ENDOTHELIN (1-21)
Contents
1. 8 CALCULATION OF RESULTS Subtract the blank extinction from all other values Construct the standard curve from the standard values Use commercially available software or graph paper Obtain sample concentration from this calibration curve The assay has been evaluated using a 4PL algorithm Different curve fitting methods need to be evaluated by the user Respective dilution factors have to be considered Example typical STD curve ENDOTHELIN BI 20052 Measured OD 450 630 fmol ml 5 24 The quality control protocol supplied with the kit shows the results of the final release QC for each kit Data for optical density obtained by customers may differ due to various influences and or due to the normal decrease of signal intensity during shelf life However this does not affect validity of results as long as an optical density of 1 50 or higher is obtained for the standard with the highest concentration 9 ASSAY CHARACTERISTICS Values from apparently panel of 70 blood donors had a median of 0 26 fmol ml healthy individuals Each laboratory should establish its own reference data Standard range 0 10 fmol ml Sample volume 50 ul human EDTA plasma serum urine saliva or cell culture supernatant Detection Limit 0 fmol ml 3 SD 0 02 fmol ml Incubation time overnight 1 h 30 min Cross reactivity ET 1 21 100 ET2 1 21 10096 ET3 1 21 596 Big Endothelin 1 38 196 Big Endothelin 22 382. 196 In normal human plasma samples ET 2 is estimated to be present at less than 2096 of the ET 1 level ET 3 is estimated to be present at 50 of the ET 1 level Animal sera Horse cat pig 100 dog 66 and rat 79 Mouse sera can not be measured in this ELISA Recovery n 4 Spike 1 fmol ml Spike 5 fmol ml Recovery fmol ml 0 96 4 3 Recovery 96 96 86 For further information on assay characteristics please visit our website www bmgrp com technical file or contact our customer service by e mail export bmgrp com or by phone 43 1 29107 45 10 PRECISION Intra Assay 2 samples of known concentrations were tested 18 times Inter Assay 2 samples of known concentrations were tested in different assays 24 times Intra Assay n 18 Inter Assay n 24 Mean fmol ml 2 02 7 01 Mean fmol ml 3 8 0 8 SD 0 08 0 21 SD 0 2 0 04 CV 4 3 CV 6 5 11 TECHNICAL HINTS Do not mix or substitute reagents with those from other lots or sources Do not mix stoppers and caps from different reagents or use reagents between lots Do not use reagents beyond expiration date Protect reagents from direct sunlight Substrate solution should remain colourless until added to the plate To ensure accurate results proper adhesion of plate sealers during incubation steps is necessary 6 24 12 PRECAUTIONS Alltest components of human source were tested with 3 generation tests against HIV Ab and HBsAg and were found negative Nevertheless
3. CTRL 42 AB J i CONJ SUB ENZYME CATALYZED COLOUR CHANGE Aun 7 ASSAY PROTOCOL All reagents and samples must be at room temperature 18 26 C before use in the assay Mark position for BLANK STD Standards SAMPLE CTRL Control on the supplied protocol sheet Take microtiter strips out of the aluminium bag take a minimum of one well as Blank Store unused strips with desiccant at 2 8 C in the aluminium bag Strips are stable until expiry date stated on the label Add 50 ul STD SAMPLE CTRL Standard Sample Control in duplicate into respective well except blank Add 200 pl AB Detection antibody into each well except blank swirl gently Cover tightly and incubate overnight 16 24 hours at room temperature 18 26 C Aspirate and wash wells 5x with 300 pl diluted WASHBUF Wash buffer remove remaining WASHBUF by hitting plate against paper towel after the latest wash 5 Add 200 ul CONJ Conjugate into each well 6 Cover tightly and incubate 1 hour at room temperature 18 26 C T Aspirate and wash wells 5x with 300 ul diluted WASHBUF Wash buffer remove remaining WASHBUF by hitting plate against paper towel after the last wash 8 Add 200 ul SUB Substrate into each well 9 Incubate for 30 minutes at room temperature 18 26 C in the dark 10 Add 50 ul STOP Stop solution into each well shake well 11 Measure absorbance immediately at 450 nm with reference 630 nm if available D
4. HRPO tap n mbar lista 1x22 m para usar SUB Substrato soluci n de TMB tap n azul listo para usar 1x 22m STOP Soluci n de parada tap n blanco lista para usar 1x7 ml Soluci n stock de Endolelina 1 21 humana sint tica liofilizado tap n ET STOCK rojo consultar etiqueta para informaci n sobre las concentraciones 1 vial liofilizado exactas tras la reconstituci n 3 MATERIAL Y EQUIPAMIENTO EN EL KIT e 2 tiras adhesivas de pl stico e Protocolo para el Control de calidad QC e Hoja con el esquema del protocolo e Manual de instrucciones 4 MATERIAL Y EQUIPAMIENTO REQUERIDO QUE NO SE SUMINISTRA Pipetas de precision calibradas de 50pl 200ul 300ul 500pl y puntas desechables e Lector de ELISA con capacidad para leer absorbancias a 450 nm con correcci n de lectura a 630 nm e Papel para representaci n gr fica o programa inform tico para el calculo de los resultados e Agua destilada o desionizada 18 24 5 PREPARACION DE LOS REACTIVOS Y DE LAS MUESTRAS Todos los reactivos en el kit son estables a 4 C 2 8 C hasta la fecha de caducidad establecida en la etiqueta de cada reactivo Preparacion de las muestras Pueden utilizarse con este ensayo muestras de suero plasma EDTA orina saliva y sobrenadante de cultivos celulares No cambiar el tipo de muestra durante los estudios Las muestras de suero o de plasma EDTA reci n extraidas se colocan inmediatamente en hielo y se centrifugan en el mismo dia Las muestras
5. Termin Waznosci Lej rati id Doba exspir cie Doba exspirace Consider instructions for use Bitte Gebrauchsanweisung beachten Consultez la notice d utilisation Consultare le istruzioni per l uso Consulte las instrucciones de utilizaci n Consulte as instru es de utiliza o Raadpleeg de gebruiksaanwijzing Se brugsanvisningen Las anvisningarna fore anvandning Prosze przeczyta instrukcje wykonania Vegy k figyelembe a haszn lati utas t sban foglaltakat Postupujte pod a pokynov na pou itie Postupujte dle n vodu k pou it In vitro Diagnostic Medical Device for in Vitro Diagnostic Use In vitro Diagnostikum zur In vitro Diagnostik Dispositif m dical de diagnostic in vitro Pour usage diagnostique in vitro Dispositivo medico per diagnostica in vitro per uso diagnostico in vitro Dispositivo m dico de diagn stico in vitro para uso diagn stico in vitro Dispositivo m dico para diagn stico in vitro Para utiliza o de diagn stico in vitro Medisch hulpmiddel voor diagnostiek in vitro Voor diagnostisch gebruik in vitro Medicinsk udstyr til in vitro diagnostik Udelukkende til in vitro diagnostisk anvendelse Medicinteknisk produkt avsedd f r in vitro diagnostik F r in vitro diagnostiskt bruk Wyr b medyczny do Diagnostyki In Vitro In vitro orvosdiagnosztikai term k In vitro diagnostick zdravotn cky materi l ur en pre diagnostiku in vitro In vitro diagnostic
