Hoefer SE600 Chroma
Contents
1. ci zatwierdzone lub dostarczone przez Hoefer Inc mog by wykorzystane do eksploatacji utrzymania i obs ugi tego produktu korzysta jedynie zasilacza e jest nosz ce oznakowanie CE lub bezpiecze stwa uwierzytelnione przez uznane na poziomie krajowym laboratorium badawcze Bezpiecze stwo lid musi by w miejsce przed pod czeniem zasilania prowadzi do zasilania Za wszystkie r d a zasilania urz dzenia steruj ce off i od czy moc prowadzi przed odbiorem bezpiecze stwa lid Kr tylko wody lub wody 50 50 ethylene glycol wymiennik ciep a poprzez je li tak wyposa one Nie nale y po czy wymiennik ciep a woda z kranu lub jakimkolwiek ch odziwo r d a je eli ci nienie wody jest nieuregulowanych Nigdy nie wprowadza rozpuszczalnika organicznego przeciw zamarzaniu lub jakichkolwiek na dowoln cz dokumentu Rozpuszczalniki organiczne spowoduje nieodwracalne szkody dla jednostki Nie dzia aj w buforze temperatury powy ej maksymalnego okre lone specyfikacje techniczne Przegrzania spowoduje nieodwracalne szkody dla jednostki pv Informac es Importantes Portuguese Se este equipamento usado numa maneira n o especificada por Hoefer Inc que a protecc o fornecida pelo equipamento pode ser comprometida Este instrumento projectado para uso de interior de laborat rio s S acess rios e partes aprovaram ou forneceu por Hoefer Inc po2. la presa teniendo cuidado de alinear los extremos de la abrazadera y los bordes de la presa Instale los ficticias de gel tornillos hacia afuera en la segunda cuna de la m quina de colada de gel de doble Coloque el emparedado de gel a la camara superior de tamp n Encienda la camara de amortiguaci n superior boca abajo y colocar una junta con ranuras en ambas cavi dades sandwich titular Tanto la ranura de la junta y la ranura en el hueco debe alinear Ambas juntas ranuradas debe ser utilizado incluso si se ejecuta s lo un emparedado de gel Ranuras a lo largo de cada ranura de ayudar a mantener la junta en su lugar Adem s una peque a cantidad de gel sello puede ser aplicado a cada extremo de la junta antes de instalar para ayudar a sujetar la junta contra la c mara de amortiguaci n superior Suelte los s ndwiches de la m quina de colada medi ante la eliminaci n de todas las c maras inferiores si existe Baje la c mara de amortiguaci n superior Nota No fuerce las levas Si se encuentra con una resistencia inusual desarmar e inspeccionar la abrazadera y la alineaci n de cristal en la parte superior del sandwich Alinee y vuelva a instalar Nota Si la opci n de refrigeraci n se utiliza con frecuencia es conveniente colocar los conectores QuickFit a la tuber a Las v lvulas en estos accesorios de evitar el derrame del l quido refrigerante en los bocadillos de gel en el soporte de fund
3. los principales factores que deben equilibrarse incluyen la concentraci n del gel y la velocidad de migraci n y el calentamiento Joule y la dis torsi n resultante banda En la tabla 2 como punto de partida las directrices y los ajustes de grosor del gel el n mero de geles y la tasa de migraci n Corriente Actos corrientes sobre el total de rea de sec ci n transversal de todos los geles porque los geles est n conectados en paralelo en el circuito el ctrico As la configuraci n actual de un gel debe ser multiplicado por el n mero de geles de la misma secci n transversal de ejecuci n simul t neamente Para un gel de 1 5 mm de espesor se aconseja un ajuste de la corriente de arranque de 25 mA Dos de 1 5 mm de geles 50 mA Nota Puede ser necesario enfriar para controlar el calentamiento Joule e p23 Precauci n Despu s de monitoreo inicial no deje la unidad sin usar por mas de 1 hora antes de comprobar el progreso de las bandas y el nivel de amortiguaci n e p24 Voltaje El voltaje de partida para un gel de 1 5 mm de losa conectado a una fuente de alimentaci n ajustado a 25 mA es generalmente 80 90 V uti lizando la unidad SE600 croma con un sistema tamp n de Laemmli discontinua para geles de SDS El voltaje final es t picamente 250 a 400 V dependiendo de la longitud del gel Ver Tabla 2 Tiempo Una ejecuci n generalmente se completa cuando el colorante de rastreo alcanza la part
4. nd testande laboratorium S kerheten locket m ste vara p platsen f re koppla kraften tillg ngen blyen till en kraft tillg ng V nder sig alla kraft tillg ng kontroller av och kopplar bort kraften blyen f re flytta s kerheten locket Cirkulerar bara vatten eller 50 50 vatten ethylene glycol genom v rmen exchanger i s utrustad fall Inte kopplar v rmen exchanger till en vatten kran eller n got kylmedel k lla d r vattnet trycket r unregulated Inf r aldrig kylv tska eller n got organiska l sningsmedel in i n gon del av instrumentet Organiskt l sningsmedel ska orsaka irreparable skada till enheten Anv nd inte med buffert temperaturer ver det h gsta angivna tekniska specifikationerna verhettning skulle orsaka irreparabla skador p enheten pvi Espa ol English French German Italian Swedish La A Ia La A La Residuos de Aparatos El ctricos y Electronicos RAEE Este simbolo indica que el equipo el ctrico y electr nico no debe tirarse con los desechos dom sticos y debe tratarse por separado Contacte con el representante local del fabricante para obtener mas informaci n sobre la forma de desechar el equipo This symbol indicates that the waste of electrical and electronic equipment must not be disposed as unsorted municipal waste and must be collected separately Please contact an authorized representative of the manufacturer for information concerning
5. oro SE6067 con 2 arandelas SE600 Chroma Intercambiador de calor SE6160 electrodo inferior de montaje Tubo de vidrio con 2 anillos SE6160 5 para el intercambiador de calor menor electrodo de la Asamblea Ojales para intercambiador de calor 4 SE6060 6 electrodo inferior de montaje Nivel de burbuja 1 SER11 Gel compuesto de sello 1 4 oz tubo 1 SE6070 Spacer Mate 3 SE6119SM p35 p36 producto cantidad c digo Ruedas de gel Para 1 0 2 geles Rueda de gel de doble 1 SE6015 b sico 2 geles 18 cm de ancho Incluye 2 juntas en blanco paral o 2 geles Una incluido con cada unidad SE600 Chroma Para un m ximo de 4 geles Gel Kit de ruedas 1 SE675 4 geles 18 x 16 cm Incluye 8 placas de vidrio 3 de ahorro de espacio en las placas 5 hojas de relleno 100 hojas de papel encerado Spacer Mate plantilla de alineaci n y los tapones de llenado Orden de los peines y separadores por separado Para un m ximo de 10 geles Gel m ltiple Kit de ruedas 1 SE615 10 gels 18 x 16 cm Incluye 20 placas de vidrio ahorrador de espacio plato 5 hojas de relleno 100 hojas de papel encerado Spacer Mate alineaci n plantilla y los tapones de relleno Orden de los peines y separadores por separado producto cantidad c digo Sujetadores y c maras Abrazadera y el Kit de Cam cuatro pinzas de 16 cm y 8 c maras negras 1 SE6003UK Tornillos de repuesto para las abraza
6. ual del usuario Espafiol Hoefer SE600 Chroma Standard doble gel enfriado por unidad de electroforesis Hoefer mu SE600X IM Spanish Rev CO 05 12 Tabla de contenidos Informaci n Importante o ooo ji Residuos de Aparatos El ctricos y Electr nicos RAEE a sa bet day ri Ab GW e vii Electroforesis en gel de la Unidad Funci n y deSCHPCEI sadze wad a ated ec ad A ee 1 lh Oe Te 2 Desembalaje e Inventari0 4 Manual de instrucciones 8 Preparar el emparedado de gel 8 Acrylamide Ges 12 Geles de acrilamida 12 Geles de gradiente anaana nananana 14 Preparaci n de la muestra y carga 16 Ensamblaje Final 0000000008 18 La separaci n de la muestra 23 Cuidado y mantenimiento 26 Soluci n de problemaS o o o oooooo o 27 Orden Informaci n risa 35 O pi Informacion Importante Espa ol Si este equipo es utilizado en una manera no especificado por Hoefer Inc la protecci n proporcionado por el equipo puede ser da ada Este instrumento es dise ado para el uso interior del laboratorio s lo S lo accesorios y partes aprobaron o suministraron por Hoefer Inc puede ser utilizado para operar para mantener y para atender a este producto S lo utiliza una alimentaci n que es CE marc o la seguridad certificada por un nacionalmente reconocido
7. 1 5 Nuevo peine ajustable 1 SE511 BKA Se requiere para convertir cualquier peine profunda de 25 mma 100 15 mm de profundidad e p38 Espaciadores espesor mm longitud cm ancho cm cantidad c digo 0 75 8 2 2 SE6419 2 75 1 0 8 2 2 SE6419 2 1 0 1 5 8 2 2 SE6419 2 1 5 0 75 16 2 2 SE6119 2 75 1 0 16 2 2 SE6119 2 1 0 5 16 2 2 SE6119 2 1 5 1 0 16 1 2 SE6118 2 1 0 5 16 1 2 SE6118 2 1 5 Productos complementarios Hoefer SE100 Plate Mate 1 SE100 lavado y unidad de almacenamiento QuickFit conectores femenino 3 8 2 QF3 8 QuickFit conectores masculino 3 8 2 QFX3 8 Ls p39 Hoefer Inc 84 October Hill Road Holliston MA 01746 Llamada gratuita 1 800 227 4750 Tel fono 1 508 893 8999 Fax 1 508 893 0176 E mail support hoeferinc com Web www hoeferinc com Hoefer es una marca registrada de Hoefer Inc Coomassie es una marca comercial de ICI PLC 2012 Hoefer Inc Todos los derechos reservados Impreso en el USA Hoefer
