ARTCULO ORIGINAL
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1. Guldberg P Eiberg H Krogdahl A Liu CJ Genetic and epigenetic alterations of the blood group ABO gene in oral squamous cell carcinoma Int J Cancer 2004b 109 230_7 8 Mandel U Orntoft TF Holmes EH Sorensen H Clausen H Hakomori S et al Lewis blood group antigens in salivary glands and stratified epithelium lack of regulation of Lewis antigen expression in ductal and buccal mucosal lining epithelia Vox Sang 1991 61 205_4 9 Hakomori S Handa K Glycosphingolipid dependent cross talk between glycosynapses interfacing tumor cells with their host cells essential basis to define tumor malignancy FEBS Lett 2002 531 88_92 10 Ravn V Dabelsteen E Tissue distribution of histo blood group antigens APMIS 2000 108 1_ 28 11 Walkers J American Association of Blood Banks Manual t cnico 13 ed Asociaci n Argentina de Hemoterapia e Inmunohematolog a Buenos Aires 2002 12 Strauchen JA Bergman SM Hanson TA Expression of A and B Tissue Isoantigens in benign and malignant lesions of the Breast Cancer 1980 45 2149 61 13 Strauchen JA Bergman SM Hanson TAM 1998 Expression of A and B Tissue Isoantigens in benign and malignant lesions of the Breast Cancer 45 2149 55 14 Ravn V Dabelsteen E Tissue distribution of histo blood group antigens APMIS 2000 108 1_28 15 Hakomori S Antigen structure and genetic basis of histo blood groups A B and O their changes associated with human cancer Biochim Biophys Acta 19992. tambi n se encuentran en todos los tejidos epiteliales y endoteliales 1 Cuando las c lulas normales se transforman en malignas estos ant genos se pierden y por lo tanto esta deleci n podr a ser utilizada como una herramienta de diagn stico para la detecci n y pron stico del c ncer oral En conclusi n nuestros resultados indicar an que al mismo tiempo que ocurren cambios morfol gicos durante el proceso de carcinog nesis oral ocurren otras series de eventos De todos modos son requeridos mayores estudios para clarificar el rol de los marcadores predictivos en lesiones precursoras de c ncer oral REFERENCIAS BI BLI OGR FI CAS 1 Mollison PI Emgelfriet CP Contreras P Blood Transfusion En Clinical Medicine 9 ed Oxford Blackwell Scientific Publications 1993 2 Salmon C Les Groupes sanguins ou ecriture des Genes Paris Editorial Masson 1997 3 Clausen H Bennett EP Grunnet N Molecular genetics of ABO Vox Sang 1994 78 Suppl 2 91_ 103 4 Le Pendu J Marionneau S Cailleau Thomas A Rocher J Moullac Vaidye B Clement M ABH and Lewis histo blood group antigens in cancer APMIS 2001 109 9 31 5 Hakomori S Antigen structure and genetic basis of histo blood groups A B and O their changes associated with human cancer Biochim Biophys Acta 1999 1473 247_66 6 Hakomori S Glycosylation defining cancer malignancy new wine in an old bottle Proc Natl Acad Sci USA 2002 99 10231_3 7 Gao S Worm J
3. lulas de mucosa yugal en buffer fosfato salino PBS pH 7 4 Se enfrent cada bater a con igual volumen de antisueros de distinta especificidad anti A anti B y lectina Ulex europeus convenientemente diluidos Los tubos se incubaron 10 minutos a temperatura ambiente y se revelaron con una suspensi n de gl bulos rojos isogrupo al 5 en PBS Se centrifug a 1 000 rpm durante 1 minuto y se observ aglutinaci n macrosc pica Con esta t cnica se eval a en forma indirecta la presencia de ant genos ABH solubles T cnica de inmunoadherencia Las muestras de tejido proveniente de las lesiones orales premalignas y malignas n 57 conservadas en bloque de parafina fueron sometidas a cortes con micr tomo para obtener secciones de 4 mm de espesor y posteriormente fueron adheridos sobre un portaobjetos Luego se desparafinaron por cambios en solvente xilol y alcohol se colorearon con hematoxilina y lavaron con buffer Tris salina isot nico Ph 7 4 durante 5 min eliminando el exceso de buffer Las secciones fueron cubiertas durante diez minutos a temperatura ambiente con antisuero monoclonal anti A anti B o lectina anti H Ulex europeus en concentraci n ptima de acuerdo al grupo sangu neo espec fico del paciente Los portaobjetos colocados en un vaso de Coplic se incubaron 3 veces con buffer Tris durante 15 min para eliminar el antisuero o la lectina anti H en exceso Cada secci n fue cubierta con una suspensi n de eritro
