EnVision™ G|2 System/AP, Rabbit/Mouse (Permanent Red)
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1. 10x11mL Rabbit Mouse LINK Listo para su uso Dextrano unido a anticuerpos secundarios frente a inmunoglobulinas de conejo y de rat n En soluci n tamponada que contiene prote na estabilizante y conservante Vial2 10x11mL AP Enzyme ENHANCER Listo para su uso Pol mero de amplificaci n marcado de fosfatasa alcalina en soluci n tamponada que contiene prote na estabilizante y conservante Vial3 10x11mL Permanent Red Substrate Buffer Soluci n de tamp n sustrato PERMANENT RED Vial 4 1x1 5 mL Permanent Red Chromogen Soluci n de crom geno rojo permanente Material necesario pero no suministrado Pa os absorbentes Agua amoniacal 37 mmol L opcional Diluyente de anticuerpos n de cat logo S0809 o S2022 de Dako Contratinci n hematoxilina como Mayer s Hematoxylin de Dako basada en agua n de cat logo 83309 Cubreobjetos Dako Autostainer instrument opcional Agua destilada o desionizada Epitope Retrieval Solution Etanol 95 y 70 C mara h meda opcional Microscopio aumento de 20 800x Medios de montaje como Dako Glycergel Mounting Medium n de cat logo C0563 Dako Faramount Aqueous Mounting Medium Ready to Use n de cat logo S3025 o medio de montaje no acuoso permanente Dako n de cat logo S3026 Tejidos positivos y negativos para su uso como controles del procedimiento Anticuerpos primarios y reactivos de control negativos Portaobjetos SuperFrost Plus recubiertos con poli L2. Coloque los viales en la gradilla de reactivos de acuerdo con el Reagent Layout Map Tenga cuidado de cargar los reactivos y los vol menes correctos Preste especial atenci n a la carga de los viales con los anticuerpos primarios Purgue el agua y las bombas de tamp n Inicie el programa Despu s de que finalice el programa enjuague los portaobjetos con agua destilada o desionizada Para la contratinci n y el montaje consulte los pasos 5 y 6 de la secci n B Interpretaci n de los resultados El uso del Permanent Red Chromogen causa un producto permanente de reacci n de color rojo en el lugar del ant geno diana que puede visualizarse con un microscopio ptico normal La actividad end gena de la fosfatasa alcalina en algunos tejidos puede causar resultados falso positivos Dicha actividad end gena puede inhibirse mediante el uso de Dual Endogenous Enzyme Block de Dako n de cat logo S2003 o de Levamisole n de cat logo X3021 Levamisole no inhibe la forma intestinal o placentaria de la fosfatasa alcalina y puede no ser til para la tinci n de las muestras que contengan estas isoenzimas Consulte los folletos informativos de los productos S2003 y X3021 para ver las instrucciones de uso Si no hay presente ninguna tinci n inespec fica se reconocer como una tinci n difusa de color rojo en los portaobjetos tratados con el reactivo de control negativo Los n cleos se te ir n de color azul gracias a la contratinci n con hema
3. 1 K5355 ES NAN 2011 01 11 p 2 11 Indicaciones de uso Para uso en diagn stico in vitro Este sistema de visualizaci n est indicado para su uso en inmunocitoqu mica con anticuerpos primarios de rat n o de conejo suministrados por el usuario para la detecci n de ant genos en tejidos fijados con formol e incluidos en parafina cortes congelados o frotis celulares fijados Este sistema puede utilizarse en procedimientos manuales o con instrumentos Dako Autostainer La interpretaci n de los resultados debe realizarla un anatomopat logo cualificado en el contexto de la historia cl nica del paciente y otras pruebas diagn sticas Resumen y explicaci n EnVisionTM G 2 System AP es un kit de visualizaci n EnVisionTM de segunda generaci n Este sistema