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Leptin (Sandwich) ELISA

1. 5 25 50 100 ng mL Ver Preparaci n de los Reactivos Contiene conservante sin mercurio Control Low amp High 2 viales 0 5 mL liofilizado Referir los valores y rangos del control a la etiqueta del vial o a la Hoja de datos QC ver Preparaci n de los Reactivos Contiene conservante sin mercurio Assay Buffer Tamp n de ensayo 1 vial 11 mL listo para usar Contiene conservante sin mercurio Antiserum Antisuero 1 vial 11 mL listo para usar un anticorpo monoclonale anti Leptina biotinilato Contiene conservante sin mercurio Enzyme Complex Complex enzim tico 1 vial 11 mL listo para usar Estreptavidina conjugado con la Peroxidasa de r bano Contiene conservante sin mercurio Substrate Solution Soluci n de sustrato 1 vial 14 mL listo para usar Tetrametilbencidina TMB Stop Solution Soluci n de parada 1 vial 14 mL listo para usar contiene 0 5 M H SO Evitar el contacto con la Soluci n de parada Puede causar irritaci n y quemaduras en al piel Wash Solution Soluci n de lavado 1 vial 30 mL concentrado 40X ver Preparaci n de los Reactivos Nota Se puede solicitar el Standard 0 para la diluci n de la muestra 4 2 Equipamiento y material requerido pero no provisto Lector de microplacas calibrado 450 10 nm ej DRG Instruments Microtiter Plate Reader Micropipetas de precisi n variable calibradas Papel absorbente Agua destilada 4 3
2. 8 C ihre Reaktivit t bis zum Verfallsdatum Nach dem Verfallsdatum die Reagenzien nicht mehr verwenden Nach dem Offnen sollten alle Reagenzien bei 2 C 8 C gelagert werden Die Mikrotiterwells sollten bei 2 C 8 C gelagert werden Der einmal ge ffnete Folienbeutel sollte stets sehr sorgf ltig wieder verschlossen werden 4 4 Vorbereitung der Reagenzien Alle Reagenzien sowie die ben tigte Anzahl von Wells sollen vor dem Gebrauch auf Raumtemperatur gebracht werden Standard Rekonstituieren Sie den lyophilisierten Inhalt der Standardfl schchen mit 0 5 mL destilliertem Wasser und lassen Sie die Fl schchen mindestens 10 Minuten ruhen Vor Gebrauch die Standards mehrmals vorsichtig sch tteln Achtung Bei 2 8 sind die rekonstituierten Standards mindestens 6 Wochen haltbar F r eine l ngere Aufbewahrung bei 20 einfrieren Vers 9 0 2012 07 vk 12 DRG Leptin Sandwich ELISA EIA 2395 Control Rekonstituieren Sie den lyophilisierten Inhalt der Fl schchen mit 0 5 mL destilliertem Wasser und lassen Sie die Fl schchen mindestens 10 Minuten ruhen Vor Gebrauch die Kontrollen mehrmals vorsichtig sch tteln Achtung Bei 2 8 TC sind die rekonstituierten Kontrollen mindestens 6 Wochen haltbar F r eine l ngere Aufbewahrung bei 20 einfrieren Wash Solution Die 40 fach konzentrierte Waschl sung 30 mL mit 1170 mL destilliertem Wasser auf ein Gesamtvolumen von 1200 mL verd nnen Die verd nnte Wa
3. iii 11 3 VORSICHTSMABNAHMEN 11 4 BESTANDTEILE DES KITS 12 5 PROBENVORBEREITUNG cciciinininincncncocininininas 13 6 TESTDURCHFUHRUNG ine 14 7 ERWARTETE WERTE 15 8 _ QUALIT TS KONTROLLE ccoicicininininincncnconinicin nns 15 9 ASSAY CHARACTERISTIKA eessen 16 10 GRENZEN DES TESTS 16 11 RECHTLICHE GRUNDLAGEN 17 12 REFERENZEN LITERATUR iii 17 1 INTRODUZIONE i 18 2 PRINCIPIO DEL TEST 18 5 PRECAUZON litio 18 4 COMPONENTI DEL KIT 19 5 CAMPION 0 eeceeeseseseseseseseseseseesevesesececeeeseseseseseees 20 6 ATTUAZIONE DEL TEST in 21 7 VALORI NORMALI i 22 8 CONTROLLO QUALIT ine 22 9 CARATTERISTICHE DEL TEST 23 10 LIMITAZIONE DEL TEST iii 23 11 ASPETTI LEGAL 24 12 BIBLIOGRAFIA 24 Vers 9 0 2012 07 vk 1 DRG Leptin Sandwich ELISA EIA 2395 1 INTRODUCTION 1 1 Intended Use The DRG Leptin ELISA is an enzyme immunoassay for the quantitative in vitro diagnostic measurement of Leptin in serum and plasma 2 PRINCIPLE OF THE TEST The DRG Leptin ELISA Kit is a solid phase enzyme linked immunosorbent assay ELISA based on the sandwich principle The microtiter wells are coated with a monoclonal antibody directed towards a unique antigenic site on a Leptin molecule An aliquot of patient sample containing endogenous Leptin is incubated in the coated well with a
4. 90 uL Standard 0 mix thoroughly b dilution 1 100 10 uL dilution a 1 10 90 uL Standard 0 mix thoroughly Vers 9 0 2012 07 vk 6 6 6 1 6 2 DRG Leptin Sandwich ELISA EIA 2395 ASSAY PROCEDURE General Remarks All reagents and specimens must be allowed to come to room temperature before use All reagents must be mixed without foaming Once the test has been started all steps should be completed without interruption Use new disposal plastic pipette tips for each standard control or sample in order to avoid cross contamination Absorbance is a function of the incubation time and temperature Before starting the assay it is recommended that all reagents are ready caps removed all needed wells secured in holder etc This will ensure equal elapsed time for each pipetting step without interruption As a general rule the enzymatic reaction is linearly proportional to time and temperature Test Procedure Each run must include a standard curve 1 2 3 10 11 12 13 14 15 Secure the desired number of Microtiter wells in the holder Dispense 15 uL of each Standard controls and samples with new disposable tips into appropriate wells Dispense 100 uL Assay Buffer into each well Thoroughly mix for 10 seconds It is important to have a complete mixing in this step Incubate for 120 minutes at room temperature without covering the plate Briskly shake out the contents of the wells Rinse the we
5. 9 2 Specificity of Antibodies Cross Reactivity The following substances were tested for cross reactivity of the assay Rat Leptin lt 0 2 Human C Peptide Glucagon IGF I N D Not detectable 9 3 Sensitivity The analytical sensitivity of the DRG ELISA was calculated by adding 2 standard deviations to the mean of 20 replicate analyses of the Standard 0 and was found to be 1 0 ng mL 9 4 Reproducibility 9 4 1 Intra Assay The within assay variability is shown below n Mean agit cv 9 4 2 Inter Assay The between assay variability is shown below n Mean ng cv 6 2 12 2 10 LIMITATIONS OF USE Reliable and reproducible results will be obtained when the assay procedure is performed with a complete understanding of the package insert instruction and with adherence to good laboratory practice Any improper handling of samples or modification of this test might influence the results 10 1 Drug Interferences Until today no substances drugs are known to us which have an influence to the measurement of Leptin in a sample Vers 9 0 2012 07 vk 9 DRG Leptin Sandwich ELISA EIA 2395 11 LEGAL ASPECTS 11 1 Reliability of Results The test must be performed exactly as per the manufacturer s instructions for use Moreover the user must strictly adhere to the rules of GLP Good Laboratory Practice or other applicable national standards and or laws This is especially relevant for the u
6. Das Plasma wird als berstand nach einer Zentrifugation gewonnen 5 2 Probenaufbewahrung Proben sollten stets gut verschlossen sein und k nnen vor Testbeginn bis zu 24 Stunden bei 2 C 8 C gelagert werden F r eine l ngere Aufbewahrung sollten die Proben eingefroren bei 20 C bis zum Testbeginn gelagert werden Nur einmal einfrieren Aufgetaute Proben sollten vor Testbeginn vorsichtig durchmischt werden ohne Schaumbildung 5 3 Probenverdinnung Wenn in einem ersten Testdurchlauf bei einer Probe eine Konzentration h her als der h chste Standard gefunden wird kann diese Probe mit Standard 0 weiter verd nnt und nochmals bestimmt werden Die Verd nnung muss jedoch bei der Berechnung der Konzentration beachtet werden Beispiel a Verd nnung 1 10 10 uL Serum 90 uL Standard 0 gr ndlich mischen b Verd nnung 1 100 10 uL Verd nnung a 1 10 90 uL Standard 0 gr ndlich mischen Vers 9 0 2012 07 vk 13 DRG Leptin Sandwich ELISA EIA 2395 6 TESTDURCHF HRUNG 6 1 Allgemeine Hinweise Alle Reagenzien und Proben m ssen vor Gebrauch auf Raumtemperatur gebracht und gut durchgemischt werden Dabei sollte Schaumbildung vermieden werden Wenn die Testdurchf hrung einmal begonnen wurde muss sie ohne Unterbrechung zu Ende gef hrt werden F r jeden Standard jede Kontrolle oder Probe eine neue Plastikspitze verwenden um Kreuzreaktionen zu vermeiden Die Optische Dichte ist abh ngig von Inkubationszeit und Tem
7. Proben kann direkt von der Standardkurve abgelesen werden Proben die eine h here Konzentration als die des h chsten Standards enthalten m ssen verd nnt werden Dieser Verd nnungsfaktor muss bei der Berechnung der Konzentration beachtet werden 6 3 1 Beispiel f r eine Standardkurve Nachfolgend wird ein typisches Beispiel f r eine Standardkurve mit dem DRG ELISA gezeigt Diese Werte sollten nicht zur Berechnung von Patientendaten verwendet werden Optische Dichte 450nm Standard 0_ 0 ng mL Standard 1 2 ng mL Standard 5 100 ng mL 7 ERWARTETE WERTE Es wird empfohlen dass jedes Labor seine eigenen normalen und abnormalen Werte ermittelt In einer Studie wurden die Proben von gesunden Erwachsenen untersucht Dabei ergaben sich mit dem DRG Leptin ELISA folgende Werte 3 84 1 79 7 36 3 73 8 QUALITATS KONTROLLE Es wird empfohlen die Kontrollproben gem den nationalen gesetzlichen Bestimmungen einzusetzen Durch die Verwendung von Kontrollproben wird eine Tag zu Tag berpr fung der Ergebnisse erzielt Es sollten Kontrollen sowohl mit normalem als auch pathologischem Level eingesetzt werden Die Kontrollen mit den entsprechenden Ergebnissen des QC Labors sind im QC Zertifikat das dem Kit beiliegt aufgef hrt Die im QC Blatt angegebenen Werte und Bereiche beziehen sich stets auf die aktuelle Kitcharge und sollten zum direkten Vergleich der Ergebnisse verwendet werden Es wird ebenfalls empfohlen an nationalen
