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1 - GE Healthcare Life Sciences

1. Pasadores gu a para la tarjeta de gel y la tarjeta PVDF Pistas del rodillo para los pasadores de rodillo Parte superior tapa blanca Pasadores del rodillo encajan en las pistas de rodillos para ensamblar las tapas Rodillo Manija Orificios para los pestillos Amersham WB PVDF card Tarjeta En la fase de transferencia las prote nas se transfieren desde el gel al rea de transferencia de la tarjeta PVDF La tarjeta PVDF es una membrana PVDF de baja fluo rescencia La siguiente ilustraci n muestra las diferentes partes de la tarjeta PVDF y el paquete nico de la tarjeta PDVF Amersham W s PVDF card td aik torte Lotm 001104 Identity no 0000001 E A EAN 80 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 3 Descripci n del sistema 3 7 Accesorios y consumibles para los pasos de la transferencia Western 3 7 1 Accesorios y consumibles para transferencia La tabla siguiente describe las diferentes partes de la tarjeta PVDF y el paquete nico de la tarjeta PDVF Descripci n Orificios gu a Nota Los orificios gu a ayudan a colocar correctamente la tarjeta en la bandeja de transferencia en la c mara de sondeo en el soporte de secado y en el cargador del Elpho scan Superficie de escritura para que haga sus propias anotaciones Nota Utilice siempre un l piz para escribir las anotaciones La anotaci n tambi n puede intr
2. Amersham WB buffer strip holder soporte de tiras de soluci n amortigua dora Amersham WB transfer holder recipiente de transferencia Amersham WB sponge esponja Amersham WB membrane adapter adaptador de membrana Amersham WB drying holder Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE soporte de secado 231 ndice ndice 232 A Adaptador de la membrana Limpiar 197 Adaptador de membrana Colocar en la placa de la tarjeta 188 Descripci n 86 Limpiar 191 An lisis Preparaciones antes de 187 Procedimientos posterio res 191 An lisis de la tarjeta PVDF 187 Anticuerpo secundario Conservaci n de anticuer pos liofilizados 64 Conservaci n de anticuer pos reconstituidos 64 Descripci n 83 Tintes de cianina conjuga dos 83 Avisos de seguridad 9 B Bandeja de transferencia Descripci n 78 Limpiar 170 C Cabezal de bomba Sustituir cabezal de bomba de sondeo o de transferen cia 210 Cargar muestras 141 CE conformidad 10 Compartimento de anticuerpos Conectar soluciones de anti cuerpos 174 Descripci n 53 Compartimento de secado Descripci n 52 Limpiar 200 Compartimento de servicio Descripci n 54 Sustituir cabezales de bom bas 210 Sustituir el filtro de aire 207 Compartimento de sondeo Descripci n 51 Composici n de la tarjeta de gel 71 Comprobar la conexi n del instrumento 115 Consumibles Co
3. e da os en otras piezas que pueden afectar el funcionamiento ADVERTENCIA Peligro de descarga el ctrica Todas las reparaciones se confiar n al personal de servicio autorizado por GE No abra ninguna cubierta ni cambie piezas a menos que se indique lo contrario en la docu mentaci n del usuario ADVERTENCIA Desconecte la alimentaci n Recuerde siempre desconectar la corriente el ctrica del instrumento antes de reemplazar cualquier componente a menos que se indique lo contrario en la documen taci n del usuario Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 193 6 Mantenimiento ADVERTENCIA Cuando trabaje con qu micos peligrosos evite los derrames y use gafas de protecci n y otros equipos de protecci n personal ade cuados Por ejemplo el NaOH es corrosivo y por tanto peligroso para la salud ADVERTENCIA Solo se pueden utilizar piezas de repuesto aprobadas o suministra das por GE para realizar el mantenimiento o la reparaci n del sis tema ADVERTENCIA Cuando reemplace un cable de alimentaci n da ado utilice un cable de repuesto del mismo tipo y de las mismas dimensiones y en conformidad con todos los requisitos vigentes del c digo local sobre electricidad as como aprobado por GE ADVERTENCIA Antes de cambiar los fusibles de la red el ctrica desconecte siempre la corriente principal Para tener protecci n continua
4. ndice Agua ultra pura limpie za 147 172 Lavado de la soluci n amortiguadora sondeo 172 Lavado final de la soluci n amortiguadora sondeo 172 Soluci n amortiguadora de transferencia 147 Soluci n de anticuerpos sondeo 172 Soluci n de bloqueo 172 Sondeo Comenzar y monitori zar 180 Conectar soluciones de anti cuerpos 174 Conectar soluciones de sondeo 173 Limpiar recorrido del flu jo 183 198 Limpieza de mantenimiento del recorrido del flujo 203 Llenar previamente la c ma ra de sondeo 177 Prepare el sondeo y las solu ciones de anticuerpos 172 Principio b sico del proceso de sondeo 59 Recorrido del flujo de l qui do 58 Sustituir cabezal de bomba de sondeo 210 Soporte del filtro de entrada Descripci n 87 Soporte de secado 85 Limpiar 191 198 Soporte de tiras de soluci n amortiguadora Colocar en la unidad Elpho amp scan 137 Descripci n 74 Limpiar 145 197 Soporte de tubo Acoplar 106 Descripci n 88 7 Tarjeta de gel Colocar sobre la placa de la tarjeta 139 235 ndice 236 Descripci n general del desmontaje 157 Resoluci n de la separaci n de prote nas 71 Retire las pel culas protecto ras antes de la electrofore sis 138 Seleccionar tipo 125 Suelte el molde de gel de su soporte 158 Tarjeta PVDF Colocar en la c mara de sondeo 179 Colocar en unidad Elpho scan 187 Comenzar y monitorizar el an lisis 189 Preparar 152 Tinte de cianin
5. specify Equipment type Product No Serial No Name Company or j institution Position or job title Date YYYY MM DD Signed GE and GE monogram are trademarks of General Electric Company To recelve a return authorization number or service number GE Healthcare Bio Sciences Corp 800 Centennial Avenue P O Box 1327 Piscataway please call local technical support or customer service NJ 08855 1327 US O 2010 14 General Electric Company All rights reserved First published April 2010 DOC1149544 28 9800 27 AC 05 2014 230 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 7 Informaci n de referencia 7 4 Traducciones de accesorios y consumibles 7 4 Traducciones de accesorios y consumibles Nombre del producto en ingl s Amersham WB labeling buffer Traducci n marcaje de la soluci n amortiguadora Amersham WB loading buffer carga de la soluci n amortiguadora Amersham WB molecular weight markers marcadores de peso molecular Amersham WB gel card 14 8 18 tarjeta de gel Amersham WB gel card 14 13 5 Amersham WB buffer strip tarjeta de gel tira de soluci n amortiguadora Amersham WB PVDF card Tarjeta PVDF Amersham WB transfer paper papel de transferencia Amersham WB goat anti rabbit Cy3 Cy5 cabra anti conejo Cy3 Cy5 Amersham WB goat anti mouse Cy3 Cy5 cabra anti rat n Cy3 Cy5 Amersham WB paper comb peine de papel
6. Cuando se hayan cargado todas las muestras pulse el bot n de expulsi n Resultado el cargador se in serta en la unidad Elpho amp scan Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 141 5 Realizar un experimento 5 6 Realizar electroforesis de prote nas 5 6 2 Realizar la electroforesis 5 6 2 Realizar la electroforesis Introducci n En esta secci n se describe c mo comenzar y monitorizar la electroforesis Comenzar y monitorizar la electroforesis y el an lisis de gel Paso Ilustraci n de pasos Acciones del operador Gel Cards Gel card Position A Position B ID Note Electrophoresis Protocol Voltage limit 600 250 600 V Current limit 50 20 50 mA Pause for sample well cleanup after 5 minutes Stop electrophoresis on front detection Estimated time 42 minutes D Stop electrophoresis on time Gel Scanning Protocol j Scan gel automatically after electrophoresis Scanning sensitivity 0 Automatic sensitivity D Manual sensitivity En el paso del flujo de trabajo ELECTROPHORE SIS amp GEL SCANNING use la configuraci n pre determinada para elec troforesis y an lisis de tarjetas de gel como se muestra en la captura de pantalla Opcional Seleccione Pause for sample well cleanup after 5 minutes si se va a usar el peine de papel Para obtener m s informaci n consul te Secci n 3 6 Accesorios y consumibles para elec tr
7. Introducci n El Amersham WB membrane adapter adaptador de membrana orienta y fija la tarjeta PVDF en la posici n correcta para lograr el mejor an lisis y detecci n posibles en la unidad Elpho amp scan Ilustraci n del adaptador de la membrana Las ilustraciones que aparecen a continuaci n muestran el adaptador de la membrana cuando est cerrado izquierda y cuando est abierto derecha 86 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 3 Descripci n del sistema 3 8 Otros accesorios 38 Otros accesorios Lector de indicador de matriz El lector del indicador de matriz se usa para introducir en el software la informaci n de la tarjeta de gel y de la tarjeta PVDF c digo de producto ID y n mero de lote escanean do los indicadores de matriz de datos que est n en la tarjeta de gel y en la etiqueta del paquete nico de la tarjeta PVDF Debe pedirse por separado consulte Informaci n sobre pedidos en Amersham WB system User Manual La ilustraci n que aparece a continuaci n muestra el lector del indicador de matriz Soporte del filtro de entrada Los soportes de filtros de entrada con los filtros de entrada est n acoplados a los tubos de entrada que se insertan en las botellas que se encuentran en el portabotellas Por el filtro de entrada se filtran las part culas y el soporte del filtro de entrada es un peso que mantiene el tubo en posici n en la parte inferior de las botel
8. Los soportes de las tiras de soluci n amortiguadora sirven para sujetarlas en posici n durante el ciclo de electroforesis Los soportes de tiras de soluci n amortiguadora tienen electrodos integrados permitiendo as que haya contacto entre el electrodo y la tira de soluci n amortiguadora y que exista una corriente el ctrica para realizar el ciclo Las tiras de soluci n amortiguadora se cargan en los soportes antes de comenzar el ciclo y se eliminan despu s del ciclo La forma del soporte gu a al usuario en la colocaci n de tiras de soluci n amortiguadora en los soportes y al colocar los soportes en la unidad Elpho amp scan Para obtener m s informaci n consulte Preparaciones antes de comenzar la electrofo resis en la p gina 135 Soluci n amortiguadora utilizada en las tiras de soluci n amortiguadora La soluci n amortiguadora que se utiliza en las tiras de soluci n amortiguadora es de tris tricina Ilustraci n de las tiras de soluci n amortiguadora La ilustraci n siguiente muestra una tira de soluci n amortiguadora 74 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 3 Descripci n del sistema 3 6 Accesorios y consumibles para electroforesis 3 6 3 Amersham WB buffer strip y Amersham WB buffer strip holder Ilustraci n de los soportes de tiras de soluci n amortiguadora La ilustraci n siguiente muestra un soporte de tiras de soluci n amortiguadora Amersham WB system
9. Nota Debe insertar siempre cuatro tubos vac os nuevos 3 Limpie los tubos de sondeo P Block P Wash y P Final Wash usando un pa o mojado y desplace los tubos hasta la botella de agua ultra pura que contiene los tubos P Water En el cuadro de di logo compruebe la cantidad de agua ultra pura que necesita para la limpieza aseg rese de que la botella contenga al menos esa cantidad de agua 4 Haga clic en Start clean en el cuadro de di logo Probing completed clean probing system Se inicia la limpieza que durar aproximadamente 13 minutes Nota Se puede comenzar el secado de las membranas mientras se limpia el reco rrido del flujo de sondeo 5 Una vez finalizada la limpieza deseche la soluci n en la botella de agua y deseche el agua residual en los tubos de soluci n de anticuerpos Coloque los tubos en una botella vac a 184 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 5 Realizar un experimento 5 8 Realizar sondeo y secado 5 8 4 Realizar el secado 5 8 4 Realizar el secado Introducci n En esta secci n se describe c mo realizar el secado de las tarjetas PDVF Al secar la tarjeta PVDF esta tendr un fondo uniforme y poco brillante y se ales m s intensas Realizar el secado Paso Ilustraci n de pasos Acciones del operador Aseg rese de que los soportes de secado con las tarjetas PVDF se han colocado en el compartimiento de secado en las posiciones correctas por eje
10. 1 Open the elpho amp scan loader 2 Apply the Paper comb in the sample wells for 5 seconds 3 Close the elpho amp scan loader Press the button below to continue the electrophoresis run Continue run Si se ha seleccionado Pause for sample well cleanup af ter 5 minutes siga las ins trucciones que se muestran a continuaci n 1 Abra el cargador 2 Coloque el peine en los pocillos de muestras y mant ngalo ah durante 5 segundos 3 Cierre el cargador y con tin e el ciclo Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 143 5 Realizar un experimento 5 6 Realizar electroforesis de prote nas 5 6 3 Procedimientos despu s de la electroforesis y del an lisis de la tarjeta de gel 5 6 3 Procedimientos despu s de la electroforesis y del an lisis de la tarjeta de gel Introducci n En esta secci n se describe c mo retirar la tarjeta de gel y limpiar la unidad Elpho scan despu s de la electroforesis Retire las tarjetas de gel ADVERTENCIA Despu s de la electroforesis o despu s de la transferencia cuando se ha abierto el s ndwich de transferencia y se ha colocado la tarjeta PVDF en el compartimento de sondeo elimine el gel de forma segura Lea la ficha de datos de seguridad SDS MSDS de la tarjeta de gel para ver las instrucciones de seguridad con respec to al gel y su eliminaci n Nota Paso El ciclo de transferencia debe iniciarse
11. 5 2 Inicie el Amersham WB analyzer 5 2 Inicie el Amersham WB analyzer Introducci n En esta secci n se describe c mo poner en marcha las unidades Amersham WB analyzer Es posible configurar un experimento con anticipaci n en un ordenador de oficina que no est conectado al instrumento Nota Las dos unidades del instrumento deben siempre estar encendidas durante un ciclo de proceso Inicie la unidad Amersham WB elpho scan Paso Acci n 1 En el panel posterior de la unidad Elpho amp scan pulse el interruptor de en cendido y apagado para que quede en la posici n I encendido Resultado se enciende la unidad Elpho amp scan 2 Durante el encendido el panel de indicadores mostrar lo siguiente ELPHO amp SCAN Cuando la unidad el instrumento est lista para usarse se muestra un cuadro blanco ELPHO amp SCAN SB 122 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 5 Realizar un experimento 5 2 Inicie el Amersham WB analyzer Inicie la unidad Amersham WB western Paso Acci n 1 En el panel posterior de la unidad Western pulse el interruptor de encendido y apagado para que quede en la posici n encendido Nota La unidad Elpho amp scan debe estar encendida antes de que se pueda operar la unidad Western Resultado se enciende la unidad Western 2 Durante el encendido el panel de indicadores mostrar lo siguiente TRANSFER PROBING DRYING Cu
12. Para ver una lista de los productos qu micos que se usan en las tarjetas de gel y en las tiras de soluci n amortiguadora consulte la Ficha de datos de seguridad SDS MSDS Uso Sustancia qu mica Concentraci n N CAS y N EC General Soluciones amortiguadoras acuo 0 0 2 M N A sas pH 4 10 por ejemplo tris glici na fosfato Transferencia Etanol 40 64 17 5 200 578 6 Metanol 40 67 56 1 200 659 6 Transferencia y son Cloruro de sodio 0 2 M 7647 14 5 231 598 3 deo Cloruro de potasio 50 mM 7447 40 7 231 211 8 Tween 1 9005 64 5 500 018 3 Limpieza del recorri Hidr xido de sodio 0 5 M 1310 73 2 215 185 5 do de flujos Hipoclorito de sodio 5 7681 52 9 231 668 3 Limpieza de la placa Etanol 50 64 17 5 200 578 6 de la tarjeta 226 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 7 Informaci n de referencia 7 2 Gu a de resistencia qu mica Sustancia qu mica Concentraci n N CAS y N EC Limpieza de las su Etanol 64 17 5 200 578 6 perficies Detergentes suaves Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 227 7 Informaci n de referencia 7 3 Formulario de declaraci n de salud y seguridad 7 3 Formulario de declaraci n de salud y seguridad 228 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE Servicio sobre el terreno 7 Informaci n de referencia 7 3 Formulario de declaraci n de salud y seguridad
13. ptimo y sin problemas del producto La sugerencia contiene informaci n til que puede mejorar u optimizar los procedimientos Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 9 1 Introducci n 1 3 Informaci n reglamentaria 1 3 Informaci n reglamentaria Introducci n Esta secci n describe las directivas y las normativas que cumple el Amersham WB system Informaci n de fabricaci n La siguiente tabla resume la informaci n de fabricaci n requerida Para obtener m s informaci n ver el documento de la Declaraci n de conformidad DoC en la UE Requisito Contenido Nombre y direcci n del fabricante GE Healthcare Bio Sciences AB Bj rkgatan 30 SE 751 84 Uppsala Sweden Conformidad con las Directivas de la UE Este producto cumple con las directivas europeas que se mencionan en la tabla mediante el cumplimiento de las correspondientes normas armonizadas Directiva 2006 42 CE Directiva sobre m quinas MD 2004 108 CE Directiva sobre compatibilidad electromagn tica EMC 2006 95 CE Directiva sobre baja tensi n LVD 10 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 1 Introducci n 1 3 Informaci n reglamentaria Marca CE La marca CE y la correspondiente Declaraci n de conformidad en la UE son v lidas para el instrumento siempre y cuando e se use como una unidad independiente o e se conecte a otros productos recomendados o descritos en la
14. rencia de prote nas desde el gel hasta la membrana el sondeo de la membrana con anticuerpos primarios y secundarios y el an lisis de las tarjetas PVDF En esta secci n Esta secci n contiene las siguientes subsecciones Secci n Consulte la p gina 3 7 1 Accesorios y consumibles para transferencia 78 3 7 2 Anticuerpos secundarios sondeo 83 3 7 3 Soporte de secado secado de la tarjeta PVDF 85 3 7 4 Adaptador de membrana an lisis de tarjeta PVDF 86 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 77 3 Descripci n del sistema 3 7 Accesorios y consumibles para los pasos de la transferencia Western 3 7 1 Accesorios y consumibles para transferencia 3 7 1 Accesorios y consumibles para transferencia Introducci n En esta secci n se describen e Amersham WB transfer holder accesorio e Amersham WB PVDF card consumible e Amersham WB transfer paper consumible e Amersham WB sponge consumible Amersham WB transfer holder La bandeja de transferencia se usa durante la transferencia Contiene el s ndwich de transferencia esponja papel de transferencia tarjeta de gel tarjeta PVDF papel de transferencia y esponja preparados antes de comenzar la transferencia Las prote nas por separado se transfieren desde el gel hasta la membrana durante el ciclo de transfe rencia Los pasadores gu a de la bandeja de transferencia sirven para asegurar que la tarjeta de gel y la tarjeta PVDF est n po
15. 19 UE Directiva de Residuos de equipos el ctricos y electr ni cos WEEE Normativa EC n Registro evaluaci n autorizaci n y restricci n de sus 1907 2006 tancias qu micas REACH ACPEIP Gesti n para el control de la contaminaci n provocada por los productos inform ticos electr nicos Restricci n de sustancias peligrosas RoHS de China Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 1 Introducci n 1 3 Informaci n reglamentaria Cumplimiento con las reglamentaciones del equipo conectado Cualquier equipo conectado a Amersham WB analyzer deber cumplir con los requisitos de seguridad de las normativas IEC EN UL CSA 61010 1 IEC EN UL CSA 60950 1 u otras normativas y normas nacionales pertinentes a la seguridad El equipo debe instalarse y utilizarse conforme a las instrucciones del fabricante En la Uni n Europea el equipo conectado debe tener la marca CE Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 13 1 Introducci n 1 4 Amersham WB system documentaci n 1 4 Introducci n Amersham WB system documentaci n En esta secci n se describe la documentaci n del usuario y la documentaci n asociada del Amersham WB system Documentaci n de usuario En la siguiente tabla se muestra la documentaci n del usuario que se entrega con Amersham WB system Documento Amersham WB analyzer Instrucciones de desembalaje Contenido principal En esta inst
16. 200 Cambiar los filtros de entrada Consulte Cambiar los filtros de entrada en la p gina 216 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 6 Mantenimiento 6 2 Instrucciones de mantenimiento 6 2 Instrucciones de mantenimiento Introducci n En esta secci n se describe el trabajo de mantenimiento que se debe realizar en el Amersham WB analyzer En esta secci n Esta secci n contiene las siguientes subsecciones Secci n Consulte la p gina 6 2 1 Limpieza semanal de los recorridos de los flujos de transferencia 202 y de sondeo 6 2 2 Procedimientos de reemplazo 206 6 2 3 Traslado de las unidades del instrumento 218 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 201 6 Mantenimiento 6 2 Instrucciones de mantenimiento 6 2 1 Limpieza semanal de los recorridos de los flujos de transferencia y de sondeo 6 2 1 Limpieza semanal de los recorridos de los flujos de transferencia y de sondeo Introducci n Lleve a cabo una limpieza de mantenimiento semanal del recorrido del flujo de transfe rencia y del recorrido del flujo de sondeo o si la unidad no se va a utilizar durante unos d as Limpieza de mantenimiento del recorrido del flujo de transferencia El procedimiento tardar aproximadamente 25 minutos El sondeo y el secado pueden realizarse al mismo tiempo en paralelo Nota Aseg rese de que no haya bandejas de transferencia en el dep sito ADVERTENCI
17. 29 0214 77 AE 5 Realizar un experimento 5 9 Analizar membrana y ver los resultados Paso Ilustraci n de pasos Acciones del operador Cierre el adaptador de membrana Cierre la tapa de sellado Pulse el bot n de expulsi n en la unidad Elpho amp scan Resultado se cierra el cargador Comenzar y monitorizar el an lisis de la membrana Ilustraci n de pasos Acciones del operador En el software haga clic en el paso del flujo de trabajo MEMBRANE SCANNING SCANNING Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 189 5 Realizar un experimento 5 9 Analizar membrana y ver los resultados Paso Ilustraci n de pasos ID Note Scanning Sensitivity Y Automatic sensitivity O Manual sensitivity Default Membranes _ o o gt Membrane Position A Position B Acciones del operador Utilice la configuraci n predeterminada para el an lisis de la membrana como se muestra en la captura de pantalla Scan Ready for Membrane scanning EP Membrane Scanning Haga clic en Scan en el rea Membrane Scanning Resultado comienza el an lisis de la membra na Membrane Scanning Remaining time Scanning Membranes El progreso de los an lisis se muestra en el rea Membrane Scanning N Cuando haya finalizado el an lisis se mostra Position A Cy5 Position B Cy p E a OO r n las im genes de la membrana en el rea Memb
18. 3 Insert the Custom tubing in at least 450 ml cleaning solution 4 Insert the tubing for probing Block Wash and Final wash in an empty bottle 5 Make sure there are four empty tubes in the antibody solution compartment 6 Make sure there are no membranes left in the probing chambers Note Discard all solutions and the antibody tubes after the cleaning The procedure will take about 45 minutes Start clean Cancel Con un pa o mojado limpie el tubo de sondeo y la tapa y bordes de la c mara de sondeo Sumerja el P Water tubo en una botella que contenga como m nimo 1000 ml de agua ultra pura Sumerja el tubo P Custom en una botella que contenga al menos 450 ml de 0 5 M NaOH Coloque los tubos P Block P Wash y P Final Wash en una botella de residuos vac a Inserte y conecte cuatro tubos de 15 ml vac os y limpios en el compartimento de anticuerpos En el cuadro de di logo haga clic en Start clean Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 6 Mantenimiento 6 2 Instrucciones de mantenimiento 6 2 1 Limpieza semanal de los recorridos de los flujos de transferencia y de sondeo Paso Acci n 8 Cuando termine la limpieza coloque el tubo en una botella vac a Nota Despu s de la limpieza elimine todas las soluciones y tubos de anticuerpos Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 205 6 Mantenimiento 6 2 Instrucciones de mantenimiento 6 2 2 Procedimien
19. AE 109 4 Instalaci n 4 2 Instalaci n del hardware Instalar un lector de indicador de matriz opcional Paso Acci n 1 Conecte el cable USB al lector de indicador de matriz 2 Conecte el cable USB al ordenador J Programe y verifique la funci n del lector de indicador de matriz conforme a las instrucciones que vienen en su documentaci n para el usuario 110 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 4 Instalaci n 4 3 Instalaci n del software 43 Instalaci n del software Instalar el Amersham WB software Para instalar el software en un ordenador con Windows 7 Professional Nota Se recomienda instalar cualquier actualizaci n pendiente de Windows antes de instalar el software y seguir las instrucciones que aparecen en pantalla Despu s de hacer clic en Install se recomienda finalizar el procedimiento completo de instalaci n sin interrupciones Paso Acci n 1 Inserte el DVD del software en el ordenador Cuando aparezca el primer cuadro de di logo haga clic en Install para instalar los requisitos de software Amersham WB software InstallShield Wizard Amersham WB software requires the following items to be installed on your computer Click Install to begin installing these requirements Status Requirement Pending GE Healthcare Life Sciences Windows Driver Package Pending Microsoft Visual C 2005 SP1 Redistributable Package x86 Pending Microsoft Visual C 2008
20. Configurar un experimento en el software en mento en el software la p gina 124 Realizar premarcaje Secci n 5 4 Realizar el premarcaje de muestras en la p gi na 128 Realizar electroforesis y Secci n 5 6 Realizar electroforesis de prote nas en la p gi an lisis na 134 Preparar y conectar so Secci n 5 7 1 Preparar y conectar soluciones de transferen luciones de transferen cia en la p gina 147 cia Preparar el s nd Secci n 5 7 Realizar transferencia en la p gina 146 wich de transferen cla Ejecutar transferen cia Preparar y conectar Secci n 5 8 1 Preparar y conectar sondas y soluciones de sondas y soluciones de anticuerpos en la p gina 172 anticuerpos Realizar sondeo y seca Secci n 5 8 Realizar sondeo y secado en la p gina 171 do Analizar membrana y Secci n 5 9 Analizar membrana y ver los resultados en la ver los resultados p gina 187 Encontrar m s informaci n Para obtener informaci n complementaria e informaci n detallada sobre c mo planificar los experimentos consulte el Amersham WB system User Manual Puede acceder a l desde el software seleccionando Help View user manual en la barra de men s Para tener informaci n detallada sobre el software consulte la Amersham WB software help integrada en el software disponible en el panel derecho del software Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 121 5 Realizar un experimento
21. Debe utilizarse un informe On Site Service Health Safety Declaration Form tal como el que se muestra en el ejemplo siguiente para registrar los detalles relacionados con la desinfecci n antes de que se realizan tareas de reparaci n en el centro correspon diente On Site Service Health Safety Declaration Form Service Ticket To make the mutual protection and safety of GE service personnel and our customers all equipment and work areas must be clean and free of any hazardous contaminants before a Service Engineer starts a repair To avoid delays in the servicing of your equipment please complete this checklist and present it to the Service Engineer upon arrival Equipment and or work areas not sufficiently cleaned accessible and safe for an engineer may lead to delays in servicing the equipment and could be subject to additional charges Please review the actions below and answer Yes or No Provide explanation for any No answers in box below Instrument has been cleaned of hazardous substances Please rinse tubing or piping wipe down scanner surfaces or otherwise ensure removal of any dangerous residue Ensure the area around the instrument is clean If radioactivity has been used please perform a wipe test or other suitable survey Adequate space and clearance is provided to allow safe access for instrument service repair or installation In some cases this may require custom
