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Mycobacterium Bovis Antibody Test Kit Trousse de détection d

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1. 13 44 Misurare e annotare i valori di assorbanza a 450nm A 450 IDEXX M bovis 14 Calcolo Controllos CNS CN1 A 450 5 CN2 A 450 CPx CP1 A 450 5 CP2 A 450 Criteri di validita CNx lt 0 200 CPx gt 0 300 Nel caso di esami non validi la tecnica da sospettarsi e l esame deve essere ripetuto seguendo attentamente l inserto tecnico Campioni _ Campione A 450 CNx bh CPx CNX La presenza o l assenza di anticorpi contro M bovis viene determinata calcolando il rapporto tra campione e controllo positivo C P per ciascun campione 15 Interpretazione Negativi Positivo C P 0 30 C P gt 0 30 Nota IDEXX offre strumenti e software in grado di calcolare i risultati e di fornire riepiloghi dei risultati Limiti di utilizzo Un risultato negativo non esclude la possibilit di un infezione da M bovis Gli anticorpi contro M bovis possono essere transitori o possono svilupparsi in uno stadio avanzato dell infezione inoltre non tutti gli animali infetti mostrano una sieroconversione Un risultato positivo indica la presenza di anticorpi contro M bovis nell animale esaminato A causa della potenziale esposizione e risposta alla presenza di Mycobacteria nell ambiente ad esempio M kansasii quando si classifica un animale o una mandria necessario considerare tutti i risultati dei test per la tubercolosi risposta cutanea presenza di gamma interferone e test ELISA per la ricerc
2. Mycobacterium Bovis Antibody Test Kit Trousse de d tection d anticorps contre Mycobacterium bovis Kit para detec o de anticorpos contra Mycobacterium bovis USO VETERIN RIO Kit para la detecci n de Anticuerpos frente a Mycobacterium bovis Mycobacterium bovis Antik rper Testkit Kit per la rilevazione degli anticorpi contro Mycobacterium bovis Vie Validated and certified by the OIE as fit for the purposes defined in the kit insert Registration number 20120107 IDEXX M bovis Test With Confidence rrr Vo VA 06 27743 02 EIS VAN IDEXX M bovis English version Mycobacterium Bovis Antibody Test Kit For veterinary use only Name and Intended Use IDEXX M bovis Antibody Test Kit is intended for the detection of antibody to Mycobacterium bovis M bovis in cattle serum and plasma samples The test is designed to be used in conjunction with other methods for diagnosing and managing tuberculosis infection however it is not suitable to diagnose individual animals or herds to be free of disease OIE Statement The validation data for the IDEXX Mycobacterium bovis Antibody Test Kit have been certified in May 2012 by the OIE based on expert review as fit for the detection of antibody to M bovis in cattle serum and plasma samples to be used as a supplemental test in conjunction with other methods for diagnosing and managing M bovis infection The test also has utility when performing sero surveys to unde
3. J D 2006 Vet Microbiol 112 171 179 Technische Unterst tzung IDEXX USA Tel 1 800 548 9997 oder 1 207 556 4895 IDEXX Europa Tel 800 727 43399 Kontaktieren Sie Ihren lokalen IDEXX Vertreter oder besuchen Sie unsere Webseite idexx com contactlpd IDEXX und Test With Confidence sind Schutzmarken oder eingetragene Schutzmarken von IDEXX Laboratories Inc oder eines Tochterunternehmens von IDEXX in den Vereinigten Staaten und oder in anderen L ndern 2015 IDEXX Laboratories Inc Alle Rechte vorbehalten 40 IDEXX M bovis IDEXX M bovis Versione Italiana Kit per la rilevazione degli anticorpi contro Mycobacterium bovis Esclusivamente per uso veterinario Nome del prodotto e utilizzo Il kit IDEXX M bovis per la rilevazione degli anticorpi contro Mycobacterium bovis M bovis destinato all uso per il rilevamento degli anticorpi contro M bovis in campioni di siero e di plasma bovini Il test stato progettato per essere usato in combinazione con altri metodi di analisi e gestione della infezione da tubercolosi per quanto non adatto a diagnostiscare singoli animali o mandrie come liberi dalla malattia Dichiarazione OIE Il dati di validazione del kit IDEXX M bovis sono stati certificati dall OIE nel maggio del 2012 sulla base della revisione di esperti del settore come idoneo per il rilevamento degli anticorpi all bovis nei campioni di siero e plasma del bestiame da utilizzare come test supplementare
4. certifi es sur la base de revues d experts par l OIE en mai 2012 comme propre au d pistage d anticorps contre M bovis dans les chantillons de s rum et de plasma bovins Elle est con ue comme test compl mentaire en association avec d autres m thodes pour diagnostiquer et g rer l infection par M bovis Le test se r v le galement utile lors de tests d analyse du s rum pour comprendre la pr valence et le risque de l infection par M bovis au niveau de la gestion du troupeau Informations G n rales La tuberculose bovine caus e par Mycobacterium bovis M bovis demeure une maladie importante des bovins dans de nombreux pays Le manque de sensibilit des tests et la pr sence de nombreux r servoirs animaux sauvages rendent le contr le et l radication difficiles Bien que les tests de d pistage de la tuberculose bas s sur les r ponses m diation cellulaire test cutan et interf ron gamma permettent de d tecter les animaux dans les premiers stades de l infection ils demeurent incapables de d tecter jusqu 20 des animaux r ellement infect s L utilisation compl mentaire strat gique d un test de d tection d anticorps contre M bovis peut augmenter la capacit de diagnostic globale en d tectant les sous ensembles d animaux infect s non d pist s avec les m thodes traditionnelles Description et principe La trousse de d tection d anticorps contre M bovis de IDEXX est une preuve immunoenzymatique
5. concue pour d tecter la pr sence d anticorps dirig s contre M bovis dans les chantillons de s rum et de plasma bovins Une m thode de microtitrage a t d velopp e en sensibilisant des plaques de microtitrage de 96 puits d antig nes recombinants de M bovis Apr s incubation des chantillons dans les puits les anticorps dirig s contre M bovis forment un complexe avec les antig nes Apr s lavage du mat riel non li on ajoute un conjugu anti bovin peroxidase de raifort se liant tout anticorps bovin attach aux puits Le conjugu non li est lav et un substrat TMB est ajout Le d veloppement de couleur qui en r sulte est proportionnel la quantit d anticorps li s dirig s contre M bovis IDEXX M bovis 9 R actifs Volume 1 Plaque sensibilis e avec des antig nes de M bovis 5 2 Contr le positif conservateur azoture de sodium 1x 0 05 ml 3 Contr le n gatif conservateur azoture de sodium 1x 0 05 ml 4 Conjugu conjugu IgG anti bovin HRPO 1x60 ml 5 Diluant des chantillons conservateur azoture de sodium 1x120 ml A Substrat TMB 1x60 ml B Solution d arr t 1x60 ml E ena N 1295 Autres composants sachet plastique herm tique r utilisable 1 Remarque voir le tableau a la fin du mode d emploi pour la description des symboles utilis s dans ce mode d emploi et sur les tiquettes de la trousse Conservation Conserver les r actifs 2 8 C Les r actifs sont stables ju
6. in concomitanza con altri metodi per la diagnosi e la gestione dell infezione da M bovis Il test utile anche durante lo svolgimento di siero sondaggi per capire la prevalenza e il rischio di infezione da M bovis a livello di gestione delle mandrie Informazioni generali La tubercolosi bovina causata da Mycobacterium bovis M bovis continua a rappresentare un importante malattia del bestiame in molti paesi e il suo controllo ed eradicazione vengono complicati dalla mancanza di test sensibili oltre che dalla presenza di numerosi animali selvatici che fungono da serbatoi dell infezione Sebbene siano in grado di identificare gli animali infetti nelle prime fasi dell infezione i test per la tubercolosi basati sulle risposte cellulo mediate risposta cutanea e presenza di gamma interferone non riescono a rilevare fino al 20 degli animali con infezione gi in corso Luso complementare strategico di un test anticorpale per M bovis pu aumentare la capacit diagnostica complessiva grazie all identificazione dei sottogruppi di animali infetti non rilevati dai metodi correntemente impiegati Descrizione e principi del test Il kit IDEXX M bovis un saggio immunoenzimatico concepito per rilevare la presenza di anticorpi contro M bovis in campioni di siero e plasma bovini Si tratta di un test che utilizza piastre per microtitolazione a 96 pozzetti rivestite da antigeni di M bovis ricombinanti Durante l incubazione del campi
7. intrakutane Tuberkulinprobe Interferon Test infizierte Tiere bereits in einem friihen Stadium der Infektion detektieren k nnen bleiben trotz dieser Tests immer noch bis zu 20 der infizierten Rinder unentdeckt Die gesamte diagnostische Effizienz l sst sich durch den strategischen Einsatz eines M bovis Antik rper Tests steigern da die Infektion auf diese Weise auch bei den mit den herk mmlichen Methoden bersehenen infizierten Tieren diagnostiziert werden kam 234 Beschreibung des Testprinzips Das IDEXX M bovis Testkit ist ein Enzymimmunoassay der speziell f r den Nachweis von Antik rpern gegen M bovis in Serum und Plasmaproben von Rindern entwickelt wurde Beim Mikrotiterformat des Tests wurden die Vertiefungen der 96er Mikrotiterplatte mit rekombinanten M bovis Antigenen beschichtet Nach Inkubation der Probe in den beschichteten Vertiefungen bilden die M bovis Antik rper mit den in der Beschichtung enthaltenen Antigenen Komplexe Nach dem Waschvorgang zur Entfernung von nicht gebundenem Material aus den Vertiefungen wird ein Anti Rind Meerrettich Peroxidase Konjugat hinzugef gt das an die bovinen Antik rper in den Vertiefungen der Mikrotiterplatte bindet Nicht gebundenes Konjugat wird beim n chsten Waschvorgang entfernt Danach wird das TMB Substrat hinzugef gt Die Intensit t der Farbentwicklung korreliert direkt mit der Menge an gebundenen Antik rpern gegen M bovis IDEXX M bovis 33 Reagenzien Menge 1 Mit M
8. s behandeln Schutzhandschuhe Schutzkleidung Augenschutz oder Gesichtsschutz beim Umgang mit Proben und Reagenzien verwenden Weitere Informationen sind im Sicherheitsdatenblatt enthalten e N here Informationen zur Reagenziensicherheit und VorsichtsmaBnahmen befinden sich am Ende der Gebrauchsinformation Laborpraktiken Bei strikter Einhaltung dieser Anweisungen werden optimale Ergebnisse erzielt Sorgf ltiges Pipettieren und Waschen sowie eine genaue Zeiteinteilung w hrend der Testdurchf hrung sind notwendig um die Genauigkeit der Werte zu gew hrleisten F r jede Probe und Kontrolle eine neue Pipettenspitze benutzen Substrat nicht starkem Licht oder oxidierenden Mitteln aussetzen Nur saubere Glas oder Plastikbeh lter benutzen Alle Abf lle vor der Entsorgung ordnungsgem dekontaminieren Den Inhalt im Einklang mit den lokalen regionalen und nationalen Bestimmungen entsorgen Eine Verunreinigung der Bestandteile des Testkits sorgf ltig vermeiden Keine unbenutzten Reagenzien zur ck in die Orginalflaschen sch tten Die Bestandteile nicht nach Ablauf des Verfalldatums benutzen Probenmaterial Als Probenmaterial k nnen sowohl frische als auch tiefgefroren gelagerte Serum oder Plasmaproben verwendet werden Aufgetaute Proben m ssen vor der Verd nnung sorgf ltig gemischt werden Vorbereitung der Proben Waschl sung Das Waschkonzentrat 10X vor Gebrauch auf 18 26 C aufw rmen lassen und
