FREE soluble RANKL High Sensitivity
Contents
1. Store at between Lagerung bei zwischen Conserver entre Conservare a tra Conservar a temp entre Armazene a entre Bewaar bij tussen Opbevares mellem F rvaras vid Przechowywa w Taroljuk k z tt Skladujte v rozsahu Skladujte v rozmez Contains sufficient for x tests Inhalt ausreichend f r x Tests Contient suffisant pour x tests Contenuto sufficiente per x test Contiene suficiente para x pruebas Cont m suficiente para x testes Bevat voldoende voor x bepalingen Indeholder tilstr kkeligt til x pr ver Inneh llet r cker till x analyser Zawarto na x test w Tartalma X teszt elv gz s re elegend Obsahuje materi l pre x testov Obsahuje materi l pro x test Authorized Representative for Registration mdi Europa GmbH Langenhagener Str 71 D 30855 Hannover Langenhagen 23 24 Bl 20462 FREE Soluble RANKL HS ELISA ASSAY PROTOCOL AND CHECKLIST PREPARATION OF REAGENTS a Bring all reagents to room temperature 18 24 C a Prepare reagents and samples as instructed a Bring unused and prepared components to the storage temperature mentioned in the package insert Q Take microtiter strips out of the alu bag and mark positions on the protocol sheet O 1 Prewash wells with 300 ul diluted WASHBUF wash buffer natural cap five times Remove remaining WASHBUF by tapping plate against paper towel after the last wash a 2 Add 50 ul ASYBUF assay buffer red cap in2. ZUSATZLICHES MATERIAL IM KIT e 3selbstklebende Abdeckfolien e QC Protokoll e Protokollblatt Arbeitsanleitung Beipacktext 7 24 4 ZUSATZLICH BENOTIGTES MATERIAL UND GERATE Kalibrierte Prazisionspipetten f r 50 ul 150 ul 200 yl 300 pl inklusive Pipettenspitzen Destilliertes oder deionisiertes Wasser Mikrotiterplattenwascher wird empfohlen K hlschrank 4 C 2 8 C Mikrotiterplattenphotometer mit 450 nm Filter mit Referenzwellenl nge 630 nm wenn verf gbar Millimeterpapier oder Software 5 REAGENZIEN UND PROBENVORBEREITUNG Alle Reagenzien des Kits sind bei 4 C 2 8 C bis zum Ablaufdatum siehe Etikett des Reagenz stabil Probenvorbereitung Abnahme von ven sem Blut mittels standardisierter Blutabnahmer hrchen zur Gewinnung von Serum oder Plasma Wir empfehlen die Zentrifugation des Blutes f r 10 Minuten bei 2000g bevorzugt bei 4 C 2 8 C so schnell wie m glich Das Blut kann vor der Zentrifugation bei 4 C 2 8 C bis zu 24 Stunden gelagert werden Das gewonnene Serum oder Plasma soll so bald wie m glich gemessen werden Fir eine Lagerung sollen die Proben aliquotiert und bei 25 C oder niedriger gelagert werden Bis zu drei Frier Tau Zyklen verandern die Messwerte nicht Lip mische und hamolytische Proben k nnen falsche Ergebnisse liefern Proben vor Verwendung gut mischen Wir empfehlen Doppelbestimmungen f r alle Werte Proben mit Ergebnissen ber dem h chsten Standard 2 pmol l k nnen mit niedrig
3. nnen mit Trockenmittel im Aluminiumbeutel bei 4 C 2 8 C bis zum angegebenen Ablaufdatum gelagert werden 1 Wells vorwaschen Die vorbereiteten Wells 5x mit 300 ul WASHBUF Waschpuffer durchsichtiger Schraubverschluss waschen Nach dem letzten Waschschritt Reste von Waschpuffer durch Ausklopfen auf saugf higem Papier entfernen 2 Pipettieren Sie 50 pl ASYBUF Verd nnungspuffer roter Schraubverschluss in alle wells Pipettieren Sie zus tzlich 150 pl ASYBUF in den Blank 3 Pipettieren Sie 150 pl STD PROBE CTRL Standard Probe Kontrolle in Doppelbestimmung in die Mikrotiterstreifen mit Ausnahme des Leerwertes 4 Streifen gut abdecken und 2 Stunden bei Raumtemperatur 18 24 C inkubieren 8 24 5 Inhalt der Wells verwerfen und 5x mit 300 pl verd nntem WASHBUF Waschpuffer durchsichtiger Schraubverschluss waschen Nach dem letzten Waschschritt Reste von Waschpuffer durch Ausklopfen auf saugfahigem Papier entfernen 6 Pipettieren Sie 200 pl AB biotinylierter sRANKL Antik rper gr ner Schraubverschluss in alle Wells mit Ausnahme des Leerwertes Pipettieren Sie 200 pl ASYBUF Verd nnungspuffer roter Schraubverchluss in den Leerwert Gut mischen 7 Streifen gut abdecken und ber Nacht 18 24 Stunden bei 4 C 2 8 C inkubieren 8 Inhalt der Wells verwerfen und 5x mit 300 pl verd nntem WASHBUF Waschpuffer durchsichtiger Schraubverschluss waschen Nach dem letzten Waschschritt Reste von Waschpuffer durch Ausklopfen au
4. propios rangos de referencia para las muestras que van a ser examinadas No cambiar el tipo de muestras durante el estudio Rango de los est ndares 0 0 0625 0 125 0 25 0 5 1 2 pmol l redee de 1 pg ml 0 05 pmol l MW 20 kD monomero Valores de individuos aparentemente sanos pg ml a pmol l Volumen de la muestra 150 pl de suero humano o de plasma heparinizado L mite de detecci n LLoQ 0 pmol l 3 SD 0 01 pmol l 0 008 pmol l Tiempo de Incubaci n 2 horas 18 24 horas 1 hora 30 min Para mas informacion sobre las caracteristicas del ensayo visite por favor nuestra pagina web www bmgrp com ver ficheros t cnicos Technical Files o contacte con nuestro servicio de atenci n al cliente por e mail export 9 bmgrp com o por tel fono 43 1 29107 45 21 24 10 PRECISION Intra ensayo un operador analiz 5 veces 2 muestras de concentraciones conocidas con un mismo kit Inter ensayo 3 operadores analizaron 12 veces 2 muestras de concentraciones conocidas con 3 kits distintos Intra ensayo n 5 Muestra 1 Muestra 2 Inter ensayo n 12 Muestra 1 Muestra 2 Media pmol l 0 12 1 00 Media pmol l 0 12 1 00 SD pmol l 0 005 0 04 SD pmol l 0 004 0 02 CV 4 4 CV 3 2 Para m s detalles sobre los datos de validaci n y de las caracter sticas visite por favor nuestra pagina web www bmgrp com ver ficheros t cnicos Technical Files o contactar con n
5. 98 102 e RANK ligand mediates progestin induced mammary epithelial proliferation and carcinogenesis Gonzalez Suarez E et al Nature 2010 468 103 107 e Central regulation of body temperature by RANKL RANK pathway Hanada R and Penninger JM Clin Calcium 2011 21 8 1201 1208 e Blockade of receptor activator of nuclear factor kB RANKL signaling improves hepatic insulin resistance and prevents development of diabetes mellitus Kiechl S et al Nature Medicine 2013 19 3 358 363 6 24 1 EINLEITUNG RANKL der Rezeptor Activator des Nuklear Faktor NF kappa B Ligand geh rt zur Familie der Tumor Nekrose Faktoren TNF http www uniprot org uniprot 014788 RANKL ist der wichtigste Faktor f r die Reifung und Proliferation der Osteoblasten RANKL bindet an seinen spezifischen Rezeptor RANK der von Osteoklasten und dentritischen Zellen exprimiert wird Als Gegenspieler zu RANKL fungiert Osteoprotegerin OPG ein l slicher endogener Rezeptor Antagonist siehe BI 20403 OPG ELISA RANKL wird hautps chlich von Osteozyten gebildet ehemaligen Osteoblasten die in der mineralisierten Knochenmatrix eingebettet sind RANKL ist ein 35 kD Typ Il Transmembran Protein und bildet bei Freisetzung einen l slichen biologisch aktiven Komplex aus Homotrimeren RANKL und sein spezifischer Rezeptor RANK sind nicht nur Schl ssel Regulatoren bei der Knochenbildung sondern spielen auch eine wichtige Rolle in der Immunbiologie zB bei der Lym
6. STOP bouchon blanc pr te l emploi 1x7 ml 3 AUTRE MATERIEL INCLUS DANS LA TROUSSE e 3bandes de film adh sif e Le protocole de v rification de contr le qualit e Une feuille de protocole e Le manuel d utilisation 9 MATERIEL NECESSAIRE MAIS NON FOURNI Micropipettes de pr cision calibr es 50 ul 150 ul 200 yl 300 ul avec embouts jetables e Eau distill amp e ou d sionis e e aveur de microplaques utile lors des tapes de lavages e R frig rateur temp rature 4 C 2 8 C 11 24 e Lecteur de microplaques ELISA avec lecture d absorbance 450 nm avec correction de longueur d onde 630 mm e Papier millim tr ou logiciel pour le calcul des r sultats 5 PREPARATION DES REACTIFS ET DES ECHANTILLONS Tous les r actifs de la trousse restent stables 4 C 2 8 C jusqu la date de p remption voir tiquette du r actif Pr paration des chantillons Pr lever un chantillon de sang veineux en utilisant des tubes de pr l vement standard pour s rum ou plasma h parin On recommande la s paration du plasma ou du s rum par centrifugation d s que possible par exemple 10 minutes 2000 x g de pr f rence 4 C 2 8 C S il y a un d lai avant la centrifugation il faut stocker les chantillons 4 C 2 8 C avant la centrifugation pendant 24 heures au maximum Le s rum ou le plasma obtenu devrait tre test s d s que possible Pour une p riode de stockage plus longue pr parer un ali