4. 1473 247_66 16 Sol s E Provenzal O Valverde J Biondi C Foresto P Muller R et al Comparative study of the ABH antegenic expression between urothelium and buccal desquamation cells in patients with bladder carcinoma Acta Urol Ital 1997 1 187 8 17 Foresto P Biondi C Racca L Brufman A Yaber F Sol s E Provenzal O Valverde J Glicosilaci n anormal de ant genos ABH solubles en patolog as tumorales del tracto urinario Arch Esp Urol 2000 53 196 9 18 Santos Garc a A Abad Hern ndez MM Fonseca S nchez E Juli n Gonzalez R Galindo Villard n P Cruz Hern ndez J E cadherin laminin and collagen IV expression in the evolution from dysplasia to oral squamous cell carcinoma Med Oral Patol Oral Cir Bucal 2006 11 E100 5 19 Ravn V Dabelsteen E Tissue distribution of histo blood group antigens APMIS 2000 108 1_28 Dra Claudia Biondi Laboratorio de nmunohematologia Histocompatibilidad e Inmunogen tica Departamento de Bioqu mica Cl nica Facultad de Ciencias Bioqu micas y Farmac uticas Universidad Nacional de Rosario Alvear 696 2000 Rosario Argentina Tel 54 341 4804592 Fax 54 341 4370765 e mail cbiondi fbioyf unr edu ar
5. ART CULO ORIGINAL P rdida de la expresi n antig nica ABH en pacientes con lesiones orales precancerosas y cancerosas Loss of ABH antigenic expression in patients with precancerous and cancerous oral lesions Dr Carlos Campi Prof Dra Livia Escovich Prof Dra Amelia Racca Dra Silvia Garc a Borr s Est Liliana Racca Dr Carlos Cotorruelo Dr Claudia Biondi C tedra de Estomatolog a Facultad de Odontolog a Departamento de Bioqu mica Cl nica Facultad de Ciencias Bioqu micas y Farmac uticas RESUMEN Los ant genos ABH productos de la interacci n de 2 sistemas gen ticos Hh y ABO est n sujetos a leyes de herencia y pueden estar localizados no s lo en los eritrocitos sino tambi n en la mayor a de las c lulas humanas El objetivo del este trabajo fue investigar la expresi n de ant genos ABH en pacientes con lesiones orales premalignas y malignas orales Se trabaj con muestras incluidas en tacos de parafina de pacientes con lesiones orales n 57 Los pacientes fueron clasificados en 2 grupos a lesiones premalignas y malignas diagnosticadas cl nica y anatopatol gicamente y b lesiones benignas n 93 Se investigaron los ant genos ABH por la t cnica de inmunoadherencia espec fica modificada Se utiliz la adherencia al tejido vascular como control positivo y al tejido adiposo como control negativo Los resultados fueron semicuantificados desde adherencia fuertemente positiva a nega
6. calizaci n de los ant genos de grupo sangu neo en los tejidos han indicado que los mismos corresponden al grupo sangu neo eritrocitario Asimismo la expresi n de estos ant genos en tejidos normales es dependiente del tipo de diferenciaci n del epitelio y del grado de maduraci n de la c lula individual en el epitelio En epitelio estratificado la expresi n de dichos ant genos depende del grado de maduraci n celular presentando una elongaci n secuencial del carbohidrato terminal de la cadena durante su vida media En el presente trabajo el an lisis de los cortes de tejidos demostr que los pacientes con mayor grado de malignidad o con lesiones pre malignas presentaron una deleci n total o parcial de los ant genos de grupo sangu neo ABH La p rdida antig nica observada en las c lulas de lesiones pre malignas y malignas podr a ser consecuencia de un paro en la maduraci n de los ant genos celulares Adem s la p rdida de la expresi n de los ant genos en las secciones de tejido de las lesiones tumorales se encuentra significativamente correlacionada con el grado del desarrollo del tumor y el grado de malignidad histol gico 18 Los estudios de los pacientes con lesiones orales premalignas y malignas mostraron que la p rdida de la expresi n antig nica ABH podr a ser utilizada como marcadores de riesgo en el desarrollo de c ncer oral Los ant genos A B y H que est n presentes en la superficie de los eritrocitos
7. citos isogrupo al corte en estudio al 5 en PBS durante 15 min Los gl bulos rojos pueden adherirse a la secci n de tejido desparafinado v a antisuero o lectina Posteriormente se colocaron los preparados invertidos sobre dos barras soporte en una caja de Petri conteniendo buffer Tris para que los eritrocitos est n en contacto con la soluci n buffer lo cual permite eliminar los eritrocitos no adheridos Se incub durante 30 min y se observaron microsc picamente Se utilizaron como controles positivos el tejido vascular y como controles negativos el tejido adiposo Interpretaci n Los resultados fueron semicuantificados desde adherencia fuertemente positiva a adherencia negativa de acuerdo al porcentaje de c lulas del tejido en estudio con hemat es adheridos Se utilizaron para designar niveles intermedios de adherencia equivalente al 25 de adherencia a 50 y a 75 An lisis estad stico Se aplic el test de Chi cuadrado para el an lisis de posibles asociaciones entre las variables predictivas y de impacto en el estudio Se calcularon razones de Odds y se estimaron los intervalos de confianza RESULTADOS Los datos obtenidos de la expresi n ABH en muestras de tejidos de lesiones orales se presentan en la tabla Se observa una asociaci n significativa entre deleci n de los ant genos ABH en muestras de lesiones orales y grado de malignidad de las lesiones orales p Yates 0 005 Tabla As
