FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human BCL6 Protein Clone
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1. 9 FLEX Monoclonal Mouse Anti Human BCL6 Protein Clone PG B6p Ready to Use CE Dako Autostainer Autostainer Plus Code IS625 ENGLISH Intended use Summary and explanation Reagent provided Immunogen Specificity Precautions Storage Specimen preparation including materials required but not supplied Staining procedure including materials required but not supplied 115279 002 For in vitro diagnostic use FLEX Monoclonal Mouse Anti Human BCL6 Protein Clone PG B6p Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus is intended for use in immunohistochemistry together with Dako Autostainer Autostainer Plus instruments This antibody is useful for classification of diffuse large B cell lymphomas follicular lymphomas and Burkitt s lymphomas 1 The clinical interpretation of any staining or its absence should be complemented by morphological studies using proper controls and should be evaluated within the context of the patient s clinical history and other diagnostic tests by a qualified pathologist The proto oncogene BCL6 encodes a 92 98 kDa POZ zinc finger protein Through its six C terminal zinc finger motifs the BCL6 protein binds to specific DNA sequences of target genes where it acts as a transcriptional repressor 2 3 BCL6 expression may be ubiquitous as low levels are detected in many tissues However high levels of BCL6 expression are limited to cells of the B Iymphoid linage and skeletal m2. 115279 002 Le syst me de visualisation recommand est le EnVision FLEX Mouse High pH Dako Autostainer Autostainer Plus R f K8012 Les tapes de coloration et d incubation sont pr programm es dans le logiciel des instruments Dako Autostainer Autostainer Plus l aide des protocoles suivants Protocole mod le FLEXRTU2 volume de distribution de 200 uL ou FLEXRTUS volume de distribution de 300 uL Autoprogram BCL6 sans contre coloration ou BCL6H avec contre coloration L tape Auxiliary doit tre r gl e sur rinse buffer lors des cycles de coloration avec lt 10 lames Pour les cycles de coloration de gt 10 lames l etape Auxiliary doit tre r gl e sur none Cela garantit des temps de lavage comparables Toutes les tapes d incubation doivent tre effectu es temp rature ambiante Pour plus de d tails se r f rer au Manuel de l op rateur sp cifique l instrument Si les protocoles ne sont pas disponibles sur l instrument Dako Autostainer utilis contacter le service technique de Dako Les conditions optimales peuvent varier en fonction du pr l vement et des m thodes de pr paration et doivent tre d termin es par chaque laboratoire individuellement Si le pathologiste qui r alise l valuation d sire une intensit de coloration diff rente un sp cialiste d application sp cialiste du service technique de Dako peut tre contact pour obtenir des informations sur la re
3. 16 16 small lymphocytic B CLL 6 6 hairy cell leukemias 22 22 mantle cell leukemias and 14 14 marginal zone lymphomas Of T cell lymphomas or leukemias 4 8 anaplastic large cell lymphomas were positive whereas no labeling was observed in 10 10 acute Iymphoblastic lymphomas 3 3 mycosis fungoides 6 6 peripheral T cell lymphomas and 2 2 peripheral T cell AILD like lymphomas In Hodgkin s disease 5 5 nodular lymphocyte predominance 1 4 nodular sclerosis and 1 3 mixed cellularity types were positive 1 In systemic AIDS related non Hodgkin s Iymphoma the antibody labeled 11 11 small noncleaved cell lymphomas 7 7 large noncleaved cell lymphomas LNCCL and 2 9 large cell immunoblastic lymphoma plasmacytoid IBLP In AIDS primary central nervous system lymphomas the antibody labeled 4 4 LNCCL and none of 4 cases of IBLP No labeling was observed in 5 cases of primary effusion lymphoma PEL and in 6 AIDS PEL cell lines 4 Pour utilisation diagnostique in vitro FLEX Monoclonal Mouse Anti Human BCL6 Protein Clone PG B6p Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus est destine a une utilisation en immunohistochimie avec les instruments Dako Autostainer Autostainer Plus Cet anticorps est utile pour la classification des Iymphomes grands lymphocytes B diffus des Iymphomes folliculaires et des Iymphomes de Burkitt 1 L interpr tation clinique de toute coloration ou son absence doit tre compl t e par des tudes morphologiques