7. TECHNIQUES e Ne pas remplacer ou m langer les r actifs qui sont fournis avec ce kit avec ceux de lots ou de sources diff rents Ne pas m langer les embouts ou bouchons de r actifs diff rents ni utiliser les r actifs d autres lots Ne pas utiliser les r actifs au dela de leur date d expiration Prot ger les r actifs contre la lumi re La solution de substrat doit tre incolore Pour obtenir les r sultats fiables il est essentiel de sceller correctement la microplaque pendant les tapes d incubation e Eviter de faire mousser les r actifs lors du m lange 12 PRECAUTIONS Les produits d origine humaine utilis s dans ce test ont t test s avec les essais contre le VIH Ab et l AgHbs et ont t trouv s n gatifs Cependant ils doivent tre manipul s comme tant susceptibles de transmettre des maladies infectieuses Tous les r actifs liquides contiennent 0 01 de Proclin 300 comme conservateur Eviter tout contact avec la peau et la muqueuse Proclin 300 n est pas toxique dans les concentrations utilis es dans cette trousse Cependant il peut entra ner les r actions allergiques et tout contact avec la peau ou les yeux doit tre vit e Ne pas pipetter avec la bouche e Nepas manger boire fumer ni appliquer les produits cosm tiques pendant la manipulation des r actifs e Porter les gants pour viter tout contact avec les r actifs e L acide sulfurique irrite les yeux et la peau Laver avec de l eau en
8. cas de contact Eviter le contact avec la peau et les muqueuses Les irritations sont possibles laver avec de l eau en cas de contact 13 LITERATURE Voir au chapitre 13 LITERATURE dans la version anglaise de cette notice 14 24 1 INTRODUZIONE Il RANKL l attivatore del recettore del fattore nucleare legante kappa B facente parte della famiglia del tumor necrosis factor TNF http www uniprot org uniprot 014788 il principale fattore di stimolazione per la formazione degli osteoclasti maturi ed essenziale per la loro sopravvivenza II RANKL attiva il suo specifico recttore RANK situato sugli osteoclasti e sulle cellule dendritiche Gli effetti sono contrastati da OPG che viene secreta da diversi tessuti e che agisce come antagonista endogeno del recettore solubile vedi kit BI 20403 OPG ELISA La fonte principale di RANKL sono gli osteociti ex osteoblasti che vengono incorporati all interno della matrice ossea mineralizzata Il RANKL una proteina transmembrana di tipo Il di 35 KD e viene scissa per rilasciare un prodotto biologicamente attivo solubile che forma un omotrimero Il RANKL e il suo specifico recettore RANK non sono solo regolatori chiave del rimodellamento osseo ma giocano anche un ruolo essenziale in immunologia ad es nella formazione del linfonodo costituzione del microambiente timico sviluppo della ghiandola mammaria durante la gravidanza metastasi ossee nel cancro ed ormoni sessuali cancro al
9. dem beigepackten QC Protokoll sind die Resultate bei der QC Freigabe der jeweiligen Kitlot vermerkt Vom Verwender erhaltene Daten der OD k nnen abweichend sein bedingt durch verschiedene Einfl sse und oder dem normalen Signalverlust des Kits wahrend der Laufzeit Dieser m gliche Signalverlust hat keinen Einfluss auf die G ltigkeit der Resultate so lange die OD des h chsten Standards den Wert 1 50 oder h her erreicht und die Werte beider CTRL im g ltigen Bereich sind Bereich siehe Etiketten beider Kontrollen 9 TESTMERKMALE Werte von anscheinend gesunden Median serum n 32 0 14 pmol l Spendern Jeder Verwender sollte den Normalbereich fiir seine Proben evaluieren Wechseln Sie nicht die Probenmatrix innerhalb einer Studie Standardbereich 0 0 0625 0 125 0 25 0 5 1 2 pmol l Umrechnungsfaktor pg ml zu pmol l 1 pg ml 0 05 pmol l MW 20 kD Monomer Probenvolumen 150 ul Serum oder Heparin Plasma Detektionsgrenze LLOQ 0 pmol l 3 SD 0 01 pmol l 0 008pmol l Inkubationszeiten 2 h ber Nacht 1 h 30 Min N here Informationen zu den Testmerkmalen finden Sie auf unserer Website unter www bmgrp com oder kontaktieren Sie unseren Kundenservice e mail unter export bmgrp com Tel unter 43 1 29107 45 9 24 10 PRAZISION Intra Assay 2 Proben mit bekannter Konzentration wurden 5 mal in Doppelbestimmung in einem Test getestet Inter Assay 2 Proben mit bekannter Konzentration wurden 12 fach in 3 unterschiedlic
10. kit Pu causare reazioni cutanee di tipo allergico evitare il contatto con la pelle o gli occhi e Nonpipettareabocca e Non mangiare bere fumare o usare cosmetici nei luoghi dove sono manipolati i reattivi e Evitare qualsiasi contatto con i reattivi utilizzando guanti monouso e L acido solforico irritante per gli occhi e la pelle Evitare il contatto con la pelle e le mucose Possibili irritazioni Lavare con acqua dopo il contatto 13 BIBLIOGRAFIA Vedi capitolo 13 LITERATURE delle istruzioni in lingua inglese 18 24 1 INTRODUCCION El RANKL ligando de receptor para el factor nuclear kB un miembro de la familia de factores de necrosis tumoral TNF es el principal factor estimulador de la formaci n de osteoclastos maduros y es esencial para su supervivencia El RANKL activa su receptor espec fico RANK que se encuentra en los osteoclastos y las c lulas dendr ticas Sus efectos son contrarrestados por la OPG que act a como un antagonista del receptor soluble end geno ver BI 20403 OPG ELISA La fuente principal del RANKL son los osteocitos antiguos osteoblastos que son embebidos en la matriz mineral sea El RANKL es una prote na transmembrana del tipo Il de 35 KD y es proclive a liberar un producto soluble biol gicamente activo que forma un homotr mero EI RANKL y su receptor espec fico RANK son no solo factores reguladores claves del remodelamiento seo sino que tienen un papel esencial en inmu
11. on our website Zus tzliche Information zu unseren Produkten ist auf unserer Homepage erh ltlich Pour toute information compl mentaire sur nos produits visiter notre site Internet Ulteriori informazioni sui nostri prodotti possono essere cercate sulla nostra home page Encontrar informacion adicional sobre nuestros productos en nuestra pagina web www bmgrp com Authorized Representative mdi Europa GmbH Langenhagener Str 71 D 30855 Hannover Langenhagen 2 24 1 INTRODUCTION RANKL the receptor activator of nuclear factor kappa B ligand a member of the tumor necrosis factor TNF family http www uniprot org uniprot O 14788 is the main stimulatory factor for the formation of mature osteoclasts and is essential for their survival RANKL activates its specific receptor RANK located on osteoclasts and dendritic cells The effects are counteracted by OPG which acts as an endogenous soluble receptor antagonist see BI 20403 OPG ELISA The major source of RANKL are osteocytes former osteoblasts that become embedded within the mineralized bone matrix RANKL is a 35 kD type Il transmembrane type protein and is cleaved to release a soluble biologically active product that forms a homotrimer RANKL and its specific receptor RANK are not only key regulators of bone remodeling but also play an essential role in immunobiology e g lymph node formation establishment of the thymic microenviroment mammary gland development d
12. papel absorbente despu s del ltimo lavado 20 24 6 A adir 200 pl del anticuerpo anti sRANKL biotinilado AB tap n verde a cada pocillo excepto para el blanco Agitar suavemente A adir 150 pl del ASYBUF tamp n de ensayo tap n rojo en el pocillo para el blanco 7 Tapar con cuidado con las hojas adhesivas e incubar durante la noche 18 24 horas a 4 C 2 8 C 8 Aspirar y lavar los pocillos 5 veces con 300 p1 del buffer de lavado diluido WASHBUF tap n transparente Eliminar el tamp n de lavado sobrante golpeando suavemente la placa sobre papel absorbente despu s del ltimo lavado 9 A adir 200 pl de conjugado CONJ tap n mbar a cada pocillo 10 Tapar con cuidado con las hojas adhesivas e incubar durante 1 hora a temperatura ambiente 18 24 C en la oscuridad 11 Aspirar y lavar los pocillos 5 veces con 300 pl del buffer de lavado diluido WASHBUF tap n transparente Eliminar el tamp n de lavado sobrante golpeando suavemente la placa sobre papel absorbente despu s del ltimo lavado 12 A adir 200 pl de substrato SUB tap n azul a cada pocillo 13 Incubar durante media hora a temperatura ambiente 18 24 C en la oscuridad 14 A adir 50 pl de la soluci n de parada STOP tap n blanco a cada pocillo 15 Medir la absorbancia inmediatamente a 450 nm y si fuera posible con un filtro de referencia de 630 nm 8 C LCULO DE RESULTADOS Leer la densidad ptica OD de todos los pocillos en un le