8. Inc beskyttelsen som ha blitt git av utstyret kan bli svekket Dette instrumentet er utformet for innend rs laboratoriumbruk bare Bare tilbeh r og deler godkjente eller forsynte ved Hoefer Inc kan bli brukt for drive vedlikeholde og betjene dette produktet bruker Bare en kraftforsyning som er CE merket eller sikkerhet som ha blitt sertifisert av et som nasjonalt ha blitt anerkjent prover laboratorium Sikkerheten lokket m v re pa plass far forbinding kraftforsyningene blyene til en kraftforsyning Vender all kraftforsyningsstyring av og frakopler kreftene blyene for fjerning sikkerheten lokket Sirkulerer bare vann eller 50 50 vann ethylene glykol gjennom oppvarmingen veksleren i sa fall utstyrer Ikke forbind oppvarmingen veksleren til en vanntapp eller noe kjalemiddelkilde hvor vannet trykket er unregulated Introduserer Aldri antifreeze eller noe organisk losemiddel inn i noe del av instrumentet Organiske losemiddler vil for rsake irreparabel skade pa enheten Driver med buffertemperaturer over maksimum ikke spesifiserte teknisk spesifikasjoner A overoppheting vil forarsake irreparabel skade pa enheten Wazne Informacje Polish Je eli ten sprz t jest wykorzystywany w spos b nie okre lone przez Hoefer Inc do ochrony przewidzianej przez urz dzenie mo e zosta obni ony Instrument ten jest przeznaczony do u ytku w laboratoriach kryty tylko Tylko akcesori w i cz
9. Las particulas de la muestra remedio Centrifugar o filtrar la muestra antes de la carga para elimi nar las particulas La sobrecarga Cargar menos muestra Degradaci n La fuga de corriente en torno de gel A adir inhibidor de la proteasa tales como PMSF Compruebe si hay fugas todas las placas y los separadores debe estar alineada y libre de grasa y las grietas Si se utiliza la presa de almacenamiento intermedio debe ser seguro Muestra o prepara ci n de los reactivos Si el pH requerido de una soluci n que se rebase no valorar en retroceso Descartar y preparar tamp n nuevo Compruebe recetas las concentraciones de gel y la diluci n de amortiguaci n Por ejemplo no utilice Tris HCl en vez de Tris para el tamp n de Laemmli tanque Disminuir la concentraci n de sal de las muestras Reactivo de la calidad Deshagase de las soluciones de acrilamida mayores y utilizar s lo acciones de la mas alta calidad Use s lo la urea reci n desionizada Valores de voltaje o corriente Preparaci n del gel y la polimerizaci n incompleta Para aumentar o disminuir la velocidad de migraci n ajustar el Voltaje o corriente en un 25 50 Desgasificar el apilamiento gel de la soluci n y evitar burbu jas de aire bajo los dientes del peine Interfaz de apila miento irregular entre en funcionamiento geles Superponer el gel de funcionamiento con agua saturada con butanol antes de
10. Se quest apparecchiatura usata in un modo specificato da Hoefer Inc la protezione fornito dall apparecchiatura potrebbe essere indebolita Questo strumento disegnato per l uso di laboratorio interno solo Solo gli accessori e le parti hanno approvato o hanno fornito da Hoefer Inc potrebbe essere usato per operare per mantenere e per revisionare questo prodotto usa Solo un alimentatore che CE ha marcato o la sicurezza certificato da un nazionalmente riconosciuto testando il laboratorio O piv ll coperchio di sicurezza deve essere nel luogo prima di collegare i piombi di alimentatore a un alimentatore Spegne tutto i controlli di alimentatore e disinserisce i piombi di potere prima di togliere il coperchio di sicurezza Circola solo l acqua o 50 50 glicole di acqua etilene attraverso lo scambiatore di calore se cosi equipaggiato Non collegare lo scambiatore di calore a un rubinetto di acqua o qualunque fonte di refrigerante dove la pressione di acqua sregolata Non introduce mai l antigelo o qualunque solvente organico in qualunque parte dello strumento I solventi organici causeranno il danno irreparabile all unita Non opera con le temperature di tampone al di sopra del massimo ha specificato le descrizioni tecniche Il surriscaldamento causera il danno irreparabile all unita Viktig Informasjon Norwegian Hvis dette utstyret blir brukt i en mate ikke spesifisert ved Hoefer
11. extremos libres de cada tramo de tuber a a los puer tos de circulaci n para el ba o una para la entrada y la otro a la toma Asegure las conexiones con las abrazaderas de manguera e p19 La figura 7 Bafio de circulaci n aproximada ajuste de la temperatura Ajuste la temperatura del ba o circulador posici n m s baja que la temperatura de funcionamiento deseada por la cantidad indicada en el gr fico Esto debe ser chequeado en tres puntos e p20 0 1 U mA 2 2 A bi v 3 Ki SS 5 2 8 4 v cs o 5 5 o 6 7 0 10 20 30 40 50 60 ajuste de potencia de suministro W Ejemplo Ejecutar los parametros 200 V 0 05 A 50 mA 1 Calcular W si su fuente de alimentaci n no se muestra el poder directamente W VxA 10W 200Vx0 05A 2 Interpolar el nimero de grados para restar de la temperatura de funcionamiento deseado 10 W intersecta la grafica menos aproximada mente 1 C Si la temperatura deseada es 23 C poner el bafio de 23 1 22 C Si la temperatura deseada es 4 C poner el ba o a 4 1 3 C Fig 8 Superior e inferior de b fer los niveles de la c mara de llenado Utilice la tabla Fig 7 en la p gina 20 para calcular un punto de partida para el ajuste de la temperatura del ba o circulador Realice los ajustes necesarios para variables tales como
12. gel se establece preparar el gel de apilamiento como se describe a continuaci n La 2 D electroforesis sistema de la prote na disconti nua Completa soluci n de mon mero de aproxima damente 1 cm por debajo de la parte superior de la placa de cristal para permitir 4 a 5 mm para la tira IPG o gel de tubo y un sello de agarosa Un gel de apilamiento se requieren espacio adicional Selle la tira IPG o gel tubo en su lugar con la agarosa disuelta en la gesti n de memoria intermedia Tenga cuidado de no atrapar burbujas de aire entre los geles de primera y segunda dimensi n 9 Superponer cada gel con una delgada capa de agua butanol saturado agua o tamp n de gel diluida para evitar la exposici n al oxigeno de gel Lentamente entregar la soluci n de superposici n de una jeringa de vidrio equipado con una aguja de calibre 22 Aplicar la soluci n cerca del espaciador en un lado del emparedado y permitir que fluya a trav s de la superficie sin ayuda Permitir que el gel se polimeriza durante un minimo de 1h Preparaci n de gel de apilamiento Verter el gel de apilamiento mientras que el sandwich se encuentra todavia en la maquina de colada de gel Apilamiento de gel de resoluci n es ptima cuando se vierte justo antes de la electroforesis 4 Eliminar la superposici n de un enjuague la parte superior del gel varias veces con agua destilada Invertir el lanzador a la fuga A fin de garantizar un cont
13. ligero angulo y muy lentamente para evitar da ar el gel Geles de agarosa Bajar el peine no m s de 1 cm en el gel Seguimiento de Pobre de Vierta un gel m s alto de apilamiento Para obtener los tinte no afilar en apilamiento mejores resultados permita una altura de apilamiento de gel una zona concen de 2 5 veces la altura de la muestra en el pozo trada en el gel de apilamiento Reactivo de Desh gase de las soluciones de acrilamida obsoletas y usar la calidad s lo el grado m s alto de la acrilamida Preparaci n de la En la preparaci n de muestras evitar el uso de soluciones muestra con altas concentraciones de sal LEE e p27 problema Polimerizaci n de gel incompleta Superiores perdi das de buffer de la camara Fuente de alimen taci n detecta fugas de corriente Curvas delanteras hasta Dye sonrie en los bordes e p28 posible causa Productos quimicos remedio Utilice nicamente las poblaciones de los ltimos de los reactivos de la m s alta calidad Si el persulfato de amonio seco no crepitan cuando se a ade al agua sustituir con caldo fresco Aumentar TEMED o concentraci n de APS o ambos pH Las soluciones con valores de pH extremos especialmente cido no puede polimerizar Ox geno Quitar el ox geno del medio ambiente en gel desgasificar la soluci n mon mero 5 10 min antes de verter y luego super poner la superficie del gel con agua saturada de n butanol Tem
14. nap jen vede k Turn ve ker nap jen kontroly vypnuto a odpojit p ed odb rem energie vede bezpe nostn v ko Rozeslat pouze voda nebo 50 50 voda ethylenglykolu prost ednictv m v m n k tepla je li to vybavena Nemaj p ipojen v m n k tepla s vodn mi set epn nebo jak koli chladic kapaliny zdroje kde tlak vody je neregulo Nikdy zav st prost edek proti zamrznut nebo jak koli organick rozpou t dla do jak koli sti z tohoto n stroje Rozpustidl m zp sob nenapraviteln po kozen jednotka Nejsou provozov na s pufru teplot ch nad maxim ln stanovenou technick mi specifikacemi P eh t zp sob nenapraviteln po kozen jednotka Vigtig Information Danish Hvis dette udstyr bruges i en made ikke specificeret ved Hoefer Inc den beskyttelse som er blevet forsynet af udstyret kan m ske sv kkes Dette instrument er designet for indend rs laboratoriumbrug bare Bare tilbeh r og del godkendede eller forsynede ved Hoefer Inc kan m ske bruges for drive funktionsfejl og betjening dette produkt bruger Bare en str mforsyning der er CE markerede eller sikkerhed som er blevet attesteret af en som nationalt er blevet anerkendt prove laboratorium Sikkerhedlaget m v re pa plads far forbinding stromforsyningsblyet til en str mforsyning Drejer alle stramforsyningskontroller af og afbryder kraftblyet for fjerning sikkerhedlaget Cirk