4. F r F rbedurchl ufe mit mehr als 10 Objekttr gern den Zusatz Schritt auf Keine einstellen Dieses gew hrleistet vergleichbare Waschzeiten Alle Inkubationsschritte sollten bei Raumtemperatur durchgef hrt werden N here Einzelheiten bitte dem Benutzerhandbuch f r das jeweilige Ger t entnehmen Wenn die F rbeprotokolle auf dem verwendeten Dako Autostainer Ger t nicht verf gbar sind bitte den Technischen Kundendienst von Dako verst ndigen Optimale Bedingungen k nnen je nach Probe und Pr parationsverfahren unterschiedlich sein und sollten vom jeweiligen Labor selbst ermittelt werden Falls der beurteilende Pathologe eine andere F rbungsintensit t w nscht kann ein Anwendungsspezialist oder Kundendiensttechniker von Dako bei der Neuprogrammierung des Protokolls helfen Die Leistung des angepassten Protokolls muss verifiziert werden indem gew hrleistet wird dass das F rbemuster mit dem unter Leistungsmerkmale beschriebenen F rbemuster identisch ist Die Gegenf rbung in H matoxylin sollte mit EnVision M FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8018 ausgef hrt werden Empfohlen wird ein nichtw ssriges permanentes Fixiermittel Positiv und Negativkontrollen sollten zur gleichen Zeit und mit demselben Protokoll wie die Patientenproben getestet werden Das positive Kontrollgewebe sollte Mandelgewebe enthalten und die Zellen Strukturen m ssen in allen positiven Proben die f r dieses Gewebe u
5. rologue comme les g nes d immunoglobuline La substitution du promoteur entra ne une d r gulation de l expression de la BCL6 ce qui peut tre associ la lymphomagen se 3 La r organisation de la BCL6 est l une des anomalies g n tiques les plus courantes dans le lymphome non hodgkinien lymphocytes B avec une fr quence particuli rement lev e 28 40 dans les cas de Iymphomes diffus grandes cellules 2 Se r f rer aux Instructions g n rales de coloration immunohistochimique de Dako ou aux instructions du syst me de d tection relatives aux proc dures IHC pour plus d informations concernant les points suivants 1 Principe de proc dure 2 Mat riels requis mais non fournis 3 Conservation 4 Pr paration des chantillons 5 Proc dure de coloration 6 Contr le qualit 7 D pannage 8 Interpr tation de la coloration 9 Limites g n rales Anticorps monoclonal de souris pr t l emploi fourni sous forme liquide dans un tampon contenant une prot ine stabilisante et 0 015 mol L d azide de sodium Clone PG B6p 1 Isotype IgG kappa Prot ine BCL6 recombinante glutathione S transf rase GST correspondant aux acides amin s 3 484 de la prot ine BCL6 humaine 1 Dans les analyses par Western blot des lysats totaux de cellules Bjab et de cellules EB3 transfect es par la BCL6 ou de cellules EB3 de contr le transfect es l anticorps n a marqu aucune bande ce qui laisse penser un manque
6. BCL6 transfizierten EB3 Zellen gebildet wurden zeigt eine Reaktion mit dem BCL6 entsprechenden Fragment von 95 kDa Bei mit Kontroll Plasmid transfizierten Rd Zellen BCL6 und EB3 Zellen wird keine Reaktion beobachtet 1 1 Nur f r Fachpersonal bestimmt 2 Dieses Produkt enth lt Natriumazid NaN eine in reiner Form u erst giftige Chemikalie Natriumazid kann auch in als ungef hrlich eingestuften Konzentrationen mit Blei und Kupferrohren reagieren und hochexplosive Metallazide bilden Nach der Entsorgung stets mit viel Wasser nachsp len um Metallazidansammlungen in den Leitungen vorzubeugen 3 Wie alle Produkte biologischen Ursprungs m ssen auch diese entsprechend gehandhabt werden 4 Geeignete Schutzkleidung tragen um Augen und Hautkontakt zu vermeiden 5 Nicht verwendete L sung ist entsprechend rtlichen bundesstaatlichen und staatlichen Richtlinien zu entsorgen Bei 2 8 aufbewahren Nach Ablauf des auf dem Fl schchen aufgedruckten Verfalldatums nicht mehr verwenden Werden die Reagenzien unter anderen als den angegebenen Bedingungen aufbewahrt m ssen diese Bedingungen vom Benutzer validiert werden Es gibt keine offensichtlichen Anzeichen f r eine eventuelle Produktinstabilit t Positiv und Negativkontrollen sollten daher zur gleichen Zeit wie die Patientenproben getestet werden Falls es zu einer unerwarteten F rbung kommt die sich nicht durch Unterschiede bei Laborverfahren erkl ren l sst und auf ein Problem
7. IBLP Beim AIDS assoziierten prim ren Lymphom des Zentralnervensystems PCNSL markierte der Antik rper 4 von 4 LNCCL und keinen der vier F lle von IBLP Keine Markierung ergab sich in 5 F llen eines prim ren Erguss Lymphoms PEL und bei 6 AIDS assoziierten PEL Zelllinien 4 References References Literatur 1 Flenghi L Bigerna B Fizzotti M Venturi S Pasqualucci L Pileri S et al Monoclonal antibodies PG B6a and PG B6p recognize respectively a highly conserved and a formol resistant epitope on the human BCL 6 protein amino terminal region Am J Pathol 1996 148 1543 55 2 Ye BH BCL 6 in the pathogenesis of non Hodgkin s lymphoma Cancer Invest 2000 18 356 65 3 Nakamura Y Internal deletions within the BCL6 gene in B cell non Hodgkin s lymphoma Leuk Lymphoma 2000 38 505 12 Carbone A Gaidano G Gloghini A Larocca LM Capello D Canzonieri V et al Differential expression of BCL 6 CD138 syndecan 1 and Epstein Barr virus encoded latent membrane protein 1 identifies distinct histogenetic subsets of acquired immunodeficiency syndrome related non Hodgkin s Iymphomas Blood 1998 91 747 55 Explanation of symbols L gende des symboles Erl uterung der Symbole 115279 002 Catalogue number Reference catalogue Bestellnummer In vitro diagnostic medical device Dispositif medical de diagnostic in vitro In vitro Diagnostikum Consult instructions for use Voir les instructions d utilisation Gebrauchsanw