6. en cada pocillo excepto para el blanco agitar suavemente 3 Tapar con cuidado e incubar durante la noche 16 24 horas a temperatura ambiente 18 26 C 4 Aspirar y lavar los pocillos 5x con 300 ul de WASHBUF diluido tamp n de lavado eliminar el WASHBUF remanente golpeando la placa suavemente sobre papel absorbente despu s del ltimo lavado 5 A adir 200 ul de CONJ Conjugado a cada pocillo 6 Tapar con cuidado e incubar durante 1 hora a temperatura ambiente 18 26 C T Aspirar y lavar los pocillos 5x con 300 ul de WASHBUF diluido tamp n de lavado eliminar el WASHBUF remanente golpeando la placa suavemente sobre papel absorbente despu s del ltimo lavado 8 A adir 200 ul de SUB Substrato en cada pocillo 9 Incubar durante 30 minutos a temperatura ambiente 18 26 C en oscuridad 10 A adir 50 ul de soluci n de parada Stop solution a cada pocillo agitar con cuidado 11 Medir la absorbancia inmediatamente a 450 nm y utilizar como referencia un filtro de 630 nm si est disponible 8 CALCULO DE RESULTADOS Restar el valor del blanco a todos los dem s valores Realizar una curva est ndar a partir de los valores de los est ndares Utilizar un programa inform tico comercial o un papel de representaci n gr fica Obtener el valor de la concentraci n de la muestra a partir de la curva est ndar El ensayo fue evaluado con un algoritmo de 4PL Si se emplean otros m todos de ajuste de curva deben se evaluados p
7. 300ul 500pl et embouts jetables e Lecteur ELISA pour lire l absorbance 450 nm reference 630 nm e Papier millim tr ou logiciel pour le calcul des r sultats e Eau distill e ou d ionis e QUANTITE 12 x 8 tests 1x50 ml 1x22ml 6 flacons lyophilis s 2 flacons lyophilis s 1x22 ml 1x22 ml 1x7 ml 1 flacon Iyophilise 13 24 5 PREPARATION DES REACTIFS ET DES ECHANTILLONS Tous les r actifs de la trousse restent stables 4 C 2 8 C jusqu la date de p remption voir tiquette du r actif Pr paration des chantillons le s rum le plasma EDTA l urine la salive et les surnageants de culture cellulaire conviennent pour cette m thode de dosage Ne pas changer de type d chantillon au cours de l tude Pour le plasma EDTA ou le s rum les chantillons pr lev s doivent tre imm diatement plac s sur de la glace et centrifug s le jour m me Les chantillons doivent tre conserv s 25 C Pour une conservation long terme congeler 70 C Les chantillons d urine peuvent tre utilis s sans traitement pr alable viter les cycles r p t s de cong lation d cong lation Les chantillons lip miques ou h molys s peuvent fournir des r sultats erron s Bien homog n iser les chantillons avant dosage Il est recommand de doser les standards contr les et chantillons en double On peut diluer les chantillons avec une haute concentration dans une solution de chlorure de s
8. INTRODUCTION Cleavage of Big Endothelin by a membrane bound metalloproteinase the Endothelin Converting Enzyme ECE leads to the active ET 1 21 a potent vasoconstrictor and to the biological inactive C terminal fragment 22 38 The half life of ET in the plasma is less than one minute whereas clearance of Big ET is much slower Endothelin has been identified in a variety of tissues including lung kidney brain pituitary and peripheral endocrine tissues and placenta The biological role of ET extends beyond regulating vascular tone also in its growth regulatory properties The peptide interacts in an autocrine paracrine manner with specific ET receptors found on numerous cells including smooth muscle cells myocytes and fibroblasts Indications Heart failure and acute myocardial infarction Oncology Marker for endothelial dysfunction liver damage and renal disease Hypertension 2 CONTENTS OF THE KIT CONT KIT COMPONENTS QUANTITY Polyclonal anti Endothelin antibody microtiter plate strips in stripholder PLATE ae E packed in aluminium bag with desiccant WASHBUF Wash buffer concentrate 20x natural cap 1x50ml Detection antibody monoclonal mouse anti Endothelin antibody green 12 x 8 tests AB 1x22 ml cap ready to use STD Standards 0 10 fmol ml synthetic human Endothelin 1 1 21 in human 6 vials lyophilised serum white caps lyophilised CTRL Controls synthetic human Endothelin 1 1 21 in human serum yellow 2 via
9. Proclin 300 als Konservierungsmittel Proclin 300 ist in der verwendeten Konzentration nicht toxisch Allergische Reaktionen sind m glich e Nicht mit dem Mund pipettieren e Nichtrauchen essen trinken oder Kosmetika benutzen w hrend der Verwendung der Testreagenzien e Verwenden Sie Handschuhe zur Vermeidung jedes Kontaktes zu Reagenzien e Schwefels ure reizt die Augen und die Haut Bei Ber hrung gr ndlich mit Wasser sp len 13 LITERATUR Siehe Kapitel 13 LTERATURE im englischen Teil des Beipacktextes 12 24 1 INTRODUCTION Le clivage de la big endoth line par une m talloprot inase membranaire l enzyme de conversion de l endoth line ECE induit la formation d une endoth line active ET 1 21 qui est un vasoconstricteur puissant et d un fragment C terminal 22 38 biologiquement inactif La demi vie d ET dans le plasma est inf rieure une minute alors que la clairance de la Big ET est bien plus lente L endoth line a t identifi e dans de nombreux tissus dont les poumons les reins le cerveau les tissus endocriniens pituitaires et p riph riques et le placenta Le r le biologique de l ET va au del d une simple r gulation du tonus vasculaire ou de la croissance Le peptide interagit de facon autocrine paracrine avec des r cepteurs ET sp cifiques que l on trouve dans de nombreuses cellules dont les cellules des muscles lisses les myocytes et les fibroblastes Indications e Insuffisance cardiaque et infection