15. para la fundici n de los geles Pies ajustables de nivel del lanza dor Una junta laminada en la parte inferior de cada cuna sellos de fundici n el fondo del emparedado cuando se sujeta en el soporte C maras C maras se utilizan dos veces primero para asegurar el sandwich montado en el soporte de fundici n y segundo para fijar el sandwich a la c mara de amortiguaci n superior Las juntas de goma Hay dos conjuntos de dos juntas Las juntas s lidas laminadas encajan en la parte inferior de la pieza colada de pie y formar el sello para colar el gel Las juntas ranuradas encajar en la c mara de amortiguaci n superior y formar el cierre herm tico entre las c maras superior e inferior Las crestas en la junta superior alinear la ranura junta para mantener un canal abierto entre la parte superior del gel y el tamp n en la c mara superior Espaciadores Espaciadores determinar el espesor del gel y estan disponibles en tres espesores 0 75 1 0 y 1 5 mm y dos anchos 1 y 2 cm Se pueden pedir por separado Spacer Mate alineaci n de la plantilla Esta plantilla se alinea espaciadores durante el montaje sandwich Combs Combs estan disponibles en tamafios que forman 10 12 15 20 6 28 pozos Preparativo peines incluir uno o dos pozos de referencia ademas de un bien preparativa La mayoria de los peines estan disponibles en tres espesores 0 75 1 0 y 1 5 mm Se pueden pedir por sepa rado Todos los pe
16. temperatura ambiente los cambios en la potencia y la eficiencia de ba o de circulaci n Si el control preciso de la temperatura es cr tico medir la temperatura y ajustar cuando sea necesario Opcional enfriamiento previo del b fer Instale el conjunto de b fer en la c mara superior de la c mara de amortiguaci n inferior Utilice una mano firme para no molestar a las muestras Sujete el conjunto en el soporte de fundici n por la c mara de amortiguaci n superior y bajar con cuidado en la c mara inferior Q Inspeccione la instalaci n y comprobar los niveles de amortiguaci n C mara de amortiguaci n superior UBC El electrodo a lo largo de la arista superior de la c mara debe estar sumergido a 1 cm Este nivel requiere 450 a 600 ml de soluci n tamp n lo suficiente para cubrir las costillas de la c mara superior pero no lo suficiente mente alto para ponerse en contacto con el conector banana No Ilene por encima de la UBC m xima de la linea de llenado Buffer de la c mara baja LBC Llene hasta la l nea de llenado MAX LBC Alta c mara amortiguadora de SC p HBC llenado m ximo de linea MAX Buffer de la camara baja la linea de llenado maximo Buffer etiqueta LBC de nivel MAX e p21 O 5 e p22 Coloque la tapa de seguridad de la unidad mediante la participaci n de los pernos de seguridad de blo queo antes de bajar las conex
17. 5 1977 Anderson L Two Dimensional Electrophoresis Operation of the ISO DALT System Second Edition Large Scale Biology Press 1991 Bravo R Schafer R Willecke K MacDonald Bravo H Fey S J and Celis J E More than one third of the discernible mouse polypeptides are not expressed in a Chinese hamster mouse embryo fibroblast hybrid that retains all mouse chromosomes Proc Natl Acad Sci USA Apr 79 7 2281 2285 1982 Hurkman W J and Tanaka C K Solubilization of Plant Membrane Proteins for Analysis by Two Dimensional Gel Electrophoresis Plant Physiology 81 802 806 1986 Mets L J and Bogorad L Two dimensional polyacrylamide gel electrophoresis an improved method for ribosomal proteins Anal Biochem Jan 57 1 200 210 1974 e p33 e p34 O Farrell P H High resolution two dimensional electrophoresis of proteins J Biol Chem May 25 250 10 4007 4021 1975 Bjellqvist B et al Isoelectric focusing in immobilized pH gradients principle methodology and some applications J Biochem Biophys Methods 6 317 339 1982 G rg A et al The current state of two dimensional electrophoresis with immobilized pH gradients Electropboresis 9 531 546 1988 G rg A Two dimensional electrophoresis with immobilized pH gradients current state Biochem Soc Trans 21 130 132 1993 Bjellqvist B et al Micropreparative two dimensional electrophoresis allowing the separ
18. 7 4 1 1 1 ref prep 4 90 6 121 9 183 1 2 ref prep 4 85 6 112 9 171 e p17 La figura 6 Colocaci n de bocadillos de gel a la camara de amortiguaci n superior Si las fugas de montaje ll velo a un fregadero y parcialmente en libertad a los c maras de amortiguaci n para permitir el drenaje de la c mara alta Desmontar verificar la alineaci n de todos los componentes de paneles s ndwich y ajustar si es necesario A Quite las levas de los orificios inferiores de la leva Coloque la c mara alta en los bocadillos y luego insertar las levas en los agujeros de levas superior cresta extremo corto apuntando hacia abajo B La posici n final de leva no mostrado debe ser vertical de manera que el montaje se ajusta en la c mara de amortiguaci n inferior e p18 Ensamblaje Final Camara de amortiguaci n superior 0 Enjuague las dos c maras de amortiguamiento con el agua y el agua destilada antes de cada uso Nota Antes de usar la primera vez desmontar la uni dad y se lava con una soluci n diluida de un deter gente de laboratorio y enjuagar primero con agua y luego con agua destilada Limpie cualquier gel de adherirse a la parte exterior de los emparedados de gel 9 Si se ejecuta un solo gel Bloquear la segunda ranura de la c mara superior de amortiguaci n mediante la instalaci n de la represa de amortiguaci n de acr lico incluido con la unidad Coloque las abrazaderas en
19. a vez que el borde del vidrio aparece mas oscura y casi transparente contra la junta No gire mas alla de este punto placa de vidrio caminar cam agujero abrazadera cam agujero soportes de fundici n 2 cam agujero niveladoras 4 burbuja instalar el cam agujero canto terminan e pll pl2 Geles de acrilamida Preparar la soluci n de mon mero y verter el gel Preparar la cantidad necesaria de soluci n de mon mero Purgar y afiadir el iniciador y el catalizador justo antes de verter el gel Pipetear la soluci n en una esquina del sandwich teniendo cuidado de no introducir burbujas de aire V ase mas abajo para el nivel de la soluci n apropiada de acuerdo con la aplicaci n No gel de apilamiento sistema continuo Soluci n de llenado hasta justo debajo de la parte superior del borde de la placa superior Si las burbujas se encuen tran atrapados retire con una pipeta o una jeringa Introducir un peine con un ligero ngulo en cada s ndwich teniendo cuidado de no atrapar burbujas de aire debajo de los dientes Club s ndwich Pipetear la soluci n en ambos emparedados llenando cada uno al mismo nivel por debajo del borde con muescas Gel de apilamiento Completa soluci n a 3 4 cm por debajo de la parte superior de la placa de vidrio Esta altura permite 1 cm de gel de apilamiento por debajo de los pozos Verter el gel y aplicar una plantilla ver paso 2 Despu s el
20. acto perfecto entre la resoluci n y apilamiento geles eliminar el liquido residual secante una esquina con un pafio de laboratorio Calcular el mon mero gel de apilamiento volumen de soluci n Preparar la soluci n de mon mero de apilamiento gel desairear y a adir catalizador y el iniciador Verter el gel de apilamiento en el gel de resoluci n con una pipeta Pasteur desechable o de un nivel de aproximadamente 2 mm desde la parte superior de la placa o Introducir un peine con un ligero angulo en el emparedado teniendo cuidado de no atrapar el aire bajo los dientes Permita un minimo de 1 hora para que el gel se polimeriza e p13 La figura 5 Verter un gel de gradiente Una punta de la pipeta se puede utilizar en lugar de una canula si la soluci n de gel se entrega a una velocidad que mantiene un flujo continuo sobre la superficie del vidrio Nota Geles de gradiente vertidas en el SE615 0 SE675 Caster Gel m ltiple se introducen a trav s de la parte inferior Nota Al verter un gel de gradiente exponencial la posici n de un mbolo o tap n de cierre por encima del liquido en la camara de mezcla para mantener el volumen constante e p14 Geles de gradiente Ambos geles de gradiente lineal y exponencial se puede verter en el lanzador de doble gel Le recomendamos que utilice un Hoefer SG Cre ador de la serie de gradiente Geles de gradiente se vierten desde la parte superior
21. ar a 40 a 80 C e p31 a Bibliograf a General Gallagher S R and Smith J A Electrophoretic separation of proteins In Current Protocols in Molecular Biology Ausubel F A eds OSC 10 2 1 10 2 21 1991 Hames B D and Rickwood D Gel Electropboresis of Proteins A Practical Approach Second edition City IRL Press 1990 Sambrook J and Russell D W Molecular Cloning A Laboratory Manual Cold Spring Harbor Laboratory Cold Spring Harbor NY 2001 Sasse J and Gallagher S R Staining proteins in gels Current Protocols in Molecular Biology Ausubel F A et al eds OSC 10 6 1 10 6 8 1991 SDS Polyacrylamide Gel Electrophoresis and Isoelectric Focusing Handbook 80 6013 88 Hoefer Inc 2001 No desnaturalizantes sistemas de gel Reisfeld R A et al Acidic buffer system for resolution of cationic proteins Nature 195 281 1962 McLellan T Electrophoresis buffers for polyacrylamide gels at various pH values Anal Biochem 126 94 1982 Hedrick J L and Smith A J Size and charge isomer separation and estimation of molecular weights of proteins by discontinuous gel electrophoresis Arch Biochem Biophys 126 155 1968 La desnaturalizaci n sistemas de gel Laemmli U K Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T Nature 227 680 685 1970 Matsudaira P T and Burgess D R SDS microslab linear gradient p
