FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human Cytokeratin 20 Clone
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1. 20 distinct CK polypeptides have been revealed in various human epithelial cells and their malignant counterparts 1 2 7 They can be divided into an acidic type I and a neutral basic type Il subfamily CK20 a 46 kDa protein is less acidic than the other type cytokeratins CK20 positivity 5 100 CK 20 positive tumor cells has been reported in the vast majority of adenocarcinomas of the colon mucinous ovarian tumors transitional cell and Merkel cell carcinomas and frequently also in adenocarcinomas of the stomach 50 bile system 75 and pancreas 40 Less than 2 of breast and lung adenocarcinomas and squamous cell carcinomas were positive while adenocarcinomas of the ovary non mucinous and endometrium and renal cell and small cell carcinomas showed only scattered positive cells in some cases 1 Refer to Dako s General Instructions for Immunohistochemical Staining or the detection system instructions of IHC procedures for 1 Principle of Procedure 2 Materials Required Not Supplied 3 Storage 4 Specimen Preparation 5 Staining Procedure 6 Quality Control 7 Troubleshooting 8 Interpretation of Staining 9 General Limitations Ready to use monoclonal mouse antibody provided in liquid form in a buffer containing stabilizing protein and 0 015 mol L sodium azide Clone K 20 8 1 Isotype IgG2a kappa CK20 isolated by SDS PAGE from cytoskeletal material obtained from human duodenal mucosa 1 In Western immuno2. 9 FLEX Monoclonal Mouse Anti Human Cytokeratin 20 Clone K 20 8 Ready to Use CE Dako Autostainer Autostainer Plus Code IS777 ENGLISH Intended use Synonym for antigen Summary and explanation Reagent provided Immunogen Specificity Precautions Storage Specimen preparation including materials required but not supplied Staining procedure including materials required but not supplied 115229 002 For in vitro diagnostic use FLEX Monoclonal Mouse Anti Human Cytokeratin 20 Clone K 20 8 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus is intended for use in immunohistochemistry together with Dako Autostainer Autostainer Plus instruments This antibody labels normal and abnormal gastric and intestinal epithelium urothelium and Merkel cells 1 2 and this antibody is of particular value in the classification of carcinomas originating from these cell types 1 3 5 The clinical interpretation of any staining or its absence should be complemented by morphological studies using proper controls and should be evaluated within the context of the patient s clinical history and other diagnostic tests by a qualified pathologist Protein IT 6 Cytokeratin 20 CK20 belongs to the intermediate filament proteins which create a cytoskeleton in almost all cells In contrast to other intermediate filaments cytokeratins CKs are made up of a highly complex multigene family of 40 to 68 kDa polypeptides 1 7
3. 3 Aufbewahrung 4 Vorbereitung der Probe 5 F rbeverfahren 6 Qualit tskontrolle 7 Fehlersuche und behebung 8 Auswertung der F rbung 9 Allgemeine Beschr nkungen Gebrauchsfertiger monoklonaler Maus Antik rper in fl ssiger Form in einem Puffer der stabilisierendes Protein und 0 015 mol L Natriumazid enth lt Klon K 20 8 1 Isotyp IgG2a Kappa Mit SDS PAGE aus Zytoskelettmaterial das aus menschlicher Duodenalmukosa 1 gewonnen wurde isoliertes CK20 Beim Western Immunblotting von durch SDS PAGE abgeschiedenen Zytoskelettproteinen aus der menschlichen Duodenalmukosa markiert der Antik rper ein 46 kDa Polypeptid entsprechend CK20 1 1 Nur f r Fachpersonal bestimmt 2 Dieses Produkt enth lt Natriumazid NaN eine in reiner Form u erst giftige Chemikalie Natriumazid kann auch in als ungef hrlich eingestuften Konzentrationen mit Blei und Kupferrohren reagieren und hochexplosive Metallazide bilden Nach der Entsorgung stets mit viel Wasser nachsp len um Metallazidansammlungen in den Leitungen vorzubeugen 3 Wie alle Produkte biologischen Ursprungs m ssen auch diese entsprechend gehandhabt werden 4 Geeignete Schutzkleidung tragen um Augen und Hautkontakt zu vermeiden 5 Nicht verwendete L sung ist entsprechend rtlichen bundesstaatlichen und staatlichen Richtlinien zu entsorgen Bei 2 8 aufbewahren Nach Ablauf des auf dem Fl schch en aufgedruckten Verfalldatums nicht mehr verwenden Werden die R
