FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human MutL Protein Homolog
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1. Va ko English Intended use Summary and explanation Reagent provided Immunogen Specificity 119332 001 CE FLEX Monoclonal Mouse Anti Human MutL Protein Homolog 1 Clone ES05 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus Code IS079 For in vitro diagnostic use FLEX Monoclonal Mouse Anti Human MutL Protein Homolog 1 Clone ES05 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus is intended for use in immunohistochemistry together with Dako Autostainer Autostainer Plus instruments This antibody is useful for the differential identification of colorectal carcinoma When deficient the MutL Protein Homolog 1 MLH1 is associated with the onset of hereditary non polyposis colorectal cancer HNPCC The clinical interpretation of any staining or its absence should be complemented by morphological studies using proper controls and should be evaluated within the context of the patient s clinical history and other diagnostic tests by a qualified pathologist Mismatch repair gene hMLHT is a ubiquitous gene encoding a mismatch repair protein MMR called MutL protein homolog 1 MLH1 which is utilized by normal proliferating cells to repair point mutations that may occur during DNA replication MLH1 forms a heterodimer with the mismatch repair protein MutL protein homolog 2 PMS2 and the MLH1 PMS2 heterodimeric complex is recruited to the mismatch DNA sequence by a MutS MMR heterodimeric complex consisting of the MSH22. a chemical highly toxic in pure form At product concentrations though not classified as hazardous sodium azide may react with lead and copper plumbing to form highly explosive build ups of metal azides Upon disposal flush with large volumes of water to prevent metal azide build up in plumbing 3 As with any product derived from biological sources proper handling procedures should be used Wear appropriate Personal Protective Equipment to avoid contact with eyes and skin 5 Unused solution should be disposed of according to local State and Federal regulations Store at 2 8 Do not use after expiration date stamped on vial If reagents are stored under any conditions other than those specified the conditions must be verified by the user There are no obvious signs to indicate instability of this product Therefore positive and negative controls should be run simultaneously with patient specimens If unexpected staining is observed which cannot be explained by variations in laboratory procedures and a problem with the antibody is suspected contact Dako Technical Support The antibody can be used for labeling formalin fixed paraffin embedded tissue sections Tissue specimens should be cut into sections of approximately 4 um Pre treatment with heat induced epitope retrieval HIER is required using Dako PT Link Code PT100 PT101 For details please refer to the PT Link User Guide Optimal results are obtained by pretreating tissues us
3. structures doivent pr senter des sch mas de r action tels que d crits pour ces tissus dans les Caract ristiques de performance pour tous les chantillons positifs Le r actif de contr le n gatif recommand est le produit FLEX Negative Control Mouse Dako Autostainer Autostainer Plus r f IS750 Le sch ma de coloration cellulaire est nucl aire Tissus sains L anticorps FLEX Monoclonal Mouse Anti Human MutL Protein Homolog 1 Clone ES05 identifie de facon positive les noyaux de divers types cellulaires dans les tissus sains Les noyaux des cellules pith liales sont marqu s par cet anticorps dans l appendice le sein le col de l uterus le c lon l oesophage le rein le poumon le pancr as la prostate la glande salivaire le petit intestin la thyro de l amygdale et l uterus Une immunor activit positive est observ e dans les cellules stromales et dans les cellules endoth liales pr sentes dans de nombreux types de tissus L anticorps marque galement les noyaux des lymphocytes de lamygdale et de l appareil gastro intestinal ainsi que les cellules endocrines de l hypophyse et de la parathyro de D autres l ments tissulaires pr sentant une positivit comprennent les adipocytes les blastes de la moelle osseuse le m soth lium les plexus nerveux le muscle lisse de l appendice et le myometre ut rin 15 307806EFG_001 4 7 Deutsch Verwendungszweck Zusammenfassung und Erkl rung
