mensualmente para los biocontroladores y mensualmente los fungicidas durante la poca lluviosa Antes de la intervenci n se eval o la micoflora presente en los lotes sin detectar presencia de Trichoderma En este primer a o no hubo diferencias significativas entre los aislamientos sin embargo se encontr menor n mero de mazorcas esporuladas con M rorer y frutos Cherelles en los tratamientos con T koningiopsis La pro2. Aplication of chemical and biological agents for the management of frosty pod rot Moniliophthora rorerr in Costa Rica cacao Theobroma cacao Annais of Applied Biology 147 129 138 CARVALHO A LOGUERCIO L AITKEN M COSTA T POMELLA A 2005 Desenvolvimento de bioensaio para sele ao de isolados de Trichoderma stromaticum correlacionando esporulagao em campo com colonizagao em laboratorio In Annais VIII Reuniao de Control Biol gico de Fitopat genos Ministerio da Agricultura pecu ria e Abastecimiento CEPLAC BR p 114 CHANG Y BAKER R KLEIFELD O CHET L 1986 Increased growth of plants in the presence of the biological control agent Trichoderma harzianum Plant Disease 70 145 148 COSTA M XIMENES E POMELLA A LOGUERCIO L DE MARCO J CARVALHO L 2005 Projeto Proteoma de Trichoderma stromaticunt identificagao caracterigao e an lise funcional de prote nas envolvidas no controle biol gico do pat geno de cacau Crinipellis perniciosa In Annais VIII Reuniao de Control Biol gico de Fitopat genos Ministerio da Agricultura pecu ria e Abastecimiento CEPLAC BR p 129 130 DUBOS B 1987 Fungal antagonism in aerial agrobiocenoses In I Chet ed Innovative Approaches to plant disease control New York p 107 135 DURANGO W 2001 Evaluaci n de fungicidas y biocontroladores en el manejo de enfermedades de la mazorca de cacao Tesis Ing Agr Universidad de Guayaquil Ecuador 69p ELIAS R A
3. 49 horas luz a o Las parcelas se ubicaron en dos lotes de cacao con clones Tipo Nacional EET 95 EET 103 y EET 96 y CCN 51 de aproximadamente tres y seis a os de edad respectivamente 1 Coordenadas geogr ficas registradas con GPS Global Positioning System Localizador Satelital por Coordenadas 315 MAGELLAN 2 pa Datos tomados de los a os 1998 2004 Estaci n Meteorol gica del INAMHI Estaci n Experimental Tropical Pichilingue INIAP Tabla 1 Concentraci n de suspensiones frecuencia y n mero de aplicaciones de los tratamientos en Nuevo Bamb y El Chollo Aplicaciones Tratamientos Concentraci n Nuevo Bamb El Chollo Frecuencia N Frecuencia N T koningiopsis 10 esp mL Quincenal 9 T stromaticum 10 esp mL Quincenal 9 T koningiopsis T stromaticum 10 esp mL 1 1 Quincenal 9 Mensual 5 Oxido cuproso Cobre Nordox 50 3 0 gr 1 a rbol Mensual 4 Azoxistrobina Bankit 0 45 mL p c rbol Mensual 4 Testigo Sin aplicaci n Se calcula un gasto de 200 mL y 160 mL de agua por rbol Manejo de los experimentos En ambos lotes se realiz una poda sanitaria y eliminaron mensualmente los chupones en Nuevo Bamb se seleccionaron al azar 48 rboles con suficiente producci n se fertiliz y aplic Glifosato para controlar malezas El experimento se realiz bajo un Dise o Completamente al Azar con 6 tratamientos y ocho unidades p
4. RCOS O ARBELAEZ G 1989 Estudio del antagonismo de algunas especies de Trichoderma sobre Fusarium oxysporum y Rhizoctonia solani Agronom a Colombia 6 25 30 FOKKEMA N 1995 Strategies for biocontrol of foliar fungal diseases In M Manka Ed Environmental Biotic Factors in Integrated Plant Disease Control The Polish Psychopathological Society Pozman p 69 79 HEBBAR P KRAUSS U SOBERANIS W LAMBERT S MACHADO R DESSIMONL C AITKEN M 1999 Biocontrol of cacao diseases in Latino America status of field trials In Workshop Manual Research Methodology for the Biological Control of Plant Diseases