4. de cellules positives a t observ e sur 9 tumeurs du poumon sur 65 1 tumeur du sein sur 20 et 2 tumeurs de l endometre sur 11 Un carcinome r nal cellules claires sur 19 tait positif pour 10 50 des cellules 3 Aucun carcinome ovarien primitif sur 10 et aucun m soth liome sur 5 ne s est av r positif l anticorps 5 La CK20 peut occasionnellement tre exprim e dans les ad nocarcinomes du sein et du poumon et dans les carcinomes cellules squameuses 1 3 Moins de 5 de cellules positives la CK 20 peuvent tre pr sentes dans diff rents tissus qui ne sont g n ralement pas consid r s comme positifs la CK 20 1 Zur In vitro Diagnostik FLEX Monoclonal Mouse Anti Human Cytokeratin 20 Clone K 20 8 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus ist zur Verwendung in der Immunhistochemie in Verbindung mit Dako Autostainer Autostainer Plus Ger ten bestimmt Dieser Antik rper markiert gesunde und pathologische gastrointestinale Epithel Urothel und Merkel Zellen 1 2 Dieser Antik rper dient besonders zur Klassifizierung von Karzinomen die von diesen Zelltypen 1 3 5 verursacht werden Die klinische Auswertung einer eventuell eintretenden F rbung sollte durch morphologische Studien mit ordnungsgem en Kontrollen erg nzt werden und von einem qualifizierten Pathologen unter Ber cksichtigung der Krankengeschichte und anderer Diagnostiktests des Patienten vorgenommen werden Protein IT 6
5. CK20H mit Gegenf rbung Bei F rbedurchl ufen mit h chstens 10 Objekttr gern sollte der Zusatz Schritt auf Puffersp lgang eingestellt werden F r F rbedurchl ufe mit mehr als 10 Objekttr gern den Zusatz Schritt auf Keine einstellen Dieses gew hrleistet vergleichbare Waschzeiten Alle Inkubationsschritte sollten bei Raumtemperatur durchgef hrt werden N here Einzelheiten bitte dem Benutzerhandbuch f r das jeweilige Ger t entnehmen Wenn die F rbeprotokolle auf dem verwendeten Dako Autostainer Ger t nicht verf gbar sind bitte den Technischen Kundendienst von Dako verst ndigen Optimale Bedingungen k nnen je nach Probe und Pr parationsverfahren unterschiedlich sein und sollten vom jeweiligen Labor selbst ermittelt werden Falls der beurteilende Pathologe eine andere F rbungsintensit t w nscht kann ein Anwendungsspezialist oder Kundendiensttechniker von Dako bei der Neuprogrammierung des Protokolls helfen Die Leistung des angepassten Protokolls muss verifiziert werden indem gew hrleistet wird dass das F rbemuster mit dem unter Leistungsmerkmale beschriebenen F rbemuster identisch ist Die Gegenf rbung in H matoxylin sollte mit EnVisionTM FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8018 ausgef hrt werden Empfohlen wird ein nichtw ssriges permanentes Fixiermittel Positiv und Negativkontrollen sollten zur gleichen Zeit und mit demselben Protokoll wie die Patientenproben
6. Cytokeratin 20 CK 20 geh rt zu den intermedi ren Filamentproteinen die in nahezu allen Zellen ein Zytoskelett bilden Im Gegensatz zu anderen intermedi ren Filamentproteinen bestehen Zytokeratine ZK aus einer hochkomplexen Multigenfamilie aus 40 bis 68 kDa Polypeptiden 1 7 Bisher wurden 20 unterschiedliche ZK Polypeptide in verschiedenen menschlichen Epithelzellen und deren malignen Entsprechungen 1 2 7 nachgewiesen Die ZK lassen sich in einen sauren Typ A Klasse I und einen neutral basischen Typ B Klasse Il unterteilen CK20 ein 46 kDa Protein ist weniger sauer als die Zytokeratine vom Typ I In der gro en Mehrzahl von Adenokarzinomen des Dickdarms muzin sen Eierstock Tumoren Karzinomen der bergangsepithel und Merkel Zellen sowie h ufig auch in Adenokarzinomen des Magens 50 des Gallensystems 75 und des Pankreas 40 wurden positive Befunde auf CK 20 ermittelt 5 100 CK 20 positive Tumorzellen Bei Adenokarzinomen der Brust und der Lunge sowie Plattenepithelkarzinomen waren 2 positiv wogegen Adenokarzinome der Eierst cke nicht muzin s und der Uterusschleimhaut sowie Nierenzellen und kleinzellige Karzinome nur in wenigen F llen vereinzelte positive Zellen 1 aufwiesen Folgende Angaben bitte den Allgemeinen Richtlinien zur immunhistochemischen F rbung von Dako oder den Anweisungen des Detektionssystems f r IHC Verfahren entnehmen 1 Verfahrensprinzip 2 Erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien
7. Vorbehandlung der formalinfixierten paraffineingebetteten Schnitte mit dem 3 in 1 Probenvorbereitungsverfahren f r Dako PT Link wird empfohlen Vorbehandlung gem der Beschreibung in der Packungsbeilage f r EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code Nr K8010 K8004 durchf hren Hinweis Nach dem F rben m ssen die Schnitte dehydriert gekl rt und mit permanentem Einbettmedium auf den Objekttr ger aufgebracht werden Entparaffinierte Schnitte Eine Vorbehandlung der entparaffinierten formalinfixierten paraffineingebetteten Gewebeschnitte mit Dako PT Link nach demselben Verfahren wie f r die paraffineingebetteten Schnitte beschrieben wird empfohlen Die Objekttr ger nach dem F rben mit einem w ssrigen oder permanenten Einbettmedium bedecken Die Gewebeschnitte d rfen w hrend der Behandlung oder des anschlie enden immunhistochemischen F rbeverfahrens nicht austrocknen Zur besseren Haftung der Gewebeschnitte an den Glasobjekttr gern wird die Verwendung von FLEX IHC Microscope Slides Code Nr K8020 empfohlen Das empfohlene Visualisierungssystem ist EnVision FLEX High pH Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8010 Die F rbeschritte und Inkubationszeiten sind in der Software der Dako Autostainer Autostainer Plus Ger te mit den folgenden Protokollen vorprogrammiert Matrixprotokoll FLEXRTU2 200 uL Abgabevolumen oder FLEXRTUS3 300 uL Abgabevolumen Autoprogram CK20 ohne Gegenf rbung oder
8. contient de l azide de sodium NaN produit chimique hautement toxique dans sa forme pure Aux concentrations du produit bien que non class comme dangereux l azide de sodium peut r agir avec le cuivre et le plomb des canalisations et former des accumulations d azides m talliques hautement explosifs Lors de l limination rincer abondamment l eau pour viter toute accumulation d azide m tallique dans les canalisations 3 Comme avec tout produit d origine biologique des proc dures de manipulation appropri es doivent tre respect es 4 Porter un v tement de protection appropri pour viter le contact avec les yeux et la peau 5 Les solutions non utilis es doivent tre limin es conform ment aux r glementations locales et nationales Conserver entre 2 et 8 Ne pas utiliser apr s la date de p remption imprim e sur le flacon Si les r actifs sont conserv s dans des conditions autres que celles indiqu es celles ci doivent tre valid es par l utilisateur Il n y a aucun signe vident indiquant l instabilit de ce produit Par cons quent des contr les positifs et n gatifs doivent tre test s en m me temps que les chantillons de patient Si une coloration inattendue est observ e qui ne peut tre expliqu e par un changement des proc dures du laboratoire et en cas de suspicion d un probleme li l anticorps contacter l assistance technique de Dako L anticorps peut tre utilis pour le
9. et intestinal normal et anormal l uroth lium et les cellules de Merkel 1 2 et il s av re particuli rement utile dans la classification des carcinomes issus de ces types de cellules 1 3 5 L interpretation clinique de toute coloration ou son absence doit tre compl t e par des tudes morphologiques en utilisant des contr les appropri s et doit tre valu e en fonction des ant c dents cliniques du patient et d autres tests diagnostiques par un pathologiste qualifi Prot ine IT 6 La cytok ratine 20 CK20 fait partie des filaments interm diaires qui cr ent un cytosquelette dans presque toutes les cellules la diff rence des autres filaments interm diaires les cytok ratines CK sont constitu es d une famille multig nique