TESTOSTERONE-ELISA - DIAsource Immunoassays
Contents
1. C to 8 C unopened reagents will retain reactivity until expiration date Do not use reagents beyond this date Opened reagents must be stored at 2 C 8 C Microtiter wells must be stored at 2 C 8 C Once the foil bag has been opened care should be taken to close it tightly again 4 4 Reagent preparation Allow all reagents and required number of strips to reach room temperature prior to use Wash Solution Add deionized water to the 40X concentrated Wash Solution Dilute 30 mL of concentrated Wash Solution with 1170 mL deionized water to a final volume of 1200 mL The diluted Wash Solution is stable for 2 weeks at room temperature Catalogue Nr KAPD1559 PI number 1701268 en Revision Nr 140127 1 4 5 Disposal of the kit The disposal of the kit must be made according to the national regulations Special information for this product is given in the Material Safety Data Sheets 4 6 Damaged test kits In case of any severe damage to the test kit or components has to be informed in writing at the latest one week after receiving the kit Severely damaged single components should not be used for a test run They have to be stored until a final solution has been found After this they should be disposed according to the official regulations 5 SPECIMEN COLLECTION AND PREPARATION Serum or plasma EDTA Heparin or citrate plasma can be used in this assay Do not use haemolytic icteric or lipaemic spec2. Samples have been spiked by adding Testosterone solutions with known concentrations in a 1 1 ratio The expected values were calculated by addition of half of the values determined for the undiluted samples and half of the values of the known solutions The Recovery has been calculated by multiplication of the ratio of the measurements values and the expected values with 100 1 1 v v ng mL ng mL ng mL 0 0 1 10 9 31 3 93 1 67 0 91 9 6 Linearity Catalogue Nr KAPD1559 PI number 1701268 en Revision Nr 140127 1 Measured Conc Expected Conc Recovery ng mL ng mL 10 LIMITATIONS OF USE Reliable and reproducible results will be obtained when the assay procedure is performed with a complete understanding of the package insert instruction and with adherence to good laboratory practice Any improper handling of samples or modification of this test might influence the results 10 1 Interfering substances Haemoglobin up to 4 mg mL Bilirubin up to 0 25 mg mL and Triglyceride up to 7 5 mg mL have no influence on the assay results 10 2 Drug interferences Until today no substances drugs are known to us which have an influence to the measurement of Testosterone in a sample 10 3 High Dose Hook Effect No hook effect was observed in this test 11 LEGAL ASPECTS 11 1 Reliability of Results The test must be performed exactly as per the manufacturer s instructions for use Moreover the user must strictly
3. INC BUF ACETONITRILE SERUM DIL SPE DIL BUF ANTISERUM IMMUNOADSORBENT DIL CAL REC SOLN PEG EXTR ELU GEL PRE NEUTR TRACEUR Ab Ag Ab Ag CONJ CHROM CHROM SUB EXTR CART SAV PIPETTE WASH Used symbols Consult instructions for use Storage temperature Use by Batch code Catalogue number Control In vitro diagnostic medical device Tubes Manufacturer Contains sufficient for lt n gt tests Wash solution concentrated Zero calibrator Calibrator Control Tracer Tracer Tracer concentrated Tracer concentrated Incubation buffer Acetonitrile Serum Specimen diluent Dilution buffer Antiserum Immunoadsorbent Calibrator diluent Reconstitution solution Polyethylene glycol Extraction solution Elution solution Bond Elut Silica cartridges Pre treatment solution Neutralization solution Tracer buffer Microtiterplate Conjugate HRP Conjugate HRP Conjugate concentrate HRP Conjugate concentrate Conjugate buffer Chromogenic TMB concentrat
4. adhere to the rules of GLP Good Laboratory Practice or other applicable national calibrators and or laws This is especially relevant for the use of control reagents It is important to always include within the test procedure a sufficient number of controls for validating the accuracy and precision of the test The test results are valid only if all controls are within the specified ranges and if all other test parameters are also within the given assay specifications In case of any doubt or concern please contact 11 2 Therapeutic Consequences Therapeutic consequences should never be based on laboratory results alone even if all test results are in agreement with the items as stated under point 11 1 Any laboratory result is only a part of the total clinical picture of a patient Only in cases where the laboratory results are in acceptable agreement with the overall clinical picture of the patient should therapeutic consequences be derived The test result itself should never be the sole determinant for deriving any therapeutic consequences 11 3 Liability Any modification of the test kit and or exchange or mixture of any components of different lots from one test kit to another could negatively affect the intended results and validity of the overall test Such modification and or exchanges invalidate any claim for replacement Claims submitted due to customer misinterpretation of laboratory results subject to point 11 2
