Ref. 4801 Ref. 4802 Ref. 4804 Ref. 4881* Ref. 4808 Ref. 4809 Ref
Contents
1. HYDRAGEL 1 IF violet Acide Acid Violet Ref 4801 HYDRAGEL 2 IF violet Acide Acid Violet Ref 4802 HYDRAGEL 4 IF Violet Acide Acid Violet Ref 4804 Ref 4881 HYDRAGEL 4 IF Amnidoschwarz Amidoblack Ref 4808 HYDRAGEL 9 IF Violet Acide Acid Violet Ref 4809 Ref 4882 Masque standard Standard mask 2012 03 HYDRAGEL 1 2 4 amp 9 IF 2012 03 Masque standard Standard mask ESPECIFICACIONES DE USO Los kits HYDRAGEL 1 IF 2 IF 4 IF y 9 IF permiten la detecci n de prote nas monoclonales en el suero y la orina humanos mediante inmunofijaci n en gel de agarosa en el sistema semiautom tico HYDRASYS Las prote nas separadas mediante electroforesis en geles de agarosa tamponados alcalinos son incubadas con antisueros individuales que son espec ficos para las cadenas pesadas gamma lg G alfa Ig A y mu Ig M y para las cadenas ligeras kappa libre y unida y lambda libre y unida respectivamente Despu s de eliminar las prote nas que no han reaccionado los inmunoprecipitados son te idos o bien con violeta cido o bien con negro amido Los electroforetogramas son evaluados visualmente para detectar la presencia de reacciones espec ficas con las prote nas monoclonales sospechosas Cada gel de agarosa est pensado para analizar 1 muestra en el kit HYDRAGEL 1 IF 2 muestras en el kit HYDRAGEL 2 IF 4 muestras en los kits HYDRAGEL 4 IF 9 muestras en los kits HYDRAGEL2. Insertar cada peine formando un ngulo de 30 en los hueco situados en el l mite inferior de la plantilla hasta que toque la cara vertical m s alejada del operador Permitir que el peine toque delicadamente el l quido formando un ngulo de 45 permitiendo la absorci n del mismo Fig 8 IMPORTANTE Cada peine debe permanecer inclinado 45 Si se coloca derecho puede llegar a da ar la superficie del gel Apretar la tecla START flecha verde situada a la izquierda en el teclado ELIMINACION DE REACTIVOS DESCRIPCION DE LOS PASOS AUTOMATIZADOS Los antisueros difunden durante 15 segundos a 20 C Temperatura controlada mediante efecto Peltier En este momento suena una alarma audible El sisguiente mensaje que aparece en pantalla es Y PAP Y PAPEL FILTRO GRUESO IV BLOTTING 1 2 9 Sp Eliminar los peine s Comprobar visualmente que los antisueros se han eliminado de forma correcta lo cual podremos saber por Ausencia de antisueros en la superficie del gel Los extremos del peine se hallan coloreados en su totalidad Si la absorci n es incompleta introducir el mismo peine y en la misma posici n repitiendo de forma manual el procedimiento de eliminaci n Coger el aplicador de reactivos por la pesta a elevar y quitar Aplicar un papel de filtro grueso sobre el gel Alinear los bordes del papel con el gel inclinrlo con un ngulo de 45 Colocarlo encima del gel suavemente ATEN
3. Conservaci n estabilidad y se ales de deterioro El diluyente del colorante concentrado puede conservarse a temperatura ambiente o en la nevera Es estable hasta la fecha de caducidad indicada en el kit o en la etiqueta del vial de diluyente NO LO CONGELE No le a ada azida s dica 4 COLORANTE NEGRO AMIDO PN 4808 Preparaci n El colorante negro amido concentrado es una soluci n viscosa que puede gelificarse lo que no afecta de ning n modo a la calidad de la soluci n final y su capacidad de coloraci n Para obtener una perfecta reconstituci n del colorante siempre hay que prepararlo como se indica a continuaci n 1 A ada unos 15 mL de diluyente del colorante en el vial de negro amido concentrado Cierre el vial con cuidado Agite el vial intensamente durante un m nimo de 5 segundos Vierta la soluci n obtenida en el recipiente de preparaci n de la soluci n de coloraci n Repita esta operaci n dos veces o tres veces si es necesario Vierta el resto de diluyente en el recipiente de preparaci n de la soluci n de coloraci n Complete hasta 300 mL con agua destilada o desionizada Agite esta soluci n de 5 a 10 minutos El colorante est listo para usar NOTA Una reconstituci n incompleta del colorante puede implicar una mala coloraci n de la fracci n alb mina disminuci n de su porcentaje o aparici n de un agujero blanco en el centro de la fracci n Despu s de la diluci n la soluci n colorante c
4. Preparaci n Cada vial de la Soluci n stock de lavado HYDRASYS SEBIA referencia N 4541 10 vials 80 ml cada una se diluye hasta 5 litros con agua destilada o desionizada Despu s de la diluci n la soluci n de lavado contiene tamp n pH 8 7 0 5 Uso Sirve patra limpiar el Compartimento de Tinci n del HYDRASYS Usar peri dicamente p ej si el instrumento se usa a diario lavar el compartimento de tinci n semanalmente Ver la hoja de instrucciones para las indicaciones de uso Almacenamiento estabilidad y se ales de deterioro Almacenar ambas soluciones de lavado stock y de trabajo a temperatura ambiente o refrigeradas en contenedores cerrados La soluci n stock de lavado es estable hasta la fecha de caducidad indicada en las etiquetas del vial Desechar la soluci n de trabajo de lavado si cambia su apariencia p ej si se vuelve turbia debido a contaminaci n bacteriana 57 4 HYDRAGEL 1 2 4 amp 9 IF 2012 03 Masque standard Standard mask DILUYENTE DE MUESTRAS HYDRAGEL IF El Diluyente SEBIA referencia n 4588 1 vial de 80 mL est listo para usar Reactivo necesario para la diluci n autom tica de las muestras Ver el p rrafo 6 anterior 5 FLUIDIL Preparaci n El Fluidil SEBIA PN 4587 5 ml est listo para su uso Uso Para diluir muestras turbias o viscosas p ej sueros que contienen crioglobulinas o criogeles Almacenamiento estabilidad y se ales de deterioro
