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Test Progensa PCA3

1. Symbole Composant Quantit AR Solution de reconstitution pour amplification PCA3 1x9 3 mL Solution aqueuse contenant des conservateurs lt 1 de parab nes ER Solution de reconstitution enzymatique PCA3 PSA 1x 3 3 mL Solution tamponn e HEPES contenant un surfactant 10 Triton X 100 et 20 de glyc rol PR Solution de reconstitution pour sonde PCA3 PSA 1x 12 4 mL Solution tamponn e de succinate contenant lt 5 de sulfate de lauryle et de lithium S R actif de s lection PCA3 PSA 1x31 mL Solution tamponn e de borate contenant un surfactant 1 Triton X 100 TCR R actif Target Capture PCA3 1x22mL Acide nucl ique non infectieux dans une solution tamponn e HEPES contenant une phase solide Cartes de protection 1 paquet Collets de reconstitution 1 paquet Test Progensa PCA3 501377FR Rev 001 Progensa PCA3 R actifs et mat riels fournis Kit de calibrateurs et contr les Progensa PCA3 Conserver entre 2 C et 8 C d s la r ception et jusqu la date de p remption indiqu e Symbole Composant Quantit CAL Calibrateur 1 PCA3 1x2 0mL Solution tamponn e de phosphate contenant lt 5 de sulfate de lauryle et de lithium CAL Calibrateurs 2 5 PCA3 4x1 7 mL Acide nucl ique PCA3 non infectieux dans une solution tamponn e de phosphate contenant lt 5 sulfate de lauryle et de lithium PC Contr les positifs PCA3 2x1 7 mL Acide nucl ique PCA3 non infectieux dans une solution tamponn
2. 0 35 M 0 5 M en veillant ce qu ils soient recouverts par la solution Maintenez les portoirs immerg s pendant 10 minutes Toute exposition plus longue endommagerait les portoirs Rincez soigneusement les portoirs avec de l eau puis s chez les enti rement avec des serviettes en papier l Contamination des tests 1 L introduction de substances contaminantes peut se produire si la proc dure du test n est pas rigoureusement respect e Les unit s TTU doivent tre d contamin es dans de la solution de d sactivation conform ment la description de la Proc dure de test Ne r utilisez pas les TTU Effectuez une d contamination r guli re du mat riel et des plans de travail comme indiqu ci dessus sous D contamination Comme avec tout syst me de r actif l exc s de poudre sur certains gants peut entra ner la contamination des tubes ouverts Il est recommand que les op rateurs utilisent des gants sans poudre Test Progensa PCA3 25 501377FR Rev 001 Proc dures de contr le de qualit Progensa PCA3 Proc dures de contr le de qualit A Validit de la s rie 1 Les calibrateurs et les contr les doivent tre soumis tous les tests et sur le m me portoir que les chantillons test s Les crit res suivants doivent tre r unis pour qu une s rie soit consid r e valide Moyenne de RLU du Calibrateur 2 gt Seuil RLU O le Seuil RLU Moyenne de RLU du Calibrateur 1 Ecarts types
3. Analyse des copies mL i CV z f Analyte Membre Mesur CV total CV intra inter CV inter CV inter CV du panel c mL s rie s rie op rateur mat riel inter lot 1 36 248 27 24 7 15 11 0 2 36 7 021 11 6 9 9 0 0 3 36 31 469 8 6 5 9 0 4 4 36 1469 15 13 7 6 0 1 PEAS 5 36 14 844 7 5 2 6 0 4 6 36 72 372 7 4 6 0 1 0 7 36 430 26 26 0 11 0 1 8 36 62 274 13 8 8 3 0 5 1 34 52 739 9 6 6 7 4 2 2 34 218 789 10 6 7 7 4 0 3 32 1073 920 11 4 6 9 8 0 4 34 37 185 9 5 7 3 0 1 ee 5 32 386 504 10 4 8 6 3 4 6 34 1518748 12 5 8 4 3 7 7 32 11 007 14 8 9 0 6 0 8 34 1694 404 11 7 7 0 1 6 Test Progensa PCA3 37 501377FR Rev 001 Caract ristiques des performances Progensa PCA3 Tableau 12 Reproductibilit du test Progensa PCA3 Analyse du PCA3 Score Membre du Score CVintra CVinter CVinter CV inter CV inter A n CV total pi ee f aR panel moyen s rie s rie op rateur mat riel lot 1 34 5 27 26 5 23 8 0 2 34 32 14 9 10 12 0 2h 3 32 30 12 7 5 17 Th 6 7 32 39 28 24 2 8 11 7 8 34 37 21 14 12 0 0 9 Les membres 4 6 du panel contenaient uniquement le transcrit RNA de PCA3 ou de PSA et n ont donc pas t inclus dans cette analyse Test Progensa PCA3 38 501377FR Rev 001 Progensa PCA3 Bibliographie Bibliographie
4. Mettez la pompe vide en marche et d branchez la rampe d aspiration du premier connecteur situ entre la rampe d aspiration et le flacon pi ge Assurez vous que la jauge de vide satisfait les sp cifications du test de fuite Il est possible que 15 secondes soient n cessaires pour obtenir une lecture Rebranchez la rampe et v rifiez que la jauge de d pression est bien conforme la sp cification du niveau de d pression Laissez la pompe vide en marche jusqu ce que toutes les tapes de la capture de cible soient termin es et que la tubulure de la rampe d aspiration soit s che Test Progensa PCA3 19 501377FR Rev 001 Proc dure de test Progensa PCA3 H 11 12 13 14 15 16 17 Consultez la Fiche des sp cifications de d pression du Syst me Target Capture situ e au verso du Manuel de l op rateur du Syst me Target Capture ou contactez le Service technique de Hologic pour de plus amples renseignements Fixez fermement la rampe d aspiration au premier jeu d embouts Abaisser les embouts dans la premi re TTU jusqu ce que les embouts soient au contact de la surface du liquide Maintenir le contact entre les embouts et le liquide lors de la baisse du niveau du liquide jusqu ce qu ils touchent bri vement le fond des tubes Tapoter d licatement les embouts sur les fonds des tubes jusqu ce que tout le liquide restant ait t aspir Ne pas maintenir longtemps les embouts contre
5. NN oO a Bussemakers M J G A Van Bokhoven G W Verhaegh F P Smit H F M Karthaus J A Schalken F M J Debruyne N Ru and W B Isaacs 1999 DD3 A New Prostate Specific Gene Highly Overexpressed in Prostate Cancer Cancer Res 59 5975 5979 Hessels D J Mt Klein Gunnewiek I van Oort H F M Karthaus G J L van Leenders B van Balken L A Kiemeney J A Witjes and J A Schalken 2003 DD3 44 8 16 Groskopf J S M Aubin I L Deras A Blase S Bodrug C Clark S Brentano J Mathis J Pham T Meyer M Cass P Hodge M L Macairan L S Marks and H Rittenhouse 2006 Aptima PCA3 Molecular Urine Test Development of a Method to Aid in the Diagnosis of Prostate Cancer Clin Chem 52 1089 95 CLSI 1995 CLSI document GP10 A Assessment of the Clinical Accuracy of Laboratory Tests Using Receiver Operating Characteristic ROC Plots CLSI Wayne PA CLSI 2004 CLSI document EP17 A Protocols for Determination of Limits of Detection and Limits of Quantitation CLSI Wayne PA CLSI 2005 CLSI document EP7 A2 Interference Testing in Clinical Chemistry CLSI Wayne PA CLSI 2005 CLSI document EP15 A2 User Verification of Performance for Precision and Trueness CLSI Wayne PA CLSI 2003 CLSI document EP6 A Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures A Statistical Approach CLSI Wayne PA CLSI 2004 CLSI document EP5 A2 Evaluation of Precision Performance of Quantitative Measur
