Autokit CH50
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1. 1 586 90 Presentaciones C digo No Producto Presentaci n 995 40801 Autokit CH50 R1 2x20ml R2 1 x para 20 ml R2a 1x 20 ml 997 43801 CH50 Calibrator CAL 5 Conc x 0 5 ml 991 43701 Complement Control H 10 x 0 5 ml L 10 x 0 5 ml No Esperado Observado Recuperaci n U ml U ml 1 27 1 31 0 114 4 2 36 5 40 0 109 6 3 47 3 47 0 99 4 4 54 6 53 5 98 0 Precisi n WAKO 30R Prueba preliminar de precisi n Precisi n intra ensayo Proceso Muestra Replicados Media SD CV U ml 1 1 21 49 5 0 5 1 10 1 2 21 25 9 0 3 1 35 2 1 21 46 2 0 5 1 14 2 2 21 27 9 0 3 1 05 Precisi n total Los datos se recogieron de acuerdo con la Gu a NCCLS Nivel de de Media SD CV S S Concentraci n d as U ml de ensayo High 21 48 3 1 57 3 2 18 9 22 1 Low 21 26 9 1 54 5 7 16 6 16 7 Sensibilidad el nivel m nimo detectable de CH50 se ha estimado en 10 U ml Especificidad WAKO 30R Estudio de adici n Acido Asc rbico Nada 10 20 30 40 50 mg dl CH50 36 0 36 0 36 0 35 0 35 5 35 5 U ml Bilirrubina Nada 8 16 24 32 40 mg dl CH50 35 0 36 0 36 0 36 0 37 0 37 0 U ml Hemoglobina None 100 200 300 400 500 mg dl CH50 40 0 40 0 40 0 40 0 40 0 39 5 U ml innovaci n tecnol gica vafer laboratorio2. HP 995 40801 1008 D1 Autokit CH50 In vitro automatizado basado en liposomas Para la determinaci n de del complemento total en suero humano CE Uso El Autokit CH50 es un inmunoensayo in vitro automatizado basado en liposomas para la determinaci n de del complemento total CH50 en suero humano Resumen y explicaci n del ensayo La cascada del complemento integrada por aproximadamente 20 prote nas s ricas juega un papel importante en el sistema inmunol gico La actividad del complemento en muestras de suero aporta informaci n importante para el diagn stico de varias enfermedades Cl nicamente la actividad del complemento es un indicador directo de las anormalidades del sistema del complemento a diferencia de los componentes inmunoreactivos del sistema La actividad del complemento puede ser relacionada con las fases activas del lupus eritematoso sist mico artritis reumatoide vasculitis crioglobulinemia algunas nefritis e inmunodeficiencias cong nitas Hasta el momento el ensayo m s utilizado para el complemento total ha sido el basado en la hem lisis mediada por complemento de hemat es sensibilizados con anticuerpos En este m todo se necesitan diluciones apropiadas del suero para medir las lisis de las c lulas indicadoras Se ha desarrollado un m todo sencillo que no requiere diluciones del suero Sin embargo ambos m todos son complicados y laboriosos y los reactivos son inestables debido a la utilizaci n d
3. e hemat es Adem s los sistemas hemol ticos son dificilmente automatizables debido a la inestabilidad de las suspensiones de hemat es Los liposomas integrados por l minas conc ntricas de bicapas lip dicas separadas por espacios acuosos han sido ampliamente utilizados en el estudio del da o producido en las membranas celulares por el sistema de complemento Se hab a descrito anteriormente un ensayo homog neo para la actividad total del complemento basado en la inmuno lisis de los liposomas El grado de lisis se determinaba a trav s de la actividad de la fosfatasa alcalina englobada y el procedimiento el cual se realizaba de forma manual no pod a aplicarse a los autoanalizadores Este m todo requer a la adici n de varios reactivos a los tubos de reacci n un tiempo de reacci n prolongado y la utilizaci n de anticuerpos unidos a los liposomas lo cual podr a provocar la agregaci n y sedimentaci n de los liposomas en el reactivo preparado Recientemente hemos desarrollado un ensayo homog neo automatizable basado en liposomas para la determinaci n de la actividad de complemento total en suero Se emplea una poblaci n homog nea de liposomas de peque o tama o 200 nm que proporcionan una dispersi n estable y glucosa 6 fosfato deshidrogenasa G6PDH EC 1 1 1 49 como enzima englobada el pH ptimo de la G6PDH es el neutro a diferencia del de la fosfatasa alcalina Utilizando estos liposomas hemos desarrollado un ensayo comp