22. Information y seleccione la pesta a Experiment log En el Experiment log compruebe en qu fase se interrumpi el experimento Elimine las partes de la fase que se hab an completado cuando se interrum pi el ciclo y reinicie la fase Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 33 2 Instrucciones de seguridad 2 4 Informaci n sobre reciclado 2 4 Informaci n sobre reciclado Introducci n Este cap tulo contiene informaci n acerca del desmantelamiento del Amersham WB analyzer Desinfecci n El Amersham WB analyzer se debe desinfectar antes de desmantelarlo y se debe cumplir toda la normativa local relacionada con el desguace del equipo Instrucciones generales para el desecho Al poner el Amersham WB analyzer fuera de servicio se deben separar y reciclar los distintos materiales de acuerdo con las reglamentaciones ambientales nacionales y lo cales C mo reciclar las sustancias peligrosas El Amersham WB analyzer contiene sustancias peligrosas Para obtener informaci n detallada comun quese con su representante de GE Desecho de componentes el ctricos Los residuos de los equipos el ctricos y electr nicos no se deben desechar como basura de recogida municipal sin clasificar y se deben recoger por separado Comun quese con un representante autorizado del fabricante para obtener informaci n sobre el desman telamiento de equipos 34 Amersham WB system Instrucciones de fu
23. NJ 08855 1327 USA GE Healthcare Japan Corporation Sanken Bldg 3 25 1 Hyakunincho Shinjuku ku Tokyo 169 0073 Japan 29 0214 77 AE 03 2015 a24
24. PVDF de la caja de cart n PVDF Amershom WB PVDF cord gt 4 Sc ee Nota Conserve el paquete para IDENTIFICAR la tarjeta PVDFindividual y para alma cenaje posterior 2 Extraiga la tarjeta PVDF del paquete y retire el primer papel de protecci n azul 152 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 5 Realizar un experimento 5 7 Realizar transferencia 5 7 2 Preparar el s ndwich de transferencia Paso Acci n 3 Opcional e Antes de retirar el segundo papel de protecci n azul escriba una anota ci n con un l piz en la superficie de escritura de la tarjeta PVDF Consejo La superficie de escritura puede utilizarse para introducir la posici n A o B en la que se usa la tarjeta PVDF e Seleccione el paso del flujo de trabajo TRANSFER del software Coloque el cursor en el campo Note apropiado y escriba el texto Gel Cards amp Membranes Membrane Position A Yj Position B ID te Note Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 153 5 Realizar un experimento 5 7 Realizar transferencia 5 7 2 Preparar el s ndwich de transferencia Paso Acci n 4 Retire el segundo papel de protecci n azul IN Nota No toque el rea de transferencia marcada con un cuadro rojo en la imagen con los dedos Sostenga la tarjeta PVDF por las asas 154 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 5 Realizar un experimento 5 7 Realizar transfe
25. SP 1 Redistributable Package x86 Pending JRE_SE 1 7 0_02 x86 Pending Microsoft NET Framework 4 0 Full Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 111 4 Instalaci n 4 3 Instalaci n del software Paso Acci n 2 Cuando aparezca el cuadro de di logo Windows Security haga clic en el bot n Install H k Would you like to install this device software Name GE Healthcare Life Sciences Publisher GE Healthcare Bio Sciences AB Always trust software from GE Healthcare Don t Bio Sciences AB You should only install driver software from publishers you trust How can I decide which device software is safe to install E Cuando se hayan instalado correctamente todos los requisitos comience la instalaci n del software haciendo clic en Next en el cuadro de di logo Welcome to the InstallShield Wizard for Amersham WB software Welcome to the InstallShield Wizard for j _ Amersham WB software The InstallShield R Wizard will install Amersham WB software on your computer To continue dick Next WARNING This program is protected by copyright law and international treaties lt k E 112 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 4 Instalaci n 4 3 Instalaci n del software Paso Acci n 4 Lea el acuerdo de licencia del software Cuando haya le do y aceptado el acuerdo de licencia del software seleccione la opci n I accept y haga
26. a pegadas a los tubos No es necesario que la etiqueta est dentro del soporte de tubo Instale los filtros de entrada en los tubos Inserte el tubo en el soporte de filtro que contiene el filtro de entrada y gire el soporte de filtro para que el tubo quede apretado 106 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 4 Instalaci n 4 2 Instalaci n del hardware Coloque el tubo de residuos y derrames PRECAUCI N El tubo de residuos y derrames debe apretarse correctamente para evitar el riesgo de que se salga del contenedor de residuos Coloque el tubo de residuos y derrames de modo que las salidas est n en una posici n m s baja que la mesa sobre la cual est colocado el Amersham WB analyzer Corte el tubo a la longitud apropiada y apri telo para evitar el riesgo de que se salga del conte nedor de residuos Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 107 4 Instalaci n 4 2 Instalaci n del hardware Instale gu as para el secador de membrana en el compartimento de secado Paso Acci n 1 Abra la bolsa de pl stico que contiene las dos gu as de secador de membra na 2 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 4 Instalaci n 4 2 Instalaci n del hardware Paso Acci n 3 Coloque las gu as de secador de membrana en las dos ranuras Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77
27. c maras de son deo e Yano es posible cambiar el ti po del primer paso que apare ce en la tabla de secuencia del sondeo Sin embargo se pue den editar los campos Dur min y Repeat e Elbot n Pre Fill cambia y pasa a ser el bot n Start y aparece el mensaje de estado Ready for Probing en la pantalla Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 177 5 Realizar un experimento 5 8 Realizar sondeo y secado 5 8 2 Realizar el sondeo Paso Ilustraci n de pasos Acciones del operador Abra la tapa del compartimento de sondeo y utilice el pestillo para abrir la tapa de la c mara de son deo Abra la bandeja de transferencia y retire la esponja y el papel de transferencia que est en la parte superior de la tarjeta PVDF e Retire la tarjeta PVDF de la bandeja de transferencia Su jete las asas de la tarjeta PVDF con los dedos o utilice la pinza de punta plana e Coloque la tarjeta PVDF en la c mara de sondeo consulte el paso 5 e Para conocer las instrucciones de limpieza de la bandeja de transferencia y de manipula ci n de los residuos consulte Limpiar la bandeja de transfe rencia en la p gina 170 178 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 5 Realizar un experimento 5 8 Realizar sondeo y secado 5 8 2 Realizar el sondeo Paso Ilustraci n de pasos Acciones del operador Coloque la tarjeta PVDF en la c mara de sond
28. contra el riesgo de incendio sustituya los fusibles solamente por fusibles del mismo tipo y clasificaci n el ctrica como se indica en las eti quetas del instrumento PRECAUCI N Cuando trabaje con qu micos peligrosos tome todas las medidas de protecci n adecuadas como usar gafas y guantes de protecci n resistentes a los qu micos que est utilizando Para un funciona miento y mantenimiento seguro del sistema respete las normas e instrucciones locales A A A A A 194 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 6 Mantenimiento Contenido de este capitulo Este cap tulo contiene las siguientes secciones Secci n Consulte la p gina 6 1 Programa de mantenimiento 196 6 2 Instrucciones de mantenimiento 201 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 195 6 Mantenimiento 6 1 Programa de mantenimiento 6 1 Programa de mantenimiento Introducci n En esta secci n se enumeran las actividades de mantenimiento que debe realizar el usuario del Amersham WB analyzer El mantenimiento se divide en Despu s de cada ciclo de proceso Mantenimiento semanal Mantenimiento mensual Mantenimiento anual Mantenimiento seg n sea necesario 196 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 6 Mantenimiento 6 1 Programa de mantenimiento Programa de mantenimiento peri dico El usuario del Amersham WB analyzer deber realizar el m
29. de prote nas Cy5 premarcadas se transfieren a las membranas y las prote nas objetivo pueden detectarse mediante anticuerpos con jugados secundarios Cy3 y o Cy5 La detecci n basada en la fluorescencia proporciona una alta sensibilidad y un amplio espectro din mico adem s de permitir el an lisis multiplex de la misma membrana de transferencia Western El an lisis multiplex de prote nas totales premarcadas con Cy5 y detectadas con anti cuerpos secundarios marcadas con Cy3 permite la normalizaci n de las se ales objetivo mediante el uso de prote nas totales en cada fila Amersham WB software de f cil uso para controlar los diferentes pasos del flujo de trabajo y para la evaluaci n automatizada o manual de sus resultados es parte del sistema Para ver una lista de nombres traducidos de accesorios y consumibles consulte Sec ci n 7 4 Traducciones de accesorios y consumibles en la p gina 231 Contenido de este capitulo Este cap tulo contiene las siguientes secciones Secci n Consulte la p gina 1 1 Acerca de este manual 7 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 5 1 Introducci n Secci n Consulte la pagina 1 2 Informaci n importante para los usuarios 8 1 3 Informaci n reglamentaria 10 1 4 Amersham WB system documentaci n 14 6 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 1 Introducci n 1 1 Acerca de este manual 1 1 Acerca de este manual Objetiv
30. de transferencia Materiales necesarios Se necesitan los siguientes consumibles y accesorios cuando se prepara un s ndwich de transferencia e 1 bandeja de transferencia e 1tarjeta de gel procesada e 1 Tarjeta PVDF e 2 esponjas e 2 papeles de transferencia e 1 recipiente con soluci n amortiguadora de transferencia para mojar los papeles de transferencia e 1recipiente con al menos 96 de etanol para mojado previo de la tarjeta PVDF e 1recipiente con soluci n amortiguadora de transferencia para equilibrado de la tarjeta PVDF Nota Algunos etanoles tiene propiedades autofluorescentes que dar n como resultado un fondo de membrana muy brillante Aseg rese de que el etanol que se usa durante la transferencia no sea autofluorescente Precauciones ADVERTENCIA Utilice siempre guantes ropa de protecci n y gafas adecuadas cuando manipule tarjetas de gel tarjetas PVDF y otros consumibles que se suministran con Amersham WB system Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 149 5 Realizar un experimento 5 7 Realizar transferencia 5 7 2 Preparar el s ndwich de transferencia Ilustraci n general del conjunto de s ndwich de transferencia La ilustraci n siguiente muestra una descripci n general del conjunto de s ndwich de transferencia 150 La tabla siguiente describe brevemente el proceso de preparaci n de un s ndwich de transferencia Fase Descripci n 1
31. desconectarse al acceso remoto del instrumento Recuperar los c digos de acceso al instrumento y gestionar usuarios remotos Editar la configuraci n de la conexi n remota Nota Solamente visible cuando hay un instrumento conectado Help Generar informes del sistema Abra el panel de ayuda el manual del usuario y el About Amersham WB cuadro de di logo Panel de flujo de trabajo El panel de flujo de trabajo muestra los diferentes pasos del flujo de trabajo del software en un experimento Antes de comenzar un ciclo por ejemplo electroforesis transferencia sondeo secado o an lisis de membranas es posible avanzar y retroceder para ver y editar la informaci n y los par metros en los diferentes pasos del flujo de trabajo Siempre es posible retroceder y editar el texto de los campos de informaci n en los dife rentes pasos del flujo de trabajo durante un ciclo y despu s de este Por ejemplo la tabla de muestras puede rellenarse despu s de que haya comenzado la electroforesis Nota Para experimentos de electroforesis los pasos del flujo de trabajo TRANSFER PROBING DRYING y MEMBRANE SCANNING aparecen atenuados en pantalla Estos pasos solamente est n incluidos en los experimentos Western rea de trabajo El rea de trabajo muestra la informaci n en forma de texto los par metros y los controles del paso del flujo de trabajo que se muestra en ese momento Amersham WB system Instrucciones de funcionami
32. electroforesis cuando se realizan e experimentos de electroforesis e experimentos Western con normalizaci n de prote nas totales Consumibles premarcados Los consumibles para premarcaje se embalan en bolsas aparte de papel metalizado Cada bolsa de papel metalizado contiene suficientes reactivos para procesar 10 tarjetas de gel cuando se cargan 14 filas tarjeta de gel con muestras premarcadas es decir 140 reacciones de marcaje individuales La tabla que aparece a continuaci n muestra un resumen del contenido de los consu mibles para premarcaje Consumible para premarcaje Contenido Cantidad Amersham WB Cy5 0 25 mg ml laproximadamen 5 frascos tapones azules te 250 pmol pl de tinte Cy5 Soluci n de tinte Cy5 de 35 pl por en DMSO envase suficiente para dos tarje tas de gel Amersham WB labeling buffer Soluci n amortiguadoraba 5 frascos tapones negros Etiquetado de la soluci n amorti sada en Tris Hidroximetil Soluci n amortiguadora de marca guadora Aminometano que contiene je de 0 7 ml por envase suficiente con un pH de 8 7 la 25 bara dos tarjetas de gel C Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 65 3 Descripci n del sistema 3 5 Consumibles premarcados Consumible para premarcaje Amersham WB loading buffer Carga de la soluci n amortiguado ra Contenido 50 mM Tris Cl 0 25 w v Naranja G 4 SDS 0 5 mM Lisina Consumible para la pre
33. en un plazo de una hora desde la finalizaci n de la electroforesis Acci n Cuando la electroforesis est lista y la luz est encendida en el panel del instrumento pulse el bot n de expulsi n en la unidad Elpho amp scan Resultado se expulsa el cargador Abra la tapa de sellado utilizando el pestillo Retire la tarjeta de gel y col quela boca abajo sobre la mesa Contin e con Limpie la unidad Elpho amp scan en la p gina 145 Nota Se recomienda limpiar la unidad Elpho scan despu s de cada ciclo de pro ceso Sin embargo si no hay tiempo suficiente proceda con la transferencia y limpie la unidad en una fase posterior del experimento 144 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 5 Realizar un experimento 5 6 Realizar electroforesis de prote nas 5 6 3 Procedimientos despu s de la electroforesis y del an lisis de la tarjeta de gel Limpie la unidad Elpho amp scan Paso Acci n 1 Retire del cargador los soportes de tiras de soluci n amortiguadora y dese che la soluci n amortiguadora 2 Pase un pa o que no deje pelusa mojado con un 50 de etanol si es nece sario para limpiar el l quido de la tarjeta de gel a Con un pa o que no deje pelusa limpie la suciedad o l quido del vidrio pro tector mojado con un 50 de etanol si es necesario Nota Es importante mantener el vidrio protector limpio con el fin de obtener un buen resultado al analizar las tarjetas d
34. evaluaci n despu s del an lisis del gel se realiza un an lisis autom tico de las bandas de prote nas y los resultados se presentan en el software Experimentos Western 118 En experimentos Western las prote nas no marcadas o prote nas premarcadas con Cy5 son separadas en el gel durante la electroforesis y luego transferidas desde el gel a una membrana La membrana es sondeada con anticuerpos primarios y con anticuerpos secundarios conjugados con tinte Cy3 o Cy5 para la detecci n de las prote nas objetivo Para la detecci n total de prote nas se marca previamente la muestra con Cy5 Despu s del sondeo se seca la membrana y luego se analiza En la fase de evaluaci n se realiza un an lisis autom tico de las bandas de prote nas y los resultados se presentan en el software Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE Descripci n general del flujo de trabajo 5 Realizar un experimento 5 1 Informaci n general La ilustraci n siguiente muestra los pasos principales en la electroforesis y experimentos Western Experimento de Experimento electroforesis Western Iniciar instrumento Configurar experimento en el software Realizar premarcaje O BIEN Ejecutar electroforesis y an lisis con gel Preparar s ndwich de transferencia Evaluar resultados Ejecutar transferencia Realizar sondeo y secado Analizar membranas Evaluar resultados Preparar muestras no marcadas para ca
35. flujos de l quidos Ilustraci n del recorrido del flujo de liquido de sondeo 58 La ilustraci n siguiente muestra un gr fico de flujos detallado para el proceso de sondeo El gr fico de flujos muestra interconexiones entre los componentes del instrumento Las etiquetas blancas se refieren a las etiquetas de los tubos Los n meros azules se refieren a los componentes del instrumento P WASTE P CUSTOM P WASTE mu P WATER P WASH Ao P BLOCK E La tabla siguiente describe los componentes en el gr fico de flujos Descripci n 1 Compartimento de anticuerpos con tubos de soluci n de anticuerpos que contienen anticuerpos primarios y secundarios para las posiciones A y B 2 Bloqueo de la v lvula de sondeo Se usa para seleccionar la soluci n que se va a bombear a trav s del re corrido del flujo 3 Bomba de sondeo Para bombear la soluci n a trav s del recorrido del flujo de l quido Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 3 Descripci n del sistema 3 3 Unidad Western 3 3 3 Recorridos de flujos de l quidos Descripci n Sensor de aire Para detectar si existe aire en los tubos El detector de aire pausa el ciclo si hay una botella de soluci n vac a V lvula del selector de c mara de sondeo Para seleccionar si se va a dirigir la soluci n hacia las c maras de sondeo o desde las c maras de sondeo hacia el conducto de salida de residuos C maras de son
36. la c mara de sondeo A SECONDARY Posici n que se usar para los anticuerpos secun darios dirigidos a la membrana en la posici n A de la c mara de sondeo B PRIMARY Posici n que se usar para los anticuerpos prima rios dirigidos a la membrana en la posici n B de la c mara de sondeo B SECONDARY Posici n que se usar para los anticuerpos secun darios dirigidos a la membrana en la posici n B de la c mara de sondeo 3 Cierre la tapa del compartimiento de anticuerpos Nota Por cada membrana hay un tubo de anticuerpos para los anticuerpos primarios y uno para los anticuerpos secundarios Esto significa por ejemplo que si se seleccionan dos anticuerpos primarios para el marcaje de la membrana en Position A los anticuerpos se mezclan en el mismo tubo de anticuerpos y se colocan en su posici n A PRIMARY Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 175 5 Realizar un experimento 5 8 Realizar sondeo y secado 5 8 2 Realizar el sondeo 5 8 2 Realizar el sondeo Introducci n En esta secci n se describe c mo e coloque las tarjetas PVDF en las c maras de sondeo e comenzar y monitorizar el sondeo Precauciones ADVERTENCIA Despu s de la electroforesis o despu s de la transferencia cuando se ha abierto el s ndwich de transferencia y se ha colocado la tarjeta PVDF en el compartimento de sondeo elimine el gel de forma segura Lea la ficha de datos de seguridad SDS MSD
37. n 2 Inserte el electrodo izquierdo de transferencia en el extremo izquierdo del dep sito de transferencia y presi nelo hacia abajo 3 Inserte el electrodo derecho de transferencia en el extremo derecho del dep sito de transferencia y presi nelo hacia abajo 4 Cierre la tapa del dep sito de transferencia Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 101 4 Instalaci n 4 2 Instalaci n del hardware Conecte las unidades del instrumento al ordenador y enchufe los cables de alimentaci n ADVERTENCIA Protecci n a tierra y cable de alimentaci n El Amersham WB analyzer siempre debe estar conectado a un toma de corriente con descarga a tierra Utilice solamente el cable de alimentaci n de 3 hilos oficialmente autorizado suministrado o aprobado por GE o que cumpla todos los requisitos de los c digos locales sobre electricidad ADVERTENCIA Voltaje de alimentaci n Aseg rese de que el voltaje de alimenta ci n en el enchufe de la pared se corresponde con la especificaci n del instrumento antes de conectar el cable de alimentaci n AVISO Cualquier ordenador que se utilice con el equipo deber cumplir la normativa IEC EN UL CSA 60950 1 u otras regulaciones relativas a la seguridad Deber instalarse y utilizarse conforme a las instruc ciones del fabricante O 102 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 4 Instalaci n 4 2
38. no est bloqueada durante la electro foresis Por consiguiente es posible rellenar la tabla duran te la fase de electroforesis despu s de haber comenza do el ciclo si necesita comen zar un ciclo r pidamente 126 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 5 Realizar un experimento 5 3 Configurar un experimento en el software Paso Ilustraci n de pasos Acciones del operador PTEE BES ERT LATE A Introducir el nombre descrip O Primary ab against target Enter description 0000 ci n de Primary ab against Labeled secondary ab Select Labeled secondary ab v target opcional y seleccio Goat anti mouse Cy 3 ne la Labeled secondary ab Goat anti rabbit Cy 3 apropiada en la pesta a Gel card A En este protocolo se ha utili zado Cy5 para el premarcaje Elija un anticuerpo secunda rio conjugado con Cy3 Repita los pasos 3 4 para la tarjeta de gel B si est inclui da en el experimento Consejo Puede imprimir el protocolo y usarlo en conexi n con la preparaci n y premarcaje de muestras Para imprimir el protocolo haga clic en el ico gt no que se encuentra a la derecha de las pesta as de tarjeta de gel o pulse Ctrl P Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 127 5 Realizar un experimento 5 4 Realizar el premarcaje de muestras 5 4 Realizar el premarcaje de muestras Introducci n El premarcaje de muestras es necesario pa
39. para lisis compatibles 129 Soluciones y materiales ne cesarios 129 Procedimientos de emergencia Fallo de alimentaci n el ctri ca 32 Parada de emergencia 32 Procedimientos posteriores a la electroforesis 144 Protocolo de premarcaje Wes tern 131 PVDF Descripci n 80 Mover al compartimiento de secado 181 R Recetas Soluciones de anticuer pos 172 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE Soluciones de transferen cia 147 Soluciones para son deo 172 Reciclado de sustancias peligro sas 34 Recipiente de transferencia Retirar despu s del ci clo 168 Recorrido del flujo de l quido de transfe rencia 56 Requisitos de espacio 95 Requisitos de la sala 94 Requisitos inform ticos 96 Retire la tarjeta del pocillo de muestras 140 S S ndwich de transferencia Cargar en el dep sito de transferencia 165 Descripci n general del conjunto 150 Materiales 149 Preparar 149 Secado Comenzar y monitori zar 185 Seguridad para transporte Retirar 100 Software Inicio del 124 Instalaci n 111 Soluciones Bloqueo 172 Conectar soluciones de anti cuerpos 174 Conectar soluciones de sondeo 173 Conectar soluciones de transferencia 148 de anticuerpos 172 Sondeo 172 Transferencia 147 Soluciones amortiguadoras Soluciones amortiguadoras para lisis 129 Soluciones amortiguadoras y otras soluciones Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE
40. para obtener infor maci n sobre el desmantelamiento de equipos Este s mbolo indica que el producto contiene materiales peligrosos que superan los l mites establecidos por el est ndar chino SJ T11363 2006 Requirements for Concentration Limits for Certain Hazardous Substances in Electronics Requisitos SJ T11363 2006 sobre los l mites de concentraci n de ciertas sustancias peligrosas en equipos electr nicos 30 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 2 Instrucciones de seguridad 2 2 Etiquetas Etiqueta de seguridad relacionada con la luz l ser Las siguientes etiquetas est n relacionadas con la luz l ser y la primera est adherida al panel posterior de la unidad Elpho amp scan La segunda est adherida al interior del cargador de Elpho amp scan Etiqueta Descripci n Este equipo es un producto l ser de clase 1 IEC 60825 1 2007 EN 60825 1 2007 Este instrumento cumple con los requisitos de se guridad de radiaci n l ser especificados en el Complies with 21 CFR 1040 10 and 1040 11 except C digo de Reglamentaciones Federales 21 CFR for deviations pursuant to Laser Notice No 50 T tulo 1 Subcap tulo J Parte 1040 10 Productos dated July 24 2007 IEC EN 60825 1 2007 l ser ser Jan Feb Mar Apr May Jun ES aa l L O L L A En la etiqueta tambi n se indica el mes de fabrica Jul Aug _ Sep _ Oct nov _ Dec ci n El s mbolo se ve al abrir el cargador d
41. system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE Indicadores de estado Estado TRANSFER Error O Advertencia 3 Descripci n del sistema 3 1 Descripci n general del instrumento Descripci n La luz se enciende cuando se produce un error Para obtener informaci n sobre el error consulte Amersham WB software El software proporciona sugerencias sobre c mo corregir el problema Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 39 3 Descripci n del sistema 3 2 Unidad Elpho scan S 2 Introducci n Unidad Elpho scan La unidad Elpho amp scan se usa para separar las prote nas de muestras tratadas con SDS en un gel de poliacrilamida Tambi n se usa para analizar los geles despu s de la elec troforesis y las tarjetas PVDF despu s del sondeo y secado en un experimento Western Esta secci n ofrece una descripci n general de la unidad Elpho scan Ilustraci n de la unidad Elpho scan 40 La ilustraci n siguiente muestra las partes principales de la unidad Elpho scan 1 2 3 Ea R a Descripci n 1 Panel de instrumentos con indicadores de estado 2 Cargador de Elpho scan Para cargar las tarjetas de gel o tarjetas PVDF Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 3 Descripci n del sistema 3 2 Unidad Elpho scan Descripci n Bot n de expulsi n Para abrir cerrar el cargador del compartimento de electrofo
42. transferencia de Western 8 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 1 Introducci n 1 2 Informaci n importante para los usuarios e Elinstrumento y el software deben instalarse conforme a las instrucciones existentes en Cap tulo 4 Instalaci n en la p gina 93 Consejo Para leer m s sobre los principios y m todos de transferencia Western y para tener orientaci n sobre c mo realizar una transferencia Western co rrecta una descarga o pedir el manual Western Blotting Principles and Methods 28 9998 97 en www gelifesciences com Informaci n de seguridad Esta documentaci n del usuario contiene avisos ADVERTENCIA PRECAUCI N y AVISO sobre el uso seguro del producto Consulte las definiciones a continuaci n ADVERTENCIA ADVERTENCIA indica situaciones peligrosas que si no se evitan podr an causar la muerte o lesiones de gravedad Es muy impor tante no proceder hasta cumplir y comprender todas las condicio nes establecidas PRECAUCI N PRECAUCI N indica situaciones peligrosas que si no se evitan podr an causar lesiones menores o moderadas Es muy importante no proceder hasta cumplir y comprender todas las condiciones establecidas Notas y consejos Nota Consejo AVISO AVISO indica las instrucciones que se deben seguir para evitar da os al producto u otros equipos La nota A se utiliza para indicar informaci n que es importante para un uso
43. un experimento 5 8 Realizar sondeo y secado 5 8 3 Procedimientos despu s del sondeo Paso Acci n 5 Coloque los soportes de secado en la posici n correcta del compartimiento de secado por ejemplo la tarjeta PVDF en la posici n de sondeo A a la po sici n de secado A Limpiar el recorrido del flujo de sondeo Nota Antes de proceder con la limpieza desplace las tarjetas PVDF al compar timento de secado consulte las instrucciones anteriores Paso Acci n 1 Cuando finalice el sondeo se abre el cuadro de di logo Probing Completed Clean Probing Flow Path Nota Se recomienda limpiar el recorrido del flujo de sondeo despu s de un ciclo Si decide no limpiar el recorrido del flujo de sondeo haga clic en Cancel y proceda con el Secci n 5 8 4 Realizar el secado en la p gina 185 Sin embargo recuerde limpiar el recorrido del flujo de sondeo en una fase posterior del experimento La limpieza puede realizarse seleccionando Control Clean Probing flow path en la barra de men s Sino se ha realizado la limpieza es necesario vaciar manualmente el recorrido del flujo de sondeo seleccionando Empty Probing chamber en el men Control Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 183 5 Realizar un experimento 5 8 Realizar sondeo y secado 5 8 3 Procedimientos despu s del sondeo Paso Acci n 2 Inserte tubos nuevos para soluci n de anticuerpos vac os en el comparti mento de anticuerpos