6. PCA3 Score calcul OU ortement nors Dans la fourchette gt PCA3 Score Opti i 2 Diluez l chantillon dans un diluant be pas de code calcul pHonne d chantillon retestez le PCA3 et mettez P manuellement les r sultats en correspondance si un PCA3 Score est requis Faiblement hors Pans la fourchette lt PCA3 Score Faites une correspondance manuelle pour Fe pas de code calcul gn obtenir le lt PCA3 Score calcul Faiblement hors Fortement hors lt PCA3 Score N Faites une correspondance manuelle pour jus priis calcul en obtenir le lt PCA3 Score calcul 9 F Test Progensa PCA3 29 501377FR Rev 001 Interpr tation des r sultats Progensa PCA3 Tableau 4 Conditions du R sum des exceptions du test Progensa PCA3 suite Consulter le Manuel d utilisation du logiciel de test Progensa PCA3 pour une liste compl te des codes d analyse S applique uniquement aux chantillons non valides d une s rie valide Pour les valeurs hors normes le PCA3 Score calcul est obtenu en utilisant le taux de copie du calibrateur positif le plus proche 4 Interpr tation des r sultats du Rapport sur les ratios Si un pr l vement figure dans le Rapport sur les ratios accompagn d un PCA3 Score le r sultat est un PCA3 Score utilisable dans un rapport et aucune action suppl mentaire n est n cessaire Si aucun PCA3 Score n est list exprim sous la forme dans la colonne PC
7. Substances test es pour l interf rence avec le test Progensa PCA3 Agents th rapeutiques Agents th rapeutiques suite Concentrations Concentrations Substance test es Substance lest es Ac taminoph ne Cod ine 5 34 pmol L Uroxatral 30 mg L Atorvastatine 25 mg L Doxazosine 1 33 pmol L Lisinopril 0 74 pmol L T razosine 7 8 umol L Amlodipine 245 pmol L Finast ride 15 mg L At nolol 37 6 pmol L Tamsulosine 1 2 pg L Sulfasalazine 754 pmol L Metformine 310 pmol L Esom prazole 120 mg L Sild nafil 12 9 pmol L Allopurinol 294 pmol L Chou palmiste nain 1 600 mg L 7 Diph nhydramine 19 6 pmolL S l nium O0 275mgL Ac taminoph ne 1 324 pmol L Acide ac tylsalicylique 3 62 mmol L Constituants de l urine Ibuprof ne 2 425 pmol L Substance Concentrations test es Furos mide 181 umol L Acide urique 1 4 mmol L Ciprofloxacine 30 2 pmol L H moglobine 2 g L Levaquin 48 6 pmol L Globules blancs 4 56 x 10 cellules L Doxycycline 67 5 umol L Globules rouges 3 06 x 10 cellules L Hydrochloride de fluoxetine 11 2 pmol L Albumine 50 g L Flutamide 1 500 mg L Bilirubine non conjugu e 342 g L Dutast ride 1 5 mg L IgG 60 g L 3 Pr cision La pr cision du test Progensa PCA3 a t valu e conform ment CLSI EP15 A2 2005 7 Les transcrits RNA de PCA3 et de PSA ont t quantifi s par spectrophotom trie ultraviolette et visible puis ajout s des urines f minines trait es et
8. de glyc rol PR Solution de reconstitution pour sonde PCA3 PSA 1x 12 4 mL Solution tamponn e de succinate contenant lt 5 de sulfate de lauryle et de lithium S R actif de s lection PCA3 PSA 1x31mL Solution tamponn e de borate contenant un surfactant 1 Triton X 100 TCR R actif Target Capture PSA 1x22mL Acide nucl ique non infectieux dans une solution tamponn e HEPES contenant une phase solide Cartes de protection 1 paquet Collets de reconstitution 1 paquet Kit de calibrateurs et contr les Progensa PSA Conserver entre 2 C et 8 C d s la r ception et jusqu la date de p remption indiqu e Symbole Composant Quantit CAL Calibrateur 1 PSA 1x2 0mL Solution tamponn e de phosphate contenant lt 5 de sulfate de lauryle et de lithium CAL Calibrateurs 2 5 PSA 4x1 7 mL Acide nucl ique PSA non infectieux dans une solution tamponn e de phosphate contenant lt 5 sulfate de lauryle et de lithium PC Contr les positifs PSA 2x1 7mL Acide nucl ique PSA non infectieux dans une solution tamponn e de phosphate contenant lt 5 sulfate de lauryle et de lithium Fiche d informations sur la concentration PSA 1 fiche Test Progensa PCA3 501377FR Rev 001 Progensa PCA3 R actifs et mat riels fournis Liquides pour tests Aptima Conserver entre 15 C et 30 C 2 bo tes d s la r ception et jusqu la date de p remption indiqu e Symbole Composant Quantit W Solution
9. r actionnels doivent maintenant avoir une teinte jaune b Couvrez les tubes avec une carte de protection et vortexez les pendant 10 secondes ou jusqu l obtention d une teinte uniforme sur le vortexeur m langeur tourbillon multi tubes c Incubez le portoir dans un bain marie 62 C 1 C pendant 20 5 minutes d Retirez le portoir du bain marie et laissez incuber temp rature ambiante pendant 5 1 minutes 2 S lection a A l aide du pipeteur r p tition ajoutez 250 uL de r actif de s lection dans chaque tube Toutes les r actions doivent maintenant avoir une teinte rose b Couvrez les tubes avec une carte de protection vortexez pendant 10 secondes ou jusqu l obtention d une teinte uniforme et incubez le portoir dans un bain marie 62 C 1 C pendant 10 1 minutes c Retirez le portoir du bain marie Incubez le portoir temp rature ambiante pendant 15 3 minutes J D tection Concernant l utilisation du Leader HC Luminometer consultez le Manuel de l utilisateur du Leader HC Luminometer Pour utiliser le logiciel de test du Progensa PCA3 consultez le Guide de r f rence rapide ou le Manuel de l administrateur syst me du logiciel de test du Progensa PCA3 ainsi que le Manuel de l op rateur 1 Pr parez le Leader HC Luminometer en pla ant une unit TTU vide dans la position de cassette num ro 1 et effectuez le protocole de LAVAGE une fois Test Progensa PCA3
10. une temp rature de 8 C ou inf rieure voir Collecte transport et conservation des chantillons pour de plus amples informations au cas o il serait n cessaire de reprendre le test Couvrez les unit s TTU avec des cartes de protection et agitez d licatement le portoir manuellement Ne pas vortexer Incubez le portoir dans un bain marie 62 C 1 C pendant 30 5 minutes Retirez le portoir du bain marie et s chez le fond des tubes sur un mat riau absorbant V rifiez que les cartes de protection sont fermement positionn es Au besoin remplacez les par de nouvelles cartes de protection et fermez herm tiquement les unit s TTU Vortexez le portoir pendant 60 secondes sur le vortexeur m langeur tourbillon multi tubes voir Remarques concernant la proc dure Le portoir doit tre vortex dans les 2 minutes qui suivent son retrait du bain marie Sans retirer les cartes de protection incubez le portoir temp rature ambiante pendant 30 5 minutes Placez le portoir avec l onglet Front devant sur la base magn tique TCS pendant 5 10 minutes Chargez le portoir pour unit s TTC avec les unit s TTC Amorcez les conduites de la pompe du poste de distribution en pompant la solution de lavage dans la rampe de distribution Pompez une quantit suffisante de liquide dans le syst me afin d viter toute formation de bulle d air dans les tubulures et de dispenser un flux r gulier de liquide par les dix t tes