5. a la presencia de una gammapat a de lg D Ig E que habr que confirmar con los antisueros anti cadenas pesadas detla o psilon b la presencia de una cadena ligera libre que habr que confirmar con los antisueros espec ficos anti cadenas ligeras libres kappa o lambda La presencia de bandas en alguna de las pistas correspondientes a los antisueros anti cadenas ligeras y a su vez en las pistas corresponcdientes a los antisueros cadenas pesadas puede indicarnos una Gammapat a de cadenas pesadas muy poco frecuente Presencia de dos o m s componentes monoclonales En algunos casos la proliferaci n de varios clones de c lulas B se muestran como varias bandas al realizar una inmunofijaci n Una gammapat a biclonal se caracteriza por la presencia de dos bandas en la zona correspondiente al las cadenas pesadas iguales o diferentes y dos bandas en la correspondiente a las cadenas ligeras iguales o diferentes La presencia de inmunoglobulinas con diferentes grados de polimerizaci n se manifiesta mediante la aparici n de varias bandas en una misma pista cadenas pesadas sucediendo lo mismo lo con las cadenas ligeras Para confirmar la presencia de una anormalidad monoclonal simple es necesario despolimerizar con beta mercaptoetanol y repetir la inmunofijaci n ver Muestras para el an lisis Una gammapatia oligoclonal se caracteriza por la presencia de m ltiples bandas de uno 6 m s tipos cadenas pesadas y uno m s tipos ca
6. 2 Extraer los aplicador es y desechar 3 Elevar ambos soportes extraer las esponjas tamponadas por sus extremos de pl stico y desechar Extraer el portaaplicadores Limpiar los electrodos son un trapo h medo Mantener el gel en su posici n dentro de la c mara de migraci n 4 Colocar la plantilla de aplicaci n de antisueros acto siguiente Fig 5 La posici n de la plantilla de aplicaci n vendr determinada por una hendidura existente en la gu a met lica la cual debe permanecer en el m dulo de migraci n todo el tiempo Sostener la plantilla por la muesca superior e insertarla en la gu a los extremos deben coincidir con los de la superficie serigrafiada Hacer descender la plantilla hasta que se ponga en contacto con el gel Ajuste la posici n de la plantilla para un alineamiento perfecto entre los perfiles electrofor ticos y los pocillos de la plantilla consulte el kit de accesorios para HYDRASYS 9 IF SEBIA PN 1265 para las instrucciones 5 Aplicar los antisueros del modo siguiente VOL ul PISTA plantilla plantilla REACTIVO COLOR 1 2y41F 91F ELP 40 20 Soluci n FIJADORA Amarillo G 25 15 ANTISUERO ANTI GAMMA cadenas pesadas Rosa A 25 15 ANTISUERO ANTI ALFA cadenas pesadas Azul oscuro M 25 15 ANTISUERO ANTI MU cadenas pesadas Verde oscuro K 25 15 ANTISUERO ANTI KAPPA cadenas ligeras libres o no Verde claro JE 25 15 ANTISUERO ANTI LAMBDA cadenas ligeras libres o no
7. 9 IF Los kits HYDRAGEL 4 IF est n disponibles con el colorante violeta cido o con negro amido Para uso diagn stico In Vitro NOTA En estas instrucciones el nombre HYDRASYS es usado para designar los sistemas semiautom ticos HYDRASYS e HYDRASYS 2 SEBIA PRINCIPIO DEL TEST Las bandas anormales de las separaciones electrofor ticas de prote nas de suero y orina principalmente aquellas situadas en las fracciones de beta globulinas y de gamma globulinas son siempre sospechosas de ser prote nas monoclonales prote nas M paraprote nas inmunoglobulinas monoclonales y por lo tanto son un indicio de gammapat as monoclonales Para identificar esas bandas anormales se aplica la t cnica de la inmunofijaci n La electroforesis seguida de inmunofijaci n es una t cnica sencilla que permite que una prote na sea retenida despu s de la electroforesis in situ mediante la formaci n de un complejo insoluble con su anticuerpo Es f cil de realizar en cuatro etapas y de f cil interpretaci n 1 Separaci n de prote nas mediante electroforesis en gel de agarosa 2 Inmunofijaci n inmunoprecipitaci n de las prote nas separadas electrofor ticamente los carriles de migraci n electrofor tica apropiados son recubiertos con los antisueros individuales Los antisueros difunden dentro del gel y precipitan los ant genos correspondientes cuando est n presentes Las prote nas del carril de referencia son fijadas con una soluci n
8. Azul claro NOTA Para evitar mezclar antisueros stos se hallan coloreados de igual modo que la etiqueta presente en los correspondientes viales y la plantilla de aplicaci n Dispensar los antisueros evitando la formaci n de burbujas de aire en la punta de la pipeta Aplicar los antisueros Fig 6 Mantener la pipeta en posici n perpendicular a la plantilla dejando que repose suavemente en el centro del pocillo Inyectar el antisuero mientras va form ndose el canal por capilaridad sin que se formen burbujas en el mismo 6 Cerrar la tapa del m dulo de migraci n 7 Iniciar el procedimiento inmediatamente presionando la tecla START situada a la izquierda del teclado En pantalla aparece el mensaje INCUBACI N 60 HYDRAGEL 1 2 4 amp 9 IF 2012 03 Masque standard Standard mask INMUNOFIJACION DESCRIPCION DE LOS PASOS AUTOMATIZADOS Incubaci n a 20 C durante 5 minutos termostatizaci n mediante efecto Peltier Una se al audible advierte de la necesidad de levantar la tapa El siguiente mensaje que aparece en pantalla es AS ME ANTISUEROS ME NOTA La tapa del m dulo de migraci n debe permanecer cerrada durante la incubaci n Il ELIMINACION DEL EXCESO DE REACTIVOS 2 3 Abrir la tapa Elimine los reactivos usando los peines de papel de filtro Fig 7 Un peine para las plantillas 1 IF y 2 IF dos peines para la plantilla 4 IF y 3 peines para la plantilla 9 IF
9. B mercaptoetanol diluido previamente a 1 10 con agua destilada o desionizada o con soluci n salina agite en el v rtex y deje que incube de 10 a 15 minutos y luego siga con el procedimiento habitual Muestras a descartar No utilice muestras de plasma El fibrin geno da lugar a una banda cerca del punto de aplicaci n que puede ser confundida con una inmunoglobulina monoclonal y afectar a al porcentaje de la fracci n beta correspondiente No utilice muestras de suero hemolizadas La hem lisis incrementa las fracciones alfa 2 y beta No utilice muestras de orina muy antiguas o almacenadas incorrectamente en las que pueda haber tenido lugar degradaci n enzim tica de las prote nas PROCEDIMIENTO El sistema HYDRASYS es un instrumento semiautom tico multiparam trico Las etapas autom ticas incluyen el procesamiento de los geles de agarosa HYDRAGEL en la siguiente secuencia aplicaci n de la muestra migraci n electrofor tica secado tinci n destinci n y secado final Las etapas manuales incluyen el manejo de las muestras y los geles y la puesta en marcha del instrumento para la operaci n LEER CUIDADOSAMENTE EL MANUAL DE INSTRUCCIONES DEL HYDRASYS HYDRASYS 2 l PUESTA EN MARCHA DE LA MIGRACI N 1 Encender el HYDRASYS 2 Coloque un aplicador para el HYDRAGEL 1 IF 6 HYDRAGEL IF 2 4 2 muestras dos aplicadores para el HYDRAGEL IF 2 4 4 muestras 6 3 aplicadores para el HYDRAGEL 9 IF en una superficie plana con los n m