13. picchiando la micropiastra su carta assorbente dopo l ultimo lavaggio 9 Aggiungere 200 pl di CONJ Coniugato tappo ambra in tutti i pozzetti 10 Coprire bene la micropiastra con il copripiastra adesivo e incubare al buio a temperatura ambiente 18 24 C per 1 ora 11 Aspirare e lavare i pozzetti con 300 pl di WASHBUF tampone di lavaggio tappo non colorato diluito per cinque volte Togliere il WASHBUF restante picchiando la micropiastra su carta assorbente dopo l ultimo lavaggio 12 Aggiungere 200 y di SUB substrato tappo blu in tutti i pozzetti 13 Incubare al buio a temperatura ambiente 18 24 C per 30 min 14 Aggiungere 50 pl di STOP soluzione di arresto tappo blanco in tutti i pozzetti 15 Misurare subito l assorbanza a 450 nm con filtro di riferimento a 630 nm se disponibile 8 CALCOLO DEI RISULTATI Leggere le densit ottiche OD di ciascun pozzetto su un lettore di micropiastre utilizzando il filro a 450 nm filtro di riferimento a 630 nm Sottrarre la OD del bianco da quelle di STD CTRL e campioni Costruire la curva di calibrazione dai valori di OD degli standard Usare software di calcolo disponibili in commercio oppure carta millimetrata Calcolare la concentrazione dei campioni da questa curva di calibrazione Il dosaggio qui presentato stato valutato con l algoritmo 4PL Metodi di calcolo delle curve differenti devono essere valutati dalPutilizzatore Esempio di curva STD tipica Vedi capitolo 8
14. seno progestinico guidato termoregolazione ed infine nello sviluppo diabete mellito di tipo 2 Indicazioni del dosaggio e Osteoporosi in post menopausa e senile e Osteoporosi indotta da uso di glucocorticoidi e Malattie con attivit di rimodellamento osseo localmente aumentata e Artrite e Oncologia e Diabete mellito di tipo 2 2 CONTENUTO DEL KIT CONT REATTIVI QUANTITA PLATE Micropiastra pre sensibilizzata con OPG ricombinante umano e cornice 12x8 per le strip determinazioni WASHBUF Tampone per il lavaggio concentrato 20x tappo non colorato 1x50mL ASYBUF Tampone di dosaggio tappo rosso pronto all uso 1x7mL AB Anticorpo di capra policlonale biotinilato anti SRANKL tappo verde 1x22 mL pronto per l uso STD Standard 0 0 0625 0 125 0 25 0 5 1 2 pmol l tappo bianco 7 flaconi liofilizzati Controlli A B RANKL ricombinante umano in siero umano tappo giallo VR SURE vedere l etichetta per l esatta concentrazione dopo ricostituzione 2 flaconi liofilizzati CONJ Coniugato streptavidina poliHRPO tappo ambra pronto all uso 1x22mL SUB o soluzione di TMB flacone color ambra tappo blu pronto 1x22 ml STOP Soluzione di arresto tappo bianco pronta all uso 1x7mL 3 MATERIALE AGGIUNTIVO CONTENUTO NEL KIT e 3copripiastra auto adesivi Protocollo QC e Templato e Manuale di istruzioni d uso 4 MATERIALE RICHIESTO MA NON FORNTO Micropipette di precisione calibrate per volumi di 50 ul 150 ul 200 p1 300 pl e punt
15. temp rature ambiante 18 24 C 12 24 5 Aspirer et laver 5 fois les puits avec 300 pl de WASHBUF Tampon de lavage bouchon de couleur neutre dilu Apr s le dernier lavage taper la plaque contre une serviette afin d enlever les derni res gouttes de WASHBUF 6 Ajouter 200 pl d AB anticorps anti sRANKL biotinyl bouchon vert dans chaque puits sauf le blanc Agiter doucement Pipetter 200 ul d ASYBUF tampon d chantillonage bouchon rouge dans le puits du blanc 7 Sceller la plaque et incuber pendant 18 24h a 4 C 2 8 C 8 Aspirer et laver 5 fois les puits avec 300 pl de WASHBUF Tampon de lavage dilu Apres le dernier lavage taper la plaque contre une serviette afin d enlever les derni res gouttes de WASHBUF 9 Ajouter 200 pl de CONJ conjugu bouchon ambr dans chaque puits 10 Sceller la plaque et incuber pendant 1h a temp rature ambiante 18 24 C et a l abri de la lumi re 11 Aspirer et laver 5 fois les puits avec 300 ul de WASHBUF Tampon de lavage dilu Apres le dernier lavage taper la plaque contre une serviette afin d enlever les derni res gouttes de WASHBUF 12 Ajouter 200 pl de SUB substrat bouchon bleu dans chaque puit 13 Incuber pendant 30 minutes temp rature ambiante 18 24 C l abri de la lumi re 14 Ajouter 50 ul de STOP solution stop bouchon blanc dans chaque puit 15 Mesur imm diatement l absorbance 450 nm avec r f rence 630 nm si possible 8 CAL
16. vitro per uso diagnostico in vitro Dispositivo m dico de diagn stico in vitro para uso diagn stico in vitro Dispositivo m dico para diagn stico in itro Para utilizag o de diagn stico in vitro Medisch hulpmiddel voor diagnostiek in vitro Voor diagnostisch gebruik in vitro Medicinsk udstyr til in vitro diagnostik Udelukkende til in itro diagnostisk anvendelse Medicinteknisk produkt avsedd f r in vitro diagnostik F r in tro diagnostiskt bruk Wyr b medyczny do Diagnostyki In Vitro In vitro orvosdiagnosztikai erm k In vitro diagnostick zdravotn cky material ur en pre diagnostiku in vitro In vitro iagnosticky zdravotnicky material ur eno pro diagnostiku in vitro lt lt os o Lot Batch Number Charge Chargennummer Lot Code du lot Lotto Numero di lotto Lote C digo de lote Lote C digo do lote Lot Partijnummer Lot Batchkode Lot Satskod Numer serii Lot Batch sz m slo ar e slo ar e Manufactured by Hergestellt von Fabriqu par Prodotto da Fabricado por Fabricado por Vervaardigd door Fabrikation af Tillverkad av Wyprodukowane pr Gy rtotta Vyroben Vyrobeno Catalogue Number Bestellnummer Num ro de r f rence Numero di riferimento N mero de referencia N mero de refer ncia Referentienummer Referencenummer Katalognummer Numer katalogowy Katal gussz m Katal gov slo Katalogov slo
17. 2 8 C jusqu la date de p remption mentionn e sur l tiquette Le tampon dilu reste stable 4 C 2 8 C jusqu un mois Utiliser uniquement du WASHBUF Tampon de lavage dilu pour l ex cution du dosage 6 PRINCIPE DE L ESSAI Voir le chapitre 6 PRINCIPLE OF THE ASSAY de la version anglaise de la notice 7 PROTOCOLE DE L ESSAI Tous les r actifs et chantillons doivent tre temp rature ambiante 18 24 C avant l utilisation Marquer la position du BLANK STD SAMPLE CTRL Blanc Standard Echantillon Contr le sur la feuille du protocole Sortir du sac d aluminium les bandelettes de microtitrage et marquer correctement les bandelettes marquant au minimum un puits comme Blanc Conserver les bandelettes non utilis es avec leur dessiccateur 4 C 2 8 C dans le sac d aluminium Les bandelettes restent stables jusqu la date d expiration marqu e sur l tiquette 1 Pr laver les puits en lavant et en aspirant 5 fois les puits avec 300 uil de WASHBUF Tampon de lavage bouchon de couleur neutre dilu Apr s le dernier lavage taper la plaque contre une serviette afin d enlever les derni res gouttes de WASHBUF 2 Ajouter 50 pl d ASYBUF tampon d chantillonage bouchon rouge dans chaque puis Pipetter 150 pl d ASYBUF dans le puits du blanc 3 Ajouter 150 pl de STD SAMPLE CTRL Standard chantillon Contr le en duplicata dans les puits respectifs sauf le blanc 4 Sceller la plaque et incuber pendant 2h
18. 2 8 C nella canfezione Le strip sono stabili fino alla data di scadenza indicata sull etichetta 1 Prelavare i pozzetti con 300 ul di WASHBUF diluito tampone di lavaggio tappo non colorato per cinque volte Togliere il WASHBUF restante picchiando la micropiastra su carta assorbente dopo l ultimo lavaggio 2 Aggiungere 50 ul di ASYBUF tampone di dosaggio tappo rosso in tutti i pozzetti Pipettare altri 150 ul di ASYBUF nel pozzetto utilizzato per il bianco 3 Pipettare 150 ul di STD CAMPIONE CTRL Standard Campione Controllo in doppio nei corrispondenti pozzetti ad eccezione del bianco 4 Coprire bene la micropiastra con il copripiastra adesivo e incubare a temperatura ambiente 18 24 C eper 2 ore 5 Aspirare e lavare i pozzetti con 300 ul di WASHBUF tampone di lavaggio tappo non colorato diluito per cinque volte Togliere il WASHBUF restante picchiando la micropiastra su carta assorbente dopo l ultimo lavaggio 6 Aggiungere 200 yl di AB anticorpo anti sRANKL biotinilato tappo verde in ciascun pozzetto ad eccezione del bianco agitare delicatamente la micropiastra Pipettare altri 200 ul di ASYBUF tampone di lavaggio tappo rosso nel pozzetto del bianco 7 Coprire bene la micropiastra con il copripiastra adesivo e incubare a 4 C 2 8 C overnight 18 24 ore 16 24 8 Aspirare e lavare i pozzetti con 300 ul di WASHBUF tampone di lavaggio tappo non colorato diluito per cinque volte Togliere il WASHBUF restante