11. viter toute contamination crois e Recommandations concernant les tests O P Ne pas utiliser ce kit apr s la date de p remption Pour le kit du test Progensa PCA3 ne jamais changer m langer ou combiner des r actifs de test PCA3 ayant des num ros de lots diff rents c d pour chaque analyte les r actifs de test dans la bo te r frig r e et la bo te temp rature ambiante doivent provenir d un seul et m me lot Les r actifs de test peuvent tre utilis s avec diff rents lots de kits de contr les et de calibrateurs Les kits de liquides des tests Aptima sont interchangeables Il nest pas n cessaire d apparier les kits de r actifs PCA3 et PSA Conservez tous les r actifs du test aux temp ratures indiqu es Les r sultats du test peuvent tre affect s par l utilisation de r actifs de test mal conserv s Voir Conditions de conservation et de manipulation et Remarques concernant la proc dure pour des instructions pr cises Pour la d sactivation du test voir Proc dure de test la concentration minimum de javel doit tre de 2 5 0 35 M d hypochlorite de sodium apr s une dilution de 1 1 avec un tampon de d sactivation Pour cette raison l eau de javel de d part doit tre dos e de 5 7 0 7 1 0 M pour parvenir la concentration finale requise pour la d sactivation Des embouts de pipette munis de filtres hydrophobes doivent tre utilis s R servez au minimum de
12. actif lyophilis la solution de reconstitution Si elles ont t r frig r es laissez les solutions de reconstitution parvenir temp rature ambiante avant l emploi A 2 l n LL 4 L lt J 1 5 6 N 7 gt S j l L AlE a b Ke J 7 KL J Figure 2 Processus de reconstitution a Appariez la solution de reconstitution appropri e avec le r actif d shydrat V rifiez que les flacons ont les m mes couleurs d tiquette pour s assurer qu ils sont correctement appari s Test Progensa PCA3 16 501377FR Rev 001 Progensa PCA3 Proc dure de test b Ouvrez le flacon de r actif d shydrat et ins rez fermement l extr mit portant une encoche du collet de reconstitution dans l ouverture du flacon Figure 2 tape 1 c Ouvrez la solution de reconstitution correspondante et posez le bouchon sur une surface de travail propre et couverte Tout en tenant le flacon de solution sur la paillasse ins rez fermement l autre extr mit du collet de reconstitution dans l ouverture du flacon Figure 2 tape 2 d Retournez d licatement l assemblage de flacons Laissez la solution s couler depuis le flacon dans le flacon en verre Figure 2 tape 3 Attendez que le r actif lyophilis se m le la solution puis faites tourner d licatement la solution dans le flacon en verre en lui imprimant un mouvement circulaire pour la
13. con u pour tre utilis en conjonction avec les algorithmes de diagnostic conformes aux normes de soin pour faciliter le diagnostic du cancer de la prostate R sum et explication du test L utilisation du test de l antig ne prostatique sp cifique PSA s rique pour le d pistage du cancer de la prostate a permis la biopsie de tumeurs plus petites auparavant ind tectables 1 cr ant ainsi un nouveau dilemme en mati re de diagnostic seule une fraction des hommes dont les taux de PSA s rique sont lev s ont un cancer de la prostate d tectable Les hommes ayant au moins une biopsie n gative ont souvent un PSA s rique constamment lev d g n ralement une hypertrophie de la prostate ainsi qu des hyperplasies prostatiques b nignes HPB N anmoins une proportion significative d hommes ayant un PSA s rique l g rement lev 2 5 4 0 ug L ont ou d velopperont un cancer de la prostate significatif sur le plan clinique 1 Bien que la biopsie demeure la norme de r f rence pour la d tection du cancer de la prostate des tests plus pr cis et d une meilleure sp cificit sont n cessaires avant de d cider d effectuer une biopsie de la prostate Le PCA3 galement nomm PCA3 ou DD3 est un RNA sp cifique la prostate non codant qui est hautement surexprim dans les cellules prostatiques canc reuses avec un niveau m dian 66 fois plus lev que dans les tissus b nins adjacents 2
14. de 1 645 pour les r plicats de RLU du Calibrateur 1 Ecarts types de 1 645 pour les r plicats de RLU du Calibrateur 2 R cup ration de la moyenne interpol e du Calibrateur 5 100 30 R cup ration de la moyenne interpol e du Contr le 100 60 R cup ration de la moyenne interpol e du Contr le B 100 35 Le logiciel PCA3 value automatiquement les r sultats en fonction des crit res ci dessus et indique que la s rie a r ussi PASS REUSSITE si les crit res de validit sont r unis ou qu elle a chou FAIL ECHEC si les crit res de validit ne sont pas r unis Si l Etat de la s rie indique FAIL ECHEC tous les r sultats des tests d une m me s rie sont non valides pour cet analyte et ne doivent pas tre valid s Si une s rie n est pas valide elle doit tre r p t e pour l analyte en question voir Interpr tation des r sultats Si la s rie est valide pour l autre analyte ces r sultats peuvent tre utilis s dans l analyse de donn es avec la s rie valide r p t e du premier analyte B Validit de l chantillon Dans une s rie valide des r sultats d chantillons individuels peuvent tre jug s INVALID NON VALIDES et seront alors indiqu s dans le Rapport sur la s rie brute voir Interpr tation des r sultats Bien que les r plicats individuels d un chantillon puissent tre valides un chantillon sera non valid si la diff rence interpol e en c mL entre l
15. de calibrateurs et de contr les La conservation ad quate du surplus de l chantillon avant tout nouveau test est essentielle voir Collecte transport et conservation des chantillons pour de plus amples informations Une correspondance manuelle des analytes PCA3 et PSA peut tre n cessaire pour d terminer le PCA3 Score voir Mise en correspondance manuelle pour de plus amples informations 2 Dilution des chantillons fortement hors normes a Si la concentration extrapol e d un chantillon est sup rieure la valeur du Calibrateur 5 dans une s rie valide le r sultat est fortement hors normes et sera accompagn d un code d analyse f ou F chec dans le ou les rapports sur la s rie La concentration sera exprim e sous la forme gt Concentration Calibrateur 5 Inversez l chantillon d urine trait pour le m langer avant la dilution de l chantillon La dilution recommand e mais non requise est de 1 10 en utilisant le test Progensa PCA3 Specimen Diluent Kit Dans un flacon appropri ajoutez 1 800 uL de diluant d chantillon et 200 uL d chantillon rebouchez le tube et retournez le cinq fois pour obtenir un m lange homog ne Le facteur de dilution sera de 10 dans la liste de travail de la s rie Si les deux analytes doivent tre test s nouveau doublez les volumes utilisez 3 600 uL de diluant d chantillon et 400 uL d chantillon Consultez la notice du Progensa PCA3 Sp