with special reference to fungal diseases of cacao CATIE Costa Rica Krauss U and Hebbar P eds JIMENEZ J GALINDO J RAMIREZ C ENRIQUEZ G 1988 Evaluaci n del combate biol gico y qu mico de la moniliasis Moniliopthora rorer del cacao en Costa Rica In 10 Conferencia Internacional de Investigaci n en cacao p 453 456 KRAUSS U y SOBERANIS W 2003 Biological control of frosty pod Moniliopthora rorer1 and other pod pathogens in Peru In 13 Conferencia Internacional de Investigaci n en cacao p 741 748 KREDICS L ANTAL Z MANCZINGER L SZEKERES A KEVEI F ERZSEBET N 2003 Influence of environmental parameters on Trichoderma strains with biocontrol potencial Food Technology Biotechnology 41 1 37 42 MACAGMAN D ROMEIRO R POMELLA A 2005 Eficiencia de bacterias do tipo a
5. as en porcentajes de mazorcas Escoba y Phytophthora Sin embargo Azoxistrobina present menor porcentaje de Phytophthora y T koningiopsis el menor n mero de Cherelles Wilt Tabla 3 B Establecimiento de T Koningiopsis y T stromaticum En muestreos n vitro tronco frutos tiernos mazorcas maduras flores y cojinetes florales se recuper T koningiopsis Tabla 4 En el testigo se obtuvieron los g neros Merospora Cladosporium y Fusarium Tabla 4 Porcentaje de recuperaci n de 7 koningiopsis en rboles aplicados Nuevo Bamb EET Pichilingue de T koningiopsis Tratamientos Frutos Escobas Tronco Cojinetes Flores Sanos Pepinos Verdes Secas Antes Durante Posterior Posterior Posterior T koningiopsis 100 75 0 63 0 75 38 88 100 T stromaticum 0 0 0 0 0 0 0 0 0 T k 1 s 50 50 0 75 0 63 38 75 50 Testigo 0 0 0 0 0 0 0 0 0 DISCUSION Antes de las aplicaciones de T koningiopsis T stromaticum no se encontraron especies nativas en las parcelas lo que podr a deberse al manejo del cultivo que probablemente afecta a las poblaciones nativas microorganismos ben ficos incluyendo Trichoderma spp Kredics ef al 2003 La reducci n de enfermedades en parcelas tratadas con T koningiopsis y T stromaticum fue similar a la obtenida con fungicidas Esto concuerda con Papavizas 1985 T koningiopsis se estableci en las plantas y control a M rorer igual que los f
6. aticum 24 19 27 29 Azoxistrobina 29 16 31 24 Oxido de cobre 33 18 23 26 Testigo 25 17 26 32 En El Chollo el efecto de Trichoderma y fungicidas sobre la producci n de mazorcas sanas fue igual Sin embargo los frutos infectados fueron similares en comparaci n con el testigo Analizando por separado mazorcas infectadas y Cherelles se encontr diferencia en porcentajes de Monilia los fungicidas y T koningiopsis presentaron niveles de infecci n similares entre s y estad sticamente diferentes al testigo Tabla 3 Tabla 3 Porcentaje de mazorcas producidas en parcelas aplicadas con T koningiopsis T stromaticum y fungicidas El Chollo ORECAO dos de Mazorcas Mazorcas infectadas Sanas Enfermas Monilia Escoba Phytophthora Cherelles T koningiopsis T k 48 22a 51 78 b 19 10b 29 87 a 2 52 a 18 18 c T stromaticum T s 50 40 a 49 60 b 19 88 ab 27 22 a 2 22 a 25 78 ab TK T Ss 50 02 a 49 99 b 18 61 b 27 42 a 3 91a 19 16b Azoxistrobina 54 62 a 45 38 b 18 43 b 25 22 a 1 56 a 23 71 b Oxido de cobre 54 47 a 45 54 b 19 37 b 23 04 a 3 13 a 32 31 a Testigo 34 34b 65 66 a 28 57 a 33 59 a 3 50 a 20 14 b CV 13 14 13 23 23 34 24 47 58 10 14 69 Duncan al 5 P lt 0 05 promedios que comparten la misma letra no difieren estad sticamente entre s T koningiopsis solo o combinado present valores menores de Monilia No se presentaron diferenci