19. ADICIONAL INCLUIDO EN EL KIT e 3tiras adhesivas de pl stico e Protocolo QC e Hoja con el esquema de la placa e Manual de instrucciones 4 MATERIAL Y EQUIPAMIENTO NECESARIO PERO NO SUMINISTRADO Pipetas de precisi n calibradas para dispensar 50 yl 150 ul 200 ul 300 pl y puntas desechables Agua destilada o desionizada Se recomienda lavador de placas para lavar como alternativas pipetas multicanal o un dispensador Frigor fico a 4 C 2 8 C Lector ELISA para absorbancias de 450 nm con longitud de ondas de correcci n de 630 nm Papel gr fico o software para el c lculo de resultados 19 24 5 REACTIVOS Y PREPARACION DE MUESTRA Todos los reactivos en el kit son estables a 4 C 2 8 C hasta la fecha de caducidad marcada en la etiqueta de cada reactivo Preparaci n de la muestra Recoger muestras de sangre venosa utilizando tubos de recogida de muestra estandarizados para suero o plasma heparinizado Se recomienda centrifugar parar separar el plasma o el suero tan pronto como sea posible ej 10 min a 2000 x g preferiblemente a 4 C 2 8 C Si esto no es posible almacene las muestras a 4 C 2 8 C antes de la centrifugaci n hasta un d a La muestra de suero o plasma recogida deber ser medida tan pronto como sea posible Para mantener las al cuotas almacenadas durante m s tiempo se pueden congelar a 25 C o a temperaturas m s bajas Las muestras solo pueden someterse a un m ximo de 3 ciclos de congelaci n de
20. CALCULATIONS OF RESULTS delle istruzioni in lingua inglese Il foglio di controllo di qualit fornito insieme al kit mostra i risultati ottenuti al rilascio finale di ogni kit dal Controllo di Qualit QC valori di densit ottica ottenuti dagli utilizzatori possono essere differenti a causa di vari fattori e o alla diminuzione nell intensit del segnale derivata dal decadimento naturale del kit In ogni caso questo aspetto non incide sulla validit dei risultati finch la densit ottica del calibratore con la concentrazione pi alta sia superiore a 1 50 e i risultati dei controlli siano compresi nell intervallo di riferimento per gli intervalli di riferimento vedere le etichette dei flaconi 9 CARATTERISTICHE DEL DOSAGGIO Valori per individui Mediana siero n 32 0 14 pmol l apparentemente sani Si raccomanda che ogni laboratorio stabilisca i propri intervalli di riferimento in base alla popolazione esaminata Non scambiare i campioni durante lo studio Intervallo standard 0 0 0625 0 125 0 25 0 5 1 2 pmol l Conversione da pg ml a pmol l 1 pg ml 0 05 pmol l MW 20 kD Monomero Volume del campione 150 pl di siero o plasma eparina umani Sensibilit LLOQ 0 pmol L 3 SD 0 01 pmol L 0 008 pmol L Tempo di incubazione 2 h overnight 1 h 30 min 10 PRECISIONE Intra Saggio 2 campioni a concentrazioni note sono stati dosati 5 volte con un lotto da un operatore Inter Saggio 2 campioni a concentrazioni n
21. CUL DES RESULTATS Lire la densit optique DO de tous les puits sur un lecteur de microplaque longueur d onde de 450 nm correction de longueur d onde 630 nm Soustraire l absorbance du blanc des valeurs STD CTRL et des chantillons Construire la courbe d talonnage partir des valeurs des talons utilisant du papier millim tr vendu couramment dans le commerce ou un logiciel pr vu cet effet Obtenir la concentration des chantillons partir de la courbe d talonnage Cette m thode a t valu e en utilisant un algorithme 4PL Les autres types de courbes doivent tre valu s par l utilisateur Il est recommand que chaque laboratoire tablisse ses propres valeurs normales Courbe STD typique Voir le chapitre 8 CALCULATION OF RESULTS dans la version anglaise de la notice d utilisation Le protocole de contr le qualit fourni avec la trousse pr sente les r sultats de la derni re s rie CQ de chaque trousse Les donn es de densit optique obtenues par les utilisateurs peuvent tre diff rentes de celles obtenues par le Laboratoire de Contr le Cela d pend de plusieurs facteurs notamment de la perte du signal que l on constate pendant la dur e de vie d un kit Cependant ceci n a pas d incidence sur la validit des r sultats partir du moment o la D O du standard ayant la concentration la plus lev e est au moins gale 1 50 unit s et que les valeurs des contr les sont dans les normes de valeur
22. FREE soluble RANKL High Sensitivity EN 3rd Generation ENZYME IMMUNOASSAY FOR THE QUANTITATIVE DETERMINATION OF FREE SOLUBLE UNCOMPLEXED HUMAN RANKL IN SERUM OR HEPARIN PLASMA CAT NO BI 20462 12 X 8 TESTS DE 3 Generation ENZYM IMMUNOASSAY ZUR QUANTITATIVEN BESTIMMUNG VON FREIEM NICHT KOMPLEXIERTEM LOSLICHEM HUMANEN RANKL IN SERUM ODER HEPARIN PLASMA KAT NR BI 20462 12 X 8 TESTE FR DOSAGE IMMUNOENZYMATIQUE DU 3EME GENERATION POUR LA DETERMINATION QUANTITATIVE DE LIBRE SOLUBLE HUMAIN RANKL NON COMPLEXE DANS LE SERUM OU DANS LE PLASMA HEPARINE REF BI 20462 12 X8 TESTS IT IMMUNODOSAGGIO ENZIMATICO DI 34 GENERAZIONE PER LA DETERMINAZIONE QUANTITATIVA DEL RANKL UMANO LIBERO SOLUBILE NON COMPLESSATO SU CAMPIONI DI SIERO O PLASMA EPARINA CAT NO BI 20462 12 X 8 DETERMINAZIONI ES INMUNOENSAYO ENZIMATICO DE 3 GENERACI N PARA LA DETERMINACION CUANTITATIVA DE RANKL LIBRE SOLUBLE NO ACOMPLEJADO HUMANO EN SUERO O EN PLASMA CON HEPARINA CAT NO BI 20462 12 X 8 TESTS Receptor Activator of Nuclear Factor Kappa B Ligand RANKL n MIN rev no 141126 C JUL BIOMEDICA Biomedica Medizinprodukte GmbH amp Co KG A 1210 Wien Divischgasse 4 V Oo 2 L C Tel 43 1 291 07 45 Fax 43 1 291 07 85 E mail export bmgrp com 1 24 CONTENT INHALT SOMMAIRE CONTENUTO CONTENIDO ENGLISH Page 3 DEUTSCH Seite 7 FRANCAIS Page 11 ITALIANO Pagina 15 ESPANOL Pagina 19 Additional information on our products is available
23. absorbance immediately at 450 nm with reference 630 nm if available 8 CALCULATION OF RESULTS Read the optical density OD of all wells on a plate reader using 450 nm wavelength correction wavelength 630 nm Subtract the blank OD from the values of STD CTRL and sample Construct the standard curve from the OD values of the STD Use commercially available software or graph paper Calculate sample concentration from the standard curve The assay was evaluated with 4PL algorithm Different curve fitting methods need to be evaluated by the user Example typical STD curve Calibration curve 4PL free soluble RANKL ELISA BI 20462 3 000 2 500 A Lec 2 000 1 500 OD 450nm 1 000 0 500 ai 0 000 0 02 04 0 6 08 1 12 14 16 18 2 free soluble RANKL pmol I The quality control protocol supplied with the kit shows the results of the final release QC for each kit lot Data for optical density obtained by customers may differ due to various influences and or due to the normal decrease of signal intensity during shelf life However this does not affect validity of results as long as an OD of 1 50 or more is obtained for the standard with the highest concentration and the values of the CTRLs are in range target ranges see labels 9 ASSAY CHARACTERISTICS Median serum n 32 0 14 pmol l Values of apparently healthy Each laboratory should establish its own refere
24. ali monouso Acqua distillata o deionizzata Lavatore automatico di micropiastre raccomandato per i lavaggi Frigorifero a 4 C 2 8 C Lettore di micropiastre ELISA con filtro a 450 nm e filtro di riferimento a 630 nm Carta per grafici o software per il calcolo dei risultati 15 24 5 PREPARAZIONE DEI REATTIVI E DEI CAMPIONI Tutti i reattivi contenuti nel kit sono stabili a 4 C 2 8 C fino alla data riportata sull etichetta di ciascun flacone Preparazione del campione Prelevare i campioni di sangue in provette per siero o plasma eparina Si consiglia di separare il plasma o il siero per centrifugazione il pi presto possibile ad es 10 min at 2000 x g preferibilmente a 4 C 2 8 C Nel caso ci non fosse possibile conservare i campioni a 4 C 2 8 C prima della centrifugazione fino ad un giorno Analizzare i campioni di siero o plasma il pi presto possibile Per conservazioni pi prolungate nel tempo aliquotare i campioni e congelarli a 25 C o a bassa Ciascun campione pu essere sottoposto ad un massimo di 3 cicli di congelamento scongelamento Campioni lipemici o emolizzati possono dare risultati aberranti Mescolare bene i campioni prima del dosaggio Lavorare in duplicato campioni con risultato superiore allo standard a concentrazione pi elevata devono essere diluiti con un siero a bassa concentrazione di analita e ridosati Per ulteriori informazioni sulla stabilit dei campioni si prega di visitare il sito web w