16. de lavage 1x402mL Solution tamponn e HEPES contenant lt 2 de dod cyl sulfate de sodium DF Tampon pour solution de d sactivation 1x402mL Solution tamponn e de bicarbonate O R actif huileux 1x 24 6 mL Huile de silicone Remarque Tout le mat riel inclus dans le Progensa PCA3 Assay Kit peut aussi tre achet s par ment voir le chapitre Mat riels pour de plus amples d tails Test Progensa PCA3 7 501377FR Rev 001 Mat riels Progensa PCA3 Mat riels Remarque Pour obtenir des informations sur les mentions de danger et de mise en garde qui pourraient tre associ es ces r actifs consultez la Safety Data Sheet Library Biblioth que des fiches techniques de s curit l adresse www hologic com sds Remarque Les r f rences du mat riel disponible chez Hologic sont indiqu es Mat riel requis mais disponible s par ment Progensa PCA3 Urine Specimen Transport Kit Luminom tre Leader HC Syst me de capture de cible Target Capture System TCS Hologic Kit Auto Detect Aptima 2 pipeteurs r p tition eppendorf Repeater Plus Embouts de pipeteur r p tition 2 5 mL 5 0 mL 25 0 mL Soit 2 vortexeurs m langeur tourbillon multi tubes r f rence 102160F 3 bains marie circulateurs r f rence 104586F 62 C 1 C 42 C 1 C 62 C 1 C 3 s parateurs pour bain marie r f rence 104627 OU 2 SB100 Dry Heat Bath vortexeurs r f rence 105524F Des instrum
17. e de phosphate contenant lt 5 sulfate de lauryle et de lithium Fiche d informations sur la concentration PCA3 1 fiche Kit Progensa PSA 100 r actions Bo te r frig r e Progensa PSA Conserver entre 2 C et 8 C d s la r ception et jusqu la date de p remption indiqu e Symbole Composant Quantit A R actif d amplification PSA 1 flacon Acides nucl iques non infectieux d shydrat s dans une solution tamponn e HEPES contenant lt 10 de r actif diluant E R actif enzymatique PCA3 PSA 1 flacon Transcriptase inverse et polym rase RNA d shydrat es dans une solution tamponn e HEPES contenant lt 10 de r actif diluant P R actif de sonde PSA 1 flacon Sondes DNA chimiluminescentes non infectieuses d shydrat es dans une solution tamponn e de succinate contenant lt 5 de r actif diluant et lt 5 de sulfate de lauryle et de lithium Test Progensa PCA3 5 501377FR Rev 001 R actifs et mat riels fournis Progensa PCA3 Bo te temp rature ambiante Progensa PSA Conserver entre 15 C et 30 C d s la r ception et jusqu la date de p remption indiqu e Symbole Composant Quantit AR Solution de reconstitution pour amplification PSA 1x9 3mL Solution aqueuse contenant des conservateurs lt 1 de parab nes ER Solution de reconstitution enzymatique PCA3 PSA 1x3 3mL Solution tamponn e HEPES contenant un surfactant 10 Triton X 100 et 20
18. lation en veillant viter toute formation de bouchon S il s av re impossible d liminer le bouchon l chantillon sera alors pipet manuellement b Si un bouchon s est form et que les chantillons doivent tre pipet s manuellement l aide d un micro pipeteur aucune autre intervention n est n cessaire Vous devez cependant veiller ce que le bouchon n interf re pas avec le pr l vement d chantillons Test Progensa PCA3 22 501377FR Rev 001 Progensa PCA3 Proc dure de test B Pipetage des contr les des calibrateurs et des chantillons 1 Le volume de calibrateur contr le ou chantillon ajout l unit TTU doit tre de 400 uL L inspection visuelle du volume pipet dans l unit TTU est recommand e pour v rifier que le transfert de volume est ad quat Un volume ad quat est n cessaire pour obtenir des r sultats pr cis 2 V rifiez que l embout de la pipette est bien en place sur le pipeteur et que le r glage du volume est correct Il est recommand de v rifier visuellement le r glage du volume la fin de chaque unit TTU tous les 10 tubes Rel chez lentement le piston de la pipette un rythme constant pour le pr l vement de l chantillon afin d viter toute production de mousse ou de bulles C R actifs 1 La solution de reconstitution de sonde peut se pr cipiter pendant la conservation Chauffez la solution 62 C 1 C pendant 1 2 minutes Apr s cette
19. le Tableau 1 pour toute information sur la conservation des r actifs Tableau 1 Conservation des r actifs R actif liquide Conservation avant ouverture Stabilit l tat ouvert reconstitu jusqu la date de p remption R actifs d amplification 2 C 8 C jusqu la date de p remption 30 jours entre 2 C et 8 C R actifs de sonde 2 C 8 C jusqu la date de p remption 30 jours entre 2 C et 8 C Enzyme Reagent R actifs Target Capture 2 C 8 C jusqu la date de p remption 15 C 30 C jusqu la date de p remption 30 jours entre 2 C et 8 C 30 jours entre 15 C et 30 C Amplification Reconstitution Solution 2 C 30 C jusqu la date de p remption S O usage unique Probe Reconstitution Solution 2 C 30 C jusqu la date de p remption S O usage unique Enzyme Reconstitution Solution 2 C 30 C jusqu la date de p remption S O usage unique R actif de s lection 2 C 30 C jusqu la date de p remption 30 jours entre 15 C et 30 C Calibrateurs 2 C 8 C jusqu la date de p remption S O une seule s rie Contr les 2 C 8 C jusqu la date de p remption S O une seule s rie R actif huileux 15 C 30 C jusqu la date de p remption 30 jours entre 15 C et 30 C Solution de lavage 15 C 30 C jus
20. le flacon d chets et la rampe d aspiration c Retirez le flacon d chets du bo tier de pi ge vide d Retirez le bouchon et ajoutez avec pr caution 400 mL de solution d hypochlorite de sodium dos e de 5 7 0 7 M 1 0 M dans le flacon d chets de 4 L Remarque Cette manipulation peut tre effectu e sous une hotte pour viter les manations dans le laboratoire e Rebouchez le flacon d chets et faites tourner d licatement le contenu jusqu l obtention d un m lange homog ne f Laissez le flacon d chets reposer pendant 15 minutes minimum puis jetez le contenu d chets g Rincez le flacon d chets l eau pour liminer tout r sidu ventuel l int rieur Test Progensa PCA3 24 501377FR Rev 001 Progensa PCA3 Proc dure de test h Rebouchez le flacon d chets vide et mettez le dans le bo tier du pi ge vide Fixez le raccord d connexion rapide sur l unit TCS Jetez avec pr caution les deux gants 4 Unit TCS Essuyez les surfaces de l unit TCS la rampe d aspiration et des embouts d jection du tampon de lavage avec des serviettes en papier humidifi es de solution d hypochlorite de sodium de 2 5 3 5 0 35 M 0 5 M Faites suivre cette tape par un rin age l eau puis s chez compl tement les surfaces avec des serviettes en papier Portoirs Plongez les portoirs pour TTU dans une solution d hypochlorite de sodium de 2 5 3 5