4. 8 of MSI High colon carcinomas and 12 4 of endometrial carcinomas associated with HNPCC 8 9 Loss of MLH1 expression has also been reported in gastric adenoma intramucosal carcinoma noninvasive squamous cell carcinoma of the uterine cervix pancreatic carcinoma and sebaceous gland tumors 10 13 Refer to Dako s General Instructions for Immunohistochemical Staining or the detection system instructions of IHC procedures for 1 Principle of Procedure 2 Materials Required Not Supplied 3 Storage 4 Specimen Preparation 5 Staining Procedure 6 Quality Control 7 Troubleshooting 8 Interpretation of Staining 9 General Limitations Ready to use monoclonal mouse antibody provided in liquid form as cell culture supernatant containing fetal bovine serum dialyzed against 0 05 mol L Tris HCl pH 7 2 and containing 0 015 mol L NaNs Clone ES05 Isotype IgG1 kappa Recombinant protein corresponding to a 210 amino acid portion of the human MLH1 molecule In Western blotting of human Caco 2 cell lysate the antibody labels a major band at 88 kDa corresponding to the expected molecular weight of MLH1 14 307806EFG_001 1 7 Precautions Storage Specimen preparation including materials required but not supplied Staining procedure including materials required but not supplied Staining interpretation Performance characteristics 119332 001 1 For professional users 2 This product contains sodium azide NaN3
5. Autostainer Plus Cet anticorps est utile pour l identification diff rentielle des carcinomes colorectaux Lorsqu il est d ficient homologue 1 de la prot ine MutL MLH1 est associ a l apparition d un cancer colorectal h r ditaire sans polypose ou syndrome HNPCC hereditary non polyposis colorectal cancer L interpr tation clinique de toute coloration ou son absence doit tre compl t e par des tudes morphologiques en utilisant des contr les appropri s et doit tre valu e en fonction des ant c dents cliniques du patient et d autres tests diagnostiques par un pathologiste qualifi Le g ne de r paration des m sappariements AMLHT est un g ne ubiquitaire codant une prot ine de r paration des m sappariements MMR appel e homologue 1 de la prot ine MutL MLH1 qui est utilis e par les cellules en prolif ration saines afin de r parer les mutations ponctuelles qui peuvent survenir au cours de la r plication de l ADN MLH1 forme un h t rodim re avec la prot ine de r paration des m sappariements homologue 2 de la prot ine MutL PMS2 et le complexe h t rodim rique MLH1 PMS2 est recrut pour la s quence ADN m sappari e par un complexe h t rodim rique de r paration des m sappariements MutS compos de l h t rodim re MSH2 MSH6 qui se lie directement l o se trouve l erreur de r paration du m sappariement de la base Le complexe MLH1 PMS2 initie ensuite des fonctions de r paration en aval y compris l exc
6. Geliefertes Reagenz Immunogen Spezifit t Vorsichtsma nahmen Lagerung 119332 001 Code Nr 1IS079 Zur In vitro Diagnostik FLEX Monoclonal Mouse Anti Human MutL Protein Homolog 1 Clone ES05 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus ist zur Verwendung in der Immunhistochemie in Verbindung mit Dako Autostainer Autostainer Plus Ger ten bestimmt Dieser Antik rper tr gt zur Differentialdiagnose kolorektaler Karzinome bei Ein Defekt von MutL Protein Homolog 1 MLH1 ist mit dem Auftreten des erblichen kolorektalen Karzinoms ohne Polyposis hereditary non polyposis colorectal cancer HNPCC assoziiert Die klinische Auswertung einer eventuell eintretenden F rbung sollte durch morphologische Studien mit geeigneten Kontrollen erg nzt und von einem qualifizierten Pathologen unter Ber cksichtigung der Krankengeschichte und anderer diagnostischer Tests des Patienten vorgenommen werden Das Mismatch Repair Reparatur Gen hMLHT ist ein ubiquit res Gen welches das Mismatch Repair MMR Protein MutL protein homolog 1 MLH1 codiert Dieses Protein repariert in normal proliferierenden Zellen Punktmutationen die w hrend der DNA Replikation auftreten k nnen MLH1 bildet ein Heterodimer mit dem MMR Protein MutL protein homolog 2 PMS2 Der heterodimere MLH1 PMS2 Komplex wird durch einen weiteren aus dem Heterodimer MSH2 MSH6 bestehenden MutS MMR Komplex der direkt an den zu reparierenden Basen Mismatch bindet zum DNA Mismatch g