4. idad en Laboratorios Microbiol gicos y Biom dicos del Centro USA para el Control de la Enfermedad Instituto USA de la Salud y siguiendo las normativas locales o nacionales relativas a la manipulaci n de tales materiales Indicios de inestabilidad f sica o qu mica La presencia de precipitados en los reactivos o la obtenci n de valores de suero control fuera de lo establecido por el fabricante puede ser una indicaci n de inestabilidad en el reactivo Instrumentaci n El reactivo se ha dise ado para su utilizaci n en los analizadores disponibles en el mercado Consultar el manual de instrucciones para obtener una descripci n de su utilizaci n y especificaciones Las prestaciones obtenidas en equipos alternativos deben ser establecidas por el usuario final Obtenci n y preparaci n de la muestra Emplear suero como muestra Se recomienda medir la actividad del complemento inmediatamente despu s de haber separado el suero Si es preciso almacenar la muestra a 70 C o temperatura inferior El cido asc rbico la bilirrubina la hemoglobina y la turbidez de las muestras lip micas no tienen un efecto significativo en los resultados Materiales suministrados Ver el apartado Reactivos Materiales necesarios pero no suministrados Analizador automatizado Calibrador CH50 C digo No 997 43801 Control de Complemento C digo No 991 43701 Preparaci n de los reactivos Reactivo 1 R1 Emplear los Liposomas R1 tal c
5. ificados como sigue de acuerdo con la Directiva Europea 91 155 EEC Letra distintiva y denominaci n de peligro del producto Xi Xi Irritante Informaci n relativa a peligros espec ficos para el ser humano y el medio ambiente Frases R Frases S 43 Posibilidad de sensibilizaci n en 24 Ev tese el contacto con la piel contacto con la piel 37 sense guantes adecuados Procedimiento Hitachi 717 37 C Medida 5 9 3 10 0 0 min M A Muestra 10 pl R2 125 yl i dla R1 250 yl Este procedimiento est ndar es s lo un ejemplo Aplicaciones para autoanalizadores est n disponibles bajo pedido Advertencias y precauciones Para diagn stico in vitro Para uso professional No utilizar internamente en personas o animales No mezclar reactivos pertenecientes a kits con n meros de lote diferentes No emplear reactivos que hayan superado la fecha de caducidad indicada en la etiqueta de cada envase No emplear los reactivos descritos anteriormente para prop sitos diferentes al indicado Concentraciones de cido asc rbico hasta 50 mg dl hemoglobina hasta 500 mg dl y bilirrubina hasta 40 mg dl no interfieren de forma significativa con el Autokit CH50 Advertencia Riesgo biol gico Dado que todas las muestras son potencialmente infecciosas deben ser manipuladas en nivel de seguridad 2 tal como se recomienda para cualquier fluido corporal potencialmente infeccioso en el manual Biosegur