9. 15 minutos 1 minuto 12 Dispensar 100 ul de Solu o de Interrup o em cada cavidade 13 20 Me a e anote os valores de absorb ncia a 450 nm A 450 IDEXX M bovis 14 C lculos Controles CNx CN1 A 450 3 CN2 A 450 CPx CP1 A 450 3 CP2 A 450 Crit rios de Validade CNx lt 0 200 CPx 0 300 Para testes inv lidos deve se suspeitar da t cnica e o teste deve ser repetido ap s a revis o cuidadosa do protocolo do produto Amostras Amostra A 450 CNX CPx CNN AP presen a ou n o de anticorpos contra M bovis determinada calculando se a raz o amostra Positivo A P para cada amostra 15 Interpreta o Negativas Positivas A P lt 0 30 A P gt 0 30 Nota IDEXX t m instrumentos e software dispon veis para o c lculo de resultados e a elabora o de resumo de dados Limita es do uso Um resultado negativo n o descarta a possibilidade de infec o por M bovis Os anticorpos contra M bovis podem apresentar n veis flutuantes podem surgir posteriormente na evolu o da infec o ou alguns animais infectados podem n o desenvolver soroconvers o Um resultado positivo sugere que o animal testado possui anticorpos contra M bovis Devido possibilidade de exposi o e resposta a micobact rias no ambiente p ex M kansasii todos os resultados positivos de testes para tuberculose cut neos interferon gama e ELISA e as hist rias do rebanho dev
10. IDEXX M bovis 1 Reagents Volume 1 M bovis Antigen Coated Plate 5 2 Positive Control preserved with sodium azide 1x0 05 mL 3 Negative Control preserved with sodium azide 1x0 05 mL 4 Conjugate anti bovine IgG HRPO Conjugate 1x60 mL 5 Sample Diluent preserved with sodium azide 1x 120 mL A TMB Substrate 1x60 mL B Stop Solution 1x60 mL C Wash Concentrate 10X phosphate tween wash preserved with gentamicin 1x235 mL Other Components Zip lock bag 1 Note See table at the end of the insert for a description of symbols used on the insert and labels of this kit Storage Store the reagents at 2 8 C Reagents are stable until expiration date provided they have been stored properly Materials Required but Not Provided Precision micropipettes or multi dispensing micropipettes Disposable pipette tips Graduated cylinder for wash solution e 96 well microplate reader equipped with 450 nm filter Microplate washer manual semi automatic or automatic system Use only distilled or deionized water for preparation of the reagents used in the test Vortex or equivalent Tubes for diluting samples Microplate covers lid aluminium foil or adhesive 2 IDEXX M bovis Precautions and Warnings Handle all biological material as potentially infectious Wear protective gloves protective clothing eye or face protection when handling samples and reagents Referto the product Material Safety Data
11. Metodo di confronto IDEXX M bovis Antibody ELISA Specie target bestiame N 166 Sensibilit diagnostica e rispetto a IFN Gamma DSn 62 7 Cl 64 4 74 1 N Nessun confronto diretto eseguito DSp sui negativi Gamma ricavati da o mandrie negative Specificita diagnostica rispetto a IFN Gamma Accordo e discrepanze La natura delle analisi per la TB classificazione basata sull ispezione visiva della macellazione successo relativo con coltura e differenze tra cellulo mediata GIFN e SICCT e risposte umorali ha generato come previsto un grande numero di discrepanze Le discrepanze sono indicative della natura complessa della TB bovina e sottolineano l importanza dell applicazione di strumenti diagnostici multipli per poter ottenere un quadro pi completo dell infezione Anche se sono state rilevate discrepanze significative tra i vari metodi i dati mostrano la maggiore sensibilit che pu essere ottenuta tramite l impiego strategico dei sottoinsiemi di rilevamento di veri positivi non riscontrati tramite altri metodi Riproducibilit Un pannello di campioni caratterizzati n 30 e lotti distinti sono stati forniti a 2 laboratori al fine di poter stabilire la riproducibilit a livello dell utente finale Ciascun laboratorio ha testato il pannello in duplicato senza supervisione su ciascuno dei tre lotti forniti Il pannello ha compreso un totale di 30 campioni 10 negativi e 20 positivi stato raggiunto un acc
12. Nota Ver a tabela no final do inserte para uma descri o dos s mbolos utilizados na inserte e nos r tulos deste kit Armazenagem Conservar os reagentes a 2 8 C Os reagentes s o est veis at a data de validade desde que sejam devidamente conservados Materiais Necess rios mas N o Fornecidos Micropipetas de precis o e micropipetas multicanal Ponteiras de pipeta descart veis Proveta graduada para a solu o de lavagem Leitor de placas para 96 cavidades equipado com filtro 450 nm Lavador de microplaca sistema manual semi autom tico ou autom tico Usar somente gua destilada ou deionizada para o preparo dos reagentes usados no teste V rtex ou equivalente Tubos para diluir as amostras Tampa para placas tampa pl stica papel alum nio ou adesivo 18 IDEXX M bovis Precau es e Advert ncias e Manipular todos os materiais biol gicos como potencialmente infectantes Usar luvas de protec o vestu rio protetores para o rosto e oculares ao manusear amostras e reagentes Consultar a ficha de seguran a do produto para informa es adicionais Ver no final do protocolo as medidas de preven o relacionadas aos perigos potenciais de alguns reagentes Pr ticas laboratoriais e Resultados timos ser o obtidos seguindo se rigorosamente o protocolo deste teste Pipetagem cuidadosa observa o dos tempos de incuba o e lavagens corretas durante todo o procedimento s o neces
13. Sheet for additional information Seethe end of this insert for reagent hazard and precaution warnings Laboratory Practices Optimal results will be obtained by strict adherence to this protocol Careful pipetting timing and washing throughout this procedure are necessary to maintain precision and accuracy Use a separate pipette tip for each sample and control e Do not expose TMB solution to strong light or any oxidizing agents Handle TMB solution with clean glass or plastic ware All wastes should be properly decontaminated prior to disposal Dispose of contents in accordance with local regional and national regulations Care should be taken to prevent contamination of kit components Do not pour unused reagents back into containers Do not use kit past expiration date Sample Collection Either fresh or previously frozen serum or plasma samples may be tested All thawed samples must be thoroughly mixed prior to dilution Preparation of Reagents Wash Solution The Wash Concentrate 10X may form precipitates upon 2 8 C storage make certain that the Wash Concentrate 10X is fully in solution prior to diluting To prepare the Wash Solution transfer 50 mL of the Wash Concentrate 10X to a 500 mL volumetric flask or graduated cylinder add 450 mL distilled deionized water and mix thoroughly The diluted solution can be stored at 18 26 C for up to 3 days or at 2 8 C for up to 2 weeks Samples and Controls D
14. de pruebas sensibles as como a la existencia de importantes reservorios salvajes Aunque las pruebas para la detecci n de la tuberculosis basadas en las respuestas mediadas por c lulas prueba tuberculina intrad rmica e interfer n gamma permiten detectar animales en las primeras etapas de la infecci n fracasan en la detecci n de hasta el 2096 de los animales realmente infectados El uso estrat gico y complementario de una prueba de detecci n de anticuerpos frente a M bovis permite revelar subgrupos de animales infectados no detectados con los m todos actuales y aumentar as la eficacia total del diagn stico Descripci n y principios El kit para la detecci n de anticuerpos frente a M bovis de IDEXX es un inmunoensayo enzim tico disefiado para el an lisis de muestras bovinas de suero y plasma Se ha creado un formato de microtitulaci n tapizando los 96 pocillos de cada placa con ant genos recombinantes de M bovis Al incubar la muestra que se desea analizar en el pocillo tapizado el anticuerpo espec fico frente a M bovis forma un complejo con los ant genos que revisten el pocillo Tras eliminar mediante lavado el material no ligado de los pocillos se afiade un conjugado de anticuerpos antibovinos y peroxidasa de r bano picante HRPO que se une a cualquier anticuerpo bovino fijado en los pocillos Mediante un nuevo lavado se elimina el conjugado no ligado y se afiade el substrato TMB La aparici n de color est relacio
15. i reagenti inutilizzati Non utilizzare i componenti oltre la data di scadenza Prelievo dei campioni Utilizzare campioni di siero o plasma freschi o precedentemente congelati Miscelare accuratamente tutti i campioni scongelati prima della diluizione Preparazione dei reagenti Soluzione di lavaggio La soluzione di lavaggio concentrata 10X pu formare precipitati durante la conservazione a 2 8 C Assicurarsi che la soluzione di lavaggio concentrata 10X si trovi completamente in soluzione prima della diluizione Per preparare la soluzione di lavaggio trasferire 50 ml di soluzione di lavaggio concentrata 10X in un recipiente volumetrico da 500 ml o in un cilindro graduato aggiungere 450 ml di acqua distillata deionizzata e miscelare accuratamente La soluzione diluita pu essere conservata a 18 26 C per un periodo non superiore a 3 giorni o a 2 8 C per un periodo fino a 2 settimane Campioni e controlli Diluire i campioni e i controlli del kit con rapporto 1 50 1 parte di campione e 49 parti di diluente nel diluente campione controlli del kit devono essere analizzati in duplicato per ogni serie di test IDEXX M bovis 43 Protocollo del test Prima dell uso tutti i reagenti devono raggiungere 18 26 C reagenti devono essere miscelati mediante centrifugazione delicata o movimenti circolari brevi 1 Estrarre le piastre rivestite di antigene dalla confezione di alluminio e registrare la posizione dei campioni S
16. ne pas se produire chez tous les animaux infect s Un r sultat de test positif sugg re la pr sence d anticorps contre M bovis chez l animal Compte tenu de l exposition potentielle et de la r ponse aux mycobact ries environnementales M kansasii par exemple tous les r sultats de tests de d pistage de la tuberculose test cutan interf ron gamma et anticorps ELISA de m me que les ant c dents du troupeau devront tre consid r s avant de d cider du statut de l animal ou du troupeau vis vis de la tuberculose Ce test n est pas destin d terminer le status d animaux individuels ou de troupeaux vis vis de la maladie IDEXX M bovis 13 Certification de OIE R sum des tudes de validation Se reporter au registre des tests de diagnostic sur http www oie int pour obtenir des renseignements complets et d taill s Caract ristiques analytiques Pr cision Coefficients de variation de la plaque densit optique d un chantillon n gatif 14 5 17 7 Coefficients de variation de la plaque densit optique d un chantillon faiblement positif 8 7 11 9 Coefficients de variation de la plaque densit optique d un chantillon positif 5 7 10 3 R patabilit Inter plaques E P d un chantillon quivoque 18 27 Inter plaques E P d un chantillon positif 12 21 Sp cificit analytique Les donn es indiquent que la trousse est tr s specifique au regard des autres mycobact
17. ries environnementales p ex M Avium M paratuberculosis M kansasii Les isolements de M kansasii sont rares mais une infection par M kansasii des doses lev es peut donner lieu des r sultats faussement positifs mettant ainsi en vidence les limites des tests de d pistage bas s sur des prot ines conserv es des esp ces mycobact riennes Sensibilit analytique sans objet Caract ristiques diagnostiques D termination de la valeur seuil du test La valeur seuil E P de positivit du test de 0 30 a t d termin e en ciblant une sp cificit globale du test de 97 98 lors du d veloppement Estimations de la sensibilit DSn et de la sp cificit DSp diagnostiques Les niveaux de performance figurant ci dessous sont bas s sur trois lots ELISA diff rents repr sentant une diversit biologique significative par rapport aux composants de la trousse R sultats du test ELISA M bovis compar s avec des chantillons au statut de culture positif et des chantillons provenant des troupeaux ou des r gions d clar s indemnes de la tuberculose M thode de test en Test de d tection des anticorps e cours d valuation IDEXX M bovis Esp ces cibles b tail N 307 Sensibilit diagnostique cultures positives M bovis GH E IC 59 7 69 5 Specificit diagnostique E chantillons de r gions DSp 98 indemnes en tuberculose IC 97 5 98 4 14 IDEXX M bovis valuation comp