7. MSH6 heterodimer which binds directly to the base mismatch repair error The MLH1 PMS2 complex then initiates downstream repair functions including the excision of the mismatched DNA strand and repair through the recruitment of nucleases polymerases and other assorted proteins The mismatched nucleotides or microsatellite instable MSI sequence targeted by the heterodimer are consequently repaired as the result of normal dimerization of the two proteins in an ATP dependent process 1 3 MLH1 deficiency is often the result of germline mutations in MMR deficient individuals 4 Absence of MLH1 has also been reported in 10 15 of sporadic colorectal carcinomas 5 Individuals lacking the MLH1 protein are predisposed for hereditary non polyposis colorectal cancer HNPCC HNPCC is an autosomal dominant disorder associated with a high risk for developing colorectal cancer 1 4 6 Additionally HNPCC increases the risk for extracolonic cancers including carcinoma of the endometrium ovary renal pelvis small bowel stomach and ureter 6 HNPCC is believed to account for approximately 2 5 of all colorectal cancers with about 50 of HNPCC mutations occurring in the MutL homologue 1 gene 4 7 Antibodies to MLH1 are useful for identifying mismatch repair deficiencies in tumors of the gastrointestinal tract including HNPCC and associated extracolonic cancers by immunohistochemistry IHC MLH1 deficiency as determined by IHC has been reported in 80 3
8. described for these tissues in Performance characteristics in all positive specimens The recommended negative control reagent is FLEX Negative Control Mouse Dako Autostainer Autostainer Plus Code 1S750 The cellular staining pattern is nuclear Normal tissues FLEX Monoclonal Mouse Anti Human MutL Protein Homolog 1 Clone ES05 positively identifies the nuclei of a variety of cell types in normal tissue The nuclei of epithelial cells are labeled by the antibody in appendix breast cervix colon esophagus kidney lung pancreas prostate salivary gland small intestine thyroid tonsil and uterus Positive immunoreactivity is observed in stromal cells and endothelial cells present in many tissue types The antibody also labels the nuclei of lymphocytes of the tonsil and gastrointestinal tract and endocrine cells of pituitary and parathyroid Other tissue elements which demonstrate positivity include adipocytes bone marrow blasts mesothelium nerve plexi smooth muscle of appendix and uterine myometrium 15 307806EFG_001 2 7 Francais Utilisation prevue Resume et explication Reactifs fournis Immunogene Specificite Precautions 119332 001 Ref 15079 Pour utilisation diagnostique in vitro L anticorps FLEX Monoclonal Mouse Anti Human MutL Protein Homolog 1 Clone ES05 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus est destin tre utilis en immunohistochimie avec les appareils Dako Autostainer
9. ebracht Der MLH1 PMS2 Komplex l st dann eine Reihe von Reparaturfunktionen aus die das Ausschneiden des falsch gepaarten DNA Strangs und die Reparatur durch Nukleasen Polymerasen und weitere spezielle Proteine einschlie t Die falsch gepaarten Nukleotide oder DNA Sequenzen hoher Mikrosatelliten Instabilit t MSI die das Ziel des Heterodimers sind werden daraufhin als Ergebnis der Dimerisierung der beiden Proteine in einem ATP abh ngigen Prozess repariert 1 3 Ein MLH1 Defekt ist oft die Folge von Keimbahnmutationen bei Personen mit Beeintr chtigungen der Mismatch Reparatur MMR 4 Ein Fehlen von MLH1 wurde auch bei 10 15 der sporadischen kolorektalen Karzinome beobachtet 5 Personen denen das MLH1 Protein fehlt zeigen eine Pr disposition f r das erbliche kolorektale Karzinom ohne Polyposis hereditary non polyposis colorectal cancer HNPCC HNPCC ist eine autosomal dominante St rung die mit einem hohen Risiko f r kolorektale Karzinome assoziiert ist 1 4 6 Au erdem ist bei HNPCC auch das Risiko f r Krebs au erhalb des Kolons erh ht z B im Endometrium im Ovar im Nierenbecken im D nndarm im Magen und in der Harnr hre 6 Es wird angenommen dass HNPCC f r etwa 2 5 aller kolorektalen Karzinome verantwortlich ist wobei 50 der bei HNPCC beobachteten Mutationen das MutL Homolog 1 Gen betreffen 4 7 Antik rper gegen MLH1 sind hilfreich bei der Identifizierung von Mismatch Repair Defekten bei Tumoren des Gastro
