Disco reactivo químico general 6 de Piccolo
Contents
1. Piccolo contiene puntos espec ficos para pruebas secas descritos a continuaci n En cada disco se incluye un reactivo seco de muestra de referencia con amortiguador surfactantes excipientes y estabilizadores para utilizar en el c lculo de las concentraciones de alanina aminotransferasa ALT aspartato aminotransferasa AST gamma glutamil transferasa GGT glucosa GLU y nitr geno ureico sangu neo BUN En el disco se incluye una muestra de referencia dedicada para la creatinina CRE Cada disco reactivo contiene tambi n un disolvente formado por surfactantes excipientes y estabilizadores Page 51 of 79 Tabla 1 Reactivos Componente Cantidad Disco Adenosina 5 difosfato 4 ug Adenosina 5 trifosfato ll ug L alanina 874 ug 4 Aminoantipirina HCl 14 ug Ascorbato oxidasa cucurbita ssp 04 U L cido asp rtico 426 ug Creatina amidinohidrolasa actinobacillus spp 2 U Creatinina amidohidrolasa pseudomonas spp 1 U Glucosa 6 fosfato deshidrogenasa levadura 0 05 U cido L glut mico deshidrogenasa h gado bovino 0 01 U cido L glut mico y 3 carboxi 4 nitroanilina sal de amonio 30 ug Glicilglicina 317 ug Hexoquinasa levadura 0 1 U a cetoglutarato sal dis dica 28 Acido a cetoglutarico 72 ug Lactato deshidrogenasa corazon de pollo 0 002 U Lactato deshidrogenasa LDH microbiana 0 03 U Lactato deshidrogenasa staphylococcus epidermidis 0 1 U Acetato de magnesio 7 ug Malato deshidrogenasa MDH coraz n po2. Technicon 13 111 Paramax 13 252 DAX 0 4 14 7 Paramax 0 4 7 5 Beckman 5 312 Paramax 27 1848 Beckman 72 422 Paramax 56 646 Beckman 6 52 Paramax 6 38 Beckman Un sitio utiliz solamente suero en el analizador Piccolo para la correlaci n de gammaglutamil transferasa Resultados de un estudio con usuarios sin preparaci n Se llev a cabo un estudio con usuarios sin preparaci n en el que los participantes nicamente con las instrucciones del an lisis que se les proporcionaban deb an analizar tres discos con muestras aleatorizadas a ciegas Las muestras se prepararon a base de suero con tres niveles de cada uno de los trece analitos ALT AST creatinina GGT glucosa y BUN Los participantes no ten an ninguna formaci n en la realizaci n del an lisis Se reclutaron en total aproximadamente 60 participantes de 3 centros que constitu an una poblaci n suficientemente diversa estudios edad sexo etc a efectos demogr ficos En las tablas siguientes se muestra un resumen del rendimiento de cada analito Alanina aminotransferasa ALT Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3 N 62 62 62 Media 45 4 U I 98 9 U L 184 3 U l VR 3 7 1 7 1 5 Intervalo observado 42 53 96 103 175 191 Porcentaje de 98 4 100 100 resultados en el 61 62 62 62 62 62 intervalo 15 0 95 IC 91 3 a 100 95 IC 94 2 a 100 95 IC 94 2 a 100 F 2 E bt 4 Este porcentaje est basado en el supuesto de
3. creatina end gena de los c lculos la concentraci n de creatinina es proporcional a la intensidad del color rojo producido El criterio de valoraci n del fin de la reacci n se mide como la diferencia en la absorbancia entre 550 nm y 630 nm eGFR calculada La creatinina s rica se mide de forma rutinaria como indicador de la funci n renal Debido a que la edad el sexo y la raza influyen en las concentraciones de creatinina no es posible detectar la nefropat a cr nica NC tan solo mediante la creatinina s rica As pues el National Kidney Disease Education Program Programa Nacional de Educaci n sobre la Nefropat a recomienda encarecidamente que los laboratorios informen de forma rutinaria de la tasa de filtraci n glomerular estimada eGFR cuando se mida la creatinina s rica en los pacientes mayores de 18 a os La comunicaci n de forma rutinaria de la eGFR junto con todas las determinaciones de creatinina s rica permite a los laboratorios ayudar a identificar a los individuos con funci n renal reducida y contribuye a facilitar la detecci n de la NC Los valores calculados de la eGFR lt 60 mL min generalmente est n asociados con un mayor riesgo de resultados adversos de la NC Piccolo calcula la eGFR usando la edad el sexo y la raza del paciente El m todo de Piccolo para la creatinina es comparable con el m todo de referencia para la creatinina IDMS de forma que se puede utilizar la siguiente forma de la ecuaci n MDRD para e
4. fueron realizadas mediante m todos de reducci n del cobre como Folin Wu y Somogyi Nelson La falta de especificidad en las t cnicas de reducci n del cobre llev al desarrollo de procedimientos cuantitativos con las enzimas hexoquinasa y glucosa oxidasa La prueba de glucosa incorporada en el disco reactivo qu mico general 6 Piccolo es una versi n modificada del m todo de la hexoquinasa que ha sido propuesto como la base del m todo de referencia de glucosa La reacci n de glucosa con adenosina trifosfato ATP catalizada por la hexoquinasa HK produce glucosa 6 fosfato G 6 P y adenosina difosfato ADP La glucosa 6 fosfato deshidrogenasa G 6 PDH cataliza la reacci n de G 6 P en 6 fosfogluconato y la reducci n de nicotinamida adenina dinucle tido NAD a NADH Hexoquinasa Glucosa ATP Glucosa 6 fosfato ADP G 6 PDH G 6 P NAD _ 6 fosfogluconato NADH La absorbencia se mide bicromaticamente a 340 nm y 850 nm La produccion de NADH es directamente proporcional a la cantidad de glucosa en la muestra Page 50 of 79 Nitr geno ureico sangu neo BUN La urea puede ser medida tanto directa como indirectamente La reacci n de diacetil monoxima el nico m todo directo para medir la urea es la usada m s com nmente pero emplea reactivos peligrosos Los m todos indirectos miden el amon aco creado a partir de la urea el u