18. tapa papel de aluminio o adhesivo etc 26 IDEXX M bovis Precauciones y advertencias Considerar todo material biol gico como potencialmente infeccioso cuando se manipule Usar guantes de protecci n prendas de protecci n gafas o proteccion de la cara al manipular muestras y reactivos Consultar la Ficha de Datos de Seguridad de Materiales del producto para obtener informaci n adicional Consultar al final de este protocolo para los peligros y medidas de prevenci n relacionados con los reactivos Pr cticas de laboratorio Los resultados ptimos se obtendr n siguiendo estrictamente este protocolo El pipeteo cuidadoso la coordinaci n y el lavado durante todo este procedimiento son necesarios para mantener la precisi n y exactitud Usar una punta de pipeta diferente para cada muestra y control No exponer las soluciones TMB a la luz fuerte o a cualquier agente oxidante Manejar el Substrato TMB con material de cristal limpio o material pl stico Todos los desechos deben descontaminarse adecuadamente antes de ser eliminados Desechar el contenido de conformidad con las regulaciones locales regionales y nacionales Extremar la precauci n para evitar la contaminaci n de los componentes del kit No verter los reactivos no utilizados de nuevo en contenedores No utilizar los kits pasada su fecha de caducidad Obtenci n de Muestras Se pueden analizar muestras de suero o plasma reci n extra das o p
19. 4 IDEXX M bovis IDEXX M bovis Versi n Espa ola Kit para la detecci n de Anticuerpos frente a Mycobacterium bovis Para uso veterinario exclusivo Nombre y uso propuesto El kit IDEXX M bovis para la detecci n de anticuerpos frente a Mycobacterium bovis M bovis se ha dise ado para el an lisis de muestras de suero y plasma de bovino Esta prueba est dise ada para utilizarse en combinaci n con otros m todos para el diagn stico y manejo de la infecci n tuberculosa sin embargo no es adecuada para el diagn stico individual de animales o manadas como libres de la enfermedad Declaraci n de la OIE Los datos de validaci n del kit IDEXX M bovis para la detecci n de anticuerpos frente a Mycobacterium bovis han sido certificados en Mayo de 2012 por la OIE bas ndose en la revisi n por expertos declar ndose el kit apto para la detecci n de anticuerpos de M bovis en muestras de plasma o suero de bovino para usarse como una prueba adicional junto con otros m todos para el diagn stico y el manejo de la infecci n por M bovis La prueba tambi n puede utilizarse al realizar estudios serol gicos para comprender el predominio y el riesgo de infecci n de M bovis a nivel de manejo del reba o Informaci n general La tuberculosis bovina causada por Mycobacterium bovis M bovis sigue siendo una importante enfermedad del ganado en muchos pa ses cuyo control y erradicaci n resultan complicados debido a la falta
20. Mycobacterium bovis Antik rper Testkit Nur zum tier rztlichen Gebrauch Name und Verwendungszweck Das IDEXX M bovis Testkit ist ein Enzymimmunoassay zum den Nachweis von Antik rpern gegen Mycobacterium bovis in Serum und Plasmaproben von Rindern Der Test ist in Verbindung mit anderen Methoden zur Diagnose und zum Management der Rindertuberkulose einzusetzen jedoch nicht zur Freitestung von Einzeltieren oder Herden geeignet OIE Erkl rung Die Validierungsdaten f r das IDEXX Mycobacterium bovis Antik rper Test Kit wurden im Mai 2012 durch Experten der OIE begutachtet und auf dieser Basis das Kit als geeignet f r die Erkennung von M bovis Antik rpern in Serum und Plasmaproben vom Rind f r die Verwendung als Zusatztest in Verbindung mit anderen Methoden zur Diagnose und Behandlung einer M bovis Infektion beurteilt Der Test eignet sich auch f r die Verwendung bei Serountersuchungen zum Erlangen eines besseren Verst ndnisses der Pr valenz und Risiken einer M bovis Infektion auf Herdenbasis Allgemeine Informationen Die durch Mycobacterium bovis M bovis verursachte Tuberkulose der Rinder stellt in manchen L ndern nach wie vor eine bedeutende Erkrankung in Rinderbest nden dar und die Bek mpfung bzw Eradikation der Infektionskrankheit wird durch das Fehlen sensitiver Tests und das Vorliegen groBer Erregerreservoirs in wildlebenden Tieren erschwert Obwohl die auf zellvermittelten Reaktionen basierenden Tuberkulosetests
21. P280 P337 P313 Sample Diluent Causes serious eye irritation Wear eye protection If eye irritation persists Get medical advice attention Diluant des chantillons Provoque une s v re irritation des yeux Porter un quipement de protection des yeux Si l irritation oculaire persiste consulter un m decin Diluente de Amostra Provoca irrita o ocular grave Usar protec o ocular Caso a irrita o ocular persista consulte um m dico Diluyente de la Muestra Provoca irritaci n ocular grave Llevar gafas de protecci n Si persiste la irritaci n ocular Consultar a un m dico Probenverd nnungspuffer Verursacht schwere Augenreizung Augenschutz tragen Bei anhaltender Augenreizung Arztlichen Rat einholen rztliche Hilfe hinzuziehen Diluente del campione Provoca grave irritazione oculare Indossare proteggere gli occhi Se l irritazione degli occhi persiste consultare un medico H315 H319 P280 P332 P313 P337 P313 TMB Substrate Causes skin irritation Causes serious eye irritation Wear protective gloves eye protection face protection If skin irritation occurs Get medical advice attention If eye irritation persists Get medical advice attention Substrat TMB Provoque une irritation cutan e Provoque une s v re irritation des yeux Porter des gants de protection un quipement de protection des yeux du visage En cas d irritation cutan e co
22. a di anticorpi insieme all anamnesi della mandria Il test non adatto a diagnostiscare singoli animali o mandrie come liberi dalla malattia IDEXX M bovis 45 Certificazione OIE Sommario degli Studi di convalida Fare riferimento al registro www oie int dei test diagnostici per informazioni descrittive complete Caratteristiche analitiche Precisione CV piastra densit ottica del campione negativo da 14 5 a 17 7 CV piastra densit ottica del positivo debole da 8 7 a 11 9 CV piastra densit ottica del positivo moderato da 5 7 a 10 3 Ripetibilita Da piastra a piastra valore C P del campione equivoco da 18 a 27 Da piastra a piastra valore C P del campione positivo da 12 a 21 Specificit analitica dati indicano che il kit molto specifico per quanto riguarda altre componenti micobatteriche ambientali ad esempio M avium M paratuberculosis M kansasii Gli isolamenti M kansasii sono rari ma l infezione con alte dosi di M kansasii potrebbe comportare risultati positivi falsi sottolineando i limiti dei test di screening basati sulle proteine conservate tra le specie micobatteriche Sensibilit analitica non applicabile Caratteristiche diagnostiche Determinazione del cut off Il cut off C P del test rapporto campione positivo di 0 30 stato determinato prendendo in considerazione la specificit del test complessiva al 97 98 durante lo sviluppo Stime della sensibilit diagnost
23. a dizer se animais individuais ou rebanhos est o livres da doen a Declara o da OIE Os dados de valida o para o Kit IDEXX Mycobacterium bovis antibody test foram certificados em maio de 2012 pela OIE com base na an lise de especialistas como apto para a detec o de anticorpos para M bovis em amostras de soro e plasma de bovinos de forma ser usado como teste suplementar em conjunto com outros m todos para o diagn stico e gest o da infec o por M bovis O teste tamb m til ao realizar exames sorol gicos para compreender a preval ncia e o risco de infec o por M bovis no controle de rebanho Informa es Gerais A tuberculose bovina causada pelo Mycobacterium bovis M bovis continua a ser uma importante doen a que acomete os animais de produ o em muitos pa ses e seu controle e erradica o dificultada pela falta de testes sens veis bem como a presen a significativa de animais selvagens como reservat rios Embora os testes de tuberculose com base nas respostas mediadas por c lulas Tuberculina e interferon gama possam detectar animais nas fases iniciais da infec o eles ainda n o conseguem detectar at 20 de animais verdadeiramente infectados A utiliza o estrat gica suplementar de um teste baseado em rea o de anticorpo ao M bovis pode aumentar o poder de diagn stico atrav s da detec o de subconjuntos de animais infectados n o detectados pelos m todos atuais Descri
24. ar a 2 8 C Dispensar 100 ul de Control Negativo CN DILUIDO en dos pocillos Dispensar 100 ul de Control Positivo CP DILUIDO en dos pocillos Dispensar 100 ul de muestra DILUIDA en los pocillos apropiados Las muestras pueden analizarse por duplicado pero el an lisis en un solo pocillo es tambi n aceptable Cubrir los pocillos e incubar a 18 26 C durante 60 minutos 5 min Eliminar el contenido l quido de cada pocillo y lavar cada pocillo con aproximadamente 300 ul de Soluci n de Lavado 3 5 veces Evitar que las placas se sequen entre los lavados y antes de a adir el reactivo siguiente Despu s del lavado final eliminar el fluido de lavado residual de cada placa golpe ndola sobre material absorbente Dispensar 100 ul de Conjugado a cada pocillos Cubrir los pocillos e incubar a 18 26 C durante 30 minutos 2 min Repetir el paso 6 10 Dispensar 100 ul de Substrato TMB en cada pocillo 11 Cubrir los pocillos e incubar a 18 26 C durante 15 minutos 1 min 12 Dispensar 100 ul de Soluci n de Frenado en cada pocillo 13 28 Medir y anotar los valores de absorbancia a 450nm A 450 IDEXX M bovis 14 C lculos Controles CNS CN1 A 450 5 CN2 A 450 CPx CP1 A 450 5 CP2 A 450 Criterios de Validaci n CNx lt 0 200 CPx 0 300 En los ensayos no validos debe sospecharse de la t cnica y el ensayo tiene que repetirse siguiendo una revisi
25. arative des performances Le niveau de sensibilit indiqu ci dessous est bas sur trois lots ELISA diff rents repr sentant une diversit biologique significative par rapport aux composants de la trousse Les donn es de sp cificit sont repr sentatives d un seul lot ELISA R sultats du test M bovis avec la m thode ELISA compar s au test d intradermotuberculinisation comparative IDC Test de d tection des anticorps M thode de test de comparaison Esp ces cibles b tail IDEXX M bovis Sensibilit di f N 344 ensibilit diagnostique a par rapport au test IDC DSn 69 5 IC 64 4 74 1 Sp cificit di f N 144 p cificit diagnostique par rapport au test IDC DSp 97 2 IC 92 8 99 1 R sultats du test M bovis par la m thode ELISA compar s au test interf rons gamma IFN gamma Test de d tection des anticorps M thode de test de comparaison Esp ces cibles b tail IDEXX M bovis Sensibilit di t N 166 ensibilit diagnostique 5 par rapport au test IFN gamma DSn 62 7 IC 64 4 74 1 EE N Pas de comparaison directe ii sii DSp effectu e sur les gamma n gatifs par rapport au tes gamma IC partir des troupeaux n gatifs Accord et divergences La nature du test de d pistage de la tuberculose classification bas e sur une inspection visuelle lors de l abattage r ussite relative avec la culture et les diff rences entre les r ponses m diation cellulaire IFN