8. Using a reservoir for dispensing a substrate solution that had previously been used for the conjugate solution may turn solution colored Do not pour reagents back into vials as reagent contamination may occur Mix the contents of the microplate wells thoroughly to ensure good test results Do not reuse microwells Do not let wells dry during assay add reagents immediately after completing the rinsing steps Allow the reagents to reach room temperature 21 C 26 C before starting the test Temperature will affect the absorbance readings of the assay However values for the patient samples will not be affected Never pipet by mouth and avoid contact of reagents and specimens with skin and mucous membranes Wear disposable latex gloves when handling specimens and reagents Microbial contamination of reagents or specimens may give false results Handling should be done in accordance with the procedures defined by an appropriate national biohazard safety guideline or regulation Do not use reagents beyond expiry date as shown on the kit labels All indicated volumes have to be performed according to the protocol Optimal test results are only obtained when using calibrated pipettes and microtiterplate readers Do not mix or use components from kits with different lot numbers It is advised not to exchange wells of different plates even of the same lot The kits may have been shipped or stored under different conditions and the binding
9. angegebenen Verfallsdatum verwenden Alle im Kit Protokoll angegebenen Mengen m ssen genau eingehalten werden Optimale Ergebnisse k nnen nur durch Verwendung kalibrierter Pipetten und Mikrotiterplatten Leseger te erreicht werden Komponenten von Kits mit unterschiedlichen Lotnummern nicht untereinander vertauschen Es wird empfohlen keine Wells von verschiedenen Platten zu verwenden auch nicht wenn es sich um das gleiche Lot handelt Die Kits k nnen unter anderen Bedingungen gelagert oder versendet worden sein so dass die Bindungscharakteristik der Platten leicht unterschiedlich ausf llt Chemikalien und zubereitete oder bereits benutzte Reagenzien m ssen gem den nationalen Gefahrenstoffvorschriften wie gef hrlicher Abfall behandelt werden Materialsicherheitsdatenbl tter f r dieses Produkt sind auf Anfrage direkt von der Firma DRG Instruments GmbH erh ltlich Vers 9 0 2012 07 vk siis DRG Leptin Sandwich ELISA ElA 2395 4 BESTANDTEILE DES KITS 4 1 Kitinhalt 1 Microtiterwells 96 Wells 12 x 8 Wells einzeln brechbar Mit anti Leptin Antik rper monoklonal beschichtet 2 Standard Standard 0 5 6 Fl schchen lyophilisiert je 0 5 mL Konzentrationen 0 2 5 25 50 100 ng mL Siehe Vorbereitung der Reagenzien Enth lt quecksilberfreies Konservierungsmittel 3 Control Low 8 High Kontrolle 2 Fl schchen lyophilisiert je 0 5 mL Kontrollwerte und bereiche entn
10. oder internationalen Qualit tssicherungs Programmen teilzunehmen um die Genauigkeit der Ergebnisse zu sichern Es sollten geeignete statistische Methoden zur Analyse von Kontroll Werten und Trends angewendet werden Wenn die Ergebnisse des Assays nicht mit den angegebenen Akzeptanzbereichen des Kontrollmaterials bereinstimmen sollten die Patientenergebnisse als ung ltig eingestuft werden In diesem Fall berpr fen Sie bitte die folgenden Bereiche Pipetten und Zeitnehmer Photometer Verfallsdatum der Reagenzien Lagerungs und Inkubationsbedingungen Absaug und Waschmethode Sollten Sie nach berpr fung der vorgenannten Bereiche keinen Fehler erkannt haben setzen Sie sich bitte mit Ihrem Lieferanten oder direkt mit der Firma DRG in Verbindung Vers 9 0 2012 07 vk 15 DRG Leptin Sandwich ELISA ElA 2395 9 ASSAY CHARACTERISTIKA 9 1 Messbereich Der Messbereich des Testes liegt zwischen 1 0 100 ng mL 9 2 Spezifit t der Antik rper Kreuzreaktivit t Folgende Substanzen wurden auf m gliche Kreuzreaktion im Leptin ELISA gepr ft Kreuzreaktion Ratten Leptin lt 0 2 N N nicht nachweisbar 9 3 Analytische Sensitivit t Die analytische Sensitivit t definiert als Mittelwert plus der zweifachen Standardabweichung des Standards 0 n 20 betr gt 1 0 ng mL Die Daten zu 9 4 Pr zision 9 5 Wiederfindung 9 6 Linearit t entnehmen Sie bitte der ausf hrlichen englischen Arbeitsanleitung 10 GREN
11. para cada paso de pipeteo sin que haya interrupciones Como regla general la reacci n enzim tica es linealmente proporcional al tiempo y a la temperatura Vers 9 0 2012 07 vk 28 6 2 DRG Leptin Sandwich ELISA ElA 2395 Procedimiento de ensayo Cada uno debe incluir una curva de est ndares 1 2 3 N 10 11 12 13 14 15 Asegurar el n mero deseado de pocillos en el recipiente Dispensar 15 HL de cada Standard Control y muestras con puntas nuevas en los pocillos adecuados Dispensar 100 HL de Assay Buffer a cada pocillo Mezclar totalmente durante 10 segundos Es importante mezclar completamente en este paso Incubar durante 120 minutes a temperatura ambiente Sacudir en rgicamente el contenido de los pocillos Lavar los pocillos 3 veces con Wash Solution diluida 300 uL por pocillo Realizar un golpe seco de los pocillos contra el papel absorbente para eliminar las gotas residuales Nota importante La sensibilidad y la precisi n de este ensayo se ve marcadamente influenciada por la realizaci n correcta del proceso de lavado Dispensar 100 uL de Antiserum a cada pocillo Incubar durante 30 minutes a temperatura ambiente Sacudir en rgicamente el contenido de los pocillos Lavar los pocillos 3 veces con Wash Solution diluida 300 uL por pocillo Realizar un golpe seco de los pocillos contra el papel absorbente para eliminar las gotas residuales Dispensar 100 uL de Enzyme Complex a ca
12. pueden ser almacenadas hasta 24 horas a 2 C a 8 C antes del ensayo Las muestras almacenadas por un per odo de tiempo mas largo han de congelarse s lo una vez a 20 C antes del ensayo Las muestras descongeladas deben invertirse varias veces antes del ensayo 5 3 Diluci n de las muestras Si en un ensayo inicial se encuentra una muestra que presenta valores mayores que el est ndar mas concentrado ha de diluirse con Standard 0 y volver a ensayarse como se describe en el Procedimiento de Ensayo Para el c lculo de las concentraciones habr que tener en cuenta el factor de diluci n Ejemplo a diluci n 1 10 10 uL muestra 90 uL Standard 0 mezclar totalmente b diluci n 1 100 10 uL diluci n a 1 10 90 uL Standard 0 mezclar totalmente 6 PROCEDIMIENTO DE ENSAYO 6 1 Consideraciones generales Todos los reactivos y muestras han de estar a temperatura ambiente antes de su uso Todos los reactivos deben mezclarse sin formar espuma Una vez se ha comenzado el ensayo deben completarse todos los pasos sin interrupci n Utilizar puntas de pipeta de pl stico nuevas para cada est ndar control o muestra para evitar combinaciones cruzadas La absorbancia es funci n del tiempo de incubaci n y la temperatura Antes de comenzar el ensayo se recomienda que todos los reactivos est n preparados tapas removidas todos los pocillos que se necesiten asegurados en recipiente etc Esto asegurar un tiempo similar
13. se pueden derivar consecuencias terap uticas Nunca deben derivarse consecuencias terap uticas a partir de solamente el resultado obtenido en el ensayo 11 3 Responsabilidad Cualquier modificaci n del kit y o cambio o mezcla de cualquier componente procedentes de kits de lotes diferentes puede afectar negativamente a los resultados esperados y en la validez de todo el test Esas modificaciones y o cambios invalidad cualquier reclamaci n de reposici n Las reclamaciones emitidas debidas a una mala interpretaci n de los resultados de laboratorio por parte del comprador referidos al punto 11 2 son tambi n inv lidas A pesar de todo en el caso de cualquier reclamaci n la responsabilidad del fabricante no excede el valor del kit Cualquier da o provocado al kit durante su transporte no est sujeto a la responsabilidad del fabricante 12 REFERENCIAS BIBLIOGRAF A Consultar el manual de usuario en ingl s Vers 9 0 2012 07 vk 32 DRG Leptin Sandwich ELISA EIA 2395 SYMBOLS USED WITH DRG ELISAS Symbol English Deutsch Francais Espa ol Italiano y CE Konfirmit ts Conforme aux normes i s European Conformity Kennzeichnung europ ennes Conformidad europea Conformit europea z Consult instructions for use Gebrauchsanweisung beachten Consulter les instructions d utilisation Consulte las Instrucciones Consultare le istruzioni per l uso lt oO In vitro diagnostic device In vitr