8. Zeit f r E pitopdemaskierung 97 f r 20 1 Minuten auf 65 abk hlen lassen Schnitte mit auf Raumtemperatur gebrachtem EnVision FLEX Wash Buffer 10x Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8012 absp len Paraffineingebettete Schnitte Zur Probenpr paration kann f r Entparaffinierung und Epitopdemaskierung im PT Link auch ein modifiziertes Verfahren verwendet werden Weitere Informationen siehe PT Link Benutzerhandbuch Nach Abschluss des F rbeverfahrens m ssen die Schnitte dehydriert gekl rt und unter Verwendung eines permanenten Fixiermittels auf die Objekttr ger aufgebracht werden Die Gewebeschnitte d rfen w hrend der Behandlung oder w hrend des anschlie enden immunhistochemischen F rbeverfahrens nicht austrocknen Zur besseren Haftung der Gewebeschnitte an den Glasobjekttr gern wird die Verwendung von Dako Silanized Slides Code Nr S3003 empfohlen Das empfohlene Visualisierungssystem ist EnVision FLEX Mouse High pH Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8012 Die F rbeschritte und Inkubationszeiten sind in der Software der Dako Autostainer Autostainer Plus Ger te mit den folgenden Protokollen vorprogrammiert Matrix Protokoll FLEXRTU2 200 uL Abgabevolumen oder FLEXRTU3 300 uL Abgabevolumen Autoprogram BCL6 ohne Gegenf rbung oder BCL6H mit Gegenf rbung Bei F rbedurchl ufen mit h chstens 10 Objekttr gern sollte der Zusatz Schritt auf Puffersp lgang eingestellt werden
9. anaplasiques grandes cellules taient positifs alors qu aucune coloration n a t observ e dans 10 10 Iymphomes lymphoblastiques aigus 3 3 mycoses fongoides 6 6 lymphomes p riph riques lymphocytes T et 2 2 lymphomes p riph riques lymphocytes T de type AILD Dans la maladie de Hodgkin 5 cas de type nodulaire sur 5 pr dominance Iymphocytaire 1 cas scl rose nodulaire sur 4 et 1 cas cellularit mixte sur 3 taient positifs 1 Parmi les lymphomes non hodgkiniens li s au SIDA l anticorps a marqu 11 Iymphomes petites cellules non cliv es sur 11 7 lymphomes grandes cellules non clivees LNCCL sur 7 et 2 lymphomes malins larges cellules immunoblastiques plasmacytoides IBLP sur 9 Parmi les Iymphomes du syst me nerveux central primitifs associ s au SIDA l anticorps a marqu 4 LNCCL sur 4 et aucun des 4 cas d IBLP Aucun marquage n a t observ dans 5 cas de lymphomes effusion primaire LIP et 6 lign es cellulaires de LIP associ es au SIDA 4 Zur In vitro Diagnostik FLEX Monoclonal Mouse Anti Human BCL6 Protein Clone PG B6p Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus ist zur Verwendung in der Immunhistochemie in Verbindung mit Dako Autostainer Autostainer Plus Ger ten bestimmt Dieser Antik rper dient zur Klassifizierung gro zelliger diffuser B Zell Lymphome follikul rer Lymphome und Burkitt Lymphome 1 Die klinische Auswertung einer eventuell eintretenden F rbung sollte
10. celles ci doivent tre valid es par l utilisateur Il n y a aucun signe vident indiquant l instabilit de ce produit Par cons quent des contr les positifs et n gatifs doivent tre test s en m me temps que les chantillons de patient Si une coloration inattendue est observ e qui ne peut tre expliqu e par un changement des proc dures du laboratoire et en cas de suspicion d un probl me li l anticorps contacter l assistance technique de Dako L anticorps peut tre utilis pour le marquage des coupes de tissus inclus en paraffine et fix s au formol L paisseur des coupes d chantillons de tissu doit tre d environ 4 um Le pr traitement avec un d masquage d Epitope induit par la chaleur HIER est n cessaire Des r sultats optimaux sont obtenus en pr traitant les tissus l aide de la EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 10x Dako Autostainer Autostainer Plus R f K8012 K8014 Coupes d paraffin es Le pr traitement des coupes de tissus d paraffin s fix s au formol et inclus en paraffine est recommand l aide du Dako PT Link R f PT100 PT101 Pour plus de d tails se r f rer au Guide d utilisation du PT Link Suivre la proc dure de pr traitement indiqu e dans la notice pour la EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 10x Dako Autostainer Autostainer Plus R f K8012 K8014 Les param tres suivants doivent tre utilis s pour le PT Link temp rature de