10. congelados algunos sueros especialmente los que contienen crioglobulinas o criogeles pueden volve ser viscosos o desarrollar turbidez Tales sueros pueden presentar problemas de aplicaci n debido a la difusi n dificultada a trav s de los papeles del aplicador En este caso a adir 25 yl de Fluidil a 75 yl suero y mezclar durante 15 segundos Seguir con el procedimiento habitual Algunas proteinas monoclonales pueden plolimerizarse dando lugar a una banda monoclonal en todas las pistas En este caso i preparar una diluci n al 1 de beta mercaptoetanol BME en Fuidil ii adicionar 25 ul de esta soluci n reductora a 75 pl del suero problema iii agitar en un vortex y esperar un m nimo de 15 minutos m ximo 30 minutos y proceder luego del modo habitual Para an lisis de lg D y o de lg E aplicar las mismas diluciones que para las cadenas ligeras libres y ligadas 2 Orinas concentradas La mayor a de muestras de orina deben ser concentradas Aplique orina concentrada en todos los carriles Concentre la orina con un mecanismo adaptado hasta alcanzar una concentraci n de prote nas totales de gt 5 g l o una lg total de aproximadamente 1 g l Si desconoce las concentraciones de prote nas o de Ig en la orina concentre 20x 100x Con el programa de migraci n de IF est ndar el l mite de detecci n de 150 500 mg l corresponde a la menor concentraci n de prote na monoclonal en la muestra que da lugar a una banda claramente d
11. facilitar su identificaci n y como control de su aplicaci n la soluci n fijadora est coloreada con un colorante no t xico del mismo color que el reflejado en la etiqueta del vial Uso Fijaci n de las proteinas separadas electrofor ticamente en la pista de referencia ELP NOTA La soluci n fijadora es espec fica de la t cnica de inmunofijaci n realizada con las plantillas 1 2 4 y 9 IF IMPORTANTE Para evitar cualquier contaminaci n entre los diferentes reactivos es imperativo poner cada tap n sobre el vial correspondiente despu s de usarlo Almacenamiento estabilidad y se ales de deterioro Almacenar a temperatura ambiente o refrigerada Es estable hasta la fecha de caducidad del kit o la que muestra la etiqueta del vial La soluci n fijadora debe estar exenta de precipitados 8 ANTISUEROS PN 4881 y 4882 Preparaci n Los antisueros est n listos para su uso Contienen inmunoglobulinas totales de mam fero anti humanas Cada reactivo tiene un color espec fico para evitar errores al utilizarlos El color es el mismo que el de las etiquetas de los viales Cuando los antisueros presentan una ligera turbidez o precipitados generalmente basta con poner los viales a temperatura ambiente unos 10 minutos antes de su utilizaci n Si la turbidez persiste no perturbar la reacci n inmunol gica Si hay un precipitado insoluble se recomienda centrifugar los antisueros durante 5 minutos a 3000 r p m Utilizaci n Para la in
12. interpretaci n parecidos a los del suero Una prote na monoclonal intacta en la orina se caracteriza por una banda monoclonal detectada con uno de los antisueros anti cadenas pesadas gamma alfa o mu y con cualquiera de los antisueros anti cadenas ligeras kappa o lambda libres y unidas La banda monoclonal detectada normalmente de apariencia definida y localizada debe estar situada en la misma distancia de migraci n que la banda monoclonal sospechosa observada en el carril de referencia ELP Una cadena ligera libre Bence Jones est caracterizada por una banda monoclonal detectada con uno de los antisueros anti cadenas ligeras kappa o lambda No se observa reacci n positiva en ninguno de los carriles de antisueros anti cadenas pesadas gamma alfa o mu 62 HYDRAGEL 1 2 4 amp 9 IF 2012 03 Masque standard Standard mask Interferencias y limitaciones Vea MUESTRAS PARA ANILISIS La presencia de fibrin geno o de fibrina residual puede implicar que aparezca una banda artefactual en todos los carriles la intensidad de la banda puede variar seg n el carril y generalmente es m s intensa en el carril revelado con el antisuero anti lg A La utilizaci n de antisueros distintos a los especificados para la t cnica de inmunofijaci n realizada con la plantilla est ndar puede afectar a la calidad de los resultados Teniendo en cuenta los principios anal ticos de las t cnicas actuales principios de la electroforesis de
13. 00 pul y 200 pul MUESTRAS PARA ANALISIS Extracci n y almacenamiento de las muestras Se recomienda analizar muestras frescas El suero y la orina deben obtenerse de acuerdo con los procedimientos establecidos de uso en los laboratorios cl nicos Refrigere las muestras 2 a 8 C tan pronto como sea posible despu s de su obtenci n durante una semana Para per odos de almacenamiento m s prolongados almacene las muestras congeladas son estables durante un mes al menos Congelar los sueros con azida s dica 0 2 g l mejora la estabilidad del almacenaje Congelar orina con HEPES 0 1 M pH 6 75 y azida s dica 0 2 g l mejora la estabilidad del almacenaje IMPORTANTE No utilizar cido b rico como conservante Las muestras descongeladas pueden dar lugar a ligeras marcas de aplicaci n debidas a la desnaturalizaci n de prote nas o lipoprote nas Preparaci n de las muestras die Suero Diluya 1 muestra para el HYDRAGEL 1 IF 2 4 muestras para el HYDRAGEL IF 2 4 seg n el kit y 9 muestras para el HYDRAGEL 9 IF Diluirlos sueros antesde su aplicaci n para prevenir el efecto prozona consecuencia de elevados niveles de ant geno mezclando de forma homog nea PISTA SUERO pl DILUYENTE pl Pista lg G 20 100 ELP pista de referencia y restantes pistas 30 60 Casos particulares Si la tasa de inmunoglobulinas es superior a 20 g L caso de hipergammaglobulinemia se recomienda aumentar el factor de dilu
14. 5 4 0 25 0 25 4 alfa 15 1 0 12 0 12 4 lambda 15 1 0 12 0 12 5 mu 9 0 0 12 0 12 5 kappa 9 0 0 25 0 25 6 mu 9 1 0 12 0 12 6 lambda 9 1 0 25 0 25 64 HYDRAGEL 1 2 4 amp 9 IF 2012 03 Masque standard Standard mask BIBLIOGRAPHIE BIBLIOGRAPHY Pour des informations compl mentaires sur l interpr tation des profils obtenus par immunofixation voir For additional information on interpretation of immunofixation patterns refer to 1 Le Carrer Didier lectrophor se des Prot ines et Immunofixation Guide d interpr tation Laboratoires SEBIA 1994 Hatier Paris 2 Keren D F High Resolution Electrophoresis and Immunofixation Techniques and Interpretation Butterworth Heinemann Woburn Ma USA 2nd ed 1994 397 pp 238 HYDRAGEL 1 2 4 amp 9 IF 2012 03 Masque standard Standard mask SCH MAS FIGURES Figure 1 Figure 2 Figure 3 Figure 4 Figure 5 Figure 6 239 HYDRAGEL 1 2 4 amp 9 IF 2012 03 Masque standard Standard mask SCH MAS FIGURES Figure 7 Figure 8