14. specific biotinylated monoclonal anti Leptin antibody A sandwich complex is formed After incubation the unbound material is washed off and a Steptavidin Peroxidase Enzyme Complex is added for detection of the bound Leptin Having added the substrate solution the intensity of colour developed is proportional to the concentration of Leptin in the patient sample Vers 9 0 2012 07 vk 2 DON 10 Do not smoke eat drink or apply cosmetics in areas where specimens or kit reagents are handled 12 14 15 17 18 20 21 DRG Leptin Sandwich ELISA EIA 2395 WARNINGS AND PRECAUTIONS This kit is for in vitro diagnostic use only For professional use only All reagents of this test kit which contain human serum or plasma have been tested and confirmed negative for HIV I II HBsAg and HCV by FDA approved procedures All reagents however should be treated as potential biohazards in use and for disposal Before starting the assay read the instructions completely and carefully Use the valid version of the package insert provided with the kit Be sure that everything is understood The microplate contains snap off strips Unused wells must be stored at 2 C to 8 C in the sealed foil pouch and used in the frame provided Pipetting of samples and reagents must be done as quickly as possible and in the same sequence for each step Use reservoirs only for single reagents This especially applies to the substrate reservoirs
15. 2012 07 vk 18 DRG Leptin Sandwich ELISA EIA 2395 4 COMPONENTI DEL KIT 4 1 Contenuto del kit 1 Microtiterwells Micropozetti 12 x 8 file separatamente staccabili 96 pozzetti Pozzetti ricoperti con l anti Leptina anticorpo monoclinale 2 Standard Standard 0 5 6 flaconi liofillizzati 0 5 mL Concentrazioni 0 2 5 25 50 100 ng mL Vedi preparazione dei reagent Contiene conservante senza mercurio 3 Control Low amp High Controllo 2 flaconi liofillizzati 0 5 mL 2 livelli basso e alto valori dei controlli sono indicati sull etichetta dei flaconi o sulla descrizione QC Vedi preparazione dei reageniti Contiene conservante senza mercurio 4 Assay Buffer tampone del test 1 flacone 11 mL pronto all uso Contiene conservante senza mercurio 5 Antiserum antisiero 1 flacone 11 mL pronto all uso anti leptina monoclonale di topo coniugata alla biotina Contiene conservante senza mercurio 6 Enzyme Complex Complesso enzimatico 1 flacone 11 mL pronto all uso complesso streptavidina HRP Contiene conservante senza mercurio 7 Substrate Solution Soluzione di substrato 1 flacone 14 mL pronto all uso TMB benzidine tetrametilico 8 Stop Solution Soluzione d arresto 1 flacone 14 mL pronto all uso contiene 0 5 M H gt SO Evitare il contatto con la soluzione d arresto Pu causare irritazioni cutanee e ustioni 9 Wash Solution Soluzione di l
16. 95 4 4 Reagent Preparation Allow all reagents and required number of strips to reach room temperature prior to use Standards Reconstitute the lyophilized contents of the standard vials with 0 5 mL Aqua dest and let stand for 10 minutes in minimum Mix the vials several times before use Note The reconstituted standards are stable for at least 6 weeks at 2 C 8 For longer storage freeze at 20 C Control Reconstitute the lyophilized content of each vial with 0 5 mL Aqua dest and let stand for 10 minutes in minimum Mix the control several times before use Note The reconstituted control is stable for at least 6 weeks at 2 C 8 For longer storage freeze at 20 C Wash Solution Add deionized water to the 40X concentrated Wash Solution Dilute 30 mL of concentrated Wash Solution with 1170 mL deionized water to a final volume of 1200 mL The diluted Wash Solution is stable for 2 weeks at room temperature 4 5 Disposal of the Kit The disposal of the kit must be made according to the national regulations Special information for this product is given in the Material Safety Data Sheets see chapter 13 4 6 Damaged Test Kits In case of any severe damage to the test kit or components DRG has to be informed in writing at the latest one week after receiving the kit Severely damaged single components should not be used for a test run They have to be stored until a final solution has been found After this they should be dispos
17. Almacenamiento y estabilidad del kit Cuando se almacena a 2 C 8 C los reactivos sin abrir mantienen su reactividad hasta la fecha de caducidad No utilizar los reactivos m s all de esta fecha Los reactivos abiertos han de almacenarse a2 C 8 C Las placas multipocillo han de almacenarse a 2 C 8 C Una vez se ha abierto la bolsa hay que tener cuidado y cerrarla de nuevo Vers 9 0 2012 07 vk 26 DRG Leptin Sandwich ELISA EIA 2395 4 4 Preparaci n de los Reactivos Dejar que todos los reactivos y el n mero requerido de tiras alcancen la temperatura ambiente antes de usarse Standards Reconstituir los contenidos liofilizados de los viales de los est ndares con 0 5 mL de agua destilada y dejar reposar como m nimo durante 10 minutos Mezclar varias veces antes de usar Nota Los est ndares reconstituidos son estables durante 6 semanas a2 C 8 Para per odos m s largos congelar a 20 TC Control Reconstituir el contenido liofilizado con 0 5 mL de agua destilada y dejar reposar como m nimo durante 10 minutos Mezclar varias veces antes de usar Nota El control reconstituido es estable durante 6 semanas a2 C 8 Para per odos m s largos congelar a 20 TC Wash Solution Mezclar 30 mL de Wash Solution concentrada con 1170 mL de agua desionizada hasta un volumen final de 1200 mL La soluci n del lavado diluida es estable durante 2 semanas a temperatura ambiente 4 5 Eliminaci n del Kit La elim
18. Users Manual Leptin Sandwich ELISA ElA 2395 Y 96 Wells sl Legal Manufacturer Distributed by DRG DRG Instruments GmbH Germany Division of DRG International Inc Frauenbergstr 18 D 35039 Marburg Telefon 49 0 6421 17000 Fax 49 0 642 1 1700 50 Internet www drg diagnostics de E mail drg drg diagnostics de CE DRG Leptin Sandwich ELISA ElA 2395 Contents Inhaltsverzeichnis Contenuti Contenido 1 INTRODUCTION ie 2 1 INTRODUCCI N ie 25 2 PRINCIPLE OF THE TEST 2 2 FUNDAMENTO DEL ENSAYO 25 3 WARNINGS AND PRECAUTIONS 3 3 PRECAUCIONES ccccicicinnnnincncnnnoncncncnnoncnnoniconnnns 25 4 REAGENT Side ibid 4 4 COMPONENTESDELKIT in 26 5 SPECIMEN COLLECTION AND PREPARATION 6 5 MUESTRAS aidaa ai 28 6 ASSAY PROCEDURE 7 6 PROCEDIMIENTO DE ENSAYO 28 7 EXPECTED NORMAL VALUES 8 7 VALORES ESPERADOS 30 8 QUALITY CONTROL 8 8 CONTROL DE CALIDAD unnnnnnnnn 30 9 PERFORMANCE CHARACTERISTICS 9 9 CARACTER STICAS DEL ENSAYO 31 10 LIMITATIONS OF USE 9 10 LIMITACIONES DE USO nenn 31 TH LEGAL ASPECTS u esse 10 11 ASPECTOSLEGALES iii 32 12 REFERENCES LITERATURE 10 12 REFERENCIAS BIBLIOGRAF A 32 1 EINLEITUNG ie 11 SYMBOLS USED WITH DRG ELISAS 33 2 TESTPRINZIP
19. ZEN DES TESTS Jede unsachgem e Behandlung von Proben oder Modifikationen dieses Tests k nnen die Ergebnisse beeinflussen 10 1 Beeinflussung durch Medikamente Uns sind bislang keine Stoffe Medikamente bekannt geworden deren Einnahme die Messung des Leptin Gehaltes der Probe beeinflussen w rde Vers 9 0 2012 07 vk 16 DRG Leptin Sandwich ELISA EIA 2395 11 RECHTLICHE GRUNDLAGEN 11 1 Zuverl ssigkeit der Ergebnisse Der Test muss exakt gem der Testanleitung des Herstellers abgearbeitet werden Dar ber hinaus muss der Benutzer sich strikt an die Regeln der GLP Good Laboratory Practice oder andere eventuell anzuwendende Regeln oder nationale gesetzliche Vorgaben halten Dies betrifft besonders den Gebrauch der Kontrollreagenzien Es ist sehr wichtig bei der Testdurchf hrung stets eine ausreichende Anzahl Kontrollen zur berpr fung der Genauigkeit und Pr zision mitlaufen zu lassen Die Testergebnisse sind nur g ltig wenn alle Kontrollen in den vorgegebenen Bereichen liegen und wenn alle anderen Testparameter die vorgegebenen Spezifikationen f r diesen Assay erf llen Wenn Sie bez glich eines Ergebnisses Zweifel oder Bedenken haben setzen Sie sich bitte mit der Firma DRG in Verbindung 11 2 Therapeutische Konsequenzen Therapeutische Konsequenzen sollten keinesfalls nur aufgrund von Laborergebnissen erfolgen selbst dann nicht wenn alle Testergebnisse mit den in 11 1 genannten Voraussetzungen bereinstimmen J
20. alcolati automaticamente usando un fitting avvicinamento con il 4 PL 4 Parameter Logistics Altri funzioni usati per l elaborazioni dei dati possono dare risultati leggermente differenti 5 La concentrazione dei campioni pu essere determinata direttamente dalla curva standard Campioni con una concentrazione piu elevata dello standard piu concentrato devono essere diluiti Di questo fattore di diluizione deve essere tenuto conto per il calcolo della concentrazione 6 3 1 Esempio di una curva standard tipica seguenti dati sono a scopo dimostrativo soltanto e non possono sostituire i dati generati dall eseguimento del test Densit ottiche 450 nm Standard 0_ 0 ng mL Standard 1 2 ng mL Standard 5 100 ng mL 7 VALORI NORMALI E consigliabile che ogni laboratorio determini i propri valori normali e anormali In uno studio condotto su persone apparentemente sane usando il test DRG Leptin ELISA i seguenti valori sono stati ottenuti 3 84 1 79 7 36 3 73 8 CONTROLLO QUALIT consigliabile utilizzare i campioni controllo secondo le norme di legge Attraverso l utilizzo dei campioni controllo si pu raggiungere una verifica dei risultati giorno per giorno Dovrebbero essere adoperati campioni controllo sia con un livello normale sia con uno patologico Le referenze con i rispettivi risultati del laboratorio QC sono elencati nel QC certificato che allegato al kit valori riportati nel QC certificato si