10. er Schilddr se in den Mandeln und in der Geb rmutter angef rbt Immunreaktivit t wird auch in Stroma und in Endothelzellen in vielen Gewebetypen gefunden Der Antik rper f rbt au erdem die Zellkerne von Lymphozyten in den Mandeln und im Gastrointestinaltrakt sowie endokrine Zellen der Hypophyse und der Nebenschilddr sen Weitere Gewebeelemente die sich anf rben lassen sind z B Adipozyten Blasten im Knochenmark Mesothel Nervenplexi sowie glatte Muskeln des Appendix und des Geb rmutter Myometriums 15 307806EFG_001 6 7 References 1 Modrich P Mechanisms and biological effects of mismatch repair Annu Rev Genet 1991 25 229 53 Bibliographie 2 Modrich P Lahue R Annua Rev Biochem 1996 65 101 33 Literaturhinweise 3 Scherer SJ Avdievich E Edelmann W Functional consequences of DNA mismatch repair missense mutations in murine models and their impact on cancer disposition Biochem Soc Trans 2005 33 689 93 4 Kunstmann E Vieland J Brasch FE Hahn SA Epplen JT Schulmann K et al HNPCC Six new pathogenic mutations BMC Med Genet 2004 5 16 5 Marcus VA Madlensky L Gryfe R Kim H So K Millar A et al Immunohistochemistry for hMLH1 and hMSH2 a practical test for DNA mismatch repair deficient tumors Am J Surg Pathol 1999 23 1248 55 6 Lynch H T and Smyrk T Hereditary Nonpolyposis Colorectal Cancer Lynch Syndrome An Updated Review Cancer 1996 78 1149 67 7 Peltom ki P Role of DNA mismatch repair defec
11. eratoacanthomas J Invest Dermatol 2006 126 2302 7 14 R schle M Marra G Nystr m Lahti M Primo Schar P Jiricny J Identification of hMutLbeta a Heterodimer of hMLH1 and hPMS1 J Biol Chem 1999 274 32368 75 15 M3640 IHC110608 161 Catalogue number Temperature limitation In vitro diagnostic medical device f rence du catalogue Limites de temp rature Dispositif m dical de diagnostic in vitro sal Tec REP Bestellnummer Zulassiger Temperaturbereich In vitro Diagnostikum Dako North America Inc Dako Denmark A S Manufacturer Batch code Contains sufficient for lt N gt tests 6392 Via Real Produktionsvej 42 atal Fabricant Code du lot Contenu suffisant pour lt n gt tests Carpinteria California 93013 USA DK 2600 Glostrup Denmark Hersteller Chargenbezeichnung Inhalt ausreichend fur n Ansatze Use by Consult instructions for use Authorized representative in the European Community Tel 805 566 6655 Tel 45 4485 9500 Utiliser jusque BA Consulter les instructions d utilisation EC REP Repr sentant Autoris dans la Communaut Europ enne Fax 805 566 6688 Fax 45 4485 9595 Verwendbar bis Gebrauchsanweisung beachten Autorisierter Reprasentant in der EU Technical Support 800 424 0021 Customer Service 800 235 5763 www dako com PT0020 Rev C Edition 02 09 119332 001 307806EFG_001 7 7
12. es m sappariements dans les tumeurs de l appareil gastro intestinal y compris le syndrome HNPCC et les cancers extra coliques associ s Une d ficience en MLH1 d termin e par IHC a t rapport e dans 80 3 des carcinomes du c lon forte instabilit des microsatellites et dans 12 4 des carcinomes endom triaux associ s au syndrome HNPCC 8 9 Une perte de l expression de MLH1 a galement t signal e dans l ad nome gastrique le carcinome intramuqueux le carcinome pidermo de non invasif du col de l ut rus le carcinome pancr atique et les tumeurs des glandes s bac es 10 13 Se reporter aux nstructions g n rales de coloration immunohistochimique de Dako ou aux instructions du systeme de d tection relatives aux proc dures IHC pour plus d informations concernant les points suivants 1 Principe de proc dure 2 Mat riels requis mais non fournis 3 Conservation 4 Pr paration des chantillons 5 Proc dure de coloration 6 Contr le qualit 7 D pannage 8 Interpr tation de la coloration 9 Limites g n rales Anticorps monoclonal de souris pr t l emploi fourni sous forme liquide comme surnageant de culture cellulaire contenant du s rum bovin foetal dialys en utilisant 0 05 mol L de tampon Tris HCl de pH 7 2 et contenant 0 015 mol L de NaN Clone ES05 Isotype lgG1 kappa Prot ine recombinante correspondant une portion de 210 acides amin s de la mol cule MLH1 humaine Lor