15. Almacenar a temperatura ambiente es estable hasta la fecha de caducidad indicada en las etiquetas del vial de Fluidil El Fluidil debe mostrar ausencia de precipitados NOTAS Las pruebas realizadas durante la validaci n de los reactivos muestran que para las diferentes soluciones y usando material adaptado al volumen a reconstituir una variaci n del volumen final de un 5 no tiene ning n efecto adverso en el an lisis El agua destilada o desionizada usada para la reconstituci n de las soluciones debe estar exenta de contaminaci n bacteriana o f ngica use un filtro de 0 22 ym y debe tener una resistividad superior a 10 Megohms x cm EQUIPAMIENTO Y ACCESORIOS NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS T Nm 8 O Sistema HYDRASYS SEBIA HYDRASYS 2 SCAN PN 1200 HYDRASYS 2 PN 1201 HYDRASYS 2 SCAN FOCUSING PN 1202 HYDRASYS 2 FOCUSING PN 1203 HYDRASYS PN 1210 o PN 1211 o HYDRASYS FOCUSING PN 1212 Micropipeteador manual o automatico como el HYDRAPLUS SEBIA PN 1216 HYDRAPLUS 2 SEBIA PN 1217 o ASSIST SEBIA PN 1218 para cargar los aplicadores de muestra de una forma alternativa C mara h meda PN 1270 suministrada con HYDRASYS Kit de recipientes suministrado con HYDRASYS Barra de Guia de la Plantilla SEBIA suministrada con HYDRASYS Kit de Accesorios HYDRASYS IF SEBIA PN 1260 Kit de Accesorios HYDRASYS 9 IF SEBIA PN 1265 Kit de Accesorios HYDRASYS 1 IF 1 BENCE JONES SEBIA PN 1267 Pipetas 10 pl 20 pul 1
16. CI N Asegurarse de apoyar correctamente toda la superficie de la hoja de papel de filtro para conseguir un perfecto contacto entre el gel y el papel Cerrar la tapa del m dulo de migraci n Apretar la tecla START flecha verde situada a la izquierda en el teclado Limpiar la plantilla de aplicaci n con un peque o cepillo por ej de dientes NO UTILIZAR ALCOHOL O DISOLVENTES Verificar que la plantilla se encuentra perfectamente seca antes de ser reutilizada eliminar las peque as gotas de agua con un papel de filtro suave BLOTTING DESCRIPCION DE LOS PASOS AUTOMATIZADOS Blotting a 40 C controlado mediante efecto Peltier durante 3 minutos Suena una se al audible El siguiente mensaje que aparece en pantalla es PAP 4 PAPEL FILTRO GRUESO V SECADO DEL GEL 1 2 3 4 Abrir la tapa del m dulo de migraci n Extraer el papel de filtro dejando el gel en su posici n actual Cerrar la tapa Apretar la tecla START flecha verde situada a la izquierda en el teclado SECADO DESCRIPCION DE LOS PASOS AUTOMATIZADOS Secado a 50 C controlado mediante efecto Peltier durante 6 minutos Un pitido nos indica que debemos levantar la tapa El gel permanecer a 50 C mientras la tapa permanece cerrada NOTA El m dulo de migraci n permanece cerrado mientras se produce el proceso de secado VI PROCESADO DEL GEL 1 2 3 Abrir la tapa Extraer el gel una vez seco para su procesado posterior A
17. L 4 IF MAXI KIT HYDRAGEL 9 IF MAXI KIT 54 INSTRUCCIONES SEBIA Espa ol HYDRAGEL 1 2 4 amp 9 IF 2012 03 Masque standard Standard mask NOTA La soluci n fijadora y los antisueros se comercializan por separado excepto en los MAXI KITS consulte REACTIVOS NECESARIOS NO SUMINISTRADOS Durante el transporte el MAXI KIT puede permanecer a temperatura ambiente entre 15 y 30 C durante 15 d as sin que la calidad del test se vea afectada PARA OBTENER RESULTADOS PTIMOS Los elementos de un mismo kit deben utilizarse conjuntamente y seg n las instrucciones incluidas LEER ATENTAMENTE LAS INSTRUCCIONES 1 GELES DE AGAROSA Preparaci n Los geles de agarosa est n listos para usar Cada gel contiene agarosa tamp n pH 9 2 0 5 componentes inocuos a las concentraciones usadas necesarios para un funcionamiento ptimo Uso Medio de soporte para la electroforesis de proteinas e inmunofijaci n Almacenamiento estabilidad y se ales de deterioro Almacenar los geles horizontalmente en sus recipientes protectores originales a temperatura ambiente 15 a 30 C o refrigerados 2 a 8 C Son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la caja del kit y en sus recipientes protectores La flecha situada en la cara frontal de la caja del kit debe apuntar hacia arriba Evitar su almacenamiento cerca de una ventana o de una fuente de calor Evitar variaciones importantes de temperatura durante su almacenami
18. as necesarios para un funcionamiento ptimo Uso Para la tinci n de los geles con separaci n electrofor tica de prote nas y posterior inmunofijaci n IMPORTANTE El colorante est destinado para la coloraci n de 10 geles Cambie el colorante despu s de su utilizaci n en 10 coloraciones Almacenamiento estabilidad y se ales de deterioro Almacenar ambas soluciones stock y de trabajo del colorante a temperatura ambiente o refrigeradas en contenedores cerrados para evitar la evaporaci n La soluci n stock de colorante es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la caja del kit o en las etiquetas del vial La soluci n de trabajo de colorante es estable 6 meses 6 DILUYENTE Preparaci n El diluyente est listo para usar Contiene tamp n pH 7 5 0 5 azul de bromofenol componentes inocuos a las concentraciones usadas necesarios para un funcionamiento ptimo Uso Diluci n de muestras El azul de bromofenol act a como marcador de la aplici n y migraci n posterior Almacenamiento estabilidad y se ales de deterioro Almacenar a temperatura ambiente o refrigerado Es estable hasta la fecha de caducidad indicada en el kit o la etiqueta del vial El diluyente debe estar exento de precipitados 7 SOLUCION FIJADORA PN 4881 y 4882 Preparaci n El fijador est listo para usar Contiene una soluci n cida pH 2 y componentes inocuos a las concentraciones usadas necesarios para un funcionamiento ptimo Para