11. control reagent is FLEX Negative Control Mouse Dako Autostainer Autostainer Plus Code 1S750 Cells labeled by the antibody show a diffuse microgranular staining confined to the nucleus Intense cytoplasmic staining unassociated with metaphase chromosomes is noted only in mitotic figures 1 Normal tissues In tonsil the antibody strongly labels the nuclei of centroblasts in the dark zone and centrocytes in the basal and apical light zones of germinal centres In addition the antibody labels approximately 10 of germinal centre T cells No labeling was observed in plasma cells macrophages follicular dendritic cells and IgD IgM follicular mantle lymphocytes In spleen the staining pattern was similar to that of tonsil but in addition the antibody labeled a few scattered Iymphoid like cells of undefined phenotype In extra lymphoid tissues the antibody faintly labeled squamous epithelia in the tonsil thymus and skin No labeling was observed in liver thyroid striated muscle or kidney 1 In tonsil germinal center B cells show a moderate to strong staining reaction whereas squamous epithelial cells show a weak to moderate staining reaction Abnormal tissues 173 cases of human lymphoid neoplasms were tested with the antibody Of B cell lymphomas or leukemias 24 24 follicle centre lymphomas 29 30 diffuse large cell lymphomas and 13 13 Burkitt s lymphomas were positive No labeling was observed in 7 7 pre B acute lymphoblastic leukemias
12. de r activit une prot ine BCL6 d natur e 1 L analyse par immunoblot PAGE en pr sence de SDS d immunoprecipites form s entre les lysats totaux de cellules Bjab BCL6 et les cellules EB3 transfect es par la BCL6 et l anticorps a r v l une r action un fragment d environ 95 kDa correspondant la BCL6 Aucune r action n est observ e avec les cellules Rd BCL6 et les cellules EB3 transfect es avec un plasmide de contr le 1 1 Pour utilisateurs professionnels 2 Ce produit contient de l azide de sodium NaN produit chimique hautement toxique dans sa forme pure Aux concentrations du produit bien que non class comme dangereux l azide de sodium peut r agir avec le cuivre et le plomb des canalisations et former des accumulations d azides m talliques hautement explosifs Lors de l limination rincer abondamment l eau pour viter toute accumulation d azide m tallique dans les canalisations 3 Comme avec tout produit d origine biologique des proc dures de manipulation appropri es doivent tre respect es 4 Porter un v tement de protection appropri pour viter le contact avec les yeux et la peau 5 Les solutions non utilis es doivent tre limin es conform ment aux r glementations locales et nationales Conserver entre 2 et 8 Ne pas utiliser apr s la date de p remption indiqu e sur le flacon Si les r actifs sont conserv s dans des conditions autres que celles indiqu es
13. durch morphologische Studien mit ordnungsgem en Kontrollen erg nzt werden und von einem qualifizierten Pathologen unter Ber cksichtigung der Krankengeschichte und anderer Diagnostiktests des Patienten vorgenommen werden Das Proto Onkogen BCL6 kodiert ein 92 98 kDa POZ Zinkfingerprotein ber seine sechs C terminalen Zinkfinger Motive erfolgt die Bindung des BCL6 Proteins an spezifische DNA Sequenzen der Zielgene wo es als die Transkription verhindernder Repressor fungiert 2 3 Die BCL6 Expression ist kann h ufig vorkommen da niedrige Gehalte in vielen Gewebetypen nachgewiesen werden Hochgradige BCL6 Expression ist allerdings auf Zellen der B Lymphoidzelllinie und der Skelettmuskulatur beschr nkt Bei der B Lymphoidzelllinie scheint die BCL6 Expression w hrend der Differenzierung unter strikter Regulierung zu stehen Starke Expression wird vorzugsweise in dem Keimzentrum GC entstammenden B Zellen nicht jedoch in Plasmazellen Vorl uferzellen Mantelzonenzellen und B Ged chtniszellen beobachtet Neoplastische Entsprechungen der GC B Zellen einschlie lich Burkitt Lymphom Follikel Lymphom und diffusem gro zelligem Lymphom zeigen ebenfalls hochgradige BCL6 Expression 3 BCL6 ist m glicherweise an chromosomalen Translokationen beteiligt bei denen die regulatorische Region des BCL6 Gens durch einen heterologen reziproken Partner wie beispielsweise die Immunglobulin Gene IG ersetzt wird Die Promotor Substitution f hrt zur D