44. 2 Anticuerpos secundarios sondeo Preparaci n y conservaci n de anticuerpos reconstituidos secundarios Reconstituya los anticuerpos secundarios en 150 ul de agua ultra pura por envase hasta una concentraci n de 1 ug ul Mezcle con un agitador vorticial y centrifugue los anticuerpos secundarios reconstituidos Se recomienda conservar los anticuerpos secundarios en partes al cuotas a una tempe ratura de entre 15 C y 30 C y protegerlos de la luz Evite la repetici n de ciclos de congelaci n descongelaci n 84 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 3 Descripci n del sistema 3 7 Accesorios y consumibles para los pasos de la transferencia Western 3 7 3 Soporte de secado secado de la tarjeta PVDF 3 7 3 Soporte de secado secado de la tarjeta PVDF Introducci n El Amersham WB drying holder soporte de secado orienta y fija la tarjeta PVDF en la posici n correcta para obtener el mejor resultado posible de secado Ilustraci n del soporte de secado Las ilustraciones que aparecen a continuaci n muestran el soporte de secado cuando est cerrado arriba y el soporte de secado cuando est abierto abajo Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 85 3 Descripci n del sistema 3 7 Accesorios y consumibles para los pasos de la transferencia Western 3 7 4 Adaptador de membrana an lisis de tarjeta PVDF 3 7 4 Adaptador de membrana an lisis de tarjeta PVDF
45. 30 minutos Amersham WB molecular 15 C a 30 C Proteja los indicadores de peso weight markers molecular MW de la luz solar directa Los marcadores del peso molecular deben conser varse siempre en el congela dor Minimice el tiempo de ex posici n a temperatura ambien te antes de usar y evite volver a congelar Los marcadores de peso mo lecular diluidos en la soluci n amortiguadora de carga con DTT pueden dispensarse en partes al cuotas para un solo uso si se han congelado direc tamente despu s de la dilu ci n Las partes al cuotas no deben conservarse durante m s de una semana Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 63 3 Descripci n del sistema 3 4 Descripci n general de accesorios y consumibles Consumible Amersham WB gel card Temperatura de almacena miento De 44C a8 C Datos ambientales Conservar en frigor fico o cuarto fr o Amersham WB buffer strips De 4 C a8 C Conservar en frigor fico o cuarto fr o Amersham WB PVDF card Temperatura ambiente Guarde la tarjeta PVDF en el paquete nico dentro de la caja en que se distribuyen Guarde la caja en un lugar lim pio y seco y protegido de la luz Amersham WB transfer paper Temperatura ambiente Guarde los papeles de transfe rencia en un lugar seco en la caja en la cual se entregaron Prot jalos del polvo Amersham WB paper comb Temperatura ambiente Gu
46. 4 Instalaci n 4 Instalaci n Acerca de este cap tulo En este cap tulo se describe la instalaci n del Amersham WB system Contenido de este capitulo Este cap tulo contiene las siguientes secciones Secci n Consulte la p gina 4 1 Preparaci n del lugar 94 4 2 Instalaci n del hardware 97 4 3 Instalaci n del software 111 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 93 4 Instalaci n 4 1 Preparaci n del lugar 4 1 Preparaci n del lugar Por qu es necesario preparar el lugar Se debe planificar y preparar la ubicaci n en el laboratorio antes de instalar el Amersham WB system Solo se pueden alcanzar las especificaciones de rendimiento del sistema si el entorno del laboratorio cumple los requisitos que se mencionan en esta secci n Respete siempre cualquier normativa local relativa a la seguridad Requisitos de la habitaci n ADVERTENCIA Si se va a utilizar metanol u otros productos qu micos que necesitan ventilaci n coloque el Amersham WB analyzer en una sala con ventilaci n para escape de humos Las unidades del instrumento no deben estar expuestas a la luz solar directa El polvo de la atm sfera debe mantenerse al m nimo Los l mites de m rgenes de temperatura y humedad permitidos est n especificados en la siguiente tabla Par metro Rango permitido Temperatura ambiente de funcionamien de 15 C a 32 C to Para un rendimiento ptimo de 16
47. 6 2 27 1 Probing steps Dur min Repeat Block 10 Wash Primary antibody Wash Secondary antibody Wash Do E Pp e PR EJ e e a Esa Final wash Total time 2 31 h 180 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 5 Realizar un experimento 5 8 Realizar sondeo y secado 5 8 3 Procedimientos despu s del sondeo 5 8 3 Procedimientos despu s del sondeo Introducci n En esta secci n se describe c mo e coloque la tarjeta PVDF en el soporte de secado e coloque el soporte de secado en el compartimiento de secado y comience a secar e limpiar el recorrido del flujo de sondeo Desplace las tarjetas PVDF al compartimento de secado Paso Acci n 1 Retire un Amersham WB drying holder soporte de secado del compartimien to de secado y bralo 2 Tarjeta Agarre las asas de la tarjeta PVDF con los dedos o use la pinza de punta plana y extraiga la tarjeta PVDF de la c mara de sondeo Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 181 5 Realizar un experimento 5 8 Realizar sondeo y secado 5 8 3 Procedimientos despu s del sondeo Paso Acci n 3 Coloque la tarjeta PVDF en el soporte de secado encajando los orificios de la tarjeta PDVF en los tres pasadores gu a 4 Cierre el soporte de secado Aseg rese de que el soporte de secado est cerrado con el pestillo 182 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 5 Realizar
48. 7 Sustituir el cabezal de la bomba de transferencia Consulte Sustituir el cabezal de la bom ba de sondeo o de transferencia en la p gina 210 Sustituir el cabezal de la bomba de sondeo Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE Consulte Sustituir el cabezal de la bom ba de sondeo o de transferencia en la p gina 210 199 6 Mantenimiento 6 1 Programa de mantenimiento Intervalo Seg n sea necesario Medida de mantenimiento Instrucciones Limpiar el compartimento de secado Limpie el compartimento de secado de cualquier polvo o part culas utilizando un pa o que no deje pelusa mojado con agua ultra pura Deje que el comparti mento se seque antes de usarlo Sustituirlos electrodos de transferencia Consulte Sustituir los electrodos de transferencia en la p gina 213 Sustituir los soportes de tiras de solu ci n amortiguadora Para obtener informaci n sobre pedi dos consulte Amersham WB system User Manual Sustituir el fusible del suministro el ctri CO Consulte Sustituir el fusible del suminis tro el ctrico en la p gina 216 Sustituir el cable de alimentaci n da a do Consulte Precautions al comienzo de este cap tulo Sustituir el filtro en el dep sito de transferencia Inspeccione el filtro y si est sucio o da ado sustit yalo Consulte Sustituir el filtro del dep sito de transferencia en la p gina 215
49. 7 1 Especificaciones del sistema en la p gina 221 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 95 4 Instalaci n 4 1 Preparaci n del lugar Requisitos del ordenador Par metro Sistema operativo Windows 7 Professional 32 bit or 64 bit versi n en ingl s Navegador de Internet Windows Internet Explorer 8 o superior Resoluci n de pantalla 1280 x 800 o superior Rendimiento M nimo 2 GB de memoria f sica Recomendaci n 4 GB de memoria f sica Nota El ordenador debe instalarse colocarse y utilizarse conforme a las instruc ciones y especificaciones establecidas por el fabricante del ordenador 96 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 4 Instalaci n 4 2 Instalaci n del hardware 42 Instalaci n del hardware Desembalar el Amersham WB analyzer Consulte las instrucciones de desembalaje del Amersham WB analyzer Levante las unidades del instrumento y col quelas sobre la mesa ADVERTENCIA Aseg rese de que el sistema est colocado sobre una mesa estable y plana con espacio adecuado para la ventilaci n ADVERTENCIA No bloquee el acceso al interruptor de alimentaci n ni al cable de alimentaci n El interruptor de alimentaci n debe ser de f cil acceso en todo momento El cable de alimentaci n con enchufe debe ser f cil de desconectar en todo momento PRECAUCI N Equipo de Protecci n Personal EPP Durante
50. A Cuando trabaje con qu micos peligrosos evite los derrames y use gafas de protecci n y otros equipos de protecci n personal ade cuados Por ejemplo el NaOH es corrosivo y por tanto peligroso para la salud 202 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 6 Mantenimiento 6 2 Instrucciones de mantenimiento 6 2 1 Limpieza semanal de los recorridos de los flujos de transferencia y de sondeo Paso Acci n ll En el software seleccione Control Maintenance clean Transfer flow path o haga clic en el bot n Maintenance clean Transfer de la pantalla de inicio del software Resultado se abre el cuadro de di logo Maintenance Clean Transfer Flow Path Maintenance Clean Transfer Flow Path Maintenance cleaning of the transfer flow path 1 Wipe both transfer tubing with a wet tissue Insert the transfer Water tubing in 2000 ml water Insert the transfer Buffer tubing in 1000 ml wash solution Make sure that no transfer holders are left in the tank Note Discard all solutions after cleaning The procedure will take about 25 minutes Start clean Cancel 2 e Pase un pa o mojado para limpiar la parte superior del dep sito de transferencia y de los dos tubos de transferencia e Compruebe que el filtro del dep sito de transferencia est intacto y limpio Si fuera necesario sustituya el filtro 3 Sumerja el T Water tubo en una botella que contenga 2000 ml de agua
51. Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento Idioma de origen de la traducci n ingl s EE 5 A fi LS E C e map e 5 E SSS HA eres i l 6 5 lt Kali e L r E i sn a o gt P gina dejada intencionalmente en blanco ndice Indice 1 A a n 5 A pass O a E A 7 Le Informaci n importante para lOS USUAOTIOS psss 8 LS Iniomacionregidamnentatid ossessi E 10 1 4 Amersham WB system dOCUMEenNtaci N sssssssssssssssssssssrssrisiiriiiiirirrisrrirrrsrrsssrssssssssssssssssnssnssnssss 14 2 Instrucciones de seguridad essesseeseeseeseeseeseeseceserserseeseeseessesseesesseeseeseesseeseess 16 2 1 Precauciones de seguridad mccccconcconanonocononnncnnennnemernerrrrerrrrerrrrres 17 2 2 o Udo EA E E A E E EE EE 26 23 Procedimientos ae emergenciO vsripr iia 32 2A NO maci n soore TOCA O sotana 34 3 Descripci n del Sistema mesias 35 3 1 Descripci n general del iInStruMento coccincicninnncnnnnnnenarerrrr 36 32 Unidad EDO cia 40 o A sonas 45 Fal o A 46 53 2 Compartimentos de la unidad Western coccococcccacannnnnncenncennmeer 50 3 3 3 Recorridos de Nujos de lUidOS ll 55 3 4 Descripci n general de accesorios y consumibles sssssssssssssssssssssssssssssssssrssrssrirrerrerrrnnen 60 35 Consumibles premarcadoS vrai is 65 3 6 Accesorios y consumibles para electroforesis cococcoccicininmmrrerermss 67 36 1 Amersham WB molecular weight markers sssssssssssssssriirsssssssss
52. C a 28 C Temperatura ambiente almacenamiento de 25 C a 60 C y transporte Humedad relativa de funcionamiento De 20 a 80 sin condensaci n Para un rendimiento ptimo de 20 a 70 sin condensaci n Altitud M ximo 2 000 m Datos ambientales S lo para uso en interiores 94 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 4 Instalaci n 4 1 Preparaci n del lugar Requisitos de espacio ADVERTENCIA No bloquee el acceso al interruptor de alimentaci n ni al cable de alimentaci n El interruptor de alimentaci n debe ser de f cil acceso en todo momento El cable de alimentaci n con enchufe debe ser f cil de desconectar en todo momento Las unidades del instrumento deben colocarse sobre una mesa de laboratorio La mesa debe ser plana nivelada y estable estar limpia y ser capaz de soportar el peso del Amersham WB system unidades del instrumento 45 kg peso del ordenador port til y de los liquidos colocados sobre la unidad Western Para conocer los requisitos de espacio lea a continuaci n Deje al menos 10 cm de es pacio por detr s de las unidades del instrumento para que haya ventilaci n El espacio necesario para las dos unidades es de 90 cm Sin embargo se recomienda 140 cm de mesa disponible para que haya suficiente espacio para la preparaci n de reactivos manipulaci n de la tarjeta de gel etc Requisitos de alimentaci n Consulte Secci n
53. Cy CyDye MiniTrap y Sephadex son marcas comerciales de empre sas de GE Healthcare o de una de sus filiales Microsoft y Windows son marcas registradas de Microsoft Corporation Tween es una marca comercial de Unigema Americas LLC CyDye Este producto est fabricado bajo una licencia exclusiva de Carnegie Mellon University y est respaldado por los n meros de patentes estadouniden ses 5 569 587 y 5 627 027 La compra de productos CyDye incluye una licencia limitada para usar los pro ductos CyDye en investigaci n y desarrollo internos pero no con fines comercia les Existe una licencia para usar los productos CyDye con fines comerciales que est sujeta a un acuerdo de licencia por separado con GE Healthcare El resto de las marcas comerciales son propiedad de sus respectivos due os O 2014 2015 General Electric Company Todos los derechos reservados Primera edici n marzo 2014 Todos los productos y servicios se venden de conformidad con los t rminos y las condiciones de venta de la compa a de GE Healthcare que los provee Se dispone de una copia de estos t rminos y condiciones previa solicitud Comun quese con el representante local de GE Healthcare para obtener la informaci n m s reciente GE Healthcare Bio Sciences AB Bj rkgatan 30 751 84 Uppsala Sweden GE Healthcare Europe GmbH Munzinger Strasse 5 D 79111 Freiburg Germany GE Healthcare Bio Sciences Corp 800 Centennial Avenue P O Box 1327 Piscataway
54. Instalaci n del hardware Paso Acci n Al Conecte el ordenador con la unidad Elpho amp scan contacto Computer con el cable USB suministrado O a a au Western unit S v i h f Comprar Nota Cuando est conectado al Amersham WB analyzer se recomienda desactivar en el ordenador el modo de ahorro de energ a o estado de suspensi n o configurarlo para que ocurra a las 3 horas Al entrar en estado de suspensi n se interrumpir la conexi n de acceso remoto al instrumento lo cual significa que no se cargar el estado del ciclo hasta que el ordenador est activo de nuevo 2 Conectar la unidad Elpho amp scan contacto Western unit con la unidad Western contacto Elpho and scan unit con el cable Ethernet suministrado D Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 103 4 Instalaci n 4 2 Instalaci n del hardware Paso Acci n 3 Enchufe los cables de alimentaci n a sus conectores en las unidades qu PLL 4 Conecte los cables de alimentaci n a enchufes de pared con toma a tierra Consulte Secci n 7 1 Especificaciones del sistema en la p gina 221 para ver la informaci n relacionada con el voltaje y la frecuencia Nota No active el interruptor de encendido antes de que se hayan realizado to das las conexiones Montar las torres de los tubos de la unidad Western Las torres para los tubos de la unidad Western no vienen preinstaladas en
55. Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 75 3 Descripci n del sistema 3 6 Accesorios y consumibles para electroforesis 3 6 4 Amersham WB paper comb 3 6 4 Introducci n Amersham WB paper comb El peine de papel se usa para limpiar los pocillos de muestras tras haber migrado las prote nas al gel durante algunos minutos Se recomienda realizar la limpieza del pozo de muestras con el fin de eliminar el exceso de tinte cuando se utilizan muestras premar cadas De este modo se reduce el fondo que mejora la detecci n y cuantificaci n de prote nas abundantes bajas lt 1 ng banda y prote nas de peso molecular bajo M lt 40 000 Por lo general la limpieza del pocillo de muestras mejora la resoluci n de la banda tambi n para muestras no marcadas de concentraciones altas de prote na o vol menes elevados de muestra Para obtener m s informaci n sobre c mo usar el peine de papel consulte Comenzar y monitorizar la electroforesis y el an lisis de gel en la p gina 142 Ilustraci n del peine de papel 76 La ilustraci n que aparece a continuaci n muestra un peine de papel Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 3 Descripci n del sistema 3 7 Accesorios y consumibles para los pasos de la transferencia Western 3 7 Accesorios y consumibles para los pasos de la trans ferencia Western Introducci n En esta secci n se describen los accesorios y consumibles que se usan para la transfe
56. La tarjeta PVDF se humedece previamente en etanol y despu s se equilibra en la soluci n amortiguadora de transferencia 2 Se coloca una esponja en la parte inferior de la bandeja de transferencia tapa negra 3 Se moja un papel de transferencia en soluci n amortiguadora de transfe rencia y despu s se coloca en la bandeja de transferencia 4 El molde de gel incluido el gel con prote nas separadas son extra dos del soporte del molde de gel y colocados en la bandeja de transferencia 5 La tarjeta PVDF se coloca en la bandeja de transferencia 6 El segundo papel de transferencia se humedece previamente en la soluci n amortiguadora de transferencia y despu s se coloca en la bandeja de transferencia 7 Se eliminan las burbujas de aire usando el rodillo integrado en la bandeja de transferencia Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 5 Realizar un experimento 5 7 Realizar transferencia 5 7 2 Preparar el s ndwich de transferencia Fase Descripci n 8 Se coloca una segunda esponja sobre el papel de transferencia 9 Se cierra la bandeja de transferencia Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 151 5 Realizar un experimento 5 7 Realizar transferencia 5 7 2 Preparar el s ndwich de transferencia Prepare la tarjeta PVDF La instrucci n siguiente describe c mo prepararse para hacer un s ndwich de transfe rencia Paso Acci n 1 Extraiga un paquete nico de tarjetas
57. Nivel de sobretensi n Categor a de sobretensi n Datos ambientales Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE S lo para uso en interiores 221 7 Informaci n de referencia 7 1 Especificaciones del sistema Especificaciones del sistema Amersham WB analyzer Par metro Configuraci n del sistema Sistema de laboratorio que consiste en un ordenador externo y dos unidades Unidad Elpho amp scan y unidad Western El ordenador no se incluye con la entrega del producto Sistema operativo del ordenador de control PC con Windows 7 Software de control Amersham WB software Conexi n entre las unidades Elpho amp scan y Western Cable Ethernet Conexi n entre el ordenador y la unidad Elpho amp scan Cable USB Tipo A a Tipo B Grado de contaminaci n 2 Nivel de sonido Especificaciones del sistema de la unidad Elpho amp scan Par metro Dimensiones ancho x profundidad x altu ra Por debajo de 80 dB A 47x51x27cm Peso sin incluir ordenador 25 kg Fuente de alimentaci n Voltaje 100 240 V CA 10 Frecuencia 50 60 Hz Consumo de energ a Potencia m xima 300 VA Fuse 2x T4AH 250 V 222 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 7 Informaci n de referencia 7 1 Especificaciones del sistema Especificaciones del esc ner Par metro Sensor de imagen Fotodiodo de si
58. PVDF de la fase de secado Amersham WB mem brane adapter Adaptador de mem brana Secci n 3 7 4 Otros An lisis de indica dores de matriz de datos en tarje tas de gel y en paquetes de una tarjeta PVDF op cional 1 Se incluye con la entrega de Amersham WB analyzer 62 Lector de indicador de matriz se piden por separado Secci n 3 8 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 3 Descripci n del sistema 3 4 Descripci n general de accesorios y consumibles Pedido de consumibles En funci n de los experimentos que se vayan a realizar se necesitar n diferentes com binaciones de consumibles Hay una gu a de selecci n para preparar un kit de consumi bles disponible en www gelifesciences com Para obtener informaci n sobre pedidos de consumibles por separado consulte Amersham WB system User Manual Conservaci n de consumibles En la tabla que aparece a continuaci n se resumen la condiciones de conservaci n y medioambientales para los diferentes art culos consumibles La fecha de caducidad de los consumibles est impresa en el envase Consumible Temperatura de almacena Datos ambientales miento Consumibles premarcados 15 C a 30 C Proteja el contenido de la luz solar directa Evite la repetici n de ciclos de congelaci n des congelaci n del reactivo de tinte Cy5 Se debe usar reactivo de tinte Cy5 diluido y no congelado en un plazo de
59. S de la tarjeta de gel para ver las instrucciones de seguridad con respec to al gel y su eliminaci n PRECAUCI N Peligro de pinzamiento No toque la c mara de sondeo m vil du rante un ciclo de operaci n Antes del sondeo Aseg rese de que las soluciones amortiguadoras el agua ultra pura el anticuerpo las soluciones de bloqueo y las soluciones de lavado est n conectados antes de comenzar el sondeo Nota El agua ultra pura debe estar siempre conectada porque se usa para en juagar entre los pasos de sondeo La soluci n de lavado se utiliza para efectuar el lavado entre anticuerpos primarios en las posiciones A y B 176 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE Llenar previamente la c mara de sondeo y cargar las tarjetas PVDF Paso Ilustraci n de pasos 5 Realizar un experimento 5 8 Realizar sondeo y secado 5 8 2 Realizar el sondeo Acciones del operador Y PROBING amp DRYING Probing Pre Fill Ready for Probing pre fill Llene previamente la c mara de sondeo En el software haga clic en el paso del flujo de trabajo PRO BING amp DRYING e Haga clic en Pre Fill en el rea Probing Resultado La c mara de son deo se llena con unos pocos mil metros de la primera solu ci n que aparece en la tabla de secuencia del sondeo por defecto la soluci n de blo queo Nota Despu s de que se ha realizado el prellenado de las
60. TENCIA No bloquee el acceso al interruptor de alimentaci n ni al cable de alimentaci n El interruptor de alimentaci n debe ser de f cil acceso en todo momento El cable de alimentaci n con enchufe debe ser f cil de desconectar en todo momento ADVERTENCIA Protecci n a tierra y cable de alimentaci n El Amersham WB analyzer siempre debe estar conectado a un toma de corriente con descarga a tierra Utilice solamente el cable de alimentaci n de 3 hilos oficialmente autorizado suministrado o aprobado por GE o que cumpla todos los requisitos de los c digos locales sobre electricidad PRECAUCI N Nunca mueva la unidad Western con las botellas colocadas sobre esta PRECAUCI N Objeto pesado Para levantar las unidades del instrumento de forma segura son necesarias dos personas AVISO Cualquier ordenador que se utilice con el equipo deber cumplir la normativa IEC EN UL CSA 60950 1 u otras regulaciones relativas a la seguridad Deber instalarse y utilizarse conforme a las instruc ciones del fabricante AVISO Desconecte los cables Para prevenir da os al equipo desconecte siempre los cables antes de desplazar cualquier parte del instru mento O O gt D Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 21 2 Instrucciones de seguridad 2 1 Precauciones de seguridad Funcionamiento del sistema 22 ADVERTENCIA Explosi n de crist
61. a CyDye Longitud de onda de emi si n 83 Longitud de onda de excita ci n 83 Tipos de tarjetas de gel 71 Tira de soluci n amortiguadora Colocar en soporte de tiras de soluci n amortiguado ra 136 Descripci n 74 Torres de tubos Montar 104 Transferencia Comenzar y monitori zar 166 Conectar soluciones 148 Limpiar el recorrido del flujo de transferencia 198 Limpieza de mantenimiento del recorrido del flujo 202 Preparar y conectar las solu ciones 147 Principio b sico del proceso de transferencia 57 Sustituir cabezal de bomba de transferencia 210 Sustituir electrodos de transferencia 213 Sustituir filtro del dep sito de transferencia 215 U Unidad Western del instrumento 45 Unidad Elpho amp scan 40 Cerrar 141 Inicio 122 Limpiar 145 Unidad Western Compartimento de anticuer pos 53 Compartimento de seca do 52 Compartimento de servi cio 54 Compartimento de son deo 51 Dep sito de transferen cia 50 Inicio 123 V Ver resultados 190 W Western 45 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE P gina dejada intencionalmente en blanco Para obtener la informaci n de contacto de la oficina local visite www gelifesciences com contact GE Healthcare UK Limited Amersham Place Little Chalfont Buckinghamshire HP7 9NA Reino Unido www gelifesciences com GE y el monograma GE son marcas comerciales de General Electric Company Amersham
62. a autofluorescente Agua ultra pura Agua ultra pura 1 000 ml se usa para limpieza Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 147 5 Realizar un experimento 5 7 Realizar transferencia 5 7 1 Preparar y conectar soluciones de transferencia Conecte el tubo a la soluci n amortiguadora de transferencia y al agua ultra pura del soporte de botellas PRECAUCI N Para evitar la salpicadura de l quidos peligrosos utilice filtros de entrada robustos conectados a los tubos de las botellas Consulte Secci n 3 8 Otros accesorios en la p gina 87 para ver las descripciones de los filtros de entrada y de los soportes de los tubos Consulte Acoplar los soportes de los tubos en la p gina 106 para obtener informaci n sobre la forma de instalar los accesorios Antes de comenzar la transferencia conecte el tubo a la soluci n amortiguadora de transferencia y al agua ultra pura que se usa para limpiar el dep sito de transferencial de la forma siguiente Paso Acci n 1 Desde la torre de tubo de la izquierda coloque el tubo marcado T Buffer en una botella de 1000 ml de soluci n amortiguadora de transferencia 2 Coloque el tubo marcado T Water en una botella de 1000 ml con agua ultra pura 148 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 5 Realizar un experimento 5 7 Realizar transferencia 5 7 2 Preparar el s ndwich de transferencia 5 7 2 Preparar el s ndwich
63. against two different targets and two corresponding secondary antibodies for detection of the two targets individually This Western with total protein normalization f allows for unambiguous analysis of two targets of similar size in Easy SDS PAGE one experiment Create Samples should normally not be pre labeled for use in this experiment NI E Create new experiment Maintenance clean Open experiment based on a previous run Learn more aug E r manual Open New from existing Maintenance clean Transfer ennL Web resource Maintenance clean Probing Consejo Para mostrar el panel de ayuda con las instrucciones para la pantalla activa haga clic en el bot n del panel de ayuda o pulse F1 Para abrir el manual del usuario seleccione Help View user manual o pulse Ctrl F1 124 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 5 Realizar un experimento 5 3 Configurar un experimento en el software Crear y configurar un experimento Paso Ilustraci n de pasos Acciones del operador All Western experiments include necessary SDS PAGE steps D Easy Western O Western with total protein normalization D Western with endogenous protein normalization gt Easy SDS PAGE Create D Create New Experiment Seleccione el tipo de experi mento y haga clic en Create En este ejemplo Western with total protein normaliza tion Resultado se abre la pantalla principal del s
64. al No utilice el sistema si el cristal de la tapa de sellado de la unidad Elpho amp scan est rayado o roto Apague el instrumento desconecte el cable de alimentaci n y p ngase en contacto con un ingeniero de mantenimiento autorizado ADVERTENCIA Peligro de descarga el ctrica si se produce salpicadura durante el ciclo de operaci n Si existe el riesgo de que el l quido salpicado penetre la carcasa del Amersham WB analyzer apague el instru mento inmediatamente desconecte el cable de alimentaci n y p ngase en contacto con un ingeniero de mantenimiento autori zado ADVERTENCIA Despu s de la electroforesis o despu s de la transferencia cuando se ha abierto el s ndwich de transferencia y se ha colocado la tarjeta PVDF en el compartimento de sondeo elimine el gel de forma segura Lea la ficha de datos de seguridad SDS MSDS de la tarjeta de gel para ver las instrucciones de seguridad con respec to al gel y su eliminaci n PRECAUCI N Piezas en movimiento Tenga cuidado al abrir o cerrar el cargador para evitar que los dedos o la ropa queden atrapados cuando se mueve el cargador Nunca coloque botellas o frascos en frente de la unidad Elpho scan Pueden caerse cuando se abre el cargador gt bb gt gt PRECAUCI N Peligro de descarga el ctrica Detenga siempre cualquier ciclo de transferencia en curso antes de limpiar el l quido del instrumento o de la mesa Am