21. m langer vitez de faire de la mousse lorsque vous tournez le flacon Figure 2 tape 4 e Inversez l assemblage puis inclinez le un angle de 45 pour minimiser la formation de mousse Figure 2 tape 5 Laissez la totalit du liquide retourner dans le flacon en plastique f Retirez le collet de reconstitution et le flacon en verre Figure 2 tape 6 g Rebouchez le flacon en plastique Figure 2 tape 7 Indiquez les initiales de l op rateur et la date de reconstitution sur tous les flacons de r actif reconstitu N oubliez pas d indiquer l analyte PCA3 ou PSA sur les flacons de r actif de sonde h Jetez le collet de reconstitution et le flacon en verre Figure 2 tape 8 2 Les r actifs de sonde d amplification et enzymatiques pr c demment reconstitu s doivent parvenir temp rature ambiante 15 C 30 C avant d entreprendre le test Consultez Conditions de conservation et de manipulation pour grouper des surplus de r actifs Si le r actif d amplification reconstitu contient un pr cipit qui emp che la solution de revenir temp rature ambiante chauffez le 62 C 1 C pendant 1 2 minutes dans la zone de pr amplification Si le r actif de sonde reconstitu contient un pr cipit qui emp che la solution de revenir temp rature ambiante chauffez le 62 C 1 C pendant 1 2 minutes dans la zone de post amplification Apr s ces tapes les r actifs de sonde reconstitu s
22. reconstitu s peut tre utilis lors de tests ult rieurs s ils sont conserv s de mani re appropri e apr s leur utilisation initiale Le surplus de r actif peut tre ajout un r actif fra chement pr par ou au surplus d un r actif du m me lot Ne pas changer m langer ou combiner les r actifs de kits portant diff rents num ros de lots voir Avertissements et pr cautions Aucun des composants du r actif group ne peut d passer les limites de conservation du r actif ouvert ou reconstitu V rifiez que le r actif group a t soigneusement m lang et qu il a t pr par en quantit suffisante pour toute la s rie de tests Test Progensa PCA3 13 501377FR Rev 001 Collecte transport et conservation des chantillons Progensa PCA3 Collecte transport et conservation des chantillons Le test Progensa PCA3 est con u pour quantifier le RNA du PCA3 et du PSA dans l urine de premier jet recueillie apr s un toucher rectal consistant en trois effleurages par lobe L urine est trait e l aide du Progensa PCA3 Urine Specimen Transport Kit La stabilit du RNA du PCA3 et du PSA dans l urine ainsi que l urine trait e a t tablie en surveillant les taux de copie de RNA dans les chantillons d urine collect s conform ment aux instructions ci dessous A Instructions concernant la collecte et le traitement des chantillons d urine 1 3 Il peut tre utile de demander au patient de co
23. sujets de quatre sites cliniques g ographiquement diversifi s en Am rique du Nord La population de sujets consistait en 529 hommes pr vus pour une biopsie de la prostate Les donn es d mographiques des sujets sont indiqu es ci dessous a Moyenne d ge ET 64 8 ans m diane 63 fourchette de 32 89 b Taux moyen de PSA s rique 7 9 21 9 ug L 5 6 0 3 484 c Volume prostatique moyen d termin par une ultrasonographie transrectale 44 25 cc 39 5 225 d 34 180 529 de biopsies positives pour le cancer de la prostate Figure 3 Le indique la corr lation du PCA3 Score avec la probabilit de biopsies positives Plus le PCA3 Score augmente plus le nombre de biopsies canc reuses positives chez les sujets augmente 80 70 a 60 2 5 50 2 y 40 a 30 s S 20 m 0 PCA3 Score 10 19 p _ T A m a su Nbre de sujets 104 Figure 3 Corr lation du PCA3 Score avec la probabilit de biopsies positives L analyse de la fonction d efficacit du r cepteur ROC a t effectu e en utilisant la biopsie de la prostate comme m thode de r f rence conform ment CLSI GP10 A 1995 4 Pour le test Progensa PCA3 la zone sous la courbe AUC tait de 0 685 intervalle de confiance de 95 0 637 0 733 Tableau 6 Le donne la sensibilit et la sp cificit diagnostiques pour diff rents seuils du PCA3 Score Chaque laboratoire devra tablir les
24. tape la solution de reconstitution de sonde peut tre utilis e m me s il reste des pr cipit s de r sidus Apr s la remise en suspension m langez le flacon d licatement par retournement 2 Pour pipeter des r actifs autre que le r actif enzymatique visez l g rement le fond de la paroi du tube r actionnel l endroit o le fond se courbe pour rejoindre les parois Pour pipeter le r actif enzymatique visez directement le centre de chaque tube r actionnel Confirmez visuellement que les r actifs sont correctement vers s sans quantit excessive de r actif sur les parois des tubes et avec le changement de couleur ad quat D Temp rature 1 Les tapes de capture de cible d amplification d hybridation et de s lection d pendent de la temp rature Il est donc essentiel que les bains marie soient maintenus dans les plages de temp ratures indiqu es 2 La temp rature ambiante est d finie comme se situant entre 15 C et 30 C E Dur e Les r actions de capture de cible d amplification d hybridation et de s lection sont toutes fonction du temps coul Respectez les dur es indiqu es dans la Proc dure de test F Agitation au vortex La qualit de l agitation au vortex est essentielle pour assurer la bonne performance du test Progensa PCA3 Pour vortexer des r actions r glez la vitesse du vortexeur m langeur tourbillon multi tubes sur le r glage le plus bas fixez solidement le portoi
25. temp rature ambiante ou congel Dur e autoris e apr s conservation sous cong lation 2 Les chantillons d urine trait s peuvent subir un total de 5 cycles de cong lation d cong lation C Conservation des chantillons apr s les tests 1 Les chantillons qui ont t test s doivent tre rang s dans un portoir en position verticale 2 Les tubes de transport d chantillons d urine doivent s ils ne sont pas rebouch s avec un bouchon intact tre recouverts d une nouvelle barri re de plastique ou d aluminium propre 3 Si certains des chantillons test s doivent tre congel s ou envoy s retirez les bouchons p n trables et placez de nouveaux bouchons non p n trables sur les tubes de transport d chantillon d urine Si les chantillons doivent tre envoy s pour tre test s dans un autre tablissement les temp ratures recommand es doivent tre maintenues vitez les projections et la contamination crois e Remarque Le transport des chantillons doit s effectuer conform ment aux r glementations nationale et internationale applicables relatives au transport Test Progensa PCA3 15 501377FR Rev 001 Proc dure de test Progensa PCA3 Proc dure de test A Pr paration de la zone de travail 1 2 Pr parez un premier bain marie 62 C 1 C pour la pr amplification un second bain marie 42 C 1 C pour l amplification et un troisi me bain marie 62