25. ctor de placas usando la longitud de onda de 450 nm longitud de onda de correcci n de 630 nm Substraer la densidad ptica OD del blanco de todos los valores de la densidad ptica de los est ndares controles y muestras Construir la curva est ndar a partir de la densidad ptica de los est ndares Utilizar un software comercialmente disponible o un papel gr fico Calcular la concentraci n de las muestras a partir de esta curva est ndar El ensayo se ha evaluado con el algoritmo 4PL Se recomienda al usuario que eval e diferentes m todos de ajuste de curvas Curva est ndar t pica Ver cap tulo 8 CALCULATIONS OF RESULTS de la versi n inglesa del manual de instrucciones del ensayo El certificado del control de calidad que se suministra con el kit muestra los resultados del control de calidad final que se realiza con cada lote Los datos de la densidad ptica obtenidos por los clientes pueden diferir debido a diversos factores y o debido a una disminuci n obvia de la intensidad de la se al a lo largo de la vida media del producto Sin embargo esto no afecta a la validez de los resultados siempre que se obtenga como m nimo un valor de 1 5 para la densidad ptica del est ndar de concentraci n m s elevada y los controles est n dentro de su rango de medida para ver los rangos de los controles ver las etiquetas de sus viales 9 CARACTER STICAS DEL ENSAYO Mediana suero n 32 0 14 pmol l Cada laboratoro deber a establecer sus
26. diluido para el ensayo 6 PRINCIPIO DEL ENSAYO Ver cap tulo 6 PRINCIPLE OF THE ASSAY de la versi n inglesa del manual de instrucciones del ensayo 7 PROTOCOLO DEL ENSAYO Todos los reactivos y las muestras deben estar a temperatura ambiente 18 24 C antes de utilizarse en el ensayo Marcar la posici n de BLANCO STD MUES CTRL Blanco Est ndar Muestra Control en la hoja del protocolo Sacar las tiras con los pocillos de la bolsa de aluminio y emplear como m nimo un pocillo para el blanco Almacenar las tiras no utilizadas en la bolsa de aluminio con desecante a 4 C 2 8 C Las tiras son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta 1 Realizar un prelavado de los pocillos con 300 pl del tamp n de lavado diluido WASHBUF tap n transparente 5 veces Eliminar el tamp n de lavado sobrante golpeando suavemente la placa sobre papel absorbente despu s del ltimo lavado 2 A adir 50 ul del tamp n de ensayo tap n rojo en cada pocillo A adir 150 ul del tamp n de ensayo en el pocillo para el blanco 3 A adir 150 ul de STD MUES CTRL Estandar Muestra Control por duplicado en sus respectivos pocillos excepto para el blanco 4 Tapar con cuidado con las hojas adhesivas e incubar durante 2 horas a temperatura ambiente 18 24 C 5 Aspirar y lavar los pocillos 5 veces con 300 ul del tamp n de lavado diluido WASHBUF tap n transparente Eliminar el tamp n de lavado sobrante golpeando suavemente la placa sobre
27. e last wash 2 Add 50 pl ASYBUF assay buffer red cap into each well Pipette additional 150 pl ASYBUF into well marked as blank 3 Pipette 150 pl STD SAMPLE CTRL Standard Sample Control in duplicate into respective wells except blank 4 Cover tightly and incubate at room temperature 18 24 C for 2 hours 4 24 5 Aspirate and wash wells with 300 y diluted WASHBUF wash buffer natural cap five times Remove remaining WASHBUF by tapping plate against paper towel after the last wash 6 Add 200 pl AB biotinylated anti sRANKL antibody green cap into each well except blank Swirl gently Pipette additional 200 pl ASYBUF assay buffer red cap into well marked as blank 7 Cover tightly and incubate at 4 C 2 8 C over night 18 24 hours 8 Aspirate and wash wells with 300 u diluted WASHBUF wash buffer natural cap fives times Remove remaining WASHBUF by tapping plate against paper towel after the last wash 9 Add 200 ul CONJ conjugate amber cap into each well 10 Cover tightly and incubate at room temperature 18 24 C for 1 hour in the dark 11 Aspirate and wash wells with 300 y1 diluted WASHBUF wash buffer natural cap fives times Remove remaining WASHBUF by tapping plate against paper towel after the last wash 12 Add 200 pl SUB substrate blue cap into each well 13 Incubate at room temperature 18 24 C for 30 min in the dark 14 Add 50 ul STOP stop solution white cap into each well 15 Measure
28. ettieren e Nicht Rauchen Essen Trinken oder Kosmetika benutzen w hrend der Verwendung der Testreagenzien e Verwenden Sie Handschuhe zur Vermeidung jeden Kontaktes mit Reagenzien e Die Stoppl sung enth lt Schwefels ure Diese reizt Augen und Haut Bei Ber hrung gr ndlich mit Wasser sp len 13 LITERATUR Siehe Kapitel 13 LTERATURE im englischen Teil des Beipacktextes 10 24 1 INTRODUCTION Le sRANKL r cepteur activateur soluble du ligand NF kB est un membre de la famille TNF Facteur Oncon crosant http www uniprot org uniprot 014788 Il est le principal facteur stimulateur pour la formation d ost oclastes m rs et est indispensable leur survie RANKL active son r cepteur sp cifique RANK qui se trouve sur les ost oclastes et les cellules dendritiques Ces effets sont contr s par l OPG voir ELISA r f Bl 20403 qui est secr t par divers tissus et agit comme antagoniste des r cepteurs solubles endog nes La source principale de RANKL est les ost ocytes d anciens ost oblastes qui ont t int gr s la matrice min rale osseuse Le RANKLest une prot ine transmembranaire de type Il d environs 35kD et est cliv pour form un produit soluble biologiquement actif qui forme un homotrimer Le RANKL et son r cepteur sp cifique RANK ne sont pas seulement des facteurs de r gulations cl s dans le remodelage osseux mais jouent aussi un r le dans l immunobiologie par exemple formation des node
29. f saugfahigem Papier entfernen 9 Pipettieren Sie 200 pl CONJ Konjugat brauner Schraubverschluss in alle Wells 10 Streifen gut abdecken und 1 Stunde bei Raumtemperatur 18 24 C im Dunkeln inkubieren 11 Inhalt der Wells verwerfen und 5x mit 300 pl verd nntem WASHBUF Waschpuffer durchsichtiger Schraubverschluss waschen Nach dem letzten Waschschritt Reste von Waschpuffer durch Ausklopfen auf saugfahigem Papier entfernen 12 Pipettieren Sie 200 pl SUB Substrat blauer Schraubverschluss in alle Wells 13 30 Minuten bei Raumtemperatur 18 24 C im Dunkeln inkubieren 14 Pipettieren Sie 50 pl STOP Stoppl sung wei er Schraubverschluss in alle Wells 15 Extinktion unmittelbar bei 450 nm messen mit 630 nm als Referenz falls m glich 8 BERECHNUNG DER ERGEBNISSE M essen Sie die optische Dichte OD von allen Wells mit einem Mikrotiterplattenphotometer mit einem 450 nm Filter Referenz 630 nm Die OD des Leerwertes ist von den Werten der STD CTRL und Proben abzuziehen Konstruieren Sie eine Standardkurve aus den OD Werten der STD unter Verwendung von kommerziell erh ltlichem Millimeterpapier oder einer geeigneten Software Das Testsystem wurde mit einem 4 Parameter Algorithmus evaluiert Andere Auswerte Algorithmen m ssen vom Verwender evaluiert werden Die Konzentration der Proben wird aus der Standardkurve abgelesen Typische STD Kurve Siehe Kapitel 8 CALCULATION OF RESULTS im englischen Teil des Beipacktextes Auf