10. aigu du myocarde e Oncologie e Marqueur de dysfonctionnement endoth lial maladie du foie et des reins e Hypertension 2 CONTENU DE LA TROUSSE CONT COMPOSITION DE LA TROUSSE PLATE microplaque de puits rev tus d anticorps polyclonal anti endoth line dans un support emball dans un sac en aluminium avec dessicateur WASHBUF Tampon de lavage concentr 20x bouchon non color AB Anticorps monoclonal de souris anti endoth line bouchon vert pr t l emploi STD Standards 0 10 fmol ml endoth line 1 humaine de synth se 1 21 dans du serum humain bouchons blancs lyophilis s Contr les Endoth line 1 humaine de synth se 1 21 dans du serum CTRL humain bouchons jaunes lyophilis pour la concentration exacte apr s reconstitution se reporter l tiquette du flacon CONJ Conjugu anticorps anti souris IgG HRPO bouchon orange pr t l emploi SUB Substrat solution TMB bouchon bleu pr t l emploi STOP Solution STOP bouchon blanc pr t l emploi R serve d endotheline Endoth line 1 humaine de synth se 1 21 ET STOCK lyophilis e bouchon rouge pour la concentration exacte apr s reconstitution se reporter l tiquette du flacon 3 AUTRE MAT RIEL INCLUS DANS LA TROUSSE e 2 bandes de film adh sif e Le certificat de conrt le e Une feuille de protocole e La notice d utilisation e MATERIEL ET EQUIPEMENT NECESSAIRE MAIS NON FOURNI Micropipettes de pr cisions calibr es pour distribuer 50ul 200l
11. deber an almacenarse a 25 C o nivel para periodod prolongados Las muestras de orina pueden utilizarse sin ningun tipo de pretratamiento Evitar los ciclos repetidos de congelaci n y descongelaci n Las muestras con elevado contenido en lipidos o muy bemolizadas pueden dar lugar a resultados err neos Las muestras deben estar bien mezcladas antes de someterse al ensayo Se recomienda la realizaci n de duplicados para todas las muestras Si se requiere realizar una diluci n de las muestras de elevada concentraci n utilizar una soluci n de cloruro sddico al 0 9 Reconstituir como se indica STD Estandares tapones blancos en 0 5ml de agua destilada a temperatura a ambiente 18 26 C durante 30 minutos agitar bien Los estandares reconstituidos son estables a 25 C 6 nivel hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta jEvitar ciclos repetidos de congelaci n y descongelaci n CTRL Controles tap n amarillo en 0 5ml de agua destilada a temperatura a ambiente 18 26 C durante 30 minutos agitar bien Los est ndares reconstituidos son estables a 25 C 6 nivel hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta jEvitar ciclos repetidos de congelaci n y descongelaci n WASHBUF Tamp n transparente Diluir el concentrado 1 20 e g 50 ml WASHBUF 950 ml de agua destilada Los cristales en el tamp n de concentrado pueden disolverse a temperatura ambiente El tamp n es estable a 2 8 C hasta la fecha de caducidad marc
12. 2 esta presente a unos niveles de concentraci n inferiores al 20 de la ET 1 Se estima que la ET 3 est presente con un nivel de concentraci n del 50 en relaci n con la ET 1 Suero animal Caballo gato cerdo 100 perro 66 y rata 79 El suero de rat n no puede ser cuantificado con este kit de ELISA Adici n de 1 fmol ml Adici n de 5 fmol ml 0 96 43 96 86 Para mas informaci n en las caracter sticas del ensayo por favor visite nuestra pagina web www bmgrp com technical file o contacte con nuestro servicio de atenci n al cliente por e mail export bmgrp com o por tel fono 43 1 29107 45 10 PRECISION Intra Ensayo Para valorar la precisi n intra ensayo se analizaron 18 replicados de 2 muestras de concentraciones conocidas Inter Ensayo Para valorar la precisi n inter ensayo se analizaron 2 muestras de concentraciones conocidas en 12 ensayos Intra Ensayo n 18 Media fmol ml SD CV Inter Ensayo n 24 2 02 7 01 Media fmol ml 3 8 0 8 0 08 0 21 SD 0 20 0 04 4 3 CV 6 5 11 OBSERVACIONES TECNICAS e No mezclar o sustituir reactivos de diferentes lotes o fabricantes e No mezclar los tapones de los viales de diferentes reactivos o de reactivos de diferentes lotes e No utilizar los reactivos despu s de la fecha de caducidad Proteger los reactivos de la acci n directa de la luz solar e La soluci n de substrato deber a permanecer incolora hasta que se a ada a la placa e Para asegurar
13. Aluminiums ckchen Mindestens 1 Well f r den Leerwert reservieren Nicht verwendete Mikrotiterstreifen k nnen mit Trockenmittel im Aluminiumsackchen bis zum angegebenen Ablaufdatum gelagert werden 1 Pipettieren Sie 50 ul STD SAMPLE CTRL Standard Probe Kontrolle in Doppelbestimmung in die Mikrotiterstreifen mit Ausnahme des Leerwertes 2 Pipettieren Sie 200 ul AB monoklonal Maus anti Endothelin Antik rper in alle Wells mit Ausnahme des Leerwertes mischen 3 Streifen abdecken und ber Nacht 16 24 Stunden bei Raumtemperatur 18 26 C inkubieren 4 Inhalt der Wells verwerfen und 5x mit 300 ul verd nnten WASHBUF Waschpuffer waschen Nach dem letzten Waschschritt Reste von Waschpuffer durch Ausklopfen auf saugf higem Papier entfernen 5 Pipettieren Sie 200 ul CONJ Konjugat in alle Wells 6 Streifen abdecken und 1 Stunde bei Raumtemperatur 18 26 C inkubieren T Inhalt der Wells verwerfen und 5x mit 300 ul verd nnten WASHBUF Waschpuffer waschen Nach dem letzten Waschschritt Reste von Waschpuffer durch Ausklopfen auf saugf higem Papier entfernen 8 Pipettieren Sie 200 ul SUB Substrat in alle Wells 9 30 Minuten bei Raumtemperatur 18 26 C im Dunkeln inkubieren 10 Pipettieren Sie 50 ul STOP Stoppl sung in alle Wells mischen 11 Extinktion unmittelbar bei 450 nm messen mit 630 nm als Referenz falls m glich 8 BERECHNUNG DER ERGEBNISSE Die OD des Leerwertes ist von allen Wells abzuziehen Konstruier
14. ENDOTHELIN 1 21 EN ENZYME IMMUNOASSAY FOR THE QUANTITATIVE DETERMINATION OF HUMAN ENDOTHELIN 1 21 IN SERUM EDTA PLASMA URINE SALIVA AND CELL CULTURE SUPERNATANTS CAT NO BI 20052 12 X 8 TESTS D E ENZYMIMMUNOASSAY ZUR QUANTITATIVEN BESTIMMUNG VON HUMAN ENDOTHELIN 1 21 IN SERUM EDTA PLASMA URIN SPEICHEL UND ZELLKULTURUBERSTAND KAT NR BI 20052 12 X 8 TESTE FR DOSAGE IMMUNOENZYMATIQUE POUR LA DETERMINATION QUANTITATIVE D ENDOTHELINE HUMAINE 1 21 DANS LE SERUM LE PLASMA EDTA L URINE LA SALIVE ET LES SURNAGEANTS DE CULTURE CELLULAIRE CAT NO BI 20052 12 X 8 TESTS ES ENZIMOINMUNOENSAYO PARA LA DETERMINACION CUANTITATIVA DE ENDOTELINA HUMANA 1 21 EN SUERO PLASMA EDTA ORINA SALIVA Y EN SOBRENADANTE DE CULTIVOS CELULARES CAT NO BI 20052 12 X 8 TESTS rev no 120216 replacing 090701 C BLOMEDICA VLIL Biomedica Medizinprodukte GmbH amp Co KG A 1210 Wien Divischgasse 4 Tel 43 1 291 07 45 Fax 43 1 291 07 85 E mail export bmgrp com 1 24 CONTENT INHALT SOMMAIRE CONTENIDO 1 ENGLISH 3 2 DEUTSCH 9 3 FRANCAIS 13 4 ESPANIOL 18 Additional information on our products is available on our website Zus tzliche Information zu unseren Produkten ist auf unserer Homepage erh ltlich Des informations compl mentaires figurent sur notre site Web Encontrar informaci n adicional sobre nuestros productos en nuestra p gina web www bmgrp com 2 24 1