19. brir el soporte del gel Colocar el gel seco con la superficie mirando hacia arriba en los orificios de las dos varillas y cerrar el soporte Comprobar que el gel est colocado adecuadamente dentro del soporte Fig 9 Colocar el soporte en el M dulo de Procesado Coloraci n IMPORTANTE Antes de comenzar con el procesado coloraci n comprobar lo siguiente Contenedor de Soluci n de lavado contenido m nimo de 400 ml Contenedor de Colorante 300 ml de colorante Contenedor de Decolorante como m nimo 1 litro Contenedor de Deshechos vac o Los canales no utilizados deber n taparse Seleccionar el programa de coloraci n IF ACID VIOLET o IF AMIDO e iniciar el proceso apretando la tecla START flecha verde situada a la derecha en el teclado Durante todas las secuencias de coloraci n decoloraci n y secado el sistema permanece bloqueado Despu s del enfriamiento de la cubeta una se al sonora bip suena y el sistema se desbloquea la ventilaci n se mantiene hasta la recuperaci n del porta films spie HYDRAGEL 1 2 4 amp 9 IF 2012 03 Masque standard Standard mask NOTAS La temperatura de la placa de migraci n puede descender hasta 20 C mientras permanezca abierta la tapa en menos de 5 minutos En este momento podremos iniciar una nueva migraci n Volver a colocar el portaaplicadores en su ubicaci n original Lavar la placa de migraci n con un trapo suave ligeramente humed
20. ci n de las muestras excepto para el recorrido ELP con el fin de obtener una concentrasci n normal de inmunoglobulinas Si la tasa de inmunoglobulinas es inferior a 5 g L caso de hipogammaglobulinemia se recomienda disminuir el factor de diluci n de las muestras Para la investigaci n de cadenas ligeras libres s ricas o urinarias se recomienda utilizar el programa BENCE JONES Para ello el test podr realizarse con el kit IF y con los antisueros ANTI KAPPA LIBRE SEBIA referencia N 4610 y ANTI LAMBDA LIBRE SEBIA referencia N 4611 o con el kit HYDRAGEL 1 2 6 4 BENCE JONES SEBIA referencias N 4821 4822 6 4824 En caso de b squeda de cadenas libres s ricas diluir la muestra en suero fisiol gico o en diluyente para inmunotijaci n prediluido a 1 4 1 volumen de diluyente 3 vol menes de agua destilada o desmineralizada a 1 10 para los recorridos ELP GAM K y L 1 volumen de muestra 9 vol menes de diluyente prediluido o suero fisiol gico y a 1 3 1 volumen de muestra 2 vol menes de diluyente prediluido o suero fisiol gico para los recorridos revelados con antisueros anti kappa libre y anti lambda libre Si la tasa de inmunoglobulinas es inferior a 5 g L se recomienda diluir menos la muestra por ejemplo a 1 5 para los recorridos ELP GAM K y L y a 1 2 para los recorridos KI y LI 58 HYDRAGEL 1 2 4 amp 9 IF 2012 03 Masque standard Standard mask Despu s de almacenados a 2 to 8 C o
21. de 2 10 bolsas de 2 10 bolsas de 2 80 bolsas de 2 Diluyente del colorante soluci n stock 1 vial de 60 ml Colorante Negro Amido soluci n stock 1 vial de 20 ml Colorante Violeta Acido soluci n stock 1 vial de 75 ml 1 vial de 75 ml 8 viales de 75 ml Diluyente listo para su uso 1 vial de 3 2 ml 1 vial de 32 ml 1 vial de 32 ml 2 viales de 80 ml 3 viales de 80 ml Soluci n Fijadora lista para uso 1 vial de 14 4 ml Inmunoglobulinas totales de mam fero 1 vial de 8 0 ml anti cadenas pesadas gamma listo para usar 1 vial de 10 8 ml Inmunoglobulinas totales de mam fero 1 vial de 8 0 ml anti cadenas pesadas alfa listo para usar 1 vial de 10 8 ml Inmunoglobulinas totales de mam fero 1 vial de 8 0 ml anti cadenas pesadas mu listo para usar 1 vial de 10 8 ml Inmunoglobulinas totales de mam fero anti cadenas 1 vial de 8 0 ml ligeras kappa libres y ligadas listo para usar 1 vial de 10 8 ml Inmunoglobulinas totales de mam fero anti cadenas 1 vial de 8 0 ml ligeras lambda libres y ligadas listo para usar 1 vial de 10 8 ml Applicadores listos para su uso 1 caja de 10 2 cajas de 10 2 cajas de 10 16 cajas de 10 3 cajas de 10 24 cajas de 10 Papeles de Filtro finos 1 paquete de 10 1 paquete de 10 1 paquete de 10 8 paquetes de 10 Papeles de Filtro Peines 1 caja de 10 2 cajas de 10 2 cajas de 10 16 cajas de 10 3 cajas de 10 24 cajas de 10 Papeles de Filtro gruesos 1 paquete de 10 1 paquete de 10 1 paquete de 10 8 paquetes de 10 HYDRAGE
22. denas ligeras Casos especiales Cuando se observa una banda monoclonal en la electroforesis pista ELP mas no se confirma mediante inmunofijaci n debe sospecharse la presencia de fibrin geno plasma como muestra Cuando se aprecia una nica banda en todas las pistas podemos pensar en la presencia de una crioglobulina o una Ig M polimerizada Despolimerizar con un agente reductor y repetir el procedimiento ver Muestras para an lisis En algunos casos de gammapat as de Ig A el antisuero anti cadenas ligeras puede presentar baja afinidad por la inmunoglobulina monoclonal lo que dificulta su detecci n En ese caso se aconseja realizar la inmunofijaci n con el programa BENCE JONES en el que la reacci n est amplificada debido a un tiempo de incubaci n con el antisuero m s largo vea las instrucciones de uso de los kits HYDRAGEL BENCE JONES para saber c mo diluir los sueros En caso de fondo policlonal importante se aconseja aumentar la diluci n de la muestra en los carriles de antisueros especialmente en el carril lg G HYDRAGEL 9 IF En los casos de gammapat as oligoclonales se recomienda realizar las inmunofijaciones usando las t cnicas HYDRAGEL 1 2 4 IF para obtener una mejor resoluci n en la zona gamma ya que la zona de las gammaglobulinas es m s alargada y facilita la visualizaci n de bandas m ltiples Orina concentrada Al interpretar los patrones de inmunofijaci n de la orina se aplican conceptos de
23. ecido VII PROCESADO DEL GEL FINALIZACION DEL PROCEDIMIENTO 1 Retirar el soorte del compartimento abrirlo y extraer el gel ya seco 2 Si procede limpiar el reverso del gel soporte pl stico con un trapo seco y suave NOTA En los geles con varias filas de muestras 2 6 3 las longitudes de migraci n pueden ser ligeramente diferentes sin ninguna repercusi n en los resultados CONTROL DE CALIDAD Se recomienda analizar un suero control como el Control IT IF SEBIA referencia n 4788 despu s de cada cambio de lote de uno de los reactivos RESULTADOS Interpretacion 1 Suero Ausencia de componentes monoclonales Un suero normal muestra una tinci n tenue y difusa de las inmunoglobulinas policlonales en todas las pistas Una hipergammaglobulinemia se caracteriza por una tinci n fuerte y difusa en la zona de las gamma sin presentar bandas claramente definidas Presencia de componentes monoclonales La presencia de una proteina monoclonal gammapat a se caracteriza por una banda monoclonal en las pistas gamma alfa o mu y en la pista kappa o lambda indistintamente La banda monoclonal detectada normalmente bien definida y focalizada deber estar posicionada a la misma altura que la previsible banda monoclonal localizada en la pista de referencia ELP Si no hay reacci n con uno de los antisueros anti cadenas pesadas aplicados y hay reacci n con uno de los antisueros anti cadenas ligeras eso puede significar