14. en utilisant des contr les appropri s et doit tre valu e en fonction des ant c dents cliniques du patient et d autres tests diagnostiques par un pathologiste qualifi Le proto oncogene BCL6 code pour une prot ine POZ doigt de zinc de 92 98 kDa Par l interm diaire de six motifs doigt de zinc C terminaux la prot ine BCL6 se lie des s quences sp cifiques de l ADN des g nes cibles o elle agit comme un r presseur de transcription 2 3 L expression de la BCL6 peut tre g n rale tant donn que des niveaux faibles sont d tect s dans de nombreux tissus Cependant les taux d expression lev s de BCL6 se limitent aux cellules de la lign e lympho de de type B et aux cellules du muscle squelettique Dans la lign e lympho de de type B l expression de la BCL6 semble tre fermement r gul e au cours de la diff renciation et une forte expression est observ e de pr f rence dans les lymphocytes B du centre germinatif CG mais pas dans les cellules plasmatiques ni dans les lymphocytes B pr curseurs de la zone du manteau et m moire Les quivalents n oplasiques des lymphocytes B du CG y compris les Iymphomes diffus grands lymphocytes B les lymphomes folliculaires et les lymphomes de Burkitt pr sentent galement des taux d expression lev s de la BCLE6 3 La BCL6 pourrait tre impliqu e dans les translocations chromosomiques o la r gion du gene BCL6 est remplac e par un partenaire r ciproque h t
15. pr chauffage 65 temp rature et dur e de restauration de l pitope 97 pendant 20 1 minutes laisser refroidir jusqu 65 Rincer les coupes avec un EnVision FLEX Wash Buffer 10x Dako Autostainer Autostainer Plus R f K8012 dilu temp rature ambiante Coupes incluses en paraffine Comme pr paration alternative des chantillons le d paraffinage et la restauration de l Epitope peuvent tre r alis s dans le PT Link l aide d une proc dure modifi e Se r f rer aux instructions du Guide d utilisation du PT Link Une fois que la proc dure de coloration est termin e les coupes doivent tre d shydrat es lav es et mont es l aide d un milieu de montage permanent Les coupes de tissus ne doivent pas s cher lors du traitement ou lors de la proc dure de coloration immunohistochimique suivante Pour une meilleure adh rence des coupes de tissus sur les lames de verre il est recommand d utiliser des lames Dako Silanized Slides R f S3003 IS625 EFG MNI 09 10 07 p 2 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 9595 CVR No 33 21 13 17 Proc dure de coloration y compris le mat riel requis mais non fourni Interpr tation de la coloration Caract ristiques de performance DEUTSCH Zweckbestimmung Zusammenfassung und Erkl rung Geliefertes Reagenz Immunogen Spezifitat Vorsichtsma nahmen Lagerung
16. BCL6 protein corresponding to amino acids 3 484 of the human BCL6 protein 1 In Western blotting of total lysates of Bjab cells and BCL6 transfected EB3 cells or control transfected EB3 cells the antibody did not label any bands suggesting lack of reactivity with denatured BCL6 protein 1 SDS PAGE analysis of immunoprecipitates formed between total lysates of Bjab cells BCL6 and BCL6 transfected EB3 cells and the antibody shows reaction with a 95 kDa fragment corresponding to BCL6 No reaction is observed with Rd cells BCL6 and EB3 cells transfected with a control plasmid 1 1 For professional users 2 This product contains sodium azide NaN a chemical highly toxic in pure form At product concentrations though not classified as hazardous sodium azide may react with lead and copper plumbing to form highly explosive build ups of metal azides Upon disposal flush with large volumes of water to prevent metal azide build up in plumbing 3 As with any product derived from biological sources proper handling procedures should be used 4 Wear appropriate Personal Protective Equipment to avoid contact with eyes and skin 5 Unused solution should be disposed of according to local State and Federal regulations Store at 2 8 Do not use after expiration date stamped on vial If reagents are stored under any conditions other than those specified the conditions must be verified by the user There are no obvious signs to indicate in