5. la concentraci n de Testosterona en la muestra Despu s de la adici n de la soluci n sustrato la intensidad de color desarrollado es inversamente proporcional a la concentraci n de Testosterona en la muestra del paciente e PRECAUCIONES Este kit es solamente para diagn stico in vitro Por favor se usa solo la version valida de la metodico t cnico incluido aqui en el kit Para obtener informaci n de las sustancias peligrosas incluidas en el kit por favor mirar las hojas de los datos de seguridad del material Todos los reactivos en este kit de ensayo que contienen suero o plasma humano se han ensayado y confirmado ser negativos para HIV 1 11 HBsAg y HCV mediante procedimientos aprobados por la FDA Sin embargo todos los reactivos deben ser tratados tanto en su uso como dispensaci n como potencialmente biopeligrosos Evitar contacto con Stop Solution que contiene H2SO 0 5 M Puede provocar irritaci n y quemaduras en la piel Nunca pipetear con la boca y evitar el contacto de los reactivos y las muestras con la piel y con membranas mucosas fumar comer beber o usar cosm ticos en reas donde las muestras o los reactivos del kit est n siendo usados Usar guantes de l tex cuando se utilicen las muestras y los reactivos La contaminaci n microbiana de los reactivos o las muestras puede dar resultados err neos El manejo debe realizarse de acuerdo a los procedimientos definidos por las gu as o
6. los asuntos fijados en el punto 11 1 Cualquier resultado de laboratorio es solamente una parte del cuadro cl nico de un paciente Solamente en los casos donde los resultados de laboratorio est n en acuerdo con todo el cuadro cl nico de un paciente se pueden derivar consecuencias terap uticas Nunca deben derivarse consecuencias terap uticas a partir de solamente el resultado obtenido en el ensayo Responsabilidad Cualquier modificaci n del kit y o cambio o mezcla de cualquier componente procedentes de kits de lotes diferentes puede afectar negativamente a los resultados esperados y en la validez de todo el test Esas modificaciones y o cambios invalidad cualquier reclamaci n de reposici n Las reclamaciones emitidas debidas a una mala interpretaci n de los resultados de laboratorio por parte del comprador referidos al punto 11 2 son tambi n inv lidas A pesar de todo en el caso de cualquier reclamaci n la responsabilidad del fabricante no excede el valor del kit Cualquier da o provocado al kit durante su transporte no est sujeto a la responsabilidad del fabricante REFERENCIAS BIBLIOGRAF A Consultar el manual de usuario en ingl s Fecha de revisi n 2014 01 27 Catalogue Nr KAPD1559 PI number 1701268 es Revision Nr 140127 1 P I Number 1701000 CAL CAL CONTROL Ag Ab Ag Ab 0
7. regulaci n nacionales de seguridad de sustancias biopeligrosas No utilizar los reactivos despu s de su fecha de caducidad que aparece en las etiquetas del kit Todos los vol menes indicados han de ser realizados de acuerdo con el protocolo Los resultados ptimos del ensayo se obtienen solo cuando se utilizan pipetas y lectores de microplacas calibrados No mezclar o usar componentes de kits con distinto n mero de lote Se recomienda no intercambiar pocillos de distintas placas incluso si son del mismo lote Los kits pueden haber sido enviados o almacenados bajo diferentes condiciones y las caracter sticas de uni n de las placas pueden resultar diferentes Los compuestos qu micos y los reactivos preparados o utilizados han de tratarse como residuos peligrosos de acuerdo con las gu as o regulaci n nacionales de seguridad de sustancias biopeligrosas Las hojas de los datos de seguridad de este producto est n disponibles bajo pedido directamente a DIAsource ImmunoAssays S A Las hojas de los datos de seguridad se ajustan a las demandas de las gu a europea EU Guideline 91 155 EC Catalogue Nr KAPD1559 PI number 1701268 es Revision Nr 140127 1 COMPONENTES DEL KIT Componentes del Kit Microtiterwells Placas multipocillo 12x8 tiras separables 96 pocillos Pocillos recubiertos con anticuerpo anti Testosterona monoclonal 2 E Calibrador Calibrador 0 6 7 viales 1 mL listo para usar Concentra