24. ento NO CONGELAR Desechar cuando i haya cristales o precipitados en la superficie del gel o su textura sea muy blanda consecuencias de la congelaci n del gel ii se observe crecimiento bacteriano o f ngico iii se videncie una cantidad excesiva de l quido en el recipiente del gel consecuencia de la exudaci n del tamp n debida a un almacenamiento inadecuado 2 ESPONJAS TAMPONADAS Preparaci n Las esponjas tamponadas est n listas para usar Cada esponja tamponada contiene tamp n pH 9 1 0 5 componentes inocuos a las concentraciones usadas necesarios para un funcionamiento ptimo Uso Las esponjas tamponadas funcionan como reservorio de tamp n de electroforesis y aseguran el contacto entre el gel y los electrodos Almacenamiento estabilidad y se ales de deterioro Las esponjas tamponadas pueden conservarse a temperatura ambiente o en la nevera Deben ser conservadas horizontalmente en su bolsa protectora la flecha situada en la parte frontal del kit debe apuntar hacia arriba Son estables hasta la techa de caducidad indicada en el kit o en su bolsa protectora NO LAS CONGELE Deseche las esponjas tamponadas si la bolsa est abierta o si las esponjas est n secas 3 DILUYENTE DEL COLORANTE PN 4808 Preparaci n El diluyente del colorante concentrado debe ser usado como se indica en el p rrafo COLORANTE NEGRO AMIDO Contiene una soluci n cida pH 2 Uso Para la preparaci n del colorante negro amido
25. eros de los pocillos hacia arriba Fig 1 Aplique 10 pl de suero diluido adecuadamente o de orina concentrada en los pocillos del aplicador Cargue cada aplicador en menos de 2 minutos CARRIL MIGRACION IMMUNOFIJACION POCILLOS DE APLICACI N ELP G A M K L HYDRAGEL 1 IF 1 2 3 4 5 6 HYDRAGEL IF 2 4 MUESTRA No 10 3 2 3 5 6 7 MUESTRA No 2 4 9 10 11 12 13 14 HYDRAGEL 9 IF MUESTRA No 1 407 1 2 3 4 5 6 MUESTRA No 2 508 7 8 9 10 T 12 MUESTRANo3 609 13 14 15 16 17 18 NOTA Los pocillos no 1 8 y 15 no se utilizan en esta prueba por lo que pueden ser se alados con un rotulador para evitar llenarlos con muestra por error Colocar cada aplicador en la c mara h meda con el peine hacia arriba asirlos por el pl stico protector del peine Ver la hoja de instrucciones de la c mara h meda para m s detalles Dejar difundir las muestras durante 5 min antes de su aplicaci n Para un uso posterior m s de 8 horas mantener la c mara h meda en el refrigerador 3 Abrir la puerta del M dulo de migraci n y elevar los soportes de los electrodos y el aplicador ATENCI N Nunca cerrar la puerta cuando los soportes est n elevados 4 Seleccione en el men el programa de migraci n 1 IF ME MD para el HYDRAGEL 1 IF 2 4 IF ME MD para el HYDRAGEL IF 2 4 9 IF ME para el HYDRAGEL 9 IF 5 Extraer las esponjas tamponadas de su envoltorio asirlas por los extremo
26. es papeles de filtro finos deben conservarse en un lugar seco a temperatura ambiente o en la nevera 11 PAPELES DE FILTRO PEINES Uso Papeles de filtro precortados de un solo uso para eliminar el exceso de sol Fijadora y antisueros del gel despu s de haber realizado la inmunofijaci n 12 PAPELES DE FILTRO GRUESOS Uso Papeles de filtro gruesos de un solo uso para la eliminaci n de prote nas no precipitadas del gel despu s de haber realizado la inmunofijaci n Conservaci n Los papeles de filtro gruesos deben conservarse en un lugar seco a temperatura ambiente o en la nevera REACTIVOS NECESARIOS NO SUMINISTRADOS ATENCI N Ver las fichas de datos de seguridad 1 CAJA DE ANTISUEROS Y SOLUCI N FIJADORA PARA IF para los kits 4801 4802 4804 4808 y 4809 La caja de Antisueros y Soluci n Fijadora para inmunofijaci n IF Plantilla est ndar SEBIA referencia N 4815 contiene cinco viales de antisueros anti lg G anti Ig A anti lg M anti Kappa cadenas ligeras libres y ligadas y anti Lambda cadenas ligeras libres y ligadas de 1 ml cada uno y un vial de soluci n fijadora de 2 5 ml espec ficos de la t cnica de inmunofijaci n realizada con las plantillas 1 2 4 y 9 IF SEBIA 1 1 ANTISUEROS Ver el p rrafo 8 1 2 SOLUCI N FIJADORA Ver el p rrafo 7 2 SOLUCI N DECOLORANTE Preparaci n Cada vial de Soluci n Decolorante stock SEBIA referencia N 4540 10 viales de 100 ml se diluye hasta 100 litros c
27. etectable IMPORTANTE Algunas orinas presentan un alto contenido de sales Esto puede provocar que el gel se deforme durante la migraci n y por lo tanto distorsi n de los perfiles electrofor ticos Para evitar este problema es necesario eliminar las sales con una di lisis En caso de orinas turbias concentradas o no se recomienda eliminar las part culas centrifugando las muestras durante 10 minutos a 3000 rpm o por filtraci n en un filtro de 0 45 nm para obtener una buena difusi n en los aplicadores Se puede aumentar la sensibilidad en el an lisis de orinas incrementando la aplicaci n de muestra y el tiempo de incubaci n de los antisueros utilizando el programa de migraci n BENCE JONES Entonces el l mite de detecci n corresponde a 10 50 mg l de prote na monoclonal En esta t cnica las orinas pueden analizarse sin concentrar o concentradas para mejorar la sensibilidad NOTA No se recomienda intentar incrementar la sensibilidad de la prueba incrementando el grado de concentraci n La utilizaci n de orina demasiado concentrada a menudo tiene como resultado la formaci n de bandas falsas y otros artefactos Tales muestras pueden tener que ser analizadas de nuevo a concentraciones menores Caso particular Algunas cadenas ligeras tienden a polimerizarse y a formar agregados y la orina presenta entonces una banda de aspecto monoclonal en todos los carriles Trate las muestras como sigue mezcle 100 pl de orina y 5 ul de