15. ada en la etiqueta Emplear solo WASHBUFdiluido Tamp n de lavado para el ensayo ET STOCK Soluci n stock de Endotelina tap n rojo Cuantificaci n directa de Endotelina en el sobrenadante de c lulas en cualtivo Reconstituir en 2 ml de medio de cultivo celular a temperatura ambiente 18 26 C durante 30 minutos agitar bien Consultar etiqueta para informaci n sobre las concentraciones exactas tras la reconstituci n eg 10 fmol ml La soluci n stock de ET reconstituida es estable a 25 C 6 nivel hasta la fecha de caducidad indicada en su etiqueta jEvitar ciclos repetidos de congelaci n y descongelaci n Medida de muestras en cultivos celulares iNo utilizar los est ndares de plasma tap n blanco ni los controles tap n amarillo Preparar una diluci n seriada del cultivo celular ET STOCK endotelina stock tap n rojo con medio de cultivo celular hasta aproximadamente 0 625 fmol ml ej 10 5 2 5 1 25 0 625 fmol ml El medio de cultivo celular se utiliza como el est ndar cero Diluir el sobrenadante delos cultivos celulares de acuerdo con las concentraciones esperadas con el medio de cultivo La diluci n del sobrenadante dependera de la cantidad de endotelina secretada por el tipo celular del que se trate Medida de muestras en saliva Para la recogida de las muestras se recomienda la utilizaci n del dispositivo Salivettes de Sarstedt Recogida de la muestra No se debe comer ni fumar al menos durante una
16. ate stated on the label Avoid repeated freeze thaw cycles Measurement of Cell culture samples Do not use the plasma standards white caps and controls yellow cap Prepare a serial dilution of the cell culture ET STOCK Endothelin stock red cap with cell culture medium down to appr 0 625 fmol ml e g 10 5 2 5 1 25 0 625 fmol ml Cell culture medium is used as a zero standard Dilute cell culture supernatant according to the expected concentration with the culture medium Dilution of supernatant is dependent on amount of Endothelin secreted by the respective cell type Measurement of saliva samples For sample collection we recommend Sarstedt Salivettes Sample collection Last meal or cigarette should have been consumed at least one hour before sample collection Rinse mouth with water wait 10 minutes Put cotton roll of the Sarstedt Salivette tube into the mouth chew for 30 sec keep in mouth for two additional minutes Place the cotton roll into the flat bottom upper tube of the Salivette seal with the stopper and centrifuge for 3 min at 1000 rcf rotational centrifugal force g Remove the flat bottom tube from the Salivette and pipette the clear saliva from the bottom of the V tube aliquot and store at 25 C or lower Use the clear saliva according to the assay protocol 4 24 6 PRINCIPLE OF THE ASSAY ES bat Geh 2 P 3 A 2 lt y y c 9 les PRECOATED AB CAL SAMPLE
17. contre une serviette en papier afin d enlever les derni res gouttes de WASHBUF 5 Distribuer 200 ul CONJ Conjugu dans chaque puits 6 Couvrir la plaque et incuber pendant 1 heure temp rature ambiante 18 26 C T Aspirer et laver 5 fois les puits avec 300 ul de WASHBUF tampon de lavage dilu Apr s le dernier lavage taper la plaque contre une serviette en papier afin d enlever les derni res gouttes de WASHBUF 8 Distribuer 200 ul SUB Substrat dans chaque puits 9 Incuber 30 minutes temp rature ambiante 18 26 C dans l obscurit 10 Rajouter 50 ul de STOP Solution Stop dans chaque puits et bien homog n iser 11 Mesurer imm diatement l absorbance 450 nm avec une r f rence 630 nm si possible Se 8 CALCUL DES RESULTATS S oustraire la valeur de l extinction du Blanc des autres valeurs Tracer la courbe d talonnage a partir des valeurs des standards Utiliser un logiciel du commerce ou du papier millim tr Obtenir la concentration des chantillons a partir de cette courbe Le dosage a t valu avec un algorithme 4PL Les autres m thodes de lissage des courbes doivent tre valu es par l utilisateur Les facteurs de dilution respectifs devront tre galement pris en compte Courbe STD typique Voir au chapitre 8 CALCULATION OF RESULTS dans la version anglaise de la notice d utilisation Le certificat de contr le fourni avec le kit pr sente les r sultats obtenus lors du certif
18. e temp rature ambiante 18 26 C laisser reposer pendant 30 min bien homog n iser La concentration exacte apr s la reconstitution est indiqu e sur l tiquette du flacon par exemple 10 fmol ml L ET ainsi reconstitu e est stable 25 C ou basse jusqu la date de p remption figurant sur l tiquette Eviter les cycles r p t s de cong lation d cong lation Mesure des chantillons de culture cellulaire Ne pas utiliser les standards bouchons blancs et les contr les bouchon jaune Pr parer une dilution en cascade partir du flacon ET STOCK Endoth line bouchon rouge avec le milieu de culture cellulaire jusqu environ 0 625 fmol ml p e 10 5 2 5 1 25 0 625 fmol ml Le milieu de culture cellulaire sert de standard z ro Diluer le surnageant de culture cellulaire avec le milieu de culture en fonction de la concentration attendue La dilution du surnageant d pend de la quantit d Endoth line secr t e par le type de cellule concern Mesure des chantillons de salive Pour recueillir la salive nous recommandons les Salivettes Sarstedt Recueil de l chantillon Le dernier repas ou la derni re cigarette doit avoir t termin au moins une heure avant le recueil de l chantillon 14 24 Rincer la bouche l eau attendre 10 minutes Placer le rouleau de coton de la Salivette Sarstedt dans la bouche m cher environ 30 secondes conserver dans la bouche deux minutes suppl menta
19. en Sie eine Standardkurve aus den Werten der Standards unter Verwendung von kommerziell erh ltlichem Millimeterpapier oder einer geeigneten Software Die Konzentration der Proben wird aus der Standardkurve abgelesen Eventuell verwendete Verd nnungen m ssen ber cksichtigt werden Typische STD Kurve Siehe Kapitel 8 CALCULATION OF RESULTS im englischen Teil des Beipacktextes Auf dem beigepackten QC Protokoll sind die Resultate bei der QC Freigabe des Kits vermerkt Vom Verwender erhaltene Daten der optischen Dichte OD k nnen abweichend sein bedingt durch verschiedene Einfl sse und oder dem normalen Signalverlust des Kits w hrend der Laufzeit Dieser m gliche Signalverlust hat keinen Einfluss auf die G ltigkeit der Resultate so lange die OD des h chsten Standards den Wert 1 50 oder h her erreicht 9 TESTMERKMALE Werte von anscheinend Ein Kollektiv von 70 Blutspendern hatte einen Median von 0 26 fmol ml gesunden Spendern Jeder Verwender sollte eigene Referenzdaten erheben Standardbereich 0 10 fmol ml Probenvolumen 50 ul EDTA Plasma Serum Urin Speichel oder Zellkultur berstand Detektionsgrenze 0 fmol ml 3 SD 0 02 fmol ml Inkubationszeiten ber Nacht 1 h 30 min Kreuzreaktivitaten ET 1 21 100 ET2 1 21 100 ET3 1 21 lt 5 Big Endothelin 1 38 lt 1 Big Endothelin 22 38 lt 1 11 24 Es wird geschatzt dass ET 2 in normalen Plasma Proben zu 20 des ET 1 Wertes und ET 3 zu 50 des ET 1 Werte