8. ignos Se considera que la ausencia de los ant genos A B en estas patolog as es consecuencia de una alteraci n en los genes que codifican las glicosiltransferasas En pacientes con p rdida de estos ant genos una proporci n variada de c lulas rojas no son capaces de aglutinar con los reactivos espec ficos dando una reacci n caracter stica de campo mixto Igualmente este tipo de reacciones puede aparecer en individuos sanos asociados a raros alelos que codifican a los genes ABO Existe amplia evidencia de que el c ncer est asociado con anormalidades en la regulaci n g nica y su expresi n en la superficie de la membrana celular Las alteraciones pueden ocurrir por bloqueo directamente de las mol culas superficiales de la c lula que median la interacci n o alteraciones en su s ntesis organizaci n del desarrollo y diferenciaci n En tumores es posible encontrar cambios tanto en los glicol pidos como en las glicoprote nas La mayor a de los estudios han investigado las alteraciones en los carbohidratos de la superficie celular En recientes investigaciones se ha demostrado que las modificaciones en la glicosilaci n participan en la mayor a de los fenotipos malignos incluyendo se ales de transducci n y apoptosis Considerando que la mayor a de los c nceres humanos se originan a partir de c lulas epiteliales los cambios en los grupos sangu neos constituyen un t pico importante de la inmunolog a tumora
9. l El objetivo de este trabajo fue investigar la expresi n antig nica ABH en cortes histol gicos de pacientes con lesiones orales premalignas y malignas M TODOS Se trabaj con muestras de pacientes con lesiones orales premalignas y malignas n 57 clasificados seg n el grado anatomopatol gico e individuos con lesiones orales benignas n 93 Tambi n se analiz una poblaci n de individuos sin patolog a demostrable n 81 Todos los pacientes estudiados fueron derivados de la C tedra de Estomatolog a de la Universidad Nacional de Rosario con consentimiento informado previo Los ant genos ABH en c lulas de cortes histol gicos de pacientes con lesiones orales pre malignas y malignas fueron estudiados por la t cnica de inmunoadherencia 1 Las lesiones benignas fueron analizadas por la misma t cnica Se obtuvo muestra de mucosa yugal de los pacientes que fueron considerados controles normales Se utiliz la t cnica de inhibici n de la aglutinaci n para detectar la presencia de ant genos solubles de grupo sangu neo ABO C lulas de mucosa yugal se obtuvieron por raspado de la cavidad interna de la boca y colectadas en tubo con 1mL de soluci n salina Las mismas fueron sometidas a sucesivos choques t rmicos 3 veces Se centrifugaron las muestras y se trabaj con el sobrenadante T cnica de inhibici n de la aglutinaci n Se realizaron 3 bater as de diluciones geom tricas al medio del material en estudio c
10. ociaci n entre histoantigenos ABH y patolog a oral PRECANCER BENIGNAS CANCER n n DELECI N 51 894 36 38 7 parcial o total CONSERVACI N 6 10 6 57 61 3 Las lesiones analizadas de precancer y c ncer oral mostraron una deleci n del 89 4 en las muestras analizadas mientras que el 10 6 conserv la expresi n antig nica ABH En las lesiones benignas diagnosticadas anatomopatol gicamente el 38 7 de las mismas presentaron una p rdida de la reactividad antig nica y el 61 3 restante conserv su expresi n Al analizar la presencia de ant genos ABH en muestras de mucosa yugal por la t cnica de inhibici n de la hemaglutinaci n en los 81 pacientes sin patolog a demostrable controles normales se observ que todas 100 conservaban su reactividad DISCUSI N Los glucoconjugados de membrana de las c lulas epiteliales presentan carbohidratos antig nicos relacionados con las sustancias de grupo sangu neo Durante la progresi n a la malignidad estos oligosac ridos inmunodominantes sufren alteraciones espec ficas El cambio m s frecuente y destacable en las determinantes de grupo sangu neo asociado con c ncer humano es la deleci n de ant genos de grupos sangu neos A Bo H En el diagn stico histopatol gico de rutina la clasificaci n del tipo de tumor est basado en la apariencia histol gica de la mayor a de las partes diferenciadas del tumor Por otro lado el pron stico de la enfe