30. hen Kit Lots von 3 unterschiedlichen Operatoren getestet Intra Assay n 5 Probe 1 Probe 2 Intrer Assay n 12 Probe 1 Probe 2 Durchschnitt pmol l 0 12 1 00 Durchschnitt pmol l 0 12 1 00 SD pmol l 0 005 0 04 SD pmol l 0 004 0 02 VK 4 4 VK 3 2 Weitere Daten zur Validierung und der Kit Charakterisierung finden Sie auf unserer Webseite www bmgrp com s Technical Files oder kontaktieren Sie unseren Kundenservice e mail unter export bmgrp com Tel unter 43 1 29107 45 11 TECHNISCHE MERKMALE Reagenzien von verschiedenen Lots oder Tests d rfen nicht gemischt werden St psel oder Verschl sse von verschiedenen Reagenzien d rfen nicht vertauscht werden Abgelaufene Reagenzien d rfen nicht verwendet werden Reagenzien sind vor direktem Sonnenlicht zu sch tzen Substratl sung muss vor Verwendung farblos sein Mikrotiterstreifen m ssen bei den Inkubationen gut mit Abdeckfolie abgedeckt sein wo notwendig Vermeiden Sie Schaumbildung beim Mischen der Reagenzien 12 VORSICHTSMASSNAHMEN sollten die Reagenzien als potentiell infekti s behandelt werden Alle Bestandteile humanen Ursprunges wurden auf HIV Ak und HBsAg getestet und negativ gefunden Trotzdem Alle fl ssigen Reagenzien enthalten 0 01 Proclin 300 als Konservierungsmittel Vermeiden Sie Kontakt mit Augen Haut oder Schleimhaut Proclin 300 ist in der verwendeten Konzentration nicht toxisch Allergische Reaktionen sind m glich e Nicht mit dem Mund pip
31. incubation steps is necessary Avoid foaming when mixing reagents 12 PRECAUTIONS Ali test components of human source were tested against HIV Ab and HBsAg and were found negative Nevertheless they should be handled and disposed as if they were infectious All liquid reagents contain s 0 1 Proclin 300 as preservative Avoid contact with skin and mucous membrane Proclin 300 is not toxic in concentrations used in this kit It may cause allergic skin reactions avoid contact with skin or eyes e Do not pipette by mouth e Donot eat drink smoke or apply cosmetics where reagents are used e Wear gloves glasses and lab coat while performing this assay e Sulfuric acid is irritating to the eyes and skin Avoid contact with skin and mucous Irritations are possible Flush with water if contact occurs 13 LITERATURE e Immunology and bone Danks L and Takayanagi H J Biochem 2013 154 29 39 e Physiology and pathophysiology of the RANKL RANK system Hanada R et al Biol Chem 2010 391 12 1365 1370 e Evidence for osteocyte regulation of bone homeostasis through RANKL expression Nakashima T et al Nat Med 2011 17 10 1231 1234 e RANKL Employs Distinct Binding Modes to Engage RANK and the Osteoprotegerin Decoy Receptor Nelson CA et al Structure Nov 2012 20 11 1971 1982 e Osteoclast differentiation factor RANKL controls development of progestin driven mammary cancer Schramek D et al Nature 2010 468 7320
32. messendem Serum verd nnt und erneut getestet werden N here Informationen zur Probenstabilit t finden Sie auf unserer Website unter www bmgrp com s Technical Files oder kontaktieren Sie unseren Kundenservice e mail unter export 9 bmgrp com Tel unter 43 1 29107 45 Rekonstitution Handhabung STD Standards und CTRL Kontrolle L sen Sie das Lyophilisat in jeweils 700 y destilliertem Wasser bei Raumtemperatur 18 24 C f r 15 min Die rekonstituierten STD und CTRL sind bei 25 C bis zum Ablaufdatum haltbar STDs und CTRLs sind bis zu drei Frier Tauzyklen stabil WASHBUF Waschpuffer Das mitgelieferte Konzentrat wird 1 20 verd nnt zB 50 ml WASHBUF 950 ml destilliertes Wasser Kristalle im Pufferkonzentrat l sen sich bei Raumtemperatur auf Das Konzentrat ist bei 4 C 2 8 C bis zum Ablaufdatum haltbar Der verd nnte Puffer ist bei 4 C 2 8 C bis zu einem Monat haltbar Im Testsystem darf nur verd nnter WASHBUF Waschpuffer verwendet werden 6 TESTPRINZIP Siehe Kapitel 6 PRINCIPLE OF THE ASSAY im englischen Teil des Beipacktextes 7 TESTPROTOKOLL Im Test d rfen nur Reagenzien und Proben verwendet werden welche Raumtemperatur 18 24 C aufweisen Markieren Sie die Positionen f r BLANK STD PROBE CTRL Leerwert Standard Probe Kontrolle am Protokollblatt Nehmen Sie die ben tigten Mikrotiterstreifen aus dem Aluminiumbeutel Mindestens 1 Well f r den Leerwert reservieren Nicht verwendete Mikrotiterstreifen k
33. n los reactivos utilizando guantes e La soluci n de parada contiene cido sulf rico El cido sulf rico es irritante para los ojos y la piel Enjuagar con abundante agua si se produce contacto Evitar el contacto con la piel y con las membranas mucosas Puede presentarse irritaci n Si tiene lugar contacto alguno enjuagar con abundante agua 13 LITERATURA Ver cap tulo 13 LITERATURE de la versi n inglesa del manual de instrucciones del ensayo 22 24 E IVD LOT qa E SYMBOLS Expiry date Verfallsdatum Date de p remption Data di scadenza Fecha de caducidad Data de validade Uiterste gebruiksdatum Udlabsdato Utgangsdatum Termin Waznosci Lej rati id Doba exspir cie Doba exspirace Consider instructions for use Bitte Gebrauchsanweisung beachten Consultez la notice d utilisation Consultare le istruzioni per l uso Consulte las instrucciones de utilizaci n Consulte as instru es de utiliza o Raadpleeg de gebruiksaanwijzing Se brugsanvisningen Las anvisningarna fore anv ndning Prosze przeczyta instrukcj wykonania Vegy k figyelembe a haszn lati utas t sban foglaltakat Postupujte pod a pokynov na pou itie Postupujte dle n vodu k pou it In vitro Diagnostic Medical Device for in Vitro Diagnostic Use In vitro Diagnostikum zur In itro Diagnostik Dispositif m dical de diagnostic in vitro Pour usage diagnostique in vitro Dispositivo medico per diagnostica in
34. nce range for the samples individuals under investigation Do not change sample type during study Standard range 0 0 0625 0 125 0 25 0 5 1 2 pmol l Conversion factor pg ml to pmol l 1 pg ml 0 05 pmol l MW 20 kD monomer Sample volume 150 ul human serum or Heparin plasma Detection limit LLOQ 0 pmol l 3 SD 0 01 pmol l 0 008pmol Incubation time 2 h ovemight 1 h 30 min 5 24 10 PRECISION Intra assay 2 samples of known concentrations were tested 5 times within one kit lot by one operator Inter assay 2 samples of known concentrations were tested 12 times within 3 different kit lots and by 3 different operators Intra assay n 5 Sample 1 Sample 2 Inter assay n 12 Sample 1 Sample 2 Mean pmol l 0 12 1 00 Mean pmol l 0 12 1 00 SD pmol l 0 005 0 04 SD pmol l 0 004 0 02 CV 4 4 CV 3 2 Further details on validation data and assay characteristics please visit our website www bmgrp com see Technical Files or contact our customer service by e mail export bmgrp com or by phone 43 1 29107 45 11 TECHNICAL HINTS Do not mix or substitute reagents with those from other lots or sources Do not mix stoppers and caps from different reagents or use reagents between lots Do not use reagents beyond expiration date Protect reagents from direct sunlight Substrate solution should remain colourless until added to the plate To ensure accurate results proper adhesion of plate sealers during
35. ndling STD Standards and CTRL Controls Pipette 700 pl of distilled or deionised water into each vial Leave at room temperature 18 24 C for 15 min Reconstituted STD and CTRL are stable at 25 C or lower until expiry date stated on label STDs and CTRLs are stable for 3 freeze thaw cycles WASHBUF Wash buffer Dilute the concentrate 1 20 e g 50 ml WASHBUF 950 ml distilled water Crystals in the buffer concentrate will dissolve at room temperature The undiluted buffer is stable at 4 C 2 8 C until expiry date stated on label The diluted WASHBUF is stable up to one month at 4 C 2 8 C Only use diluted WASHBUF Wash buffer when performing the assay 6 PRINCIPLE OF THE ASSAY H gt Y li d Y M 1 precoated OPG 2 free sRANKL of sample STD CTRL 3 AB anti sRANKL Biotin 4 CON Streptavidin HRPO 5 SUB enzyme catalyzed color change 7 ASSAY PROTOCOL All reagents and samples must be at room temperature 18 24 C before use in the assay Mark position for BLANK STD SAMPLE CTRL Blank Standard Sample Control on the protocol sheet Take microtiter strips out of the aluminium bag take a minimum of one well as blank Store unused strips with desiccant at 4 C 2 8 C in the aluminium bag Strips are stable until expiry date stated on the label 1 Prewash wells with 300 y diluted WASHBUF wash buffer natural cap five times Remove remaining WASHBUF by tapping plate against paper towel after th