65. amiento 29 0214 77 AE 131 5 Realizar un experimento 5 5 Preparaci n del Amersham WB molecular weight markers 5 5 Preparaci n del Amersham WB molecular weight markers Introducci n Saque del congelador un envase de Amersham WB molecular weight markers marca dores de peso molecular suficiente para procesar dos tarjetas de gel y descong lelo completamente Experimentos Western En los experimentos de Western los Amersham WB molecular weight markers deben diluirse en una proporci n de 1 20 en la soluci n amortiguadora de carga antes de efectuar la carga en la tarjeta de gel Antes de usarse la soluci n amortiguadora de carga suministrada debe diluirse con agua ultra pura y contener el DTT agregado Paso Acci n 1 Agregue 29 ul de soluci n est ndar de 1 M DTT a los 0 7 ml un envase de soluci n amortiguadora de carga Mezcle con un agitador vorticial 2 Diluya el DTT que contiene la soluci n amortiguadora de carga con un volu men igual de agua ultra pura Mezcle con un agitador vorticial 3 Diluya los marcadores de peso molecular en una proporci n de 1 20 con la soluci n amortiguadora de carga preparada Nota Los marcadores de peso molecular pueden diluirse posteriormente en la soluci n amortiguadora de carga preparada para igualar las muestras con se ales d biles Sin embargo despu s es necesario seleccionar la opci n Stop electrophoresis on time Experimentos de electroforesis En experimen
66. ando los compartimentos de la unidad Western est n listos para usarse se mostrar un cuadro blanco por cada uno de los tres compartimentos transferencia sondeo y secado TRANSFER MN PROBING UN ORYING MN Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 123 5 Realizar un experimento 5 3 Configurar un experimento en el software 5 3 Configurar un experimento en el software Introducci n En esta secci n se describe c mo iniciar el Amersham WB software y c mo configurar un experimento Amersham WB en el software Para obtener informaci n detallada consulte el Amersham WB software Help en el panel derecho del software Iniciar el software Paso Acci n 1 Encienda el ordenador e inicie sesi n en Microsoft Windows 2 Haga doble clic en el icono Amersham WB software en el escritorio Amersham WB Software Resultado se muestra la pantalla de inicio del software g y G Amersham WB software EmA IN TM ES Amersham WB software Fie w Control wW Remote w Help w Create New Experiment Easy Western 6 All Western experiments include necessary SDS PAGE steps Western blot experiment for quick confirmation of protein identity and easy sample to sample comparison Easy Western One primary antibody against the specific target and a corresponding secondary antibody for the detection D Western with endogenous protein normalization Optionally two primary antibodies of different species
67. ano cuando utilice el Amersham WB analyzer Utilice el equipo Amersham WB analyzer nicamente en la forma indicada en la docu mentaci n de usuario De lo contrario puede quedar expuesto a peligros que causen lesiones a su persona y da os al equipo Uso previsto Amersham WB system es un sistema de electroforesis de prote nas y de transferencia Western que incluye el an lisis de tarjetas de gel y tarjetas PVDF Las prote nas pueden marcarse previamente con Cy5 para que puedan detectarse directamente en el gel despu s de la electroforesis En los experimentos Western las muestras de prote nas sin marcar o de prote nas Cy5 premarcadas se transfieren a las membranos y las pro te nas objetivo pueden detectarse con anticuerpos conjugados secundarios Cy3 y o Cy5 La detecci n basada en la fluorescencia proporciona una alta sensibilidad y un amplio espectro din mico adem s de permitir el an lisis multiplex de la misma mem brana de transferencia Western Amersham WB El system est dise ado para su uso en investigaci n nicamente y no debe ser empleado en procedimientos cl nicos ni para realizar diagn sticos Requisitos previos Para poner en funcionamiento el sistema en la forma indicada se deben respetar los requisitos previos indicados a continuaci n e Debe contar con conocimientos generales acerca de c mo funcionan un ordenador y el sistema Microsoft Windows e Debe comprender los conceptos de electroforesis y
68. antenimiento peri dico que se delinea a continuaci n Intervalo Medida de mantenimiento Despu s de cada ciclo de proceso de la unidad Elpho scan Instrucciones Limpie cualquier l quido que haya en la placa de la tarjeta Limpie cualquier l quido o suciedad que se encuentre en el vidrio protec tor de la tapa de sellado Inspeccione el vidrio de la tapa de sellado por si tuviera ralladuras o marcas y compruebe que el cristal est firmemente fijado al armaz n Inspeccione el pestillo de la tapa de sellado al cerrar el armaz n y elimi ne cualquier suciedad Utilice un pa o que no deje pelusa o un papel que no raye el vidrio protector o la placa de la tarjeta Utilice un pa o que no deje pelusa mo jado en una soluci n de 50 de etanol para eliminar las manchas P ngase en contacto con el departa mento de servicio si necesita sustituir una pieza de la tapa de sellado Limpie los soportes de las tiras de solu ci n amortiguadora Limpie los soportes de las tiras de solu ci n amortiguadora con agua corriente para eliminar las sales y la soluci n amortiguadora Deje los soportes de tiras de soluci n amortiguadora boca abajo para que se sequen al aire Limpiar los adaptadores de la membra na Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE Limpie los adaptadores de la membra na usando un pa o que no deje pelusa y col quelos en el espacio de conserva ci n
69. ararlo Health amp Safety Declaration Form for Product Return or Servicing Return authorization and or number Service Ticket Request To make sure the mutual protection and safety of GE personnel our customers transportation personnel and our environment all equipment must be clean and free of any hazardous contaminants before shipping to GE To avoid delays in the processing of your equipment please complete this checklist and include it with your return 1 Please note that items will NOT be accepted for servicing or return without this form 2 Equipment which is not sufficiently cleaned prior to return to GE may lead to delays in servicing the equipment and could be subject to additional charges 3 Visible contamination will be assumed hazardous and additional cleaning and decontamination charges will be applied Please specify if the equipment has been in contact with any of the following Radioactivity please specify Infectious or hazardous biological substances please specify Other Hazardous Chemicals please specify Equipment must be decontaminated prior to service return Please provide a telephone number where GE can contact you for additional information concerning the system equipment Telephone No Liquid and or gas in equipment is Water Ethanol None empty Argon Helium Nitrogen Liquid Nitrogen Other please
70. arde los peines de papel en un lugar seco y en la caja en la que se entregaron Prot jalos del polvo Amersham WB sponge Temperatura ambiente Prot jalos del polvo y de la luz solar directa Amersham WB goat anti mou se Cy3 Cy5 o Amersham WB anti rabbit Cy3 Cy5 liofilizados De 2 C a 8 C Proteja los anticuerpos secun darios de la luz Anticuerpos reconstituidos se cundarios reconstituidos en agua ultra pura con una con centraci n de 1 ug ul Almacene las partes al cuotas a una temperatura de entre 15 C y 30 C Proteja de la luz los anticuer pos reconstituidos secundarios Las partes al cuotas no deben conservarse durante periodos superiores a 6 meses Evite la repetici n de ciclos de congela ci n descongelaci n Anticuerpos primarios 64 Consulte las instrucciones del fabricante Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE Consulte las instrucciones del fabricante 3 Descripci n del sistema 3 5 Consumibles premarcados 3 5 Consumibles premarcados Introducci n Los consumibles premarcados se usan para el premarcado de muestras de prote nas con tinte fluorescente Premarcaje fluorescente de muestras e permite la detecci n total de prote nas al analizar la tarjeta de gel e elimina la necesidad de colorear posteriormente el gel Uso del premarcaje de proteinas El premarcaje de prote nas se hace siempre antes de la fase de
71. cciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 17 2 Instrucciones de seguridad 2 1 Precauciones de seguridad ADVERTENCIA No utilice el equipo Amersham WB analyzer si no funciona correc tamente o si ha sufrido alg n da o por ejemplo e da os en el cable de alimentaci n o el enchufe e da os causados porque el equipo se cay e da os en otras piezas que pueden afectar el funcionamiento L quidos inflamables PRECAUCI N Peligro de incendio e Sise ha derramado l quido en el exterior del dispositivo Elpho amp scan o en la carcasa de la unidad Western desconecte la corriente y pase un pa o para eliminar el l quido e Sise ha derramado l quido sobre las partes del instrumento penetrando la carcasa del Elpho amp scan o de la unidad Western desconecte el cable de alimentaci n que va a las unidades y p ngase en contacto con el departamento de mantenimiento PRECAUCI N Peligro de incendio Aseg rese de que los tubos de residuos que vienen de la unidad Western sean dirigidos hacia la botella de re siduos que est ubicada debajo de la mesa y de que no haya nin guna fuga antes comenzar un ciclo de funcionamiento Se necesita una botella de residuos vac a de al menos 4 litros PRECAUCI N Peligro de incendio No utilice soluciones amortiguadoras de transferencia que contengan m s de un 40 de etanol o m s de un 40 de metanol Se recomienda utilizar solamente un 20 de etanol e
72. clic en Next Please read the following license agreement carefully GE Healthcare 3 E STANDARD SOFTWARE END USER LICENSE AGREEMENT FOR LIFE SCIENCES SOFTWARE PRODUCTS IMPORTANT PLEASE READ CAREFULLY THIS IS THE LICENSE AGREEMENT THAT END USER IS REQUIRED TO ACCEPT BEFORE INSTALLING AND USING GE HEALTHCARE SOFTWARE CAREFULLY READ ALL OF THE TERMS AND CONDITIONS OF THIS LICENSE AGREEMENT BEFORE PROCEEDING 9 I accept the terms in the license agreement I do not accept the terms in the license agreement InstallShield lt Bak J _next gt 5 e Para cambiar el directorio predeterminado no se recomienda haga clic en Change y navegue hasta el directorio deseado e Haga clic en Next Click Next to install to this folder or dick Change to install to a differi E7 Install Amersham WB software to C Program Files x86 GE Healthcare Amersham WB software Installshield Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 113 4 Instalaci n 4 3 Instalaci n del software Paso Acci n 6 e Para revisar o cambiarla configuraci n de instalaci n haga clic en Back e Para comenzar la instalaci n haga clic en Install The wizard is ready to begin installation Click Install to begin the installation If you want to review or change any of your installation settings dick Back Click Cancel to exit the wizard InstallShield oao oooO i Haga clic en Finish
73. conectar sondas y solu ciones de anticuerpos en la p gina 172 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 167 5 Realizar un experimento 5 7 Realizar transferencia 5 7 4 Procedimientos despu s de la transferencia 5 7 4 Procedimientos despu s de la transferencia Introducci n En esta secci n se describen los procedimientos de limpieza que se realizan despu s de la transferencia Retirar los recipientes de transferencia Paso Acci n 1 Abra la tapa del dep sito de transferencia 2 Retire los recipientes de transferencia Cu lguelos diagonalmente en la parte interna frontal del dep sito de transferencia por encima del l quido Nota Para evitar que se sequen las membranas no abra los recipientes de transfe rencia en este paso 168 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 5 Realizar un experimento 5 7 Realizar transferencia 5 7 4 Procedimientos despu s de la transferencia Limpie el recorrido del flujo de transferencia Nota Antes de ponerse a limpiar retire el recipiente de transferencia Paso Acci n 1 Cuando se finaliza la transferencia se abre el cuadro de di logo Transfer Completed Clean Transfer Flow Path Nota Se recomienda limpiar el recorrido del flujo de transferencia despu s de un ciclo Si decide no limpiar el recorrido del flujo de transferencia haga clic en Cancel y proceda con el Contin e con el sondeo en la p
74. contie Help ne informaci n acerca de e flujos de trabajo del usuario para realizar electroforesis y experimen tos Western descripciones del software v nculos al Amersham WB system User Manual para obtener informa ci n detallada sobre la manipula ci n del instrumento accesorios y consumibles Manual de m todos Disponibilidad Integrado con Amersham WB software en el panel de recho del software El manual Western Blotting Principles and Methods constituye una gu a del flujo de trabajo de transferencia Western completo Describe los aspectos te ricos y pr cticos de la t cnica adem s de incluir sugerencias y consejos tiles El objetivo del manual es guiar e inspirar a los principiantes as como a los expertos a la realizaci n de operaciones de transferencia Western correctas Descargue o pida el manual Western Blotting Principles and Methods 28 9998 97 en www gelifesciences com Archivos de datos y notas de aplicaciones Los archivos de datos y las notas de aplicaci n pueden pedirse o descargarse en www gelifesciences com Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 15 2 Instrucciones de seguridad 2 Instrucciones de seguridad Acerca de este cap tulo Este cap tulo describe las precauciones de seguridad y los procedimientos de parada de emergencia para el Amersham WB system Tambi n se describen las etiquetas del instrumento e informaci n re
75. cuando se mueve el cargador Nunca coloque botellas o frascos en frente de la unidad Elpho scan Pueden caerse cuando se abre el cargador Paso Ilustraci n de pasos Acciones del operador Pulse el bot n de expulsi n en la unidad Elpho amp scan a Resultado se expulsa el cargador e Gire el pestillo hacia arriba y abra la tapa de sellado e Con un pa o que no deje pelusa limpie cualquier l quido y suciedad del vidrio protector de la placa de la tarjeta Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 187 5 Realizar un experimento 5 9 Analizar membrana y ver los resultados Paso Ilustraci n de pasos Acciones del operador e Saque un adaptador de membrana del compartimento de anticuerpos de la unidad Western Nota Aseg rese de que el adaptador de mem brana est seco y limpio e Abra el adaptador de membrana y col quelo sobre la placa de la tarjeta ajustan do los orificios gu a del adaptador de membrana a los pasadores gu a Nota Tenga cuidado de no rayar la placa de la tarjeta con ning n objeto afilado Abra el soporte de secado Retire la tarjeta PVDF del soporte de secado y coloque la tarjeta en el adaptador de la membrana encajando los orificios gu a en los pasadores gu a Nota Tenga cuidado de no tocar el rea de transfe rencia de la tarjeta PVDF 188 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento
76. cuerpos primarios y luego con anti cuerpos secundarios conjugados con CyDye e secar las tarjetas PVDF antes de analizarlas en la unidad Elpho amp scan Esta secci n ofrece una descripci n general de la unidad Western En esta secci n Esta secci n contiene las siguientes subsecciones Secci n Consulte la p gina 3 3 1 Informaci n general 46 3 3 2 Compartimentos de la unidad Western 50 3 3 3 Recorridos de flujos de l quidos 55 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 45 3 Descripci n del sistema 3 3 Unidad Western 3 3 1 Informaci n general 3 3 1 Informaci n general Introducci n En esta secci n se muestra una descripci n general de los paneles frontal y posterior de la unidad Western Ilustraci n de la unidad Western La ilustraci n siguiente muestra las partes principales de la unidad Western Descripci n 1 Tapa del compartimento de anticuerpos 2 Lugar que se presiona para abrirla tapa del compartimento de anticuerpos 3 Panel de instrumentos para los indicadores de estado 4 Tapa del dep sito de transferencia 46 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 3 Descripci n del sistema 3 3 Unidad Western 3 3 1 Informaci n general Descripci n Soporte de botellas y tapa del compartimento de servicio Nota Retire el soporte de botellas solamente cuando se hayan inspeccionado las bombas y los tubos o cuando s
77. d 12 Filtro de aire Sustituir el filtro de aire 207 Filtro de entrada Instalar los filtros de entra da en los tubos 106 Soporte del filtro de entra da 87 Sustituir filtro de entra da 216 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE ndice Filtro del dep sito de transfe rencia Sustituir filtro del dep sito de transferencia 215 Fusible de suministro el ctrico Sustituir fusible del suminis tro el ctrico 216 G Gu as de secador de membra na Instalar gu as de secador de membrana 108 Impreso de declaraci n relativo a salud y seguridad 229 230 Indicadores 38 Indicadores del instrumento 38 Informaci n de fabricaci n 10 Informaci n normativa 10 Cumplimiento normativo del equipo conectado 13 Informaci n reglamentaria Conformidad medioambien tal 12 Normas internacionales 11 Normativas y normas de aplicaci n al l ser 12 Informaci n sobre pedidos Pedido de consumibles 63 Instalaci n Instalaci n del softwa re 111 Instalar electrodos de transferencia 100 Instalar gu as de secador de membrana 108 Instalar lector de indicador de matriz 110 Montar las torres de tu bos 104 Requisitos de espacio 95 Requisitos de la sala 94 Requisitos inform ticos 96 Instrumento Comprobar la conexi n del instrumento 115 Conectar al ordenador 103 233 ndice 234 Conectar cables de alimen taci n 104 Conecte las unidades del instrumento 103 Elpho a
78. dad Western Ilustraci n del compartimento de anticuerpos La ilustraci n siguiente muestra el compartimento de anticuerpos donde se insertan antes del sondeo tubos con 15 ml de soluci n de anticuerpo que contienen anticuerpos primarios y secundarios lado izquierdo Para obtener m s informaci n consulte Conecte los tubos de soluci n de anticuerpos en la p gina 173 El lado derecho del compartimento se usa para almacenaje de Amersham WB membrane adapters adaptadores de membrana Descripci n 1 Soporte de tubo 2 Tubos 3 Pestillo de puerta magn tico 4 Adaptadores de membrana 5 Soporte de adaptadores de membrana 6 Pestillo de puerta Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 53 3 Descripci n del sistema 3 3 Unidad Western 3 3 2 Compartimentos de la unidad Western Pieza Descripci n i Indicador de posici n del tubo de soluci n de anticuerpos A PRIMARY A SECONDARY B PRIMARY y B SECONDARY Ilustraci n del compartimento de servicio La ilustraci n siguiente muestra el compartimento de servicio de la unidad Western Descripci n Bloqueo de la v lvula de transferencia Bomba de sondeo Bomba de transferencia Tapa del compartimento del filtro de aire Bloqueo de la v lvula de sondeo 54 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 3 Descripci n del sistema 3 3 Unidad Western 3 3 3 Recorridos de flu
79. dadosamente 3 El soporte del molde de gel permanece en la mesa Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 157 5 Realizar un experimento 5 7 Realizar transferencia 5 7 2 Preparar el s ndwich de transferencia Suelte el molde de gel de su soporte y col quelo en la bandeja de transferencia Nota No toque la zona de gel marcada con una cruz roja cuando afloje el molde de gel Paso Ilustraci n de pasos Acciones del operador Sujete la tarjeta de gel con un fir me agarre Retire la pel cula pro tectora agarrando el extremo indi cado con una flecha naranja y ti rando de l diagonalmente en la direcci n de la flecha 158 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE Paso Ilustraci n de pasos 5 Realizar un experimento 5 7 Realizar transferencia 5 7 2 Preparar el s ndwich de transferencia Acciones del operador Coloque la tarjeta de gel sobre la mesa con el gel expuesto hacia arriba como se ilustra en la ima gen Sujete las esquinas del molde infe rior de gel y afloje el molde de gel entre las esquinas inferiores hasta donde lo indica la l nea de puntos y las flechas Nota Cuando se afloje el gel siga presio nando la tarjeta de gel en direcci n del banco con los dedos Sujete las esquinas del molde su perior de gel y afloje el molde de gel hasta donde lo indica la l nea de puntos Aseg rese de que el mo
80. de Reglamentaciones Federa les 21 CFR T tulo 1 Subcap tulo J Parte 1040 10 Productos l ser Conformidad con FCC Este equipo cumple con la Parte 15 de las reglas de la Confederaci n Federal de Comu nicaciones FCC estadounidense Su funcionamiento est sujeto a las dos condiciones siguientes 1 Este dispositivo no puede causar interferencias da inas y 2 debe aceptar cualquier interferencia recibida incluidas aquellas que puedan originar un funcionamiento no deseado Nota Se advierte al usuario que cualquier cambio o modificaci n no aprobado expresamente por GE podr a anular la autoridad del usuario para operar el equipo Este equipo fue probado y se determin que cumple con los l mites de un dispositivo digital Clase A conforme a la Parte 15 de las normas FCC Estos l mites se han previsto para ofrecer una protecci n razonable contra interferencias da inas cuando se utiliza en un entorno comercial Este equipo genera utiliza y puede emitir energ a de radiofre cuencia y si no se instala y utiliza conforme al manual de instrucciones puede causar interferencias perjudiciales para las radiocomunicaciones La utilizaci n de este equipo en un rea residencial podr a provocar interferencias da inas en cuyo caso el usuario deber corregir la interferencia por cuenta propia Conformidad medioambiental L2 Regulaci n T tulo 2011 65 EU Directiva de Restricci n de sustancias peligrosas RoHS 2012
81. de mantenimiento 6 2 2 Procedimientos de reemplazo Sustituir el filtro del dep sito de transferencia Nota Si el filtro de transferencia est sucio no se debe quitar limpiar y colocar de nuevo Debe sustituirse En las instrucciones siguientes se describe c mo sustituir el filtro del dep sito de trans ferencia Paso Acci n 1 Abra la tapa del dep sito de transferencia El filtro est ubicado en la parte inferior del dep sito de transferencia 2 Utilizando pinzas perfore la parte central del filtro Nota No retire el filtro sujetando sus bordes ya que podr a da ar la junta herm tica del filtro 3 Utilice el orificio para sujetar y retirar el filtro 4 Coloque el nuevo filtro y presi nelo con suavidad contra la junta herm tica Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 215 6 Mantenimiento 6 2 Instrucciones de mantenimiento 6 2 2 Procedimientos de reemplazo Cambiar los filtros de entrada Sustituya el filtro de entrada cuando sea necesario por ejemplo cuando est atascado Materiales necesarios Conjunto de filtro de entrada Siga las instrucciones siguientes para sustituir un filtro de entrada y una rejilla de soporte Paso Acci n 1 Quite el filtro de entrada y la red de soporte del soporte de filtro de entrada AS Encaje la nueva rejilla de soporte y el nuevo filtro de entrada en el soporte de filtro o presione el filtro para que encaje en posici n Sust
82. del compartimento de anticuerpos 197 6 Mantenimiento 6 1 Programa de mantenimiento Intervalo Medida de mantenimiento Despu s de cada ciclo de proceso de la unidad Western Instrucciones 198 Limpiar el recorrido del flujo de transfe rencia Si tras completar la transferencia no se limpi el recorrido del flujo de trans ferencia ejecute el procedimiento de limpieza haciendo clic en Control Clean Transfer flow path en la barra de me n s Limpiar recorrido del flujo de sondeo Si tras completar el sondeo no se limpi el recorrido del flujo de sondeo ejecute el procedimiento de limpieza haciendo clic en Control Clean Probing flow path en la barra de men s Limpiar la bandeja de transferencia Consulte Limpiar la bandeja de transfe rencia en la p gina 170 Limpiar los soportes de secado Limpie los soportes de secado con un pa o que no desprenda pelusa y col quelos en el compartimiento de secado Retirar cualquier part cula del dep sito de transferencia Inspeccione el dep sito y retire cual quier residuo de gel o fibras de papel con unas pinzas Compruebe el filtro del dep sito de transferencia y sustit yalo si est sucio consulte Sustituir el filtro del dep sito de transferencia en la p gina 215 Limpiar la parte superior del dep sito de transferencia Limpie la parte superior del dep sito de transferencia con un pa o mojado Amersham WB sys
83. deo Principio b sico del proceso de sondeo Al realizar el sondeo los anticuerpos primarios se unen a las prote nas sobre la membrana y a continuaci n los anticuerpos secundarios conjugados con CyDye se unen a los anticuerpos primarios El principio b sico del proceso de sondeo se describe a continuaci n Fase Descripci n 1 La c mara de sondeo se llena previamente con la primera soluci n tal y como se introduce en el protocolo de sondeo del software se utiliza soluci n de bloqueo como opci n predeterminada El usuario inicia el prellenado de la c mara de sondeo seleccionando la instrucci n de software apropiada 2 Las tarjetas PVDF se insertan en las c maras de sondeo y se realizan incu baciones secuenciales incluidos los pasos de lavado de la membrana con soluci n de bloqueo anticuerpos primarios y anticuerpos secundarios Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 59 3 Descripci n del sistema 3 4 Descripci n general de accesorios y consumibles 3 4 Descripci n general de accesorios y consumibles Introducci n En esta secci n se ofrece un resumen de los accesorios y consumibles que se deben usar con el Amersham WB analyzer Tambi n contiene informaci n sobre el almacena miento de los consumibles e informaci n sobre c mo realizar pedidos Accesorios y consumibles La tabla que aparece a continuaci n enumera los accesorios y consumibles que se usan con el inst
84. documentaci n del usuario y e seuse en el mismo estado en que fue entregado por GE a excepci n de las modifi caciones descritas en la documentaci n del usuario Normas internacionales Los requisitos de las normas con los que cumple este producto se resumen en la tabla que aparece a continuaci n Descripci n EN IEC 61010 1 UL Requisitos de seguridad para equi Lanorma EN es 61010 1 CAN CSA C22 2 pos el ctricos de medici n control t armonizada N 1010 1 y uso en laboratorio con la directiva 2006 95 CE de la UE EN IEC61326 1 Equipos el ctricos para fines de La norma EN es medici n control y laboratorio re t armonizada quisitos del EMC con la directiva 2004 108 CE de la UE Emisiones seg n CISPR 11 Grupo 1 clase A EN ISO 12100 Seguridad de m quinas Principios La norma ISO generales de dise o Evaluaci n de EN est armoni riesgos y reducci n de riesgos zada con la di rectiva de la UE 2006 42 CE EN IEC 60825 1 Seguridad de los productos l ser La norma EN es t armonizada con la directiva 2006 95 CE de la UE Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 11 1 Introducci n 1 3 Informaci n reglamentaria Normativas y normas del l ser Este equipo es un producto l ser de clase 1 IEC 60825 1 2007 EN 60825 1 2007 Este instrumento cumple con los requisitos de seguridad de radia ci n l ser especificados en el C digo
85. e Elpho scan Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 31 2 Instrucciones de seguridad 2 3 Procedimientos de emergencia 2 3 Procedimientos de emergencia Introducci n En esta secci n se describe c mo realizar una parada de emergencia del Amersham WB analyzer y las consecuencias en caso de un fallo de la alimentaci n el ctrica Parada de emergencia En una situaci n de emergencia desconecte los cables de alimentaci n de los paneles posteriores de la unidad Elpho amp scan y de la unidad Western De este modo se asegurar que la alimentaci n se corte inmediatamente incluso si se utiliza un sistema de alimentaci n ininterrumpida SAI Fallo de alimentaci n Las consecuencias de un fallo de alimentaci n el ctrica se describen a continuaci n Un fallo de alimenta produce ci n en Amersham WB analyzer e Todo experimento que est en ejecuci n se detendr Los experimentos no se continuar n cuando se resta blezca la alimentaci n el ctrica Nota Gracias a un SAI se puede eliminar la p rdida de datos durante y despu s de un corte de energ a y proporcio nar el tiempo necesario para realizar una parada con trolada del Amersham WB analyzer e La hora de la detenci n se registrar en el software de las unidades del instrumento 32 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 2 Instrucciones de seguridad 2 3 Procedim