21. as Hasta ahora no se han encontrado sustancias drogas conocidas por nosotros que tengan influencia en la medida de Leptina en una muestra Vers 9 0 2012 07 vk 31 DRG Leptin Sandwich ELISA EIA 2395 11 ASPECTOS LEGALES 11 1 Fiabilidad de los Resultados El ensayo debe realizarse exactamente de acuerdo a las instrucciones del fabricante Mas a n el usuario debe ajustarse estrictamente a las reglas BPL Buenas Pr cticas de Laboratorio o a otros est ndares y o leyes nacionales aplicables Esto es especialmente relevante para el uso de reactivos control Es importante incluir siempre dentro del procedimiento de ensayo un n mero suficiente de controles para validar la exactitud y la precisi n del ensayo Los resultados del ensayo son v lidos s lo si todos los controles se encuentran dentro de los rangos especificados y si todos los otros par metros del ensayo se encuentran dentro de las especificaciones dadas para el ensayo En cado de alguna duda o inquietud por favor contactar con DRG 11 2 Consecuencias Terap uticas Las consecuencias terap uticas nunca deben basarse s lo en los resultados de laboratorio incluso si todos los resultados del ensayo est n de acuerdo con los asuntos fijados en el punto 11 1 Cualquier resultado de laboratorio es solamente una parte del cuadro cl nico de un paciente Solamente en los casos donde los resultados de laboratorio est n en acuerdo con todo el cuadro cl nico de un paciente
22. avaggio 1 flacone 30 mL concentrata 40X vedi preparazione dei reagenti Nota Ulteriore Standard 0 per la diluizione dei campioni pu essere richiesto alla ditta 4 2 Materiali richiesti ma non contenuti nel kit Uno spettrofotometro calibrato per micropozzetti 450 10 nm p es il DRG Instruments Microtiterplate Reader Micropipette calibrate di precisione a volume variabile Carta assorbente Acqua distillata 4 3 Magazzinaggio e stabilit del kit A 2 C 8 C i reagenti non aperti rimangono reattivi fino alla data di scadenza indicata Non usare reagenti oltre questa data Tutti i reagenti aperti devono essere magazzinati a 2 C 8 C micropozzetti devono essere magazzinati a 2 C 8 C Una volta aperti i pacchi questi devono essere richiusi accuratamente 4 4 Preparazione dei reagenti Prima dell uso portare tutti i reagenti e il numero necessario di pozzetti a temperatura ambiente Standard Ricostituire il contenuto liofillizzato dei flaconi con gli standard con 0 5 mL acqua distillata e far riposare per almeno 10 minuti Mescolare alcune volte prima dell uso Nota Gli standard ricostituiti sono stabili almeno 6 settimane a 2 8 Per periodi piu lunghi congelare a 20 TC Control Ricostituire il contenuto liofilizzato con 0 5 mL acqua distillata e far riposare per almeno 10 minuti Mescolare alcune volte prima dell uso Nota Il controllo ricostituito stabili almeno 6
23. bentwicklung nach einer definierten Zeit gestoppt Die Intensit t der gebildeten Farbe ist proportional der Leptin Konzentration in der Probe Die Extinktion wird bei 450 nm mit einem Mikrotiterplattenleser gemessen ww VORSICHTSMABNAHMEN Dieser Kit ist nur zum in vitro diagnostischen Gebrauch geeignet Informationen zu im Kit enthaltenen gef hrlichen Substanzen entnehmen Sie bitte dem Materialsicherheitsdatenblatt Alle Bestandteile dieses Testkits die humanes Serum oder Plasma enthalten wurden mit FDA gepr ften Methoden auf HIV I II HosAg und HCV getestet und als negativ best tigt Jedoch sollten alle Bestandteile im Umgang und bei der Entsorgung wie m gliche Gefahrenstoffe betrachtet werden Der Kontakt mit der Stop Solution sollte vermieden werden da sie 0 5 M H2SO enth lt Schwefels ure kann Hautreizungen und Verbrennungen verursachen Nicht mit dem Mund pipettieren und den Kontakt von Kitbestandteilen und Proben mit Haut und Schleimh uten vermeiden Inden Bereichen in denen Proben oder Kitbestandteile verwendet werden nicht rauchen essen oder Kosmetika verwenden Beim Umgang mit Proben oder Reagenzien Einweg Latexhandschuhe tragen Die Verunreinigung von Reagenzien oder Proben mit Mikroben kann zu falschen Ergebnissen f hren Der Gebrauch sollte gem der Vorschriften einer entsprechenden nationalen Gefahrenstoff Sicherheitsrichtlinie erfolgen Reagenzien nicht nach dem auf dem Kit Etikett
24. characteristics of the plates may result slightly different Avoid contact with Stop Solution containing 0 5 M H2SQ It may cause skin irritation and burns Some reagents contain Proclin 300 BND and or MIT as preservatives In case of contact with eyes or skin flush immediately with water TMB substrate has an irritant effect on skin and mucosa In case of possible contact wash eyes with an abundant volume of water and skin with soap and abundant water Wash contaminated objects before reusing them If inhaled take the person to open air Chemicals and prepared or used reagents have to be treated as hazardous waste according to the national biohazard safety guideline or regulation For information on hazardous substances included in the kit please refer to Material Safety Data Sheets Material Safety Data Sheets for this product are available upon request directly from DRG Vers 9 0 2012 07 vk 3 4 1 DRG Leptin Sandwich ELISA ElA 2395 REAGENTS Reagents provided Microtiter wells 12x8 break apart strips 96 wells Wells coated with anti Leptin antibody monoclonal Standard Standard 0 5 6 vials lyophilized 0 5 mL Concentrations 0 2 5 25 50 100 ng mL See Preparation of Reagents Contain non mercury preservative Control Low amp High 2 vials lyophilized 0 5 mL For control values and ranges please refer to vial label or QC Datasheet See Preparation of Reagents Co
25. da pocillo Incubar durante 30 minutes a temperatura ambiente Sacudir en rgicamente el contenido de los pocillos Lavar los pocillos 3 veces con Wash Solution diluida 300 uL por pocillo Realizar un golpe seco de los pocillos contra el papel absorbente para eliminar las gotas residuales Adicionar 100 uL de Substrate Solution a cada pocillo Incubar durante 15 minutes a temperatura ambiente Parar la reacci n enzim tica mediante la adici n de 50 HL de Stop Solution a cada pocillo Leer la OD a 450 10 nm con un lector de microplacas dentro de los 10 minutos despu s de la adici n de la Stop Solution C lculo de los Resultados Calcular los valores de absorbancia media para cada conjunto de est ndares controles y muestras de pacientes Construir una curva est ndar mediante la representaci n de la absorbancia media obtenida para cada est ndar frente a su concentraci n con el valor de absorbancia en el eje vertical Y y la concentraci n en el eje horizontal X Usando el valor de absorbancia media de cada muestra determinar la concentraci n correspondiente a partir de la curva est ndar M todo automatizado Los resultados en la IFU se han calculado autom ticamente usando una curva de regresi n 4 PL 4 Par metros Log sticos Otras funciones de regresi n dar n lugar a resultados sensiblemente diferentes La concentraci n de las muestra puede leerse directamente de la curva de est ndares Las muestras con concentraci
26. e la ditta DRG 11 2 Conseguenze terapeutiche Soltanto sulla base dei risultati dei laboratori non dovrebbero essere intraprese delle conseguenze terapeutiche di alcun tipo anche se i risultati del test sono d accordo con gli aspetti articolati nel punto 11 1 Ogni risultato di laboratorio soltanto una parte di un quadro clinico completo di un paziente Soltanto in casi in cui i risultati di un test del laboratorio si accordano con il quadro clinico dell ammalato si possono intraprendere delle conseguenze terapeutiche Il risultato del test da solo non base sufficiente per lo stabilimento di una terapia 11 3 Responsabilit legali Ogni cambiamento del protocollo del test e o lo scambio o il mescolamento di componenti provenienti da cariche diverse possono influenzare negativamente i risultati e compromettere la validit del test Questi cambiamenti e o scambi annullano ogni diritto al risarcimento Si respingano inoltre tutti i richiami risultanti da interpretazioni sbagliate da parte dell utente secondo il paragrafo 11 2 Nel caso di reclamazione la garanzia del produttore limitato al valore massimo del test kit Ogni danno provocato durante il trasporto del kit non sottost alla responsabilit del produttore 12 BIBLIOGRAFIA Per dettagli pi precisi consultare la metodica in inglese Vers 9 0 2012 07 vk 24 DRG Leptin Sandwich ELISA EIA 2395 1 INTRODUCCI N El Kit de inmunoensayo enzim tico DRG Leptin pr
27. ed according to the official regulations Vers 9 0 2012 07 vk 2 51 DRG Leptin Sandwich ELISA ElA 2395 5 SPECIMEN COLLECTION AND PREPARATION Serum or plasma can be used in this assay Do not use haemolytic icteric or lipaemic specimens Please note Samples containing sodium azide should not be used in the assay 5 1 Specimen Collection Serum Collect blood by venipuncture e g Sarstedt Monovette for serum allow to clot and separate serum by centrifugation at room temperature Do not centrifuge before complete clotting has occurred Patients receiving anticoagulant therapy may require increased clotting time Plasma Whole blood should be collected into centrifuge tubes containing anti coagulant e g Sarstedt Monovette with the appropriate plasma preparation and centrifuged immediately after collection 5 2 Specimen Storage and Preparation Specimens should be capped and may be stored for up to 24 hours at 2 C 8 C prior to assaying Specimens held for a longer time should be frozen only once at 20 C prior to assay Thawed samples should be inverted several times prior to testing 5 3 Specimen Dilution If in an initial assay a specimen is found to contain more than the highest standard the specimens can be diluted with Standard 0 and reassayed as described in Assay Procedure For the calculation of the concentrations this dilution factor has to be taken into account Example a dilution 1 10 10 uL Serum