36. nobiolog a por ejemplo en la formaci n de n dulos linf ticos en el establecimiento del microambiante t mico en el desarrollo de la gl ndula mamaria en el embarazo en la met stasis sea en el desarrollo del c ncer de mama mediado por progestina en la termoregulaci n y finalmente en el desarrollo de la diabetes mellitus tipo 2 Indicaciones posibles Osteoporosis postmenop usica y senil Osteoporosis inducida por glucocorticoides Enfermedad con actividad de resorci n incrementada localmente Artritis Oncolog a Diabetes mellitus tipo 2 2 CONTENIDO DEL KIT CONT COMPONENTES DEL KIT CANTIDAD PLACA Tiras con micropocillos recubiertas de OPG recombinante humana 12 x 8 tests incluidas en un soporte WASHBUF Tamp n de lavado concentrado 20x tap n transparente 1x50 ml ASYBUF Tamp n de ensayo tap n rojo listo para usar 1x7ml AB Anticuerpo de cabra policlonal biotinilado anti SRANKL tap n verde listo 1x22 ml para usar STD Est ndares 0 0 0625 0 125 0 25 0 5 1 2 pmol l tap n blanco 7 viales liofilizados Controles A B OPG recombinante humana en suero humano tap n CTRL amarillo Consultar en la etiqueta la concentraci n exacta tras 2 viales liofilizados reconstituci n CONJ Conjugado estreptavidina HRPO tap n mbar listo para usar 1x22ml SUB Substrato Soluci n de TMB bote ambar y tap n azul listo para usar 1x22 ml STOP Soluci n de parada tap n blanco lista para usar 1x7ml 3 MATERIAL
37. ote sono stati dosati con 12 con 3 lotti diversi da 3 diversi operatori Intra Saggio n 5 Campione 1 Campione 2 Inter Saggio n 12 Campione 1 Campione 2 Media pmol l 0 12 1 00 Media pmol l 0 12 1 00 SD pmol l 0 005 0 04 SD pmol l 0 004 0 02 CV 4 4 CV 3 2 Si prega di visitare il sito www bmgrp com vedere la voce Technical Files o di contattare il distributore autorizzato locale nel caso si desideri controllare ulteriori dettagli sui dati di validazione e sulle caratteristiche del test 17 24 11 ACCORGIMENTI TECNICI Non mescolare o sostituire i reattivi di lotti differenti Non mescolare tra loro i tappi di differenti reattivi Non usare reattivi oltre la loro data di scadenza Proteggere i reattivi dalla luce solare diretta Il substrato deve restare incolore fino alla sua aggiunta in micropiastra Per assicurare l ottenimento di risultati accurati far aderire bene il copripiastra adesivo durante le incubazioni Evitare la formazione di schiuma nel mescolare i reattivi 12 PRECAUZIONI Tutti i componenti del kit di origine umana sono stati testati con dosaggi per HIV Ab e HBsAg e sono risultati essere negativi Nonostante ci tali componenti devono essere manipolati e smaltiti come materiale potenzialmente infetto Tutti i reattivi liquidi contengono Proclin 300 lt 0 1 come conservante Evitare il contatto con la pelle e le mucose Il Proclin 300 non tossico nelle concentrazioni utilizzate in questo
38. phknotenbildung bei der Schaffung der Mikroumgebung des Thymus bei der Brustdr senentwicklung w hrend der Schwangerschaft bei Knochenmestatasen sowie Progestin bedingtem Brustkrebs der Warmeregulation und schlieBlich in der Entwicklung von Typ 2 Diabetes mellitus Indikationen e Postmenopausale und senile Osteoporose Glukokortikoid induzierte Osteoporose Arthritis Krankheiten mit lokal induzierter Knochenresorptionsaktivitat Onkologie Typ 2 Diabetes Mellitus 2 INHALT DES KITS CONT KIT KOMPONENTEN MENGE PLATE Humanes rekombinantes OPG beschichtet auf Mikrotiterplattenstreifen 12 x 8 Tests im Streifenhalter WASHBUF Waschpuffer 20fach Konzentrat durchsichtiger Schraubverschluss 1x 50 ml ASYBUF Verd nnungspuffer roter Schraubverschluss gebrauchsfertig 1x7ml AB polyklonaler biotinylierter Ziege anti sRANKL Antik rper gr ner 1x22 ml Schraubverschluss gebrauchsfertig STD Standards 0 0 0625 0 125 0 25 0 5 1 2 pmol l wei er 7 x lyophilisiert Schraubverschluss lyophilisiert Kontrollen A B rekombinantes humanes RANKL in humanem Serum CTRL gelber Schraubverschluss lyophilisiert genaue Konzentration nach 2 x lyophilisiert Rekonstitution siehe Etikett Konjugat Streptavidin PolyHRPO brauner Schraubverschluss CONJ gebrauchsfertig bazami SUB Substrat TMB L sung braunes Fl schchen blauer Schraubverschluss 1x22 ml gebrauchsfertig STOP Stoppl sung wei er Schraubverschluss gebrauchsfertig 1x7ml 3
39. quot des chantillons et les entreposer dans une chambre froide 25 C ou plus bas Le nombre de cycle de cong lation d cong lation maximal pour tout chantillon est de 3 Des chantillons lip mique ou h molyses peuvent donner des r sultats erron s Les chantillons doivent tre agit s avant l analyse Il est recommand de doser les standards contr les et chantillons en double Les chantillons qui donnent les valeurs plus lev es que le dernier standard doivent tre dilu avec un s rum n gatif en SRANKL Vous trouverez de plus amples informations sur la stabilit des chantillons en consultant notre site web l adresse www bmgrp com voir Technical Files ou contactez notre service client le l adresse email export gmbrp com ou en composant le num ro de t l phone 43 1 29107 45 Reconstitution Manipulation STD Standards et CTRL Contr les Reconstituer dans chaque flacons 700 pl d eau d sionis e ou distill e et laisser temp rature ambiante 18 24 C pendant 15 minutes Les standards et les contr les restent stables 25 C jusqu la date de p remption marqu e sur l tiquette Eviter de faire plus que 3 cycles r p t s de cong lation d cong lation WASHBUF Tampon de lavage Diluer le concentr 1 20 Par exemple 50 ml de WASHBUF 950 ml d eau distill e Les cristaux dans le concentr de lavage se dissoudront temp rature ambiante Le tampon concentr reste stable 4 C
40. s lymphatiques tablissement du microenvironement thymique le d veloppement des glandes mammaires durant la grossesse les m tastases osseuses dans les cancers hormono d pendants les cancers du sein r cepteur progest rone positif la thermor gulation et finalement dans le d veloppement du diab te de type 2 Indications e Ost oporose post m nopausique ou s nile e Ost oporose induite par les glucocortico des e Maladies entra nant une activit de r sorption osseuse locale accrue e Arthrite e Oncologie e Diab te de type Il 2 CONTENUE DE LA TROUSSE CONT COMPOSANT DE LA TROUSSE QUANTITE PLATE Plaque de bandelettes de microtitrage rev tues d OPG recombinant 12 x8 tests humain avec portoir de bandelettes WASHBUF Tampon de lavage concentration 20x bouchon couleur neutre 1x50 ml ASYBUF Tampon d chantilonage bouchon rouge pr t l emploi 1x7ml AB Anticorps polyclonal de ch vre avec anti sRANKL biotinyl s bouchon 1x22 ml vert pr t l emploi STD Standards 0 0 0625 0 125 0 25 0 5 1 2 pmol l bouchon blanc 7 flacons lyophilis s lyophilis s Contr les A B lyophilis RANKL humain recombin dans du s rum 2 flacons CTRL humain bouchon jaune Voir l tiquette pour la concentration exacte lvophilis s apr s reconstitution yop CONJ Conjugu streptavidin polyHRPO bouchon ambre pr t l emploi 1x22 ml SUB Substrat solution TMB bouteille ambr bouchon bleu pr t l emploi 1x22 ml STOP Solution
41. s possibles voir tiquette pour les normes de valeurs 9 CARACTERISTIQUES DU DOSAGE Gamme de valeurs Median s rum n 32 0 14 pmol l normales Nous recommandons chaque laboratoire d tablir son propre intervalle de valeurs normales Ne pas changer le type d enchantillon durant l tude Gamme de standard 0 0 625 0 125 0 25 0 5 1 2 pmol l Facteur de conversion pg ml pmol l 1 pg ml 0 05 pmol l MW 20 kD monom re Volume de l chantillon 150 ul plasma h parin ou s rum Limite de d tection LLoQ 0 pmol l 3 SD 0 01 pmol l 0 008pmol l Temps d incubation 2 h pendant la nuit 1 h 30 min 10 PRECISION Pr cision intra s rie 2 chantillons ont t test s 5 fois en utilisant la m me trousse et le m me op rateur Pr cision inter s ries 2 chantillons ont t test s 12 fois en utilisant 3 trousses diff rentes avec 3 op rateurs diff rents 13 24 Intra s rie n 5 Enchantillon 1 Enchantillon 2 Inter s ries n 12 Enchantillon 1 Enchantillon 2 Moyenne pmol l 0 12 1 00 Moyenne pmol l 0 12 1 00 ET pmol l 0 005 0 04 ET pmol l 0 004 0 02 CV 4 4 CV 3 2 Vous trouverez de plus amples informations sur la stabilit des chantillons en consultant notre site web a l adresse www bmgrp com voir Technical Files ou contactez notre service client le l adresse email export gmbrp com ou en composant le num ro de t l phone 43 1 29107 45 11 CONSEILS