20. eut tre mesur dans cet ELISA surcharge surcharge 1 fmol ml 5 fmol ml 0 96 43 96 86 Vous trouverez de plus amples informations sur la stabilit des chantillons en consultant notre site web a l adresse www bmgrp com technical file ou contactez notre service client le l adresse email export gmbrp com ou en composant le num ro de t l phone 43 1 29107 45 10 PRECISION Pr cision intra s rie 2 chantillons ont t test s 16 fois en double lors d un essai Pr cision inter s ries 2 chantillons ont t test s 12 fois en double pendant 12 essais Intra s rie n 16 Inter s ries n 24 Moyenne fmol ml 2 02 7 01 Moyenne fmol ml 3 8 0 8 SD 0 08 0 21 SD 0 2 0 04 CV 4 3 CV 6 5 11 CONSEILS TECHNIQUES Ne pas remplacer ou m langer les r actifs qui sont fournis avec ce kit avec ceux de lots ou sources diff rents Ne m langer les embouts ou bouchons de r actifs diff rents ni utiliser les r actifs d autres lots Ne pas utiliser les r actifs au dela de leur date de p remption Prot ger les r actifs contre la lumi re Les solutions de substrat tre incolores avant leur ajout a la plaque Pour obtenir des r sultats fiables il est n cessaire de couvrir correctement la microplaque pendant les tapes d incubation 16 24 12 PRECAUTIONS Tous les produits d origine humaine utilis s dans ce kit ont t test s avec des m thodes de 3 me g n ration contre les anticorps ant
21. hohe Proben zu verd nnen verwenden Sie 0 9 NaCl L sung N here Informationen zur Probenstabilit t finden sie auf unserer Website unter www bmgrp com technical file oder Sie kontaktieren unser Kundenservice Email unter export bmgrp com Tel unter 43 1 29107 45 Rekonstiturtion Handhabung STD Standards weisse Kappe L sen Sie die Standards in jeweils 0 5 ml destilliertem Wasser bei Raumtemperatur 18 26 C f r 30 min gut mischen Die L sung ist bei 25 C oder tiefer bis zum Ablaufdatum haltbar Vermeiden Sie Frier Tau Zyklen CTRL Kontrollen gelbe Kappen L sen Sie das Lyophilisat in 0 5 ml destilliertem Wasser bei Raumtemperatur 18 26 C f r 30 min gut mischen Die L sung ist bei 25 C oder tiefer bis zum Ablaufdatum haltbar Vermeiden Sie Frier Tau Zyklen WASHBUF Wasch Puffer Das mitgelieferte Konzentrat wird 1 20 verd nnt z B 50 ml WASHBUF 950 ml destilliertes Wasser Kristalle im Pufferkonzentrat l sen sich bei Raumtemperatur auf Der verd nnte Puffer ist bei 2 8 C bis zum Ablaufdatum haltbar Im Testsystem darf nur verd nnter WASHBUF Waschpuffer verwendet werden ET STOCK Endothelin stock rote Kappe Bestimmung von Endothelin in Zellkultur berst nden L sen Sie das Lyophilisat in 2 ml Zellkulturmedium bei Raumtemperatur 18 26 C f r 30 min gut mischen Genaue Konzentration nach Rekonstitution siehe Etikett z B 10 fmol ml Der rekonstituierte ET STOCK ist bei 25 C oder tiefer b
22. hora antes de la recogida de la muestra Lavar la boca con agua esperar 10 minutos Situar la parte algodonosa del tubo salivette Sarstedt dentro de la boca recoger la saliva durante 30 segundos y mantener dentro de la boca durante dos minutos m s Colocar la parte algodonosa dentro del tubo superior de fondo plano del Salivette cerrarlo y centrifugar durante 3 minutos a 1000 rcf fuerza rotacional de centrifugaci n g 19 24 Extraer el tubo de fondo plano del Salivette y pipetear la saliva clara del fondo del tubo en V alicuotar y almacenar a 25 C nivel Utilizar muestras claras de salivas siguiendo este protocolo 6 PRINCIPIO DEL ENSAYO Ver capitulo 6 principios del ensayo de la versi n inglesa del manual de instrucciones del ensayo 7 PROTOCOLO DEL ENSAYO Todos los reactivos y las muestras deben alcanzar la temperatura ambiente 18 26 C antes de su utilizaci n en el ensayo Marcar la posici n para el BLAN STD estandares MUES CTRL Control en la hoja del esquema de la placa Sacar las tiras de la bolsa de aluminio y emplear como m nimo un pocillo como blanco Almacenar las tiras no utilizadas en la bolsa de aluminio con desecante a 2 8 C Las tiras son estables hasta la fecha de caducidad indicada en su etiqueta 1 A adir 50 ul de STD SAMPLE CTRL est ndar muestra control por duplicado a los ocillos respectivos excepto para el blanco 2 A adir 200 pl de anticuerpo AB anticuerpo de detecci n
23. i VIH et l Antigene VHB et ont t trouv n gatifs Cependant ils doivent tre manipul s comme tant susceptibles de transmettre des maladies infectieuses R actifs liquides contenant comme conservateur du Proclin en concentration lt 0 1 Proclin 300 n est pas toxique dans les concentrations utilis es dans cette trousse Cependant il peut entrainer des r actions allergiques et tout contact avec la peau et les yeux doit tre vit Ne pas pipeter avec la bouche Ne pas manger boire ni fumer ni appliquer des produits cosm tiques pendant la manipulation des r actifs Porter des gants pour viter tout contact avec les r actifs L acide sulfurique irrite les yeux et la peau Laver avec de l eau en cas de contact viter le contact avec la peau et les muqueuses Les irritations sont possibles laver avec de l eau en cas de contact 13 BIBLIOGRAPHIE Voir au chapitre 13 LITERATURE dans la version anglaise de cette notice 17 24 1 INTRODUCCION Ei corte de la endotelina de gran tama o big endothelin por una metaloproteinasa unida a membrana la enzima convertasa de endotelina Endothelin Converting Enzime ECE conduce a la formaci n de la endotelina activa ET 1 21 un potente vasoconstrictor y al fragmento C terminal 22 38 biol gicamente inactivo La vida media de la ET en el plasma es inferior a un minuto siendo mucho mas lenta la liberaci n de la ET de gran tama o La endotelina ha sido ident
24. icat de lib ration du lot Les donn es de densit optique obtenues par les utilisateurs peuvent tre diff rentes de celles obtenues par le laboratoire de contr le ceci cause de plusieurs facteurs et notamment la perte de signal que l on constate pendant la dur e de vie d un kit Cependant ceci n a pas d incidence sur la validit des r sultats partir du moment o la densit optique de 1 50 est obtenue pour le standard ayant la concentration la plus lev e 9 CARACTERISTIQUES DU DOSAGE 15 24 gamme des valeurs normales Gamme standard Volume de l chantillon Limite de d tection Dur e d incubation R actions crois es R cup ration n 4 Recuperation fmol ml R cup ration Un panel de 70 donneurs de sang avait une m diane de 0 26 fmol ml Nous recommandons chaque laboratoire d tablir sa propre gamme de valeurs normales 0 10 fmol ml 50 ul plasma EDTA humain s rum urine salive ou surnageant de culture cellulaire 0 fmol ml 3 SD 0 02 fmol ml Une journ e 16 24 h 1h 30 min ET 1 21 100 ET2 1 21 100 ET3 1 21 596 Big Endoth line 1 38 lt 1 Big Endoth line 22 38 196 Dans les chantillons normaux de plasma humain ET 2 est consid r comme tant pr sent moins de 20 du niveau ET 1 ET 3 est consid r comme tant pr sent 50 du niveau ET 1 S rum animal Cheval chat porc 100 chien 66 et rat 79 Le s rum de la souris ne p