5. que es imposible distinguir correctamente entre valores normales y anormales cuando el error es mayor de una cuarta parte de intervalo normal Se utiliz el intervalo 10 UNA 47 UN Aspartato aminotransferasa AST Page 60 of 79 Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3 N 62 62 62 Media 56 0 120 4 276 3 VR 2 4 1 1 1 0 Intervalo observado 54 60 117 124 266 285 Porcentaje de 100 100 100 resultados en el 62 62 62 62 62 62 intervalo 15 0 95 IC 94 2 a 100 95 IC 94 2 a 100 95 IC 94 2 a 100 Creatinina CRE intervalo 15 0 95 IC 84 3 a 98 2 95 IC 94 2 a 100 Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3 N 62 62 62 Media 0 89 2 07 6 89 VR 11 0 5 0 1 6 Intervalo observado 0 7 1 2 1 8 2 3 6 5 7 2 Porcentaje de 93 6 100 100 resultados en el 58 62 62 62 62 62 95 IC 94 2 a 100 Gamma glutamiltransferasa GGT intervalo 15 0 95 IC 94 2 a 100 95 IC 94 2 a 100 Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3 N 62 62 62 Media 35 0 U I 86 2 U I 131 3 U I VR 2 8 1 5 1 5 Intervalo observado 33 38 83 90 123 135 Porcentaje de 100 100 100 resultados en el 62 62 62 62 62 62 95 IC 94 2 a 100 intervalo 10 4 95 IC 94 2 a 100 95 IC 94 2 a 100 Glucosa GLU Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3 N 62 62 62 Media 95 2 130 3 365 8 VR 1 1 1 0 0 8 Intervalo observado
6. todo de referencia actual de la Federaci n Internacional de Qu mica Cl nica IFCC utiliza la t cnica de Karmen Bergmeyer de acoplamiento de malato deshidrogenasa MDH y nicotinamida dinucle tido reducida NADH en la detecci n de AST en suero Se agrega lactato deshidrogenasa LDH a la reacci n para reducir la interferencia causada por el piruvato end geno La AST cataliza la reacci n de L aspartato y a cetoglutarato en oxaloacetato y L glutamato El oxaloacetato se convierte en malato y NADH se oxida a NAD por el catalizador MDH AST L aspartato o cetoglutarato Oxaloacetato L glutamato MDH Oxaloacetato NADH Malato NAD El cambio en el indice de absorbancia a 340 nm 405 nm debido a la conversi n de NADH a NAD es directamente proporcional a la cantidad de AST contenida en la muestra Creatinina CRE El m todo Jaffe presentado en 1886 sigue siendo el m todo usado con mayor frecuencia para la determinaci n de los niveles de creatinina en la sangre El m todo de referencia actual combina el uso de tierra de fuller floridina con la t cnica de Jaffe para aumentar la especificidad de la reacci n Se desarrollaron m todos enzim ticos que son m s espec ficos para la creatinina que las distintas modificaciones de la t cnica de Jaffe Los m todos que utilizan la enzima creatinina amidohidrolasa eliminan los problemas de la interferencia del i n am
7. 62 0 65 pueden dar resultados falsos Las muestras con un hematocrito elevado pueden ser analizadas como hemolizadas Estas muestras pueden ser centrifugadas para obtener plasma y luego realizar la prueba con un nuevo disco reactivo Todo resultado para una prueba particular que supere los valores del an lisis deber analizarse por otro m todo de prueba homologada o ser enviado a un laboratorio de referencia No diluya la muestra ni vuelva a analizarla en el analizador qu mico sangu neo Piccolo o el analizador qu mico Piccolo xpress Advertencia Pruebas exhaustivas del sistema qu mico sangu neo Piccolo o el analizador qu mico Piccolo xpress han demostrado que en casos muy raros la muestra aplicada al disco reactivo podr a no fluir con facilidad a la c mara de la muestra Debido al flujo irregular puede analizarse una cantidad inadecuada de muestra y los resultados obtenidos pueden quedar fuera de los valores de referencia La muestra puede volverse a analizar con un nuevo disco reactivo Interferencia Se probaron sustancias como factores de interferencia con los analitos Se prepararon mezclas de suero humano La concentraci n a la cual se prob cada interferente potencial estuvo basada en los niveles de prueba en NCCLS EP7 P Efectos de las sustancias end genas Los factores de interferencia fisiol gicos hem lisis ictericia y lipidemia provocan cambios en las concentraciones analizadas de algunos analitos Los ndices de la
8. 65 DE 1 06 1 18 VR 1 6 1 8 Correlaci n Las muestras de suero y de sangre entera heparinizadas de los pacientes se extrajeron de dos sitios Las muestras de sangre entera se analizaron con el analizador qu mico sangu neo de Piccolo en los sitios de campo y las muestras s ricas se analizaron mediante m todos de comparaci n En los dos casos se utilizaron los resultados de las pruebas de las muestras s ricas con Piccolo y stos fueron indicados convenientemente en la tabla En algunos casos se usaron muestras muy y poco enriquecidas para cubrir el intervalo din mico Todas las muestras fueron probadas en singlicato el mismo d a En la tabla 7 se muestran las estad sticas de correlaci n representativas Page 59 of 79 Tabla 7 Correlaci n del analizador qu mico sangu neo Piccolo con uno o m s m todos comparativos Coeficiente de correlaci n f Alanina 0 981 aminotransferasa 0 985 UN i Aspartato 0 93 aminotransferasa LO UA Creatinina 0 993 mg dl 0 987 Gamma glutamil 1 0 transferasa 1 0 UA i 0 987 Glucosa mg dl 0 997 Nitr geno ureico 0 964 sanguineo mg dl 0 983 Pendiente Intercepci n VER N 0 905 1 3 3 21 86 0 946 2 5 2 84 67 0 87 5 3 2 76 159 0 97 3 0 1 9 46 0 926 0 0 0 15 260 0 866 0 1 0 16 107 0 98 0 4 3 29 135 1 60 3 1 18 57 49 1 009 2 8 3 89 251 0 943 1 2 4 69 91 0 923 0 5 1 08 251 0 946 0 0 0 66 92 Limites de M todo de la muestra comparaci n 10 174 Paramax 10 174