es til para la detecci n de los ant genos presentes en concentraciones bajas Este sistema no contiene biotina por lo que se reduce significativamente la tinci n inespec fica derivada de la actividad end gena de la avidina biotina Debido a la elevada sensibilidad del sistema las diluciones ptimas de los anticuerpos primarios pueden ser varias veces superiores a las utilizadas con los m todos tradicionales EnVision M ABComplex o LSAB Principios del procedimiento El kit se emplea en un procedimiento de tres pasos en el que el primer paso es la incubaci n de la muestra con un anticuerpo primario de rat n o de conejo diluido adecuadamente y el segundo paso es la incubaci n
4. O Ce EnVisionTM G 2 System AP Rabbit Mouse Permanent Red N de cat logo K5355 32 edici n Para su uso con anticuerpos primarios de conejo y de rat n Para 50 500 ensayos 121859 001 K5355 ES NAN 2011 01 11 p 1 11 ndice P gina Indicaciones ASUS a a dt A SU ADE OTA ad orgs ab pan a 3 Resumen Y explicacion 3 Principios del procedimiento oooooccccccocccocononoccnccconnonnnonnnnononnnnnncnnnnannnnnnnn nn cnn nana rena EEEE EEEE Enne EEEE Enne 3 Re act A 3 Reactivos suministrados kiiin iiare riiai ereraa taena da aare ada anaa aaaea terii iiie des tai 3 Material necesario pero no suministrado aerea cnn nono nnnnnnnncnnn 4 PrecaUCION S ruriri 52080 LA A A AAA A da E aa LA Do png a aa 5 Preparaci n de las muestras 22 2 2 cza quis su siadto loss sadanl ds 6 ProcedimIento2 3 crias EEA ASETA renda dana eluia di 6 A Preparaci nide los r activosS ici a TD Load nana aa iiair ekaa e ie 6 B Procedimiento de tinci n manual erre aeaaaneaerrananaaaaaearananaananaa 6 C Procedimiento de tinci n para instrumentos Dako Autostainer cocccnnnninnconncconcnonnonononnnnonnnnnos 7 Interpretaci n de los resultados area aaa naaaaaarer rara nn rra cane nannnnncn 9 Referencias us rianasa una da asa io da doom da Ns LAS IL6 ASA ed RR E posam aio 6 De Doado Sesi dra 10 Explicaci n de los s mbolos e EEEE AENEA nana ananeneneaaanaaaaananenanaanananaa 10 121859 00
5. a obtener el nombre el paso de la plantilla y el tiempo de incubaci n y el Manual del usuario del Autostainer Instrument correspondiente 121859 001 K5355 ES NAN 2011 01 11 p 8 11 Tabla 1 Modificaciones necesarias de la lista de reactivos Reactivo N de Paso de la plantilla Tiempo de cat logo incubaci n Los anticuerpos primarios no est n todav a en la lista Individual Primary Antibody 30 minutos del Autostainer Anticuerpo primario Rabbit Mouse LINK K5355 Secondary Reagent 30 minutos Reactivo secundario AP Enzyme ENHANCER K5355 Tertiary Reagent 30 minutos Reactivo terciario Substrate Working Solution K5355 Substrate Batch 10 minutos Lote del sustrato Paso 2 Protocolo de tinci n Cargue la plantilla K5355 de los kits de detecci n EnVisionTM G 2 System AP Rabbit Mouse Permanent Red en la PROGRAM STAINING RUN SCREEN Especifique el n mero de portaobjetos de la sesi n y cargue los reactivos con los tiempos de incubaci n de la plantilla La posici n de los portaobjetos se mostrar en la Slide Layout Map Screen y la posici n y el volumen del reactivo que debe cargarse en el Autostainer Instrument se mostrar n en la Reagent Layout Map Screen Consulte tambi n el Manual del usuario Antes de cargar los portaobjetos de acuerdo con la Slides Layout Map Screen se recomienda mojar previamente los portaobjetos durante 5 minutos en el Tamp n de lavado Dako n de cat logo S3006