22. ation of samples containing milligram amounts of proteins Electropboresis 14 1375 1378 1993 Blomberg A et al Interlaboratory reproducibility of yeast protein patterns analyzed by immobilized pH gradient two dimensional gel electrophoresis Electrophoresis 16 1935 1945 1995 seguridad la tapa con los cables SE6056X camara amortiguadora superior SE6054 intercambiador de calor SE6160 buffer de la camara baja SE6150X Orden informacion producto cant codigo SE600 Chroma unidad completa 1 Incluye 3 series de placas de vidrio dos de 15 y peines 2 juegos de separadores de 1 5 mm de espesor 6 levas doble soporte de fundici n de gel con base de nivelaci n y el nivel la presa de amortiguaci n Spacer Mate plantilla de alineaci n y Wedge Wonder Gel herramienta de separaci n de las placas SE600X 15 1 Las piezas de repuesto Wonder Wedge Gel Plate separaci n de la herramienta 1 SE1514 Ranurados juntas de goma de silicona 2 SE6008B para la camara de amortiguaci n superior Laminadas juntas de goma de silicona 2 SE6009 para la fundici n de soporte Tamp n de la presa SE6032 Camara de amortiguaci n superior SE6054 para SE600 Chroma Buffer de la camara baja SE6150X para SE600 Chroma Tapa con cables de alta tensi n SE6056X para SE600 Chroma De alta tensi n de seguridad SE6056 HV conjunto de derivaciones Banana del cable rojo
23. de la rueda con una c nula si se usa el gel de siempre y de doble rueda o de la parte inferior si se utiliza un lanzador m ltiple de gel Hoefer vea las instruc ciones que acompa an a la m quina de colada Un gel de apilamiento se vierte entonces sobre el gel de gradiente oo O o 0000 EL Verter un gel de gradiente lineal Ensamble sandwich s en las ruedas de doble gel como se describe en la pagina 9 9 Establecer la soluci n de mon mero trayectoria de flujo Ejecutar una longitud de tubo de vinilo transparente a trav s de una bomba perist ltica Una un extremo del tubo al puerto de salida gradiente fabricante y el otro extremo a una c nula de 20 cm El di metro exterior de la c nula debe ser menor que el espesor del espaciador Coloque la c nula de manera que descansa en la parte inferior del sandwich a medio camino entre los espaciadores Opcional Ajuste la soluci n de acrilamida de mayor porcentaje al 15 w v de sacarosa o 25 v v de glicerol para mejorar estratificaci n Prepare la soluci n de mon mero Calcular el volumen de soluci n de mon mero sea necesario Divida el volumen total a la mitad y la pre paraci n de este volumen tanto de las soluciones de mayor y menor porcentaje de acrilamida 4 Vierta la luz soluci n en la camara de reserva la camara lo mas lejos posible de la toma Abrir la llave de paso entre las c maras de tie
24. de ser usada para operar manter e servicing este produto S usa um estoque de poder que CE marcou ou seguranca registrada por um nacionalmente reconhecido testando laborat rio A tampa de seguran a deve estar em lugar antes de ligar o estoque de poder leva a um estoque de poder Desliga todos controlos de estoque de poder e desconecta os chumbos de poder antes de retirar a tampa de seguran a Circulam s agua ou 50 50 glicol de gua ethylene pelo exchanger de calor se for assim equiparam N o ligue o exchanger de calor a uma torneira de gua nem qualquer fonte de refrigerante onde a press o de gua n o regulado Nunca introduz anticongelante nem qualquer org nico solvente em qualquer parte do instrumento Org nico solvente causar agress o irrepar vel unidade Nao opera com temperaturas de buffer acima do m ximo especificou especificac es t cnicas Superaquecer causar agress o irrepar vel a unidade Viktig Information Swedish om denna utrustning anv nds i ett s tt som inte har specificeras av Hoefer Inc skyddet tillhandah ll vid utrustningen kan skadas Detta instrument formges f r inomhuslaboratorium anv ndning bara Bara medhj lpare och delar godk nde eller levererade vid Hoefer Inc kan anv ndas f r fungera underh lla och servicing denna produkt anv nder bara en kraft tillg ng som r CE markerade eller s kerhet intygade vid en nationellt erk
25. deras 12 SE6003U 2 C maras negro para bridas con agujeros de leva SE6005L Conjuntos de abrazadera 16 cm SE6003U Conjuntos de abrazadera 8 cm SE6403U Las placas de vidrio 18 x 8 cm Las placas de vidrio 2 SE6402 Placa de vidrio divisor de s ndwich con muescas SE6402D 18 x 16 cm Las placas de vidrio 2 SE6102 Placa de vidrio divisor de sandwich con muescas SE6102D elegir el espaciador apropiado y longitud de la placa de su unidad SER11 abrazadera universal SE6003U lanzador basica SE6015 leva e p37 Combs n mero espesor ancho de pozos mm mm cantidad c digo 10 0 75 8 3 SE511 10 75 10 1 00 8 3 SE511 10 1 0 10 1 50 8 3 SE511 10 1 5 12 0 75 7 6 SE511 12 75 12 1 00 7 6 SE511 12 1 0 12 1 50 7 6 SE511 12 1 5 15 0 75 5 7 SE511 15 75 15 1 00 5 7 SE511 15 1 0 15 1 50 5 7 SE511 15 1 5 20 0 75 4 1 SE511 20 75 20 1 00 4 1 SE511 20 1 0 20 1 50 4 1 SE511 20 1 5 28 0 75 2 7 SE511 28 75 28 1 00 27 SE511 28 1 0 28 1 50 2 7 SE511 28 1 5 Peine de profundidad 15 mm todos los demas de 25 mm Peines de preparaci n Estos peines son de 25 mm de profundidad ajustable a 10 o 15 mm n mero espesor ancho mm de pozos prep ref mm prep ref cantidad c digo 1 1 0 75 121 6 d SE511 R 75 1 1 1 121 6 1 SE511 R 1 0 1 1 1 50 121 6 1 SE511 R 1 5 1 2 0 75 113 6 1 SE511 DR 75 1 2 1 113 6 1 SE511 DR 1 0 1 2 1 50 113 6 1 SE511 DR
26. destilada o Prepare la soluci n de mon mero de apilamiento de gel vierta el gel de apilamiento e introducir un peine con un ligero angulo en el sandwich teniendo cuidado de no atrapar el aire debajo de los dientes Permita un minimo de 1 hora para que el gel se polimeriza Preparaci n de la muestra y carga La muestra puede ser cargado ya sea mientras el sandwich esta en la maquina de colada o despu s de la camara de amortiguaci n superior esta unido Al cargar las muestras durante el uso de placas divisorias las muestras deben ser cargados sin la camara de amortiguaci n supe rior en su lugar La cantidad de muestra cargada depende del espe sor del gel la sensibilidad del m todo de detecci n utilizado y la cantidad de muestra se espera en cada banda En un sistema tampon continuo la muestra de proteina debe ser relativamente con centrada porque no se utiliza gel de apilamiento En un sistema de tampon discontinuo la zona en la que cada especie molecular migra se agudiza por el gel de apilamiento de modo que la muestra no necesita ser tan concentrada Preparar los pozos Quite el peine suavemente movi ndola de lado a lado y luego levantandolo hacia arriba para evitar dafios en las paredes del pozo Enjuagar cuidadosamente cada pocillo con agua destilada para eliminar acrilamida no polimerizada y luego drenar invirtiendo el empare dado de gel o lanzador Llene cada pocillo con el tamp n de electrofor
27. e inferior del gel En un gel de 16 cm SE600 croma un 1 5 mm de espesor de Laemmli en gel de SDS que funcionaba a 25 mA gel sin enfriamiento por lo general requiere 5 horas Registre cada carrera Mantenga un registro de la configuraci n de cor riente o voltaje el n mero y el grosor de los geles sistema de amortiguaci n y las lecturas inicial y final de corriente o voltaje para cada carrera para que los resultados pueden ser comparados Los resultados inconsistentes para el mismo sistema y la configuraci n de indicar posibles problemas como la filtraci n de las concentraciones actuales de b fer incorrecto las altas concentraciones de sal o la calidad qu mica inconsistente Comprobar el progreso de la banda despu s de 5 minutos y de nuevo despu s de una hora manteniendo un ojo en la tasa de migraci n del colorante de seguimiento La carrera se completa cuando el colorante de rastreo alcanza la parte inferior del gel Ver el nivel de amor tiguaci n y si es necesario reponer seg n sea necesario para mantener el electrodo superior sumergido Un peque o volumen de tamp n puede filtrarse pasado una placa de muescas o junta o tamp n puede pasar a trav s del gel Despu s de la electroforesis Una vez que el colorante de rastreo alcanza el fondo del gel apague la fuente de alimentaci n desco nectar los cables y retirar la tapa de seguridad el uso de apalancamiento dedo entre la tapa y la parte superio