9. 93 98 125 133 351 373 Porcentaje de 100 100 100 resultados en el 62 62 62 62 62 62 95 IC 94 2 a 100 Se consideraron l mites de 65 mg dl 99 mg dl Nitr geno ureico sangu neo BUN Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3 N 62 62 62 Media 15 1 41 0 72 2 VR 2 3 25 1 8 Intervalo observado 14 16 37 43 68 75 Porcentaje de 100 100 100 resultados en el 62 62 62 62 62 62 intervalo 15 0 95 IC 94 2 a 100 95 IC 94 2 a 100 95 IC 94 2 a 100 13 Bibliografia 1 Tonhazy NE NG White WW Umbreit A rapid method for the estimation of the glutamic aspartic transaminase in tissues and its application to radiation sickness Arch Biochem 1950 28 36 42 2 Reitman S Frankel S A colorimetric method for the determination of serum glutamic oxalacetic and glutamic pyruvic transaminases Am J Clin Pathol 1957 28 56 63 3 Murray RL Alanine aminotransferase En Clinical Chemistry Theory Analysis and Correlation 2nd ed Kaplan LA Pesce AJ eds St Louis The C V Mosby Company 1989 895 898 4 Wr blewski F LaDue JS Serum glutamic pyruvic transminase in cardiac and hepatic disease Proc Soc Exp Biol Med 1956 91 569 571 5 Bergmeyer HU Horder M IFCC methods for the measurement of catalytic concentration of enzymes Part 3 IFCC method for alanine aminotransferase J Clin Chem Clin Biochem 1980 18 521 534 6 Karmen A A note on the spectrophotometric assay o
10. Disco reactivo qu mico general 6 de Piccolo C Para uso diagn stico in vitro y uso profesional solamente Servicio t cnico y al cliente 800 822 2947 Exoneraci n de la CLIA Usar nicamente sangre entera tratada con heparina litio Complejidad moderada Usar sangre entera tratada con heparina litio plasma tratado con heparina litio o suero Diciembre de 2009 PN 400 7083 Rev K O 1997 Abaxis Inc Union City CA 94587 1 Indicaciones El disco reactivo qu mico general 6 de Piccolo usado con el analizador qu mico sangu neo de Piccolo o el analizador qu mico Piccolo xpress se ha dise ado para proporcionar determinaciones cuantitativas in vitro de alanina aminotransferasa ALT aspartato aminotransferasa AST creatinina gamma glutamiltransferasa GGT glucosa y nitr geno ureico sangu neo BUN en sangre entera heparinizada plasma heparinizado o suero Los an lisis de este panel est n exonerados seg n los requisitos de CLIA 88 Si un laboratorio modificara las instrucciones del sistema de an lisis los an lisis se considerarian de alta complejidad y quedar an sujetos a todos los requisitos de la CLIA En los laboratorios exonerados seg n la CLIA s lo puede analizarse sangre entera tratada con heparina litio En laboratorios de complejidad moderada pueden utilizarse sangre entera tratada con heparina litio plasma tratado con heparina litio o suero Se necesita un certificado de exoneraci n de la CLIA
11. approved guideline second edition NCCLS document H18 A2 Wayne PA NCCLS 1999 Overfield CV Savory J Heintges MG Glycolysis a re evaluation of the effect on blood glucose Clin Chim Acta 1972 39 35 40 Rehak NN Chiang BT Storage of whole blood effect of temperature on the measured concentration of analytes in serum Clin Chem 1988 34 2111 2114 National Committee for Clinical Laboratory Standards Interference testing in clinical chemistry proposed guideline NCCLS Publication EP7 P Wayne PA NCCLS 1986 Young DS Effects of drugs on clinical laboratory tests 3rd ed Washington DC AACC Press 1990 Page 62 of 79 13 38 39 40 41 42 Bibliograf a cont Benet LZ Williams RL Design and optimization of dosage regimens pharmacokinetic data En Goodman and Gilman s The Pharmacological Basis of Therapeutics 8th ed Gilman AG et al eds New York McGraw Hill Inc 1990 1650 1735 Young DS Effects of drugs on clinical laboratory tests 1991 suplemento a la tercera edici n Washington DC AACC Press 1991 Moss DW Henderson AR Enzymes In Tietz Textbook of Clinical Chemistry 2nd ed Burtis CA Ashwood ER eds Philadelphia W B Saunders Company 1994 735 896 Painter PC Cope JY Smith JL Appendix In Tietz Textbook of Clinical Chemistry 2nd ed Burtis CA Ashwood ER eds Philadelphia W B Saunders Company 1994 2161 2217 National Committee for Clinical Laboratory Standards Eval