hautement complexe de polypeptides dont les poids mol culaires varient entre 40 et 68 kDa 1 7 On a recens 20 CK diff rentes dans diverses cellules pith liales humaines et leurs homologues tumorales 1 2 7 Les CK peuvent tre divis es en sous familles type acide et type II neutre basique La CK20 une prot ine de 46 kDa est moins acide que les autres cytok ratines de type I La CK20 a t d tect e 5 100 de cellules tumorales positives la CK 20 dans la majorit des ad nocarcinomes du c lon des tumeurs ovariennes mucineuses des carcinomes cellules transitionnelles et cellules de Merkel et galement tr s souvent dans les adenocarcinomes de l estomac 5
10. getestet werden Das positive Kontrollgewebe muss Dickdarmzellen enthalten und die Zellen Strukturen m ssen in allen positiven Proben die f r dieses Gewebe unter Leistungsmerkmale beschriebenen Reaktionsmuster aufweisen Das empfohlene Negativ Kontrollreagenz ist FLEX Negative Control Mouse Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr IS750 Mit diesem Antik rper markierte Zellen weisen ein zytoplasmatisches F rbemuster auf Gesundes Gewebe Der Antik rper markiert gesundes Urothel 1 4 und das vollst ndig entwickelte Epithel entlang der Zotten der Duodenalmukosa 1 In einer Reihe von epithelfreien Geweben wie z B glatter Muskulatur Blutgef w nden Lymphknoten und Tumorstroma 1 wurde keine CK20 Immunreaktivit t nachgewiesen In s ulenf rmigen Epithelzellen im Dickdarm zeigen die Luminalzellen eine m ige bis starke F rbereaktion die Basal und die Intermedi rzellen dagegen nur eine schwache bis m ige F rbereaktion Pathologisches Gewebe In Dickdarm Adenokarzinomen markierte der Antik rper 26 von 27 Tumoren 96 21 78 zeigten eine F rbung in mehr als 50 der Zellen 3 Von 51 Patienten mit Urothelpapillom der Blase zeigten 10 eine Markierung von Urothelzellen an der Oberfl che gesunde Markierung durch den Antik rper Keiner dieser Patienten wies bei Nachuntersuchungen weitere Tumore auf Dagegen zeigten 30 Patienten 73 CK20 Expression in allen Zellschichten pathologische Markierung und bildeten
11. marquage des coupes de tissus inclus en paraffine et fix s au formol L epaisseur des coupes d chantillons de tissu doit tre d environ 4 um Un pretraitement avec d masquage d pitope induit par la chaleur HIER est n cessaire avec le Dako PT Link R f PT100 PT101 Pour plus de d tails se r f rer au Guide d utilisation du PT Link Des r sultats optimaux sont obtenus en pr traitant les tissus l aide de la EnVisionT FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x R f K8010 K8004 Coupes incluses en paraffine le pr traitement des coupes tissulaires fix es au formol et incluses en paraffine est recommand l aide de la proc dure de pr paration d chantillon 3 en un pour le Dako PT Link Suivre la proc dure de pr traitement indiqu e dans la notice de la EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x R f K8010 K8004 Remarque apr s coloration les coupes doivent tre d shydrat es lav es et mont es l aide d un milieu de montage permanent Coupes d paraffin es le pr traitement des coupes tissulaires d paraffin es fix es au formol et incluses en paraffine est recommand l aide du Dako PT Link en suivant la m me proc dure que pour les coupes incluses en paraffine Apr s coloration un montage aqueux ou permanent des lames est recommand Les coupes de tissus ne doivent pas s cher lors du traitement ni lors de la proc dure de coloration immunohistochimique suivante Pour un