28. es varios kits se pueden pedir por separado El SE615 Kit de multiple Caster Gel con capacidad para 10 bocadillos de gel individuales y el SE675 Kit de ruedas Gel con capacidad para cuatro sandwiches Vea la rueda de acompafiamiento en gel Manual del usuario para obtener instruc ciones completas Para ejecutar cuatro geles de forma simult nea dos placas accesorias mues cas divisorias y dos pares adicionales de separa dores son obligatorios La figura 2 Sandwich de montaje Inspeccione las placas de vidrio para los apodos Utilice Unicamente las placas unchipped para evitar fugas sujetar caminar placas de vidrio las crestas presi n placa Nota Las placas de vidrio y los separadores debe quedar a ras con los bordes de sujeci n en la parte superior e inferior para un buen sellado Nota No use grasa de silicona o vaselina para sellar el s ndwich Estas sustancias son dif ciles de eliminar y finalmente producir artefactos Construir el emparedado de gel y se insertan en rueda Preparar la m quina de colada y abrazaderas Coloque el nivel de burbuja en el centro de la rueda y ajuste las patas niveladoras Afloje todos los tornillos de fijaci n y hacer espacio para el bocadillo desli zando las placas de presi n hacia los tornillos 9 Construir bocadillos de gel Para cada s ndwich elegir dos la limpieza de las placas de vidrio y los separadores unchipped dos Coloque un plato sobre una su
29. esis ty O Nota Una vez que las muestras se encuentran en los pozos tener cuidado de no sacudir los s ndwiches de forma que las muestras no se derrame o mezclado Preparar la muestra Aumentar la densidad de l quido de muestra con 10 de glicerol o sacarosa A adir un tinte de seguimiento como el rojo fenol azul de bromofenol o Y pironina Para geles de prote nas SDS utilice 2X tamp n de tratamiento para desnaturalizar muestras l quidas y en seco en un tubo de ensayo Para soluciones de prote nas l quidas a adir un volu men igual de tamp n de 2X Para secar las muestras de prote nas a adir vol menes iguales de tamp n de muestra 2X y agua de alta pureza para alcanzar la concentraci n deseada Se calienta el tubo en agua hirviendo durante 90 segundos luego se deja enfriar a temperatura ambi ente Las muestras tratadas se pueden almacenar a 40 a 80 C durante carreras futuras Proteinas de membrana de calor a 60 C durante 20 minutos No conserve la muestra utilizada a 4 C o Sirvieron de base al de la muestra en los pocillos utilizando una microjeringa de punta fina o un gel de carga punta de la pipeta Tabla 1 Volumen de la muestra para el estandar de tama os de peine volumen de la muestra I por la profundidad de 1 mm n mero espesor de peine mm de pozos 0 75 1 0 1 5 10 6 2 8 3 12 4 12 5 8 7 7 1155 15 4 3 5 7 8 6 20 3 1 4 1 6 2 28 2 1 2
30. et quipement est utilis dans une mani re pas sp cifi par Hoefer Inc la protection fourni par l quipement pourrait tre diminu e Cet instrument est con u pour l usage de laboratoire int rieur seulement Seulement les accessoires et les parties ont approuv ou ont fourni par Hoefer Inc pourrait tre utilis pour fonctionner maintenir et entretenir ce produit utilise Seulement une alimentation qui est CET a marqu ou la s curit certifi par un nationalement reconnu essayant le laboratoire Le couvercle de s curit doit tre a sa place avant connecter l alimentation mene a une alimentation Tourner tous contr les d alimentation de et d brancher les avances de pouvoir avant enlever le couvercle de s curit Circuler seulement de l eau ou 50 50 glycol d eau thyl ne par I exchanger de chaleur si si quip Ne pas connecter l lexchanger de chaleur a un robinet d eau ou a la source d agent de refroidissement ou la pression d eau est non r gul e Ne Jamais introduire d antigel ou du dissolvant organique dans n importe quelle partie de l instrument Les dissolvants organiques causeront des dommages irr parables a l unit Ne pas fonctionner avec les temp ratures de tampon au dessus du maximum a sp cifi des sp cifications techniques La surchauffe causera des dommages irr parables a l unit Wichtige Informationen German Wenn diese Ausr stung gewisserma en nich
31. ici n Instale las levas canto apuntando hacia abajo en el buffer de la c mara de los agujeros de la leva Fije el s ndwich en lugar simult neamente girando hacia la derecha una c mara y el otro en sentido contrario un completo de 180 Utilizar una pipeta para llenar cuidadosamente cada ranura por encima de los pocillos de la muestra con tamp n para reducir al m nimo perturbar las muestras A continuaci n vierta 100 ml de tamp n en la c mara dirigiendo el flujo hacia el buffer de la pared lateral Compruebe que no haya fugas de amor tiguamiento alrededor de la junta Buffer de la c mara baja 0 Coloque una barra magn tica magn tico en la c mara de amortiguaci n inferior LBC y coloque la unidad sobre un agitador magn tico Llene la c mara baja con hasta 4 litros de tamp n 9 Bajar el intercambiador de calor en la c mara infe rior el montaje de los puertos en las muescas en el borde El intercambiador de calor debe estar en su lugar para todas las carreras porque el electrodo inferior est integrado en el intercambiador de calor Si no se requiere enfriamiento vaya al paso 3 Opcional Conectar el intercambiador de calor a un circulador termost tico Deslice las abrazaderas de manguera cuatro en total en cada extremo de las dos longitudes de 10 a 12 mm de di metro Tuber a de vinilo o silicona Una un extremo de cada tramo de tuber a a un puerto intercambiador de calor Una los
32. ida solamente cuando el instrumento es la siguiente e utilizarse en lugares de laboratorio e usado como liberado de Hoefer Inc a excepci n de las alteraciones descritas en el manual del usuario y e conectado a otros instrumentos de marcado CE o productos recomendados o aprobados por Hoefer Inc Fig 1 Principales componentes del Chroma Hoefer SE600 v ase la Fig 4 para los componentes de lanzador Incluye pero no se muestran e Gel Sello compuesto 1 4 oz e Spacer Mate alineaci n de la plantilla e Glacas de vidrio 6 e Wedge Wonder placa de separacion de herramientas e Presa de bufer La unidad completa incluye tambi n separadores 4 y peines 2 Necesario pero no se incluyen e Agitador magn tico e Fuente de alimentaci n con un calificaci n minima de 300 V 100 mA constante A o V Opcional Ba o termost tico Nota La secci n de ordenar listas de todos los accesorios y piezas de repuesto cables codificados por color 2 seguridad de la tapa enclavamiento pines c mara amortiguadora superior con electrodo superior intercambiador de calor con el electrodo inferior buffer de la c mara baja Desembalaje e Inventario Quite el envoltorio de los paquetes cuidadosa mente y comparar el contenido con la lista de empaque asegurandose de que todos los elemen tos llegaron Si falta alguna pieza comun quese con su oficina local de ventas Inspeccione
33. ines preparativa y 10 el 12 15 20 y asi formen pozos peines que son 25 mm de profundidad Los 28 pozos y peine las formas que est n a tan s lo 15 mm de profundidad por lo que los pozos no se rompan cuando el peine se retira El volumen de muestra a cabo por cada bien depende del espesor de gel profundi dad del pozo y el n mero de pozos por peine La Tabla 1 muestra los vol menes de muestra de los pozos para todos los peines ver p gina 17 Wonder Gel Wedge Placa herramienta Separaci n Esta herramienta se utiliza para desmontar bocadillos de gel y para comprobar el espacia dor y espesores de peine Manual de instrucciones Gel de procedimientos de fundici n y la electro foresis seguir Se incluyen las instrucciones para geles de poliacrilamida usado con los sistemas de amortiguaci n continuo o discontinuo y geles de gradiente Consulte la pagina 31 de la bibliograffa Preparar el emparedado de gel Las placas de vidrio espaciadores y los con juntos de abrazadera estan dimensionados de modo que el sandwich puede ser facilmente montado alineado para crear la junta necesaria para emitir la primera gel y luego a correr Para obtener los mejores resultados de tener un cui dado especial para alinear todos los componen tes en el montaje sandwiches De uno a cuatro geles 18 x 16 cm se puede montar y ejecutar en el Chroma SE600 Ambos geles prefabricados y geles auto fundido se puede utilizar Para auto cast gel
34. iones de los electrodos a las bananas Conecte los cables codificados por color en las tomas de una fuente de alimentaci n aprobada Conecte el cable rojo a la salida de conector rojo y el negro en el enchufe de salida negro En la mayoria de los siste mas de plomo rojo que esta conectado al electrodo inferior es el nodo y el cable negro conectado al electrodo superior es el c todo Notas importantes de montaje e EF Coria El nivel de amortiguaci n en la c mara de amortiguaci n menor nunca debe llegar a la c mara de amortiguaci n superior mantener por lo menos 2 cm de espacio libre e No llenar la c mara superior o inferior por encima de los niveles recomendados se ilustra en la Figura 8 Quitar tamp n en contacto con los puestos de electrodos e Vierta lentamente tamp n y lejos de las ranuras de la c mara de amortiguaci n superior para evitar molestar a las muestras e Use agua solamente o 50 50 de agua glicol de etileno como refrigerante Nunca utilice un anti congelante comercial o cualquier mezcla a base de alcohol o un da o irreparable al intercambiador de calor va a resultar e No conecte el intercambiador de calor para un grifo de agua o cualquier otra fuente donde la presi n del agua no est regulada Nota SE600 unidad de Chroma utiliza de 18 cm de ancho placas El espesor de gel determina la secci n transversal y el requisito de corriente para constantes carreras act