28. edes Laborergebnis ist nur ein Teil des klinischen Gesamtbildes eines Patienten Nur in F llen in denen die Laborergebnisse in akzeptabler bereinstimmung mit dem allgemeinen klinischen Bild des Patienten stehen sollten therapeutische Konsequenzen eingeleitet werden Das Testergebnis allein sollte niemals als alleinige Grundlage f r die Einleitung therapeutischer Konsequenzen dienen 11 3 Haftung Jegliche Ver nderungen des Testkits und oder Austausch oder Vermischung von Komponenten unterschiedlicher Chargen von einem Testkit zu einem anderen k nnen die gew nschten Ergebnisse und die G ltigkeit des gesamten Tests negativ beeinflussen Solche Ver nderungen und oder Austausch haben den Ausschluss jeglicher Ersatzanspr che zur Folge Reklamationen die aufgrund von Falschinterpretation von Laborergebnissen durch den Kunden gem Punkt 11 2 erfolgen sind ebenfalls abzuweisen Im Falle jeglicher Reklamation ist die Haftung des Herstellers maximal auf den Wert des Testkits beschr nkt Jegliche Sch den die w hrend des Transports am Kit entstanden sind unterliegen nicht der Haftung des Herstellers 12 REFERENZEN LITERATUR Angaben zu den Referenzen entnehmen Sie bitte der ausf hrlichen englischen Arbeitsanleitung Vers 9 0 2012 07 vk 17 DRG Leptin Sandwich ELISA EIA 2395 1 INTRODUZIONE Il test immuno enzimatico DRG Leptin contiene materiale per la determinazione quantitativa di Leptina in siero e plasma Questo te
29. ehmen Sie bitte dem Fl schchenetikett oder dem QC Datenblatt Siehe Vorbereitung der Reagenzien Enth lt quecksilberfreies Konservierungsmittel 4 Assay Buffer Assaypuffer 1 Fl schchen 11 mL gebrauchsfertig Enth lt quecksilberfreies Konservierungsmittel 5 Antiserum 1 Fl schchen 11 mL gebrauchsfertig biotinylierter monoklonaler Leptin Antik rper Enth lt quecksilberfreies Konservierungsmittel 6 Enzyme Complex Enzymkomplex 1 Fl schchen 11 mL gebrauchsfertig Streptavidin mit Meerrettichperoxidase konjugiert Enth lt quecksilberfreies Konservierungsmittel 7 Substrate Solution Substratl sung 1 Fl schchen 14 mL gebrauchsfertig Substratl sung TMB 8 Stop Solution Stoppl sung 1 Fl schchen 14 mL gebrauchsfertig enth lt 0 5 M H2S0O Kontakt mit der Stoppl sung vermeiden Kann Hautreizungen und Verbrennungen verursachen 9 Wash Solution Waschl sung 1 Fl schchen 30 mL 40X konzentriert Siehe Vorbereitung der Reagenzien Anmerkung Zus tzlicher Standard 0 zur Probenverd nnung ist auf Anfrage erh ltlich 4 2 Nicht im Kit enthaltene aber erforderliche Ger te und Materialien Kalibriertes Mikrotiterplattenleseger t mit 450 10 nm Filter z B das DRG Instruments Mikrotiterplattenleseger t Kalibrierte variable Prazisions Mikropipette Saugf higes Papier Aqua dest 4 3 Lagerung und Haltbarkeit des Kits Die unge ffneten Reagenzien behalten bei Lagerung um 2 C
30. forico pu provocare irritazioni cutanee e ustioni Non pipettare con la bocca ed evitare il contatto con componenti del kit con la pelle o con le mucose Nelle aree in cui il test viene utilizzato non fumare mangiare bere o fare uso di prodotti cosmetici Nella manutenzione dei campioni o reagenti del kit portare guanti di latex monouso La contaminazione dei reagenti o dei campioni con microbi pu dare risultati falsi L utilizzo dovrebbe avvenire secondo regole che seguono le rispettive norme di sicurezza nazionali sulle sostanze nocive Non utilizzare i reagenti dopo la scadenza indicata sul kit Ogni indicazione sulla quantit indicata del protocollo del kit deve essere accuratamente seguito Risultati ottimali possono essere ottenuti soltanto con l uso di pipette calibrate e spettrofotometro calibrato Componenti del kit con numeri di lotto diversi non devono essere combinati consigliabile di non utilizzare pozzetti di piastre diversi anche se si tratta dello stesso lotto kit potrebbero essere stati magazzinati o spediti a condizioni diverse cosicch le caratteristiche di legame potrebbero divergere leggermente componenti chimici e reagenti preparati o gi utilizzati devono essere trattati e smaltiti secondo le norme di sicurezza nazionali sulle sostanze nocive regolamenti di sicurezza di questo prodotto possono essere richiesti direttamente dalla ditta DRG Instruments GmbH Vers 9 0
31. inaci n del kit debe realizarse de acuerdo con las leyes nacionales En las hojas de datos de seguridad se proporciona informaci n especial de este producto ver cap tulo 13 4 6 Kits de ensayo da ados En caso de que exista cualquier da o severo del kit de ensayo o de sus componentes ha de informarse por escrito a DRG no mas tarde de una semana despu s de recibir el kit No deben utilizarse componentes da ados para llevar a cabo un ensayo Han de almacenarse hasta que se encuentre una soluci n Despu s de esto deben ser eliminados de acuerdo con las leyes oficiales Vers 9 0 2012 07 vk 27 DRG Leptin Sandwich ELISA ElA 2395 5 MUESTRAS En este ensayo pueden usarse suero o plasma No usar muestras hemol ticas ict ricas o lip micas Tener en cuenta No deben usarse muestras que contengan acida s dica 5 1 Toma de muestras Suero Recoger la sangre por punci n en la vena ej Sarstedt Monovette para el suero permitir coagulaci n y separar el suero por centrifugaci n a temperatura ambiente No centrifugar antes de la coagulaci n completa Las muestras de pacientes que reciben terapia anticoagulante requieren m s tiempo para coagular Plasma Toda la sangre ha de recogerse en tubos de centrifuga que contengan anticoagulante Ej Sarstedt Monovette con una preparaci n adecuada para el plasma y centrifugar inmediatamente tras la recogida 5 2 Almacenamiento de las muestras Las muestras deben ser tapadas y
32. lls 3 times with diluted Wash Solution 300 uL per well Strike the wells sharply on absorbent paper to remove residual droplets Important note The sensitivity and precision of this assay is markedly influenced by the correct performance of the washing procedure Add 100 uL Antiserum to each well Incubate for 30 minutes at room temperature Briskly shake out the contents of the wells Rinse the wells 3 times with diluted Wash Solution 300 uL per well Strike the wells sharply on absorbent paper to remove residual droplets Dispense 100 uL Enzyme Complex into each well Incubate for 30 minutes at room temperature Briskly shake out the contents of the wells Rinse the wells 3 times with diluted Wash Solution 300 uL per well Strike the wells sharply on absorbent paper to remove residual droplets Add 100 uL of Substrate Solution to each well Incubate for 15 minutes at room temperature Stop the enzymatic reaction by adding 50 L of Stop Solution to each well Determine the absorbance OD of each well at 450 10 nm with a microtiter plate reader It is recommended that the wells be read within 10 minutes after adding the Stop Solution Calculation of Results Calculate the average absorbance values for each set of standards controls and patient samples Construct a standard curve by plotting the mean absorbance obtained from each standard against its concentration with absorbance value on the vertical Y axis and concentration
33. ntain non mercury preservative Assay Buffer 1 vial 11 mL ready to use Contain non mercury preservative Antiserum 1 vial 11 mL ready to use monoclonal biotinylated anti Leptin antibody Contain non mercury preservative Enzyme Complex 1 vial 11 mL ready to use Strepavidin conjugated to horseradish Peroxidase Contain non mercury preservative Substrate Solution 1 vial 14 mL ready to use Tetramethylbenzidine TMB Stop Solution 1 vial 14 mL ready to use contains 0 5 M H SO Avoid contact with the stop solution It may cause skin irritations and burns Wash Solution 1 vial 30 mL 40X concentrated see Preparation of Reagents Note Additional Standard 0 for sample dilution is available on request 4 2 Materials required but not provided A microtiter plate calibrated reader 450 10 nm e g the DRG Instruments Microtiter Plate Reader Calibrated variable precision micropipettes Absorbent paper Distilled or deionized water Timer Semi logarithmic graph paper or software for data reduction 4 3 Storage Conditions When stored at 2 C 8 C unopened reagents will retain reactivity until expiration date Do not use reagents beyond this date Opened reagents must be stored at 2 C 8 C Microtiter wells must be stored at 2 C 8 C Once the foil bag has been opened care should be taken to close it tightly again Vers 9 0 2012 07 vk 4 DRG Leptin Sandwich ELISA EIA 23