7. aticum mejoraron la sanidad del cultivo disminuyendo la incidencia de enfermedades e incrementaron la producci n de mazorcas sanas Redujeron la Moniliasis de manera similar a los fungicidas evaluados T koningiopsis fue el organismo mas eficaz para control se adapt al agroecosistema del cacao pudiendo sobrevivir asociado al cultivo durante la poca seca Se recomienda realizar evaluaciones con 7 koningiopsis T stromaticum y Azoxystrobina combinados en el manejo integrado de enfermedades con diferentes dosis m todos formulaciones y pocas de aplicaci n de los agentes de control biol gico AGRADECIMIENTOS A Drs Prakash Hebbar MARS MASTERFOODS Keith Holmes CABI Bioscience y Gary Samuels USDA ARS por su colaboraci n cient fica y financiera en el desarrollo de esta investigaci n A los estudiantes Raquel Guerrero David Arias Marlon D as y Ra l Pucha BIBLIOGRAF A ARNOLD E 1999 Fungal endophytes of tropical trees methods and potential for biological control of fungal pathogens of cacao In Workshop Manual Research Methodology for the Biological Control of Plant Diseases with special reference to fungal diseases of cacao CATIE Costa Rica Krauss U and Hebbar P eds BASTOS C 1996 Potencial de Trichoderma viride no controle da vassoura_de_bruxa Crimpelis perniciosa do cacaueiro Fitopatologia Brasileira 21 509 512 BATEMAN R HIDALGO E GARCIA J ARROYO G HOOPER G ADONIJAH V KRAUSS U 2005
8. control de enfermedades de la mazorca de cacao Con estos antecedentes en este trabajo se evalu a nivel de campo la eficacia y establecimiento de los agentes de control biol gico T koning10psis y T stromaticum para el control de M rorer y C perniciosa comparado con el xido de Cobre y Azoxistrobina con la finalidad de integrar al componente biol gico dentro del manejo integrado del cultivo MATERIALES Y M TODOS Especies nativas de Ecuador Colecci n de hongos antag nicos Laboratorio de Fitopatolog a Departamento Nacional de Protecci n Vegetal Estaci n Experimental Tropical Pichilingue del INIAP probados n vitro y seleccionados por su agresividad 7 koningiopsis 509 y T stromaticum 01 se aplicaron en dos lotes de cacao durante enero hasta mayo del 2005 Tabla 1 Un lote de h bridos IMC 67 x SCA 6 y EET 19 x SILECIA 1 de 40 a os de edad denominado Nuevo Bamb EET Pichilingue se encuentra a cinco kil metros de la v a El Empalme sus coordenadas geogr ficas 79 28 06 de longitud oeste y 01 0524 de latitud sur a 85msnm Con una precipitaci n de 2442 6mm 25 C 85 15 de humedad relativa y 889 4 horas luz a o El lote comercial El Chollo de la empresa exportadora ORECAO S A ubicado en La Cadena Provincia de Los R os Sus coordenadas son 79 25 09 de longitud oeste y 0 54 11 de latitud sur a 90 msnm Con una precipitaci n de 3278 mm 25 C 87 de humedad relativa y 9
9. ctinomicetos e endoporogenicas na inhibigao da germinagao de basidoporos de Crimipillis perniciosa em frutos de cacau In Annais VIII Reuniao de Control Biol gico de Fitopat genos Ministerio da Agricultura pecu ria e Abastecimiento CEPLAC BR p 97 98 PAPAVIZAS G 1985 Trichoderma and Gliocladiunz Biology ecology and potential for biocontrol Annual Review of Phytopathology 23 23 24 RAM A 1989 Biology Epidemiology and Control of Moniliasis Moniliophthora roreri of cacao Thesis PhD Imperial College of Science and Technology University of London England p 46 153 SAMUELS G PARDO SCHUKTHEISS C HEBBAR P LUMSDEN R BASTOS C COSTA N BEZERRA J 2000 Trichoderma stromaticum sp nov a parasite of the cacao witches broom pathogen Mycol Res 104 6 760 764 SANDOVAL G AMBRECHT H GRANADA G 1987 Posibilidad de control biol gico de la Moniliasis del cacao El Cacaotero Colombiano 10 34 39 SOLIS H Z K 1999 Determinaci n de organismos antag nicos a Monilia rorer a partir de mazorcas de cacao dejadas en el suelo Tesis Ing Agr Universidad de Guayaquil Ecuador 55p SU REZ C C 1971 Estudio del mecanismo de penetraci n y del proceso de infecci n de Monilia rorer Cif amp Par en frutos de cacao Theobroma cacao Tesis Ing Agr Universidad de Guayaquil Ecuador 59p SU REZ C 1993 Enfermedades de cacao y su control In Su rez C ed Manual del Cultivo de Cacao 2da Ed Qu