8. CEDIMIENTO DE ENSAYO Consideraciones generales Todos los reactivos y muestras han de estar a temperatura ambiente antes de su uso Todos los reactivos deben mezclarse sin formar espuma Una vez se ha comenzado el ensayo deben completarse todos los pasos sin interrupci n Utilizar puntas de pipeta de pl stico nuevas para cada calibrador control o muestra para evitar combinaciones cruzadas La absorbancia es funci n del tiempo de incubaci n y la temperatura Antes de comenzar el ensayo se recomienda que todos los reactivos est n preparados tapas removidas todos los pocillos que se necesiten asegurados en recipiente etc Esto asegurar un tiempo similar para cada paso de pipeteo sin que haya interrupciones Como regla general la reacci n enzim tica es linealmente proporcional al tiempo y a la temperatura Catalogue Nr KAPD1559 PI number 1701268 es Revision Nr 140127 1 Procedimiento de ensayo Cada uno debe incluir una curva de calibradors Asegurar el n mero deseado de pocillos en el recipiente 2 Dispensar 25 uL de cada Calibrador Control y muestras con puntas nuevas en los pocillos adecuados 3 Dispensar 200 pL de Enzyme Conjugate a cada pocillo Mezclar totalmente durante 10 segundos Es importante mezclar completamente en este paso 4 Incubar durante 60 minutes a temperatura ambiente 5 Sacudir en rgicamente el contenido de los pocillos Lavar los pocillos veces con soluci n de lavado diluida 400 uL po
9. DIA e TESTOSTERONE ELISA KAPD1559 DIAsource ImmunoAssays S A Rue du Bosquet 2 B 1348 Louvain la Neuve Belgium LOT 140127 1 TESTOSTERONE ELISA KAPD1559 IN VITRO DIAGNOSTIC USE DiAsource ImmunoAssays SA Rue du Bosquet 2 B 1348 Louvain la Neuve Belgium Tel 32 10 84 99 11 Fax 32 10 84 91 90 1 INTRODUCTION 1 1 Intended Use The DlAsource Testosterone ELISA is an enzyme immunoassay for the quantitative in vitro diagnostic measurement of Testosterone in serum and plasma 1 2 Summary and Explanation Testosterone 178 hydroxy 4 androstene 3 one is a C19 steroid with an unsaturated bond between C 4 and C 5 a ketone group and a hydroxyl group in the B position at C 17 This steroid hormone has a molecular weight of 288 47 Testosterone is the most important androgen secreted into the blood In males testosterone is secreted primarily by the Leydig cells of the testes in females ca 50 of circulating testosterone is derived from peripheral conversion of androstenedione ca 25 from the ovary and ca 25 from the adrenal glands Testosterone is responsible for the development of secondary male sex characteristics and its measurements are helpful in evaluating the hypogonadal states In women high levels of testosterone are generally found in hirsutism and virilization polycystic ovaries ovarian tumors adrenal tumors and adrenal hyperplasia In men high levels of testosterone are associ
10. Quality Assessment programs in order to ensure the accuracy of the results Employ appropriate statistical methods for analysing control values and trends If the results of the assay do not fit to the established acceptable ranges of control materials patient results should be considered invalid In this case please check the following technical areas Pipetting and timing devices photometer expiration dates of reagents storage and incubation conditions aspiration and washing methods After checking the above mentioned items without finding any error contact your distributor or DIAsource directly 9 PERFORMANCE CHARACTERISTICS 9 1 Assay Dynamic Range The range of the assay is between 0 083 16 ng mL Catalogue Nr KAPD1559 PI number 1701268 en Revision Nr 140127 1 9 2 Specificity of Antibodies Cross Reactivity The following substances were tested for cross reactivity of the assay 5a Dihydrotestosterone 08 Androstenedione 09 9 3 Sensitivity The analytical sensitivity of the DIAsource ELISA was calculated by subtracting 2 standard deviations from the mean of 20 replicate analyses of the Zero Calibrator and was found to be 0 083 ng mL 9 4 Reproducibility 9 1 1 Intra Assay Variation The within assay variability is shown below sample Wem emi ov 11 26 9 1 2 Inter Assay Variation The between assay variability is shown below sample n mean tamy 11 38 9 5 Recovery
11. acas multipocillo han de almacenarse a 2 8 C Una vez se ha abierto la bolsa hay que tener cuidado y cerrarla de nuevo Preparaci n de los Reactivos Dejar que todos los reactivos y el n mero requerido de tiras alcancen la temperatura ambiente antes de usarse Wash Solution Mezclar 30 mL de la soluci n de lavado concentrada con 1170 mL de agua desionizada hasta un volumen final de 1200 mL La soluci n del lavado diluida es estable durante 2 semanas a temperatura ambiente Eliminacion del Kit La eliminaci n del kit debe realizarse de acuerdo con las leyes nacionales En las hojas de datos de seguridad se proporciona informaci n especial de este producto Kits de ensayo da ados En caso de que exista cualquier da o severo del kit de ensayo o de sus componentes ha de informarse por escrito a DIAsource ImmunoAssays S A no mas tarde de una semana despu s de recibir el kit No deben utilizarse componentes da ados para llevar a cabo un ensayo Han de almacenarse hasta que se encuentre una soluci n Despu s de esto deben ser eliminados de acuerdo con las leyes oficiales Catalogue Nr KAPD1559 PI number 1701268 es Revision Nr 140127 1 MUESTRAS En este ensayo pueden usarse suero o plasma plasma EDTA Heparina o citrato No usar muestras hemol ticas ict ricas o lip micas Tener en cuenta No deben usarse muestras que contengan acida s dica Toma de muestras Suero Recoger la sangre por punci n en la ve