35. la c mara inferior El refrigerante pasa a trav s de los tubos de vidrio que est n fijadas con arandelas de goma de silicona Los puertos de intercam biador de calor del conector son 13 mm de di metro exterior El intercambiador de calor tiene un m ximo de 0 8 atm sferas encima de la ambiente 12 psig Conecte s lo a las fuentes de refrigerante con una presi n regulada No conectar al grifo de agua Tapa de seguridad El enchufe de banana en el intercambiador de calor se conecta con el cable rojo y el tap n en la c mara de amortiguaci n superior se conecta al cable negro El 4 mm cubierto con c digo de color en el enchufe los cables codificados por color en tomas de la fuente de alimentaci n Participar pasadores de bloqueo antes de bajar los electrodos conectados a los enchufes de pl tano Siempre instale la tapa de seguridad antes de usar Las placas de vidrio El Chroma SE600 tiene capacidad para 18 cm de ancho placas de 16 u 8 cm de largo Placas con muescas divisorias pedir por sepa rado se dividen para formar bocadillos de gel s ndwiches de dos geles de cada uno as hasta cuatro geles se pueden ejecutar al mismo tiempo Abrazaderas Dos pinzas 16 cm se utilizan para asegurar el emparedado de gel El bar de presi n de la mordaza se ajusta con tornillos distribuye la presi n uniformemente Fundici n soporte El soporte de fundici n tiene reunidos bocadil los de gel en posici n vertical
36. la polimerizaci n comienza para evitar la formaci n de un gel de superficie desigual Preparaci n de la muestra Dializar o desalar la muestra e p29 problema posible causa Muestra tefiida recoge Cerca de la parte delantera tamp n Gel de concentraci n Degradaci n remedio Las mol culas no estan lo suficientemente restringido por el tamafio de poro de gel de resoluci n de aumentar la T Las proteinas pueden ser degradadas por proteasas end ge nas utilizar inhibidores de la proteasa durante la etapa de aislamiento Cerca de la parte superior del gel cuando el frente tamp n ha alcanzado la parte inferior Gel de concentraci n Precipitaci n El tama o de los poros del gel es demasiado peque o dis minuir la T de la resoluci n o encima de gel La prote na ha precipitado Se calienta la muestra a una temperatura m s baja 70 C o menos durante 1 2 min En la parte superior e infe rior del gel e p30 Gel de concentraci n El rango de peso molecular de la muestra requiere un gradi ente de concentraci n de acrilamida para resolver la gama completa de tama os de las prote nas problema Resoluci n de la banda pobre posible causa condiciones de funcionamiento remedio Comienza electroforesis tan pronto como la muestra se carga para evitar las especies de bajo peso molecular a partir de la difusi n Llevar a cabo la separaci n en una posici n ma
37. mpo suficiente para desplazar el aire y cierre Verter el pesado soluci n en la c mara de mezcla y colocar una barra de agitaci n en esta c mara Coloque el fabricante de gradiente sobre un agitador magn tico y comenzar agitaci n a una velocidad que se mezcla bien pero no introducir burbujas en la soluci n Mezclar el gradiente y bombear la soluci n en el sand wich Mientras que la soluci n se agita empezar a bom bear desde la c mara de mezcla y abra la llave de paso a la c mara de dep sito Levante la c nula que entre l quido en el s ndwich manteniendo la punta en la superficie del gel Preparar m s geles seg n sea necesario Superponer cada gel con una delgada capa de agua butanol saturado agua o tamp n de gel diluida para evitar la exposici n al oxigeno de gel Lentamente entregar la soluci n de superposici n de una jeringa de vidrio equipado con una aguja de calibre 22 Aplicar la soluci n cerca del espaciador en un lado del emparedado y permitir que fluya a trav s de la superficie sin ayuda o Permitir que los geles para polimerizar durante un minimo de 1 h Despu s de la polimerizaci n se e p15 Nota Con Coomassie Blue es posible detectar 1 g de prote na en una sola banda Con las manchas de plata m s sensibles es posible detectar tan poco como 10 ng de prote na e p16 vierte la superposici n y enjuagar la superficie del gel varias veces con agua
38. n waterkraan of koelmiddelbron niet waar de waterdruk niet geregulariseerd is Stel Nooit antivriesmiddel of organische oplosmiddelen in deel van het instrument voor Organische oplosmiddelen zullen onherstelbare schade aan de eenheid veroorzaken Bedien niet met buffertemperaturen boven het maximum specificeerde technische specificaties Oververhittend zal onherstelbare schade aan de eenheid veroorzaken Important Information English If this equipment is used in a manner not specified by Hoefer Inc the protection provided by the equipment may be impaired This instrument is designed for indoor laboratory use only Only accessories and parts approved or supplied by Hoefer Inc may be used for operating maintaining and servicing this product Only use a power supply that is CE marked or safety certified by a nationally recognized testing laboratory The safety lid must be in place before connecting the power supply leads to a power supply Turn all power supply controls off and disconnect the power leads before removing the safety lid Circulate only water or 50 50 water ethylene glycol through the heat exchanger if so equipped Do not connect the heat exchanger to a water tap or any coolant source where the water pressure is unregulated Never introduce antifreeze or any organic solvent into any part of the instrument Organic solvents will cause irreparable damage to the unit Do not o
39. nte con un peque o giro hasta que se detenga Compruebe que la goma no se pellizca Solucion de problemas problema Las fugas de gel de tipo sandwich mientras fundici n Muestra los pozos da ados o irregular posible causa Componentes sucios o da ados remedio Las placas separadores y la junta debe estar completamente limpia Lavar si es necesario Vuelva a colocar las placas con chip especialmente si est n cascadas cerca de los separadores Compruebe la junta de lanzador para cortes o grietas y reem plazar si es necesario Mis aliados con Verifique la alineaci n de la placa y el separador vuelva a las partes alinear si es necesario El exceso Gire a la c mara s lo en la medida necesaria para crear un de sujeci n sello por lo general 90 150 pero hasta 180 Las burbujas de aire En cada separador aplicar una capa delgada de gel compues to de sello en la parte inferior esquina exterior solamente No utilice grasa de silicona Eliminar las burbujas de aire antes de insertar los peines Deslice peine en soluci n en un ngulo Si el peine se debe quitar a adir m s soluci n de mon mero antes de volver a colocar el peine Polimerizaci n incompleta o retrasada Permitir geles de acrilamida para establecer un m nimo de 1 h Escombros en los pozos Enjuague de gel polimerizado con tamp n de muestra Eliminaci n de peine Quite el peine con un
40. olyacrylamide gel electrophoresis Anal Biochem 87 386 396 1978 Schreier M H Erni B and Stachelin T Initiation of mammalian protein synthesis I Purification and characterization of seven initiation factors J Mol Biol Nov 116 4 727 753 1977 e p32 Shapiro A L and Maizel J V Jr Molecular weight estimation of polypeptides by SDS polyacrylamide gel electrophoresis further data concerning resolving power and general considerations Anal Biochem Jun 29 3 505 514 1969 Schaegger H and Von Jagow G Tricine sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis for the separation of proteins in the range from 1 to 100 kDa Anal Biochem 166 368 379 1987 Weber K and Osborn M The reliability of molecular weight determinators by dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis J Biol Chem 224 4406 4412 1969 Electroforesis bidimensional Adams L D and Gallagher S R Two Dimensional Gel Electrophoresis Using the O Farrell System Current Protocols in Molecular Biology Ausubel E A et al eds OSC pp 10 4 1 10 4 13 1992 Anderson N G Anderson N L and Tollaksen S L Proteins of human urine I Concentration and analysis by two dimensional electrophoresis Clin Chem Jul 25 7 1199 2210 1979 Anderson Leigh and Anderson Norman G High resolution two dimensional electrophoresis of human plasma proteins Proc Natl Acad Sci USA 74 5421 542
41. perate with buffer temperatures above the maximum specified technical specifications Overheating will cause irreparable damage to the unit T rke Tietoa Finnish Jos tata varusteita k ytet n tavassa ei m ritetty Hoefer Inc suojelu ehkaisty varusteille saattaa olla avuton Tama valine suunnitellaan sis laboratoriok yt lle vain Vain lis varusteet ja osat hyv ksyiv t tai toimitti Hoefer Inc oheen voi k ytt k ytt miselle valvoalle ja servicing t m tuote Vain k ytt k ytt j nnitett joka on CE merkitsi tai turvallisuus joka on todistanut aidoksi ohi joka on kansallisesti tunnustettnut testaaminen laboratoriota Turvallisuuskansi t ytyy olla paikallaan kaytt jannitteeseen Kiert kaikki kaytt jannitevalvonnat ja irrottaa valtalyijyt ennen poistaminen turvallisuuskantta Kiert vain vesi tai 50 50 vesi ethylene glycol siin tapauksessa varustetun limm nvaihtimen l pi l yhdist l mm nvaihdinta vesinapautukseen eik j hdytysnestel hteeseen miss vesipaine on unregulated piii Pakkasneste eik orgaaninen liuotin v lineen osassa ei esitele Koskaan Orgaaniset liuottimet aiheuttavat korvaamattoman vahingon yksikk n Ei k yt puskuria yll olevia l mp tiloja enint n m ritetyill teknisill t smennyksill Ylikuumeneminen aiheuttaa korvaamattoman vahingon yksikk n Information Importante French Si c