6. ada Ponga durante 5 minutos los portaobjetos enjuagados en un ba o mar a de agua destilada o desionizada reci n preparado Paso 5 Contratinci n instrucciones v lidas para la hematoxilina Sumerja los portaobjetos en un ba o de hematoxilina La duraci n de la incubaci n depende de la concentraci n de la hematoxilina usada Despu s de la contratinci n con hematoxilina enjuague bien en agua destilada o desionizada Opcional Sumerja los portaobjetos con tejido en un ba o de 37 mmol L de agua amoniacal y enju guelos suavemente en agua destilada o desionizada durante 2 5 minutos El agua de amon aco 37 mmol L se prepara mezclando 2 5 mL de hidr xido am nico a 15 mol L concentrado con 1 litro de agua destilada o desionizada El agua amoniacal de 37 mmol L no utilizada puede almacenarse a temperatura ambiente 20 25 en un frasco bien cerrado durante 12 meses Paso 6 Montaje Si se utilizan medios de montaje acuosos se recomienda utilizar medios como Dako Glycergel M Mounting Medium n de cat logo C0563 o Faramount Aqueous Mounting Medium n de cat logo S3025 Para montajes no acuosos permanentes se recomienda el uso de Permanent Mounting Media de Dako n de cat logo S3026 tras haber dejado secar completamente los portaobjetos al aire C Procedimiento de tinci n para instrumentos Dako Autostainer Todos los reactivos del kit con la excepci n del Vial 4 se suministran con Autostainer Reagent Vials La Sub
7. ambiente 20 a 25 antes de la inmunotinci n De forma similar todas las incubaciones deben realizarse a temperatura ambiente No deje que las muestras se sequen durante el procedimiento de tinci n Las muestras secas pueden causar un aumento de la tinci n inespec fica Paso 1 Programaci n del Autostainer Instrument Antes de la primera aplicaci n del EnVisionTM G 2 System AP en el Autostainer Instrument debe crearse una nueva plantilla Consulte la plantilla abajo indicada y el Manual del usuario del Autostainer correspondiente Plantilla K5355 1 Rinse Buffer 2 Primary Antibody 200 3 Rinse Buffer 4 Secondary Reagent 200 5 Rinse Buffer 6 Auxiliary 200 7 Rinse Buffer 8 Tertiary Reagent 200 9 Rinse Butter 10 Auxiliary 200 11 Rinse Buffer 12 SwtchB 13 Substrate Batch 200 14 Rinse Buffer 15 Swtch 16 Auxiliary 17 Rinse Buffer 18 Auxiliary NOTA El paso Auxiliary Auxiliar debe ajustarse a Rinse Buffer Enjuagar el tamp n en sesiones de tinci n con 10 portaobjetos o menos En el caso de sesiones de tinci n con m s de 10 portaobjetos el paso Auxiliary Auxiliar debe ajustarse a None Ninguno De esta manera se aseguran tiempos de lavado semejantes Antes de cargar los portaobjetos de acuerdo con la PROGRAM STAINING RUN SCREEN deben a adirse a la lista de reactivos los siguientes reactivos Le rogamos que consulte la Tabla 1 par
8. con el reactivo EnVisionTM G 2 Rabbit Mouse LINK del kit Este reactivo es un pol mero de dextrano que tambi n est recubierto de anticuerpos frente a las inmunoglobulinas de conejo y de rat n En el tercer paso se a ade un pol mero de amplificaci n marcado con fosfatasa alcalina La reacci n se visualiza mediante el Permanent Red Chromogen tambi n incluido en este kit Reactivos Reactivos suministrados N de cat logo K5355 50 ensayos Los materiales que se indican a continuaci n son suficientes para realizar 50 ensayos El n mero de los ensayos se basa en el uso de 200 uL de cada reactivo por ensayo Vialt 1x11mL Rabbit Mouse LINK Listo para su uso Dextrano unido a anticuerpos secundarios frente a inmunoglobulinas de conejo y de rat n En soluci n tamponada que contiene prote na estabilizante y conservante Vial2 1x11mL AP Enzyme ENHANCER Listo para su uso Pol mero de amplificaci n marcado de fosfatasa alcalina en soluci n tamponada que contiene prote na estabilizante y conservante 121859 001 K5355 ES NAN 2011 01 11 p 3 11 Vial3 1x11mL Permanent Red Substrate Buffer Soluci n de tamp n sustrato Vial4 1x150 pL Permanent Red Chromogen Soluci n de crom geno rojo permanente N de cat logo K5355 500 ensayos Los materiales que se indican a continuaci n son suficientes para realizar 500 ensayos El n mero de los ensayos se basa en el uso de 200 uL de cada reactivo por ensayo Vialt