13. ferte Materialien Auswertung der F rbung Leistungsmerkmale 119332 001 Der Antik rper eignet sich zur Markierung von formalinfixierten und paraffineingebetteten Gewebeschnitten Gewebeproben sollten in Schnitte von ca 4 um St rke geschnitten werden Die Vorbehandlung durch hitzeinduzierte Epitopdemaskierung HIER mit Dako PT Link Code Nr PT100 PT101 ist erforderlich Weitere Informationen hierzu siehe PT Link Benutzerhandbuch Optimale Ergebnisse k nnen durch Vorbehandlung der Gewebe mit EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code Nr K8010 K8014 erzielt werden Paraffineingebettete Schnitte Die Vorbehandlung der formalinfixierten paraffineingebetteten Schnitte mit dem 3 in 1 Probenvorbereitungsverfahren f r Dako PT Link wird empfohlen Vorbehandlung gem der Beschreibung in der Packungsbeilage f r EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code Nr K8010 K8014 durchf hren Hinweis Nach dem F rben m ssen die Schnitte dehydriert gekl rt und mit permanentem Einbettmedium auf den Objekttr ger aufgebracht werden Entparaffinierte Schnitte Eine Vorbehandlung der entparaffinierten formalinfixierten paraffineingebetteten Gewebeschnitte mit Dako PT Link nach demselben Verfahren wie f r die paraffineingebetteten Schnitte beschrieben wird empfohlen Die Objekttr ger nach dem F rben mit einem w ssrigen oder permanenten Fixiermittel fixieren Die Gewebeschnitte d rfen w hrend de
14. ing EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code K8010 K8014 Paraffin embedded sections Pre treatment of formalin fixed paraffin embedded tissue sections is recommended using the 3 in 1 specimen preparation procedure for Dako PT Link Follow the pre treatment procedure outlined in the package insert for EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code K8010 K8014 Note After staining the sections must be dehydrated cleared and mounted using permanent mounting medium Deparaffinized sections Pre treatment of deparaffinized formalin fixed paraffin embedded tissue sections is recommended using Dako PT Link and following the same procedure as described for paraffin embedded sections After staining the slides should be mounted using aqueous or permanent mounting medium The tissue sections should not dry out during the treatment or during the following immunohistochemical staining procedure For greater adherence of tissue sections to glass slides the use of FLEX IHC Microscope Slides Code K8020 is recommended The recommended visualization system is EnVision FLEX Mouse High pH Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8012 The staining steps and incubation times are pre programmed into the software of Dako Autostainer Autostainer Plus instruments using the following protocols Template protocol FLEXRTU2 200 uL dispense volume or FLEXRTU3 300 uL dispense volume Autoprogram mlh without counte
15. intestinaltrakts einschlie lich HNPCC und assoziierte Krebsarten au erhalb des Kolons durch Immunhistochemie IHC Uber mittels IHC nachgewiesene MLH1 Defekte wurde bei 80 3 der hochgradigen MSI Kolonkarzinome und bei 12 4 der mit HNPCC assoziierten Endometriumkarzinome berichtet 8 9 Ein Verlust der MLH1 Expression wurde au erdem bei Magenadenomen intramukosalen Karzinomen nicht invasiven Plattenepithelkarzinomen des Geb rmutterhalses Pankreaskarzinomen und Talgdr senkarzinomen gezeigt 10 13 Folgende Angaben bitte den Allgemeinen Richtlinien zur immunhistochemischen F rbung von Dako oder den Anweisungen des Detektionssystems f r IHC Verfahren entnehmen 1 Verfahrensprinzip 2 Erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien 3 Aufbewahrung 4 Vorbereitung der Probe 5 F rbeverfahren 6 Qualit tskontrolle 7 Fehlersuche und behebung 8 Auswertung der F rbung 9 Allgemeine Beschr nkungen Gebrauchsfertiger monoklonaler Maus Antik rper in fl ssiger Form als Zellkultur berstand mit f talem Rinderserum dialysiert gegen 0 05 mol L Tris HCl pH 7 2 und 0 015 mol L NaNs Klon ESO5 Isotyp lgG1 Kappa Rekombinantes Protein das einem 210 Aminosauren langen Teil des menschlichen MLH1 Molekuls entspricht Im Western Blot mit menschlichem Caco 2 Zelllysat markiert der Antik rper in bereinstimmung mit dem erwarteten Molekulargewicht von MLH1 eine starke Bande bei ungef hr 88 kDa 14 1 Zur klinischen Anwe
16. ision du brin d ADN m sappari et la r paration grace au recrutement de nucl ases de polym rases et d autres prot ines associ es Les nucl otides m sappari s ou s quence d instabilit des microsatellites MSI cibl s par l h t rodim re sont alors r par s suite la dim risation normale des deux prot ines lors d un processus ATP d pendant 1 3 Une d ficience en MLH1 est souvent le r sultat de mutations au niveau des lign es germinales chez des individus pr sentant une d ficience du systeme de r paration des m sappariements 4 L absence de MLH1 a galement t rapport e dans 10 15 des cancers colorectaux sporadiques 5 Les individus d pourvus de la prot ine MLH1 pr sentent une pr disposition au cancer colorectal h r ditaire sans polypose ou syndrome HNPCC Le syndrome HNPCC est un trouble dominant autosomique associ un fort risque de d veloppement d un cancer colorectal 1 4 6 De plus le syndrome HNPCC augmente le risque de cancers extra coliques notamment le carcinome de l endometre de l ovaire du bassinet du rein du petit intestin de l estomac et de l uret re 6 On pense que ce syndrome repr sente environ 2 5 de l ensemble des cancers colorectaux avec environ 50 des mutations de type HNPCC survenant dans le gene de I homologue 1 de MutL 4 7 Les anticorps dirig s contre MLH1 sont utiles pour identifier par immunohistochimie IHC les d ficiences de la r paration d