26. 21 501377FR Rev 001 Proc dure de test Progensa PCA3 2 V rifiez que les volumes d Auto Detect 1 et 2 sont suffisants pour effectuer les r actions Chargez les unit s TTU dans le luminom tre en vous guidant pour cela sur le diagramme du luminom tre Si les deux analytes sont test s s ries cons cutives chargez tout d abord les unit s TTU de PCA3 suivies imm diatement des unit s TTU de PSA Connectez vous l ordinateur Cliquez sur NEW RUN NOUVELLE SERIE et s lectionnez le protocole de test et les concentrations ad quates Cliquez sur NEXT SUIVANT pour commencer la s rie Remarque La s rie doit tre compl t e dans les 2 heures qui suivent la fin de l incubation 62 C de l tape de s lection Pr parez une solution de d sactivation en m langeant un volume identique d hypochlorite de sodium de 5 7 0 7 M 1 0 M et de tampon pour solution de d sactivation dans un r cipient en plastique quip d un grand couvercle Mettez une tiquette et inscrivez la date de p remption sur le r cipient en plastique La solution de d sactivation est stable 4 semaines temp rature ambiante Une fois la s rie termin e le logiciel de test g n re deux rapports sur la s rie un Rapport sur la s rie brute et un Rapport sur les ratios dans le cas de s ries cons cutives voir Proc dures de contr le de qualit and Interpr tation des r sultats Une fois la s rie termin e retirez les uni
27. A3 Score se r f rer aux instructions du Tableau 5 Tableau 5 Conditions du Rapport sur les ratios du test Progensa PCA3 R sultat PCA3 R sultat PSA Test PCA3 Score h Code Code list suppl men Action commentaire d analyse d analyse taire Dans la fourchette Dans la fourchette PCA3 Score Non Aucune action suppl mentaire le r sultat pas de code pas de code peut tre utilis dans un rapport Non valide Non valide Oui Testez nouveau les deux analytes voir a b e h oui A B E H ou l Nouveau test Fort th Diluez l chantillon dans le diluant Non valide PARIS Oui d chantillon voir Dilution des chantillons a b e h oui Ps a w fortement hors normes et testez nouveau F les deux analytes Fortement hors N lid Diluez l chantillon dans le diluant normes A in S _ Oui d chantillon et testez nouveau les deux f A B E H ou I analytes Fortement hors Fortement hors Diluez l chantillon dans le diluant normes normes _ Oui d chantillon et testez nouveau les deux f F analytes Faibl th L chantillon ne contient pas suffisamment Non valide aR MENENS N de RNA pour des analyses pr cises Un a b e h ou i p E n nouvel chantillon doit tre collect aupr s G du patient Faibl th L chantillon ne contient pas suffisamment Dans la fourchette PEER N de RNA pour des analyses pr cises Un pas de code ae E en nouvel chantillon doit tre col
28. A3 associe les technologies de capture de cible de TMA Transcription Mediated Amplification et du test de protection contre l hybridation HPA pour respectivement simplifier le traitement des chantillons d urine amplifier le RNA cible et d tecter l amplicon Test Progensa PCA3 2 501377FR Rev 001 Progensa PCA3 Informations g n rales Lorsque le test Progensa PCA3 est r alis en laboratoire les mol cules du RNA cible sont isol es des chantillons d urine par capture de cible Les oligonucl otides oligonucl otides de capture qui sont compl mentaires aux r gions sp cifiques de la s quence des cibles sont hybrid s aux cibles dans l chantillon d urine Un oligonucl otide de capture distinct est utilis pour chaque cible La cible hybrid e est ensuite captur e sur des microparticules magn tiques qui sont s par es de l chantillon d urine dans un champ magn tique Des tapes de lavage sont effectu es pour liminer les composants exog nes du tube r actionnel La s paration magn tique et les tapes de lavage ont lieu avec un syst me de capture de cible L amplification de cible se produit via la TMA une m thode d amplification de l acide nucl ique bas e sur la transcription qui utilise deux enzymes la transcriptase inverse du virus de la leuc mie murine de Moloney MMLV et la polym rase RNA T7 On utilise un seul jeu d amorces pour chaque cible La transcriptase inverse sert g n rer u
29. C 1 C pour la post amplification Assurez vous que ces bains marie contiennent une quantit d eau suffisante voir Remarques concernant la proc dure Si l on utilise le SB100 Dry Heat Bath vortexeur se r f rer la fiche d application du SB100 Dry Heat Bath vortexeur pour le test Progensa PCA3 Fiche d application du SB100 Avant d entreprendre le test essuyez les plans de travail et les pipeteurs avec une solution d hypochlorite de sodium dos e de 2 5 3 5 0 35 0 5 M Laissez la solution d hypochlorite de sodium au contact des surfaces et des pipeteurs pendant au moins 1 minute puis rincez l eau Ne laissez pas s cher la solution d hypochlorite de sodium Couvrez la surface de la paillasse sur laquelle le test sera effectu avec des protections de laboratoire absorbantes propres avec envers plastifi Placez un nombre suffisant de cassettes de dix embouts dans le syst me de capture de cible Target Capture System TCS V rifiez que la bouteille de solution de lavage TCS est remplie avec la solution de lavage et que l aspirateur est branch sur la pompe vide Se r f rer au Manuel de l op rateur du Syst me Target Capture B Reconstitution et pr paration des r actifs La reconstitution des r actifs doit tre effectu e avant d entreprendre le transfert des chantillons 1 Afin de reconstituer le r actif d amplification le r actif enzymatique et le r actif sonde combinez les flacons de r
30. En revanche l expression du g ne PSA est similaire dans les cellules malignes et les cellules b nignes les taux de RNA du PSA peuvent ainsi tre utilis s pour normaliser la quantit d acide ribonucl ique RNA sp cifique la prostate dans les chantillons de test mol culaires La faisabilit des tests mol culaires quantitatifs bas s sur le PCA3 des s diments urinaires 2 et de l urine non centrifug e 3 a t d montr e Le test Progensa PCA3 utilise l urine non centrifug e collect e apr s un toucher rectal TR consistant en trois effleurages par lobe Le TR lib re les cellules prostatiques via le syst me du canal prostatique dans les voies urinaires o elles peuvent tre recueillies dans l urine de premier jet L urine est trait e par l ajout de Moyen de transport d urine UTM qui lyse les cellules et stabilise le RNA Les RNA des PCA3 et PSA sont quantifi s et le PCA3 Score est d termin en se basant sur le ratio des RNA de l expression PCA3 PSA Outre qu il normalise le signal PCA3 le dosage du RNA du PSA sert galement confirmer que la lib ration du RNA sp cifique la prostate est suffisante pour g n rer un r sultat valide Des PCA3 Scores plus lev s pr sentent une corr lation avec une probabilit de biopsie positive de la prostate plus importante Principes de la proc dure Le test Progensa PCA3 se compose de deux tests quantitatifs d amplification de l acide nucl ique Le test Progensa PC