12. weitere Tumore 4 aus 3 von 4 metastatischen gastrischen Tumoren wurden durch die Antik rper 5 markiert Eine konzentrierte Immunf rbung mit dem Antik rper weniger als 10 positive Zellen wurde bei 9 von 65 Lungentumoren 1 von 20 Brusttumoren und 2 von 11 Tumoren des Endometriums beobachtet 1 von 19 Nierenzellkarzinomen Klarzellen waren in 10 50 der Zellen 3 positiv Keines der 10 prim ren Eierstockkarzinome und keines der 5 Mesotheliome wurde durch den Antik rper 5 als positiv bestimmt CK20 kann gelegentlich in Adenokarzinomen von Brust und Lunge und in Plattenepithelkarzinomen 1 3 exprimiert werden Bis zu 5 CK 20 positive Zellen k nnen in verschiedenen Geweben auftreten die allgemein nicht als CK 20 positiv gelten 1 References References Literatur 1 Moll R L we A Laufer J Franke WW Cytokeratin 20 in human carcinomas A new histodiagnostic marker detected by monoclonal antibodies Am J Pathol 1992 140 427 47 2 Moll R Cytokeratins as markers of differentiation in the diagnosis of epithelial tumors In Herrmann Harris editors Subcellular biochemistry Volume 31 New York Plenum Press 1998 p 205 62 3 Savera AT Torres FX Linden MD Bacchi CE Gown AM Zarbo RJ Primary versus metastatic pulmonary adenocarcinoma An immunohistochemical study using villin and cytokeratins 7 and 20 Appl Immunohistochem 1996 4 86 94 4 Harnden P Mahmood N Southgate J Expression of cytokeratin 20 redefines urothe
13. 0 du syst me biliaire 75 et du pancr as 40 Moins de 2 des ad nocarcinomes du sein et du poumon et des carcinomes cellules squameuses sont positifs alors que les adenocarcinomes de l ovaire non mucineux et de l endometre ainsi que les carcinomes cellules r nales et petites cellules pr sentent uniquement des cellules positives isol es dans certains cas 1 Se r f rer aux Instructions g n rales de coloration immunohistochimique de Dako ou aux instructions du systeme de d tection relatives aux proc dures IHC pour plus d informations concernant les points suivants 1 Principe de proc dure 2 Mat riels requis mais non fournis 3 Conservation 4 Pr paration des chantillons 5 Proc dure de coloration 6 Contr le qualit 7 D pannage 8 Interpr tation de la coloration 9 Limites g n rales Anticorps monoclonal de souris pr t l emploi fourni sous forme liquide dans un tampon contenant une prot ine stabilisante et 0 015 mol L d azide de sodium Clone K 20 8 1 Isotype IgG2a kappa CK20 isol e par immunoblot PAGE en pr sence de SDS partir de mat riau cytosquelettique provenant de muqueuse duod nale humaine 1 Dans les analyses de prot ines cytosquelettiques de la muqueuse duod nale humaine r alis es par Western immunoblot PAGE en pr sence de SDS l anticorps marque un polypeptide de 46 kDa correspondant la CK20 1 1 Pour utilisateurs professionnels 2 Ce produit
14. 4 um Pre treatment with heat induced epitope retrieval HIER is required using Dako PT Link Code PT100 PT101 For details please refer to the PT Link User Guide Optimal results are obtained by pretreating tissues using EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code K8010 K8004 Paraffin embedded sections Pre treatment of formalin fixed paraffin embedded tissue sections is recommended using the 3 in 1 specimen preparation procedure for Dako PT Link Follow the pre treatment procedure outlined in the package insert for EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code K8010 K8004 Note After staining the sections must be dehydrated cleared and mounted using permanent mounting medium Deparaffinized sections Pre treatment of deparaffinized formalin fixed paraffin embedded tissue sections is recommended using Dako PT Link and following the same procedure as described for paraffin embedded sections After staining the slides should be mounted using aqueous or permanent mounting medium The tissue sections should not dry out during the treatment or during the following immunohistochemical staining procedure For greater adherence of tissue sections to glass slides the use of FLEX IHC Microscope Slides Code K8020 is recommended The recommended visualization system is EnVision FLEX High pH Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8010 The staining steps and incubation times are pre programmed into the softw