34. o Diagnostikum Usage Diagnostic in vitro Para uso Diagn stico in vitro Per uso Diagnostica in vitro Nur f r Seulement dans le S lo para uso en Da RUO For research use only Forschungszwecke cadre de recherches investigaci n Solo a scopo di ricerca Catalogue number Katalog Nr R f rence N mero de cat logo No di Cat Lot No Batch code Chargen Nr No de lot N mero de lote Lotto no Contains sufficient for lt n gt tests Ausreichend f r n Ans tze Contenu suffisant pour n tests Contenido suficiente para lt n gt ensayos Contenuto sufficiente per n saggi Storage Temperature Lagerungstemperatur Temp rature de conservation Temperatura de conservacion Temperatura di conservazione Expiration Date Mindesthaltbarkeits datum Date limite d utilisation Fecha de caducidad Data di scadenza Er BH Legal Manufacturer Hersteller Fabricant Fabricante Fabbricante Distributed by Distributor Vertreiber Distributeur Distribuidor Distributore Content Content Inhalt Contenu Contenido Contenuto Volume No Volume No Volumen Anzahl Volume Num ro Volumen N mero Volume Quantit Microtiterwells Microtiterwells Mikrotiterwells oe ce micro Placas multipocillo Micropozzetti Antiserum Antiserum Antiserum Antis rum Antisuero Antisiero Enzyme Enzyme Conjugate Enzymkonjugat Conjugu enzymatique Conjugado enzim tico Tracciante en
35. omplex in jedes Well geben 10 30 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren 11 Den Inhalt der Wells kr ftig aussch tteln Wells 3 mal mit verd nnter Waschl sung waschen Verbleibende Fl ssigkeit durch Ausklopfen der Wells auf saugf higem Papier entfernen 12 100 uL Substrate Solution in jedes Well geben 13 15 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren 14 Die enzymatische Reaktion durch Zugabe von 50 uL Stop Solution in jedes Well abstoppen 15 Die Optische Dichte bei 450 10 nm mit einem Mikrotiterplatten Leseger t innerhalb von 10 Minuten nach Zugabe der Stoppl sung bestimmen N Vers 9 0 2012 07 vk 14 DRG Leptin Sandwich ELISA EIA 2395 6 3 Ergebnisermittlung 1 Die durchschnittlichen Werte der Optischen Dichte OD f r jedes Set von Standards Controls und Patientenproben bestimmen 2 Eine Standardkurve ermitteln durch Auftragen der mittleren Optischen Dichte jedes Standards gegen die Konzentration wobei der OD Wert auf der vertikalen Y Achse und die Konzentration auf der horizontalen X Achse eingetragen wird 3 Unter Verwendung der mittleren OD wird f r jede Probe die entsprechende Konzentration aus der Standardkurve ermittelt 4 Automatische Methode Die in der Arbeitsanleitung ermittelten Werte wurden automatisch mit Hilfe der 4 Parameter Gleichung 4PL 4 Parameter Logistics 4 Parameter Rodbard bestimmt Andere Auswertungsfunktionen k nnen leicht abweichende Werte ergeben 5 Die Konzentration der
36. on curve A statistically significant number of controls should be assayed to establish mean values and acceptable ranges to assure proper performance It is recommended to use control samples according to state and federal regulations The use of control samples is advised to assure the day to day validity of results Use controls at both normal and pathological levels The controls and the corresponding results of the QC Laboratory are stated in the QC certificate added to the kit The values and ranges stated on the QC sheet always refer to the current kit lot and should be used for direct comparison of the results It is also recommended to make use of national or international Quality Assessment programs in order to ensure the accuracy of the results Employ appropriate statistical methods for analysing control values and trends If the results of the assay do not fit to the established acceptable ranges of control materials patient results should be considered invalid In this case please check the following technical areas Pipetting and timing devices photometer expiration dates of reagents storage and incubation conditions aspiration and washing methods After checking the above mentioned items without finding any error contact your distributor or DRG directly Vers 9 0 2012 07 vk 8 DRG Leptin Sandwich ELISA ElA 2395 9 PERFORMANCE CHARACTERISTICS 9 1 Assay Dynamic Range The range of the assay is between 1 0 100 ng mL
37. on the horizontal X axis Using the mean absorbance value for each sample determine the corresponding concentration from the standard curve Automated method The results in the IFU have been calculated automatically using a 4 PL 4 Parameter Logistics curve fit 4 Parameter Logistics is the preferred method Other data reduction functions may give slightly different results The concentration of the samples can be read directly from this standard curve Samples with concentrations higher than that of the highest standard have to be further diluted For the calculation of the concentrations this dilution factor has to be taken into account Vers 9 0 2012 07 vk 7 DRG Leptin Sandwich ELISA ElA 2395 6 3 1 Example of Typical Standard Curve The following data is for demonstration only and cannot be used in place of data generations at the time of assay Standard 0 0 ng mL Standard 1 2 ng mL 7 EXPECTED NORMAL VALUES It is strongly recommended that each laboratory should determine its own normal and abnormal values In a study conducted with apparently normal healthy adults using the DRG Leptin ELISA the following values are observed 3 84 1 79 7 36 3 73 The results alone should not be the only reason for any therapeutic consequences The results should be correlated to other clinical observations and diagnostic tests 8 QUALITY CONTROL Good laboratory practice requires that controls be run with each calibrati
38. one necessario utilizzare una nuova punta monouso per evitare reazioni incrociate La densit ottica dipende dal tempo d incubazione e dalla temperatura Perci si rende necessario di preparare tutti i reagenti di aprire i tappi dei flaconi e di appostare tutti i pozzetti nelle appropriate posizioni Soltanto una tale preparazione garantisce gli stessi tempi per ogni processo di pipettamento Come regola generale vale che la reazione enzimatica si svolge linearmente proporzionale con il tempo e con la temperatura 6 2 Eseguimento del test Ogni analisi deve includere una curva standard 1 Fissare i pozzetti necessari sul supporto 2 Pipettare 15 HL di ogni Standard controllo e campione nei pozzetti cambiando ogni volta la punta monouso 3 Pipettare 100 uL Assay Buffer in ogni pozzetto Agitare bene per 10 secondi E molto importante raggiungere un completo mescolamento 4 Incubare per 120 minuti a temperatura ambiente senza coptire la piastra 5 Rovesciare la piastra per vuotare i pozzetti Lavare i pozzetti 3 volte con soluzione di lavaggio diluita 300 uL in ogni pozzetto Rimuovere le gocce d acqua rimanenti rivoltando la piastra su carta assorbente Importante La sensibilit e la precisazione di questo kit sono fortemente influenzate dal corretto eseguimento del lavaggio 6 Aggiungere 100 uL Antiserum ad ogni pozzetto 7 Incubare per 30 minuti a temperatura ambiente 8 Rovesciare la piastra per vuotare i p
39. ones superiores al mayor est ndar han de diluirse Para el c lculo de las concentraciones hay que tener en cuenta el factor de diluci n Vers 9 0 2012 07 vk 29 DRG Leptin Sandwich ELISA EIA 2395 6 3 1 Ejemplo de una Curva Est ndar Tipica Los siguientes datos son solamente para la explicaci n y no pueden ser utilizados en lugar de los datos generados en el momento del ensayo Est ndar Unidades pticas 450 nm Standard 1 2n9 m1 Standard 5 100 ng mL 7 VALORES ESPERADOS Se recomienda encarecidamente que cada laboratorio determine sus valores normales e inusuales En un estudio con adultos aparentemente sanos utilizando el DRG Leptin ELISA se observaron los siguientes valores 8 CONTROL DE CALIDAD Se recomienda usar muestras control de acuerdo con las leyes estatales y federales El uso de muestras control ser recomienda para asegurar la validez diaria de los resultados Usar controles tanto a niveles normal como patol gico Los controles y los correspondientes resultados del Laboratorio de control de calidad est n fijados en el certificado de control de calidad que acompa an al kit Los valores y los rangos fijados en la hoja del control de calidad se refieren siempre al kit actual y deben usarse para la comparaci n directa de los resultados Es recomendable tambi n hacer uso de programas de Aseguramiento de la Calidad nacionales o internacionales para asegurar la exactitud de los resultados Utiliza
40. oporciona los materiales necesarios para la determinaci n cuantitativa del Leptina en suero y plasma Este ensayo est dise ado solo para diagn stico in vitro 2 FUNDAMENTO DEL ENSAYO El Kit DRG Leptin ELISA es un ensayo en fase s lida de inmunoadsorci n unido a enzimas ELISA basado en el principio del s ndwich 3 PRECAUCIONES Este kit es solamente para diagn stico in vitro Por favor se usa solo la version valida de la metodico t cnico incluido aqui en el kit Para obtener informaci n de las sustancias peligrosas incluidas en el kit por favor mirar las hojas de los datos de seguridad del material Todos los reactivos en este kit de ensayo que contienen suero o plasma humano se han ensayado y confirmado ser negativos para HIV I II HBsAg y HCV mediante procedimientos aprobados por la FDA Sin embargo todos los reactivos deben ser tratados tanto en su uso como dispensaci n como potencialmente biopeligrosos Evitar contacto con Stop Solution que contiene H2SO 0 5 M Puede provocar irritaci n y quemaduras en la piel Nunca pipetear con la boca y evitar el contacto de los reactivos y las muestras con la piel y con membranas mucosas No fumar comer beber o usar cosm ticos en reas donde las muestras o los reactivos del kit est n siendo usados Usar guantes de l tex cuando se utilicen las muestras y los reactivos La contaminaci n microbiana de los reactivos o las muestras puede dar resultad