42. scongelaci n Las muestras lip micas o hemolizadas pueden dar resultados err neos Las muestras deber n ser mezcladas correctamente antes de cada ensayo Se recomienda realizar las muestras por duplicado Si en la lectura de las muestras se manifiestan valores superiores al tope est ndar establecido recomendamos que se diluyan con muestras de suero de baja concentraci n y que se vuelvan a medir Para informaci n adicional sobre la estabilidad de las muestras por favor visite nuestra p gina web www bmgrp com ver ficheros t cnicos Technical Files o contacte con nuestro servicio de atenci n al cliente por e mail exportQ bmgrp com o por tel fono 43 1 29107 45 Reconstituci n Manipulaci n STD Est ndares y CTRL Controles Pipetear 700 ul de agua destilada o desionizada en cada vial Dejar a temperatura ambiente 18 24 C durante 15 min Los est ndares y controles reconstituidos son estables a 25 C hasta la fecha de caducidad marcada en la etiqueta evitar ciclos de congelaci n y descongelaci n WASHBUF Tamp n de lavado Diluir el concentrado 1 20 ej 50 ml WASHBUF 950 ml de agua destilada Los cristales en el tamp n concentrado pueden disolverse a temperatura ambiente El tamp n sin diluir es estable a 4 C 2 8 C hasta la fecha de caducidad marcada en la etiqueta Si el WASHBUF est diluido se mantiene estable durante un periodo de un mes como maximo a 4 C 2 8 C Emplear solo el WASHBUF tamp n de lavado
43. te washer is recommended for washing alternative multichannel pipette or manifold dispenser Refrigerator with 4 C 2 8 C ELISA reader capable of measuring absorbance at 450 nm with correction wavelength at 630 nm Graph paper or software for calculation of results 3 24 5 REAGENTS AND SAMPLE PREPARATION All reagents of the kit are stable at 4 C 2 8 C until the expiry date stated on the label of each reagent Sample preparation Collect venous blood samples by using standardized blood collection tubes for serum or Heparin plasma We recommend performing plasma or serum separation by centrifugation as soon as possible e g 10 min at 2000 x g preferably at 4 C 2 8 C If this is not possible store the samples at 4 C 2 8 C prior to centrifugation maximal one day The acquired plasma or serum samples should be measured as soon as possible For longer storage aliquot samples and store at 25 C or lower Samples should undergo 3 freeze thaw cycles only Lipemic or haemolysed samples may give erroneous results Samples should be mixed well before assaying We recommend duplicates for all values If samples read higher than the top standard we recommend diluting with a low measuring serum sample and re measuring the samples For further information on sample stability please visit our website www bmgrp com see Technical Files or contact our customer service by e mail export bmgrp com or by phone 43 1 29107 45 Reconstitution Ha
44. to each well Pipette additional 150 pl ASYBUF into well marked as blank a 3 Add 150 ul STD SAMPLE CTRL standard sample control into all wells except blank a 4 Cover tightly and incubate at room temperature 18 24 C for 2 hours Q 5 Aspirate and wash wells with 300 pl diluted WASHBUF wash buffer natural cap five times Remove remaining buffer by tapping plate against paper towel a 6 Add 200 pl AB biotinylated anti sRANKL antibody green cap into each well except blank Swirl gently Pipette additional 200 ul ASYBUF assay buffer red cap into well marked as blank Q 7 Cover tightly and incubate at 4 C 2 8 C over night 18 24 hours a 8 Aspirate and wash wells with 300 ul WASHBUF wash buffer natural cap five times Remove remaining buffer by tapping plate against paper towel 9 Add 200 pl CONJ conjugate amber cap into each well 10 Cover tightly and incubate at room temperature 18 24 C for 1 hour in the dark 11 Aspirate and wash wells with 300 pl WASHBUF wash buffer natural cap five times Remove remaining buffer by hitting plate against paper towel a 12 Add 200 ul SUB substrate blue cap into each well a 13 Incubate at room temperature 18 24 C for 30 minutes in the dark a 14 Add 50 ul STOP stop solution white cap into each well A 15 Measure absorbance immediately at 450 nm with reference 630 nm if available 24 24
45. uestro servicio de atenci n al cliente por e mail export bmgrp com o por tel fono 43 1 29107 45 11 OBSERVACIONES T CNICAS No mezclar ni sustituir reactivos procedentes de diferentes lotes o fabricantes No mezclar tapas y tapones de los viales de diferentes reactivos o de reactivos de diferentes lotes No utilizar los reactivos despu s de la fecha de caducidad Proteger los reactivos de la acci n directa de la luz solar Las soluciones de substrato deber an mantenerse incoloras hasta que se a adan a la microplaca Para asegurar unos resultados m s exactos es necesario tapar adecuadamente la placa con el papel adhesivo durante los pasos de incubaci n e Evitar la formaci n de espuma al mezclar los reactivos 12 PRECAUCIONES Todos los componentes de procedencia humana fueron testados para dectectar la presencia de anticuerpos de VIH y Hepatitis B el resultado fue negativo Sin embargo deber an manipularse y deshechar como si se tratara de material potencialmente infeccioso Todos los reactivos l quidos contienen Proclina 300 al 0 01 como conservante Evitar el contacto con la piel o con las membranas mucosas La Proclina 300 no es t xica en las concentraciones empleadas en este kit Como puede provocar reacciones al rgicas en la piel evitar el contacto con la piel o los ojos e Nopipetear con la boca e Nocomer o beber o aplicarse cosm ticos en las zonas de manipulaci n de los reactivos e Evitar el contacto co
46. uring pregnancy bone metastasis in cancer and sex hormone progestin driven breast cancer thermoregulation and finally in the development of type 2 diabetes mellitus Possible Indications Postmenopausal and senile osteoporosis Glucocorticoid induced osteoporosis Disease with locally increased resorption activity e Arthritis e Oncology e Type2 diabetes mellitus 2 CONTENTS OF THE KIT CONT KIT COMPONENTS QUANTITY PLATE Human recombinant OPG pre coated microtiter strips in strip holder 12 x 8 tests WASHBUF Wash buffer concentrate 20x natural cap 1x50 ml ASYBUF Assay buffer red cap ready to use 1x7 ml AB Goat polyclonal biotinylated anti sRANKL antibody green cap 1x22 ml ready to use STD Standards 0 0 0625 0 125 0 25 0 5 1 2 pmol l white caps 7 vials lyophilised Controls A B recombinant human RANKL in human serum yellow RL caps exact concentration after reconstitution see label 2 vials lyophilised CONJ Conjugate streptavidin polyHRPO amber cap ready to use 1x22 ml SUB Substrate TMB solution amber bottle blue cap ready to use 1x22 ml STOP Stop solution white cap ready to use 1x7 ml 3 ADDITIONAL MATERIAL SUPPLIED IN THE KIT e 3 self adhesive plastic films e QC protocol e Protocol sheet e Instruction manual for use 4 MATERIAL AND EQUIPMENT REQUIRED BUT NOT SUPPLIED Precision pipettes calibrated to deliver 50 ul 150 ul 200 ul 300 pl and disposable tips Distilled or deionised water Pla
47. ww bmgrp com vedere alla voce Technical Files o contattare il distributore autorizzato locale Ricostituzione Manipolazione STD Standards e CTRL Controlli A temperatura ambiente 18 24 C aggiungere 700 ul di acqua deionizzata o distillata a ciascun flacone e lasciare a riposo per 15 min STD e CTRL ricostituiti sono stabili a 25 C fino alla data di scadenza indicata sull etichetta di ciascun flacone STD e CTRL sono stabili per 3 cicli di congelamento scongelamento WASHBUF Tampone di lavaggio Diluire il tampone concentrato 1 20 ad es 50 ml WASHBUF 950 ml acqua distillata cristalli eventualmente presenti nel tampone concentrato si disciolgono a temperatura ambiente Il tampone concentrato stabile a 4 C 2 8 C fino alla data riportata sull etichetta di flacone Il tampone diluito stabile a 4 C 2 8 C per un mese Utilizzare solo il WASHBUF Tampone di lavaggio diluito durante l esecuzione del dosaggio 6 PRINCIPIO DEL DOSAGGIO Vedi capitolo 6 PRINCIPLE OF THE ASSAY delle istruzioni in lingua inglese 7 PROTOCOLLO DEL DOSAGGIO Portare tutti i reattivi e i campioni a temperatura ambiente 18 24 C prima di usarli per il dosaggio Evidenziare la posizione di BIANCO STD CAMPIONE CTRL Bianco Standard Campione Controllo sul protocol sheet Togliere le strip della micropiastra dalla confezione considerare minimo un pozzetto per il Bianco Conservare le strip inutilizzate con il dessiccante a 4 C
Download Pdf Manuals
Related Search