26. bovis Antigen beschichtete Testplatte inaktiviert 5 2 Positive Kontrolle Konservierungsstoff Natriumazid 1x0 05 ml S Negative Kontrolle Konservierungsstoff Natriumazid 1x0 05 ml 4 Konjugat Anti Rind IgG HRPO Konjugat 1x60 ml 5 Probenverd nner Konservierungsstoff Natriumazid 1x120 ml A TMB Substrat 1x60 ml B Stoppl sung 1x60 ml Waschkonzentrat 10X Phosphat Tween Waschl sung 6 Konservierungsstoff Gentamicin 1x235 ml Sonstige Komponenten Plastikbeutel mit DruckverschluB 1 Hinweis Am Ende dieser Gebrauchsinformation befindet sich eine Tabelle welche die im Text und auf den Etiketten verwendeten Symbole erl utert Lagerung Reagenzien bei 2 8 C lagern Bei entsprechender Lagerung sind die Reagenzien bis zum Verfalldatum stabil Notwendiges Material das nicht mitgeliefert wird 34 Prazisionspipetten und Multikanalmikropipetten Einweg Pipettenspitzen Graduierter Zylinder f r die Waschl sung Photometer f r 96 Vertiefungen ausgestattet mit 450 nm Messfiltern Manuelles halbautomatisches oder automatisches Mikrotiterplatten Waschsystem Zur Vorbereitung der Reagenzien nur destilliertes oder demineralisiertes Wasser verwenden Vortex Mischer oder gleichwertiger Mischer R hrchen f r die Verd nnung der Proben Abdeckungen fiir Mikrotiterplatten Deckel Alu Folie oder Klebefolie IDEXX M bovis Vorsichtsmafinahmen und Warnhinweise Alle biologischen Substanzen als potenziell infekti
27. bovis 19 Procedimento de Teste Permitir que os reagentes atinjam 18 26 C ent o mesclar gentilmente atrav s de invers o ou movimentos circulares leves 1 Obter Placa s impregnada s com ant geno e registrar a posi o da amostra Se utilizar parcialmente as placas remova apenas as cavidades suficientes para as amostras a sererm testadas Guarde as cavidades remanescentes com o dissecante no saco ziplock fornecido adicionalmente e armazene entre 2 8 C Dispensar 100 ul de Controle Negativo CN DILU DO em duplicata Dispensar 100 ul de Controle Positivo CP DILU DO em duplicata Dispensar 100 ul de amostra DILUIDA nas cavidades apropriadas As amostras podem ser testadas em duplicata mas uma nica cavidade por amostra aceit vel Cubra as placas e incube as entre 18 26 C por 60 minutos 5 minutos Remover o conte do liquido das cavidades da placa e lavar cada cavidade com aproximadamente 350 ul de Solu o de Lavagem por 3 5 vezes Evitar que a placa seque entre as lavagens e antes da adicao do pr ximo reagente Ap s a lavagem final remover o fluido residual de lavagem de cada placa batendo a firmemente em material absorvente Dispensar 100 ul de Conjugado em cada cavidade Cubra as placas e incube as entre 18 26 C por 30 minutos 2 minutos Repetir passo 6 10 Dispensar 100 ul de Substrato TMB em cada cavidade 11 Cubra as placas e incube as entre 18 26 C por
28. diferentes fabricados con una significativa diversidad biol gica con respecto a los componentes del kit Resultados del ELISA M bovis comparados con cultivos de estatus positivo y muestras de reba os o regiones declarados libres de tuberculosis IDEXX M bovis Anticuerpos Especies a las que se apunta Prueba en evaluaci n ELISA ganado Sensibilidad D N 307 ensibilidad Diagn stica n usando cultivos positivos M bovis ES wu Cl 59 7 69 5 Especificidad Diagn stica N 1473 muestras de zonas DSp 98 libres de tuberculosis CI 97 5 98 4 30 IDEXX M bovis Rendimiento comparado El nivel de sensibilidad que se indica a continuaci n se basa en 3 lotes ELISA diferentes fabricados con una significativa diversidad biol gica con respecto a los componentes del kit Los datos de especificidad representan solo un lote de ELISA Resultados del ELISA de M bovis en comparaci n con positivos y negativos de la prueba de tuberculina cervical comparativa intrad rmica simple SICCT m IDEXX M bovis EU Prueba de comparaci n Anticuerpos ELISA Especies Diana bovino N 344 Sensibilidad Diagn stica en comparaci n con SICCT pe Du Cl 64 4 74 1 N 144 Especificidad Diagnostica 5 en comparaci n con SICCT DSp ah Cl 92 8 99 1 Resultados de ELISA de M bovis en comparaci n con positivos de interfer n gamma GIFN Prueba de comparaci n IDEXX M bovis Especies a las que se p Anticuerpos ELISA apun
29. durch leichtes Sch tteln mischen um ausgef llte Salze aufzul sen Das Waschkonzentrat 10X vor Gebrauch 1 10 mit destilliertem demineralisiertem Wasser verd nnen z B 50 ml Waschkonzentrat 10X mit 450 ml destilliertem Wasser verd nnen Die Waschl sung kann bei 18 26 C drei Tage lang und bei 2 8 C bis zu zwei Wochen lang aufbewahrt werden Proben und Kontrollen Proben und Kontrollen mit dem Probenverd nner im Verh ltnis 1 50 verd nnen 1 Teil Probe 49 Teile Probenverd nner Die Kontrollen m ssen f r jede Testserie im Doppelansatz mitgef hrt werden IDEXX M bovis 35 Testanweisung Alle Reagenzien m ssen vor Gebrauch auf 18 26 C gebracht werden Die Reagenzien durch leichtes Sch tteln mischen 1 Die beschichteten Platten nehmen und die Position der Proben notieren Falls nur ein Teil der Platte verwendet wird die notwendige Menge an Vertiefungen entnehmen und den Rest der Platte mit dem Trockenmittel in dem mitgelieferten Plastikbeutel bei 2 8 C zur ckstellen 100 ul VERD NNTE negative Kontrolle NK in zwei Vertiefungen geben 100 ul VERD NNTE positive Kontrolle PK in zwei Vertiefungen geben 100 ul der VERD NNTEN Probe in die entsprechenden Vertiefungen geben Die Proben k nnen im Einfachansatz getestet werden empfehlenswert ist jedoch sie im Doppelansatz zu testen Vertiefungen abdecken und 60 Minuten 5 Minuten bei 18 26 C inkubieren Den fl ssigen Inhalt aus den Vertiefung
30. e concord ncia entre os lotes de kits dos tr s centros incluindo os testes na IDEXX IDEXX M bovis 23 Refer ncias 1 de la Rua Domenech R A T Goodchild H M Vordermeier R G Hewinson K H Christiansen and R S Clifton Hadley 2006 Ante mortem diagnosis of tuberculosis in cattle a review of the tuberculin tests interferon assay and other ancillary diagnostic techniques Res Vet Sci 81 190 210 2 Coad M Downs S H Durr PA Clifton Hadley R S Hewinson R G Vordermeier H M Whelan A 0 2008 The Veterinary Record 162 382 384 3 Gormley E Doyle M B Fitzsimons T McGill K Collins J D 2006 Vet Microbiol 112 171 179 4 Palmer M V Waters W R 2006 Advances in bovine tuberculosis diagnosis and pathogenesis What policy makers need to know Vet Microbiol 112 181 190 PRODUTO IMPORTADO USO VETERINARIO IDEXX BRASIL LABORATORIOS LTDA Sao Paulo SP Av Brig Faria Lima 1478 Cj416 CEP 01472 900 CNPJ 00 377 455 0001 20 Resp Tec Andrea L C Frezza CRMV SP 30 632 Para assist ncia t cnica IDEXX EUA Tel 1 800 548 9997 ou 1 207 556 4895 IDEXX Europa Tel 800 727 43399 Contacte o representante local ou distribuidor IDEXX ou visite idexx com contactlpd IDEXX e Test With Confidence s o marcas ou marcas registradas de IDEXX Laboratories Inc ou de suas filiais nos Estados Unidos e ou em outros pa ses 2015 IDEXX Laboratories Inc Todos os direitos reservados 2
31. e multicanale idonee all erogazione Puntali per pipette monouso Cilindro graduato per la soluzione di lavaggio Lettore di piastre per microtitolazione in grado di misurare la densit ottica OD a 450 nm Sistema di lavaggio per piastre manuale semi automatico o automatico Usare solo acqua distillata o deionizzata per la preparazione dei reagenti Vortex o simile Provette per la diluizione dei campioni Copripiastra o sigillante per piastre coperchio foglio di alluminio o adesivo IDEXX M bovis Precauzioni e avvertenze per gli utenti Maneggiare tutti i materiali biologici come potenzialmente infettivi La soluzione substrato irritante per occhi apparato respiratorio e pelle Evitare il contatto con la pelle e gli occhi e Indossare guanti protettivi abbigliamento protettivo protezione per viso e occhi Fare riferimento alla scheda di sicurezza MSDS del prodotto per maggiori informazioni Pratiche di laboratorio e La stretta osservanza di questo protocollo permette di ottenere risultati ottimali necessario eseguire con attenzione la pipettatura e il lavaggio per tutta la durata di questa procedura al fine di garantire precisione e accuratezza e Tutti i rifiuti devono essere correttamente decontaminati prima dello smaltimento Smaltire il contenuto in accordo con le normative locali regionali e nazionali Fare attenzione per evitare la contaminazione dei componenti del kit Non riversare nei loro contenitori
32. e si utilizza solo una parte delle piastre estrarre solamente il numero di pozzetti sufficiente per i campioni da analizzare Posizionare i pozzetti rimanenti con l essiccante nel sacchetto di plastica con chiusura lampo aggiuntivo e rimetterli in frigorifero a 2 8 C Erogare 100 ul di controllo negativo CN DILUITO in due pozzetti della piastra da analizzare Erogare 100 ul di controllo positivo CP DILUITO in due pozzetti della piastra da analizzare Erogare 100 ul di campione diluito nei relativi pozzetti Se possibile analizzare i campioni in duplicato sebbene sia accettabile anche l analisi in un singolo pozzetto Coprire i pozzetti e incubarli a 18 26 C per 60 minuti 5 minuti Rimuovere il contenuto liquido di tutti i pozzetti e lavare ciascun pozzetto con circa 300 ul di soluzione di lavaggio per 3 5 volte Evitare di lasciare asciugare la piastra tra un lavaggio e l altro e prima di aggiungere altro reagente Dopo l ultima rimozione picchiettare con decisione il liquido di lavaggio residuo presente in ciascuna piastra su materiale assorbente Erogare 100 ul di coniugato in ciascun pozzetto Coprire i pozzetti e incubarli a 18 26 C per 30 minuti 2 minuti Ripetere il passaggio 6 10 Erogare 100 ul di substrato TMB in ciascun pozzetto 11 Coprire i pozzetti e incubarli a 18 26 C per 15 minuti 1 minuto 12 Erogare 100 ul di soluzione di arresto in ciascun pozzetto
33. ed TB free herds or regions Test method under evaluation IDEXX M bovis Antibody ELISA Target Species Cattle N 307 Diagnostic sensitivity using M bovis culture positives Bn o CI 59 7 69 5 N 1473 Diagnostic specificity samples from TB free areas en SES Cl 97 5 98 4 6 IDEXX M bovis Comparative Performance The sensitivity level indicated below is based on 3 different ELISA lots manufactured with significant biological diversity with respect to kit components The specificity data are representative of only one ELISA lot M bovis ELISA results compared to single intradermal comparative cervical tuberculin test SICCT positives and negatives Test method of comparison IDEXX M bovis Antibody ELISA Target Species Cattle N 344 Diagnostic sensitivity e vs SICCT Ben SE Cl 64 4 74 1 N 144 Diagnostic specificity E vs SICCT DI So Cl 92 8 99 1 M bovis ELISA results compared to Gamma Interferon GIFN positives Test method of comparison IDEXX M bovis Antibody ELISA Target Species Cattle N 166 Diagnostic sensitivity 0 vs Gamma IFN DSn 62 7 Ci 64 4 74 1 Diagnostic specificit N No direct comparison performed G i IFN y DSp on Gamma negatives from pos CI negative herds Agreement and Discrepancies The nature of TB testing classification based on visual slaughter inspection relative success with culture and differences between cell mediated GIFN and SICCT and hum