11. rmedad est basado parcialmente en el grado de diferenciaci n del tejido En la mayor a de los casos el grado de diferenciaci n est determinado por la morfolog a celular del tejido analizado y por la capacidad de las c lulas de sintetizar productos espec ficos tales como queratina y mucina Previamente ha sido demostrado que la expresi n de los carbohidratos sobre la superficie celular de epitelio estratificado est relacionado a la diferenciaci n celular 11 En el presente trabajo hemos utilizado la p rdida de la expresi n de los ant genos ABH como marcador de diferenciaci n celular Como la expresi n de estos ant genos puede ser detectada a trav s de anticuerpos monoclonales constituye un marcador de diferenciaci n m s com nmente utilizado en ensayos histol gicos subjetivos Se acepta que los tumores est n compuestos por poblaciones celulares heterog neas con distinto comportamiento biol gico Para obtener una ptima informaci n del pron stico sobre el tumor se deber a estudiar todas las subpoblaciones celulares Si la biopsia recogida no es representativa del tumor el estudio de la reactividad ABH puede ser relacionado con el grado del tumor en estudio Esto podr a ser valor diagn stico y pron stico de la patolog a en estudio Estudios similares de deleci n de ant genos ABH en c ncer de vejiga mostraron una asociaci n con peor pron stico de la enfermedad La mayor a de los estudios relacionados a la lo
12. tiva Se observ una significativa relaci n entre la expresi n antig nica ABH y el grado de malignidad de las lesiones analizadas P Yates 0 005 La p rdida de reactividad ABH en los sitios de mayor invasividad tumoral se correlaciona con el grado del desarrollo del tumor el grado histol gico y su malignidad Palabras clave ant genos ABH c ncer oral lesi n oral premaligna t cnica de inmunoadherencia t cnica de inhibici n de la aglutinaci n ABSTRACT The ABH antigens which are produced by the interaction of 2 genetic systems Hh and ABO are subjected to laws of heredity and may be located not only in the erythrocytes but also in most of the human cells The objective of this paper was to investigate the expression of ABH antigens in patients with premalignant and malignant oral lesions Work was done with samples included in paraffin plugs in patients with oral lesions n 57 The patients were classified into 2 groups a clinical and anatomopathologically diagnosed premalignant and malignant lesions and b benign lesions n 93 The ABH antigens were investigated by the modified specific immunoadherence technique Adherence to the vascular tissue was used as a positive control whereas adherence to the fat tissue was considered as a negative control The results were semiquantified from strongly positive to negative adherence A significant relation between the ABH antigen expression and the degree of malignancy of the anal
13. yzed lesions P Yates 0 005 was observed The loss of ABH reactivity in the sites of greater tumoral invasiveness is correlated with the tumor development degree the histological degree and its malignancy Key words ABH antigens oral cancer premalignant oral lesion immunoadherence technique agglutination inhibition technique INTRODUCCI N La expresi n de los ant genos del grupo sangu neo ABO no est limitada a los gl bulos rojos tambi n est n presentes en la superficie de otras c lulas del organismo y en las secreciones Estos ant genos confieren propiedades biol gicas esenciales participan en el recambio y el tr fico transcelular y tienen gran importancia para la interacci n celular durante el desarrollo y crecimiento Algunos ant genos pluritisulares son productos secundarios de genes que codifican glucosiltransferasas espec ficas y su expresi n est bajo regulaci n sin rgica de varios sistemas gen ticos entre los que se encuentran los sistemas ABO Hh li Lewis y los relacionados con el car cter secretor del individuo Alteraciones en la expresi n antig nica ABH en s ndromes hematol gicos malignos fue descrita primeramente por van Loghem quien observ una expresi n d bil del ant geno A en un paciente con leucemia mieloide aguda Actualmente la p rdida de la reactividad de los ant genos A B H de la superficie de los hemat es es reconocida como un fen meno recurrente en procesos hematol gicos mal
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