17. it des temps de lavage comparables Toutes les tapes d incubation doivent tre effectu es a temp rature ambiante Pour plus de details se reporter au Manuel de l op rateur sp cifique a l appareil Si les protocoles ne sont pas disponibles sur l appareil Dako Autostainer utilis contacter le service technique de Dako Les conditions optimales peuvent varier en fonction du pr l vement et des m thodes de pr paration et doivent tre d termin es par chaque laboratoire individuellement Si le pathologiste qui r alise l valuation d sire une intensit de coloration diff rente un sp cialiste d application spe amp cialiste du service technique de Dako peut tre contact pour obtenir des informations sur la reprogrammation du protocole V rifier que l ex cution du protocole modifi est toujours valide en v rifiant que le sch ma de coloration est identique au sch ma de coloration d crit dans les Caract ristiques de performance Il est recommand d effectuer une contre coloration l h matoxyline en utilisant le produit EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus r f K8018 L utilisation d un milieu de montage permanent non aqueux est recommand e Des contr les positifs et n gatifs doivent tre r alis s en m me temps et avec le m me protocole que les chantillons du patient Le tissu de contr le positif doit comprendre l appendice le c lon et amygdale et les cellules
18. les ci doivent tre valid es par l utilisateur Il n y a aucun signe vident indiquant l instabilit de ce produit Par cons quent des contr les positifs et n gatifs doivent tre test s en m me temps que les chantillons de patients Si une coloration inattendue est observ e qui ne peut tre expliqu e par des diff rences dans les proc dures du laboratoire et qu un probl me li l anticorps est suspect contacter l assistance technique de Dako L anticorps peut tre utilis pour le marquage des coupes de tissus fix es au formol et incluses en paraffine L paisseur des coupes d chantillons de tissu doit tre d environ 4 um Le pr traitement avec un d masquage d pitope induit par la chaleur HIER est n cessaire l aide de l appareil PT Link de Dako r f PT100 PT101 Pour plus de d tails se reporter au Guide d utilisation du PT Link Pour obtenir des r sultats optimaux pr traiter les tissus l aide du produit EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x r f K8010 K8014 Coupes incluses en paraffine Il est recommand de pretraiter les coupes de tissus fix es au formol et incluses en paraffine l aide de la proc dure de pr paration des chantillons 3 en 1 du PT Link de Dako Suivre la proc dure de pr traitement indiqu e dans la notice du produit EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x ref K8010 K8014 Remarque Apr s coloration les coupes doiven
19. ndung 2 Dieses Produkt enth lt Natriumazid NaN3 eine in reiner Form u erst giftige Chemikalie Natriumazid kann auch in als ungef hrlich eingestuften Konzentrationen mit Blei und Kupferrohren reagieren und hochexplosive Metallazide bilden Nach der Entsorgung stets mit viel Wasser nachsp len um Metallazidansammlungen in den Leitungen vorzubeugen 3 Wie alle Produkte biologischen Ursprungs m ssen auch diese entsprechend gehandhabt werden 4 Geeignete Schutzkleidung tragen um Augen und Hautkontakt zu vermeiden 5 Nicht verwendete L sung ist entsprechend rtlichen bundesstaatlichen und staatlichen Richtlinien zu entsorgen Bei 2 8 aufbewahren Nach Ablauf des auf dem Fl schchen aufgedruckten Verfallsdatums nicht mehr verwenden Werden die Reagenzien nicht entsprechend den angegebenen Bedingungen aufbewahrt m ssen die Bedingungen vom Anwender gepr ft werden Es gibt keine offensichtlichen Anzeichen f r eine eventuelle Produktinstabilit t Positiv und Negativkontrollen sollten daher zur gleichen Zeit wie die Patientenproben getestet werden Falls es zu einer unerwarteten F rbung kommt die sich nicht durch Unterschiede bei Laborverfahren erkl ren l sst und auf ein Problem mit dem Antik rper hindeutet ist der technische Kundendienst von Dako zu verst ndigen 307806EFG_001 5 7 Vorbereitung der Probe und erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien F rbeverfahren und erforderliche aber nicht mitgelie