42. peratura Ajustar la temperatura de la soluci n de gel a un m nimo de Mis aliados con las partes 20 C especialmente para bajos geles T Compruebe que las placas de vidrio espaciadores y las abrazaderas se alinean y encajan perfectamente en la junta de la c mara superior Compruebe que ambas juntas est n centrados y que las crestas de posicionamiento que encajen en las ranuras Componentes sucios o da ados Trayectoria el ctrica a tierra fuera Desigual distribuci n del calor Verifique que el empaque no est da ado o aplastado Reemplace si es necesario Compruebe que la c mara de amortiguaci n superior no est deformado por la exposici n previa a un calor excesivo A adir m s grasa de silicona para sellar los ojales del inter cambiador de calor Compruebe si hay fugas o grietas en el intercambiador de calor Vuelva a colocar arandelas desgastadas Llenar la c mara de amortiguaci n inferior al nivel apropiado para la ejecuci n en los bordes V ase la Fig 8 p gina 21 Usar agitador magn tico y una barra de agitaci n para man tener tamp n que est n bien mezclados El exceso de calor Circular ext refrigerante Disminuya el valor de corriente o voltaje Enfriamiento previo del b fer Ejecutar el gel en la c mara fr a problema Rayas verticales de proteinas Inusualmente lento o rapido de ejecuci n Las bandas estan sesgados o distor sionados posible causa
43. perficie plana coloque la plantilla de alineaci n Spacer Mate en la placa lado ancho en la parte superior de la placa colo car un espaciador largo de cada borde y sentar las segunda placa de vidrio en la parte superior Asegurar el sandwich con abrazaderas Deslice una abrazadera a la vez a lo largo de los lados del emparedado Apriete con los dedos un tor nillo en cada abrazadera fije el sandwich en posici n vertical sobre una superficie plana y aflojar el tor nillo para ajustar la pila Teniendo mucho cuidado en la alineaci n sera asegurar un buen sellado Los dedos apretar todos los tornillos Retire el Spacer Mate SUGERENCIA Utilice la base de lanzamiento a man tener el sandwich durante la alineaci n Retire la junta laminada de la base y en lugar de establecer el sandwich en posici n vertical sobre una superficie plana se pone en la cuna de calidad La figura 3 Asamblea del club sandwich Abrazaderas de banda sea dos espaciadores de hasta 1 5 mm de espesor placas de vidrio en los lados exteriores del sandwich espaciadores placa central con muescas e p10 Club sandwich A 16 cm de largo con muesca central divisor de placas por separado dos pares de bocadillos para duplicar el n mero de geles que se pueden lanzar y correr Montar un s ndwich de la misma manera como un sandwich regular excepto antes de colocar la placa de vidrio superior coloque la placa divisora
44. probando el laboratorio La tapa de la seguridad debe estar en el lugar antes de conectar la alimentaci n lleva a una alimentaci n Apaga todos controles de alimentaci n y desconecta los plomos del poder antes de quitar la tapa de la seguridad Circula s lo agua o 50 50 glicol de agua etileno por el intercambiador de calor si se es el caso equiparon No conecte el intercambiador de calor a un toque de la agua ni cualquier fuente del l quido refrigerante donde la presi n del agua est libre Nunca introduce anticongelante ni alg n solvente org nico en cualquier parte del instrumento Los solventes org nicos causar n da o irreparable a la unidad No opera con temperaturas de b fer encima del m ximo especific especificaciones t cnicas Recalentar causar da o irreparable a la unidad Dulezit Informace Czech Pokud by toto za zen je pou ito zp sobem kter nen podle Hoefer Inc ochrana poskytovan na z klad za zen m e b t naru ena Tento n stroj je ur en pro vnit n pou it v laborato i pouze Pouze p slu enstv a sti schv len nebo poskytnut ch Hoefer Inc mohou b t pou ity pro provoz dr bu a dr b tohoto v robku e zdroj nap jen pou vaj jen e je opat en ozna en m CE osv d ena nebo bezpe nost vnitrost tn uznan mi zku ebn mi laborato Bezpe nosti lid musi b t zavedena p ed p ipojen m nap jec zdroj
45. r del intercambiador de calor Levante hacia arriba para evitar que se doblen las bananas 9 Si el refrigerante est circulando detener el flujo y desconecte los accesorios o tubos Saque el conjunto de buffer de la camara superior Vierta el buffer en un fregadero Instale el ensamblado en la maquina de colada de gel de doble y luego suelte los sandwiches girando y la eliminaci n de las levas o Aflojar las abrazaderas de los bocadillos y quitar Afloje suavemente y luego deslice lejos ambos espa ciadores Utilice la Maravilla Hoefer cu a gel placa herramienta separaci n para separar las placas Levante con cuidado la placa de vidrio con el gel adjunta Manejar el gel con cuidado para evitar da arlo Invertir la placa y la posici n del gel a baja altura sobre la bandeja de tinci n Haga palanca en una de las esquinas del gel fuera de la copa y la deje caer en la bandeja o si el gel es suficientemente gruesa como para manejar levantar y colocar en la bandeja Para evitar salpicaduras manchas o a adir la soluci n de fijaci n a la bandeja despu s de que el gel se transfiere Limpieza de la unidad como se describe en la sec ci n siguiente e p25 Limpieza e No esterilizar en autoclave o calentar cualquier parte por encima de 45 C e No utilice disolventes organicos productos abrasivos soluciones de limpieza fuertes o acidos o bases fuertes para limpiar las camara
46. s e No dejar en remojo la junta laminada Nota Si el tubo de edad esta rajada o quebrada proteger tu mano con guantes gruesos un pedazo de tela o toallas de papel antes de retirar el tubo p26 Cuidado y mantenimiento Inmediatamente despu s de cada uso enjuague las c maras de amortiguaci n superior e infe rior con agua y luego enjuague bien con agua destilada Manejar la c mara de amortiguaci n superior con cuidado para evitar da ar el conec tor banana Limpie las juntas con un detergente suave y enjuague con agua destilada Deje que se seque al aire Limpie las placas de vidrio y los separadores con una soluci n diluida de un limpiador de laboratorio tales como RBS 35 y luego enjuague bien con agua del grifo y agua des tilada Las placas de vidrio tambi n puede ser tratado con pero no se almacenan en solucio nes de cido de limpieza Sustituci n de un intercambiador de calor de tubo de vidrio Retirar el tubo por simult neamente torsi n y desli zando hacia abajo en la medida de lo posible hasta que el extremo superior est libre de la arandela superior Con cuidado el tubo de modo que se desac tive la asamblea a continuaci n levante el tubo del aro inferior 9 Engrase ligeramente la parte exterior de ambos extre mos del tubo de nuevo con grasa de silicona Gire y desliza un extremo del tubo en el ojal inferior Luego deslice el otro extremo en el ojal superior presion ando suaveme
47. s baja de cor riente o tensi n para reducir el calentamiento Joule reactivo de la calidad Use s lo los reactivos de la mas alta calidad Pobre de apilamiento Utilice solamente los geles que estaban reci n preparado Afiadir un gel de apilamiento o aumentar la altura del gel de apilamiento Preparar la superficie Resolviendo gel por prim era vez aclarado con mon mero de apilamiento de gel antes de verter el gel de apilamiento para asegurar la continuidad entre los geles Compruebe los valores de pH de las resoluci n de apilamien to y gel soluciones No valorar en retroceso tampones Polimerizaci n de gel incompleta Permitir gel para polimerizar completamente preparaci n de la muestra Almacenar la muestra en hielo antes de que sea desnatural izada Dializar o desalar la muestra Muestras de calor en tamp n de muestra SDS para no mas de 1 2 minutos a 100 C para mejorar la disociaci n de las subunidades Almacenar en hielo despu s del calentamiento Ajustar el volumen de muestra o de la concentraci n A adir m s mercaptoetanol o ditiotreitol revisar el trata miento de la muestra A adir inhibidores de proteasa tales como PMSF si es nec esario para evitar la degradaci n proteol tica de la muestra Aumentar glicerol o sacarosa para aumentar la densidad de la muestra Almacene las muestras que se congel en al cuotas para evitar repetidas congelaci n descongelaci n Almacen