6. letamente autom tico para la determinaci n de la actividad total del complemento Principio del m todo Cuando la muestra se mezcla con los liposomas y el substrato los anticuerpos presentes en el reactivo se combinan con el dinitrofenil DNP incorporado a los liposomas El complejo ant geno anticuerpo activa el complemento presente en la muestra del paciente El complemento activado rompe la membrana del liposoma El enzima G6PDH contenido en el liposoma reacciona con el NAD y la glucosa 6 fosfato G6P presentes en el reactivo Durante la reacci n enzim tica el NAD se reduce a NADH increment ndose la absorbancia a 340 nm El incremento de absorbancia es proporcional a la actividad de complemento en la muestra Reacci n Reacci n enzim tica G6PDH D Glucosa 6 fosfato NAD RB Gluconolactona 6 fosfato NADH detecci n a 340 nm Reactivos Contenidos yconditiones de almacenamiento Conservar a 2 10 C No congelar 1 botella x para 20 ml Conservar a 2 10 C 1 botella x 20 ml Conservar a 2 10 C R1 Liposomas 2 botellas x 20 ml R2 Substrato R2a Diluyente R1 Liposomas R2 Substrato de liposomas conteniendo 4 U ml G6PDH Anticuerpo Anti DNP cabra 24 mmol l G6P 9 mmol l NAD R2a Diluyente Tamp n maleate pH5 5 10 mmol l Mezcla de 5 cloro 2 metil 2H isotiazol 3 ona EC no 247 500 7 y 2 metil 2H isotiazol 3 ona EC no 220 239 6 3 1 Este kit contiene componentes clas
7. mitaciones del procedimiento El rango de medici n del Autokit CH50 es de 10 60 U ml Cuando los valores de CH50 exceden 60 U ml diluir la muestra 1 1 con soluci n salina repetir el ensayo y multiplicar por 2 el resultado Valores esperados Suero 23 46 U ml Ya que los valores esperados est n afectados por la edad sexo dieta localizaci n geogr fica y otros factores cada laboratorio debe establecer su propio rango Prestaciones anal ticas Exactitud WAKO 30R Referencias 1 Schur PH Complement studies of sera and other biologic fluids Hum Palhol 1983 14 338 42 2 Mayer MM Complement and complement fixation In Kabat EA Mayer MM eds Experimental immunochemistry 2nd ed Springfield IL Charles C Thomas 1967 133 240 3 Kitamura H Inai S Nagaki K A simple procedure for the titration of total hemolytic complement activity Jpn J Clin Chem 1983 12 143 7 4 Kinsky SC Antibody complement interaction with lipid model membranes Biochim Biophys Acta 1972 265 1 23 5 Akots G Braman JC Broeze RJ Bowden DW Rapid homogeneous phase liposome based assays for total complement activity Complement 1984 1 125 33 6 Bowden DW Rising M Akots G Myles A Broeze RJ Homogeneous liposome based assay for total complement activity in serum Clin Chem 1986 32 275 8 7 Yamamoto S KubotsuK Kida M Kondo K Matsuura S Uchiyama S Yonekawa 0 Kanno T Clin Chem 1995 4
8. omo se suministran La soluci n es estable hasta la fecha de caducidad Reactivo 2 R2 R2a Reconstituir un envase para 20 ml del Substrato R2 con un envase 20 ml de Diluyente R2a para preparar la Soluci n Substrato La Soluci n Substrato es estable 40 d as a 2 10 C Calibrador CAL A adir cuidadosamente 0 5 ml de agua destilada o desionizada para disolver el contenido de cada calibrador Una vez reconstituido mantener la soluci n en hielo y usarla en un per odo de 8 horas innovaci n tecnol gica vafer laboratorio Autokit CH50 In vitro automatizado basado en liposomas Para la determinaci n de del complemento total en suero humano CE Resultados Los resultados se calculan autom ticamente y se imprimen en unidades de concentraci n Calibraci n El ensayo CH50 se calibra con una curva que representa la absorbancia frente a la concentraci n Se recomienda realizar al menos una calibraci n semanal Control de calidad Se recomienda un programa de control de calidad para todos los laboratorios cl nicos Para monitorizar el funcionamiento de la t cnica se recomienda el an lisis de materiales de control en rangos normales y patol gicos Los valores obtenidos deben estar entre los m rgenes indicados por el fabricante Si el material de control no tiene valores establecidos el laboratorio deber realizar el n mero de an lisis necesario para obtener un valor central y un rango aceptable Li
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