34. em ser levadas em conta ao determinar a classifica o dos animais ou rebanhos O teste n o suficiente para dizer se animais individuais ou rebanhos est o livres da doen a IDEXX M bovis 21 Certifica o OIE Resumo de estudos de valida o Consulte o registro de testes diagn sticos em www oie int para informa es descritivas completas Caracter sticas da an lise Precis o CV da placa densidade ptica de amostra negativa 14 5 a 17 7 CV da placa densidade ptica de positivo fraco 8 7 a 11 9 CV da placa densidade ptica de positivo moderado 5 7 a 10 3 Repetibilidade Placa a placa valores A P de amostra equ voca 18 a 27 Placa a placa valores A P de amostra positiva 12 a 21 Especificidade da an lise Os dados indicam que o kit muito espec fico com rela o a outras micobact rias ambientais p ex M avium M paratuberculosis M kansasii Os isolamentos de M Kansasii s o raros mas a infec o com altas doses de M kansasii pode resultar em resultados falso positivos impondo limita es que comprometem testes de investiga o baseados em prote nas conservadas dentre as esp cies de micobact rias Sensibilidade da an lise n o aplic vel Caracter sticas do diagn stico Determina o do corte do teste O corte do teste A P raz o amostra para positivo de 0 30 foi determinado pela especificidade geral do teste alvo em 97 a 98 durante o seu desenvolvimento Est
35. en entfernen und sodann mit etwa 300 ul Waschl sung 3 bis 5 mal waschen Dabei ein Austrocknen der Platte zwischen den Waschschritten und der Zugabe des n chsten Reagenz vermeiden Nach dem letzten Waschen die Platte auf saugf higem Material ausklopfen um verbleibende Restfl ssigkeit zu entfernen 100 ul Konjugat in jede Vertiefung geben Vertiefungen abdecken und 30 Minuten 2 Minuten bei 18 26 C inkubieren Den Schritt 6 wiederholen 10 100 ul TMB Substrat in jede Vertiefung pipettieren 11 Vertiefungen abdecken und 15 Minuten 1 Minuten bei 18 26 C inkubieren 12 100 ul Stoppl sung in jede Vertiefung geben 13 36 Messen und Notieren der Extinktionswerte bei 450 nm A 450 IDEXX M bovis 14 Berechnungen Kontrollen NKx NK1 A 450 5 NK2 A 450 PKx PK1 A 450 PK2 A 450 Validit tskriterien NKx x 0 200 PKx gt 0 300 Ung ltige Ergebnisse sind m glicherweise auf eine nicht sachgem e Durchf hrung zur ckzuf hren Der Test sollte nach erneutem sorgf ltigem Durchlesen der Gebrauchsinformation wiederholt werden Proben Probe A 450 NKx PKx NKx P PK Das Vorhandensein oder Nichtvorhandensein von Antik rpern gegen M bovis wird bestimmt indem f r jede Probe das Verh ltnis der Probe zur positiven Kontrolle P PK berechnet wird 15 Interpretation Negativ Positiv P PK lt 0 30 P PK gt 0 30 Hinweis IDEXX bietet auch Ger
36. ent de la plaque sur du papier absorbant Distribuer 100 ul de conjugu dans chaque puits Couvrir les puits et incuber 18 26 C pendant 30 minutes 2 minutes R p ter l tape 6 10 Distribuer 100 ul de substrat TMB dans chaque puits 11 Couvrir les puits et incuber 18 26 C pendant 15 minutes 1 minute 12 Distribuer 100 ul de solution d arr t dans chaque puits 13 12 Lire et enregistrer les valeurs des densit s optiques 450 nm A 450 IDEXX M bovis 14 Calculs Contr les CNx CN1 A 450 CN2 A 450 CPx CP1 A 450 5 CP2 A 450 Criteres de validit CNx lt 0 200 CPX gt 0 300 Si le test est invalide la technique doit tre suspect e et le test r p t en suivant scrupuleusement le mode op ratoire Echantillons Echantillon A 450 CNX CPx CNX EP La pr sence ou l absence d anticorps contre M bovis est d termin e en calculant le rapport chantillon contr le positif pour chaque chantillon E P 15 Interpr tation N gatifs Positifs E P 0 30 E P 2 0 30 Remarque IDEXX fournit quipements et logiciels pour le calcul des r sultats et la synth se des donn es Limites d utilisation Un r sultat n gatif n exclut pas la possibilit d une infection par M bovis Les anticorps contre M bovis peuvent tre transitoires ou peuvent se d velopper lorsque l infection est plus avanc e et la s roconversion peut
37. fication majeure du mode d emploi Modifica es importante nas instru es de uso Modificaci n importante en el manual de instrucciones Wesentliche Anderung der Gebrauchsinformation Modifica importante nell inserto tecnico 53 Manufacturer IDEXX Laboratories Inc One IDEXX Drive Westbrook Maine 04092 USA EU Representative IDEXX Europe B V PO Box 1334 2130 EK Hoofddorp The Netherlands idexx com Bama i Bn FOO
38. gamma et IDC et humorale a g n r sans surprise un grand nombre de divergences Ces divergences illustrent la nature complexe de la tuberculose bovine et soulignent la n cessit d utiliser de multiples outils de diagnostic de mani re avoir une vision plus complete de l infection En d pit de divergences significatives entre les m thodes les donn es montrent la sensibilit accrue qui peut tre atteinte gr ce l utilisation strat gique d un test de d tection d anticorps capable de r v ler de vrais positifs non d tect s par d autres m thodes Reproductibilit Un panel d chantillons caract ris s n 30 ainsi que des lots de trousses distincts ont t fournis deux laboratoires afin de d terminer la reproductibilit au niveau de l utilisateur final Chaque laboratoire a test le panel en double et de facon ind pendante sur chacun des trois lots de trousse fournis Le panel de test tait constitu de 30 chantillons au total 10 n gatifs et 20 positifs Une concordance de 100 a t tablie entre les lots sur chacun des trois sites y compris les tests internes IDEXX IDEXX M bovis 15 R f rences 1 de la Rua Domenech R A T Goodchild H M Vordermeier R G Hewinson K H Christiansen and R S Clifton Hadley 2006 Ante mortem diagnosis of tuberculosis in cattle a review of the tuberculin tests interferon assay and other ancillary diagnostic techniques Res Vet Sci 81 190 210 2 C
39. ica DSn e della specificit DSp I livelli di prestazione indicati in basso si basano su 3 diversi lotti ELISA prodotti con significativa diversit biologica per quanto riguarda i componenti del kit Risultati di ELISA M bovis messi a confronto con lo stato positivo della coltura e con campioni provenienti da mandrie o regioni prive di TB Metodo in corso di valutazione IDEXX M bovis Antibody ELISA Specie target Bestiame N 307 Sensibilit diagnostica utilizzando 0 positivi di coltura M bovis nen 64 6 CI 59 7 69 5 N 1473 Specificita diagnostica E campioni da aree prive di TB DSp 98 CI 97 5 98 4 46 IDEXX M bovis Prestazioni comparative Il livello di sensibilit indicato in basso si basa su 3 diversi lotti ELISA prodotti con significativa diversit biologica per quanto riguarda i componenti del kit dati della specificit rappresentano soltanto un lotto ELISA Risultati ELISA M bovis messi a confronto con risultati positivi e negativi del test della tubercolina cervicale comparativa intradermica singola Single Intradermal Comparative Certical Tuberculin SICCT Metodo di confronto IDEXX M bovis Antibody ELISA Specie target bestiame N 344 Sensibilit diagnostica o rispetto a SICCT DSn 69 5 Cl 64 4 74 1 N 144 Specificita diagnostica rispetto a SICCT DSp 97 2 Cl 92 8 99 1 Risultati ELISA M bovis a confronto con positivi gamma interferone GIFN
40. ica cut nea Em caso de irrita o ou erup o cut nea consulte um m dico Lavar a roupa contaminada antes de a voltar a usar Soluci n de Frenado Provoca una leve irritact n cut nea Puede provocar una reacci n al rgica en la piel En caso de irritaci n o erupci n cut nea Consultar a un m dico Lavar las prendas contaminadas antes de volver a usarlas Stoppl sung Verursacht milde Hautreizungen Kann allergische Hautreaktionen verursachen Bei Hautreizung oder ausschlag Arztlichen Rat einholen arztliche Hilfe hinzuziehen Kontaminierte Kleidung vor erneutem Tragen waschen Soluzione di arresto Provoca delicato irritazione della pelle Pu provocare una reazione allergica cutanea In caso di irritazione o eruzione della pelle consultare un medico Lavare gli indumenti contaminati prima di indossarli nuovamente 52 IDEXX M bovis Symbol Descriptions Descriptions des symboles Descri es do s mbolos Descripciones de los s mbolos Symbol Beschreibungen Descrizione dei simboli LOT Batch Code Lot Num ro de lot C digo de lote Lote N mero de Partida Lote Chargenbezeichnung Ch B Codice del lotto partita SN Serial Number Num ro de s rie N mero de s rie N mero de serie Seriennummer Numero di serie po m u Catalog Number Numero de catalogue N mero de cat logo Numero de cat logo Katalognummer Numero di catalogo In vitro diagnostic Diagn
41. ilute samples and kit controls 1 50 1 part sample 49 parts diluent in Sample Diluent Kit controls must be tested in duplicate for each test series IDEXX M bovis 3 Test Procedure All reagents must be allowed to come to 18 26 C before use Mix reagents by gentle inverting or swirling 1 Obtain antigen coated plate s from foil bag and record the sample position If using partial plates remove only those wells sufficient for samples to be tested Place the remaining wells along with desiccant in the extra ziplock bag provided and return to 2 8 C Dispense 100 uL of DILUTED Negative Control NC into duplicate wells Dispense 100 uL of DILUTED Positive Control PC into duplicate wells Dispense 100 uL of DILUTED sample into appropriate wells Samples may be tested in duplicate but a single well is acceptable Cover the wells and incubate at 18 26 C for 60 minutes 5 minutes Remove the solution and wash each well with approximately 300 uL of Wash Solution 3 5 times Avoid plate drying between plate washings and prior to the addition of the next reagent Tap each plate onto absorbent material after the final wash to remove any residual wash fluid Dispense 100 uL of Conjugate into each well Cover the wells and incubate at 18 26 C for 30 minutes 2 minutes Repeat Step 6 10 Dispense 100 uL of TMB Substrate into each well 11 Cover the wells and incubate at 18 26 C for 15 minu
42. imativas de sensibilidade do diagn stico SD e de especificidade do diagn stico ED Os n veis de desempenho indicados abaixo s o baseados em tr s lotes ELISA diferentes fabricados com diversidade biol gica significativa com rela o ao seus componentes de kit Resultados ELISA para M bovis comparados a estados positivos de culturas e amostras de rebanhos ou regi es designadas livres de TB M todo de teste em avalia o IDEXX M bovis anticorpo ELISA Esp cie alvo gado Sensibilidade do diagn stico aus usando culturas positivas de SD 64 6 Ge ci 59 7 69 5 N 1473 Especificidade do diagn stico ED 98 amostras de reas sem TB BER CI 97 5 98 4 22 IDEXX M bovis Desempenho comparado O n vel de sensibilidade indicado abaixo baseia se em tr s lotes ELISA diferentes fabricados com diversidade biol gica significativa com rela o aos componentes do kit Os dados de especificidade s o representativos de somente um lote ELISA Resultados ELISA para M bovis comparados a positivos e negativos de teste de tuberculina cervical comparativo intradermal nico SICCT single intradermal comparative cervical tuberculin test SICCT M todo de teste de compara o IDEXX M bovis anticorpo ELISA Esp cie alvo gado N 344 Sensibilidade do diagn stico vs SICCT Ben Ban CI 64 4 74 1 N 144 Especificidade do diagn stico vs SICCT ED BE CI 92 8 99 1 Resultados ELISA para M bov
43. is comparados a positivos para Gama Interferon GIFN M todo de teste de compara o IDEXX M bovis anticorpo ELISA Esp cie alvo gado N 166 Sensibilidade do diagn stico e vs Gama IFN an 62 7 Cl 64 4 74 1 N Especiicidade d ignis F Aa vs Gama IFN parag 9 cl n o foi realizada Acordos e discrep ncias As caracter sticas do exame para TB classifica o com base em inspe o visual no abate relativo sucesso em culturas e em diferen as entre respostas humorais mediadas por c lulas GIFN e SICCT geraram conforme esperado um n mero alto de discrep ncias Essas discrep ncias ilustram a caracter stica complexa da TB bovina e ressaltam a import ncia de aplicar m ltiplas ferramentas diagn sticas para poder compreender um quadro mais completo da infec o Mesmo havendo discrep ncias significativas entre os m todos os dados mostram a sensibilidade aumentada que pode ser obtida com o uso estrat gico de subconjuntos de anticorpos de testes de detec o positivos verdadeiros que outros m todos n o encontraram Reprodutibilidade Um painel de amostras caracterizadas n 30 e de lotes distintos de kits foi fornecido a dois laborat rios para determinar a reprodutibilidade na inst ncia do usu rio final Cada laborat rio testou o painel em duplicata sem supervis o para cada um dos tr s kits fornecidos O painel de teste era composto de 30 amostras no total 10 negativos e 20 positivos Houve 100 d