25. ificada en una gran variedad de tejidos incluyendo pulmones rifiones cerebro pituitaria tejido endocrino perif rico y placenta El papel biol gico de la ET se extiende mas alla de la regulaci n del tono vascular observandose un incremento en sus propiedades reguladoras El p ptido interacciona de forma autocrina y paracrina con sus receptores especificos de ET encontrados en muchos tipos celulares incluyendo a las c lulas de musculo liso los miocitos y los fibroblastos Indicationes e Valor pron stico en el fallo cardiaco y en el infarto agudo de miocardio e Oncolog a e Marcador de la disfunci n endotelial da o hep tico y enfermedad renal e Hipertensi n 2 CONTENIDO DEL KIT CONT COMPONENTES DEL KIT CANTIDAD PLACA Tiras de micropocillos recubiertas de Anticuerpo Monoclonal anti 12 x 8 tests Endotelina incluidas en bolsa de aluminio con desecante WASHBUF Tamp n de lavado concentrado 20x tap n transparente 1x50m AB Anticuerpo de detecci n anticuerpo monoclonal de rat n anti 1 k A x22m endotelina tap n verde listo para usar STD Est ndares 0 10 fmol ml Endotelina 1 1 21 humana sint tica en 6 viales liofilizados serum humano tap pn blanco liofilizado Controles Endotelina 1 1 21 humana sint tica en serum humano CTRL liofilizado tap n amarillo consultar etiqueta para informaci n sobre 2 viales liofilizados las concentraciones exactas tras la reconstituci n CONJ Conjugado anticuerpo de rat n anti IgG
26. ires Placer le rouleau de coton dans le tube sup rieur fond plat de la Salivette fermer avec le bouchon et centrifuger pendant 3 minutes 1000 g min Enlever le tube fond plat de la Salivette et pr lever la salive avec une pipette partir du bas du tube en V aliquoter et conserver 25 C ou basse Utiliser la salive qui doit tre limpide conform ment au protocole de dosage 6 PRINCIPE DU DOSAGE Voir au chapitre 6 PRINCIPLE OF THE ESSAY de la version anglaise de la notice 7 PROTOCOLE DU DOSAGE Tous les r actifs doivent tre temp rature ambiante 18 26 C avant leur utilisation pour le dosage Marquer la position du BLANC STD ECH CTRL standard chantillon contr le sur la feuille du protocole Sortir du sac alu les barrettes de micropuits en pr voyant au moins un puits comme Blanc Conserver toutes les barrettes non utilis es avec le dessicateur 2 8 C dans le sac alu Les barrettes restent stables jusqu la date de p remption figurant sur l tiquette 1 Distribuer 50 ul STD SAMPLE CTRL standard chantillon contr le en double dans leurs puits respectifs sauf le blanc 2 Rajouter 200 ul AB anticorps de d tection dans chaque puits sauf le blanc et agiter doucement Couvrir la plaque et incuber une journ e 16 24 h temp rature ambiante 18 26 C 4 Aspirer et laver 5 fois les puits avec 300 ul de WASHBUF tampon de lavage dilu Apr s le dernier lavage taper la plaque
27. is zum Ablaufdatum haltbar Vermeiden Sie Frier Tau Zyklen Messung von Zellkulturproben STD und CTRL Plasma Standard wei e Kappen und Kontrolle gelbe Kappe nicht verwenden Mit dem rekonstituierten Zellkultur ET STOCK Endothelin 1 stock eine Verd nnungsreihe bis etwa 0 625 fmol ml in Zellkulturmedium herstellen z B 10 5 2 5 1 25 0 625 fmol ml Verwenden Sie Zellkulturmedium als 0 Standard e Verd nnen Sie die Zellkultur berst nde je nach erwarteter Endothelin Konzentration mit Zellkulturmedium Messung von Speichelproben Zur Probennahme empfehlen wir Sarstedt Salivette Eine Stunde vor Probennahme nicht rauchen und nicht essen Probennahme Mund mit Wasser aussp len 10 min warten Die Baumwollrolle der Salivette in den Mund nehmen 30 Sek kauen dann f r 2 Minuten im Mund behalten Baumwollbausch in das mitgelieferte R hrchen plazieren mit dem Stoppel verschlie en und 3 Minuten bei 1000g zentrifugieren Uberstand abheben wenn n tig aliquotieren und bei 25 C oder tiefer lagern berstand direkt im Test einsetzen 10 24 6 TESTPRINZIP Siehe Kapitel 6 PRINCIPLE OF THE ASSAY im englischen Teil des Beipacktextes 7 TESTPROTOKOLL Im Test d rfen nur Reagenzien und Proben verwendet werden welche Raumtemperatur 18 26 C aufweisen Markieren Sie die Positionen f r BLANK STD PROBE CTRL Leerwert Standard Probe Kontrolle am Protokollblatt Nehmen Sie die ben tigten Mikrotiterstreifen aus dem
28. k zdravotnicky materi l ur eno pro diagnostiku in vitro Lot Batch Number Charge Chargennummer Lot Code du lot Lotto Numero di lotto Lote C digo de lote Lote C digo do lote Lot Partijnummer Lot Batchkode Lot Satskod Numer serii Lot Batch sz m C slo ar e C slo ar e Manufactured by Hergestellt von Fabriqu par Prodotto da Fabricado por Fabricado por Vervaardigd door Fabrikation af Tillverkad av Wyprodukowane pr Gy rtotta Vyroben Vyrobeno Catalogue Number Bestellnummer Num ro de r f rence Numero di riferimento N mero de referencia N mero de refer ncia Referentienummer Referencenummer Katalognummer Numer katalogowy Katal gussz m Katal gov slo Katalogov slo Store at between Lagerung bei zwischen Conserver entre Conservare a tra Conservar a temp entre Armazene a entre Bewaar bij tussen Opbevares mellem F rvaras vid Przechowywa w T roljuk k z tt Skladujte v rozsahu Skladujte v rozmez Contains sufficient for x tests Inhalt ausreichend f r x Teste Contient suffisant pour x tests Contenuto sufficiente per x test Contiene suficiente para x pruebas Cont m suficiente para x testes Bevat voldoende voor x bepalingen Indeholder tilstr kkeligt til x pr ver Inneh llet r cker till x analyser Zawarto na x test w Tartalma X teszt elv gz s re elegend Obsahuje materi l pre
29. les may give erroneous results Samples should be mixed well before assaying We recommend duplicates for all values If it is necessary to dilute samples with a high concentration please use 0 9 sodium chloride solution For further information on sample stability please visit our www bmgrp com technical file or contact our customer service by e mail export bmgrp com or by phone 43 1 29107 45 Reconstitution Handling STD Standards white caps in 0 5ml distilled water at room temperature 18 26 C for 30 min shake well Reconstituted standards are stable at 25 C or lower until expiry date stated on label Avoid repeated freeze thaw cycles CTRL Controls yellow caps in 0 5 ml distilled water at room temperature 18 26 C for 30 min shake well Reconstituted controls are stable at 25 C or lower until expiry date stated on label Avoid repeated freeze thaw cycles WASHBUF Wash buffer dilute the concentrate 1 20 with distilled water 50 ml concentrate 950 ml distilled water Crystals in the buffer concentrate will dissolve at room temperature Buffer is stable at 2 8 C until expiry date stated on label ET STOCK Endothelin stock red cap Direct measurement of Endothelin in cell culture supernatants Reconstitute in 2 ml cell culture medium at room temperature 18 26 C for 30 min shake well Exact concentration after reconstitution see label eg 10 fmol ml Reconstituted ET stock is stable at 25 C or lower until expiry d