86. e gel y las tarjetas PVDF 4 Cierre la tapa de sellado y pulse el bot n de expulsi n en la unidad Elpho scan Resultado se inserta el cargador 5 Limpie los soportes de las tiras de soluci n amortiguadora con agua corriente para eliminar las sales y la soluci n amortiguadora Deje los soportes de tiras de soluci n amortiguadora boca abajo para que se sequen al aire Continuar con la transferencia Realice uno de los siguientes pasos e Si se han preparado y conectado soluciones de transferencia a la unidad Western proceda con las instrucciones en Secci n 5 7 2 Preparar el s ndwich de transferencia en la p gina 149 de lo contrario e Contin e con las instrucciones en Secci n 5 7 1 Preparar y conectar soluciones de transferencia en la p gina 147 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 145 5 Realizar un experimento 5 7 Realizar transferencia 5 7 Realizar transferencia Introducci n En esta secci n se describe c mo preparar el s ndwich de transferencia c mo comenzar y monitorizar el ciclo de transferencia y los procedimientos que se van a realizar despu s del ciclo de transferencia En esta secci n Esta secci n contiene las siguientes subsecciones Secci n Consulte la p gina 5 7 1 Preparar y conectar soluciones de transferencia 147 5 7 2 Preparar el s ndwich de transferencia 149 5 7 3 Ejecutar transferencia 164 5 7 4 Procedimientos despu s de la transfere
87. e sustituyen las piezas como se describe en Cap tulo 6 Mantenimiento en la p gina 193 Soportes para tuber a Tapa del compartimento de sondeo Tapa del compartimento de secado Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 47 3 Descripci n del sistema 3 3 Unidad Western 3 3 1 Informaci n general Ilustraci n del panel posterior de la unidad Western La ilustraci n siguiente muestra las partes principales del panel posterior de la unidad Western 1 2 S D O5 E Descripci n 1 Salidas para residuos y tubos de desague 2 Conexi n de comunicaciones para Elpho amp scan utilizar cable Ethernet 3 Conector de cable de alimentaci n 60320 C14 4 Portafusibles 5 x 20 mm 5 Interruptor de suministro el ctrico ON l OFF 0 6 Salidas de aire 48 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 3 Descripci n del sistema 3 3 Unidad Western 3 3 1 Informaci n general Pieza Descripci n Entrada de aire Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 49 3 Descripci n del sistema 3 3 Unidad Western 3 3 2 Compartimentos de la unidad Western 3 3 2 Compartimentos de la unidad Western Introducci n En esta secci n se describen los diferentes compartimentos de la unidad Western con las tapas abiertas Ilustraci n del dep sito de transferencia La ilustraci n siguiente muestra el dep sito de transfe
88. el llenado vaciado transporte o traslado del sistema debe utilizar siempre e Calzado de protecci n preferiblemente con recubrimiento de acero e Guantes de trabajo para protegerse de los bordes afilados e Guantes protectores PRECAUCI N Objeto pesado Para levantar las unidades del instrumento de forma segura son necesarias dos personas Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 97 4 Instalaci n 4 2 Instalaci n del hardware Paso Acci n 1 Levante las unidades del instrumento manualmente utilizando el espacio para levantamiento que se encuentra a su lado Aseg rese de que las uni dades se colocan sobre una mesa estable y plana 2 Levante la primera unidad del instrumento Agarre el instrumento por debajo y por los lados utilizando las cavidades en la espuma Col quelo sobre una mesa de laboratorio 3 Levante la otra unidad del instrumento y col quela sobre una mesa de la boratorio 98 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 4 Instalaci n 4 2 Instalaci n del hardware Paso Acci n 4 Para que haya una buena ventilaci n la unidad Elpho amp scan tiene que ser colocada a la izquierda y la unidad Western a la derecha Deje al menos 10 cm de espacio por detr s de las unidades del instrumento para que haya ventilaci n No bloquee el acceso al interruptor de alimentaci n ni al cable de alimenta ci n 5 Ajuste las patas pa
89. el marcaje tambi n variar en funci n de las prote nas 128 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 5 Realizar un experimento 5 4 Realizar el premarcaje de muestras Requisitos previos de premarcaje de muestras mediante el protocolo de premarcaje Western Soluciones amortiguadoras para lisis compatibles Las soluciones amortiguadoras comunes para lisis con base de tris y pH de 7 a 9 y con diversos detergentes y sales son compatibles con el premarcaje de muestras de c lu la tejido por ejemplo e Soluci n amortiguadora de extracci n de prote nas de mam feros de GE e Soluci n amortiguadora RIPA pH de la muestra El pH de la muestra debe ser de entre 7 y 9 Un ptimo pH no es crucial para los lisados de c lulas y extractos de tejidos ya que una alta sensibilidad de la se al de la prote na no es necesaria La se al de las prote nas totales en un experimento de Western con normalizaci n de prote nas totales debe ser proporcional a la cantidad de prote nas que no depende de una alta sensibilidad Soluciones y materiales necesarios Se necesitan las siguientes soluciones y materiales para el premarcaje de prote nas e Consumibles para premarcaje reactivo Cy5 soluci n amortiguadora de marcaje soluci n amortiguadora de carga e 1Mdesoluci n est ndar de ditiotreitol DTT y agua ultra pura si se va a realizar una reducci n de la SDS PAGE e Agua ultra pura para diluir el
90. el momento de la entrega y deben ser montadas por el usuario Paso Acci n 1 Abra la bolsa de pl stico que contiene las torres y los tubos 104 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE Paso Acci n 4 Instalaci n 4 2 Instalaci n del hardware 2 Presione cada torre hacia el interior del orificio y g rela en el sentido de las agujas del reloj hasta que encaje en posici n con un chasquido Los tubos deben instalarse de la siguiente manera Posici n de la torre visto desde la parte frontal del instrumento Izquierda T buffer y T water Medio P water P block y P wash Derecha Nota P Final wash y P Custom Tenga cuidado de no quitar ninguna de las etiquetas de los tubos al montar las torres Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 105 4 Instalaci n 4 2 Instalaci n del hardware Acoplar los soportes de los tubos Para compensar las tensiones que se producen al colocar los tubos en las botellas y para evitar que se caigan las botellas cuando disminuye el nivel de l quido se deben acoplar soportes a todos los tubos Nota Se deben instalar soportes en todos los tubos antes de acoplar los filtros de entrada Paso Acci n 1 Inserte un tubo en el orificio del soporte de tubo 2 Contin e insertando el extremo abierto del tubo por la ranura del soporte de tubo Nota Aseg rese de que las etiquetas de los tubos est n todav
91. encia y se ha colocado la tarjeta PVDF en el compartimento de sondeo elimine el gel de forma segura Lea la ficha de datos de seguridad SDS MSDS de la tarjeta de gel para ver las instrucciones de seguridad con respec to al gel y su eliminaci n Nota Realice este paso cuando se haya abierto el s ndwich de transferencia y se haya colocado la tarjeta PVDF en la c mara de sondeo Paso Acci n 1 Retire el gel del s ndwich de transferencia Deseche el gel conforme a las instrucciones de los procedimientos de SDS MSDS y procedimientos locales para el manejo de residuos 2 Retire y elimine las esponjas y los papeles de transferencia 3 Limpie las diferentes partes de la bandeja de transferencia con agua corrien te 4 Deje secar al aire la bandeja de transferencia Contin e con el sondeo 170 Realice uno de los siguientes pasos e Si se han preparado las soluciones de sondeo y de anticuerpos y se han conectado a la unidad Western proceda siguiendo las instrucciones de Secci n 5 8 2 Realizar el sondeo en la p gina 176 de lo contrario e Contin e con las instrucciones en Secci n 5 8 1 Preparar y conectar sondas y solucio nes de anticuerpos en la p gina 172 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 5 Realizar un experimento 5 8 Realizar sondeo y secado 5 8 Realizar sondeo y secado Introducci n En esta secci n se describe c mo realizar el sondeo y el secado E
92. ento 29 0214 77 AE 91 3 Descripci n del sistema 3 9 Descripci n general del software Descripci n Panel de estado del instrumento El panel de estado del instrumento muestra el estado de conexi n del instrumento Cuando el instrumento est conectado se muestra el estado de cada m dulo de hardware compartimento de electroforesis y de an lisis dep sito de transferencia compartimento de sondeo y compartimento de secado y el progreso de cualquier ciclo en los m dulos Pueden abrirse varios experimentos al mismo tiempo Cada experimento requiere que se inicie de nuevo el software El panel de estado del instrumento mostrar el estado del instrumento en todos los experimentos abiertos Se puede utilizar un m dulo de hardware por cada experimento a la vez Esto significa que se pueden ejecutar en paralelo cuatro pasos diferentes del flujo de trabajo de cuatro experimentos diferentes Panel de ayuda El panel de ayuda muestra las instrucciones de ayuda para la pantalla que se muestra en ese momento en el rea de trabajo Al seleccionar un nuevo paso del flujo de trabajo las instrucciones de ayuda se actualizan autom ticamente con el fin de mostrar la ayuda para la pantalla activa Consejo Para ver el manual de usuario que contiene informaci n detallada sobre el sistema selec cione Help View user manual en la barra de men s o pulse Ctrl F1 92 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE
93. eo prellenada ajus tando los orificios de la tarjeta PVDF a los pasadores gu a marca dos con c rculos de color naranja y haciendo rodar la tarjeta PVDF en la c mara de sondeo Nota Tenga cuidado de no tocar el rea de transferencia de la tarjeta PVDF Cierre la tapa de la c mara de sondeo y la tapa del compartimen to de sondeo Aseg rese de que la tapa de la c mara de sondeo est bloqueada con el pestillo Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 179 5 Realizar un experimento 5 8 Realizar sondeo y secado 5 8 2 Realizar el sondeo Comenzar y monitorizar el sondeo Paso Ilustraci n de pasos Acciones del operador En el software haga clic en el pa amp A so de flujo de trabajo PROBING DRYING PROBING amp DRYING ETENE Dur iein Teea Utilice la configuraci n predetermi nada para los Probing steps en 0 ES pS 0 1 Insert step el rea Probing como se muestra 2 Wash m 2 Removesteg en la instant nea de pantalla 3 Primary antibody w 60 1 A Wash mi TE Defaut 3 Secondary antibody e 30 1 i 6 Wash Ni a 7 Final wash se 1 6 e Total time 2 31 h Haga clic en Start odi Resultado comienza el sondeo Start Ready for Probing El paso de sondeo que est en curso se muestra en el rea Pro bing Probing MAA SO Ready at Remaining time l Baa e lei 163
94. er to move equipment from normal operating location prior to GE arrival Provide explanation for any No answers here Consumables such as columns or gels have been removed or isolated from the instrument and from any area that may impede access to the instrument All buffer waste vessels are labeled Excess containers have been removed from the area to provide access Equipment type Product No Serial No hereby confirm that the equipment specified above has been cleaned to remove any hazardous substances and that the area has been made safe and accessible Name Company or institution Position or job title Date YYYY MM DD Signed GE and GE monogram are trademarks of General Electric Company GE Healthcare Bio Sciences Corp 800 Centennial Avenue PO Box 1327 Piscataway NJ 08855 1327 O 2010 14 General Electric Company All rights reserved First published April 2010 DOC1149542 28 9800 26 AC 05 2014 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 229 7 Informaci n de referencia 7 3 Formulario de declaraci n de salud y seguridad Devoluci n del producto o reparaci n Debe utilizarse un informe Health amp Safety Declaration Form for Product Return or Ser vicing tal como el que se muestra en el ejemplo siguiente para registrar los detalles relacionados con la desinfecci n antes de devolver el producto o tener que rep
95. erca de este cap tulo En este cap tulo se enumeran las especificaciones t cnicas del Amersham WB analyzer El cap tulo tambi n incluye una gu a de resistencia qu mica y un informe de desinfecci n que debe utilizarse para registrar los detalles de desinfecci n antes de una reparaci n Contenido de este capitulo Este cap tulo contiene las siguientes secciones Secci n Consulte la p gina 7 1 Especificaciones del sistema 221 7 2 Gu a de resistencia qu mica 226 7 3 Formulario de declaraci n de salud y seguridad 228 7 4 Traducciones de accesorios y consumibles 231 220 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 7 1 Especificaciones del sistema Introducci n 7 Informaci n de referencia 7 1 Especificaciones del sistema En esta secci n se mencionan los datos de especificaci n del sistema del Amersham WB analyzer Rangos ambientales Par metro Rango de temperatura de almacenamien to y transporte de 25 C a 60 C Ambiente qu mico Rango de funcionamiento Par metro Rango de temperatura de funcionamien to Consulte Secci n 7 2 Gu a de resistencia qu mica en la p gina 226 L mites de 15 C a 32 C Para un rendimiento completo de 16 C a 28 C Humedad relativa De 20 a 80 sin condensaci n Para un rendimiento completo de 20 a 70 sin condensaci n Altitud M ximo 2 000 m Grado de contaminaci n 2
96. erpos Anticuerpos en PBS T 0 1 Tween 20 en 1xPBS 5012 ml Para averiguar c mo determinar las concentracio nes ptimas de anticuerpos consulte Amersham WB system User Manual Agua ultra pura se utiliza para Agua ultra pura enjuague entre fases de sondeo y limpieza del recorrido del flujo de sondeo 172 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 5 Realizar un experimento 5 8 Realizar sondeo y secado 5 8 1 Preparar y conectar sondas y soluciones de anticuerpos Conecte los tubos a las soluciones para sondeo que est n en el soporte de botellas PRECAUCI N Para evitar la salpicadura de l quidos peligrosos utilice filtros de entrada robustos conectados a los tubos de las botellas Consulte Secci n 3 8 Otros accesorios en la p gina 87 para ver las descripciones de los filtros de entrada y de los soportes de los tubos Consulte Acoplar los soportes de los tubos en la p gina 106 para obtener informaci n sobre la forma de instalar los accesorios Antes de comenzar el sondeo conecte los tubos de las torres del medio y de la derecha a las soluciones que se van a usar en el ciclo de sondeo de la forma siguiente Paso Acci n 1 Desde la torre de tubo del medio conecte el tubo marcado con e P Water a una botella de 1000 ml con agua ultra pura e P Block a una botella de 100 ml con soluci n de bloqueo Desde la torre de tubo de la derecha conecte el tubo marcado co
97. ersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 2 Instrucciones de seguridad 2 1 Precauciones de seguridad PRECAUCI N Peligro de pinzamiento No toque la c mara de sondeo m vil du rante un ciclo de operaci n PRECAUCI N No retire ninguna tapa de la unidad Elpho amp scan Hay un l ser de clase 3B en el interior de la unidad PRECAUCI N Para evitar la salpicadura de l quidos peligrosos utilice filtros de entrada robustos conectados a los tubos de las botellas AVISO No utilice productos qu micos que no sean los incluidos en la infor maci n sobre resistencia qu mica o gt o o Mantenimiento ADVERTENCIA Peligro de descarga el ctrica Todas las reparaciones se confiar n al personal de servicio autorizado por GE No abra ninguna cubierta ni cambie piezas a menos que se indique lo contrario en la docu mentaci n del usuario ADVERTENCIA Desconecte la alimentaci n Recuerde siempre desconectar la corriente el ctrica del instrumento antes de reemplazar cualquier componente a menos que se indique lo contrario en la documen taci n del usuario Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 23 2 Instrucciones de seguridad 2 1 Precauciones de seguridad ADVERTENCIA Retire cualquier botella del soporte de botellas antes de abrir la tapa del compartimento de mantenimiento ADVERTENCIA Cuando trabaje con qu
98. escripci n del sistema 3 9 Descripci n general del software Ilustraci n de la pantalla principal del software La ilustraci n que aparece a continuaci n muestra la pantalla principal del software para un experimento Western G Unimed cespernment Arversham Wi sodhware Bosy Western Gel cord 14 13 5 O hogre el gardi Blanik Ma Type sample IO Mancia Dommenls G Amenham WE KIA Markem W Sample PHORESIS E GEL SC MHINO Sample Print the saperiment ard samples information El Erin the experiment A samples intonmaticon gr 5 Sample Se hopian a b sample ka T LNEFER 7 Sample ha 3 Sample o j Sotware puerde W z E Expermnent r ormaitor Lu 9 Sample sr 10 Sample W 11 Sample gt 12 Sample Mi 13 Sample A HEMERAHNE a CAMPERS 14 Simple nr Ameisham WE MW Markere ser Eleni e in ini Antibodies for Membrone A Primary antibody Labeled secondary ab i Priman andibody Z 90 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 3 Descripci n del sistema 3 9 Descripci n general del software Descripci n Barra del men La barra de men s se compone de cuatro men s File crear abrir y guardar experimentos Imprimir informaci n y salir de la aplicaci n Control interrumpir el ciclo vaciar la c mara de transferencia y de sondeo iniciar la limpieza del recorrido de flujo de transferencia y de sondeo Remote conectarse y
99. gina 170 Sin embargo re cuerde limpiar el recorrido del flujo de transferencia en una fase posterior del experimento La limpieza puede realizarse seleccionando Control Clean Transfer flow path en la barra de men s Sino se ha realizado la limpieza es necesario vaciar manualmente el recorrido del flujo de transferencia seleccionando Empty Transfer tank en el Control men 2 Desplace la tuber a T Buffer hasta la botella que contiene 1000 ml de agua ultra pura conjuntamente con la tuber a T Water 3 Haga clic en Start clean en el cuadro de di logo Transfer Completed Clean Transfer Flow Path Se inicia la limpieza que durar aproximadamente 9 minutes Nota Se puede iniciar el sondeo mientras se limpia el recorrido del flujo de transfe rencia consulte Contin e con el sondeo en la p gina 170 4 Deseche la soluci n en la botella de agua y coloque el tubo en una botella vac a 5 Con un pa o que no deje pelusa limpie la parte superior del interior del de p sito de transferencia 6 Con unas pinzas retire cualquier part cula fibra y pedazo de gel residual que sea visible Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 169 5 Realizar un experimento 5 7 Realizar transferencia 5 7 4 Procedimientos despu s de la transferencia Limpiar la bandeja de transferencia ADVERTENCIA Despu s de la electroforesis o despu s de la transferencia cuando se ha abierto el s ndwich de transfer
100. ho amp scan al presionar el bot n de expulsi n en el panel frontal 42 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 3 Descripci n del sistema 3 2 Unidad Elpho scan Ilustraci n del cargador Elpho scan La ilustraci n siguiente muestra la unidad Elpho amp scan con el cargador expulsado y las tapas de sellado de la placa de la tarjeta izquierda abiertas 1 2 3 pn f 5 Descripci n Cerrojo Para abrir la tapa de sellado Tapa de sellado Indicador de posici n A y posici n B Cavidades Para soportes de tiras de soluci n amortiguadora con conectores el ctricos para los electrodos de la soluci n amortiguadora 5 Pasadores gu a Para la colocaci n correcta de las tarjetas de gel o adaptadores de membrana incluidas las tarjetas PVDF 6 Placa de la tarjeta Para refrigerar las tarjetas de gel y sujetar las tarjetas en posici n plana mientras se analizan Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 43 3 Descripci n del sistema 3 2 Unidad Elpho amp scan Pieza Descripci n Vidrio protector 44 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 3 Descripci n del sistema 3 3 Unidad Western 3 3 Unidad Western Introducci n Unidad La unidad Western se usa para e transferir las prote nas separadas en el gel a la membrana e sondear las prote nas en la membrana con anti
101. i n contiene las siguientes subsecciones Secci n Consulte la p gina 3 6 1 Amersham WB molecular weight markers 68 3 6 2 Amersham WB gel card 71 3 6 3 Amersham WB buffer strip y Amersham WB buffer strip holder 74 3 6 4 Amersham WB paper comb 76 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 67 3 Descripci n del sistema 3 6 Accesorios y consumibles para electroforesis 3 6 1 Amersham WB molecular weight markers 3 6 1 Amersham WB molecular weight markers Introducci n Contenido 68 Amersham WB molecular weight markers son una mezcla de nueve prote nas nativas y recombinantes M de 10 000 a 225 000 marcadas tanto con Cy3 como con Cy5 para la determinaci n del peso molecular de las prote nas en las tarjetas de gel y en las tar jetas PVDF analizadas El software calcula las curvas de calibraci n del peso molecular Cuando se utilizan dos curvas de calibraci n del peso molecular se usan datos interpolados de las curvas para crear curvas de calibraci n espec ficas a la l nea de la muestra A continuaci n se cal culan los pesos moleculares de todas las bandas detectadas en cada l nea Cada envase de Amersham WB molecular weight markers contiene soluci n suficiente para procesar 10 tarjetas de gel cuando se cargan 2 l neas tarjeta de gel con Amersham WB molecular weight markers Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 3 Descripci n del sistema 3 6 Acceso
102. i n local para evacuar los gases Para el funcionamiento seguro siga las normativas e instrucciones locales A A A A A Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 19 2 Instrucciones de seguridad 2 1 Precauciones de seguridad PRECAUCI N Utilice siempre guantes ropa de protecci n y gafas adecuadas durante el funcionamiento y mantenimiento del Amersham WB analyzer PRECAUCI N Equipo de Protecci n Personal EPP Durante el llenado vaciado transporte o traslado del sistema debe utilizar siempre e Calzado de protecci n preferiblemente con recubrimiento de acero e Guantes de trabajo para protegerse de los bordes afilados e Guantes protectores Instalaci n y transporte ADVERTENCIA Si se va a utilizar metanol u otros productos qu micos que necesitan ventilaci n coloque el Amersham WB analyzer en una sala con ventilaci n para escape de humos ADVERTENCIA Voltaje de alimentaci n Aseg rese de que el voltaje de alimenta ci n en el enchufe de la pared se corresponde con la especificaci n del instrumento antes de conectar el cable de alimentaci n ADVERTENCIA Aseg rese de que el sistema est colocado sobre una mesa estable y plana con espacio adecuado para la ventilaci n 20 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 2 Instrucciones de seguridad 2 1 Precauciones de seguridad ADVER
103. ientos de emergencia Un fallo de alimenta produce ci n en Ordenador El ordenador conectado a la unidad Elpho scan se apaga Cualquier experimento en ejecuci n se continuar y finalizar ya que el instrumento todav a tiene energ a el ctrica Cuando se reinicia el ordenador y se restablece el contacto los resultados del experimento se guardan Si corresponde se escanear n las im genes Reinicie despu s del apagado de emergencia o del fallo de alimentaci n del instrumento Cuando la alimentaci n se normaliza no continuar ning n experimento que se estu viese ejecutando en el momento del apagado de emergencia Proceda de la siguiente manera Paso Acci n 1 Si se han desconectado los cables de alimentaci n de la red el ctrica co necte los cables a los paneles posteriores de las unidades del instrumento Aseg rese de que los interruptores de corriente que se encuentran en los paneles posteriores de las unidades del instrumento est n activados l Resultado las unidades del instrumento se ponen en funcionamiento E Inicie el ordenador y el software consulte Iniciar el software en la p gina 124 Cuando las unidades del instrumento est n conectadas el evento de registro se guardar en el registro de experimentos 3 Si desea completar un ciclo que fue interrumpido abra el archivo del expe rimento para que se ejecute el ciclo A continuaci n abra el cuadro de di logo Experiment
104. isis de la 144 tarjeta de gel 134 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 5 Realizar un experimento 5 6 Realizar electroforesis de prote nas 5 6 1 Antes de la electroforesis 5 6 1 Antes de la electroforesis Introducci n En esta secci n se describe la forma de cargar las tiras de soluci n amortiguadora la tarjeta de gel los Amersham WB molecular weight markers preparados y las muestras para ejecutar la electroforesis Preparaciones antes de comenzar la electroforesis ADVERTENCIA Explosi n de cristal No utilice el sistema si el cristal de la tapa de sellado de la unidad Elpho amp scan est rayado o roto Apague el instrumento desconecte el cable de alimentaci n y p ngase en contacto con un ingeniero de mantenimiento autorizado PRECAUCI N Piezas en movimiento Tenga cuidado al abrir o cerrar el cargador para evitar que los dedos o la ropa queden atrapados cuando se mueve el cargador Nunca coloque botellas o frascos en frente de la unidad Elpho scan Pueden caerse cuando se abre el cargador Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 135 5 Realizar un experimento 5 6 Realizar electroforesis de prote nas 5 6 1 Antes de la electroforesis Paso Ilustraci n de pasos Acciones del operador Coloque las tiras de soluci n amortiguadora en sus sopor tes sacando dos tiras de so luci n amortiguadora de sus envases y coloc ndo
105. ituir el fusible del suministro el ctrico ADVERTENCIA Antes de cambiar los fusibles de la red el ctrica desconecte siempre la corriente principal Para tener protecci n continua contra el riesgo de incendio sustituya los fusibles solamente por fusibles del mismo tipo y clasificaci n el ctrica como se indica en las eti quetas del instrumento Paso Acci n 1 Interrumpa el suministro el ctrico del Amersham WB analyzer colocando los botones de encendido y apagado de los lados posteriores de las unidades Elpho scan y Western en la posici n de desactivaci n 0 2 Desconecte los cables de alimentaci n de los enchufes de la red el ctrica en las unidades Elpho scan y Western Localice el portafusibles en el panel de conectores de la unidad correspon diente 216 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 6 Mantenimiento 6 2 Instrucciones de mantenimiento 6 2 2 Procedimientos de reemplazo Paso Acci n 4 Inserte un destornillador peque o en la ranura al lado del compartimento de fusibles 5 Utilice el destornillador para abrir el portafusibles 6 Sustituya los fusibles Para ver la informaci n relacionada con los fusibles vea las etiquetas de la unidad del instrumento en los paneles posteriores 7 Inserte el compartimento de fusibles en su recept culo en el panel de conec tores Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 217 6 Man
106. jos de l quidos 3 3 3 Recorridos de flujos de liquidos Introducci n Esta secci n muestra los recorridos de los flujos de l quidos de transferencia y sondeo en la unidad Western y describe los principios b sicos de funcionamiento Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 55 3 Descripci n del sistema 3 3 Unidad Western 3 3 3 Recorridos de flujos de l quidos Ilustraci n del recorrido del flujo de l quido de transferencia La ilustraci n siguiente muestra un gr fico detallado de los flujos del proceso de trans ferencia El gr fico de flujos muestra interconexiones entre los componentes del instru mento Las etiquetas blancas se refieren a las etiquetas de los tubos Los n meros azules se refieren a los componentes del instrumento 5 T WASTE T BUFFER T WATER 56 La tabla siguiente describe los componentes en el gr fico de flujos Descripci n 1 Bloqueo de la v lvula de transferencia Para seleccionar qu soluci n debe bombearse a lo largo del recorrido del flujo de l quido Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 3 Descripci n del sistema 3 3 Unidad Western 3 3 3 Recorridos de flujos de l quidos Descripci n Dep sito de transferencia Bomba de transferencia Para bombear la soluci n a trav s del recorrido del flujo de l quido Unidad de refrigeraci n para transferencia Para refrigerar la soluci n amortiguadora de tran
107. l protocolo siguiente se puede aumentar paulatinamente Paso Acci n 1 Coloque la reacci n de premarcaje en un tubo microcentrifugador de 0 5 ml e Agregue 2 19 ul de lisado de c lulas o muestra de extracto de tejido m ximo 40 ug total de prote na y llene hasta un volumen de 19 ul usando soluci n amortiguadora para lisis de la muestra original e Agregue 1 ul de reactivo de tinte Cy5 diluido en agua ultra pura en una proporci n de 1 10 Nota El tinte diluido debe ser una preparaci n nueva y deber usarse en un plazo de 30 minutos No puede congelarse y reutilizarse m s tarde e Gire la soluci n hasta que se mezcle completamente Incube la mezcla a temperatura ambiente durante 30 minutos Nota Aseg rese de que el tiempo de marcaje y el volumen sean iguales para todas las muestras En el caso de muestras sensibles a la temperatura inc belas en hielo durante 30 minutos Agregue 20 ul de soluci n amortiguadora de carga Caliente las muestras a 95 C durante 3 minutos Centrifugue las muestras El volumen total de las muestras es 40 ul por reacci n el volumen de carga recomendado es de 20 ul Proceda con la carga de muestras como se describe en Preparaciones antes de comenzar la electroforesis en la p gina 135 Si el an lisis de electroforesis se va a realizar en una fase posterior guarde las muestras premarcadas conserv ndolas a una temperatura de 20 C Amersham WB system Instrucciones de funcion