41. os err neos El manejo debe realizarse de acuerdo a los procedimientos definidos por las gu as o regulaci n nacionales de seguridad de sustancias biopeligrosas No utilizar los reactivos despu s de su fecha de caducidad que aparece en las etiquetas del kit Todos los vol menes indicados han de ser realizados de acuerdo con el protocolo Los resultados ptimos del ensayo se obtienen solo cuando se utilizan pipetas y lectores de microplacas calibrados No mezclar o usar componentes de kits con distinto n mero de lote Se recomienda no intercambiar pocillos de distintas placas incluso si son del mismo lote Los kits pueden haber sido enviados o almacenados bajo diferentes condiciones y las caracter sticas de uni n de las placas pueden resultar diferentes Los compuestos qu micos y los reactivos preparados o utilizados han de tratarse como residuos peligrosos de acuerdo con las gu as o regulaci n nacionales de seguridad de sustancias biopeligrosas Las hojas de los datos de seguridad de este producto est n disponibles bajo pedido directamente a DRG Instruments GmbH Vers 9 0 2012 07 vk 25 4 1 DRG Leptin Sandwich ELISA EIA 2395 COMPONENTES DEL KIT Componentes del Kit Microtiterwells Placas multipocillo 12 x 8 tiras separables 96 pocillos Pocillos recubiertos con anticuerpo anti Leptina monoclonal Standard Standard 0 5 Est ndar 6 viales liofilizados 0 5 mL Concentraciones 0 2
42. ozzetti Lavare i pozzetti 3 volte con soluzione di lavaggio diluita 300 uL in ogni pozzetto Rimuovere le gocce d acqua rimanenti rivoltando la piastra su carta assorbente 9 Pipettare 100 uL Enzyme Complex in ogni pozzetto 10 Incubare per 30 minuti a temperatura ambiente 11 Rovesciare la piastra per vuotare i pozzetti Lavare i pozzetti 3 volte con soluzione di lavaggio diluita 300 uL in ogni pozzetto Rimuovere le gocce d acqua rimanenti rivoltando la piastra su carta assorbente 12 Aggiungere 100 uL Substrate Solution ad ogni pozzetto 13 Incubare per 15 minuti a temperatura ambiente 14 Fermare la reazione enzimatica aggiungendo 50 uL Stop Solution ad ogni pozzetto 15 Determinare la densit ottica a 450 10 nm con un fotometro per microtiter piastre entro 10 minuti dopo l aggiunta della Stop Solution Vers 9 0 2012 07 vk 21 DRG Leptin Sandwich ELISA EIA 2395 6 3 Rilevamento dei risultati 1 Determinarei valori medi della densit ottica per ogni set di standard controlli e campioni 2 Costruire una curva standard riportare i valori medi della densit ottica OD di ogni standard contro la rispettiva concentrazione dove i valori delle OD si devono trovare sull asse verticale Y e le concentrazioni sull asse orizzontale X 3 Utilizzando il valore medio delle OD per ogni campione si determina la rispettiva concentrazione dalla curva standard 4 Metodo automatico risultati in IFU sono stati c
43. peratur Deshalb ist es notwendig vor Beginn der Testdurchf hrung alle Reagenzien in einen arbeitsbereiten Zustand zu bringen die Deckel der Fl schchen zu ffnen alle ben tigten Wells in den Halter zu setzen Nur eine solche Vorbereitung garantiert gleiche Zeiten f r jeden Pipettiervorgang ohne Pausen Als generelle Regel gilt dass die enzymatische Reaktion linear proportional zu Zeit und Temperatur ist 6 2 Testdurchf hrung Jeder Lauf muss eine Standardkurve beinhalten 1 Die ben tigte Anzahl Wells in der Halterung befestigen 2 Je 15 pL Standards Controls und Proben mit neuen Plastikspitzen in die entsprechenden Wells geben 3 100 uL Assay Buffer in jedes Well geben F r 10 Sekunden gut sch tteln Es ist sehr wichtig in diesem Schritt eine komplette Durchmischung zu erreichen 4 120 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren 5 Den Inhalt der Wells kr ftig aussch tteln Wells 3 mal mit verd nnter Waschl sung waschen Verbleibende Fl ssigkeit durch Ausklopfen der Wells auf saugf higem Papier entfernen Achtung Die Sensitivit t und Pr zision dieses Assays wird erheblich beeinflusst von der korrekten Durchf hrung des Waschschrittes 6 100 pL Antiserum in jedes Well geben 30 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren 8 Den Inhalt der Wells kr ftig aussch tteln Wells 3 mal mit verd nnter Waschl sung waschen Verbleibende Fl ssigkeit durch Ausklopfen der Wells auf saugf higem Papier entfernen 9 100 uL Enzyme C
44. r m todos estad sticos apropiados para el an lisis de los valores y tendencia de los controles Si los resultados del ensayo no se ajustan a los rangos aceptables establecidos en los controles los resultados obtenidos de los pacientes han de considerarse inv lidos En este caso por favor comprobar las siguientes reas t cnicas Pipeteo y tiempo empleado fot metro fecha de caducidad de los reactivos condiciones de almacenamiento e incubaci n m todos de aspiraci n y lavado Despu s de comprobar los asuntos mencionados arriba sin encontrar ning n error contactar con su distribuidor o con DRG directamente Vers 9 0 2012 07 vk 30 DRG Leptin Sandwich ELISA ElA 2395 9 CARACTER STICAS DEL ENSAYO 9 1 Rango din mico del ensayo El rango del ensayo se encuentra entre 1 0 100 ng mL 9 2 Especificidad de los Anticuerpos Reactividad Cruzada Consultar el manual de usuario en ingl s 9 3 Sensibilidad Anal tica La sensibilidad anal tica se calcul a partir de la media mas dos desviaciones est ndar de veinte 20 r plicas del Est ndar 0 y result ser 1 0 ng mL 9 4 Precisi n Consultar el manual de usuario en ingl s 9 5 Recuperaci n Consultar el manual de usuario en ingl s 9 6 Linealidad Consultar el manual de usuario en ingl s 10 LIMITACIONES DE USO Cualquier manipulaci n inadecuada de las muestras o modificaciones del ensayo pueden influenciar los resultados 10 1 Interferencias con drog
45. riferiscono al lotto del kit attuale e dovrebbero essere utilizzati per un raffronto dei risultati E altres consigliabile di partecipare a programmi di sicurezza sulla qualit nazionali o internazionali per assicurarsi dell esattezza dei risultati Appropriati metodi statistici per l analisi dei valori controllo e delle rappresentazioni grafici dovrebbero essere adoperati Nel caso che i risultati del test non combaciano con il campo di accettazione indicato dal materiale di controllo i risultati dei pazienti devono essere considerati invalidi In questo caso si prega di controllare i seguenti fattori d errore pipette cronometri fotometro data di scadenza dei reagenti condizione di magazzinaggio e d incubazione metodi di aspirazione e di lavaggio Se dopo il controllo dei suddetti fattori non rilevabile alcun errore si prega di contattare il fornitore o direttamente la ditta DRG Vers 9 0 2012 07 vk 22 DRG Leptin Sandwich ELISA ElA 2395 9 CARATTERISTICHE DEL TEST 9 1 Assay Dynamic Range Le concentrazioni determinabili con questo test stanno tra 1 0 100 ng mL 9 2 Specificit degli anticorpi reazioni ad incrocio seguenti reagenti sono stati testati per la loro capacit di dare reazioni incrociate con questo test Leptina di ratto lt 0 2 Leptina di topo Insulina umana Proinsulina umana Insulina di ratto Peptide C umana Glucagon IGF I N R Non rilevabile 9 3 Sensitivita analitica La sen
46. schl sung ist bei Raumtemperatur f r 2 Wochen stabil 4 5 Entsorgung des Kits Die Entsorgung des Kits muss gem den nationalen gesetzlichen Vorschriften erfolgen Spezielle Informationen f r dieses Produkt finden Sie im Materialsicherheitsdatenblatt Kapitel 13 4 6 Beschadigte Testkits Im Falle einer starken Besch digung des Testkits oder der Komponenten muss die Firma DRG in schriftlicher Form sp testens eine Woche nach Erhalt des Kits informiert werden Stark besch digte Einzelkomponenten sollten nicht f r den Testlauf verwendet werden Sie m ssen gelagert werden bis eine endg ltige L sung gefunden wurde Danach sollten Sie gem den offiziellen Richtlinien entsorgt werden 5 PROBENVORBEREITUNG Serum oder Plasma kann in diesem Test als Probenmaterial eingesetzt werden Lip mische ikterische und oder stark h molysierte Proben sollten nicht verwendet werden Achtung Proben die Natriumazid enthalten sollten nicht verwendet werden 5 1 Probenentnahme Serum Blut durch Venenpunktion entnehmen z B mit Sarstedt Monovette f r Serum gerinnen lassen und das Serum durch Zentrifugation bei Raumtemperatur abtrennen Vor der Zentrifugation muss die Gerinnung vollst ndig abgeschlossen sein Bei Patienten die Antikoagulantien erhalten kann die Gerinnungszeit l nger dauern Plasma Die Blutentnahme erfolgt mit R hrchen die ein Antikoagulanz enthalten z B Sarstedt Monovette mit entsprechender Plasma P parierung