48. stina para la proteina y la electroforesis de cidos nucleicos bajo desnaturalizaci n com nmente utilizados y las condiciones de no desnaturalizaci n Hasta 28 muestras pueden ser comparados en un gel de losa nica Las aplicaciones incluyen separaciones de pro te nas fraccionamiento de cido nucleico y la separaci n de segunda dimensi n de la electro foresis en 2 D En primer lugar la dimensi n de separaci n de 2 D electroforesis de prote nas se debe realizar en inmovilizados geles de gradi ente de pH Las tiras se centraron se transfieren f cilmente al gel de segunda dimensi n losa para la separaci n de tama o Las placas de gel de 18 cm de ancho por 16 cm de largo Hasta cuatro geles se pueden ejecutar al mismo tiempo si s ndwiches est n empareja dos en el club s ndwich El intercambiador de calor permite el control de la temperatura en el buffer de la c mara baja Especificaciones Gel tama o de la placa 18x 16 cm Gel de tama o 140 16 cmx 16cm Potencia m xima 50 W Tensi n m xima 1000 V Amperaje m ximo 500 mA Temperatura m ximo 45 C Ambiental condicionesde operaci n Para uso en interiores 4 40 C Humedad hasta 80 Altitud hasta 2000 m Categor a de instalaci n Grado de contaminaci n Dimensiones 32 x 29 x 14 cm A x Ax P Certificaciones del producto EN 61010 1 UL 61010A 1 CSA C22 2 1010 1 Certificado CE Esta declaracion de conformidad es val
49. t angegeben durch Hoefer Inc verwendet wird kann der durch die Ausriistung zur Verfigung gestellte Schutz verschlechtert werden Dieses Instrument wird f r den Innenlaborgebrauch nur daftir entworfen Nur Zus tze und Teile genehmigten oder lieferten durch Hoefer Inc kann fiir das Funktionieren das Aufrechterhalten und die Wartung dieses Produktes verwendet werden Verwenden Sie nur eine Energieversorgung die CE gekennzeichnet oder durch ein national anerkanntes Probelaboratorium bescheinigte Sicherheit ist Der Sicherheitsdeckel muss im Platz vor dem AnschlieBen der Energieversorgung sein fiihrt zu einer Energieversorgung Alle Energieversorgungssteuerungen abdrehen und die Macht trennen fiihrt vor dem Entfernen des Sicherheitsdeckels Nur Wasser oder 50 50 Glykol des Wassers Athylens durch den Warmeaustauscher wenn so ausgestattet in Umlauf setzen Verbinden Sie den W rmeaustauscher mit einem Wasserklaps oder jeder Kuhl mittel Quelle nicht wo der Wasserdruck ungeregelt wird F hren Sie nie Frostschutzmittel oder jedes organische L sungsmittel in jeden Teil des Instrumentes ein Organische L sungsmittel werden nicht wiedergutzumachenden Schaden der Einheit verursachen Mit Puffertemperaturen Uber angegebenen technischen Spezifizierungen des Maximums nicht funktionieren Die Uberhitzung wird nicht wiedergutzumachenden Schaden der Einheit verursachen Informazioni Importanti Italian
50. the decommissioning of your equipment Ce symbole indique que les d chets relatifs a l quipement lectrique et lectronique ne doivent pas tre jet s comme les ordures m nag res non tri es et doivent tre collect s s par ment Contactez un repr sentant agr du fabricant pour obtenir des informations sur la mise au rebut de votre quipement Dieses Symbol kennzeichnet elektrische und elektronische Ger te die nicht mit dem gew hnlichen unsortierten Hausm ll entsorgt werden d rfen sondern separat behandelt werden m ssen Bitte nehmen Sie Kontakt mit einem autorisierten Beauftragten des Herstellers auf um Informationen hinsichtlich der Entsorgung Ihres Ger tes zu erhalten Questo simbolo indica che i rifiuti derivanti da apparecchiature elettriche ed elettroniche non devono essere smaltiti come rifiuti municipali indifferenziati e devono invece essere raccolti separatamente Per informazioni relative alle modalit di smantellamento delle apparecchiature fuori uso contattare un rappresentante autorizzato del fabbricante Denna symbol anger att elektriska och elektroniska utrustningar inte f r avyttras som osorterat hush llsavfall och m ste samlas in separat Var god kontakta en auktoriserad tillverkarrepresentant f r information ang ende avyttring av utrustningen e pvii Electroforesis en gel de la Unidad Funcion y descripcion El Hoefer SE600 Chroma vertical unidad losa electroforesis en gel se de
51. todos los componentes de los da os que puedan haber ocurrido mientras la unidad estaba en tr nsito Si alguna parte est da ada p ngase en con tacto de inmediato al transportista Aseg rese de guardar todo el material de embalaje para las reclamaciones por da os o utilizar en caso de ser necesario devolver la unidad Buffer de la c mara baja La c mara de amortiguaci n inferior es trans parente lo que permite el seguimiento visual de proceso de electroforesis La c mara es qu mica mente resistente a los tampones electrofor ticos comunes pero no a los disolventes org nicos o cidos fuertes o alcalinos Las temperaturas superiores a 45 C puede causar la c mara se deforme C mara de amortiguaci n superior La c mara de amortiguaci n superior es qu mi camente resistente a los tampones de electrofore sis comunes pero no a los disolventes org nicos o cidos fuertes o alcalinos El electrodo supe rior c todo corre a lo largo de la cresta central y termina en el conector banana La c mara superior requiere 0 5 0 8 litros de tamp n no llenar m s alta que la parte superior de las cos tillas de pl stico Intercambiador de calor El intercambiador de calor debe estar instalado para cada uso ya que alberga el electrodo infe rior nodo que corre a lo largo de la parte inferior del marco Cuando se conecta a un ba o de circulador el intercambiador de calor regula la temperatura del tamp n en
52. uales La longitud de la placa determina el tiempo de ejecuci n Tabla 2 Sistema de tampon de Laemmli partida directrices punto Gel de espesor 1 5 mm Actual por gel 25 mA corriente constante A partir de tensi n 80 90 V Tensi n final 220 250 V Geles m s gruesas o m s delgada requieren proporcionalmente m s o menos corriente Por ejemplo un gel de 0 75 mm que es la mitad del grosor de un gel de 1 5 mm requiere la mitad como mucho de corriente o mA 12 5 La corriente debe ser multiplicado por el n mero de geles Por ejemplo si dos s ndwiches est n instalados los cuatro geles requieren cuatro veces m s actual La corriente se puede aumentar m s r pidas carreras si se utiliza enfriamiento activo y puede ser disminuido por m s lentas carreras durante la noche A los 25 mA por gel La separaci n de la muestra Electrophoresis parameters for discontinuous polyacrylamide gels Los geles se pueden ejecutar en contextos de tensi n constante de corrientes o constantes Un modo de corriente constante se utiliza tradi cionalmente con un sistema de tamp n discon tinuo de modo que la velocidad de migraci n electrofor tica permanece inalterada a lo largo de la carrera Bajo estas condiciones la tensi n aumenta a medida que los ingresos de ejecuci n Un valor m s bajo en curso se recomienda para una mayor resoluci n El nivel ptimo de corriente se debe determinar emp ricamente
53. ulerer bare vand eller 50 50 vand ethylene glykol gennem varmeveksleren i sa fald udrustet Forbind ikke varmeveksleren til en vandhane eller nogen kolemiddelkilde hvor vandtrykket er unregulated Introducerer Aldrig antifreeze eller noget organisk opl sningsmiddel ind i nogen del af instrumentet Organiske opl sningsmidler vil for rsage uboelig skade til enheden Driver ikke med stodpudetemperaturer O pii over maksimummet specificerede tekniske specifications Overheding vil forarsage uboelig skade til enheden Belangrijke Informatie Dutch Indien deze uitrusting in een manier wordt gebruikt die niet door Hoefer Inc is gespecificeerd de bescherming die door de uitrusting is verzorgd kan worden geschaad Dit instrument is voor binnenlaboratoriumgebruik enkel ontworpen Enkel onderdelen en delen keurden goed of leverden door Hoefer Inc kan voor het bedienen worden gebruikt handhavend en onderhouden van dit product gebruik Enkel een netvoeding die CE is markeerde of veiligheid die door een is gecertificeerd die nationaal is herkend testene laboratorium Het veiligheidsdeksel moet in plaats voor het verbinden van de netvoeding leidt tot een netvoeding zijn Doe alle netvoedingscontroles Uit en koppel los de machtleiding voor het verwijderen van het veiligheidsdeksel Circuleer enkel water of 50 50 water ethyleenglycol door de hitte exchanger zo ja uitrust Verbind de hitte exchanger naar ee
54. y un segundo conjunto de espaciadores en la pila Colo car la muesca de modo que se situar en la parte superior de los geles Es esencial que los separadores y las placas de alinear perfectamente con el fin de sellar Quitar el sandwich e inspeccionar la parte inferior para asegurarse de que los bordes estan alineados al ras para garantizar un sellado completo Ajuste si es necesario Opcional Aplique una capa delgada de compuesto con sello de gel s lo en las superficies de las esqui nas del fondo creado por los separadores y las placas si los sandwiches tienden a tener fugas Colocar la junta laminada en el soporte de colada V ase la Fig 4 con la cara hacia abajo espuma Coloque el conjunto de la abrazadera en el soporte de fundici n tornillo lateral mirando hacia fuera Nota Al conectar las camaras es mas facil para mantener la maquina de colada equilibrada si a su vez tanto hacia el centro de la rueda Fig 4 Componentes y la configuraci n de Caster junta lado espu hacia abajo Inserte una leva en el agujero a cada lado de la bandeja de fundici n con el canto lado corto apuntando hacia arriba Selle el emparedado de gel contra la junta de fundici n girando ambos en la medida de levas segtin sea necesario por lo general 90 150 hasta 180 La acci n de leva presiona las placas hacia abajo en la junta para sellar la parte inferior del sandwich El sello se complete un
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