17. bereaktion zeigen Pathologisches Gewebe Mit dem Antik rper wurden 173 F lle menschlicher lymphoider Neoplasmen getestet Von den B Zell Lymphomen oder Leuk mien wurden f r 24 von 24 follikul ren Lymphomen zentroblastisch zentrozytisch FCL 29 von 30 diffusen gro zelligen Lymphomen und 13 von 13 Burkitt Lymphomen positive Resultate erhalten Keine Markierung erbrachten 7 von 7 akuten Iymphatischen Leuk mien vom Pr B Typ 16 von 16 kleinzellig Iymphozytischen bzw B CLL 6 von 6 Haarzell Leuk mien 22 von 22 Mantelzell Leuk mien und 14 von 14 Marginalzonen Lymphomen Von den T Zell Lymphomen oder Leuk mien testeten 4 von 8 anaplastischen gro zelligen Lymphomen positiv Dagegen wurde keine Markierung beobachtet bei 10 von 10 akuten Iymphatischen Lymphomen 3 von 3 Mycosis fungoides 6 von 6 peripheren T Zell Lymphomen und 2 von 2 peripheren T Zell Lymphomen vom AILD Typ angioimmunoblastische Lymphadenopathie mit Dysprotein mie F r das Hodgkin Lymphom wurden f r 5 von 5 F llen des nodul ren Typs mit Pr dominanz der Lymphozyten 1 von 4 F llen des nodul rsklerosierenden Typs und 1 von 3 Typen gemischter Zellularit t positive Resultate erhalten 1 Beim systemischen AIDS assoziierten Non Hodgkin Lymphom markierte der Antik rper 11 von 11 kleinzelligen nicht zentrozytischen Lymphomen SNCCL 7 von 7 gro zelligen nicht zentrozytischen Lymphomen LNCCL und 2 von 9 gro zelligen immunoblastischen Iymphoplasmazytoiden Lymphomen
18. eisung beachten Temperature limitation Use by Limites de temperature Utiliser avant Zul ssiger Temperaturbereich Verwendbar bis Manufacturer Fabricant Contains sufficient for lt n gt tests Contenu suffisant pour lt n gt tests Inhalt ausreichend f r lt n gt Tests Hersteller Batch code Numero de lot Chargenbezeichnung IS625 EFG MNI 09 10 07 p 4 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 95 95 CVR No 33 21 13 17
19. eregulierung der BCL6 Expression die mit der Lymphomentstehung in Zusammenhang stehen k nnte 3 Beim BCL6 Rearrangement handelt es sich um eine der h ufigsten genetischen Anomalien bei B Zell Lymphomen vom Non Hodgkin Typ mit einer besonders stark ausgepr gten Auftrittsh ufigkeit 28 40 beim diffusen gro zelligen Lymphom 2 Folgende Angaben bitte den Allgemeinen Richtlinien zur immunhistochemischen F rbung von Dako oder den Anweisungen des Detektionssystems f r IHC Verfahren entnehmen 1 Verfahrensprinzip 2 Erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien 3 Aufbewahrung 4 Vorbereitung der Probe 5 F rbeverfahren 6 Qualit tskontrolle 7 Fehlersuche und behebung 8 Auswertung der F rbung 9 Allgemeine Beschr nkungen Gebrauchsfertiger monoklonaler Maus Antik rper in fl ssiger Form in einem Puffer der stabilisierendes Protein und 0 015 mol L Natriumazid enth lt Klon PG B6p 1 Isotyp IgG1 Kappa Rekombinantes Glutathion S Transferase GST BCL6 Protein entsprechend den Aminos uren 3 484 des menschlichen BCL6 Proteins 1 Beim Western Blotting der Gesamtlysate von Bjab Zellen und mit BCL6 transfizierten EB3 Zellen oder mit Kontrollpr parat transfizierten EB3 Zellen markierte der Antik rper keinerlei Banden Dies weist auf eine mangelnde Reaktivit t mit denaturiertem BCL6 Protein hin 1 Die SDS PAGE Analyse der Immunpr zipitate die zwischen dem Antik rper und den Gesamtlysaten der Bjab Zellen BCL6 und
20. ffinization and epitope retrieval can be performed in the PT Link using a modified procedure See the PT Link User Guide for instructions After the staining procedure has been completed the sections must be dehydrated cleared and mounted using permanent mounting medium The tissue sections should not dry out during the treatment or during the following immunohistochemical staining procedure For greater adherence of tissue sections to glass slides the use of Dako Silanized Slides Code S3003 is recommended The recommended visualization system is EnVision FLEX Mouse High pH Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8012 The staining steps and incubation times are pre programmed into the software of Dako Autostainer Autostainer Plus instruments using the following protocols Template protocol FLEXRTU2 200 uL dispense volume or FLEXRTU3 300 uL dispense volume Autoprogram BCL6 without counterstaining or BCL6H with counterstaining The Auxiliary step should be set to rinse buffer in staining runs with lt 10 slides For staining runs with gt 10 slides the Auxiliary step should be set to none This ascertains comparable wash times All incubation steps should be performed at room temperature For details please refer to the Operator s Manual for the dedicated instrument If the protocols are not available on the used Dako Autostainer instrument please contact Dako Technical Services Optimal conditions may vary de