12. diante tres m todos Dos de estos m todos la t cnica de acoplamiento colorim trico por dinitrofenilhidracina y la prueba enzim tica fluorescente se usan muy raramente La t cnica m s com n para la determinaci n de las concentraciones de ALT en suero es un m todo enzim tico basado en el trabajo de Wr blewski y LaDue La Federaci n Internacional de Qu mica Cl nica IFCC ha propuesto como m todo recomendado un procedimiento Wr blewski y LaDue modificado El m todo desarrollado para ser usado con los analizadores de Piccolo es una modificaci n del procedimiento recomendado por la IFCC En esta reacci n la ALT cataliza la transferencia de un grupo amino de la L alanina al o cetoglutarato para Page 48 of 79 formar L glutamato y piruvato La lactato deshidrogenasa cataliza la conversi n de piruvato a lactato Al mismo tiempo la NADH se oxida a NAD como se observa en el esquema de la siguiente reacci n ALT L Alanina a cetoglutarato gt L Glutamato piruvato LDH Piruvato NADH H gt Lactato NAD El ndice de cambio de la diferencia de absorbancia entre 340 nm y 405 nm se debe a la conversi n de NADH en NAD y es directamente proporcional a la cantidad de ALT en la muestra Aspartato aminotransferasa AST La prueba de la aspartato aminotransferasa AST se basa en el m todo de velocidad de Karmen de acuerdo con la modificaci n de Bergmeyer El m
13. e las pruebas de control se hagan conforme a las recomendaciones federales estatales y locales 9 Resultados El analizador qu mico de sangre Piccolo o el analizador qu mico Piccolo xpress calcula e imprime autom ticamente las concentraciones de analitos en la muestra Los detalles de los c lculos del criterio de valoraci n y velocidad de la reacci n se encuentran en el Manual del usuario del analizador qu mico en cuesti n En el Manual del usuario se detalla tambi n la interpretaci n de los resultados los cuales se imprimen en tarjetas de resultados proporcionadas por Abaxis La parte posterior de las tarjetas de resultados es adhesiva para facilitar su colocaci n en los archivos del paciente 10 Limitaciones del procedimiento Las limitaciones generales del procedimiento se detallan en el Manual del operador del analizador qu mico de sangre Piccolo o el analizador qu mico Piccolo xpress e El nico anticoagulante recomendado para uso con el sistema qu mico de sangre Piccolo o el sistema qu mico Piccolo xpress es heparina litio No utilizar heparina s dica Page 54 of 79 Abaxis realiz estudios que demuestran que EDTA fluoruro oxalato y cualquier anticoagulante que contenga iones de amonio interferir n al menos con un producto qu mico contenido en el disco reactivo qu mico general 6 de Piccolo Las muestras con hematocritos que superen el 62 65 del volumen concentrado de eritrocitos una fracci n de volumen de 0
14. ealizaron estudios de precisi n con las recomendaciones NCCLS EP5 T2 Los resultados intraseriales y de precisi n total se determinan evaluando dos niveles de material testigo Se realizaron los controles por duplicado dos veces durante 20 d as a lo largo de un per odo de cuatro semanas Los resultados de los estudios de precisi n se muestran en la Tabla 6 Tabla 6 Precisi n N 80 Analito Intraserial Total Alanina aminotransferasa U l Nivel de referencia 1 Media 21 21 DE 2 76 2 79 VR 13 4 13 5 Nivel de referencia 2 Media 52 52 DE 2 70 3 25 VR 5 2 6 2 Aspartato aminotransferasa U l Nivel de referencia 1 Media 47 49 DE 0 98 0 92 VR 2 1 1 9 Nivel de referencia 2 Media 145 147 DE 1 83 1 70 VR 1 3 1 2 Page 58 of 79 Tabla 6 precisi n N 80 cont Analito Intraserial Total Creatinina mg dl Nivel de referencia 1 Media 1 1 1 1 DE 0 14 0 14 VR 12 5 13 1 Nivel de referencia 2 Media 5 2 5 2 DE 0 23 0 27 VR 4 4 5 2 Gamma glutamiltransferasa U I Nivel de referencia 1 Media 25 25 DE 0 59 0 74 VR 2 34 2 94 Nivel de referencia 2 Media 106 106 DE 1 52 2 29 VR 1 43 2 15 Glucosa mg dl Nivel de referencia 1 Media 66 66 DE 0 76 1 03 VR 1 1 1 6 Nivel de referencia 2 Media 278 278 DE 2 47 3 84 VR 0 9 1 4 Nitr geno ureico sangu neo mg dl Nivel de referencia 1 Media 19 19 DE 0 35 0 40 VR 1 9 2 1 Nivel de referencia 2 Media 65
15. el tiempo transcurrido desde que el paciente ingiri alimentos y el tipo de muestra obtenida de l Para determinar los resultados de glucosa con precisi n deben obtenerse muestras de un paciente que haya ayunado por lo menos durante 12 horas Las concentraciones de glucosa disminuyen aproximadamente 5 12 mg dl por hora en muestras no centrifugadas almacenadas a temperatura ambiente e Larefrigeraci n de muestras de sangre entera puede provocar cambios significativos en las concentraciones de aspartato aminotransferasa creatinina y glucosa La muestra puede separarse en plasma y suero as como almacenarse en tubos de ensayo con tapa a 2 8 C 36 46 F si no se analiza en un plazo de 60 minutos e Para las muestras de sangre o plasma use s lo tubos de recolecci n de muestras tratados con heparina litio tap n verde Para las muestras de suero use tubos para obtenci n de muestras sin aditivo tap n rojo o tubos separadores de suero tap n rojo o rojo negro e Comience la prueba en los 10 minutos siguientes a la transferencia de la muestra al disco reactivo 8 Procedimiento Materiales suministrados e Un disco reactivo qu mico general 6 de Piccolo PN 400 1006 una caja de discos PN 400 0006 Materiales necesarios pero no suministrados e Analizador qu mico sangu neo de Piccolo o analizador qu mico Piccolo xpress e Con cada analizador qu mico de sangre Piccolo o analizador qu mico Piccolo xpress se suministran pipeta