12. and precision of this assay is markedly influenced by the correct performance of the washing procedure Add 200 uL of Substrate Solution to each well Incubate for 15 minutes at room temperature Stop the enzymatic reaction by adding 100 uL of Stop Solution to each well Determine the absorbance OD of each well at 450 10 nm with a microtiter plate reader It is recommended that the wells be read within 10 minutes after adding the Stop Solution Q0 io Catalogue Nr KAPD1559 PI number 1701268 en Revision Nr 140127 1 6 3 Calculation of the results Calculate the average absorbance values for each set of calibrators controls and patient samples Construct a calibration curve by plotting the mean absorbance obtained from each calibrator against its concentration with absorbance value on the vertical Y axis and concentration on the horizontal X axis 3 Using the mean absorbance value for each sample determine the corresponding concentration from the calibration curve 4 Automated method The results in the IFU have been calculated automatically using a 4 PL 4 Parameter Logistics curve fit 4 Parameter Logistics is the preferred method Other data reduction functions may give slightly different results 5 The concentration of the samples can be read directly from this calibration curve Samples with concentrations higher than that of the highest calibrator have to be further diluted or reported as gt 16 Ing mL For the calc
13. are also invalid Regardless in the event of any claim the manufacturer s liability is not to exceed the value of the test kit Any damage caused to the test kit during transportation is not subject to the liability of the manufacturer 12 REFERENCES LITERATURE 1 Tietz N W Textbook of Clinical Chemistry Saunders 1986 Revision date 2014 01 27 Catalogue Nr KAPD1559 PI number 1701268 en Revision Nr 140127 1 TESTOSTERONE ELISA KAPD1559 IN VITRO DIAGNOSTIC USE DiAsource ImmunoAssays SA Rue du Bosquet 2 B 1348 Louvain la Neuve Belgium Tel 32 10 84 99 11 Fax 32 10 84 91 90 1 INTRODUCCI N El Kit de inmunoensayo enzim tico DlAsource Testosterone ELISA proporciona los materiales necesarios para la determinaci n cuantitativa del Testosterona en suero y plasma Este ensayo est dise ado solo para diagn stico in vitro e FUNDAMENTO DEL ENSAYO El Kit DIAsource Testosterone ELISA es un ensayo en fase s lida de inmunoadsorci n unido a enzimas ELISA basado en el principio de uni n competitiva Los pocillos de las placas est n recubiertos con un anticuerpo monoclonal dirigido contra un foci antig nico en la mol cula Testosterona En las muestras de los pacientes Testosterona compite con un conjugado Testosterona peroxidasa de r bano en la uni n al anticuerpo inmovilizado Despu s de la incubaci n el conjugado no unido se lava La cantidad de conjugado de peroxidasa unido es inversamente proporcional a
14. ated to the hypothalamic pituitary unit diseases testicular tumors congenital adrenal hyperplasia and prostate cancer Low levels of testosterone can be found in patients with the following diseases Hypopituitarism Klinefelter s syndrome Testicular feminization Orchidectomy and Cryptorchidism enzymatic defects and some autoimmune diseases 2 PRINCIPLE OF THE TEST The DlAsource Testosterone ELISA Kit is a solid phase enzyme linked immunosorbent assay ELISA based on the principle of competitive binding The microtiter wells are coated with a monoclonal mouse antibody directed towards an unique antigenic site on the Testosterone molecule Endogenous Testosterone of a patient sample competes with a Testosterone horseradish peroxidase conjugate for binding to the coated antibody After incubation the unbound conjugate is washed off The amount of bound peroxidase conjugate is reverse proportional to the concentration of Testosterone in the sample After addition of the substrate solution the intensity of colour developed is reverse proportional to the concentration of Testosterone in the patient sample 3 WARNINGS AND PRECAUTIONS 1 This kit is for in vitro diagnostic use only For professional use only 2 All reagents of this test kit which contain human serum or plasma have been tested and confirmed negative for HIV I II HBsAg and HCV by FDA approved procedures All reagents however should be treated as potential biohazards in use and