31. HOLOGIC Progensa PCA3 Test Progensa PCA3 Pour diagnostic in vitro R serv l exportation am ricaine Informations g n rales 2 Usage pr vu re eee ati are rare hr viens 2 R sum et explication du test 2 Principes de la proc dure 2 R actifs et mat riels fournis 4 Mat riels 21 13 33 4eme seen 8 Avertissements et pr cautions 10 Conditions de conservation et de manipulation 13 Collecte transport et conservation des chantillons 14 Proc dure de test 4 2 248224 seasasnamesetarensmsan 16 Remarques concernant la proc dure 22 Proc dures de contr le de qualit 26 Interpr tation des r sultats 27 IMHOS En sas E E r mn nue 32 Caract ristiques des performances 33 Bibliographi 2 4 224 444 ass uutesumemsutisauue 39 Test Progensa PCA3 1 501377FR Rev 001 Informations g n rales Progensa PCA3 Informations g n rales Usage pr vu Le test Progensa PCA3 est un test d amplification de l acide nucl ique NAAT in vitro qui d tecte l acide ribonucl ique RNA du g ne 3 PCA3 du cancer de la prostate dans les chantillons d urine masculins afin de g n rer un PCA3 Score Le PCA3 Score est
32. Progensa PCA3 est limit e au personnel ayant t form la proc dure Le non respect des instructions figurant dans cette notice peut donner lieu des r sultats erron s Chaque laboratoire devra valider ind pendamment un processus de transfert LIS E La fiabilit des r sultats d pend de la qualit de la collecte des chantillons d urine Etant donn que le syst me de transport utilis pour le test Progensa PCA3 ne permet pas l valuation microscopique de la qualit des chantillons d urine il est n cessaire que les cliniciens soient form s aux techniques de collecte d chantillons d urine appropri es Voir Collecte transport et conservation des chantillons Pour des informations plus d taill es r f rez vous la notice de test fournie avec le Progensa PCA3 Urine Specimen Transport Kit Les r sultats du test Progensa PCA3 doivent tre interpr t s en conjonction avec les autres donn es de laboratoire et cliniques dont dispose le clinicien Les r sultats des tests peuvent tre affect s par une collecte impropre des chantillons une erreur technique ou une confusion entre chantillons Test Progensa PCA3 32 501377FR Rev 001 Progensa PCA3 Caract ristiques des performances Caract ristiques des performances A R sultats cliniques 1 Sensibilit et sp cificit diagnostiques Les caract ristiques de performance du test Progensa PCA3 ont t tablies en utilisant les chantillons de
33. Rapport sur les ratios Si des r sultats d analyte proviennent de s rie distinctes et qu ils sont accompagn s d un ou plusieurs codes d analyse Test Progensa PCA3 28 501377FR Rev 001 Progensa PCA3 Interpr tation des r sultats recherchez la combinaison des deux analytes dans le Tableau 4 ou le Tableau 5 pour d terminer si une action suppl mentaire est n cessaire Remarque La pr sence d un code d tat ou d analyse ne signifie pas automatiquement qu il faille effectuer un deuxi me test 3 Interpr tation des r sultats du R sum des exceptions Le R sum des exceptions peut n indiquer aucun chantillon Si tel est le cas aucune autre action n est n cessaire Si le R sum des exceptions indique un ou plusieurs chantillons pour des s ries cons cutives dans lesquelles les deux s ries d analyte sont valides r f rez vous aux instructions du Tableau 4 Pour les s ries d analyte individuelles r f rez vous Interpr tation des codes d tat et d analyse Dans les s ries cons cutives o une s rie d analyte n est pas valide testez une seconde fois la s rie invalide voir Nouveau test pour de plus amples informations et traitez les r sultats comme s il s agissait de s ries d analyte individuelles Une mise en correspondance manuelle sera alors n cessaire Un chantillon peut tre d sign comme non valide alors que les tubes individuels r plicats seront d sign s comme
34. ableau 10 Le montre l exactitude de la r p tabilit du test Progensa PCA3 aux diff rents taux de concentration test s Tableau 10 R p tabilit du test Progensa PCA3 Membre Moyenne R p tabilit R p tabilit Analyte du panel c mL SD CV 1 1 228 145 12 PCA3 2 12 020 809 7 3 61 108 2 489 4 1 48 091 3715 8 PSA 2 484 457 41 026 8 3 2 001 430 131 554 7 Concernant la reproductibilit un panel de test de 8 membres compos d chantillons group s 1 3 et un transcrit RNA dilu in vitro 4 8 a t pr par Trois op rateurs ont test ce panel au cours de 18 s ries effectu es en 3 jours en utilisant un seul lot de calibrateurs et de contr les 3 lots de r actifs et 3 jeux de mat riel Tableaux 11 et 12 r sument la pr cision totale intra s rie et inter s rie de l op rateur du mat riel et du lot avec le test Progensa PCA3 pour le c mL de l analyte et le PCA3 Score Les variabilit s intra s rie inter op rateur et inter s rie ont t par ordre d croissant les plus gros contributeurs la variance g n rale du test Le lot de r actif et le mat riel ont peu contribu la variance g n rale du test Ces r sultats prouvent que le test Progensa PCA3 se comporte de mani re reproductible et que la source principale de variation est due aux erreurs al atoires intra s rie Tableau 11 Reproductibilit du test Progensa PCA3
35. analys s en double Ne pas laisser de tubes vides entre les calibrateurs les contr les et les chantillons Si l on utilise l appareil TECAN Freedom EVO 100 4 se r f rer la Fiche d application du TECAN Freedom EVO 100 4 pour le test Progensa PCA3 Fiche d application du TECAN Freedom EVO pour de plus amples instructions Tableau 3 Pr paration du portoir exemple Concentration cible Concentration cible de portoir l chantillon tu PCAS du PSA Copies mL Copies mL 1 3 Calibrateur 1 0 0 4 6 Calibrateur 2 250 7 500 7 9 Calibrateur 3 2 500 75 000 10 12 Calibrateur 4 25 000 750 000 13 15 Calibrateur 5 125 000 3 000 000 16 17 Contr le A 1 250 37 500 18 19 Contr le B 62 500 1 500 000 20 n chantillon inconnu inconnu Les calibrateurs et contr les positifs PCA3 et PSA ont des valeurs assign es et les valeurs c mL effectives des calibrateurs 2 5 et des contr les A et B seront l g rement diff rentes des concentrations cible figurant dans le tableau et varieront d un lot l autre Les valeurs assign es seront indiqu es sur une fiche incluse dans le conditionnement des flacons de calibrateurs et de contr les et serviront la calibration et la d termination de la validit de la s rie D V rification des informations relatives la concentration V rifiez avec l administrateur syst me du logiciel de test Progensa PCA3 que les informations de concentrati