15. are of Dako Autostainer Autostainer Plus instruments using the following protocols Template protocol FLEXRTU2 200 uL dispense volume or FLEXRTUS3 300 uL dispense volume Autoprogram CK20 without counterstaining or CK20H with counterstaining The Auxiliary step should be set to rinse buffer in staining runs with lt 10 slides For staining runs with gt 10 slides the Auxiliary step should be set to none This ascertains comparable wash times All incubation steps should be performed at room temperature For details please refer to the Operator s Manual for the dedicated instrument If the protocols are not available on the used Dako Autostainer instrument please contact Dako Technical Services Optimal conditions may vary depending on specimen and preparation methods and should be determined by each individual laboratory If the evaluating pathologist should desire a different staining intensity a Dako Application Specialist Technical Service Specialist can be contacted for information on re programming of the protocol Verify that the performance of the adjusted protocol is still valid by evaluating that the staining pattern is identical to the staining pattern described in Performance characteristics Counterstaining in hematoxylin is recommended using EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8018 Non IS777 EFG MNI 2009 12 04 p 1 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glo
16. blotting of SDS PAGE separated cytoskeletal proteins from human duodenal mucosa the antibody labels a 46 kDa polypeptide corresponding to CK20 1 1 For professional users 2 This product contains sodium azide NaN a chemical highly toxic in pure form At product concentrations though not classified as hazardous sodium azide may react with lead and copper plumbing to form highly explosive build ups of metal azides Upon disposal flush with large volumes of water to prevent metal azide build up in plumbing 3 As with any product derived from biological sources proper handling procedures should be used 4 Wear appropriate Personal Protective Equipment to avoid contact with eyes and skin 5 Unused solution should be disposed of according to local State and Federal regulations Store at 2 8 Do not use after expiration date stamped on vial If reagents are stored under any conditions other than those specified the conditions must be verified by the user There are no obvious signs to indicate instability of this product Therefore positive and negative controls should be run simultaneously with patient specimens If unexpected staining is observed which cannot be explained by variations in laboratory procedures and a problem with the antibody is suspected contact Dako Technical Support The antibody can be used for labeling formalin fixed paraffin embedded tissue sections Tissue specimens should be cut into sections of approximately
17. e meilleure adh rence des coupes de tissus sur les lames de verre il est recommand d utiliser des lames FLEX IHC Microscope Slides R f K8020 Le syst me de visualisation recommand est le EnVision FLEX High pH Dako Autostainer Autostainer Plus R f K8010 Les tapes de coloration et d incubation sont preprogrammees dans le logiciel des instruments Dako Autostainer Autostainer Plus l aide des protocoles suivants IS777 EFG MNI 2009 12 04 p 2 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 9595 CVR No 33 21 13 17 Interpretation de la coloration Caracteristiques de performance DEUTSCH Verwendungszweck Synonym f r das Antigen Zusammenfassung und Erkl rung Mitgelieferte Reagenzien Immunogen Spezifit t Vorsichtsma nahmen Lagerung 115229 002 Protocole mod le FLEXRTU2 volume de distribution de 200 uL ou FLEXRTUS3 volume de distribution de 300 uL Autoprogram CK20 sans contre coloration ou CK20H avec contre coloration L tape Auxiliary doit tre r gl e sur rinse buffer lors des cycles de coloration avec lt 10 lames Pour les cycles de coloration de gt 10 lames l tape Auxiliary doit tre r gl e sur none Cela confirme des temps de lavage comparables Toutes les tapes d incubation doivent tre effectu es temp rature ambiante Pour plus de d tails se r f rer au Manuel de l op ra