30. ls lyophilised caps lyophilised exact concentration after reconstitution see label CONJ Conjugate anti mouse IgG antibody HRPO amber cap ready to use 1x22 ml SUB Substrate TMB solution blue cap ready to use 1x22 ml STOP Stop Solution white cap ready to use 1x7 ml ET STOCK Endothelin Stock synthetic human Endothelin 1 1 21 lyophilised red 1 vial lyophilised cap exact concentration after reconstitution see label 3 ADDITIONAL MATERIAL ADDED TO THE KIT 2 self adhesive plastic films QC protocol Protocol sheet Instruction manual for use 4 MATERIAL AND EQUIPMENT REQUIRED BUT NOT SUPPLIED Precision pipettes calibrated to deliver 50ul 200ul 300ul 500pl and disposable tips ELISA reader for absorbance at 450 nm reference 630 nm Graph paper or software for the calculation of results Distilled or deionised water 3 24 5 REAGENTS AND SAMPLE PREPARATION All reagents of the kit are stable at 4 C 2 8 C until expiry date stated on the label of each reagent Sample preparation Serum EDTA plasma urine saliva and cell culture supernatants are suitable for use in this assay Don t change sample type during studies Freshly collected EDTA plasma or serum is put on ice immediately and centrifuged within one day Samples should be stored at 25 C or lower for long term storage store at 70 C Urine samples can be used without any pre treatment Avoid freeze thaw cycles Lipemic or hemolyzed samp
31. n wurde in in einer Vielzahl von Geweben wie der Lunge der Niere dem Gehirn im Speichel peripheren endokrinem Gewebe und der Plazenta gefunden Die biologische Rolle von ET geht Uber die Regulierung des vaskularen Tonus hinaus und umfasst auch wachstumsregulierende Eigenschaften Das Peptid reagiert in einer autokrinen parakrinen Weise mit spezifischen ET Rezeptoren an verschiedensten Zellen wie Zellen der glatten Muskulatur Myozyten und Fibroblasten Indikationen e Herzversagen und Herzinfarkt e Onkologie e Marker f r endotheliale Dysfunktion Leberschaden und Nierenerkrankungen e Hypertonie 2 INHALT DES KITS CONT KIT KOMPONENTEN MENGE Polyklonaler anti Endothelin Antik rper beschichtet auf PLATE Mikrotiterplattenstreifen im Streifenhalter Verpackt im Aluminiumsackchen 12 x 8 Teste mit Trockenmittel WASHBUF Waschpuffer 20fach Konzentrat durchsichtige Kappe 1x 50 ml AB Monoklonal Maus anti Endothelin Antik rper gr ne Kappe gebrauchsfertig 1 x 22 ml STD wakas 0 10 fmol ml synthetisches human Endothelin 1 1 21 in 6 x lyophilisiert uman Serum weisse Kappen lyophilisiert Kontrollen synthetisches humanes Endothelin 1 1 21 in human Serum CTRL gelbe Kappen lyophilisiert genaue Konzentration nach Rekonstitution 2 x lyophilisiert siehe Etikett CONJ Konjugat anti Maus IgG Antik rper HRPO braune Kappe 1x22 ml gebrauchsfertig SUB Substrat TMB L sung blaue Kappe gebrauchsfertig 1x22 ml STOP Stopp L sung H2SO
32. odium 0 9 Vous trouverez de plus amples informations sur la stabilit des chantillons en consultant notre site web l adresse www bmgrp com technical file ou contactez notre service client le l adresse email export gmbrp com ou en composant le num ro de t l phone 43 1 29107 45 Reconstitution Manipulation STD Standards bouchons blancs dans 0 5ml d eau distill e temp rature ambiante 18 26 C pendant 30 min bien homog n iser Les standards reconstitu s sont stables 25 C ou basse jusqu la date de p remption figurant sur l tiquette Eviter les cycles r p t s de cong lation d cong lation CTRL Contr les bouchons jaunes dans 0 5 ml d eau distill amp e temp rature ambiante 18 26 C pendant 30 min bien bien homog n iser Les contr les reconstitu s sont stables 25 C ou basse jusqu la date de p remption figurant sur l tiquette Eviter les cycles r p t s de cong lation d cong lation WASHBUF tampon de lavage diluer au 1 20 le tampon concentr avec de l eau distill e 50 ml de concentr 950 ml d eau distill e Les cristaux dans le tampon de lavage concentr se dissoudront temp rature ambiante Le tampon est stable 2 8 C jusqu la date de p remption figurant sur l tiquette ET STOCK Endoth line humaine bouchon rouge pour le dosage direct de l Endoth line dans les surnageants de culture cellulaire Reconstituer dans 2 ml de milieu de culture cellulair
33. or el usuario Se deben considerar los factores de diluci n respectivos Typical STD curve Ver cap tulo 8 calculo de resultados del ensayo de la versi n inglesa del manual de instrucciones del ensayo El certificado del control de calidad que se suministra con el kit muestra los resultados del ltimo control de calidad que se realiza antes de la liberaci n del cada kit Los datos de la densidad ptica obtenidos por los clientes pueden diferir debido a diversos factores ylo debido a una disminuci n normal de la intensidad de la se al a lo largo de la vida media Sin embargo esto no afecta a la validez de los resultados siempre que se obtenga un valor de 1 5 para la densidad ptica del est ndar de concentraci n m s elevada 20 24 9 CARACTERISTICAS DEL ENSAYO Rango Normal Rango estandard Volumen de muestra Limite de Deteci n Tiempo de Incubaci n Reacciones Cruzadas Recuperaci n n 4 Recuperaci n fmol ml Recuperaci n Un panel de 70 donantes de sangre arroj una media de 0 26 fmol ml Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de normalidad 0 10 fmol l 50 ul plasma EDTA humano suero orina saliva o sobrenadante de c lulas en cultivo 0 fmol l 3 SD 0 02 fmol ml Toda la noche 1 hora 30 min ET 1 21 100 ET2 1 21 10096 ET3 1 21 lt 5 Big Endotelina 1 38 196 Big Endotelina 22 38 lt 1 En muestras de plasma humanas normales se ha estimado que la ET