28. fijadora 3 Las prote nas solubles no precipitadas se eliminan del gel mediante un blotting y un lavado La precipitaci n del complejo ant geno anticuerpo queda ifijado en la matriz del gel 4 Los precipitados y las proteinas fijadas son visualizados mediante tinci n Para detectar e identificar el componente monoclonal sospechoso la muestra es sometida a electroforesis en seis carriles de forma simult nea Despu s de la electroforesis un carril sirve de referencia proporcionando un patr n electrofor tico completo de las prote nas de la muestra Los cinco carriles restantes permiten la caracterizaci n del componente monoclonal a partir de su reacci n o de la ausencia de la misma con los antisueros para cadenas pesadas gamma Ig G alfa Ig A y mu Ig M y para las cadenas ligeras kappa y lambda libres y unidas Las bandas inmunofijadas se comparan entonces con las bandas sospechosas del patr n de referencia la banda correspondiente deber a tener la misma posici n de migraci n REACTIVOS Y MATERIALES SUMINISTRADOS EN LOS KITS HYDRAGEL 1 2 4 E 9 IF ATENCI N Ver las fichas de datos de seguridad KIT HYDRAGEL 1 IF PN 4801 KIT HYDRAGEL 2 IF PN 4802 KITS HYDRAGEL 4 IF PN 4804 PN 4808 PN 4881 KITS HYDRAGEL 9 IF PN 4809 PN 4882 Geles de Agarosa listos para su uso 10 geles 10 geles 10 geles 80 geles Esponjas tamponades listas para su uso 10 bolsas
29. munoprecipitaci n de las prote nas separadas mediante electroforesis NOTA Los antisueros son espec ficos de la t cnica de inmunofijaci n realizada con las plantillas 1 2 4 y 9 IF Los antisueros pueden ser de or genes animales diferentes Es por tanto imperativo no mezclar dos viales diferentes de antisueros incluso si son de la misma especificidad y SIEMPRE hay que cambiar la punta de la pipeta al cambiar de vial IMPORTANTE Para evitar cualquier contaminaci n entre los diferentes reactivos es imperativo poner cada tap n sobre el vial correspondiente despu s de usarlo Conservaci n estabilidad y se ales de deterioro Los antisueros deben ser conservados en nevera entre 2 y 8 C Son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la caja del kit o en las etiquetas de los viales de antisuero NOTA Durante el transporte los antisueros pueden permanecer a temperatura ambiente entre 15 y 30 C durante 15 d as sin que esto afecte a la calidad del test 56 HYDRAGEL 1 2 4 amp 9 IF 2012 03 Masque standard Standard mask 9 APLICADORES Uso Aplicadores precortados de un solo uso para la aplicaci n de la muestra Almacenamiento Almacenar los aplicadores en un lugar seco a temperatura ambiente o refrigerados 10 PAPELES DE FILTRO FINOS Uso Papeles finos absorbentes precortados de un solo uso para secar el exceso de humedad de la superficie del gel antes de la aplicaci n de la muestra Conservaci n L
30. on agua destilada o desionizada Es conveniente diluir s lo 5 ml de la soluci n stock hasta 5 litros volumen del contenedor de la soluci n decolorante Despu s de la diluci n la soluci n decolorante contiene una soluci n cida pH 2 Uso Para la destinci n eliminaci n del exceso de tinci n y de fondo de los geles Para el lavado del compartimento de coloraci n Para neutralizar la acidez del decolorante introduzca dentro del contenedor de desechos vac o 15 ml de sosa al 50 soluci n comercial Almacenamiento estabilidad y se ales de deterioro Almacenar la soluci n decolorante stock a temperatura ambiente o refrigerada La soluci n stock de decolorante es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la caja del kit o en las etiquetas del vial NO CONGELAR La soluci n decolorante de trabajo es estable una semana a temperatura ambiente en un contenedor cerrado No a adir azida s dica Desechar la soluci n decolorante de trabajo si cambia su apariencia p ej si se vuelve turbia debido a contaminaci n bacteriana Para evitar la proliferaci n microbiana en la soluci n decolorante diluida que se vaya a almacenar durante m s de una semana a ada 5 yL dL de ProClin 300 El decolorante diluido al que se ha a adido ProClin es estable en un contenedor cerrado a temperatura ambiente o en la nevera hasta la fecha de caducidad indicada en el kit o en la etiqueta del vial de decolorante 3 SOLUCI N DE LAVADO HYDRASYS
31. ontiene soluci n cida pH 2 negro amido etil n glicol componentes inocuos a las concentraciones usadas necesarios para un funcionamiento ptimo Uso Para la coloraci n de los geles despu s de la separaci n electrofor tica de las prote nas IMPORTANTE El colorante est destinado para colorear s lo 10 geles Cambie el colorante despu s de 10 usos DADA 55 HYDRAGEL 1 2 4 8 9 IF 2012 03 Masque standard Standard mask Conservaci n estabilidad y se ales de deterioro Las soluciones de colorante concentrada y diluida pueden conservarse a temperatura ambiente o en la nevera en contenedores cerrados para evitar la evaporaci n La soluci n concentrada es estable hasta la fecha de caducidad indicada en el kit o en la etiqueta del vial de colorante La soluci n diluida es estable durante 1 mes El per odo de estabilidad puede prolongarse a 3 meses si la soluci n diluida se conserva en nevera Es imperativo colocar el contenedor cerrado en nevera inmediatamente despu s de cada uso No almacene la soluci n de colorante diluida cerca de una fuente de calor 5 COLORANTE VIOLETA ACIDO PN 4801 4802 4804 4809 4881 y 4882 Preparaci n El vial del colorante violeta cido concentrado debe completarse hasta 300 mL con agua destilada o desionizada Despu s de la diluci n la soluci n colorante contiene soluci n cida pH 2 violeta cido etil n glicol componentes inocuos a las concentraciones usad
32. porte de los aplicadores HYDRAGEL 1 IF HYDRAGEL IF 2 4 2 muestras posici n N 6 HYDRAGEL IF 2 4 4 muestras posiciones N 3 y 9 HYDRAGEL 9 IF posiciones N 2 6 y 10 IMPORTANTE Los n meros impresos en el los aplicador es deben quedar de cara al usuario Fig 4 9 Cerrar la puerta del m dulo de migraci n 10 Iniciar el procedimiento inmediatamente presionando la tecla START flecha verde en el lado izquierdo del teclado IMPORTANTE Asegurarse que la toma de aire en el lado derecho del instrumento no est bloqueada MIGRACI N DESCRIPCI N DE LAS ETAPAS AUTOM TICAS Los dos soportes descienden con lo cual esponjas tamponadas y aplicador es entran en contacto con la superficie del gel El soporte del aplicador se eleva Migraci n a 10 W constantes para el HYDRAGEL 1 IF y a 20 W constantes para el HYDRAGEL IF 2 4 hasta que se hayan acumulado 42 Vh durante unos 9 minutos y a 20 W constantes hasta que se hayan acumulado 31 Vh durante unos 7 minutos para el HYDRAGEL 9 IF a 20 C siendo la temperatura controlada por efecto Peltier El soporte de los electrodos se eleva para desconectar los electrodos Un pitido audible se produce al finalizar la migraci n En pantalla aparece el siguiente mensaje Y AS Y ANTISUEROS NOTA El m dulo de migraci n permanece con la puerta cerrada durante los pasos de migraci n correspondientes Il IMMUNOFIJACION 1 Abrir la tapa del m dulo de migraci n