18. eagenzien unter anderen als den angegebenen Bedingungen aufbewahrt m ssen diese Bedingungen vom Benutzer validiert werden Es gibt keine offensichtlichen Anzeichen f r eine eventuelle Produktinstabilit t Positiv und Negativkontrollen sollten daher zur gleichen Zeit wie die Patientenproben getestet werden Falls es zu einer unerwarteten F rbung kommt die sich nicht durch Unterschiede bei Laborverfahren erklaren lasst und auf ein Problem mit dem Antik rper hindeutet ist der technische Kundendienst von Dako zu verst ndigen IS777 EFG MNI 2009 12 04 p 3 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 9595 CVR No 33 21 13 17 Vorbereitung der Probe und erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien F rbeverfahren und erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien Auswertung der F rbung Leistungsmerkmale Der Antik rper eignet sich zur Markierung von formalinfixierten und paraffineingebetteten Gewebeschnitten Gewebeproben sollten in Schnitte von ca 4 um St rke geschnitten werden Die Vorbehandlung durch hitzeinduzierte Epitopdemaskierung HIER mit Dako PT Link Code Nr PT100 PT101 ist erforderlich Weitere Informationen hierzu siehe PT Link Benutzerhandbuch Optimale Ergebnisse k nnen durch Vorbehandlung der Gewebe mit EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code Nr K8010 K8004 erzielt werden Paraffineingebettete Schnitte Die
19. lial papillomas of the bladder Lancet 1999 353 974 77 5 Wauters CCAP Smedts F Gerrits LGM Bosman FT Ramaekers FCS Keratins 7 and 20 as diagnostic markers of carcinomas metastatic to the ovary Hum Pathol 1995 26 852 55 6 Moll R Schiller DL Franke WW Identification of protein IT of the intestinal cytoskeleton as a novel type cytokeratin with unusual properties and expression patterns J Cell Biol 1990 111 567 80 7 Moll R Franke WW Schiller DL Geiger B Krepler R The catalog of human cytokeratins patterns of expression in normal epithelia tumors and cultured cells Cell 1982 31 11 24 Explanation of symbols Explication des symboles Erl uterung der Symbole 115229 002 Catalogue number Reference catalogue Bestellnummer In vitro diagnostic medical device Dispositif medical de diagnostic in vitro In Vitro Diagnostikum Consult instructions for use Voir les instructions d utilisation Gebrauchsanweisung beachten Temperature limitation Use by Limites de temp rature Utiliser avant Zul ssiger Temperaturbereich Verwendbar bis Manufacturer Fabricant Contains sufficient for lt n gt tests Contenu suffisant pour lt n gt tests Inhalt ausreichend f r lt n gt Tests Hersteller Batch code Numero de lot Chargenbezeichnung IS777 EFG MNI 2009 12 04 p 4 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 9595 CVR No 33 21 13 17
20. ontrol Mouse Dako Autostainer Autostainer Plus R f IS750 Les cellules marqu es par l anticorps pr sentent une coloration cytoplasmique Tissus sains L anticorps marque l urothelium normal 1 4 et l pith lium mature qui tapisse les villosit s de la muqueuse duod nale 1 Aucune immunor activit la CK20 n a t d tect e dans plusieurs tissus non pith liaux test s muscle lisse paroi de vaisseau sanguin ganglion lymphatique et stroma tumoral 1 Dans les cellules pith liales colonnaires du c lon les cellules luminales pr sentent une coloration mod r e forte alors que la coloration des cellules basales interm diaires est faible mod r e Tissus tumoraux Dans l ad nocarcinome du c lon l anticorps a marqu 26 tumeurs sur 27 96 21 78 de ces tumeurs pr sentaient une coloration de plus de 50 des cellules 3 Sur 51 patients atteints d un papillome uroth lial de la vessie 10 ont pr sent un marquage des cellules uroth liales superficielles coloration normale avec l anticorps Aucun de ces patients n a d velopp d autre tumeur au cours du suivi En revanche 30 patients 73 pr sentaient une expression de la CK20 dans toutes les couches cellulaires coloration anormale et ont d velopp d autres tumeurs 4 Trois tumeurs gastriques m tastatiques sur 4 ont t marqu es par l anticorps 5 Une coloration immunologique focale par l anticorps moins de 10