10. ducci n de mazorcas sanas aumento entre 16 y 20 en relaci n al testigo con todos los tratamientos T koningiopsis pudo ser recuperado del tronco mazorcas sanas y frutos tiernos as como de flores y cojinetes florales hasta cuatro meses despu s de la ltima aplicaci n En ning n caso se recuper T stromaticum INTRODUCCION Las principales enfermedades que azotan al Ecuador son Escoba de Bruja y Moniliasis causadas por Crimipellis perniciosa y Moniliophthora rorer respectivamente ocasionan p rdidas del 60 la producci n La diseminaci n de C perniciosa depende de basidiocarpos formados sobre escobas secas M rorer es especializado en frutos Su rez 1993 se dispersa por el viento las esporas que crecen abundantemente en la superficie de la mazorca colonizan internamente y los s ntomas aparecen luego 60 d as de la infecci n Su rez 1971 Ram 1989 Su control empieza bajando la altura del rbol mediante un descope poda sanitaria anual y remoci n semanal de mazorcas enfermas La protecci n de frutos con Oxido Cuproso Clorotalonil reduce infecciones en un 40 Su rez 1993 la Azoxistrobina ejerce control de M rorer Durango 2001 La selecci n de materiales con resistencia gen tica es compleja y precisa de tiempo para su disponibilidad al agricultor Su rez 1993 La b squeda de alternativas mediante selecci n y reintroducci n de microorganismos antag nicos a M rorer y C perniciosa constituye u
11. evedo Ecuador EET Pichilingue Manual T cnico No 25 p 90 116 SU REZ C C SOL S H K 2003 Hacia el control biol gico de las pudriciones de mazorcas en cacao P ster presentado In 14 Internacional Cocoa Research Conference Accra Ghana
12. lantas de observaci n En El Chollo se desarroll bajo Dise o de Bloques Completos al Azar con seis tratamientos y tres repeticiones Dos repeticiones se ubicaron en cacao Nacional y una en CCN 51 Parcelas con 64 rboles 36 6 x 6 fueron aplicados y 16 4 x 4 evaluados como parcela til En laboratorio se sub cultivaron T stromaticumy T koningiopsis en medio papa dextrosa agar PDA DIFCO Se usaron esporas T koningiopsis producidas en sustrato s lido arroz y T stromaticum obtenido en medio l quido melaza levadura de cerveza Se suspendieron a concentraciones establecidas y a adi Tween 20 0 05 v v Antes de las aplicaciones en Nuevo Bamb se colectaron muestras de mazorcas sanas enfermas tronco y Escobas vegetativas en 10 rboles del ensayo Segmentos de tronco se aislaron directamente en campo PDA m s Cloranfenicol 0 05 Las muestras se trasladaron al Laboratorio se lavaron desinfectaron Cloro comercial 5 e inocularon en PDA Las aplicaciones se realizaron con bombas de presi n retenida Jacto boquilla de cono color azul separadas para cada tratamiento Durante la cosecha se colect y aisl PDA m s Rosa de bengala 0 005 una mazorca sana por rbol Trichoderma spp y testigo Los cultivos se incubaron a 25 C durante siete d as En El Chollo al inicio del experimento se colectaron y aislaron muestras del tronco y mazorcas en 20 rboles Las aplicaciones se realiza