33. rando los patrones t picos y como se esperaba para el tipo de muestra probado La inmunofijaci n mostr repetidamente las bandas monoclonales esperadas en las tres muestras patol gicas Reproducibilidad interserial La reproducibilidad interserial se demostr con nueve muestras de suero patol gicas Las muestras se analizaron en tres lotes de geles HYDRAGEL 9 IF utilizando el procedimiento de tinci n con violeta cido Todas las muestras examinadas proporcionaron resultados id nticos en los tres lotes mostrando los patrones t picos y como se esperaba para el tipo de muestra probado Exactitud Se analizaron cincuenta y ocho 58 muestras diferentes usando el kit HYDRAGEL 9 IF y otro sistema comercial de inmunofijaci n en geles de agarosa Los geles HYDRAGEL 9 IF se probaron con el procedimiento de tinci n con violeta cido Se detectaron bandas id nticas en todas las muestras patol gicas con cada sistema o procedimiento Sensibilidad Se prepararon diluciones seriales con seis muestras de suero patol gicas que conten an componentes monoclonales 63 Los resultados se resumen abajo HYDRAGEL 1 2 4 amp 9 IF 2012 03 Masque standard Standard mask COMPONENTE MONOCLONAL L MITE DE DETECCI N g l MUESTRA No TIPO CONC g l HYDRAGEL 9 IF TEST COMPARADO 1 gamma 55 0 0 25 0 25 1 kappa 55 0 0 12 0 12 2 gamma 25 1 0 25 0 25 D lambda 25 1 0 06 0 06 3 alfa 15 4 0 25 0 25 3 kappa 1
34. ron resultados id nticos en todos los geles mostrando los patrones t picos y como se esperaba para el tipo de muestra probado Exactitud Se analizaron treinta y dos 32 muestras patol gicas diferentes usando geles HYDRAGEL IF 2 4 y otro sistema comercial de inmunofijaci n en geles de agarosa Los geles HYDRAGEL IF 2 4 se probaron con el procedimiento de tinci n con violeta cido Se detectaron bandas id nticas en todas las muestras patol gicas con cada uno de los dos sistemas Sensibilidad Se prepararon diluciones seriales con 3 muestras patol gicas que conten an componentes monoclonales Se usaron los procedimientos de tinci n con violeta cido y negro amido Los resultados se resumen abajo COMPONENTE MONOCLONAL LIMITE DE DETECCI N 9 1 ERA TIPO CONC 9 1 HYDRAGEL 4 IF HYDRAGEL 4 IF NEGRO AMIDO VIOLETA CIDO 1 al a 5 3 0 25 0 25 1 kappa 5 3 0 25 0 25 2 mu 10 9 0 12 0 12 2 lambda 10 9 0 25 0 25 3 gamma 17 2 0 50 0 25 3 lambda 17 2 0 12 0 06 HYDRAGEL 9 IF Reproducibilidad intraserial La reproducibilidad intraserial se demostr utilizando tres muestras de suero patol gicas con un nivel elevado medio y bajo de componente monoclonal respectivamente Cada muestra se analiz en dos lotes de geles HYDRAGEL 9 IF utilizando el procedimiento de tinci n con violeta cido Todas las muestras examinadas proporcionaron resultados id nticos en los dos lotes most
35. s de pl stico Engarzar los extremos de pl stico agujereados con las puntas met licas del soporte de los electrodos los extremos de pl stico deben quedar encarados al soporte Fig 2 59 HYDRAGEL 1 2 4 amp 9 IF 2012 03 Masque standard Standard mask 6 Abrir el contenedor del HYDRAGEL Extienda un papel de filtro fino de manera r pida y uniforme sobre la superficie del gel para absorber el exceso de l quido Retire el papel inmediatamente ADVERTENCIA Para evitar que se deshidrate no deje que el papel de filtro contacte con el gel durante mucho tiempo Dispense 120 pl de agua destilada o desionizada para el HYDRAGEL 1 IF 6 200 pl para el HYDRAGEL IF 2 4 e HYDRAGEL 9 IF en el tercio inferior del cuadro serigrafiado en la placa del m dulo de migraci n Colocar el gel la cara de agarosa hacia arriba con su lado inferior en contacto con el tope inferior del marco serigrafiado Fig 3 Aplicar el gel en la superficie haci ndolo contactar con el agua Fig 3 Asegurarse que no queden burbujas que el agua est extendida bajo toda la superficie del gel y y que ste est alineado con el marco serigrafiado 7 Devolver ambos soportes a su posici n original Las esponjas tamponadas no deben tocar el gel NO FORZAR LOS SOPORTES HACIA ABAJO 8 Extraer el los aplicador es de la c mara h meda Asirlo s po el pl stico protector Romper el pl stico protector precortado del peine Ponga el los aplicador es en el so
36. zona resoluci n y sensibilidad no puede darse ninguna garant a respecto a la detecci n de la totalidad de todos los componente monoclonales Resoluci n de problemas Avisar al Servicio de Atenci n T cnica del distribuidor cuando el test no funcione pese a haber seguido cuidadosamente las instrucciones para la preparaci n y almacenaje de los materiales y para el procedimiento a seguir Las hojas de seguridad de los diferentes reactivos del kit as como las informaciones relativas a la eliminaci n de los desechos est n disponibles en el Servicio de Asistencia T cnica de su distribuidor CARACTERISTICAS TECNICAS HYDRAGEL 4 IF Reproducibilidad intraserial y especificidad La reproducibilidad intraserial se demostr con tres muestras patol gicas respectivamente con un componente monoclonal de nivel elevado y uno de nivel bajo y con una muestra con dos componentes monoclonales Cada muestra se analiz en dos lotes de geles HYDRAGEL IF 2 4 utilizando el procedimiento de tinci n con violeta cido Todas las muestras examinadas proporcionaron resultados id nticos en los dos lotes mostrando los patrones t picos y como se esperaba para el tipo de muestra probado Reproducibilidad interserial y especificidad La reproducibilidad interserial se demostr con cuatro muestras patol gicas en 20 geles HYDRAGEL IF 2 4 de dos lotes diferentes utilizando el procedimiento de tinci n con violeta cido Todas las muestras examinadas proporciona
Download Pdf Manuals
Related Search