16. f glutamic oxalacetic transaminase in human blood serum J Clin Invest 1955 34 131 133 Page 61 of 79 13 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 21 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 Bibliografia cont Bergmeyer HU y otros Provisional recommendations on IFCC methods for the measurement of catalytic concentrations of enzymes Part 2 IFCC method for aspartate aminotransferase Clin Chem 1977 23 887 899 Bergmeyer HU Herder M Moss DW Provisional recommendations on IFCC methods for the measurement of catalytic concentrations of enzymes Part 2 Revised IFCC method for aspartate aminotransferase Clin Chem 1978 24 720 721 Knoll VE Stamm D Spezifische kreatininbest immung im serum Z Klin Chem Klin Biochem 1970 8 582 587 Haeckel R Simplified determinations of the true creatinine concentration in serum and urine J Clin Chem Clin Biochem 1980 18 385 394 Moss GA Bondar RJL Buzzelli DM Kinetic enzymatic method for determining serum creatinine Clin Chem 1975 21 1422 1426 Jaynes PK Feld RD Johnson GF An enzymic reaction rate assay for serum creatinine with a centrifugal analyzer Clin Chem 1982 28 114 117 Fossati P Prencipe L and Berti G Enzymic creatinine assay a new colorimetric method based on hydrogen peroxide measurement Clin Chem 1983 29 1494 1496 Whelton A Watson AJ Rock RC Nitro
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18. io de Piccolo xpress El rendimiento del analizador qu mico sangu neo Piccolo o del analizador qu mico Piccolo xpress puede verificarse por medio de controles P ngase en contacto con el Servicio de asistencia t cnica de Abaxis para solicitar una lista de los materiales de control de calidad homologados con los l mites de aceptaci n Otros controles basados en plasma o suero humanos pueden no ser compatibles Los materiales de control de calidad deben almacenarse conforme a las instrucciones del prospecto incluido con los controles Si los controles dan resultados fuera de los l mites repita una vez Si siguen fuera de los l mites llame al servicio de asistencia t cnica Si los controles incumplen los l mites de la etiqueta no utilice sus resultados Consulte el Manual del usuario de Piccolo o Piccolo xpress para obtener informaci n m s detallada sobre la realizaci n el registro la interpretaci n y la extrapolaci n de los resultados de control Laboratorios exonerados Abaxis recomienda las pruebas de control de la siguiente manera e Al menos cada 30 d as e Siempre que hayan cambiado las condiciones de laboratorio de manera significativa por ejemplo traslado del Piccolo a otro lugar o cambios en el control de temperatura e Cuando se indique la formaci n o nueva formaci n del personal e Con cada lote nuevo an lisis exonerados por CLIA en laboratorios en estado exonerado Laboratorios no exonerados Abaxis recomienda qu
19. l c lculo de la eGFR GFR mL min 1 73 m 175 x Sa x edad x 0 742 si es mujer x 1 212 si es afroamericano Gamma glutamiltransferasa GGT Los primeros m todos cuantitativos desarrollados para medir la gamma glutamiltransferasa GGT precisaban una segunda reacci n para formar un colorante azoico que se combinaba con un crom foro El cambio a L y glutamil p nitroanilida como el sustrato en la reacci n elimin el paso de formaci n del colorante Debido a la pobre solubilidad y estabilidad de L y glutamil p nitroanilida este procedimiento fue modificado para usar el sustrato L y glutamil 3 carboxi 4 nitroanilida El m todo GGT recomendado por la Federaci n Internacional de Qu mica Cl nica IFCC se basaba en el ltimo sustrato con gliciclicina como el otro sustrato Abaxis modific el m todo IFCC para que reaccione a 37 C El agregado de una muestra con gamma glutamil transferasa a los sustratos L y glutamil 3 carboxi 4 nitroanilida y glicilglicina gli gli causa la formaci n de L y glutamil glicilglicina glu gli gli y 3 carboxi 4 nitroanilina GGT L y glutamil 3 carboxi 4 nitroanilida Gli gli gt Glu gli gli 3 carboxi 4 nitroanilina La absorbancia de este indice de reacci n se mide a 405 nm La producci n de 3 carboxi 4 nitroanilina es directamente proporcional a la actividad de GGT en la muestra Glucosa GLU Las primeras mediciones de la concentraci n de glucosa
20. lo o el analizador qu mico Piccolo xpress Indicaciones de inestabilidad deterioro del disco reactivo Una bolsa desgarrada o da ada puede hacer que el rotor sin uso entre en contacto con la humedad lo que puede afectar el rendimiento del reactivo de manera negativa No utilice un rotor de una bolsa da ada 6 Instrumento Consulte el Manual del usuario del analizador qu mico sangu neo de Piccolo o el analizador qu mico Piccolo xpress para obtener informaci n completa acerca del uso del analizador 7 Obtenci n y preparaci n de las muestras En la secci n Obtenci n de muestras del manual del operador del analizador qu mico sangu neo de Piccolo o el analizador qu mico Piccolo xpress se describen las t cnicas para la obtenci n de las muestras e El tama o m nimo de muestra requerido es 100 ul de sangre entera heparinizada plasma heparinizado suero o material de control La c mara de muestra del disco reactivo puede contener hasta 120 ul de muestra e Las muestras de sangre entera obtenidas por venopunci n deben ser homogeneizadas antes de transferir una muestra al disco reactivo Invierta suavemente el tubo de recolecci n varias veces antes de transferir la muestra No agite el tubo para obtenci n de muestras esto puede causar hem lisis e Las muestras de sangre entera obtenidas por venopunci n se deben analizar en los 60 minutos posteriores a la extracci n Las concentraciones de glucosa se ven afectadas por