9. e pretratamiento deben realizarse antes de utilizar EnVisionTM G 2 System AP con cortes de tejido fijados con formol e incluidos en parafina Se debe eliminar la parafina y rehidratar la muestra Algunas muestras deben someterse al desenmascaramiento del ep topo mediante la recuperaci n del ep topo inducida por calor o digesti n enzim tica Consulte el folleto informativo del anticuerpo primario Dako individual para obtener informaci n espec fica acerca de la preparaci n de las muestras Despu s del desenmascaramiento la muestra debe enjuagarse suavemente con soluci n de tamp n de lavado de un frasco de lavado no dirija el flujo directamente sobre el tejido y colocarse durante 5 minutos en un ba o de tamp n de lavado reci n preparado Todos los reactivos deben equilibrarse a temperatura ambiente 20 a 25 antes de la inmunotinci n De forma similar todas las incubaciones deben realizarse a temperatura ambiente 121859 001 K5355 ES NAN 2011 01 11 p 6 11 No deje que las muestras se sequen durante el procedimiento de tinci n Las muestras secas pueden causar un aumento de la tinci n inespec fica Paso 1 Anticuerpo primario o reactivo de control negativo Elimine el exceso de tamp n de lavado y limpie con cuidado alrededor de la muestra para eliminar cualquier resto de l quido y mantener el reactivo en la zona requerida Aplique 200 uL de anticuerpo primario diluido adecuadamente o de reactivo de control negativo para cubri
10. erencia adecuada de los cortes a los portaobjetos es importante secar el agua de debajo de los cortes antes del proceso de secado en el horno Procedimiento A Preparaci n de los reactivos A 1 Substrate Working Solution Se prepara la soluci n de trabajo de Permanent Red Chromogen mezclando bien 100 partes de Permanent Red Substrate Buffer Vial 3 con 1 parte de Permanent Red Chromogen Vial 4 Por ejemplo mezcle 1 mL de Permanent Red Substrate Buffer Vial 3 con 10 uL de Permanent Red Chromogen Vial 4 Prepare s lo el volumen necesario para el n mero de portaobjetos que se va a te ir Utilice la soluci n en los 30 minutos siguientes La Substrate Working Solution debe prepararse en un Autostainer Reagent Vial cuando se utiliza en el Dako Autostainer instrument A 2 Instrucciones para la diluci n ptima de los anticuerpos primarios El uso de EnVisionTM G 2 System AP requiere la diluci n de los anticuerpos primarios concentrados Dako cuando se aplican Los anticuerpos primarios Dako deber an diluirse habitualmente 4 10 veces m s de las recomendaciones indicadas en los folletos informativos del anticuerpo primario individual cuando se utilizan con EnVisionTM G 2 System AP Esta es tan s lo una orientaci n por lo que el usuario debe determinar la diluci n adecuada Los anticuerpos primarios deben diluirse con Dako Antibody Diluent n de cat logo S0809 o S2022 B Procedimiento de tinci n manual Los siguientes pasos d
11. istencia de un problema con el producto p ngase en contacto con nuestros servicios t cnicos 121859 001 K5355 ES NAN 2011 01 11 p 5 11 Preparaci n de las muestras Para su uso con cortes de tejido fijados con formol e incluidos en parafina y con cortes de tejidos congelados y frotis celulares fijados Pueden utilizarse diferentes agentes de fijaci n para la conservaci n de las muestras Deber n emplearse los m todos habituales de procesamiento de tejidos para la tinci n inmunocitoqu mica con todos los cortes de tejido 2 El grosor adecuado de los cortes de