21. mit dem Antik rper hindeutet ist der technische Kundendienst von Dako zu verst ndigen IS625 EFG MNI 09 10 07 p 3 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 95 95 CVR No 33 21 13 17 Vorbereitung der Probe und erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien F rbeverfahren und erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien Auswertung der F rbung Leistungsmerkmale Der Antik rper eignet sich zur Markierung von formalinfixierten und paraffineingebetteten Gewebeschnitten Gewebeproben sollten in Schnitte von ca 4 um St rke geschnitten werden Die Vorbehandlung durch hitzeinduzierte Epitopdemaskierung HIER ist erforderlich Optimale Ergebnisse k nnen durch Vorbehandlung der Gewebe mit EnVision M FLEX Target Retrieval Solution High pH 10x Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8012 K8014 erzielt werden Entparaffinierte Schnitte Die Vorbehandlung der entparaffinierten formalinfixierten paraffineingebetteten Gewebeschnitte sollte mit Dako PT Link Code Nr PT100 PT101 erfolgen Weitere Informationen hierzu siehe PT Link Benutzerhandbuch Vorbehandlung gem der Beschreibung in der Packungsbeilage f r EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 10x Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8012 K8014 durchf hren F r PT Link sollten die folgenden Parameter verwendet werden Vorw rmtemperatur 65 Temperatur und
22. nter Leistungsmerkmale beschriebenen Reaktionsmuster aufweisen Das empfohlene Negativ Kontrollreagenz ist FLEX Negative Control Mouse Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr IS750 Mit diesem Antik rper markierte Zellen weisen eine diffuse mikrogranul re und auf den Zellkern begrenzte F rbung auf Nur bei mitotischen Konfigurationen wird eine intensive zytoplasmatische F rbung festgestellt die nicht auf Metaphasechromosomen zur ckzuf hren ist 1 Gesundes Gewebe In Mandelgewebe markiert der Antik rper in starkem Ausma die Zentroblasten Nuklei der dunklen Zone sowie die Zentrozyten der basalen und apikalen hellen Zonen in den Keimzentren Zudem markiert der Antik rper circa 10 der Keimzentrum T Zellen Keine Markierung wurde festgestellt f r Plasmazellen Makrophagen follikul r dendritische Zellen und IgD IgM follikul re Mantellymphozyten F r Milzgewebe verlief das F rbungsmuster hnlich wie bei Mandelgewebe der Antik rper markierte jedoch dar ber hinaus einige wenige verstreute Iymphoidartige Zellen eines nicht definierten Ph notyps Bei Geweben au erhalb des Lymphsystems erbrachte der Antik rper eine schwache F rbung der Plattenepithelzellen von Mandeln Thymus und Haut F r Leber Schilddr se gestreifte Muskulatur oder Niere wurde keine Markierung beobachtet 1 Bei Mandelgewebe zeigen Keimzentrum B Zellen eine m ige bis starke F rbereaktion w hrend Plattenepithelzellen eine schwache bis m ige F r
23. pending on specimen and preparation methods and should be determined by each individual laboratory Ifthe evaluating pathologist should desire a different staining intensity a Dako Application Specialist Technical Service Specialist can be contacted for information on re programming of the protocol Verify that the performance of the adjusted protocol is still valid by evaluating that the staining pattern is identical to the staining pattern described in Performance characteristics IS625 EFG MNI 09 10 07 p 1 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 95 95 CVR No 33 21 13 17 Staining interpretation Performance characteristics FRANCAIS Utilisation prevue Resume et explication Reactifs fournis Immunogene Specificite Pr cautions Conservation Pr paration des chantillons y compris le mat riel requis mais non fourni 115279 002 Counterstaining in hematoxylin is recommended using EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8018 Non aqueous permanent mounting medium is recommended Positive and negative controls should be run simultaneously using the same protocol as the patient specimens The positive control tissue should include tonsil and the cells structures should display reaction patterns as described for this tissue in Performance characteristics in all positive specimens The recommended negative
24. programmation du protocole V rifier que l ex cution du protocole modifi est toujours valide en v rifiant que le sch ma de coloration est identique au sch ma de coloration d crit dans les Caract ristiques de performance Il est recommand d effectuer une contre coloration l aide de EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus R f K8018 L utilisation d un milieu de montage permanent non aqueux est recommand e Des contr les positifs et n gatifs doivent tre r alis s en m me temps et avec le m me protocole que les chantillons du patient Le contr le de tissu positif doit comprendre l amygdale et les cellules structures doivent pr senter des sch mas de r action tels que d crits pour ces tissus dans les Caract ristiques de performance pour tous les chantillons positifs Le contr le n gatif recommand est le FLEX Negative Control Mouse Dako Autostainer Autostainer Plus R f IS750 Les cellules marqu es par l anticorps pr sentent une coloration diffuse microgranulaire limit e au noyau Une coloration cytoplasmique intense non associ e aux chromosomes m taphasiques est observ e uniquement dans les figures mitotiques 1 Tissus sains Dans l amygdale l anticorps marque fortement les noyaux des centroblastes dans la zone sombre et les centrocytes dans les zones claires basale et apicale des centres germinatifs En outre l anticorps marque environ 10 des lymphoc