21. muestra son impresos en la base de cada tarjeta de resultados para informar al usuario sobre los niveles de factores de interferencia presentes en cada muestra El sistema qu mico sangu neo Piccolo o el analizador qu mico Piccolo xpress suprime cualquier resultado que sea afectado por m s del 10 de interferencia por hem lisis lipidemia o ictericia En lugar del resultado la tarjeta tendr impreso HEM LIP o ICT respectivamente P ngase en contacto con el Servicio T cnico de Abaxis para obtener informaci n acerca de los niveles m ximos de sustancias end genas Efectos de la sustancias ex genas y terap uticas Se seleccionaron treinta y cinco sustancias ex genas y terap uticas como interferentes potenciales para los m todos de prueba de Abaxis sobre la base de las recomendaciones de Young La interferencia significativa se define como una desviaci n gt 10 en el resultado para una muestra dentro de los valores normales Las mezclas de suero humano fueron enriquecidas con una concentraci n conocida de los f rmacos o qu micos y posteriormente fueron analizadas Page 55 of 79 Tabla 2 Sustancias terap uticas o ex genas evaluadas Paracetamol Acetoacetato cido acetilsalic lico Ampicilina cido asc rbico Cafe na Cloruro de calcio Cefalotina Keflin Cloranfenicol Cimetidina L dopa Dopamina Epinefrina Eritromicina Glutationa Ibuprofeno Isoniacida a cetoglutarato Cetoprofen Meticilina Me
22. nes Unidades SI Alanina aminotransferasa ALT 5 2000 U l 5 2000 U I Aspartato aminotransferasa AST 5 2000 U l 5 2000 U 1 Creatinina CRE 0 2 20 mg dl 18 1768 umol Gamma glutamiltransferasa GGT 5 3000 U I 5 3000 U I Glucosa GLU 10 700 mg dl 0 56 38 9 mmol l Nitr geno ureico sangu neo BUN 2 180 mg dl 0 7 64 3 mmol urea l Si la concentraci n del analito es superior al intervalo de medici n intervalo din mico pero inferior al intervalo del sistema en la tarjeta impresa se indicar n un signo gt en el l mite superior y un asterisco detr s del n mero por ejemplo ALT gt 2000 UAL Si es inferior al intervalo din mico se imprimir lt con un asterisco por ejemplo ALT lt 5 U l Para valores que tengan un valor enormemente m s alto que el intervalo de medici n intervalo del sistema se imprimir en lugar del resultado Cada vez que aparezca en la tarjeta impresa recoja una muestra nueva y realice de nuevo la prueba Si los resultados de la segunda muestra se vuelven a suprimir p ngase en contacto con el servicio de atenci n al cliente de Abaxis Sensibilidad l mites de detecci n El l mite inferior del intervalo informable din mico para cada analito es alanina aminotransferasa 5 U l aspartato aminotransferasa 5 U l creatinina 0 2 mg dl 18 umol l gamma glutamil transferasa 5 U l glucosa 10 mg dl 0 56 mmol l y nitr geno ureico 2 mg dl 0 7 mmol urea l Precision Se r
23. on aco que se encuentra en las t cnicas que usan la creatinina iminohidrolasa En las reacciones de acoplamiento de enzimas la creatinina amidohidrolasa hidroliza la creatinina en creatina Una segunda enzima la creatina amidinohidrolasa cataliza la formaci n de sarcosina a partir de la creatina La sarcosina oxidasa provoca la oxidaci n de sarcosina a glicina formaldeh do y per xido de hidr geno H202 En un acabado Trinder la peroxidasa cataliza la reacci n entre el per xido de hidr geno 2 4 6 tribromo 3 cido hidroxinbenzoico TBHBA y 4 aminoantipirina 4 AAAP en una tintura roja de quinoneimina Se agregan ferrocianuro de potasio y ascorbato oxidasa a la mezcla de la reacci n para reducir al m nimo la interferencia potencial de la bilirrubina y el cido asc rbico respectivamente Creatinina amidohidrolasa Creatinina HO 5 Creatina Creatina amidinohidrolasa Creatina H O _____ gt Sarcosina Urea Sarcosina oxidasa Sarcosina HO 0 gt Glicina formaldeh do H207 Peroxidasa H O TBHBA 4 AAP 9 gt Colorante rojo de quinoneimina H O Se utilizan dos cubetas para determinar la concentraci n de creatinina en la muestra La creatina end gena se mide en la cubeta de referencia que es restada de la creatina end gena combinada y la creatina formada a partir de las reacciones enzim ticas en Page 49 of 79 la cubeta de prueba Una vez eliminada la
24. otal de 193 adultos varones y mujeres analizadas en el analizador qu mico sangu neo de Piccolo para determinar los intervalos de referencia para ALT creatinina glucosa y BUN Se usaron muestras de un total de 186 adultos varones y mujeres para determinar el intervalo de referencia de la AST Se usaron muestras de un total de 131 adultos varones y mujeres para determinar el intervalo de referencia de la GGT Estos intervalos s lo se ofrecen como gu a Se recomienda que su consultorio o instituci n establezca los intervalos normales para su poblaci n de pacientes en particular Tabla 4 Intervalos de referencia de Piccolo Analito Unidades comunes Unidades SI Alanina aminotransferasa ALT 10 47 UN 10 47 UN Aspartato aminotransferasa AST 11 38 U L 11 38 UA Creatinina CRE 0 6 1 2 mg dl 53 106 pmol l Gamma glutamiltransferasa GGT 5 65 UN 5 65 UN Glucosa GLU 73 118 mg dl 4 05 6 55 mmol l Nitr geno ureico sangu neo BUN 7 22 mg dl 2 5 7 9 mmol urea l 12 Caracter sticas de eficacia Linealidad La qu mica para cada analito es lineal a lo largo del intervalo din mico indicado a continuaci n cuando el analizador qu mico sangu neo de Piccolo o el analizador qu mico Piccolo xpress funciona de acuerdo con el procedimiento recomendado consulte el manual del usuario del analizador qu mico sangu neo de Piccolo o el analizador qu mico Piccolo xpress Page 57 of 79 Tabla 5 L mites din micos de Piccolo Analito Unidades comu