tejido fijados con formol e incluidos en parafina y de los cortes congelados es de 4 6 um La muestra debe montarse en portaobjetos para microscopio Los cortes deben montarse en los portaobjetos de la forma m s plana y estirada que sea posible Si est n demasiado arrugados esto influir negativamente en los resultados de la tinci n NOTA Para su uso en instrumentos Dako Autostainer los portaobjetos no deben superar un ancho de 26 mm con el fin de que ajusten en el soporte para portaobjetos Los cortes incluidos en parafina deben montarse desde un ba o mar a precalentado que contenga agua destilada o desionizada El ba o de agua no deber a contener aditivos como gelatina poli L lisina etc Los cortes deben secarse mediante calor generalmente a una temperatura no superior a 60 durante al menos 60 minutos p ej durante una noche Con el fin de asegurar una adh
12. lisina o Dako Silanized Slides n de cat logo S3003 Jarras o ba os de tinci n 121859 001 K5355 ES NAN 2011 01 11 p 4 11 Cron metro capaz de cronometrar intervalos de 2 40 minutos Frascos de lavado Wash Buffer n de cat logo S3006 de Dako Ba o mar a con tapa Xileno tolueno o sustitutos de xileno Precauciones 1 Para usuarios profesionales 2 Elvial 1 Rabbit Mouse LINK y el vial 2 AP Enzyme ENHANCER contienen material de origen animal Al igual que con cualquier producto de origen biol gico deber n aplicarse los procedimientos de manipulaci n adecuados 3 No utilice el vial 3 Permanent Red Substrate Buffer si se observa un precipitado a temperatura ambiente 4 No exponga el vial 4 Permanent Red Chromogen ni la Substrate Working Solution preparada a luz intensa 5 Elvial 4 Permanent Red Chromogen est etiquetado como T xico R45 Puede causar c ncer S35 Elim nense los residuos del producto y sus recipientes con todas las precauciones posibles S45 En caso de accidente o malestar ac dase inmediatamente al m dico si es posible mu strele la etiqueta S53 Ev tese la exposici n Obt nganse instrucciones especiales antes de su uso Atenci n Este producto contiene una sustancia que no est totalmente probada Esta clasificaci n se ha realizado tomando exclusivamente como base una comparaci n con sustancias con estructuras similares Como regla general los menores de 18 a os
13. no pueden manipular este producto Debe informarse debidamente a los usuarios acerca del procedimiento adecuado de trabajo las propiedades peligrosas del producto y las instrucciones de seguridad necesarias Le rogamos que consulte la hoja de datos de seguridad MSDS para obtener informaci n m s detallada 6 Este producto contiene azida de sodio NaNz un compuesto qu mico altamente t xico en su forma pura A las concentraciones en las que est presente en el producto aunque no se clasifican como peligrosas la azida s dica puede reaccionar con las ca er as de plomo y cobre lo que formar acumulaciones de azidas met licas muy explosivas Una vez desechado el producto deje correr abundante cantidad de agua para evitar acumulaciones de azidas met licas en las ca er as 7 Utilice el equipo de protecci n personal adecuado para evitar el contacto con los ojos y la piel 8 La soluci n no utilizada debe desecharse con arreglo a las normativas locales provinciales y nacionales Almacenamiento Almacene el kit a una temperatura de 2 8 C No utilice el producto despu s de la fecha de caducidad impresa en el kit No se debe intercambiar componentes del kit de lotes diferentes Si los reactivos se almacenan en condiciones diferentes a las especificadas el usuario debe comprobar dichas condiciones 1 Si observa una tinci n inesperada que no puede explicarse por variaciones en los procedimientos del laboratorio y sospecha de la ex