44. lons et les contr les de la trousse au 1 50 1 part chantillon pour 49 part de diluant des chantillons dans le diluant des chantillons Les contr les doivent tre analys s en double pour chaque s rie de tests IDEXX M bovis 11 Mode op ratoire Porter tous les r actifs 18 26 C avant utilisation et bien homog n iser par agitation douce ou inversion 1 R server le nombre de plaques n cessaires la manipulation et noter la position des chantillons En cas d utilisation d une portion de plaque seulement retirer lg nombre de barrettes requises pour les chantillons tester et replacer le reste de la plaque dans le sachet plastique fournis avec le dessicant 2 8 C Distribuer 100 ul de contr le n gatif CN DILUE dans deux cupules Distribuer 100 ul de contr le positif CP DILUE dans deux cupules Distribuer 100 ul de chaque chantillon DILUE dans les cupules appropri es Les chantillons peuvent tre test s en double mais un test en simple est acceptable Couvrir les puits et incuber 18 26 C pendant 60 minutes 5 minutes liminer le liquide contenu dans les puits de la microplaque et laver 3 5 fois chaque puits avec environ 300 ul de Solution de lavage viter la dessiccation des puits de la microplaque entre les lavages et pr alablement la distribution du prochain r actif Apr s le dernier lavage vider le liquide r siduel contenu dans les puits par retournement et tapotem
45. n cada uno de los 3 centros incluyendo las pruebas realizadas en IDEXX IDEXX M bovis 31 Bibliografia 1 de la Rua Domenech R A T Goodchild H M Vordermeier R G Hewinson K H Christiansen and R S Clifton Hadley 2006 Ante mortem diagnosis of tuberculosis in cattle a review of the tuberculin tests interferon assay and other ancillary diagnostic techniques Res Vet Sci 81 190 210 2 Coad M Downs S H Durr PA Clifton Hadley R S Hewinson R G Vordermeier H M Whelan A 0 2008 The Veterinary Record 162 382 384 3 Gormley E Doyle M B Fitzsimons T McGill K Collins J D 2006 Vet Microbiol 112 171 179 4 Palmer M V Waters W R 2006 Advances in bovine tuberculosis diagnosis and pathogenesis What policy makers need to know Vet Microbiol 112 181 190 Para asistencia t cnica IDEXX EE UU Tel 1 800 548 9997 0 1 207 556 4895 IDEXX Europa Tel 800 727 43399 Contacte al representante local o distribuidor IDEXX o visite idexx com contactlpd N de registro 2862 RD Al no estar la iELISA incluida explicitamente en la legislaci n se recomienda su utilizaci n con fines de investigaci n IDEXX y Test With Confidence son marcas o marcas registradas de IDEXX Laboratories Inc o sus filiales en los Estados Unidos de America y o en otros pa ses 2015 IDEXX Laboratories Inc Todos los derechos reservados 32 IDEXX M bovis IDEXX M bovis Deutsche Version
46. n meticulosa del protocolo suministrado con el producto Muestras Muestra A 450 CNX CPx CNX M P La presencia o ausencia de anticuerpos frente a M bovis se determina calculando el cociente del resultado de la muestra dividido por el del Control Positivo M P para cada muestra 15 Interpretaci n Negativo Positivo M P lt 0 30 M P gt 0 30 Nota IDEXX tiene a disposici n instrumentos y sistemas de software para el c lculo de resultados y la elaboraci n de res menes de datos Limitaciones de uso Un resultado negativo no excluye la posibilidad de que exista infecci n por M bovis Los anticuerpos frente a M bovis pueden aparecer s lo temporalmente y pueden desarrollarse m s adelante durante la infecci n de manera que no todos los animales infectados mostrar n seroconversi n Un resultado positivo indica la presencia de anticuerpos frente a M bovis en el animal Debido a la posible exposici n y respuesta a las micobacterias M kansasii por ejemplo presentes en el ambiente a la hora de clasificar al animal o al reba o se deben considerar todos los resultados de las pruebas de tuberculosis test cut neo interfer n gamma y ELISA para detecci n de anticuerpos junto con los antecedentes del reba o La pruebas no es adecuada para el diagn stico individual de animales o manadas como libres de la enfermedad IDEXX M bovis 29 Certificaci n de la OIE Resumen de estudios de validaci n Consulta
47. nada con la cantidad de anticuerpos frente a M bovis que quedan fijados IDEXX M bovis 25 Reactivos Volumen 1 Placa tapizada con Ant geno de M bovis 5 2 Control Positivo conservado con azida de sodio 1x 0 05 ml 3 Control Negativo conservado con azida de sodio 1 x 0 05 ml 4 Conjugado conjugado IgG anti bovino HRPO 1x60ml 5 Diluyente de la Muestra conservado con azida de sodio 1x120 ml A Substrato TMB 1x60 ml B Soluci n de Frenado 1x60 ml C Soluci n de Lavado Concentrada 10X soluci n fosfato Tween 10X 1x235 ml conservada con gentamicina Otros componentes Bolsa de pl stico de cierre herm tico reutilizable 1 Nota Ver tabla al final del protocolo para las explicaciones de los s mbolos utilizados en este protocolo y en las etiquetas del kit Almacenamiento Almacenar los reactivos a 2 8 C Los reactivos son estables hasta su fecha de caducidad siempre y cuando hayan sido almacenados en las condiciones correctas Materiales necesarios que no se suministran Micropipetas de precisi n y micropipetas multidispensadoras Puntas de pipeta desechables Probetas graduadas para la soluci n de lavado Lector de placas de 96 pocillos equipado con filtros de 450 nm Lavador de microplacas manual semiautom tica o autom tica Usar s lo agua destilada o desionizada para preparar los reactivos de la prueba Vortex o equivalente Tubos para la diluci n de las muestras Cubiertas de placas
48. nsulter un m decin Si l irritation oculaire persiste consulter un m decin Substrato TMB Provoca irrita o cut nea Provoca irrita o ocular grave Usar luvas de protec o protec o ocular protec o facial Em caso de irrita o cut nea consulte um m dico Caso a irrita o ocular persista consulte um m dico TMB Substrat Verursacht Hautreizungen Verursacht schwere Augenreizung Schutzhandschuhe Augenschutz Gesichtsschutz tragen Bei Hautreizung Arztlichen Rat einholen arztliche Hilfe hinzuziehen Bei anhaltender Augenreizung Arztlichen Rat einholen arztliche Hilfe hinzuziehen Substrato TMB Provoca irritazione cutanea Provoca grave irritazione oculare Indossare guanti Proteggere gli occhi il viso In caso di irritazione della pelle consultare un medico Se l irritazione degli occhi persiste consultare un medico IDEXX M bovis 51 H316 H317 P333 P313 P363 Stop solution Causes mild skin irritation May cause an allergic skin reaction If skin irritation or rash occurs Get medical advice attention Wash contaminated clothing before reuse Solution d arr t Provoque une l g re irritation cutan e Peut provoquer une allergie cutan e En cas d irritation ou d ruption cutan e consulter un m decin Laver les v tements contamin s avant r utilisation Solu o de Interrup o Causa uma irrita o suave da pele Pode provocar uma reac o al rg
49. o e Princ pios O kit para detec o de anticorpos contra M bovis IDEXX um ensaio imunoenzim tico projetado para detectar anticorpos contra M bovis em amostras de soro e plasma bovino A microtitula o pode ser realizada impregnando se placas de microtitula o de 96 cavidades com ant genos de M bovis recombinantes Durante a incuba o da amostra de teste na cavidade impregnada com ant genos anticorpos espec ficos contra M bovis se presentes formam complexos com os ant genos impregnados Em seguida as cavidades s o lavadas para retirar o material n o aderido e acrescentado um conjugado de anticorpo antibovino peroxidase de raiz forte HRPO que se liga ao anticorpo bovino aderido s cavidades Na pr xima etapa o conjugado que n o se ligou ao ant geno lavado e o substrato de tetrametilbenzidina TMB acrescentado O surgimento de cor varia de acordo com a quantidade de anticorpos anti M bovis ligados ao ant geno IDEXX M bovis 17 Reagentes Volume 1 Placa Impregnada com ant geno de M bovis 5 2 Controle Positivo conservado com azida s dica 1x0 05 ml 3 Controle Negativo conservado com azida s dica 1x0 05 ml 4 Conjugado Conjugado anti bovina IgG HRPO 1x60 ml 5 Diluente de Amostra conservado com azida s dica 1x120 ml A Substrato TMB 1x60 ml B Solu o de Interrup o 1x60ml C E i oo 10X tamp o fosfato tween 10X conservado 1x235 ml Outros componentes embalagem zip lock 1
50. oad M Downs S H Durr PA Clifton Hadley R S Hewinson R G Vordermeier H M Whelan A 0 2008 The Veterinary Record 162 382 384 3 Gormley E Doyle M B Fitzsimons T McGill K Collins J D 2006 Vet Microbiol 112 171 179 4 Palmer M V Waters W R 2006 Advances in bovine tuberculosis diagnosis and pathogenesis What policy makers need to know Vet Microbiol 112 181 190 Pour l assistance technique IDEXX U T l 1 800 548 9997 ou 1 207 556 4895 IDEXX Europe T l 800 727 43399 Contacter votre responsable de secteur IDEXX votre distributeur ou visiter notre site web idexx com contactlpd Perm v t des U N 313 Code de produit 5A65 20 IDEXX et Test With Confidence sont des marques de commerce ou des marques d pos es d IDEXX Laboratories Inc ou ses filiales aux Etats Unis et ou dans d autres pays 2015 IDEXX Laboratories Inc Tous droits r serv s 16 IDEXX M bovis IDEXX M bovis Vers o em Portugu s Kit para detec o de anticorpos contra Mycobacterium bovis Para uso exclusivamente veterin rio Nome e Indica es O kit para detec o de anticorpos contra Mycobacterium bovis M bovis da IDEXX destina se a detectar anticorpos contra M bovis em amostras de soro e plasma de gado O teste foi desenvolvido para ser usado em conjunto com outros m todos para o diagnostico e gerenciamento de infec o por tuberculose no entanto ele n o suficiente par
51. one gli anticorpi contro M bovis formano un complesso con gli antigeni del rivestimento Dopo aver rimosso dai pozzetti mediante lavaggio il materiale non legato viene aggiunto un coniugato di anticorpi anti bovino perossidasi di rafano HRPO che si lega agli anticorpi di bovino legati ai pozzetti Il coniugato non legato viene rimosso mediante lavaggio e il substrato TMB viene aggiunto nei pozzetti Lo sviluppo di colore correlato alla quantit di anticorpi contro M bovis che si legano IDEXX M bovis 41 Reagenti Volume 1 Piastre rivestite di antigene M bovis 5 2 Controllo positivo contiene sodio azide come conservante 1x0 05ml 3 Controllo negativo contiene sodio azide come conservante 1x0 05 ml 4 Coniugato coniugato di IgG anti bovino HRPO 1x60 ml 5 Diluente del campione contiene sodio azide come conservante 1x120 ml A Substrato TMB 1x60 ml B Soluzione di arresto 1x60 ml C Soluzione di lavaggio concentrata 10X fosfato Tween contiene gentamicina come conservante 1x235 ml Altri componenti sacchetti con chiusura lampo 1 Nota vedere la tabella alla fine dell inserto tecnico per la descrizione dei simboli usati nell inserto e nelle etichette Conservazione Conservare i reagenti a una temperatura di 2 8 C reagenti sono stabili fino alla data di scadenza a condizione che siano stati conservati correttamente Notwendiges Material das nicht mitgeliefert wird 42 Pipette di precisione o pipett