15. ciones 0 0 2 0 5 1 2 6 16 ng mL Conversion 1 ng mL 3 467 nmol L Contiene 0 03 Proclin 300 0 005 gentamicin sulfate como conservante El 3 Enzyme Conjugate Conjugado enzim tico 1 vial 25 mL listo para usar Testosterona conjugado con la Peroxidasa de r bano contiene 0 03 Proclin 300 0 015 BND 0 010 MIT como conservante 4 crow Substrate Solution Soluci n de sustrato 1 vial 25 mL listo para usar Tetrametilbencidina TMB Stop Solution Soluci n de parada 1 vial 14 mL listo para usar contiene 0 5M H2SOz Evitar el contacto con la Soluci n de parada Puede causar irritaci n y quemaduras en al piel Wash Solution Soluci n de lavado 1 vial 30 mL concentrado 40X ver Preparaci n de los Reactivos a STOP SOLN 2 BND 5 bromo 5 nitro 1 3 dioxane Bromonitrodioxano MIT 2 methyl 2H isothiazol 3 one Metilisotiazolona Nota Se puede solicitar el Calibrador 0 para la diluci n de la muestra Equipamiento y material requerido pero no provisto Lector de microplacas calibrado 450 10 nm ej Microtiter Plate Reader Micropipetas de precisi n variable calibradas Papel absorbente Agua destilada Almacenamiento y estabilidad del kit Cuando se almacena a 2 8 C los reactivos sin abrir mantienen su reactividad hasta la fecha de caducidad No utilizar los reactivos m s all de esta fecha Los reactivos abiertos han de almacenarse a 2 8 C Las pl
16. e Chromogenic TMB solution Substrate buffer Stop solution Incubation serum Buffer Conjugate Substrate PNPP Biotin conjugate concentrate Assay buffer Avidine HRP concentrate Biotin conjugate Specific Antibody Streptavidin HRP concentrate Non specific binding 2nd Antibody Acidification Buffer Distributor Incubation trays PMSF solution Protect from light Dot Strip Substrate Extraction Buffer Concentrate Cartridge Streptavidin HRP Pipette Wash buffer Revision nr 130513 P I Number 1701000 WASH CAL CAL CONTROL Ag Ab Ag Ab T INC BUF ACETONITRILE SERUM DIL SPE DIL BUF ANTISERUM IMMUNOADSORBENT DIL CAL REC PEG EXTR ELU GEL PRE NEUTR TRACEUR Ab Ag Ab Ag CONJ CHROM CHROM SUB STOP INC BUF Ab CART SAV PIPETTE WASH SOLN S mbolos utilisados Consultar las instrucciones de uso Limitaci n de temperatura F
17. echa de caducidad Codigo de lote N mero de cat logo Control Producto sanitario para diagn stico in vitro Fabricante Contenido suficiente para lt n gt ensayos Soluci n de lavado concentrada Calibrador cero Calibrador Control Trazador Trazador Trazador concentrada Trazador concentrada Tubos Tamp n de incubaci n Acetonitrilo Suero Diluyente de Muestra 3 Tamp n de diluci n Antisuero Inmunoadsorbente Diluyente de calibrador Soluci n de Reconstituci n Glicol Polietileno Soluci n de extracci n Soluci n de eluci n Cartuchos Bond Elut Silica Soluci n de Pre tratamiento Soluci n de Neutralizaci n Tamp n de trazador Placa de microvaloraci n HRP Conjugado Conjugado HRP Conjugado concentrada HRP Conjugado concentrada Tamp n de Conjugado Crom gena TMB concentrada Soluci n Crom gena TMB Tamp n de sustrato Soluci n de Parada Suero de Incubaci n Tamp n AP Conjugado Sustrato PNPP Concentrado de conjugado de biotina Concentrado avidina HRP Tamp n de ensayo Conjugado de biotina Anticuerpo espec fico Estreptavidina HRP Concentrado Uni n no espec fica Segundo anticuerpo Tamp n de Acidificaci n Distribuidor Bandejas de incubaci n Soluci n de PMSF Proteger de la luz Tries Dot Sustrato Concentrado de tamp n de extracci n Cartucho Estreptavidina HRP Pipeta Tampon de lavado Revision
18. es al mayor calibrador han de diluirse Para el c lculo de las concentraciones hay que tener en cuenta el factor de diluci n NA 1 1 1 Ejemplo t pico de una curva calibrador Los siguientes datos son solamente para la explicaci n y no pueden ser utilizados en lugar de los datos generados en el momento del ensayo Unidades pticas 450 nm Catalogue Nr KAPD1559 PI number 1701268 es Revision Nr 140127 1 e VALORES ESPERADOS Se recomienda encarecidamente que cada laboratorio determine sus valores normales e inusuales En un estudio con adultos aparentemente sanos utilizando el DIAsource Testosterone ELISA se observaron los siguientes valores Poblaci n Percentil 5 Percentil 95 2 0 ng mL 6 9 ng mL 0 26 ng mL 1 22 ng mL 2 CONTROL DE CALIDAD Se recomienda usar muestras control de acuerdo con las leyes estatales y federales El uso de muestras control ser recomienda para asegurar la validez diaria de los resultados Usar controles tanto a niveles normal como patol gico Los controles y los correspondientes resultados del Laboratorio de control de calidad est n fijados en el certificado de control de calidad que acompa an al kit Los valores y los rangos fijados en la hoja del control de calidad se refieren siempre al kit actual y deben usarse para la comparaci n directa de los resultados Es recomendable tambi n hacer uso de programas de Aseguramiento de la Calidad nacionales o internacionales para asegurar la exac