21. strup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 9595 CVR No 33 21 13 17 Staining interpretation Performance characteristics FRANCAIS Utilisation pr vue Synonyme de l antig ne R sum et explication R actifs fournis Immunog ne Sp cificit Pr cautions Conservation Pr paration des chantillons y compris le mat riel requis mais non fourni Proc dure de coloration y compris le mat riel requis mais non fourni 115229 002 aqueous permanent mounting medium is recommended Positive and negative controls should be run simultaneously using the same protocol as the patient specimens The positive control tissue should include colon and the cells structures should display reaction patterns as described for this tissue in Performance characteristics in all positive specimens The recommended negative control reagent is FLEX Negative Control Mouse Dako Autostainer Autostainer Plus Code IS750 Cells labeled by the antibody display cytoplasmic staining Normal tissues The antibody labels normal urothelium 1 4 and the mature epithelium lining the villi of duodenal mucosa 1 CK20 immunoreactivity has not been detected in a number of non epithelial tissues tested such as smooth muscle blood vessel walls lymph nodes and tumor stroma 1 In columnar epithelial cells in colon the luminal cells show a moderate to strong staining reaction whereas the basal to intermediate cells show a
22. teur sp cifique l instrument Si les protocoles ne sont pas disponibles sur l instrument Dako Autostainer utilis contacter le service technique de Dako Les conditions optimales peuvent varier en fonction du pr l vement et des m thodes de pr paration et doivent tre d termin es par chaque laboratoire individuellement Si le pathologiste qui r alise l valuation d sire une intensit de coloration diff rente un sp cialiste d application sp cialiste du service technique de Dako peut tre contact pour obtenir des informations sur la re programmation du protocole V rifier que l ex cution du protocole modifi est toujours valide en v rifiant que le sch ma de coloration est identique au sch ma de coloration d crit dans les Caract ristiques de performance Il est recommand d effectuer une contre coloration l aide d h matoxyline EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus R f K8018 L utilisation d un milieu de montage permanent non aqueux est recommand e Des contr les positifs et n gatifs doivent tre r alis s en m me temps et avec le m me protocole que les chantillons du patient Le contr le de tissu positif doit comprendre le c lon et les cellules structures doivent pr senter des sch mas de r action tels que d crits pour ces tissus dans les Caract ristiques de performance pour tous les chantillons positifs Le contr le n gatif recommand est le FLEX Negative C
23. weak to moderate staining reaction Abnormal tissues In colonic adenocarcinoma the antibody labeled 26 of 27 tumors 96 21 78 displayed staining in more than 50 of the cells 3 Of 51 patients with urothelial papillomas of the bladder 10 showed labeling of superficial urothelial cells normal labeling with the antibody None of these patients showed further tumors during the follow up By contrast 30 patients 73 showed CK20 expression in all cell layers abnormal labeling and developed further tumors 4 3 out of 4 metastatic gastric tumors were labeled by the antibody 5 Focal immunostaining with the antibody less than 10 positive cells was observed in 9 of 65 lung 1 of 20 breast and 2 of 11 endometrial tumors 1 of 19 clear cell type renal cell carcinomas was positive in 10 50 of the cells 3 None of 10 primary ovarian carcinomas and none of 5 mesotheliomas were found positive with the antibody 5 CK20 may occasionally be expressed in breast and lung adenocarcinomas and in squamous cell carcinomas 1 3 Less than 5 CK 20 positive cells may be present in a number of tissues not generally considered CK 20 positive 1 Pour utilisation diagnostique in vitro FLEX Monoclonal Mouse Anti Human Cytokeratin 20 clone K 20 8 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus est destin a une utilisation en immunohistochimie avec les instruments Dako Autostainer Autostainer Plus Cet anticorps marque l epithelium gastrique
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