25. para realizar an lisis exonerados por la CLIA Un certificado de exoneraci n puede obtenerse de CMS Centers for Medicare amp Medicaid Services Si necesita ayuda para obtener este certificado dir jase a la comisi n de acreditaci n de laboratorios COLA en el tel fono 1 800 981 9883 2 Resumen y explicaci n de las pruebas El disco reactivo qu mico general 13 de Piccolo y el analizador qu mico sangu neo de Piccolo o el analizador qu mico Piccolo xpress constituyen un sistema de diagn stico in vitro que ayuda al m dico a diagnosticar los trastornos siguientes Alanina aminotransferasa ALT Enfermedades hep ticas incluidas hepatitis viral y cirrosis Aspartato aminotransferasa AST Hepatopat as incluidas hepatitis e ictericia viral shock Creatinina Enfermedad renal y control de di lisis renal Gamma glutamiltransferasa GGT Hepatopat as incluidas cirrosis hep tica y tumores hep ticos primarios y secundarios Glucosa Alteraciones del metabolismo de carbohidratos incluida la diabetes mellitus e hipoglucemia del adulto y juvenil Nitr geno ureico sangu neo BUN Enfermedades renales y metab licas Al igual que con cualquier procedimiento diagn stico de prueba antes del diagn stico final hay que considerar todos los restantes procedimientos de prueba incluido el estado cl nico del paciente 3 Principios de la prueba Alanina aminotransferasa ALT La alanina aminotransferasa ALT ha sido medida me
26. rcino 0 01 U Nicotinamida adenina dinucle tido NAD 20 ug B nicotinamida adenina dinucle tido reducida NADH 18 ug Peroxidasa r bano 0 6 U Ferrocianuro de potasio 0 4 ug Sarcosina oxidasa microorganismos 0 6 U cido 2 4 6 Tribromo 3 hhidroxibenzoico 188 ug Ureasa haba blanca 0 05 U Amortiguador surfactantes excipientes y estabilizantes Advertencias y precauciones e Para uso diagn stico in vitro e El envase del diluyente del disco reactivo se abre autom ticamente cuando se cierra el caj n del analizador Un disco con un contenedor diluyente abierto no puede volver a utilizarse Aseg rese de que la muestra o la prueba est colocada en el disco antes de cerrar el caj n e Los discos de reactivo usados contienen l quidos del cuerpo humano Siga las pr cticas de seguridad del laboratorio cuando manipule y elimine discos usados Consulte el Manual del operador del analizador qu mico sangu neo de Piccolo o el analizador qu mico Piccolo xpress para obtener instrucciones sobre la limpieza de derrames biopeligrosos e Los discos reactivos son de pl stico y pueden romperse o estallar si se caen Nunca use un disco que se haya ca do ya que puede esparcir material biol gico peligroso en el interior del analizador e Elreactivo en soporte s lido puede contener sustancias cidas o c usticas El usuario no entra en contacto con el reactivo en soporte s lido si sigue los procedimientos recomendados En el caso de que
27. rum direct diacetyl monoxime method En Selected Methods of Clinical Chemistry vol 9 Faulkner WR Meites S eds Washington D C American Association for Clinical Chemistry 1982 365 373 Van Slyke DD Cullen GE A permanent preparation of urease and its use in the determination of urea J Biol Chem 1914 19 211 228 Fawcett JK Scott JE A rapid and precise method for the determination of urea J Clin Pathol 1960 13 156 159 Chaney AL Marbach EP Urea and ammonia determinations Clin Chem 1962 8 130 132 Talke H Schubert GE Enzymatische Hamstoffbest immung in Blut und Serum im optischen Test nach Warburg Klin Wochensch 1965 43 174 175 Hallett CJ Cook JGH Reduced nicotinamide adenine dinucleotide coupled reaction for emergency blood urea estimation Clin Chim Acta 1971 35 33 37 Patton CJ Crouch SR Spectrophotometric and kinetics investigation of the Berthelot reaction for the determination of ammonia Anal Chem 1977 49 464 469 Sampson EJ y otros A coupled enzyme equilibrium method for measuring urea in serum optimization and evaluation of the AACC study group on urea candidate reference method Clin Chem 1980 26 816 826 National Committee for Clinical Laboratory Standards Physician s office laboratory guidelines tentative guideline second edition NCCLS Document POL1 T2 Wayne PA NCCLS 1992 National Committee for Clinical Laboratory Standards Procedures for the handling and processing of blood specimens