19. for disposal 3 Before starting the assay read the instructions completely and carefully Use the valid version of the package insert provided with the kit Be sure that everything is understood 4 microplate contains snap off strips Unused wells must be stored at 2 C to 8 C in the sealed foil pouch and used in the frame provided 5 Pipetting of samples and reagents must be done as quickly as possible and in the same sequence for each step 6 Use reservoirs only for single reagents This especially applies to the substrate reservoirs Using a reservoir for dispensing a substrate solution that had previously been used for the conjugate solution may turn solution colored Do not pour reagents back into vials as reagent contamination may occur Mix the contents of the microplate wells thoroughly to ensure good test results Do not reuse microwells Do not let wells dry during assay add reagents immediately after completing the rinsing steps Allow the reagents to reach room temperature 21 26 C before starting the test Temperature will affect the absorbance readings of the assay However values for the patient samples will not be affected 10 Never pipet by mouth and avoid contact of reagents and specimens with skin and mucous membranes 11 Do not smoke eat drink or apply cosmetics in areas where specimens or kit reagents are handled 12 Wear disposable latex gloves when handling specimens and reagents Microbial contaminat
20. imens Please note Samples containing sodium azide should not be used in the assay 5 1 Specimen collection Serum Collect blood by venipuncture e g Sarstedt Monovette 02 1388 001 allow to clot and separate serum by centrifugation at room temperature Do not centrifuge before complete clotting has occurred Patients receiving anticoagulant therapy may require increased clotting time Plasma Whole blood should be collected into centrifuge tubes containing anti coagulant and centrifuged immediately after collection E g for EDTA plasma Sarstedt Monovette red cap 02 166 001 for Heparin plasma Sarstedt Monovette orange cap 02 165 001 for Citrate plasma Sarstedt Monovette green cap 02 167 001 5 2 Specimen storage and preparation Specimens should be capped and may be stored for up to 5 days at 2 8 C prior to assaying Specimens held for a longer time should be frozen only once at 20 C prior to assay Thawed samples should be inverted several times prior to testing 5 3 Specimen dilution If in an initial assay a specimen is found to contain testosterone more than the highest calibrator the specimens can be diluted with Calibrator 0 and reassayed as described in Assay Procedure For the calculation of the concentrations this dilution factor has to be taken into account Example a Dilution 1 10 10 uL Serum 90 uL Calibrator O mix thoroughly b Dilution 1 100 10 uL dilution a 1 10 90 uL Ca
21. ion of reagents or specimens may give false results 13 Handling should be done in accordance with the procedures defined by an appropriate national biohazard safety guideline or regulation 14 Do not use reagents beyond expiry date as shown on the kit labels 15 All indicated volumes have to be performed according to the protocol Optimal test results are only obtained when using calibrated pipettes and microtiterplate readers 16 Do not mix or use components from kits with different lot numbers It is advised not to exchange wells of different plates even of the same lot The kits may have been shipped or stored under different conditions and the binding characteristics of the plates may result slightly different 17 Avoid contact with Stop Solution containing 0 5 M H2SO It may cause skin irritation and burns 18 Some reagents contain Proclin 300 BND and or MIT as preservatives In case of contact with eyes or skin flush immediately with water 09 73 Catalogue Nr KAPD1559 PI number 1701268 en Revision Nr 140127 1 19 20 21 TMB substrate has an irritant effect on skin mucosa In case of possible contact wash eyes with an abundant volume of water and skin with soap and abundant water Wash contaminated objects before reusing them If inhaled take the person to open air Chemicals and prepared or used reagents have to be treated as hazardous waste according to the national biohazard safety guideline o