20. r Behandlung oder des anschlie enden immunhistochemischen F rbeverfahrens nicht austrocknen Zur besseren Haftung der Gewebeschnitte an den Glasobjekttr gern wird die Verwendung von FLEX IHC Microscope Slides Code Nr K8020 empfohlen Das empfohlene Visualisierungssystem ist EnVision FLEX Mouse High pH Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8012 Die Farbeschritte und Inkubationszeiten sind in der Software der Dako Autostainer Autostainer Plus Ger te mit den folgenden Protokollen vorprogrammiert Matrix Protokoll FLEXRTU2 200 ul Anwendungsvolumen oder FLEXRTU3 300 ul Anwendungsvolumen Autoprogramm mih ohne Gegenf rbung oder mihH mit Gegenf rbung Bei F rbedurchl ufen mit h chstens 10 Objekttr gern sollte der Zusatz Schritt auf Puffersp lgang eingestellt werden F r F rbedurchl ufe mit mehr als 10 Objekttragern den Zusatz Schritt auf Keine einstellen Dies gew hrleistet vergleichbare Waschzeiten Alle Inkubationsschritte sollten bei Raumtemperatur durchgef hrt werden N here Einzelheiten bitte dem Benutzerhandbuch f r das jeweilige Ger t entnehmen Wenn die F rbeprotokolle auf dem verwendeten Dako Autostainer Ger t nicht verf gbar sind bitte den Technischen Kundendienst von Dako verst ndigen Optimale Bedingungen k nnen je nach Probe und Pr parationsverfahren unterschiedlich sein und sollten vom jeweiligen Labor selbst ermittelt werden Falls der beurteilende Pathologe eine ande
21. re F rbungsintensit t w nscht kann ein Anwendungsspezialist oder Kundendiensttechniker von Dako bei der Neuprogrammierung des Protokolls helfen Die Leistung des angepassten Protokolls muss verifiziert werden indem gew hrleistet wird dass das F rbemuster mit dem unter Leistungsmerkmale beschriebenen F rbemuster identisch ist Die Gegenf rbung mit Hamatoxylin sollte mit EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8018 ausgef hrt werden Empfohlen wird ein nichtw ssriges permanentes Einbettmedium Positiv und Negativkontrollen sollten zur gleichen Zeit und mit demselben Protokoll wie die Patientenproben getestet werden Das positive Kontrollgewebe muss Zellen aus Appendix Dickdarm und Mandelgewebe enthalten und die Zellen Strukturen m ssen in allen positiven Proben die f r dieses Gewebe unter Leistungsmerkmale beschriebenen Reaktionsmuster aufweisen Das empfohlene Negativ Kontrollreagenz ist FLEX Negative Control Mouse Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr IS750 Das zellul re F rbemuster ist nukle r Gesunde Gewebe FLEX Monoclonal Mouse Anti Human MutL Protein Homolog 1 Clone ES05 f rbt die Kerne einer Reihe von Zelltypen in gesunden Geweben Die Kerne epithelialer Zellen werden durch den Antik rper im Appendix in der Brust in der Zervix im Kolon in der Speiser hre in der Niere in der Lunge im Pankreas in der Prostata in den Speicheldr sen im D nndarm in d
22. rstaining or mIhH with counterstaining The Auxiliary step should be set to rinse buffer in staining runs with lt 10 slides For staining runs with gt 10 slides the Auxiliary step should be set to none This ascertains comparable wash times All incubation steps should be performed at room temperature For details please refer to the Operator s Manual for the dedicated instrument If the protocols are not available on the used Dako Autostainer instrument please contact Dako Technical Services Optimal conditions may vary depending on specimen and preparation methods and should be determined by each individual laboratory If the evaluating pathologist should desire a different staining intensity a Dako Application Specialist Technical Service Specialist can be contacted for information on re programming of the protocol Verify that the performance of the adjusted protocol is still valid by evaluating that the staining pattern is identical to the staining pattern described in Performance characteristics Counterstaining in hematoxylin is recommended using EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8018 Non aqueous permanent mounting medium is recommended Positive and negative controls should be run simultaneously using the same protocol as the patient specimens The positive control tissue should include appendix colon and tonsil and the cells structures should display reaction patterns as