52. oral responses generated as expected a large number of discrepancies These discrepancies illustrate the complex nature of bovine TB and highlight the importance of applying multiple diagnostic tools in order to understand a more complete picture of the infection Even though there were significant discrepancies between methods the data show the increased sensitivity that can be attained by the strategic use of the antibody test detecting subsets of true positives missed by other methods Reproducibility panel of characterized samples n 30 and distinct lots of kits were provided to 2 laboratories in order to determine reproducibility at the end user level Each laboratory tested the panel in duplicate unsupervised on each of the 3 kit lots provided The test panel was comprised of 30 samples in total 10 negatives and 20 positives There was 100 agreement between kit lots at each of the 3 sites includes testing at IDEXX IDEXX M bovis 7 References 1 de la Rua Domenech R A T Goodchild H M Vordermeier R G Hewinson K H Christiansen and R S Clifton Hadley 2006 Ante mortem diagnosis of tuberculosis in cattle a review of the tuberculin tests interferon assay and other ancillary diagnostic techniques Res Vet Sci 81 190 210 2 Coad M Downs S H Durr PA Clifton Hadley R S Hewinson R G Vordermeier H M Whelan A O 2008 The Veterinary Record 162 382 384 3 Gormley E Doyle M B Fitz
53. ordo del 100 tra i lotti presso ciascuna delle 3 sedi comprese le prove effettuate alla IDEXX IDEXX M bovis 47 Riferimenti bibliografici 1 de la Rua Domenech R A T Goodchild H M Vordermeier R G Hewinson K H Christiansen and R S Clifton Hadley 2006 Ante mortem diagnosis of tuberculosis in cattle a review of the tuberculin tests interferon assay and other ancillary diagnostic techniques Res Vet Sci 81 190 210 2 Coad M Downs S H Durr PA Clifton Hadley R S Hewinson R G Vordermeier H M Whelan A 0 2008 The Veterinary Record 162 382 384 3 Gormley E Doyle M B Fitzsimons T McGill K Collins J D 2006 Vet Microbiol 112 171 179 4 Palmer M V Waters W R 2006 Advances in bovine tuberculosis diagnosis and pathogenesis What policy makers need to know Vet Microbiol 112 181 190 Assistenza tecnica IDEXX USA Tel 1 800 548 9997 o 1 207 556 4895 IDEXX Europa Tel 800 727 43399 Contattare il responsabile di zona o il distributore IDEXX o consultare il sito idexx com contactlpdre IDEXX e Test With Confidence sono un marchio di propriet di e o registrato da IDEXX Labortaories Inc o dei suoi affiliati e protetti negli Stati Uniti e o in altri paesi 2015 IDEXX Laboratories Inc Tutti i diritti sono riservati 48 IDEXX M bovis IDEXX M bovis 49 50 IDEXX M bovis WARNING ATTENTION ATENCI N ATEN O ACHTUNG ATTENZIONE H319
54. ostic in vitro Diagn stico in vitro Diagn stico in vitro In vitro Diagnostikum Diagnostico in vitro ECIREP e m Authorized Representative in the European Community Repr sentant agr pour la Communaut europ enne Representante autorizado na Comunidade Europ ia Representante autorizado en la Comunidad Europea Autorisierte EG Vertretung Rappresentante autorizzato nella Comunit Europea CONTROL Positive Control Contr le positif Controle Positivo Control Positivo Positive Kontrolle Controllo Positivo CONTROL Negative Control Contr le n gatif Controle Negativo Control Negativo Negative Kontrolle Controllo Negativo Use by date utiliser avant la date Data de Vencimento Usar antes de Verwendbar bis Usare entro Date of manufacture Date de fabrication Data de Fabrica o Fecha de fabricaci n Herstellungsdatum Data di produzione Manufacturer Fabricant Fabricante Fabricante Hersteller Ditta produttrice Temperature limitation Limite de temp rature Limite de temperatura L mite de temperatura Zul ssiger Temperaturbereich Limite di temperatura SEEM Consult instructions for use Consulter la notice d utilisation Consulte instru es para o uso Consultar las instrucciones de uso Gebrauchsinformation beachten Consultare le istruzioni per l uso 9 IDEXX M bovis Major change in the user instructions Modi
55. r en el registro de pruebas de diagn stico en www oie int para obtener informaci n descriptiva integral Caracter sticas anal ticas Precisi n CV de la placa Densidad Optica de Muestra Negativa 14 5 a 17 7 CV de la placa Densidad ptica de Positivo D bil 8 7 a 11 9 CV de la placa Densidad ptica de Positivo Moderado 5 7 a 10 3 Repetibilidad De placa a placa Valor M P de Muestra Dudosa 18 a 27 De placa a placa Valor M P de Muestra Positiva 12 a 21 Especificidad anal tica Los datos indican que el kit es muy espec fico con respecto a otras micobacterias ambientales por ejemplo M avium M paratuberculosis M kansasii Los aislamientos de M kansasii son poco frecuentes pero la infecci n con altas dosis de M kansasii pueden causar resultados falsos positivos lo que acent a las limitaciones de las pruebas de detecci n basadas en prote nas conservadas entre las especies micobacterianas Sensibilidad anal tica no aplica Caracter sticas de diagn stico Determinaci n de punto de corte de prueba El punto de corte coeficiente muestra positivo de la prueba de 0 30 se determin con elfin de alcanzar una especificidad general de la prueba del 97 al 98 durante el desarrollo Estimaciones de especificidad de diagn stico Diagnostic specificity DSp y sensibilidad de diagn stico Diagnostic sensitivity DSn Los niveles de rendimiento que se indican a continuaci n se basan en 3 lotes ELISA
56. reviamente congeladas Las muestras descongeladas deben mezclarse bien antes de su diluci n Preparaci n de las reactivos Soluci n de Lavado Debido al almacenamiento a 2 8 C puede que se formen precipitados en la Soluci n de Lavado Concentrada 10X asegurarse de que la Soluci n de Lavado Concentrada 10X est completamente disuelta antes de diluirla Para preparar la soluci n de lavado vertir 50 ml de Soluci n de Lavado Concentrada 10X en un matraz aforado o en una probeta graduada afiadir 450 ml de agua destilada desionizada y mezclar bien Se puede almacenar la soluci n diluida hasta un m ximo de 3 d as a 18 26 C o hasta un m ximo de 2 semanas a 2 8 C Muestras y Controles Realizar una diluci n 1 50 1 parte de muestra en 49 partes de diluyente de las muestras y los controles del kit con el Diluyente de la Muestra Los controles del kit se deben analizar por duplicado en cada serie de pruebas IDEXX M bovis 27 Procedimiento de la Prueba Debe dejarse que todos los reactivos adquieran 18 26 C antes de usarlos Los reactivos deber n mezclarse invirti ndolos o agit ndolos suavemente 1 Obtener la Placa o placas tapizada s con ant geno y anotar la posici n de las muestras Si no se utiliza toda la placa separar nicamente los pocillos necesarios para analizar las muestras Guardar el resto de pocillos junto con el desecante en la bolsa de pl stico de cierre herm tico reutilizable y volver a almacen
57. rstand prevalence and risk of M bovis infection at a herd management level General Information Bovine tuberculosis caused by Mycobacterium bovis M bovis continues to be an important livestock disease in many countries and its control and eradication is complicated by the lack of sensitive tests as well as the presence of significant wildlife reservoirs Although tuberculosis tests based on cell mediated responses skin and gamma interferon can detect animals in the early stages of infection they still fail to detect up to 20 of truly infected animals The strategic supplemental use of an M bovis antibody test may increase overall diagnostic power by detecting subsets of infected animals missed by current methods 4 Descriptions and Principles The IDEXX M bovis antibody test kit is an enzyme immunoassay designed to detect the presence of antibody to M bovis in bovine serum and plasma samples A microtiter format has been configured by coating M bovis recombinant antigens onto the wells of 96 well microtiter plates Upon incubation of the test sample in the coated well antibody to M bovis forms a complex with the coated antigens After washing away unbound material from the wells an antibovine horseradish peroxidase conjugate is added that binds to any bovine antibody attached in the wells Unbound conjugate is washed away and TMB substrate is added Color development is related to the amount of bound antibody against M bovis
58. s rios para manter a precis o e acur cia Usar uma ponteira diferente para cada amostra e controle e N o expor a solu o de TMB luz forte ou a agentes oxidantes Manusear a solu o de TMB em recipientes limpos de vidro ou pl stico e Todos os res duos devem ser descontaminados adequadamente antes do descarte Descartar os conte dos de acordo com as normas locais regionais e nacionais Ter cuidado para evitar a contamina o dos componentes do kit N o devolver a sobra do reagente ao frasco N o utilizar kits com prazo de validade vencido Coleta de Amostras O teste pode ser realizado em soro fresco ou previamente congelado As amostras descongeladas devem ser bem misturadas antes de serem dilu das Preparo dos reagentes Solu o de Lavagem A Concentrado de Lavagem 10X pode se precipitar ao ser armazenada entre 2 8 C Dissolva a completamente antes de usar Para preparar a solu o de trabalho 1X coloque 50 ml da Concentrado de Lavagem 10X em um bal o volum trico ou proveta graduada adicione 450 ml de gua destilada deionizada e misture bem A solu o dilu da pode ser armazenada entre 18 26 C por at 3 dias ou entre 2 8 C por at 2 semanas Amostras e Controles As amostras e controles do kit devem ser dilu dos com o Diluente de Amostra na propor o 1 50 uma parte de amostra para 49 de diluente Os controles do kit devem ser testados em duplicata para cada s rie de testes IDEXX M
59. se IDEXX M bovis 5 OIE Certification Summary of Validation Studies Refer to www oie int registry of diagnostic tests for comprehensive descriptive information Analytical Characteristics Precision Plate CVs Optical Density of Negative Sample 14 5 to 17 7 Plate CVs Optical Density of Weak Positive 8 7 to 11 9 Plate CVs Optical Density of Moderate Positive 5 7 to 10 3 Repeatability Plate to Plate S P value of Equivocal Sample 18 to 27 Plate to Plate S P value of Positive Sample 12 to 21 Analytical Specificity The data indicates that the kit is very specific with respect to other environmental Mycobacterial e g M avium M paratuberculosis M kansasii M kansasii isolations are rare but infection with high doses of M kansasii may result in false positive results underscoring limitations of screening tests based on proteins conserved among Mycobacterial species Analytical Sensitivity Not Applicable Diagnostic Characteristics Test Cut off Determination The test S P cut off Sample to Positive ratio of 0 30 was determined by targeting overall test specificity at 97 to 98 during development Diagnostic sensitivity DSn and specificity DSp estimates The performance levels indicated below are based on 3 different ELISA lots manufactured with significant biological diversity with respect to kit components M bovis ELISA results compared to culture positive status and samples from designat
60. simons T McGill K Collins J D 2006 Vet Microbiol 112 171 179 4 Palmer M V Waters W R 2006 Advances in bovine tuberculosis diagnosis and pathogenesis What policy makers need to know Vet Microbiol 112 181 190 For technical assistance IDEXX USA Tel 1 800 548 9997 or 1 207 556 4895 IDEXX Europe Tel 800 727 43399 Contact your IDEXX area manager or distributor or visit our website idexx com contactlpd U S Vet License No 313 Product Code 5A65 20 IDEXX and Test With Confidence are trademarks or registered trademarks of IDEXX Laboratories Inc or its affiliates in the United States and or other countries 2015 IDEXX Laboratories Inc All rights reserved 8 IDEXX M bovis IDEXX M bovis Version fran aise Trousse de d tection d anticorps contre Mycobacterium bovis R serv l usage v t rinaire D finition et application La trousse IDEXX M bovis a t d velopp e pour d tecter les anticorps dirig s contre Mycobacterium bovis M bovis dans les chantillons de plasma et de s rum bovins Elle est con ue comme test compl mentaire en association avec d autres m thodes pour diagnostiquer et g rer l infection par la tuberculose bovine elle n est pas destin e d terminer le status d animaux individuels ou de troupeaux vis vis de la maladie Communiqu de l OIE Les donn es de validation de la trousse IDEXX de d tection d anticorps contre Mycobacterium bovis ont t