22. librator 0 mix thoroughly 6 ASSAY PROCEDURE 6 1 General remarks All reagents and specimens must be allowed to come to room temperature before use All reagents must be mixed without foaming Once the test has been started all steps should be completed without interruption Use new disposal plastic pipette tips for each calibrator control or sample in order to avoid cross contamination Absorbance is a function of the incubation time and temperature Before starting the assay it is recommended that all reagents are ready caps removed all needed wells secured in holder etc This will ensure equal elapsed time for each pipetting step without interruption general rule the enzymatic reaction is linearly proportional to time and temperature 6 2 Test procedure Each run must include a calibrationcurve Secure the desired number of Microtiter wells in the holder 2 Dispense 25 uL of each Calibrator Control and samples with new disposable tips into appropriate wells Dispense 200 uL Enzyme Conjugate into each well Thoroughly mix for 10 seconds It is important to have a complete mixing in this step 4 Incubate for 60 minutes at room temperature without covering the plate 5 Briskly shake out the contents of the wells Rinse the wells times with diluted Wash Solution 400 uL per well Strike the wells sharply on absorbent paper to remove residual droplets Important note The sensitivity
23. na ej Sarstedt Monovette 02 1388 001 permitir coagulaci n y separar el suero por centrifugaci n a temperatura ambiente No centrifugar antes de la coagulaci n completa Las muestras de pacientes que reciben terapia anticoagulante requieren m s tiempo para coagular Plasma Toda la sangre ha de recogerse en tubos de centr fuga que contengan anticoagulante y centrifugar inmediatamente tras la recogida Ej Para plasma EDTA Sarstedt Monovette tapa roja 02 166 001 para plasma Heparina Sarstedt Monovette tapa naranja 02 165 001 para plasma Citrato Sarstedt Monovette tapa verde 02 167 001 Almacenamiento de las muestras Las muestras deben ser tapadas y pueden ser almacenadas hasta 5 dias a 2 8 C antes del ensayo Las muestras almacenadas por un per odo de tiempo mas largo han de congelarse s lo una vez a 20 C antes del ensayo Las muestras descongeladas deben invertirse varias veces antes del ensayo Diluci n de las muestras Si en un ensayo inicial se encuentra una muestra que presenta valores mayores que el calibrador mas concentrado ha de diluirse con Calibrador 0 y volver a ensayarse como se describe en el Procedimiento de Ensayo Para el c lculo de las concentraciones habr que tener en cuenta el factor de diluci n Ejemplo a diluci n 1 10 10 uL Suero 90 uL Calibrador 0 mezclar totalmente b diluci n 1 100 10 uL diluci n a 1 10 90 uL Calibrador 0 mezclar totalmente e PRO
24. nr 130513
25. r pocillo Realizar un golpe seco de los pocillos contra el papel absorbente para eliminar las gotas residuales Nota importante La sensibilidad y la precisi n de este ensayo se ve marcadamente influenciada por la realizaci n correcta del proceso de lavado Adicionar 200 uL de Substrate Solution a cada pocillo Incubar durante 15 minutes a temperatura ambiente Parar la reacci n enzim tica mediante la adici n de 100 uL de Stop Solution a cada pocillo o ESO Leer la OD a 450 10 nm con un lector de microplacas dentro de los 10 minutos despu s de la adici n de la Stop Solution C lculo de los Resultados Calcular los valores de absorbancia media para cada conjunto de calibradors controles y muestras de pacientes Construir una curva calibrador mediante la representaci n de la absorbancia media obtenida para cada calibrador frente a su concentraci n con el valor de absorbancia en el eje vertical Y y la concentraci n en el eje horizontal X 3 Usando el valor de absorbancia media de cada muestra determinar la concentraci n correspondiente a partir de la curva calibrador 4 M todo automatizado Los resultados en la IFU se han calculado autom ticamente usando una curva de regresi n 4 PL 4 Par metros Log sticos Otras funciones de regresi n dar n lugar a resultados sensiblemente diferentes 5 La concentraci n de las muestra puede leerse directamente de la curva de calibradors Las muestras con concentraciones superior
26. r regulation For information on hazardous substances included in the kit please refer to Material Safety Data Sheets Material Safety Data Sheets for this product are available upon request directly from DlAsource REAGENTS Reagents provided Microtiterswells 12 x 8 break apart strips 96 wells Wells coated with a mouse monoclonal anti Testosterone antibody 7 vials 1 ml ready to use Concentrations 0 0 2 0 5 1 2 6 16 ng mL Conversion 1 ng mL 3 467 nmol L Contains 0 03 Proclin 300 0 005 gentamicin sulfate as a preservative ag Enzyme Conjugate 1 vial 25 mL ready to use Testosterone conjugated to horseradish peroxidase contains 0 03 Proclin 300 0 015 BND and 0 010 MIT as a preservative Ready to use Tetramethylbenzidine TMB 1 vial 14 ml Ready to use Contains 0 5M 2504 Avoid contact with the stop solution It may cause skin irritations and burns wast conc 1 vial 30 ml 40X concentrated see Preparation of Reagents BND 5 bromo 5 nitro 1 3 dioxane MIT 2 methyl 2H isothiazol 3 one Note Additional Calibrator O for sample dilution is available upon request 4 2 o 9rd om 4 3 Materials required but not included A microtiter plate calibrated reader 450 10 nm Calibrated variable precision micropipettes Absorbent paper Distilled or deionized water Timer Semi logarithmic graph paper or software for data reduction Storage conditions When stored at 2