108. l s ndwich de transferencia Paso Ilustraci n de pasos Acciones del operador Agarre las dos asas de la tarjeta PVDF con los dedos o con la ayuda de la pinza de punta plana Retire la tarjeta de la bandeja para solu ci n amortiguadora de transferen cia Nota No toque el rea de transferencia de la tarjeta PVDF marcada con un cuadro rojo en la imagen Coloque la tarjeta PVDF sobre la tarjeta de gel encajando los orifi cios gu a de la tarjeta PVDF en los pasadores gu a y haciendo rodar la tarjeta PVDF sobre el gel Nota No ajuste la posici n de la tarjeta PVDF una vez est colocada sobre la tarjeta de gel Moje un papel de transferencia en soluci n amortiguadora de trans ferencia y col quelo sobre la tarje ta PVDF el asidero del papel de transferencia debe estar posicio nado entre los pasadores gu a 162 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 5 Realizar un experimento 5 7 Realizar transferencia 5 7 2 Preparar el s ndwich de transferencia Paso Ilustraci n de pasos Acciones del operador Quite cualquier burbuja de aire de la forma siguiente e Tomelatapa blanca e ins rte la en las dos cavidades ima gen de la izquierda e Agarre el asidero del papel de transferencia con su mano iz quierda y arrastre el rodillo en las gu as del soporte hacia el otro lado de la bandeja de transferencia con su mano derecha Coloque la segu
109. l sistema lea la documentaci n del usuario No abra ninguna tapa ni cambie piezas salvo que est es pec ficamente indicado en la documentaci n del usuario El sistema cumple con la normativa vigente en Europa Consulte el Normas internacionales en la p gina 11 El sistema cumple con los correspondientes requisitos de Australia y Nueva Zelanda Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 29 2 Instrucciones de seguridad 2 2 Etiquetas Etiqueta Descripci n Este s mbolo indica que el producto Amersham WB system ha sido El certificado por un laboratorio de pruebas reconocido nacionalmente C Us Nationally Recognized Testing Laboratory o NRTL NRTL se refiere Intertek a una organizaci n que est reconocida por la administraci n de salud y seguridad ocupacional de EE UU US Occupational Safety and Health Administration o OSHA por cumplir los requisitos legales del T tulo 29 del C digo de Reglamentaciones Federales 29 CFR Part 1910 7 S mbolos relacionados con sustancias peligrosas que se usan en las etiquetas del instrumento Los siguientes s mbolos de las etiquetas hacen referencia a las sustancias peligrosas Etiqueta Descripci n Este s mbolo indica que los residuos de aparatos el ctricos y elec tr nicos no deben desecharse como residuo de recolecci n muni cipal sin clasificar y debe recogerse por separado Comuniquese con un representante autorizado del fabricante
110. las La ilustraci n que aparece a continuaci n muestra un soporte de filtro de entrada con un filtro de entrada instalado y acoplado al tubo Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 87 3 Descripci n del sistema 3 8 Otros accesorios Soportes para tuber a Para compensar las tensiones que se producen al colocar los tubos en las botellas y para evitar que estas se caigan cuando disminuye el nivel de l quido se debe acoplar un soporte de tubo a los tubos V ase a continuaci n la ilustraci n Accesorios adicionales que debe instalar el usuario Los electrodos de transferencia y las gu as de secado de la membrana deben ser insta lados por el usuario Para obtener m s informaci n consulte Instalar electrodos de transferencia en la p gi na 100 y Instale gu as para el secador de membrana en el compartimento de secado en la p gina 108 Accesorios para tareas de mantenimiento por parte del usuario Para ver una descripci n de los accesorios para tareas de mantenimiento por parte del usuario consulte Accesorios de mantenimiento en la p gina 206 88 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 3 Descripci n del sistema 3 9 Descripci n general del software 3 9 Descripci n general del software Introducci n En esta secci n se ofrece una descripci n general del Amersham WB software Ilustraci n de la pantalla de inicio del software En la panta
111. las direc tamente en los soportes de tiras de soluci n amortigua dora Nota Para evitar la contaminaci n de las tiras de soluci n amortiguadora no las toque o aseg rese de llevar guantes limpios Unidad Pulse el bot n de ex pulsi n en la unidad Elpho amp scan Resultado se expulsa el car gador Abra la tapa de sellado utili zando el pestillo 136 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE Paso Ilustraci n de pasos 5 Realizar un experimento 5 6 Realizar electroforesis de prote nas 5 6 1 Antes de la electroforesis Acciones del operador Coloque los soportes de tiras de soluci n amortiguadora en las cavidades de la placa de la tarjeta en el cargador LELEII Gel Cards Gel card Position A ID Note D e Saquela tarjeta de gel de su envase con la parte frontal hacia arribal e Opcional Coloque el cur sor en el campo ID del software en el paso de flujo de trabajo ELEC TROPHORESIS amp GEL SCANNING y analice el indicador de matriz de la tarjeta de gel indicada con un c rculo naranja usando el lector del indi cador de matriz US De forma alternativa es criba el ID de cinco d gi tos por ejemplo 00123 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 137 5 Realizar un experimento 5 6 Realizar electroforesis de prote nas 5 6 1 Antes de la electroforesis Paso Ilus
112. lativa al reciclaje Contenido de este capitulo Este cap tulo contiene las siguientes secciones Secci n Consulte la p gina 2 1 Precauciones de seguridad 17 2 2 Etiquetas 26 2 3 Procedimientos de emergencia 32 2 4 Informaci n sobre reciclado 34 16 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 2 Instrucciones de seguridad 2 1 Precauciones de seguridad 2 1 Precauciones de seguridad Introducci n El Amersham WB analyzer es alimentado por la red el ctrica y procesa l quidos que pueden ser peligrosos Antes de instalar poner en funcionamiento o mantener el instru mento debe conocer los peligros que se describen en este manual Respete siempre las normas e instrucciones locales durante el funcionamiento y man tenimiento del sistema y manipule los productos qu micos de forma segura Siga las instrucciones para evitar lesiones personales o da os en el equipo Las precauciones de seguridad descritas en esta secci n se agrupan en las siguientes categor as Precauciones generales L quidos inflamables Protecci n personal Instalaci n y transporte Funcionamiento del sistema Mantenimiento Desmantelamiento Precauciones generales ADVERTENCIA Opere Amersham WB analyzer nicamente de la forma indicada en Instrucciones de funcionamiento ADVERTENCIA No utilice ning n accesorio que no sea suministrado o recomenda do por GE Amersham WB system Instru
113. lde de gel est completamente despegado del tap n de goma blanco indica do por la flecha superior de color naranja Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 159 5 Realizar un experimento 5 7 Realizar transferencia 5 7 2 Preparar el s ndwich de transferencia Paso Ilustraci n de pasos Acciones del operador Contin e aflojando el molde de gel de los bordes de la tarjeta de gel en direcci n hacia el extremo infe rior hasta que el molde de gel est completamente suelto ATT MEL MA jji Nota Cuando se afloje el gel siga presio nando la tarjeta de gel en direcci n del banco con los dedos Nota Tenga cuidado de no tocar el gel Agarre los asideros del molde de gel y levante con cuidado el gel para soltarlo de su soporte 160 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 5 Realizar un experimento 5 7 Realizar transferencia 5 7 2 Preparar el s ndwich de transferencia Paso Ilustraci n de pasos Acciones del operador Coloque el molde de gel sobre el papel de transferencia acoplando los orificios gu a del molde de gel a los pasadores gu a y haciendo rodar el gel sobre el papel de transferencia Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 161 5 Realizar un experimento 5 7 Realizar transferencia 5 7 2 Preparar el s ndwich de transferencia Coloque la tarjeta PVDF y termine de formar e
114. licio Tiempo de calentamiento Al menos 1 minuto Nota El calentamiento se incluye en el modo de sensibilidad autom tico Lente F1 0 13 mm Fuente de luz US M dulo de diodo l ser 635 nm 10 mW Cy3 M dulo de diodo l ser 532 nm 10 mw Funcionamiento Completamente automatizado exposi ci n autom tica no es necesario enfocar ni efectuar ning n otro ajuste ni calibra ci n Tama o m ximo de la muestra 2 muestras de aproximadamente 80 x 65 mm Escala de grises 65 536 niveles 16 bit Rango din mico 4 6 rdenes de magnitud Salida de imagen Escala de grises de 16 bit TIF Especificaciones de separaci n Par metro Descripci n Voltage 250 600 V 1 Corriente 20 50 ma 1 La potencia m xima es de 20 W tarjeta de gel Los valores m ximos para los par metros no pueden alcanzarse simult neamente Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 223 7 Informaci n de referencia 7 1 Especificaciones del sistema Especificaciones del sistema de la unidad Western Par metro Dimensiones ancho x profundidad x altu 43 x 53 x 39 cm ra Peso 20 kg Fuente de alimentaci n Voltaje 100 240 V Frecuencia 50 60 Hz Consumo de energ a Potencia m xima 400 VA Fuse 2x T4AH 250 V Tubos de transferencia y conectores Material de los tubos FEP ID 1 8 Casquillo azul Conector de tubos Tuerca de 5 16 24UNF 2 A Tubo
115. lizar un experimento 5 6 Realizar electroforesis de prote nas 5 6 1 Antes de la electroforesis Paso Ilustraci n de pasos Acciones del operador Cierre la tapa de sellado e Agarre el extremo de la tapa del pocillo de muestras y ret rela con cuidado Consejo Cambie el agarre mientras retira la tapa del pocillo de muestras para poder agarrar la tan cerca del pocillo como sea posible Nota Si se rompe la tapa del pocillo de muestras Deje que el gel contin e en el cargador con la tapa de sellado cerrada Utilice pinzas o algo similar para retirar el resto de la tapa del pocillo 140 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 5 Realizar un experimento 5 6 Realizar electroforesis de prote nas 5 6 1 Antes de la electroforesis Paso Ilustraci n de pasos Acciones del operador Cargue las muestras la solu ci n amortiguadora de carga y o el marcadores de peso molecular en los pocillos normalmente 20 ul pocillo como se configur en la pantalla EXPERIMENT 8 SAMPLES del software Nota Nunca abra la tapa despu s de que se hayan cargado las muestras Nota Todos los pocillos deben car garse con una muestra solu ci n amortiguadora de carga diluida con un volumen de agua ultra pura o marcadores de peso molecular Se recomienda te ner soluci n amortiguadora de carga en los pocillos 1 y 16 y marcadores de peso molecular en los pocillos 2 y 15
116. lla de inicio del software es posible crear nuevos experimentos y abrir expe rimentos previamente guardados Para obtener informaci n sobre c mo crear y confi gurar un experimento consulte Crear y configurar un experimento en la p gina 125 A us Amersham WB software 6 Amersham WB software Fle wv Control Y Remote Wv y Create New Experiment Easy Western All Western experiments include necessary SDS PAGE steps Western blot experiment for quick confirmation of protein identity and easy sample to sample comparison O Easy Western One primary antibody against the specific target and a corresponding secondary antibody for the detection Optionally two primary antibodies of different species against two different targets and two corresponding secondary antibodies for detection of the two targets individually This allows for unambiguous analysis of two targets of similar size in one experiment Western with total protein normalization gt Western with endogenous protein normalization Easy SDS PAGE Create Samples should normally not be pre labeled for use in this experiment NI y E Create new experiment Maintenance clean Open experiment based on a previous run Learn more ad r manual Open New from existing Maintenance clean Transfer User manual z z Web resource Maintenance clean Probing Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 89 3 D
117. micos peligrosos evite los derrames y use gafas de protecci n y otros equipos de protecci n personal ade cuados Por ejemplo el NaOH es corrosivo y por tanto peligroso para la salud ADVERTENCIA Solo se pueden utilizar piezas de repuesto aprobadas o suministra das por GE para realizar el mantenimiento o la reparaci n del sis tema ADVERTENCIA Cuando reemplace un cable de alimentaci n da ado utilice un cable de repuesto del mismo tipo y de las mismas dimensiones y en conformidad con todos los requisitos vigentes del c digo local sobre electricidad as como aprobado por GE ADVERTENCIA Antes de cambiar los fusibles de la red el ctrica desconecte siempre la corriente principal Para tener protecci n continua contra el riesgo de incendio sustituya los fusibles solamente por fusibles del mismo tipo y clasificaci n el ctrica como se indica en las eti quetas del instrumento 24 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 2 Instrucciones de seguridad 2 1 Precauciones de seguridad PRECAUCI N Cuando trabaje con qu micos peligrosos tome todas las medidas de protecci n adecuadas como usar gatas y guantes de protecci n resistentes a los qu micos que est utilizando Para un funciona miento y mantenimiento seguro del sistema respete las normas e instrucciones locales Servicio ADVERTENCIA Desinfecte el equipo antes de realiza
118. milar Paso 1 210 Acci n Abra la tapa del compartimento de servicio para acceder a las bombas de sondeo y de transferencia Nota La bomba de sondeo est ubicada a la izquierda y la bomba de transferencia a la derecha Desconecte el tubo de la bomba que se encuentra a la izquierda TA PROBING ii Ll Irranseer UA l UL i A Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 6 Mantenimiento 6 2 Instrucciones de mantenimiento 6 2 2 Procedimientos de reemplazo Paso Acci n 3 Desconecte el tubo de la bomba que se encuentra a la derecha O g pa e N t o A Ez TT H Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 211 6 Mantenimiento 6 2 Instrucciones de mantenimiento 6 2 2 Procedimientos de reemplazo Paso Acci n 5 Gire el cabezal de la bomba hacia la izquierda 6 Levante el cabezal de la bomba para sacarlo del compartimento de servicio Nota Al retirar el cabezal tenga cuidado de no da ar o doblar ninguno de los tubos en la unidad Western Si alguno de los tubos est da ado o doblado tendr que ser sustituido por tubos nuevos P ngase en contacto con el departamento de servicio para recibir asistencia Fi Desembale un nuevo cabezal de bomba 212 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE Paso 6 Mantenimiento 6 2 Instrucciones de mantenimiento 6 2 2 Procedimientos de reem
119. mp scan cargador 42 Unidad Elpho amp scan 40 Interruptores de seguridad 36 L Lector de indicador de matriz Descripci n 87 Instalar el lector de indica dor de matriz 110 Limpiar Adaptador de la membra na 197 Adaptador de membra na 191 Bandeja de transferen cia 170 Compartimento de seca do 200 Dep sito de transferen cia 198 Recorrido del flujo de son deo 183 198 Recorrido del flujo de trans ferencia 169 198 Soporte de secado 191 198 Soporte de tiras de soluci n amortiguadora 145 197 unidad Elpho amp scan 145 M Mantenimiento Accesorios 206 Limpieza de mantenimiento del recorrido del flujo de sondeo 203 Limpieza de mantenimiento del recorrido del flujo de transferencia 202 Programa de mantenimien to 193 Sustituir cabezal de bomba de sondeo o de transferen cia 210 Sustituir electrodos de transferencia 213 Sustituir el filtro de aire 207 Sustituir filtro de entra da 216 Sustituir filtro del dep sito de transferencia 215 Sustituir fusible del suminis tro el ctrico 216 Marca CE 11 Marcadores de peso molecular Ilustraci n 69 Prote nas 69 N Normas internacionales 11 Notas y consejos 9 P Papel de transferencia Descripci n 81 Peine de papel Descripci n 76 Procedimiento 143 Precauciones de seguridad introducci n 17 Premarcaje 128 pH de la muestra 129 Preparaciones 130 Protocolo de premarca jeWestern 131 Soluciones amortiguadoras
120. mplo la tarjetaPVDF en la posici n de sondeo A hasta la posici n de secado A En la fase de flujo de trabajo PROBING amp A DRYING del software haga clic en Start en el rea Drying PROBING amp DRYING Drying Remaining time Start Ready for Drying 10 mi min Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 185 5 Realizar un experimento 5 8 Realizar sondeo y secado 5 8 4 Realizar el secado Paso Ilustraci n de pasos Acciones del operador Cuando haya finalizado el secado Abra latapa del compartimento de seca do e Retire los soportes de secado e Latarjeta PVDF esta lista para el an lisis Proceda con Secci n 5 9 Analizar mem brana y ver los resultados en la p gi na 187 Nota Si las membranas no est n completamente secas haga clic en Start en el rea Drying para realizar un nuevo ciclo de secado 186 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 5 Realizar un experimento 5 9 Analizar membrana y ver los resultados 5 9 Analizar membrana y ver los resultados Introducci n En esta secci n se describe c mo e coloque la tarjeta PVDF en la unidad Elpho amp scan e comenzar y monitorizar el an lisis e verlos resultados del an lisis Coloque la tarjeta PVDF en el cargador PRECAUCI N Piezas en movimiento Tenga cuidado al abrir o cerrar el cargador para evitar que los dedos o la ropa queden atrapados
121. mplo de la etiqueta de producto que est adherida a la unidad Elpho amp scan La etiqueta est ubicada en la panel posterior de la unidad del instrumento 29032030 Amersham WB elpho scan unit Code no 29009368 Voltage 100 240 V Serial no 1111111 Frequency 50 60 Hz Mfg Year 2013 Max Power 300 VA Fuse 2x T4AH 250 V E La ci us ANE 20 E LA Intertek 4001767 A N GE Healthcare Bio Sciences AB Made in Sweden 751 84 Uppsala Sweden E Conforms to ANSIUL Std 61010 1 Cert to CAN CSA Std C22 2 No 61010 1 y 28 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 2 Instrucciones de seguridad 2 2 Etiquetas Etiqueta de la unidad Western La siguiente ilustraci n muestra un ejemplo de la etiqueta de producto que est adherida a la unidad Western La etiqueta est ubicada en la panel posterior de la unidad del instrumento A i 29032030 Amersham WB western unit Code no 28993466 Voltage 100 240 V Serial no 1111111 Frequency 50 60 Hz Mfg Year 2013 Max Power 400 VA Fuse 2x T4AH 250 V E Lv Cc us NECE ms 4001767 A AA GE Healthcare Bio Sciences AB Made in Sweden 751 84 Uppsala Sweden E Conforms to ANSI UL Std 61010 1 Cert to CANICSA Std C22 2 No 61010 1 Simbolos de seguridad utilizados en las etiquetas de la unidad del instrumento Los s mbolos de seguridad siguientes se utilizan en las etiquetas Etiqueta Descripci n Advertencia Antes de usar e
122. n e P Wash en una botella de 1000 ml de soluci n de lavado PBS T e P Final Wash a una botella de 500 ml de soluci n final de lavado PBS Antes de comenzar el sondeo conecte los tubos de soluci n de anticuerpos que se encuentran en el compartimento de anticuerpos para obtener infor maci n v ase a continuaci n Conecte los tubos de soluci n de anticuerpos Nota Las soluciones de anticuerpos deben prepararse y conectarse casi en el momento de inicio del sondeo Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 173 5 Realizar un experimento 5 8 Realizar sondeo y secado 5 8 1 Preparar y conectar sondas y soluciones de anticuerpos Paso Acci n 1 Abra el compartimento de anticuerpos de la unidad Western presionando el s mbolo de expulsi n de la tapa del compartimento de anticuerpos 174 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 5 Realizar un experimento 5 8 Realizar sondeo y secado 5 8 1 Preparar y conectar sondas y soluciones de anticuerpos Paso Acci n 2 Inserte cada tubo de soluci n de anticuerpos en la posici n apropiada co locando el tubo y haci ndolo encajar en posici n con un chasquido La tabla siguiente describe qu anticuerpos deben colocarse en qu posici n del tubo en el compartimento de anticuerpos Posici n Descripci n A PRIMARY Posici n que se usar para los anticuerpos prima rios dirigidos a la membrana en la posici n A de
123. n esta secci n Esta secci n contiene las siguientes subsecciones Secci n Consulte la p gina 5 8 1 Preparar y conectar sondas y soluciones de anticuerpos 172 5 8 2 Realizar el sondeo 176 5 8 3 Procedimientos despu s del sondeo 181 5 8 4 Realizar el secado 185 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 171 5 Realizar un experimento 5 8 Realizar sondeo y secado 5 8 1 Preparar y conectar sondas y soluciones de anticuerpos 5 8 1 Preparar y conectar sondas y soluciones de anticuerpos Introducci n En esta secci n se describe c mo preparar y conectar las soluciones amortiguadoras y otras soluciones para el ciclo de sondeo El sondeo y las soluciones de anticuerpos pueden prepararse durante el ciclo de trans ferencia y deben conectarse antes de comenzar el ciclo de sondeo Sondeo y recetas de soluciones de anticuerpos Soluci n Receta Cantidad ci clo Soluci n de bloqueo El sistema es compatible con la mayor a de solucio nes de bloqueo por ejemplo 2 de agente ECL PRI ME en PBS T 0 1 Tween 20 en 1xPBS o 5 de alb mina de suero bovino en PBS Utilice soluciones de bloqueo con baja fluorescencia autom tica para ver las recomendaciones consulte el manual de Western Blotting Principles and Met hods Lavado de la soluci n amorti PBS T 0 1 Tween 20 en 1xPBS 560 ml guadora Lavado final de la soluci n PBS de pH 7 4 290 ml amortiguadora Soluci n de anticu
124. n las soluciones amortiguadoras de transferencia 18 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 2 Instrucciones de seguridad 2 1 Precauciones de seguridad Protecci n personal ADVERTENCIA Utilice siempre guantes ropa de protecci n y gafas adecuadas cuando manipule tarjetas de gel tarjetas PVDF y otros consumibles que se suministran con Amersham WB system ADVERTENCIA Cuando trabaje en el premarcaje de muestras de prote nas e Utilice siempre ropa de protecci n guantes y gafas adecuadas e Lea la Ficha de datos de seguridad SDS MSDS antes de realizar el premarcaje de muestras ADVERTENCIA El Amersham WB analyzer es un producto Clase A En el entorno del hogar podr a causar radiointerferencia y es posible que el usuario deba tomar las medidas pertinentes PRECAUCI N Sustancias peligrosas Cuando trabaje con sustancias qu micas y agentes biol gicos peligrosos tome todas las medidas de protec ci n adecuadas como usar gafas y guantes de protecci n resis tentes a la sustancia que est utilizando Para un funcionamiento mantenimiento y desmantelamiento seguros del equipo respete las normativas locales y nacionales PRECAUCI N Al realizarse el premarcaje de las prote nas de las muestras puede surgir un fuerte olor procedente de los vestigios de sulfato de dime tilo DMS y de dimetil sulf xido DMSO Puede ser necesaria venti lac
125. ncia 168 146 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 5 Realizar un experimento 5 7 Realizar transferencia 5 7 1 Preparar y conectar soluciones de transferencia 5 7 1 Preparar y conectar soluciones de transferencia Introducci n En esta secci n se describe c mo preparar y conectar las soluciones amortiguadoras y otras soluciones para la transferencia Las soluciones para la transferencia pueden prepararse durante el ciclo de electroforesis y deben conectarse antes de comenzar la transferencia Recetas de soluciones de transferencia ADVERTENCIA Si se va a utilizar metanol u otros productos qu micos que necesitan ventilaci n coloque el Amersham WB analyzer en una sala con ventilaci n para escape de humos PRECAUCI N Peligro de incendio No utilice soluciones amortiguadoras de transferencia que contengan m s de un 40 de etanol o m s de un 40 de metanol Se recomienda utilizar solamente un 20 de etanol en las soluciones amortiguadoras de transferencia Soluci n Receta Cantidad ci clo Soluci n amortiguadora 25 mM Tris 192 mM glicina 20 etanol 1 000 ml de transferencia pH 8 3 Es posible utilizar metanol en vez de etanol en la soluci n amortiguadora de transferencia Nota Algunos etanoles tiene propiedades autofluorescentes que dar n como resultado un fondo de membrana muy brillante Aseg rese de que el etanol que se usa durante la transferencia no se
126. ncionamiento 29 0214 77 AE 3 Descripci n del sistema 3 Descripci n del sistema Acerca de este cap tulo En este cap tulo se describen las diferentes partes del Amersham WB system El Amersham WB system se compone de e Amersham WB analyzer dos unidades e accesorios y consumibles que se van a usar con el instrumento e unordenador no se incluye con la entrega del producto e Amersham WB software Contenido de este cap tulo Este cap tulo contiene las siguientes secciones Secci n Consulte la p gina 3 1 Descripci n general del instrumento 36 3 2 Unidad Elpho amp scan 40 3 3 Unidad Western 45 3 4 Descripci n general de accesorios y consumibles 60 3 5 Consumibles premarcados 65 3 6 Accesorios y consumibles para electroforesis 67 3 7 Accesorios y consumibles para los pasos de la transferencia iT Western 3 8 Otros accesorios 87 3 9 Descripci n general del software 89 35 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 3 Descripci n del sistema 3 1 Descripci n general del instrumento 3 1 Descripci n general del instrumento Introducci n En esta secci n se ofrece una descripci n general del instrumento Amersham WB analyzer El Amersham WB analyzer se compone de dos unidades e Amersham WB Unidad elpho scan e Amersham WB Unidad western Las unidades del instrumento son controladas desde un ordenador en el que se ejecuta Amersham WB software Nota Las unidades del i
127. nda esponja sobre el papel de transferencia Cierre la bandeja de transferencia presionando la tapa hasta que los pestillos encajen en posici n Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 163 5 Realizar un experimento 5 7 Realizar transferencia 5 7 3 Ejecutar transferencia 5 7 3 Ejecutar transferencia Introducci n En esta secci n se describen e c mo cargar la bandeja de transferencia en el dep sito de transferencia e C mo comenzar y monitorizar la transferencia e los procedimientos a realizar despu s de la transferencia Antes de la transferencia Aseg rese de que se ha conectado la soluci n amortiguadora de transferencia y el agua ultra pura para el ciclo de transferencia Para obtener informaci n consulte Conecte el tubo a la soluci n amortiguadora de transferencia y al agua ultra pura del soporte de botellas en la p gina 148 164 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 5 Realizar un experimento 5 7 Realizar transferencia 5 7 3 Ejecutar transferencia Cargar los s ndwich de transferencia Paso Ilustraci n de pasos Acciones del operador Abra la tapa del dep sito de transferencia S Inserte las bandejas de transferencia en el dep sito Aseg rese de que la flecha blanca apunta hacia la flecha del instrumento hacia usted Cierre la tapa del dep sito de transferencia Amersham WB system Instrucci
128. nnnmererrerrrerererrss 134 5 6 1 Antes de la electroforesis oocccoocononanonnonannnnnnnncnnrrrrrrrrrrrrrrrrars 135 5 6 2 REQUzO ld Ie OS ca 142 5 6 3 Procedimientos despu s de la electroforesis y del an lisis de la tarjeta de gel 144 57 RSQUIZO FONS SEN CIO sind 146 5 7 1 Preparar y conectar soluciones de transferencia sssr 147 5 72 Preparar el s ndwich de transferencia cccocunonnoninnnnnnnmnrres 149 5 7 5 Ejecutor translerentid veia dia 164 5 7 4 Procedimientos despu s de la transferencia coocnccaconononnnnannnmnmemss 168 Do Fooro io a e os AA 171 5 8 1 Preparar y conectar sondas y soluciones de anticuerpos sses 172 5 8 2 Realizar el SONQO nanne nia A 176 5 8 3 Procedimientos despu s del sondeo vii data 181 5 8 4 Realizar el secado cocoococccoconacanininoninnnnnnnnnrnnnrnrrrerrarrrrrrrrr errar rar 185 5 9 Analizar membrana y ver los resultados c cco ccoconanonnnree 187 gt PION ENNEN olaaa 193 6 1 Programa de mantenimiento meri 196 6 2 Instrucciones de mantenimiento usnisa EAEE 201 6 2 1 Limpieza semanal de los recorridos de los flujos de transferencia y de sondeo 202 6 2 2 Procedimientos de reemplazo ssssssessssiiisssssssssssssssssssrirrsssssssssssrrsssrsrrrrressssssssssrrrsrrrrrrrrs 206 6 2 3 Traslado de las unidades del instrumento ias 218 7 Informaci n de referencia sesesesseseseseesesessesescesesesessesesessesesesseseseeseseseesesesese 220 Tal ESPecilicaciones dels tem