23. s de Western Blots de lysats de cellules Caco 2 humaines l anticorps marque une bande principale 88 kDa correspondant au poids mol culaire attendu de MLH1 14 1 Pour utilisateurs professionnels 2 Ce produit contient de l azide de sodium NaNs un produit chimique hautement toxique sous sa forme pure Aux concentrations du produit bien que non class comme dangereux l azide de sodium peut r agir avec le cuivre et le plomb des canalisations et former des accumulations d azides m talliques hautement explosives Lors de l limination rincer abondamment l eau pour viter toute accumulation d azide m tallique dans les canalisations 3 Comme avec tout produit d origine biologique des proc dures de manipulation appropri es doivent tre respect es Porter un v tement de protection appropri pour viter le contact avec les yeux et la peau 5 Les solutions non utilis es doivent tre limin es conform ment aux r glementations locales et nationales 307806EFG_001 3 7 Conservation Preparation des chantillons y compris le mat riel requis mais non fourni Proc dure de coloration y compris le mat riel requis mais non fourni Interpr tation de la coloration Caract ristiques de performance 119332 001 Conserver entre 2 et 8 Ne pas utiliser apr s la date de p remption imprim e sur le flacon Si les r actifs sont conserv s dans des conditions autres que celles indiqu es cel
24. t tre d shydrat es claircies et mont es a l aide d un milieu de montage permanent Coupes deparaffinees Il est recommand de pr traiter les coupes de tissus fix es au formol et incluses en paraffine qui ont t deparaffinees a l aide du PT Link de Dako et de suivre la m me proc dure que celle d crite pour les coupes incluses en paraffine Apr s coloration un montage aqueux ou permanent des lames est recommande Les coupes de tissus ne doivent pas s cher lors du traitement ni lors de la proc dure de coloration immunohistochimique suivante Pour une meilleure adh rence des coupes de tissus sur les lames de verre il est recommande d utiliser des lames FLEX IHC Microscope Slides r f K8020 Le systeme de visualisation recommand est le systeme EnVision FLEX Mouse High pH Dako Autostainer Autostainer Plus r f K8012 Les tapes de coloration et les temps d incubation sont preprogrammes dans le logiciel des appareils Dako Autostainer Autostainer Plus l aide des protocoles suivants Protocole mod le FLEXRTU2 volume d application de 200 uL ou FLEXRTU3 volume d application de 300 uL Programme automatique mlh sans contre coloration ou mIhH avec contre coloration L tape Auxiliary doit tre r gl e sur rinse buffer lors des cycles de coloration avec lt 10 lames Pour les cycles de coloration de gt 10 lames l amp tape Auxiliary doit tre r gl e sur none Cela garant
25. ts in the pathogenesis of human cancer J Clin Oncol 2003 21 1174 9 8 Lanza G Gafa R Maestri Santini A Matteuzzi M Cavazzini L Immunohistochemical pattern of MLH1 MSH2 expression is related to clinical and pathological features in colorectal adenocarcinomas with microsatellite instability Mod Pathol 2002 15 741 9 9 Peir G Diebold J Mayr D Baretton GB Kimmig R Schmidt M et al Prognostic relevance of hMLH1 hMSH2 and BAX protein expression in endometrial carcinoma Mod Pathol 2001 14 777 83 10 Wilentz RE Goggins M Redston M Marcus VA Adsay NV Sohn TA et al Genetic immunohistochemical and clinical features of medullary carcinoma of the pancreas A newly described and characterized entity Am J Pathol 2000 156 1641 51 11 Giarnieri E Mancini R Pisani T Alderisio M Vechione A MSH2 Mih1 Fhit p53 Bcl 2 and Bax Expression in Invasive and in Situ Squamous Cell Carcinoma of thee Uterine Cervix Clin Cancer Res 2000 6 3600 6 12 Kawaguchi K Yashima K Koda M Tsutsumi A Kitaoka S Andachi H Hosoda A Kishimoto Y Shiota G Murawaki Y Fhit expression in human gastric adenomas and intramucosal carcinomas correlation with Mlh1 expression and gastric phenotype Br J Cancer 2004 90 672 7 13 Ponti G Losi L Pedroni M Lucci Cordisco E Di Gregorio C Pellacani G et al Value of MLH1 and MSH2 mutations in the appearance of Muir Torre syndrome phenotype in HNPCC patients presenting sebaceous gland tumors or k
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