27. s resultados Sustancias que pueden interferir Hemoglobina hasta 4 mg mL Bilirrubina hasta 0 25 mg mL y Triglic ridos hasta 7 5 mg mL no influencian los resultados del ensayo Interferencias con drogas Hasta ahora no se han encontrado sustancias drogas conocidas por nosotros que tengan influencia en la medida de Testosterona en una muestra Efecto Gancho Dosis Elevada No se ha observado efecto gancho en este ensayo e ASPECTOS LEGALES Fiabilidad de los Resultados El ensayo debe realizarse exactamente de acuerdo a las instrucciones del fabricante Mas a n el usuario debe ajustarse estrictamente a las reglas BPL Buenas Pr cticas de Laboratorio o a otros calibradors y o leyes nacionales aplicables Esto es especialmente relevante para el uso de reactivos control Es importante incluir siempre dentro del procedimiento de ensayo un n mero suficiente de controles para validar la exactitud y la precisi n del ensayo Los resultados del ensayo son v lidos s lo si todos los controles se encuentran dentro de los rangos especificados y si todos los otros par metros del ensayo se encuentran dentro de las especificaciones dadas para el ensayo En cado de alguna duda o inquietud por favor contactar con ImmunoAssays S A Consecuencias Terap uticas Las consecuencias terap uticas nunca deben basarse s lo en los resultados de laboratorio incluso si todos los resultados del ensayo est n de acuerdo con
28. titud de los resultados Utilizar m todos estad sticos apropiados para el an lisis de los valores y tendencia de los controles Si los resultados del ensayo no se ajustan a los rangos aceptables establecidos en los controles los resultados obtenidos de los pacientes han de considerarse inv lidos En este caso por favor comprobar las siguientes reas t cnicas Pipeteo y tiempo empleado fot metro fecha de caducidad de los reactivos condiciones de almacenamiento e incubaci n m todos de aspiraci n y lavado Despu s de comprobar los asuntos mencionados arriba sin encontrar ning n error contactar con su distribuidor o con DlAsource ImmunoAssays S A directamente e CARACTER STICAS DEL ENSAYO Rango din mico del ensayo El rango del ensayo se encuentra entre 0 083 16 ng mL Especificidad de los Anticuerpos Reactividad Cruzada Consultar el manual de usuario en ingl s e Sensibilidad Anal tica La sensibilidad anal tica se calcul a partir de la media menos dos desviaciones calibrador de veinte 20 r plicas del calibrador 0 y result ser 0 083 ng mL Precisi n Consultar el manual de usuario en ingl s Recuperaci n Consultar el manual de usuario en ingl s Linealidad Consultar el manual de usuario en ingl s Catalogue Nr KAPD1559 PI number 1701268 es Revision Nr 140127 1 e LIMITACIONES DE USO Cualquier manipulaci n inadecuada de las muestras o modificaciones del ensayo pueden influenciar lo
29. ulation of the concentrations this dilution factor has to be taken into account NA 6 3 1 Example of Typical Calibration Curve The following data is for demonstration only and cannot be used in place of data generations at the time of assay 7 EXPECTED NORMAL VALUES It is strongly recommended that each laboratory should determine its own normal and abnormal values In a study conducted with apparently normal healthy adults using the DIAsource Testosterone ELISA the following values are observed Population 5 Percentile 95 Percentile 2 0 ng mL 6 9 ng mL 0 26 ng mL 1 22 ng mL The results should be correlated to other clinical observations and diagnostic tests 8 QUALITY CONTROL Good laboratory practice requires that controls be run with each calibration curve A statistically significant number of controls should be assayed to establish mean values and acceptable ranges to assure proper performance It is recommended to use control samples according to state and federal regulations The use of control samples is advised to assure the day to day validity of results Use controls at both normal and pathological levels The controls and the corresponding results of the QC Laboratory are stated in the QC certificate added to the kit The values and ranges stated on the QC sheet always refer to the current kit lot and should be used for direct comparison of the results It is also recommended to make use of national or international
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