47. se of control reagents It is important to always include within the test procedure a sufficient number of controls for validating the accuracy and precision of the test The test results are valid only if all controls are within the specified ranges and if all other test parameters are also within the given assay specifications In case of any doubt or concern please contact DRG 11 2 Therapeutic Consequences Therapeutic consequences should never be based on laboratory results alone even if all test results are in agreement with the items as stated under point 11 1 Any laboratory result is only a part of the total clinical picture of a patient Only in cases where the laboratory results are in acceptable agreement with the overall clinical picture of the patient should therapeutic consequences be derived The test result itself should never be the sole determinant for deriving any therapeutic consequences 11 3 Liability Any modification of the test kit and or exchange or mixture of any components of different lots from one test kit to another could negatively affect the intended results and validity of the overall test Such modification and or exchanges invalidate any claim for replacement Claims submitted due to customer misinterpretation of laboratory results subject to point 11 2 are also invalid Regardless in the event of any claim the manufacturer s liability is not to exceed the value of the test kit Any damage caused to the te
48. settimane da 2 8 Per periodi piu lunghi congelare a 20 TC Vers 9 0 2012 07 vk 19 DRG Leptin Sandwich ELISA EIA 2395 Wash Solution Diluire 30 mL della soluzione di lavaggio concentrata con 1170 mL di acqua deionizzata fino ad un volume finale di 1200 mL La soluzione di lavaggio diluita stabile per 2 settimane a temperatura ambiente 4 5 Smaltimento del kit Lo smaltimento del kit deve avvenire secondo le regole a norma di legge Informazioni particolareggiate per questo prodotto si trovano nel regolamento di sicurezza capitolo 13 4 6 Test kits danneggiati Nel caso di gravi danneggiamenti del kit o dei suoi componenti deve avvenire una dichiarazione scritta alla ditta DRG al piu tardi una settimana dopo il ricevimento del kit Componenti danneggiati non dovrebbero essere utilizzati per il test Questi componenti devono essere magazzinati fino ala soluzione del problema Dopo di che essi devono essere smaltiti secondo le norme ufficiali 5 CAMPIONI Siero o plasma pu essere usato per questo test Non usare campioni emolitici itterici o lipemici Attenzione Se i campioni contengono sodio azide non devono essere utilizzati per questo test 5 1 Collezione dei campioni Siero Collezionare sangue tramite puntura venale p es Sarstedt Monovette per siero far coagulare e separare il siero centrifugando a temperatura ambiente Non centrifugare prima che la coagulazione sia completata Campioni di pa
49. sitivita analitica stata calcolata dai valori medi piu due deviazioni standard di venti 20 repliche dello Standard 0 ed erano 1 0 ng mL 9 4 Precisione Per dettagli pi precisi consultare la metodica in inglese 9 5 Ritrovato Per dettagli pi precisi consultare la metodica in inglese 9 6 Linearita Per dettagli pi precisi consultare la metodica in inglese 10 LIMITAZIONE DEL TEST Ogni manutenzione impropria dei campioni o modificazione del protocollo pu influenzare risultati 10 1 Droghe interferenti Fino ad oggi nessuna sostanza farmaco conosciuta a noi che abbia influenzato la determinazione di Leptin nel campione Vers 9 0 2012 07 vk 23 DRG Leptin Sandwich ELISA EIA 2395 11 ASPETTI LEGALI 11 1 Affidabilit dei risultati Il test deve essere eseguito esattamente secondo il protocollo dato dal produttore Inoltre l utente deve seguire le regole del GLP Good Laboratory Practice o eventualmente altre regole comportamentali o disposizioni legali Questo vale soprattutto per l uso delle referenze E molto importante utilizzare un numero appropriato di referenze in parallelo ai campioni test per poter controllare l esattezza e la precisione del test risultati del test sono validi soltanto se tutte le referenze cadono nei margini prestabiliti e se tutti gli altri parametri del test soddisfano la specificazione per questo test Se esistono dubbi o domande su questi risultati si prega di contattar
50. st kit adatto soltanto per l uso diagnostico 2 PRINCIPIO DEL TEST Il test kit DRG Leptin ELISA un test immunologico in fase solida con enzimi ancorati su un substrato ELISA basato sul principio sandwich micropozzetti sono ricoperti con un anticorpo monoclonale diretto contro un unico sito antigenico su una molecola Leptina Un aliquota di un campione di paziente contenente Leptina endogena viene incubato nel pozzetto ricoperto con un anticorpo specifico contro la leptina Si forma un complesso a sandwich Dopo l incubazione il componente non legato eliminato attraverso lavaggi Un coniugato tra la perossidasi e streptavidina e aggiunto per la determinazione della leptina legata Dopo l aggiunta della soluzione substrato l intensit del colore sviluppato proporzionale alla concentrazione di Leptina nel campione del paziente 3 PRECAUZIONI Questo kit adatto soltanto per l uso diagnostico in vitro Informazioni su sostanze pericolose contenute nel kit sono riportate nel regolamento di sicurezza Tutti i componenti del kit che contengono siero o plasma umano sono controllati e confermati negativi per la presenza di HIV I II HosAg e HCV con metodi conformi alle norme FDA Ciononostante tutti i componenti dovrebbero essere trattati come potenziali sostanze nocive nella manutenzione e nello smaltimento Il contatto con la soluzione stop dovrebbe essere evitato perch contiene 0 5 M H2SO L acido sol
51. st kit during transportation is not subject to the liability of the manufacturer 12 REFERENCES LITERATURE 1 Considine R V Sinha M K a o Serum Immunoreactive Leptin Concentrations in Normal Weight and Obese Humans The New England Journal of Medicine Feb 1996 2 Guillaume M Bj rntorp P Obesity in Children Environmental and Genetic Aspects Horm Metab Res 28 1996 p 573 581 3 Guillaume M Bj rntorp P Obesity in Children Environmental and Genetic Aspects Horm Metab Res 28 1996 p 573 581 Vers 9 0 2012 07 vk 10 DRG Leptin Sandwich ELISA EIA 2395 1 EINLEITUNG Der DRG Leptin ELISA wird zur quantitativen Bestimmung von Leptin in Serum und Plasma eingesetzt Nur f r In vitro Diagnostik 2 TESTPRINZIP Der DRG Leptin ELISA ist ein Festphasen Enzymimmunoassay der auf der Sandwichtechnik basiert Die Wells der Mikrotiterplatten sind mit einem monoklonalen Antik rper beschichtet der gegen eine definierte Antik rper Bindungsstelle des Leptin Molek ls gerichtet ist Die Proben inkubieren in den beschichteten Wells Eine zweite Inkubation mit einem spezifischen biotinylierten Anti Leptin Antik rper folgt Es wird ein Sandwichkomplex gebildet Nicht gebundenes Material wird durch Waschen entfernt Es folgt die Inkubation mit einem Streptavidin Peroxidase Enzymkomplex Der nicht gebundene Enzymkomplex wird durch Waschen der Wells entfernt Anschlie end wird die Substratl sung zugegeben und die Far
52. zienti con una terapia anticoagulante possono richiedere pi tempo per la coagulazione Plasma Il sangue dovrebbe essere collezionato in tubetti da centrifuga contenenti un anticoagulante p es Sarstedt Monovette con un adeguata preparazione per il plasma e centrifugando immediatamente dopo la puntura 5 2 Magazzinaggio dei campioni I campioni dovrebbero essere magazzinati ben chiusi fino a 24 ore a 2 C 8 C Campioni magazzinati per un periodo pi lungo dovrebbero essere congelati solo una volta a 20 C prima dell analisi Congelare soltanto una volta Invertire campioni scongelati alcune volte prima dell uso 5 3 Diluizione dei campioni Se in un campione di siero viene trovata una concentrazione oltre lo standard piu alto questo campione pu essere diluito con lo Standard 0 e nuovamente determinato Della diluizione deve essere per tenuto conto Esempio a diluizione 1 10 10 uL siero 90 uL Standard 0 agitare bene b diluizione 1 100 10 uL della diluizione a 90 uL Standard 0 agitare bene Vers 9 0 2012 07 vk 20 DRG Leptin Sandwich ELISA EIA 2395 6 ATTUAZIONE DEL TEST 6 1 Indicazioni generali Tutti i reagenti e i campioni devono essere portati a temperatura ambiente e ben mescolati prima dell uso Evitare la formazione di schiume Una volta iniziato il procedimento del test questo deve essere portato alla fine senza interruzione Per ogni componente standard controllo o campi
53. zimatico Conjugate Enzyme Enzyme Complex Enzymkomplex Complexe Complex enzim tico Complesso enzimatico Complex enzymatique Substrate Substrate Solution Substratl sung Solution substrat Soluci n de sustrato Soluzione di substrato Solution Stop Solution Stop Solution Stoppl sung Solution d arr t Soluci n de parada Soluzione d arresto Zero Standard Zero Standard Nullstandard Zero Standard Est ndar cero Standard zero Standard Standard Standard Standard Est ndar Standard Control Control Kontrolle Contr le Control Controllo Assay Buffer Assay Buffer Assaypuffer Tampon d essai Tamp n de ensayo Tampone del test Wash Solution Wash Solution Waschl sung Solution de lavage Soluci n de lavado Soluzione di lavaggio 1N NaOH 1N NaOH 1N NaOH 1N NaOH 1N NaOH 2 i oros seorg 1 N HCI 1N HCI 1N HCI 1N HCI 1N HCI x E Probenverd nnungs Solution pour dilution Soluci n para diluci n i Li Sample Diluent Sample Diluent medium de l chantillon de la muestra Alt as campioni Conjugate i E Konjugatverd nnungs Solution pour dilution Soluci n para diluci n Diluent Conjugate Diluent medium du conjugu del conjugado Diluente del tracciante Vers 9 0 2012 07 vk 33

Leptin (Sandwich) ELISA

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