14. r la muestra Inc bela durante 30 1 minutos Enjuague suavemente la muestra con soluci n de tamp n de lavado de un frasco de lavado no dirija el flujo directamente sobre el tejido y col quela durante 5 minutos en un ba o de tamp n de lavado reci n preparado Paso 2 Vial 1 Rabbit Mouse LINK Elimine el exceso de tamp n de lavado y limpie los portaobjetos como se indic anteriormente Aplique 200 uL de Rabbit Mouse LINK para cubrir la muestra Inc bela durante 30 1 minutos Enjuague dos veces la muestra de la forma descrita en el paso 1 Paso 3 Vial 2 AP Enzyme ENHANCER Elimine el exceso de tamp n de lavado y limpie los portaobjetos como se indic anteriormente Aplique 200 uL de AP Enzyme ENHANCER para cubrir la muestra Inc bela durante 30 1 minutos Enjuague dos veces la muestra de la forma descrita en el paso 1 Paso 4 Substrate Working Solution Prepare la Substrate Working Solution de la forma descrita en la secci n A 1 La Substrate Working Solution preparada debe utilizarse en los 30 minutos siguientes Elimine el exceso de l quido golpeando suavemente los portaobjetos y l mpielos de la forma indicada anteriormente Aplique 200 uL de Substrate Working Solution para cubrir la muestra Inc bela durante 5 20 minutos Enjuague suavemente los portaobjetos con agua destilada o desionizada Recoja los residuos que contengan crom geno en un recipiente para desechos peligrosos para eliminarlos de forma adecu
15. strate Working Solution debe prepararse en un Autostainer Reagent Vial cuando se utiliza en el Dako Autostainer instrument EnVisionTM G 2 System AP se ha adaptado para su uso con los instrumentos Dako Autostainer de acuerdo con la plantilla abajo descrita Antes de la tinci n de acuerdo con la plantilla de instrumentos Dako Autostainer le rogamos que lea atentamente el Manual del usuario del Autostainer Instrument correspondiente Antes de iniciar el Autostainer Instrument deben introducirse los portaobjetos y los reactivos de acuerdo con el Slide Layout Map y Reagent Layout Map 121859 001 K5355 ES NAN 2011 01 11 p 7 11 Los siguientes pasos de pretratamiento deben realizarse antes de utilizar EnVisionTM G 2 System AP con cortes de tejido fijados con formol e incluidos en parafina Se debe eliminar la parafina y rehidratar la muestra Algunas muestras deben someterse al desenmascaramiento del ep topo mediante la recuperaci n del ep topo inducida por calor o digesti n enzim tica Consulte el folleto informativo del anticuerpo primario Dako individual para obtener informaci n espec fica acerca de la preparaci n de las muestras Despu s del desenmascaramiento la muestra debe enjuagarse suavemente con soluci n de tamp n de lavado de un frasco de lavado no dirija el flujo directamente sobre el tejido y colocarse durante 5 minutos en un ba o de tamp n de lavado reci n preparado Todos los reactivos deben equilibrarse a temperatura
16. toxilina 121859 001 K5355 ES NAN 2011 01 11 p 9 11 Referencias 1 Clinical Laboratory Improvement Amendments of 1988 Final Rule 57CFR7163 February 28 1992 2 Sheehan DC Hrapchak BB Theory and practice of histotechnology St Louis CV Mosby Company 1980 Explicaci n de los s mbolos EP RET Y C Limitaci n de Fecha de 2 C temperatura caducidad Dispositivo m dico Contiene IVD para diagn stico NY suficiente para Fabricante in vitro lt n gt ensayos Consulte las BA instrucciones LOT C digo del lote T xico de uso 121859 001 K5355 ES NAN 2011 01 11 p 10 11 O Fabricado por Dako Denmark A S Produktionsvej 42 Tel 45 44 85 95 00 DK 2600 Glostrup Fax 45 44 85 95 95 Dinamarca www dako com 121859 001 K5355 ES NAN 2011 01 11 p 11 11
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