129. nservaci n 63 Pedido 63 Convenciones tipogr ficas 7 D Dep sito de transferencia Cargar s ndwich de transfe rencia 165 Descripci n 50 Limpiar 198 Descripci n general del software 89 Descripci n general del flujo de trabajo General 119 Western con normalizaci n de prote nas totales 120 Desinfecci n 34 Documentaci n Archivos de datos y notas de aplicaci n 15 Documentaci n del usua rio 14 Manual de m todos 15 E Electrodos de transferencia Instalar 100 Sustituir electrodos de transferencia 213 Electroforesis Cargar muestras 141 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE Colocar las tiras de soluci n amortiguadora en sus sopor tes 136 Colocar soportes de tiras de soluci n amortiguador Elp ho scan unidad 137 Comenzar y monitori zar 142 Preparar 136 Procedimientos posteriores a 144 Retirar tarjeta de gel 144 Eliminaci n instrucciones gene rales 34 Eliminaci n de componentes el ctricos 34 Elpho scan 42 Abrir 136 Esponja Colocar en la bandeja de transferencia 156 Descripci n 82 Experimento Crear 125 Experimentos de electrofo resis 118 Experimentos Western 118 Introducir informaci n so bre el anticuerpo 127 Introducir informaci n so bre la muestra 126 Experimento de electroforesis Descripci n 118 Descripci n general 119 Experimento Western Descripci n 118 Descripci n general 119 F FCC conformida
130. nstrumento deben estar siempre conectadas entre ellas durante un ciclo de proceso Ambas unidades deben estar encendidas cuando se est realizando un experimento en la unidad Western Interruptores de seguridad En el interior de la unidad Elpho amp scan hay alta tensi n y dos dispositivos l ser La unidad tiene dos interruptores de seguridad que interrumpen el suministro el ctrico que va al conversor de alta tensi n y a los l ser cuando el cargador est abierto Hay alta tensi n en el interior del dep sito de transferencia de la unidad Western La unidad tiene interruptores de seguridad que interrumpen el suministro el ctrico cuando la tapa del dep sito de transferencia est abierta 36 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 3 Descripci n del sistema 3 1 Descripci n general del instrumento Ilustraci n de Amersham WB analyzer La ilustraci n siguiente muestra el dispositivo Amersham WB analyzer con la unidad Elpho amp scan a la izquierda y la unidad Western a la derecha Ilustraci n de los paneles del instrumento La misma configuraci n de luces indicadoras est disponible para cada compartimento de las unidades del instrumento electroforesis y an lisis transferencia sondeo y secado Cuando las unidades del instrumento est n encendidas se iluminan las luces que muestran los nombres de los compartimentos Los indicadores est n ubicados en el panel de instrumento de cada
131. o de este manual Las Instrucciones de funcionamiento le proporcionan las instrucciones necesarias para instalar poner en funcionamiento y realizar tareas de mantenimiento del Amersham WB system de forma segura Alcance de este manual Las Instrucciones de funcionamiento contienen la informaci n siguiente informaci n sobre seguridad y de car cter normativo una descripci n del sistema incluidos los accesorios y consumibles que se van a usar con el sistema instrucciones de instalaci n informaci n sobre c mo realizar un experimento de forma segura instrucciones de mantenimiento para el usuario especificaciones e informaci n de referencia adicional Convenciones tipogr ficas Los elementos de software se identifican en el texto en cursiva negrita Los dos puntos separan los niveles del men de ese modo File Open se refiere al comando Open en el men File Los elementos de Hardware se identifican por el texto en negrita por ejemplo interrup torPower Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 1 Introducci n 1 2 Informaci n importante para los usuarios 1 2 Informaci n importante para los usuarios Lea lo siguiente antes de poner en funcionamiento el Amersham WB analyzer Todos los usuarios deben leer las Instrucciones de funcionamiento al completo antes de instalar utilizar o realizar trabajos de mantenimiento en el instrumento Mantenga las Instrucciones de funcionamiento a m
132. oducirse en el software Asas de la tarjeta rea de transferencia Paquete nico de la tarjeta PDVF Tarjeta PDVF con papeles de protecci n Etiqueta con el C digo del producto N mero de lote N mero de identifi caci n e Indicador de matriz de datos contiene el C digo del producto N mero de lote y N mero de ID Amersham WB transfer paper Los papeles de transferencia se usan al preparar el s ndwich de transferencia La ilustraci n que aparece a continuaci n muestra el papel de transferencia Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 81 3 Descripci n del sistema 3 7 Accesorios y consumibles para los pasos de la transferencia Western 3 7 1 Accesorios y consumibles para transferencia Amersham WB sponge Se utilizan dos esponjas al preparar el s ndwich de transferencia Las esponjas deben sustituirse despu s de cada ciclo La ilustraci n que aparece a continuaci n muestra una esponja 82 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 3 Descripci n del sistema 3 7 Accesorios y consumibles para los pasos de la transferencia Western 3 7 2 Anticuerpos secundarios sondeo 3 7 2 Anticuerpos secundarios sondeo Introducci n Las prote nas objetivo se identifican sondeando la membrana con anticuerpos primarios y con anticuerpos conjugados CyDye secundarios espec ficos de una especie Al usar dos especies diferentes de anticuerpos prima
133. oforesis en la p gi na 67 El tiempo para la pausa se calcula a partir de la configuraci n del voltaje y del amperaje El valor predeterminado es 5 minutos Opcional Introduzca una nota acerca de las tarje tas de gel en el campo Note 142 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 5 Realizar un experimento 5 6 Realizar electroforesis de prote nas 5 6 2 Realizar la electroforesis Paso Ilustraci n de pasos Start Ready for Electrophoresis Electrophoresis Elapsed time Electrophoresis in progress p prog 37 P Voltage Power Temp Gel A 50 mA Gel B 50 mA Current mA 60 Gel B Gel A 0 4 4 0 0 2 0 4 0 6 0 8 1 Time Minutes 2 Electrophoresis Acciones del operador Haga clic en Start en el rea Electrophoresis Resultado comienza el ciclo de electroforesis El progreso del ciclo aparece gr ficamente en las curvas que muestran la corriente el voltaje el efecto o la tempe ratura Tambi n se muestra el tiempo de ciclo transcurri do Consejo Durante la electroforesis hay tiempo para preparar solucio nes amortiguadoras y otras soluciones para las fases Western Para obtener m s informaci n consulte Sec ci n 5 7 1 Preparar y conec tar soluciones de transferen cia en la p gina 147 y Sec ci n 5 8 1 Preparar y conec tar sondas y soluciones de anticuerpos en la p gina 172 Pause for sample well clean up
134. oftware que muestra la fase del flujo de trabajo EXPERIMENT amp SAM PLES Para obtener informaci n general sobre la pantalla principal consulte Sec ci n 3 9 Descripci n general del software en la p gina 89 UU i EXPERIMENT SAMPLES Gel card 14 13 5 Gel card 14 8 18 e Elija el n mero de tarje tas de gel para el experi mento e Seleccione el tipo de tar jeta de gel Para obtener informaci n sobre los in tervalos de separaci n de la prote na consulte Resoluci n de la separa ci n de prote nas en la p gina 71 Resultado se activan la tabla Gel card A y las opciones del rea Antibodies for Membra ne A Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 125 5 Realizar un experimento 5 3 Configurar un experimento en el software Paso Ilustraci n de pasos Acciones del operador Introduzca informaci n y co a mentarios sobre la muestra Type Sample Ho Mena Lime y Are mE H oa en la tabla Gel card A opcio gt Amershaa WE MW Marica 5 y A A n ire A z ppuan u Consulte Secci n 3 6 1 6 Sampie M Amersham WB molecular J amiga al O r Er w qf weight markers en la p gi o hat E na 68 para obtener informa ANTE al mn ES ci n sobre los marcadores harpie no Pire de peso molecular y sobre el 14 Erie ai 3 Pa d a e c lculo autom tico de la E pe ae curva de calibraci n del peso molecular Consejo La tabla de muestras
135. ones de funcionamiento 29 0214 77 AE 165 5 Realizar un experimento 5 7 Realizar transferencia 5 7 3 Ejecutar transferencia Comenzar y monitorizar la transferencia PRECAUCI N Peligro de descarga el ctrica Detenga siempre cualquier ciclo de transferencia en curso antes de limpiar el liquido del instrumento o de la mesa Paso Ilustraci n de pasos Acciones del operador En la pantalla principal del software haga Mla clic en el paso de flujo de trabajo TRANSFER TRANSFER Gal Cord Membrones Utilice la configuraci n predeterminada para 7 Transfer Protocol como se muestra en la Membrane Y Position A Y Position B f E 5 q yn zo instant nea de pantalla Note Gel card ID Note Transfer Protocol Duration 30 15 180 minutes Voltage limit 100 10 100V Default Solutions amp Volumes Transfer buffer Cleaning Description Tris Glycine 20 Ethanol Water Total volume 1000 mi 1000 mi 166 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 5 Realizar un experimento 5 7 Realizar transferencia 5 7 3 Ejecutar transferencia Paso Ilustraci n de pasos Acciones del operador Haga clic en Start en el rea Transfer Transfer _ gt gt Nota Start Ready tor Transfer Durante el ciclo de transferencia se recomien da preparar y conectar las soluciones que se van a usar en la fase de sondeo Para obtener m s informaci n consulte Sec ci n 5 8 1 Preparar y
136. pa del compartimento de servicio a e Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 207 6 Mantenimiento 6 2 Instrucciones de mantenimiento 6 2 2 Procedimientos de reemplazo Paso Acci n Abra la tapa que est por encima del compartimento donde est ubicado el filtro girando la tuerca hacia la izquierda y quit ndola g Retire el filtro de su soporte tirando del soporte hacia arriba Retire la parte superior de la rejilla de pl stico del soporte donde est ubi cado el filtro Sustituya el filtro por uno nuevo y fije firmemente la parte superior de la re jilla de pl stico 208 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 6 Mantenimiento 6 2 Instrucciones de mantenimiento 6 2 2 Procedimientos de reemplazo Paso Acci n 6 Inserte el soporte ahora con filtro nuevo en las gu as del armaz n ri Ponga la tapa del compartimento del filtro de nuevo en su lugar y apriete la tuerca gir ndola hacia la derecha 8 Cierre la tapa del compartimento de servicio Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 209 6 Mantenimiento 6 2 Instrucciones de mantenimiento 6 2 2 Procedimientos de reemplazo Sustituir el cabezal de la bomba de sondeo o de transferencia En las instrucciones siguientes se describe c mo sustituir un cabezal de bomba utilizando la bomba de sondeo como ejemplo Las sustituci n del cabezal de transferencia es si
137. para salir del asistente de instalaci n The InstallShield Wizard has successfully installed Amersham WB software Click Finish to exit the wizard a A e 114 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 4 Instalaci n 4 3 Instalaci n del software Comprobar la comunicaci n del instrumento Paso Acci n 1 Encienda el ordenador la unidad Elpho amp scan y la unidad Western 2 Inicie el Amersham WB software Resultado El software mostrar la comunicaci n establecida con las unidades del instrumento Si no se establece comunicaci n e Es posible que el cable o las conexiones de alimentaci n sean incorrectos Compruebe toda la instalaci n del hardware e Lainstalaci n del controlador USB puede ser incorrecta Cambie el puerto USB del ordenador Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 115 5 Realizar un experimento 5 Realizar un experimento Acerca de este cap tulo En este cap tulo se ofrece una descripci n general de los dos tipos principales de expe rimentos que pueden realizarse con Amersham WB system Tambi n se describe el flujo de trabajo del tipo de experimento Western with total protein normalization Precauciones PRECAUCI N Utilice siempre guantes ropa de protecci n y gafas adecuadas durante el funcionamiento y mantenimiento del Amersham WB analyzer Contenido de este cap tulo Este cap tulo contiene las siguientes
138. paraci n de la muestra Cantidad 5 frascos tapones naranja Soluci n amortiguadora de carga de 0 7 ml por envase suficiente para dos tarjetas de gel La tabla siguiente describe el Amersham WB MiniTrap kit Consumible para la preparaci n de la muestra Amersham WB MiniTrap kit 66 Funci n El kit est dise ado para lim piar de manera r pida y conveniente las muestras de prote na gt 5000 M que con tienen sustancias interferen tes por ejemplo imidazol Cantidad 30 columnas PD MiniTrap G 25 desechables rellenas con medio SephadexTM G 25 1 botella de 10x Amersham WB labeling buffer 14 ml de soluci n est ndar Base de la columna bandeja para desechos y soporte para tubos integrados Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 3 Descripci n del sistema 3 6 Accesorios y consumibles para electroforesis 3 6 Accesorios y consumibles para electroforesis Introducci n Los siguientes accesorios y consumibles son necesarios para la electroforesis de prote nas Amersham WB buffer strip Amersham WB buffer strip holder Amersham WB molecular weight markers Amersham WB gel card Amersham WB paper comb si se va a realizar una limpieza del pocillo de muestras Amersham WB loading buffer consulte Secci n 3 5 Consumibles premarcados en la p gina 65 para obtener informaci n sobre la soluci n amortiguadora de carga En esta secci n Esta secc
139. plazo Acci n 10 11 12 Coloque el nuevo cabezal de bomba en la posici n correcta y g relo hacia la derecha Nota Aseg rese de que la rueda correspondiente del cabezal de bomba est en la posici n correcta para encajar en el eje motriz del motor de la bomba Bloquee el pestillo para que mantenga el cabezal de la bomba en la posici n correcta Conecte el tubo de la bomba de la derecha al conector derecho del cabezal de bomba Conecte el tubo de la bomba de la izquierda al conector izquierdo del cabezal de bomba Cierre la tapa del compartimento de servicio Sustituir los electrodos de transferencia Si falla el procedimiento de transferencia se podr a deber a electrodos de transferencia defectuosos Se recomienda sustituir ambos electrodos En las instrucciones siguientes se describe c mo sustituir los electrodos de transferencia Paso Acci n 1 Abra la tapa del dep sito de transferencia Los electrodos est ubicados en los dos lados Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 213 6 Mantenimiento 6 2 Instrucciones de mantenimiento 6 2 2 Procedimientos de reemplazo Paso Acci n 2 Saque el electrodo 3 4 Repita el procedimiento de la misma manera que para el electrodo del lado derecho 5 Cierre la tapa del dep sito de transferencia 214 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 6 Mantenimiento 6 2 Instrucciones
140. po de tarjeta de gel 3 Tapa del pocillo de muestras que debe quitarse cuando se ha cerrado el tap n de sellado de la unidad Elpho amp scan antes de aplicar las muestras 4 Asas para gel que facilitan la manipulaci n del gel cuando se ha retirado de su soporte para la transferencia Western Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 3 Descripci n del sistema 3 6 Accesorios y consumibles para electroforesis 3 6 2 Amersham WB gel card Descripci n Orificios gu a para la colocaci n correcta de las tarjeta de gel en el cargador del Elpho amp scan y en la bandeja de transferencia Marcaje con indicador de matriz de datos n mero de lote e ID Ilustraci n del reverso de una tarjeta de gel La ilustraci n que aparece a continuaci n muestra la tarjeta de gel con el lado posterior hacia arriba Descripci n Pel culas protectoras que se retiran antes de la electroforesis para permitir el contacto entre el gel y las tiras de soluci n amortiguadora Pel cula protectora que se retira al preparar el s ndwich de transferencia solo pertinente a los experimentos Western Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 73 3 Descripci n del sistema 3 6 Accesorios y consumibles para electroforesis 3 6 3 Amersham WB buffer strip y Amersham WB buffer strip holder 3 6 3 Amersham WB buffer strip y Amersham WB buffer strip holder Introducci n
141. r reparaciones para asegurarse de que se hayan eliminado los residuos peligrosos Desmantelamiento ADVERTENCIA Desinfecte el equipo antes de desmantelarlo para asegurarse de que se hayan eliminado los residuos peligrosos Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 25 2 Instrucciones de seguridad 2 2 Etiquetas 2 2 Etiquetas Introducci n En esta secci n se describen las etiquetas de seguridad y las etiquetas sobre sustancias peligrosas que se encuentran adheridas al Amersham WB analyzer Para obtener infor maci n sobre la rotulaci n del equipo inform tico consulte las instrucciones del fabri cante 26 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 2 Instrucciones de seguridad 2 2 Etiquetas Ubicaci n de las etiquetas en el Amersham WB analyzer La siguiente ilustraci n muestra la ubicaci n de las etiquetas en la unidad Elpho amp scan y en la unidad Western Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 27 2 Instrucciones de seguridad 2 2 Etiquetas Descripci n Computer Western unit Etiqueta de producto de la unidad Amersham WB elpho scan Etiqueta de seguridad relacionada con la luz l ser Etiqueta de producto de la unidad Amersham WB western Elpho amp scan unit Only for service Etiqueta de la unidad Elpho scan La siguiente ilustraci n muestra un eje
142. ra la detecci n cuando se realizan experi mentos de electroforesis Tambi n se requiere en experimentos Western cuando se trata de detectar el total de prote nas en una membrana En esta secci n se describen e requisitos previos para el premarcaje e materiales necesarios para el premarcaje e preparaciones antes de comenzar el premarcaje e marcaje de muestras protocolo de premarcaje En este ejemplo se realiza el premarcaje de muestras de lisis de c lula tejido que se van a usar en un experimento Western with total protein normalization Para obtener m s informaci n acerca del premarcaje consulte Amersham WB system User Manual Precauciones ADVERTENCIA Cuando trabaje en el premarcaje de muestras de prote nas e Utilice siempre ropa de protecci n guantes y gafas adecuadas e Leala Ficha de datos de seguridad SDS MSDS antes de realizar el premarcaje de muestras PRECAUCI N Al realizarse el premarcaje de las proteinas de las muestras puede surgir un fuerte olor procedente de los vestigios de sulfato de dime tilo DMS y de dimetil sulf xido DMSO Puede ser necesaria venti laci n local para evacuar los gases Para el funcionamiento seguro siga las normativas e instrucciones locales Nota Para obtener una eficacia de marcaje comparable los par metros impor tantes como pH volumen de la reacci n temperatura y sales de soluci n amortiguadora deben ser constantes La eficacia d
143. ra nivelar las unidades horizontalmente Esto es especial mente importante para la unidad Western 6 Si no est restringido por el fabricante y si el ordenador es un port til este puede colocarse en la parte superior de la unidad Elpho scan Consulte las especificaciones del ordenador relacionadas con el entorno adecuado Si se va a usar un ordenador encima de una mesa el monitor y el teclado pueden colocarse sobre la parte superior de la unidad Elpho amp scan El orde nador en s no debe colocarse en la parte superior Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 99 4 Instalaci n 4 2 Instalaci n del hardware Retirar el dispositivo de seguridad de transporte de la unidad Elpho 8 scan Para proteger los componentes fr giles del esc ner en la unidad Elpho scanse ha acoplado un dispositivo de seguridad para el transporte Retire con cuidado el dispositivo de seguridad durante el transporte antes de encender la unidad Instalar electrodos de transferencia ADVERTENCIA Desconecte la alimentaci n Recuerde siempre desconectar la corriente el ctrica del instrumento antes de reemplazar cualquier componente a menos que se indique lo contrario en la documen taci n del usuario Paso Acci n il Abrir la tapa del dep sito de transferencia Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 4 Instalaci n 4 2 Instalaci n del hardware Paso Acci
144. rane Scanning Position A Cy3 Position B Cy3 Ver los resultados Paso Acci n 1 Haga clic en el paso del flujo de trabajo EVALUATION del software Resultado se eval an las im genes en el rea Membrane Scanning El progreso de la evaluaci n se muestra en la barra de progreso 190 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE Paso 5 Realizar un experimento 5 9 Analizar membrana y ver los resultados Acci n Cuando se haya realizado la evaluaci n de las im genes estas se mostrar n en la pantalla Evaluaci n que mostrar los valores normalizados para el experimento en la pesta a Bar chart Para obtener m s informaci n sobre c mo analizar los resultados consulte el User Manual o la software help Procedimientos despu s del an lisis de la membrana Paso Acci n 1 Pulse el bot n de expulsi n en la unidad Elpho amp scan Resultado se expulsa el cargador Abra la tapa de sellado Retire de la placa de la tarjeta el adaptador de membrana con la tarjeta PVDF Retire la tarjeta PVDF del adaptador de membrana Consejo La tarjeta PVDF puede almacenarse en condici n seca entre dos papeles de filtro en el paquete nico original de tarjetas PVDF Las se ales en la tarjeta PVDF seca permanecen estables durante unos 3 meses Limpie los adaptadores de membrana con un pa o que no deje pelusa y vuelva a colocar los adaptadores en el espacio de almacenamiento del compartimen
145. rar el s ndwich de transferencia Paso Ilustraci n de pasos Acciones del operador e Coloque la bandeja de transfe rencia con el lado negro hacia abajo e Abra la bandeja de transferen cia presionando los pestillos y levantando la tapa blanca e Presione la tapa hasta que los pasadores de rodillo lleguen a las dos cavidades marcadas con c rculos de color naranja en la imagen e Retire la tapa blanca levant n dola a trav s de las dos cavi dades Coloque la primera esponja sobre la tapa negra Moje un papel de transferencia en soluci n amortiguadora de trans ferencia y col quelo sobre la es ponja de la tapa negra el asidero del papel de transferencia debe estar posicionado entre los pasa dores gu a 156 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 5 Realizar un experimento 5 7 Realizar transferencia 5 7 2 Preparar el s ndwich de transferencia Ilustraci n general del desmontaje de la tarjeta de gel La ilustraci n siguiente muestra una vista expandida de las partes de la tarjeta de gel que se desmontan despu s del ciclo de electroforesis La tabla siguiente describe brevemente las partes de la tarjeta de gel que se van a desmontar Fase Descripci n 1 Pel cula protectora En primer lugar se extrae esta pel cula 2 Molde de gel Se aflojan previamente los bordes del molde de gel de su soporte 3 en la Ilustraci n y luego se retiran cui
146. reactivo de tinte Cy5 e Soluci n amortiguadora para lisis original para ajustar el volumen de la reacci n solo experimentos de Western e tubos microcentrifugadores de 0 5 ml e Bloque calefactor e V rtex e Centr fuga Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 129 5 Realizar un experimento 5 4 Realizar el premarcaje de muestras Preparaciones antes de comenzar el premarcaje Paso Acci n 1 e Saque del congelador uno de cada de los siguientes frascos suficiente para procesar dos tarjetas de gel 1frasco de Amersham WB Cy5 1frasco de Amersham WB loading buffer e Descongele completamente los componentes de premarcaje e Equilibre el frasco de Cy5 a la temperatura ambiente antes de abrirlo para evitar la condensaci n de humedad 2 Centrifugue brevemente el l quido con reactivo de tinte Cy5 con la centrifuga 3 Establezca la temperatura del bloque calefactor en 95 C 4 Para reducir la SDS PAGE electroforesis en gel de poliacrilamida con dode cilsulfato s dico agregue agente reductor a la soluci n amortiguadora de carga e Agregue 29 ul 1 M DTT de soluci n est ndar a 0 7 ml un frasco de solu ci n amortiguadora de carga y h galo girar para mezclarlo 130 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 5 Realizar un experimento 5 4 Realizar el premarcaje de muestras Realizar premarcaje de muestras protocolo de premarcaje Western Consejo E
147. rencia 5 7 2 Preparar el s ndwich de transferencia Paso Acci n 5 Opcional Introduzca la informaci n de la tarjeta PVDF en el software e Seleccione el paso del flujo de trabajo TRANSFER del software e Enel rea Gel Cards Membranes coloque el cursor en el campo ID apropiado e Escriba manualmente el n mero de identificaci n o escanee el indicador de matriz de datos en la etiqueta del paquete nico de tarjetas PVDF Amersham WB PVDF card 1 piece 29022566 Lotno 00115381 Identity no 0000001 Remove and d se e Para introducir una nota acerca de la membrana coloque el cursor en el campo Note y escriba la nota Consejo Escriba el n mero de lote Este no se incluye en la matriz de datos pero est disponible en la etiqueta de la caja de tarjetas PVDF Gel Cards amp Membranes Membrane J Position A Fj Position B ID Note 6 Agarre las asas de la tarjeta PVDF y moje la tarjeta en etanol dej ndola en la bandeja con etanol durante aproximadamente 20 segundos 7 Traslade la tarjeta PVDFal PVDF recipiente de soluci n amortiguadora de transferencia y equil brela durante al menos 5 minutos Nota Aseg rese de que la tarjeta PVDF est cubierta con soluci n amortiguadora de transferencia durante este tiempo Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 155 5 Realizar un experimento 5 7 Realizar transferencia 5 7 2 Preparar el s ndwich de transferencia Comience a prepa
148. rencia de la unidad Western Descripci n 1 Pistas gu a para el s ndwich 2 Indicador de posici n A y posici n B 50 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 3 Descripci n del sistema 3 3 Unidad Western 3 3 2 Compartimentos de la unidad Western Descripci n Electrodo derecho de transferencia Filtro del dep sito de transferencia Electrodo izquierdo de transferencia Ilustraci n del compartimento de sondeo La ilustraci n siguiente muestra el compartimento de sondeo de la unidad Western 1 5 4 5 Pieza Descripci n 1 C mara de sondeo Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 51 3 Descripci n del sistema 3 3 Unidad Western 3 3 2 Compartimentos de la unidad Western Descripci n Tapa de la c mara de sondeo Indicador de posici n A y posici n B Pasadores gu a para tarjeta PVDF marcados con c rculos naranja Tapa del compartimento de sondeo Pestillo de la tapa de la c mara de sondeo Ilustraci n del compartimento de secado La ilustraci n siguiente muestra el compartimento de secado de la unidad Western 2 FR A B m Pieza Descripci n Gu as de secador de la membrana Indicador de posici n A y posici n B ubicaciones 52 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 3 Descripci n del sistema 3 3 Unidad Western 3 3 2 Compartimentos de la uni
149. resis y an lisis Nota El cargador solo puede abrirse cuando no hay ning n experimento de electroforesis o an lisis en marcha Para poder expulsar el cargador se debe detener primero cualquier ciclo que est en curso mediante la instruc ci n de software adecuada Patas ajustables 4 patas una en cada esquina Ilustraci n del panel posterior de la unidad Elpho scan La ilustraci n siguiente muestra las partes principales del panel posterior de la unidad Elpho amp scan Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 41 3 Descripci n del sistema 3 2 Unidad Elpho amp scan Descripci n Conector para cable USB USB tipo B Para conectar la unidad Elpho scan a un ordenador Conexi n de comunicaci n para la unidad Western usar cable Ethernet Entrada de aire Interruptor de red de alimentaci n ENC l APA 0 Portafusibles 5 x 20 mm Conector de cable de alimentaci n 60320 C14 Salidas de aire Cargador de Elpho scan Cargador de El cargador de Elpho scan se usa para cargar e tarjetas de gel para electroforesis y an lisis e Tarjetas PVDF para an lisis Al cargar tarjetas PVDF para analizarlas se debe colocar primero una Amersham WB membrane adapter sobre la placa de la tarjeta para obtener m s informaci n consulte Secci n 5 9 Analizar membrana y ver los resultados en la p gina 187 El cargador se expulsa de la unidad Elp