25. stability of this product Therefore positive and negative controls should be run simultaneously with patient specimens If unexpected staining is observed which cannot be explained by variations in laboratory procedures and a problem with the antibody is suspected contact Dako Technical Support The antibody can be used for labeling formalin fixed paraffin embedded tissue sections Tissue specimens should be cut into sections of approximately 4 um Pre treatment with heat induced epitope retrieval HIER is required Optimal results are obtained by pretreating tissues using EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 10x Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8012 K8014 Deparaffinized sections Pre treatment of deparaffinized formalin fixed paraffin embedded tissue sections is recommended using Dako PT Link Code PT100 PT101 For details please refer to the PT Link User Guide Follow the pre treatment procedure outlined in the package insert for EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 10x Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8012 K8014 The following parameters should be used for PT Link Pre heat temperature 65 epitope retrieval temperature and time 97 for 20 1 minutes cool down to 65 Rinse sections with diluted ro om temperature EnVision FLEX Wash Buffer 10x Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8012 Paraffin embedded sections As alternative specimen preparation both depara
26. uscle In the B lymphoid cell linage BCL6 expression seems to be tightly regulated during differentiation and strong expression is observed preferentially in germinal centre GC B cells but not in plasma cells and precursor mantle zone and memory B cells Neoplastic counterparts of GC B cells including diffuse large B cell lymphomas follicular and Burkitt s lymphomas also display high levels of BCL6 expression 3 BCL6 may be implicated in chromosomal translocations where the regulatory region of the BCL6 gene is replaced by a heterologous reciprocal partner such as the immunoglobulin genes Promotor substitution leads to deregulation of the BCL6 expression which may be associated with lymphomagenesis 3 BCL6 rearrangement is one of the most common genetic abnormalities in B cell non Hodgkin s lymphoma with an especially high frequency 28 40 in diffuse large cell lymphoma 2 Refer to Dako s General Instructions for Immunohistochemical Staining or the detection system instructions of IHC procedures for 1 Principle of Procedure 2 Materials Required Not Supplied 3 Storage 4 Specimen Preparation 5 Staining Procedure 6 Quality Control 7 Troubleshooting 8 Interpretation of Staining 9 General Limitations Ready to use monoclonal mouse antibody provided in liquid form in a buffer containing stabilizing protein and 0 015 mol L sodium azide Clone PG B6p 1 Isotype IgG1 kappa Recombinant glutathione S transferase GST
27. ytes T du centre germinatif Aucune coloration n a t observ e dans les cellules plasmatiques les macrophages les cellules folliculaires dendritiques et les lymphocytes du manteau folliculaire IgD IgM Dans la rate le sch ma de coloration tait similaire celui observ dans l amygdale mais par ailleurs l anticorps a marqu quelques cellules lympho des isol es de ph notype non d fini Dans les tissus extra lympho des l anticorps a marqu l g rement les pith liums squameux de l amygdale du thymus et de la peau Aucune coloration na t observ e dans le foie la thyro de le muscle stri ou le rein 1 Les lymphocytes B et T du centre germinatif dans les amygdales ont pr sent une coloration mod r e forte tandis que la coloration des cellules pith liales squameuses tait faible mod r e Tissus tumoraux 173 cas de n oplasmes lympho des humains ont t test s avec l anticorps Dans les lymphomes ou les leuc mies lymphocytes B 24 24 lymphomes du centre folliculaire 29 30 Iymphomes diffus grandes cellules et 13 13 lymphomes de Burkitt taient positifs Aucune coloration ma t observ e dans 7 7 leuc mies aigu s lymphoblastiques pr lymphocytes B 16 16 Iymphomes Iymphocytaires petites cellules LLC B 6 6 leuc mies cellules chevelues 22 22 leuc mies cellules du manteau et 14 14 Ilymphomes de la zone marginale Dans les Iymphomes ou leuc mies lymphocytes T 4 8 lymphomes
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