34. s vorhanden ist Tiersera Pferd Katze Schwein 100 Hund 66 Ratte 79 Maus Seren k nnen in diesem Test nicht gemessen werden Wiederfindung n 4 Spike 1fmol ml Spike 5 fmol ml Wiederfindung fmol ml 0 96 43 Wiederfindung 96 86 Nahere Informationen zu den Testmerkmalen finden Sie auf unserer Website unter www bmgrp com technical file oder Sie kontaktieren unser Kundenservice Email unter export bmgrp com Tel unter 43 1 29107 45 10 PRAZISION Intra Assay 2 Proben wurden 18fach in einem Test getestet Inter Assay 2 Proben wurden in verschiedenen Testen 24fach getestet Intra Assay n 18 Inter Assay n 24 Durchschnitt fmol ml 2 02 7 01 Durchschnitt fmol ml 3 8 0 8 SD 0 08 0 21 SD 0 2 0 04 CV 4 3 CV 6 5 11 TECHNISCHE MERKMALE Reagenzien von verschiedenen Lots oder Testen d rfen nicht gemischt werden St psel oder Verschl sse von verschiedenen Reagenzien d rfen nicht vertauscht werden Abgelaufene Reagenzien d rfen nicht verwendet werden Reagenzien sind vor direktem Sonnenlicht zu sch tzen Substratl sung muss vor Verwendung farblos sein Mikrotiterstreifen m ssen bei den Inkubationen mit Abdeckfolie abgedeckt sein 12 VORSICHTSMASSNAHMEN Alle Bestandteile humanen Ursprunges wurden mit Testen der 3 Generation auf HIV Ak und HBsAg getestet und negativ gefunden Trotzdem sollten die Reagenzien als potentiell infekti s behandelt werden Die fl ssigen Reagenzien enthalten lt 0 1
35. they should be handled and disposed as if they were infectious Liquid reagents contain lt 0 1 Proclin 300 as preservative Proclin 300 is not toxic in concentrations used in this kit It may cause allergic skin reactions avoid contact with skin or eyes Do not pipette by mouth Do not eat drink smoke or apply cosmetics where reagents are used Avoid all contact with the reagents by using gloves Sulfuric acid is irritating to eyes and skin Flush with water if contact occurs Avoid contact with skin and mucous Irritations are possible Flush with water after contact 13 LITERATURE Plasma levels of endothelin lipid peroxides and prostacyclin in diabetic patients with macroangiopathy Migdalis IN et al Diabetes Res Clin Pract 2001 Nov 54 2 129 36 Plasma endothelin in patients with acute aortic disease Wagner A et al Resuscitation 2002 Apr 53 1 71 6 Plasma endothelin 1 levels and clinical correlates in patients with chronic heart failure Kinugawa T et al J Card Fail 2003 Aug 9 4 318 24 7 24 8 24 1 EINLEITUNG Die Spaltung von Big Endothelin 1 Big ET durch eine membrangebundene Metalloendopeptidase das Endothelin Converting Enzyme ECE f hrt zum aktiven ET 1 21 einem potenten Vasokonstriktor und dem biologisch inaktiven C terminalen Fragment 22 38 Die Halbwertszeit von ET in Plasma betragt weniger als eine Minute w hrend die Clearance von Big ET deutlich langsamer ist Endotheli
36. unos resultados m s exactos tapar la placa con el papel adhesivo durante los pasos de incubaci n 21 24 12 PRECAUCIONES Todos los componentes de procedencia humana fueron testados con ensayos de 3 generaci n frente a la presencia de anticuerpos frente a VIH y al antigeno de superficie de la Hepatitis B con resultado negativo Sin embargo deberian manipularse y eliminarse como si se tratara de material potencialmente infeccioso Los reactivos l quidos contienen lt 0 1 de Proclin 300 como conservante La Proclina 300 no es t xica en las concentraciones empleadas en este kit Puede provocar reacciones al rgicas en la piel evitar el contacto con la piel los ojos e Nopipetear con la boca e No comer o beber o aplicarse cosm ticos en las zonas de manipulaci n de los reactivos e Evitar el contacto con los reactivos utilizando guantes e El cido sulf rico es irritante para los ojos y la piel Enjuagar con abundante agua si se produce contacto Evitar el contacto con la piel y con las membranas mucosas Puede presentarse irritaci n Si tiene lugar un contacto enjuagar con abundante agua 13 LITERATURA Ver cap tulo 13 referencias bibliogr ficas de la versi n inglesa del manual de instrucciones del ensayo 22 24 is IVD LOT q HE SYMBOLS Expiry date Verfallsdatum Date de p remption Data di scadenza Fecha de caducidad Data de validade Uiterste gebruiksdatum Udlgbsdato Utg ngsdatum
37. weisse Kappe gebrauchsfertig 1x7ml Endothelin Stock synthetisches human Endothelin 1 1 21 in Puffer rote ET STOCK Kappe Iyophilisiert genaue Konzentration nach Rekonstitution siehe 1 x lyophilisiert Etikett 3 ZUSATZLICHES MATERIAL IM KIT e 2selbstklebende Abdeckfolien e QC Protokoll e Arbeitsanleitung Beipacktext e Protokoll Blatt 4 ZUSATZLICH BEN TIGTES MATERIAL UND GERATE Kalibrierte Pr zisionspipetten f r 50ul 200pl 3001 500 ul inkl Pipettenspitzen e Mikrotiterplattenphotometer mit 450 nm Filter 630 nm Referenz e Millimeterpapier oder Software Destilliertes oder deionisiertes Wasser 9 24 5 REAGENZIEN UND PROBENVORBEREITUNG Alle Reagenzien des Kits sind bei 4 C 2 8 C bis zum Ablaufdatum siehe Etikett des Reagenz stabil Probenvorbereitung In diesem Test konnen Serum EDTA Plasma Harn Speichel und Zellkultur berst nde gemessen werden Vermeiden Sie die Probenmatrix wahrend einer Studie zu wechseln Frisch abgenommenes Serum oder EDTA Plasma wird sofort auf Eis gestellt und innerhalb eines Tages abzentrifugiert Proben sind bei 25 C oder tiefer zu lagern Urinproben k nnen ohne Vorbehandlung direkt gemessen werden Vermeiden Sie Frier Tau Zyklen bis maximal 4 Zyklen sind m glich Lip mische oder hamolysierte Proben k nnen zu fehlerhaften Ergebnissen f hren Vor dem Einsatz im Test Proben gut mischen Wir empfehlen alle Werte in Doppelbestimmungen durchzuf hren Falls es notwendig ist
38. x testov Obsahuje materi l pro x test 23 24 BI 20052 ENDOTHELIN 1 21 ASSAY PROTOCOL AND CHECKLIST PREPARATION OF REAGENTS Bring all reagents to room temperature 18 26 C a Prepare reagents and samples as instructed a Bring unused and prepared components to the storage temperature mentioned in the package insert a Take microtiter strips out of the alubag and mark positions on the protocol sheet TEST PROCEDURE m Step 1 Add 50 ul STD SAMPLE CTRL standard sample control into all wells except blank Step 2 Add 200 ul AB Detection antibody into each well except blank swirl gently Q Step 3 Cover tightly and incubate over night 16 24 hours at room temperature 18 26 C Step 4 Aspirate and wash wells with 300 ul WASHBUF Wash buffer five times Remove remaining buffer by hitting plate against paper towel Step 5 Add 200 ul CONJ Conjugate into each well a Step 6 Cover tightly and incubate at for 1 hour room temperature 18 26 C Step 7 Aspirate and wash wells with 300 ul WASHBUF Wash buffer five times Remove remaining buffer by hitting plate against paper towel Step 8 Add 200 ul SUB Substrate into each well Q Step 9 Incubate for 30 minutes at room temperature 18 26 C in the dark m Step 10 Add 50 uI STOP Stop solution into each well a Step 11 Read Optical Density at 450 nm with reference 630 nm if available 24 24
Download Pdf Manuals
Related Search