150. rgarlas Preparar y conectar soluciones de transferencia Preparar y conectar sondas y soluciones de anticuerpos Y Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 119 5 Realizar un experimento 5 1 Informaci n general Flujo de trabajo Western con normalizaci n de proteinas totales La ilustraci n siguiente muestra los pasos principales del tipo de experimento Western with total protein normalization Este flujo de trabajo se utiliza para ejemplificar la realizaci n de un experimento t pico y se describe con m s detalle en las secciones subsiguientes Para otros tipos de experimentos consulte el Amersham WB system User Manual Experimento Western Western con normalizaci n de prote nas totales Iniciar instrumento Configurar experimento en el software Realizar premarcaje Ejecutar electroforesis y Preparar y conectar an lisis con gel soluciones de transferencia Preparar s ndwich de transferencia Ejecutar transferencia Preparar y conectar sondas y soluciones de anticuerpos Y Realizar sondeo y secado Analizar membranas y ver resultados 120 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 5 Realizar un experimento 5 1 Informaci n general La tabla siguiente enumera las secciones en las que se describen los pasos Consulte Iniciar instrumento Secci n 5 2 Inicie el Amersham WB analyzer en la p gi naizz Configurar un experi Secci n 5 3
151. rios rat n y conejo y un anticuerpo con jugado secundario Cy3y un anticuerpo conjugado secundario Cy5 se puede realizar un an lisis multiplex que detecte simult neamente dos prote nas en la misma membrana Est n disponibles las siguientes variantes de anticuerpos conjugados secundarios CyDye e Amersham WB goat anti mouse Cy3 cabra anti rat n Cy3 e Amersham WB goot anti rabbit Cy3 cabra anti conejo Cy3 e Amersham WB goat anti mouse Cy5 cabra anti rat n Cy5 e Amersham WB goot anti rabbit Cy5 cabra anti conejo Cy5 CyDye conjugado con los anticuerpos secundarios El CyDye conjugado con los anticuerpos secundarios tiene sus propias longitudes de onda de excitaci n y emisi n en el espectro de luz visible y se diferencian espectralmente la una de la otra lo cual resulta en un m nimo intercambio de comunicaci n v ase la tabla que aparece a continuaci n Longitud de onda de resalte Longitud de onda de emisi n Despu s de la excitaci n las se ales de emisi n fluorescente resultantes son capturadas mediante el esc ner fluorescente multicanal en la unidad Elpho amp scan El CyDye tiene una alta fotoestabilidad La se al en la membrana sondeada es estable durante un periodo de gt 3 meses si se conserva en la oscuridad Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 83 3 Descripci n del sistema 3 7 Accesorios y consumibles para los pasos de la transferencia Western 3 7
152. rios y consumibles para electroforesis 3 6 1 Amersham WB molecular weight markers Ilustraci n de los marcadores del peso molecular La ilustraci n que aparece a continuaci n muestra los tama os de Amersham WB mo lecular weight markers separados en una tarjeta de gel con gradiente imagen de la iz quierda y una tarjeta de gel homog nea imagen de la derecha Mos 225 w 97 66 Es 50 mus 55 25 20 14 qu 10 pe 225 97 66 e 50 35 25 E 20 M1 10 Prote nas marcadoras del peso molecular La tabla siguiente muestra las prote nas que se incluyen Prote na Peso molecular M x10 Prote na recombinante Fosforilasa b m sculo de conejo Alb mina suero bovino 66 Prote na recombinante 50 Prote na recombinante 39 Prote na recombinante 25 Inhibidor de tripsina soja 20 Alfa lactoalb mina leche de vaca 14 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 69 3 Descripci n del sistema 3 6 Accesorios y consumibles para electroforesis 3 6 1 Amersham WB molecular weight markers Prote na Peso molecular M x10 70 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 3 Descripci n del sistema 3 6 Accesorios y consumibles para electroforesis 3 6 2 Amersham WB gel card 3 6 2 Amersham WB gel card Introducci n Esta secci n describe los detalles sobre la tarjeta de gel Tipos de ta
153. rjeta de gel Hay dos tipos de tarjetas de gel e Tarjeta de gel homog neo Amersham WB gel card 14 13 5 e Tarjeta de gel con gradiente Amersham WB gel card 14 8 18 Composici n del gel Los geles vienen prefabricados en el cartucho de tarjetas de gel Los geles son de polia crilamida bisacrilamida que contienen una soluci n amortiguadora de triacetato Resoluci n de la separaci n de proteinas La tabla siguiente muestra la resoluci n de separaci n de prote nas para los tipos de tarjetas de gel Tipo de tarjeta de gel Resoluci n de separaci n M x10 Amersham WB gel card 14 13 5 De 10a 225 homog nea Amersham WB gel card 14 8 18 e De6a225 prote nas premarcadas con gradiente e De3 5a225 Western experimentos de tecci n de anticuerpos Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 71 3 Descripci n del sistema 3 6 Accesorios y consumibles para electroforesis 3 6 2 Amersham WB gel card Ilustraci n del lado frontal de una tarjeta de gel 72 La ilustraci n que aparece a continuaci n muestra la tarjeta de gel con el lado frontal encarado hacia arriba m a I l MIMO 1 AQ l T Lotizou s0t 7 Pieza Descripci n 1 Superficie de escritura para que haga sus propias anotaciones Nota Utilice siempre un l piz para escribir las anotaciones La anotaci n tambi n puede introducirse en el software 2 Etiqueta con el ti
154. rucci n se describe como desembalar el Amersham WB analyzer Disponibilidad En el interior de la caja de entrega de Amersham WB analyzer Instrucciones de funcionamiento de Amersham WB system Este manual contiene la informaci n necesaria para instalar manejar y realizar manteni miento del Amersham WB system de forma segura realizar un experimento t pico de forma segura Tambi n contiene informaci n de segu ridad y normativa una descripci n del sistema e informaci n de referencia Con el sistema se entrega la versi n impresa en ingl s Las versiones traducidas es t n disponibles en archivos PDF en el CD de documenta ci n del usuario Amersham WB system User Manual Este manual contiene la informaci n necesaria para operar y realizar mantenimiento del Amersham WB system de forma segura planificar realizar y evaluar la elec troforesis y experimentos Western resolver problemas del sistema y resultados Tambi n contiene una descripci n del sistema informaci n de referencia e informaci n sobre pedidos Integrado con Amersham WB software como manual en HTML en el men Ayuda Tambi n disponible como archivo PDF en el CD de do cumentaci n del usuario 14 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 1 Introducci n 1 4 Amersham WB system documentaci n Documento Contenido principal Amersham WB software El Amersham WB software Help
155. rumento en relaci n con la tarea operacional que se va a realizar Los acce sorios del instrumento se entregan con el sistema y los consumibles se piden por sepa rado Los accesorios que se van a instalar se describen en Secci n 4 2 Instalaci n del hardware en la p gina 97 y los accesorios para tareas de mantenimiento por parte del usuario se describen en Accesorios de mantenimiento en la p gina 206 Para ver una descripci n detallada de los accesorios y consumibles consulte las seccio nes subsiguientes Consumibles necesarios Consumibles Para obte necesarios ner infor maci n de tallada consulte Premarcaje de e Amersham WB Cy5 N A Secci n 3 5 muestras e Amersham WB labeling buffer Etiqueta do de la soluci n amortiguadora e Amersham WB loading buffer Carga de la soluci n amortiguadora e Amersham WB MiniTrap kit opcional 60 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 3 Descripci n del sistema 3 4 Descripci n general de accesorios y consumibles Consumibles necesarios Consumibles Para obte necesarios ner infor maci n de tallada consulte Ejecuci n de Amersham WB molecular weight mar Amersham WB buffer Secci n 3 6 electroforesis kers Marcadores de peso molecular strip holder 1 Sopor te de tiras de soluci n Amersham WB gel card Tarjeta de gel amortiguadoro Amersham WB buffer strip Tira de solu ci n amortiguadora Amersham WB loading b
156. s y conectores de sondeo Material de los tubos FEP di metro inter no 0 063 Casquillo amarillo Conector de tubos Tuerca de 1 4 28UNF 2 B Especificaciones de transferencia Par metro Descripci n Voltage 10 100 V 1 1 La potencia m xima es 40 W La intensidad de corriente m xima es de 400 mA Especificaciones de sondeo Par metro Descripci n Vol menes sondeo de anticuerpos 5 12 ml 224 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE Especificaciones de secado Par metro Temperatura 7 Informaci n de referencia 7 1 Especificaciones del sistema Descripci n M ximo 45 C Tiempo de secado Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 10 minutos 225 7 Informaci n de referencia 7 2 Gu a de resistencia qu mica 7 2 Gu a de resistencia qu mica Introducci n En esta secci n se especifica la resistencia qu mica del Amersham WB analyzer a algunos de los productos qu micos m s com nmente usados en la electroforesis y en la transfe rencia Western Supuestos Las clasificaciones se basan en los siguientes supuestos e Nose han tenido en cuenta los efectos sin rgicos de las mezclas qu micas e Se supone la temperatura ambiente y la sobrepresi n limitada Nota Las influencias qu micas dependen del tiempo y de la presi n A menos que se establezca lo contrario todas las concentraciones son al 100 Lista de qu micos
157. secciones Secci n Consulte la p gina 5 1 Informaci n general 118 5 2 Inicie el Amersham WB analyzer 122 5 3 Configurar un experimento en el software 124 5 4 Realizar el premarcaje de muestras 128 5 5 Preparaci n del Amersham WB molecular weight markers 132 5 6 Realizar electroforesis de prote nas 134 5 7 Realizar transferencia 146 5 8 Realizar sondeo y secado 171 116 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 5 Realizar un experimento Secci n Consulte la p gina 5 9 Analizar membrana y ver los resultados 187 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 117 5 Realizar un experimento 5 1 Informaci n general 5 1 Informaci n general Introducci n En esta secci n se ofrece una descripci n general de los dos tipos principales de expe rimentos que pueden realizarse e experimentos de electroforesis e Experimentos Western incluye electroforesis de prote nas En esta secci n se describe el flujo de trabajo de un experimento t pico se describe en las secciones subsiguientes con ilustraciones del tipo de experimento Western with total protein normalization Experimentos de electroforesis En los experimentos de electroforesis las muestras son premarcadas con reactivo de tinte Cy5 antes de la electroforesis Esto permite la detecci n directa de prote nas pre marcadas en la muestra eliminando la necesidad de colorear posteriormente el gel En el paso de
158. sferencia y mantenerla a temperatura ambiente Desag e del dep sito de transferencia Principio b sico del proceso de transferencia Durante la transferencia se realiza una transferencia electrofor sica de las prote nas separadas en el gel hacia la membrana El principio b sico del proceso de transferencia se describe a continuaci n Fase Descripci n 1 Cuando el Amersham WB transfer holder s bandeja de transferencia se ha cargado en el dep sito de transferencia el dep sito de transferencia se llena con soluci n amortiguadora de transferencia el tubo marcado como T Buffer 2 Durante la fase de transferencia la soluci n amortiguadora de transferencia es bombeada a trav s del dep sito de transferencia de la unidad de refri geraci n de transferencia de la bomba de transferencia y del bloque de la v lvula de transferencia y la soluci n amortiguadora de transferencia cir cula durante el ciclo La unidad de refrigeraci n para transferencia se asegura de que la soluci n amortiguadora de transferencia se mantenga a temperatura ambiente du rante el ciclo 3 Despu s de un ciclo y despu s de la retirada de las bandejas de transferen cia se usa agua ultra pura para limpiar el recorrido del flujo de l quido se usa el tubo marcado como T Water para la limpieza Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 57 3 Descripci n del sistema 3 3 Unidad Western 3 3 3 Recorridos de
159. sicionadas correctamente cuando se prepara el s ndwich de transferencia Al usar el rodillo integrado al desplazar el rodillo sobre el s ndwich en las pistas del ro dillo se eliminan las burbujas de aire y se aplicar presi n que es reproducible sobre la tarjeta de gel y la tarjetaPVDF para que el proceso de transferencia sea uniforme Para obtener m s informaci n sobre la preparaci n del s ndwich de transferencia consulte Comience a preparar el s ndwich de transferencia en la p gina 156 78 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 3 Descripci n del sistema 3 7 Accesorios y consumibles para los pasos de la transferencia Western 3 7 1 Accesorios y consumibles para transferencia Ilustraci n de la bandeja de transferencia cuando est cerrada La imagen que aparece a continuaci n muestra la bandeja de transferencia cuando est cerrada ll Ilustraci n de la bandeja de transferencia cuando est desmontada La imagen que aparece a continuaci n muestra la bandeja de transferencia cuando ha sido desmontada La tabla siguiente describe las diferentes partes de la bandeja de transferencia Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 79 3 Descripci n del sistema 3 7 Accesorios y consumibles para los pasos de la transferencia Western 3 7 1 Accesorios y consumibles para transferencia Pieza Funci n Parte inferior tapa negra Pestillos
160. sisas iii 221 Le GUS TES NU eree 226 7 3 Formulario de declaraci n de salud y Seguridad oc occnccnccccnccnnnnmnmenss 228 7 4 Traducciones de accesorios y consumibles ccccccocococaconuninnononncnnnnnranrencennmarnrnraarss 231 Mana 232 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 1 Introducci n 1 Introducci n El Amersham WB system El Amersham WB system es un sistema integrado para SDS PAGE y para an lisis de prote nas en transferencia Western basado en la detecci n por fluorescencia Los pasos de electroforesis an lisis transferencia y sondeo autom tico los realiza el mismo sistema Hay disponibles reactivos para premarcaje y detecci n de anticuerpos as como consu mibles de gel y membranas El Amersham WB system incluye el instrumento el Amersham WB analyzer Amersham WEB software software y los accesorios y consumibles El Amersham WB analyzer se compone de dos unidades la unidad Amersham WB elpho amp scan y la unidad Amersham WB western El sistema es compatible con muchas aplicaciones desde el cribado r pido de la com posici n o abundancia de las prote nas hasta el an lisis cuantitativo avanzado para hacer comparaciones de niveles de prote na entre muestras Las prote nas pueden ser premarcadas con el reactivo Amersham WB Cy 5 y por tanto pueden detectarse di rectamente en el gel despu s de la electroforesis En los experimentos Western las muestras de prote nas no marcadas o
161. ssssrrrrirrsssssssssenn 68 3 6 2 Amer nan WB GE Cd ressirrdi iia AEREA S 71 3 6 3 Amersham WB buffer strip y Amersham WB buffer strip holder 74 3 6 4 Amersham WB paper COMO arras 76 3 7 Accesorios y consumibles para los pasos de la transferencia Western T7 3 7 1 Accesorios y consumibles para transferencia sssri 78 372 Anticuerpos secundarios Sondeo ccocccncconuninninonncncnnnrnnmnnnrrerrrrrarnrss 83 Ira Soporte de secado secado de la tarjeta PVDF sssssssssssesssirirssssssssssssssrsrrrrrrsssssss 85 3 7 4 Adaptador de membrana an lisis de tarjeta PVDF nsss 86 gt QVO OCCO OOS dao 87 3 9 Descripci n general del software ad 89 A o ASA A 93 A io oli io H T e a 94 42 Instalaci n del A A A ia 97 4s colo e 111 5 Realizar un experimento eesessseserseeseeseeseeeserserseesceseeseesseesesseeseeseessesseeserseeseeseees 116 B o A E 118 5 2 Inicie el Amersham WB analyzer ccoccocinncconocanoconanonnnnnroncencensnsnrnrnrarrrrrrrrrerernrs 122 5 3 Configurar un experimento en el SoftWare ssssssssssssssssssssssssssssssssssssesrssrsesirsrssrrirrrrrrrrrrerrerrrsess 124 5 4 Realizar el premarcaje de MUestrQS mcccccccocicociconaconennncnsnnnrerarerarrrrrrras 128 5 5 Preparaci n del Amersham WB molecular weight markers onncccicacicnnnacnmmm 132 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 3 ndice 5 6 Realizar electroforesis de proteinas ccocccocicocinonnn
162. tem Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE Intervalo Medida de mantenimiento 6 Mantenimiento 6 1 Programa de mantenimiento Instrucciones Semanalmente o cuando no se va a usar el instrumento durante varios d as Intervalo Anualmente Limpieza de mantenimiento del recorri do del flujo de transferencia Consulte Secci n 6 2 1 Limpieza sema nal de los recorridos de los flujos de transferencia y de sondeo en la p gi na 202 Limpieza de mantenimiento del recorri do del flujo de sondeo Consulte Secci n 6 2 1 Limpieza sema nal de los recorridos de los flujos de transferencia y de sondeo en la p gi na 202 Inspeccione y sustituya si est da ado e bombas e tuber a elfiltro de aire e filtro de entrada Inspeccione y apriete los conectores de los tubos Medida de mantenimiento Consulte Secci n 6 2 2 Procedimientos de reemplazo en la p gina 206 para ob tener m s informaci n sobre c mo sustituir los cabezales de las bombas el filtro de aire y el filtro de entrada P ngase en contacto con el departa mento de servicio si necesita sustituir los tubos Instrucciones Sustituya el filtro de aire en el m dulo secador Puede ser necesario sustituir el filtro de aire con m s frecuencia si el entorno externo es m s severo que el de los la boratorios normales en cuanto a la cantidad de polvo en el aire Consulte Sustituir el filtro de aire en la p gina 20
163. tenimiento 6 2 Instrucciones de mantenimiento 6 2 3 Traslado de las unidades del instrumento 6 2 3 Traslado de las unidades del instrumento Precauciones PRECAUCI N Equipo de Protecci n Personal EPP Durante el llenado vaciado transporte o traslado del sistema debe utilizar siempre e Calzado de protecci n preferiblemente con recubrimiento de acero e Guantes de trabajo para protegerse de los bordes afilados e Guantes protectores PRECAUCI N Objeto pesado Para levantar las unidades del instrumento de forma segura son necesarias dos personas PRECAUCI N Nunca mueva la unidad Western con las botellas colocadas sobre esta AVISO Desconecte los cables Para prevenir da os al equipo desconecte siempre los cables antes de desplazar cualquier parte del instru mento Instrucciones para levantamiento Paso Acci n 1 Desconecte todos los cables de las unidades del instrumento y retire cual quier botella que se encuentre en ellas 218 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 6 Mantenimiento 6 2 Instrucciones de mantenimiento 6 2 3 Traslado de las unidades del instrumento Paso Acci n 2 Se necesitan dos personas Para elevar la unidad agarre con ambas manos cada lado de la unidad y lev ntela Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 219 7 Informaci n de referencia 7 Informaci n de referencia Ac
164. to de anticuerpos Limpie los soportes de secado con un pa o que no desprenda pelusa y vuelva a colocar los soportes en el compartimiento de secado Con un pa o que no deje pelusa si es necesario impregnado en una soluci n de 50 de etanol limpie la placa de la tarjeta Con un pa o que no deje pelusa si es necesario impregnado en una soluci n de 50 de etanol limpie el vidrio protector Nota Es importante mantener el vidrio protector limpio por ambas caras con el fin de obtener un buen resultado al analizar las tarjetas de gel y las tarjetas PVDF Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 191 5 Realizar un experimento 5 9 Analizar membrana y ver los resultados Paso Acci n 9 Cierre la tapa de sellado y pulse el bot n de expulsi n en la unidad Elpho amp scan Resultado se inserta el cargador 192 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 6 Mantenimiento 6 Mantenimiento Acerca de este cap tulo En esta secci n se enumeran las actividades de mantenimiento peri dico que ser n realizadas por el usuario de Amersham WB analyzer as como actividades de manteni miento que deben realizarse cuando sea necesario Precauciones ADVERTENCIA No utilice el equipo Amersham WB analyzer si no funciona correc tamente o si ha sufrido alg n da o por ejemplo e da os en el cable de alimentaci n o el enchufe e da os causados porque el equipo se cay
165. tos de electroforesis generalmente no hay necesidad de diluir los Amersham WB molecular weight markers Si es necesario diluya los marcadores de peso molecular con la soluci n amortiguadora de carga que contiene DTT diluida con un volumen igual de agua ultra pural 132 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 5 Realizar un experimento 5 5 Preparaci n del Amersham WB molecular weight markers Reproducciones Se recomienda incluir dos filas de marcadores durante el proceso y as obtener los me jores resultados posibles en la calibraci n autom tica del peso molecular de prote nas de muestra durante el paso de evaluaci n Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 133 5 Realizar un experimento 5 6 Realizar electroforesis de prote nas 5 6 Realizar electroforesis de prote nas Introducci n En esta secci n se describe c mo realizar la electroforesis de prote nas que incluye e preparaciones antes de comenzar la electroforesis e realizar limpieza del pocillo de muestras e comenzar y monitorizar la electroforesis y el an lisis de la tarjeta de gel e procedimientos despu s de la electroforesis y del an lisis de la tarjeta de gel En esta secci n Esta secci n contiene las siguientes subsecciones Secci n Consulte la p gina 5 6 1 Antes de la electroforesis 135 5 6 2 Realizar la electroforesis 142 5 6 3 Procedimientos despu s de la electroforesis y del an l
166. tos de reemplazo 6 2 2 Procedimientos de reemplazo Introducci n En esta secci n se describe c mo sustituir e elfiltro de aire e los cabezales de las bombas de transferencia y de sondeo e los electrodos de transferencia e elfiltro del dep sito de transferencia e Filtros de entrada e elfusible de la red el ctrica Accesorios de mantenimiento Son necesarios los siguientes accesorios para tareas de mantenimiento del Amersham WB analyzer e cabezal de bomba para la bomba de transferencia y la bomba de sondeo e elfiltro de aire e elfiltro del dep sito de transferencia e los electrodos de transferencia e conjunto de filtros de entrada e fusible para usarlo correctamente consulte Secci n 7 1 Especificaciones del sistema en la p gina 221 Precauciones ADVERTENCIA Desconecte la alimentaci n Recuerde siempre desconectar la corriente el ctrica del instrumento antes de reemplazar cualquier componente a menos que se indique lo contrario en la documen taci n del usuario 206 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 6 Mantenimiento 6 2 Instrucciones de mantenimiento 6 2 2 Procedimientos de reemplazo ADVERTENCIA Retire cualquier botella del soporte de botellas antes de abrir la tapa del compartimento de mantenimiento Sustituir el filtro de aire En las instrucciones siguientes se describe c mo sustituir el filtro de aire Paso Acci n j Abra la ta
167. traci n de pasos Acciones del operador e Gire la tarjeta de gel de modo que el reverso quede hacia arriba las asas azules sin etiquetas quedan hacia arriba e Agarre el extremo de la pel cula protectora en la parte inferior de la tarje ta de gel y con cuidado ret rela e Agarre el extremo de la pel cula protectora en la parte superior de la tarje ta de gel y con cuidado ret rela Al retirar las pel culas protec toras se establece contacto entre el gel y la soluci n amortiguadora cuando se coloca la tarjeta de gel sobre la placa de la tarjeta Tenga cuidado de no tocar las su perficies expuestas del gel 138 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE Paso Ilustraci n de pasos 5 Realizar un experimento 5 6 Realizar electroforesis de prote nas 5 6 1 Antes de la electroforesis Acciones del operador e Gire el gel de modo que su lado frontal quede hacia arriba es decir la tapa del pocillo de muestras mirando hacia arriba Nota Aseg rese de que la pla ca de la tarjeta est com pletamente seca e Coloque la tarjeta de gel sobre la placa de la tarje ta alineando los orificios del armaz n con los pa sadores gu a que est n marcados con c rculos de color naranja Nota Tenga cuidado de no rayar la placa de la tarjeta con ning n objeto afilado Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 139 5 Rea
168. uffer Amersham WB paper comb opcional Peine de papel Western pasos de la transferencia Transferencia Amersham WB gel card del ciclo de Amersham WB trans Secci n electroforesis fer holder Bandeja 371 de transferencia Amersham WB PVDF card tarjeta PVDF Amersham WB transfer paper Papel de transferencia Amersham WB sponge Esponja Soluciones de transferencia preparadas en laboratorio para recetas consulte Recetas de soluciones de transferencia en la p gina 147 Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 61 3 Descripci n del sistema 3 4 Descripci n general de accesorios y consumibles Sondeo Consumibles necesarios Soluciones de anticuerpos primarios preparadas en laboratorio Anticuerpo secundario Amersham WB goat anti mouse Cy3 Cy5 cabra anti rat n Cy3 Cy5 o Amersham WB goat anti rabbit Cy3 Cy5 cabra anti conejo Cy3 Cy5 Tarjeta PVDF de la fase de transferencia Soluciones de sondeo preparadas en laboratorio para asuntos relacionados con recetas consulte Sondeo y recetas de soluciones de anticuerpos en la p gi na 172 Consumibles necesarios Tubos para soluci n de anticuerpos Para obte ner infor maci n de tallada consulte Secci n 3 7 2 Secado TarjetaPVDF de la fase de sondeo Amersham WB drying holder Soporte de se cado An lisis de la tar jeta PVDF en la unidad Elpho scan Tarjeta
169. ultra pura 4 Sumerja el tubo T Buffer en una botella que contenga 1000 ml de 0 5 M NaOH 5 En el cuadro de di logo haga clic en el bot n Start clean 6 Cuando termine la limpieza coloque el tubo en una botella vac a Nota Elimine todas las soluciones despu s de la limpieza Limpieza de mantenimiento del recorrido del flujo de sondeo El procedimiento tardar aproximadamente 45 minutos La transferencia y el secado pueden realizarse al mismo tiempo Nota Aseg rese de que no haya tarjetas PVDF en las c maras de sondeo Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 203 6 Mantenimiento 6 2 Instrucciones de mantenimiento 6 2 1 Limpieza semanal de los recorridos de los flujos de transferencia y de sondeo Paso ADVERTENCIA Cuando trabaje con qu micos peligrosos evite los derrames y use gafas de protecci n y otros equipos de protecci n personal ade cuados Por ejemplo el NaOH es corrosivo y por tanto peligroso para la salud Acci n 204 En el software seleccione Control Maintenance clean Probing flow path o haga clic en el bot n Maintenance clean Probing de la pantalla de inicio del software Resultado se abre el cuadro de di logo Maintenance Clean Probing Flow Path y Maintenance Clean Probing Flow Path Maintenance cleaning of the probing flow path 1 Wipe all probing tubing with a wet tissue 2 Insert the probing Water tubing in at least 1000 ml water
170. unidad La ilustraci n siguiente muestra los paneles del instrumento de las dos unidades con los nombres de los compartimentos iluminados Amersham WB system Instrucciones de funcionamiento 29 0214 77 AE 37 3 Descripci n del sistema 3 1 Descripci n general del instrumento ELPHO amp SCAN E TRANSFER UN IN ORYING E Indicadores del instrumento La tabla siguiente describe los diferentes indicadores Los indicadores Listo Ciclo finali zado Procesar y Error o Advertencia son id nticos para todos los compartimentos de las unidades del instrumento En este ejemplo TRANSFER se describen los indicadores Indicadores de estado Estado Descripci n TRANSFER Encendido El texto se ilumina cuando la unidad se est encendiendo y realizando pruebas internas TRANSFER ES Listo Ciclo finaliza La luz se enciende cuando do ai e la unidad compartimento est lista para un nuevo experimento e se ha completado una fase por ejemplo electroforesis an lisis transferencia sondeo o secado TRANSFER Ejecuci n La luz se enciende e cuando la unidad compartimento est funcionando e durante la limpieza del recorrido del flujo de transferencia o de sondeo Nota No abra las tapas relacionadas mientras est funcionando Por ejemplo si se abre la tapa de transferencia durante la transferencia se detendr el ciclo de transferencia y el resultado puede verse afectado 38 Amersham WB

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