28. s de transferencia de muestras volumen fijo de aproximadamente 100 ul y puntas y pueden solicitarse repuestos a Abaxis Page 53 of 79 e Reactivos de control disponibles comercialmente recomendados por Abaxis p ngase en contacto con el Servicio T cnico de Abaxis para solicitar materiales de control homologados y valores de referencia e Cron metro Par metros de prueba El analizador qu mico de sangre Piccolo o Piccolo xpress funciona a una temperatura ambiente entre 15 C y 32 C 59 90 F El tiempo de an lisis para cada disco reactivo qu mico general 6 de Piccolo es menor a 14 minutos El analizador mantiene el disco reactivo a una temperatura de 37 C 98 6 F durante el intervalo de medici n Procedimiento de prueba La recolecci n completa de la muestra y los procedimientos paso a paso se detallan en el Manual del usuario del analizador qu mico de sangre Piccolo o el analizador qu mico Piccolo xpress Calibraci n El analizador qu mico de sangre Piccolo o el analizador qu mico Piccolo xpress est calibrado por el fabricante antes de su env o al cliente El c digo de barras impreso en el anillo del c digo de barras proporciona al analizador los datos de calibraci n espec ficos del disco Ver el Manual del operador del analizador qu mico Piccolo o Piccolo xpress Control de calidad Consulte la Secci n 2 4 del manual del usuario de Piccolo o la Secci n 6 Calibraci n y control de calidad del manual del usuar
29. se manipule el reactivo en soporte s lido por ejemplo limpieza tras caerse y romperse un disco de reactivo se debe evitar la ingesti n el contacto con la piel y la inhalaci n del mismo Instrucciones para la manipulaci n de los reactivos Los discos de reactivo pueden usarse inmediatamente despu s de retirarse del refrigerador sin calentarlos previamente No permita que los discos permanezcan a temperatura ambiente m s de 48 horas antes de usar Abra la bolsa de aluminio sellada y saque el disco las instrucciones para la manipulaci n cuidadosa del reactivo recomiendan no tocar el anillo del c digo de barras ubicado en la parte superior del disco Utilizar de acuerdo con las instrucciones proporcionadas en el Manual del usuario Page 52 of 79 del analizador qu mico sangu neo de Piccolo o el analizador qu mico Piccolo xpress Deseche los discos no usados transcurridos 20 minutos de la apertura de la bolsa Almacenamiento Almacene los discos de reactivo en sus bolsas selladas a 2 8 C 36 46 F No exponga los discos abiertos o sin abrir a la luz solar directa o a temperaturas superiores a los 32 C 90 F Los discos de reactivo pueden ser usados hasta la fecha de caducidad indicada en el paquete La fecha de caducidad tambi n aparece codificada en el c digo de barras impreso en el anillo del c digo de barras Si los reactivos han caducado aparecer un mensaje de error en la pantalla del analizador qu mico sangu neo de Picco
30. so de la enzima ureasa aument la especificidad de estas pruebas El amon aco se cuantifica mediante distintos m todos entre ellos la nesslerizaci n titulaci n cida la t cnica de Berthelot y las reacciones enzim ticas acopladas Sin embargo los procedimientos de Berthelot catalizados son erraticos cuando se mide el amon aco Las reacciones enzim ticas acopladas son r pidas tienen una elevada especificidad para el amon aco y son las usadas habitualmente Una de estas reacciones fue propuesta como un posible m todo de referencia En la reacci n de acoplamiento de enzimas la ureasa hidroliza la urea en amon aco y di xido de carbono Al combinarse el amon aco con 2 oxoglutarato y nicotinamida adenina dinucle tido reducida NADH la enzima glutamato deshidrogenasa GLDH oxida la NADH en NAD Ureasa Urea H O gt NH CO GLDH NH 2 Oxoglutarato NADH __ L Glutamato H O NAD El indice de cambio de la diferencia de absorbancia entre 340 nm y 405 nm se debe a la conversi n de NADH en NAD y es directamente proporcional a la cantidad de urea en la muestra 4 Principios del procedimiento Consulte el Manual del usuario del analizador quimico sanguineo de Piccolo o el analizador quimico Piccolo xpress para obtener informacion sobre los principios y limitaciones del procedimiento 5 Descripci n de los reactivos Reactivos Cada disco reactivo qu mico general 6 de
31. totrexato Metildopa Metronidazol Nafcilina Nitrofuranto na Oxacilina Oxaloacetato Fenito na Prolina Piruvato Rifampina cido salic lico Sulfalazina Sulfanilamida Teofilina L mite fisiol gico Intervalo terap utico mg dl 1 2 0 05 3 60 2 10 0 5 0 8 1 2 0 3 1 5 10 1 2 5 0 1 1 36 41 Concentraci n m xima probada mg dl 100 102 132 44 1 5 25 10 20 e Las siguientes sustancias mostraron una interferencia superior al 10 Se define a la interferencia significativa como un desv o superior al 10 en el resultado para una muestra en l mites normales Las mezclas de suero humano fueron enriquecidas con concentraciones conocidas de los f rmacos o qu micos y luego analizadas Page 56 of 79 Tabla 3 Sustancias con interferencia significativa superior al 10 L mite Concentraci n con Interferencia fisiol gico gt 10 de interferencia Intervalo mg dl mg dl Alanina aminotransferasa ALT cido asc rbico 0 8 1 2 20 11 aum Oxaloacetato 132 843 aum Creatinina CRE cido asc rbico 0 8 1 2 20 11 dism Dopamina 19 80 dism L dopa 5 71 dism Epinefrina 1 45 dism Glutationa 30 13 dism Glucosa GLU Oxaloacetato 132 11 dism Piruvato 0 3 0 9 44 13 dism aum aumento dism disminuci n Consulte la bibliografia para obtener informaci n adicional sobre posibles interferencias qu micas 11 Valores esperados Se usaron muestras de un t
32. uation of precision performance of clinical chemistry devices tentative guideline segunda edicion NCCLS Document EP5 T2 Wayne PA NCCLS 1992 Page 63 of 79
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