13. na atractiva soluci n presentando riesgos menores que los derivados por fungicidas Sol s 1999 Hebbar ef al 1999 Samuels ef a l 2000 Su rez y Solis 2003 reduciendo la capacidad del pat geno para producir in culo Fokkema 1995 Existen pocos reportes de control biol gico de pat genos en cacao Hebbar ef al 1999 Solis 1999 especies endof ticas se mencionan con gran potencial Arnold 1999 Bacterias como Pseudomona aeruginosa Leuconostoc mesenteroides Bacillus subtillis P cepacia han sido evaluadas ampliamente en el control de Moniliasis Sandoval ef a 1987 Jim nez ef al 1988 Macagnan ef al 2005 Los hongos Cladobotryum amazonense Hypomyces spp Verticillium lecan Penicillium spp Clonostachys spp Ghocladium Trichoderma spp Aspergillus niger Acremonium spp Didymella spp Nectria spp Didymostilbe spp se han identificado como antagonistas de enfermedades del cacao Krauss y Soberanis 2003 Su rez y Solis 2003 Bateman ef al 2005 T stromaticumes usado en Brasil para controlar C perniciosa Carvalho ef al 2005 evita la formaci n de basidiocarpos Samuels ef al 2000 parasita hifas de C perniciosa en el interior de las escobas secas Costa ef a 2005 En Ecuador el INIAP ha seleccionado microorganismos antag nicos a M rorer y C perniciosa De stos T koningiopsis antes llamado 7 koningii Sol s 1999 Su rez y Solis 2003 y T stromaticum son las especies mas promisorias para el
14. ron con equipos motorizados de espalda Jacto8 Polijacto PL 50BV Quincenalmente se registr la producci n de frutos sanos se removieron y contaron mazorcas Monilia Phytophthora Cherelles Wilt frutos marchitos de hasta 10 cm y Escoba A mediados y luego de cuatro meses de la ltima aplicaci n con Trichoderma sp 3 Metodolog a de producci n masiva de Biocontroladores EET Pichilingue INIAP en Nuevo Bamb se aislaron en campo muestras del tronco y cojinetes florales se colectaron flores frutos tiernos y se aislaron en laboratorio RESULTADOS A Eficacia de T koningiopsis y T stromaticum para el control enfermedades frente al Oxido de Cobre y Azoxistrobina El muestreo zn vitro de especies nativas en mazorcas sanas enfermas tronco y escoba vegetativas previo a las aplicaciones indic ausencia de T koningiopsis y T stromaticun se aislaron colonias de los g neros Colletotrichum Diploida Fusarium Cladosporium y NMigrospora En Nuevo Bamb promedios del total de mazorcas cosechadas indicaron efecto de Trichoderma y los fungicidas 7 koningiopsis present menores niveles de Monilia y frutos Cherelles Tabla 2 Tabla 2 Porcentaje de mazorcas sanas Monilia enfermas y Cherelles Wilt Nuevo Bamb EET Pichilingue Tratamientos A de Mazorca Sanas Monilia Enfermas Cherelles T koningiopsis 27 14 36 23 T stromaticum 27 23 24 27 T koningiopsis T strom
15. ungicidas evaluados esto indica que actuar a bajo las mismas condiciones del pat geno caracter stica de vital importancia en la selecci n del antagonista Dubos 1987 este efecto podr a deberse a que la especie proviene de mazorcas infectadas Sol s 1999 al respecto Krauss y Soberanis 2003 indican que el rea vegetal donde fue aislado el antagonista determina donde ejercer a un mejor control de la enfermedad Los biocontroladores no tuvieron efecto significativo sobre C perniciosa Sin embargo T stromaticum present niveles similares a los fungicidas esto probablemente se debe a que la presi n de in culo influy en los resultados Su rez 1993 El efecto de T stromaticum es indirecto inhibiendo la formaci n de basidiocarpos se reduce la cantidad de esporas para futuras infecciones Bastos 1996 La disminuci n de frutos Cherelles Wilt con 7 koningiopsis concuerda con el efecto estimulante de Trichoderma spp Chang et al 1986 Elias ef al 1989 Al parecer T koningiopsis adem s de disminuir las infecciones de M rorer podr a reducir la formaci n Cherelles Wilt La presencia de g neros Colletotrichum Diploida Fusarium Cladosporium y Nigrospora en flores frutos tiernos y cojinetes florales en los rboles testigo sugiere que stos son reprimidos por T koningiopsis y de all su influencia en mayor cuajamiento y desarrollo de frutos CONCLUSIONES Las aplicaciones de 7 koningiopsis y T strom
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