61. sitiven Probe 12 bis 21 Analytische Spezifit t Die Daten zeigen eine sehr hohe Spezifit t des Kits in Bezug auf andere umfeldspezifische Mykobakterien z B M avium M paratuberculosis M kansasii M kansasii Isolierungen sind selten doch bei einer Infektion mit starker Konzentration von M kansasii sind falsch positive Ergebnisse m glich Dies unterstreicht die Grenzen der proteinbasierten Screening Tests unter den Mycobacterium Spezies Analytische Sensitivit t Nicht anwendbar Diagnostische Merkmale Cutoff Bestimmung Ein P PK Cutoff OD Positivkontrolle von 0 30 wurde bestimmt indem bei der Entwicklung eine allgemeine Testspezifitat von 97 bis 98 angestrebt wurde Sch tzungen der diagnostischen Sensitivit t DSn und Spezifitat DSp Die unten angegebenen Leistungsstufen basieren auf 3 verschiedenen ELISA Chargen die in Bezug auf die Kitbestandteile mit signifikanter biologischer Unterschiedlichkeit hergestellt wurden M bovis ELISA Ergebnisse im Vergleich zu kulturpositivem Status und Proben ausbestimmten TB freien Herden oder Regionen Evaluierte Testmethode IDEXX M bovis Antik rper ELISA Zielspezies Rind Diagnostische Sensitivit t au bei Verwendung von M bovis DSn 64 6 kulturpositiven Proben Kl 59 7 69 5 N 1473 Diagnostische Spezifitat Proben aus TB freien Gebieten Esp 088 KI 97 5 98 4 38 IDEXX M bovis Vergleichbare Leistung Die unten angegebenen Sensitivit t
62. solution de substrat TMB la lumi re directe du soleil ou des agents oxydants Veiller la propret de la verrerie et ou du mat riel de laboratoire en mati re plastique utilis s lors de sa manipulation Tous les d chets doivent tre correctement d contamin s avant leur limination liminer les contenus selon les r glementations locales r gionales et nationales en vigueur e viter la contamination des composants du kit Ne pas verser les r actifs non utilis s de nouveau dans les conteneurs Ne pas utiliser les trousses apr s leur date de p remption Pr l vement d chantillons Du s rum ou des chantillons de plasma frais ou congel s pr c demment peuvent tre utilis s Tous les chantillons d congel s doivent tre m lang s avec soin avant d tre dilu s Pr paration des r actifs Solution de lavage Le concentr de lavage 10X peut former des pr cipit s lorsqu il est entrepos une temp rature de 2 8 C il est important que le concentr de lavage 10X ne pr sente aucun pr cipit avant de le diluer Pour pr parer la solution de lavage transf rer 50 ml de concentr de lavage 10X dans un flacon gradu de 500 ml ajouter 450 ml d eau d ionis e or d eau distill et m langer soigneusement La solution de lavage dilu e peut tre conserv e 18 26 C pendant un maximum de 3 jours ou 2 8 C durant 2 semaines au maximum chantillons et contr les Diluer les chantil
63. squ leur date de p remption condition d tre conserv s correctement Mat riel n cessaire mais non fourni Pipettes de pr cision ou pipettes multicanaux e Embouts de pipette usage unique e prouvette gradu e pour la pr paration de la solution de lavage Lecteur de plaque 96 puits quip d un filtre 450 nm Syst me de lavage manuel semi automatique ou automatique Utiliser de l eau distill e ou d sionis e pour la pr paration des r actifs Vortex ou quivalent Microtubes pour la dilution des chantillons e Couvercles pour microplaques aluminium ou adh sifs 10 IDEXX M bovis Pr cautions d emploi et mises en garde e Manipuler tout mat riel biologique comme tant potentiellement infectieux Porter des gants de protection des v tements de protection un quipement de protection des yeux ou du visage lors de la manipulation des chantillons et des r actifs Se reporter la fiche de s curit du produit pour plus d informations Voir la fin du mode d emploi pour les risques et mesures de pr vention li s aux r actifs Pratiques de laboratoire e Des r sultats optimaux seront obtenus en se conformant de mani re stricte au protocole fourni La pr cision du test d pend des l ments suivants pipetage minutage et lavage minutieux au cours de cette proc dure Utiliser un embout de pipette diff rent pour chaque chantillon et chaque contr le Ne pas exposer la
64. sstufen basieren auf 3 verschiedenen ELISA Chargen die in Bezug auf die Kitbestandteile mit signifikanter biologischer Unterschiedlichkeit hergestellt wurden Die Spezifitatsdaten gelten nur f r eine ELISA Charge M bovis ELISA Ergebnisse im Vergleich zu positiven und negativen einzelnen intradermalen vergleichenden zervikalen Tuberkulintests SICCT Vergleichstestmethode IDEXX M bovis Antik rper ELISA Zielspezies Rind N 344 Diagnostische Sensitivit t a og SICCT DSn 69 5 KI 64 4 74 1 N 144 Diagnostische Spezifit t og SICCT DI IE KI 92 8 99 1 M bovis ELISA Ergebnisse im Vergleich zu positiven Gamma Interferon Tests GIFN Vergleichstestmethode IDEXX M bovis Antik rper ELISA Zielspezies Rind N 166 Diagnostische Sensitivit t ogi SICCT DSn 62 7 KI 64 4 74 1 Es wurde kein direkter Vergleich von Diagnostische Spezifit t DSp Gamma negativen Ergebnissen aus gg SICCT negativen Herden durchgef hrt Kl bereinstimmung und Diskrepanzen Die Art der TB Untersuchung Klassifizierung basierend auf Sichtpr fung der Schlachttiere relativer Erfolg mit Kultur und Unterschiede zwischen zellvermittelten GIFN und SICCT und humoralen Reaktionen verursachte erwartungsgem zahlreiche Diskrepanzen Diese Diskrepanzen reflektieren die Komplexit t der bovinen TB und unterstreichen die Wichtigkeit der Anwendung mehrerer Diagnosemittel um ein vollst ndigeres Bild der Infektion
65. ta ganado S N 166 ensibilidad Diagn stica 8 versus Interfer n Gamma IFN pon TEM Cl 64 4 74 1 Especificidad Diagn stica N EE H interfero es IFN DSp directa con gamma negativos versus Interferon Gamma IFN Cl de reba os negativos Coincidencias y Discrepancias La naturaleza de las pruebas de TB clasificaci n basada en el examen de visual sacrificio xito relativo con el cultivo y las diferencias entre las respuestas celulares GIFN y SICCT y humorales gener como era de esperar un gran n mero de discrepancias Estas discrepancias demuestran la compleja naturaleza de la tuberculosis bovina TB y destacan la importancia de aplicar herramientas de diagn sticos multiples a fin de comprender la infecci n de manera m s completa Aunque hubo importantes discrepancias entre los m todos los datos muestran la sensibilidad incrementada que puede alcanzarse mediante el uso estrat gico de las pruebas de anticuerpos que detectan subconjuntos de positivos verdaderos que otros m todos pasan por alto Reproducibilidad Un panel de muestras caracterizadas n 30 y distintos lotes del kit se proporcionaron a 2 laboratorios a fin de determinar la reproducibilidad del kit a nivel del usuario final Cada laboratorio analiz el panel por duplicado sin supervisar en cada uno de los lotes de 3 kits proporcionados El panel constaba de 30 muestras en total 10 negativas y 20 positivas Hubo un 100 de correlaci n entre los lotes del kit e
66. te und Softwaresysteme zur Berechnung der Ergebnisse und zur Datenverarbeitung an Grenzen bei der Anwendung Ein negatives Testergebnis schlie t die M glichkeit einer Infektion mit M bovis nicht aus Antik rper gegen M bovis k nnen transient vorhanden sein oder sich erst in einem sp teren Stadium der Infektion entwickeln AuBerdem kommt es nicht bei allen infizierten Tieren zur Serokonversion Ein positives Testergebnis spricht f r das Vorliegen von M bovis Antik rpern im betreffenden Tier Aufgrund der potenziellen Exposition und Reaktion auf Umweltmykobakterien z B M kansasii sollten zur Beurteilung des Einzeltier oder Herdenstatus alle Ergebnisse von Tuberkulosetests intrakutane Tuberkulinprobe Interferon Test ELISA Antik rpertest im Zusammenhang mit der Herdenanamnese bewertet werden Der Test ist nicht zur Freitestung von Einzeltieren oder Herden geeignet IDEXX M bovis 37 OIE Certification Zusammenfassung der Validierungsstudien Umfassende Beschreibungen und Informationen sind dem Verzeichnis der Diagnosetests auf www oie int zu entnehmen Analytische Merkmale Pr zision Platten VK Optische Dichte der negativen Probe 14 596 bis 17 796 Platten VK Optische Dichte der schwach positiven Probe 8 796 bis 11 996 Platten VK Optische Dichte der m Big positiven Probe 5 7 bis 10 3 Wiederholbarkeit Platte zu Platte P PK Wert der grenzwertigen Probe 18 bis 27 Platte zu Platte P PK Wert der po
67. tes 1 minute 12 Dispense 100 uL of Stop Solution into each well 13 Measure and record absorbance values at 450nm A 450 IDEXX M bovis 14 Calculations Controls NCX NC1 A 450 5 NC2 A 450 PCX PC1 A 450 i PC2 A 450 Validity criteria NCx lt 0 200 PCx gt 0 300 For invalid assays technique may be suspect and the assay should be repeated following a thorough review of the package insert Samples Sample A 450 NCx PCx NCx S P The presence or absence of antibody to M bovis is determined by calculating the sample to Positive S P ratio for each sample 15 Interpretation Negative Positive S P 0 30 S P gt 0 30 Note IDEXX has instrument and software systems available which calculate results and provide data summaries Limitations of use A negative result does not exclude the possibility of M bovis infection Antibody to M bovis can be transient can develop later in infection and not all infected animals will seroconvert A positive test result suggests the presence of M bovis antibodies in the subject animal Due to potential exposure and response to environmental Mycobacteria M kansasii for example all tuberculosis test results skin gamma interferon and antibody ELISA in conjunction with herd histories should be considered when determining animal or herd classification The test is not suitable to diagnose individual animals or herds to be free of disea
68. zu erhalten Trotz wesentlicher Diskrepanzen unter den Methoden zeigten die Daten dass bei zielgerichteter Verwendung von Teils tzen der Antik rper erkennenden Tests eine erh hte Sensitivit t f r wahre positive Ergebnisse die bei anderen Methoden bersehen werden erlangt wird Reproduzierbarkeit Zur Bestimmung der Reproduzierbarkeit auf Endverbraucherebene erhielten 2 Labore eine Reihe gekennzeichneter Proben n 30 und unterschiedliche Kit Chargen Jedes Labor pr fte die Testreihe im Duplikat und unbeaufsichtigt an jeder der 3 bereitgestellten Kitchargen Die Testreihe umfasste insgesamt 30 Proben 10 negative und 20 positive An den 3 Teststandorten zwei Labors und IDEXX wurde eine 100 ige bereinstimmung bei allen Kitchargen erzielt IDEXX M bovis 39 Literatur 1 Palmer M V Waters W R 2006 Advances in bovine tuberculosis diagnosis and pathogenesis What policy makers need to know Vet Microbiol 112 181 190 2 de la Rua Domenech R A T Goodchild H M Vordermeier R G Hewinson K H Christiansen and R S Clifton Hadley 2006 Ante mortem diagnosis of tuberculosis in cattle a review of the tuberculin tests interferon assay and other ancillary diagnostic techniques Res Vet Sci 81 190 210 3 Coad M Downs S H Durr PA Clifton Hadley R S Hewinson R G Vordermeier H M Whelan A 0 2008 The Veterinary Record 162 382 384 4 Gormley E Doyle M B Fitzsimons T McGill K Collins

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