36. ation 62 C 1 C pendant 10 5 minutes Transf rez le portoir dans un bain marie 42 C 1 C pendant 5 2 minutes Une fois le portoir dans le bain marie retirez soigneusement la carte de protection et l aide du pipeteur r p tition ajoutez 25 uL du r actif enzymatique reconstitu chacun des m langes r actionnels Toutes les r actions doivent maintenant avoir une teinte orang e Couvrez imm diatement les tubes avec une nouvelle carte de protection retirez le portoir du bain marie et m langez rapidement les r actions en agitant d licatement le portoir manuellement Remarque Minimisez le temps pendant lequel le portoir est hors du bain marie pour viter le refroidissement des tubes Incubez le portoir 42 C 1 C pendant 60 5 minutes I Post amplification Le pipeteur r p tition utilis pour l hybridation et la s lection doit tre r serv uniquement ces tapes voir Avertissements et pr cautions L environnement de la post amplification y compris la d tection doit tre une temp rature de 15 C 30 C Si vous utilisez le SB100 Dry Heat Bath vortexeur r f rez vous la Fiche d application du SB100 1 Hybridation a Retirez le portoir du bain marie de pr amplification et transf rez le dans la zone de post amplification A l aide du pipeteur r p tition ajoutez 100 uL de r actif de sonde reconstitu sp cifique l analyte Tous les m langes
37. automatique Dans les s ries cons cutives o les deux s ries d analyte sont valides le logiciel tablit automatiquement la correspondance des r sultats des analytes PCA3 et PSA des chantillons test s et d termine le PCA3 Score s il est calculable Les r sultats figurent dans le Rapport sur les ratios ou dans le R sum des exceptions du Rapport sur la s rie brute Mise en correspondance manuelle Si les analytes PCA3 et PSA sont test s dans des s ries diff rentes le logiciel n est pas en mesure de d terminer automatiquement le PCA3 Score La mise en correspondance Test Progensa PCA3 27 501377FR Rev 001 Interpr tation des r sultats Progensa PCA3 manuelle des r sultats des analytes est donc n cessaire pour d terminer le PCA3 Score ou la fourchette du PCA3 Score consultez le Guide de r f rence rapide ou le Manuel de l op rateur du logiciel de test Progensa PCA3 La mise en correspondance manuelle peut aussi tre n cessaire pour les r sultats figurant dans le R sum des exceptions du Rapport sur la s rie brute Apr s la mise en correspondance manuelle le ou les PCA3 Score s pour le ou les pr l vements mis en correspondance figureront dans un nouveau Rapport sur les ratios C Interpr tation des rapports 1 PCA3 Score Remarque Seuls les PCA3 Scores et les fourchettes des PCA3 Scores figurant dans le Rapport sur les ratios sont utilisables dans un rapport Les r sultats apparaissant da
38. ecimen Diluent Kit Testez l chantillon dilu avec le test Si apr s ce nouveau test les r sultats de l chantillon sont toujours fortement hors normes continuez diluer l chantillon jusqu ce que les r sultats soient interpol s dans la fourchette du calibrateur si n cessaire Une dilution suppl mentaire de la dilution initiale au 1 10 est permise sous r serve que la solution initiale au 1 10 ait t correctement conserv e voir Collecte transport et conservation des chantillons pour de plus amples informations Test Progensa PCA3 31 501377FR Rev 001 Limites Progensa PCA3 Limites A Le test Progensa PCA3 ne devrait pas tre utilis chez les patients prenant des m dicaments connus pour affecter les taux de PSA s rique tels que le finast ride Proscar Propecia le dutast ride Avodart et suivant une th rapie anti androg ne Lupron L effet de ces m dicaments sur l expression du g ne PCA3 n a pas encore t valu Certaines proc dures th rapeutiques et de diagnostic telles qu une prostatectomie des rayons une biopsie de la prostate et autres peuvent affecter la viabilit des tissus prostatiques et alt rer ainsi le PCA3 Score L effet de ces proc dures sur la performance du test n a pas t encore valu Les chantillons destin s au test PCA3 doivent tre collect s lorsque le clinicien estime que les tissus prostatiques ont r cup r L utilisation du test
39. ement Methods CLSI Wayne PA based Molecular Urine Analysis for the Diagnosis of Prostate Cancer European Urology Ahal CE IVD Hologic Inc 10210 Genetic Center Drive San Diego CA 92121 Etats Unis Service clients 1 844 Hologic 1 844 465 6442 customersupport hologic com Service technique 1 888 484 4747 molecularsupport hologic com Pour obtenir des coordonn es suppl mentaires visitez le site www hologic com EMERGO EUROPE Molenstraat 15 2513 BH La Haie Pays Bas Hologic Aptima DTS Leader Progensa et SB100 sont des marques commerciales et ou des marques d pos es d Hologic Inc et ou de ses filiales aux tats Unis et ou dans d autres pays eppendorf stylis et REPEATER sont des marques de commerce de Eppendorf AG RAININ est une marque de commerce de Rainin Instrument LLC TECAN et FREEDOM EVO sont des marques de commerce de Tecan Group AG Toutes les autres marques commerciales qui peuvent appara tre dans ce notice sont des marques commerciales de leurs d tenteurs respectifs 2006 2014 Hologic Inc Tous droits r serv s 501377FR R v 001 2014 11 Test Progensa PCA3 39 501377FR Rev 001
40. ents SB100 suppl mentaires peuvent tre n cessaires selon le d bit requis throughput Micro pipeteur 1 000 uL RAININ PR1000 Embouts 1 000 uL P1000 Pipeteur eppendorf 20 200 uL Embouts pipette 20 200 uL N de r f rence 302352 104747 104555 301048 105725 901715 105049 105726 Javel solution d hypochlorite de sodium dos e de 5 7 0 7 1 0 M R cipient plastique large couvercle R cipients standard pour la collecte d urine sans conservateurs Unit s de dix tubes TTU Cassette de dix embouts TTC Solution talon SysCheck v rification syst me Mat riel optionnel Kit Progensa PCA3 100 r actions Kit Progensa PSA 100 r actions Kit de calibrateurs et contr les Progensa PCA3 TU0022 104578 301078 N de r f rence 302354 302357 302353 Test Progensa PCA3 8 501377FR Rev 001 Progensa PCA3 Mat riels Kit de calibrateurs et contr les Progensa PSA Progensa PCA3 PSA Proficiency Panels Progensa PCA3 Specimen Diluent Kit Kit de liquides pour tests Aptima Embouts de pipette jetables avec filtre 1 mL TECAN Freedom EVO 100 4 Plaque de support pour PCA3 DTS 800 R servoir r actif quart de module de 40 mL R servoir r actif partag en deux quart de module de 19 mL x 2 r f rence 902021 r f rence 104765 r f rence 901172 Tubes de transport Bouchons p n trables de rechange Bouchons non p n trables de rechange N de r f
41. es et le c mL de l analyte signal Aucun effet de matrice de diluant significatif n a t not Voir Figure 4 PCA3 c mL mesur 1 4E 05 1 2E 05 1 0E 05 8 0E 04 6 0E 04 4 0E 04 2 0E 04 0 0E 00 Analyte PCA3 Analyte PSA 3 0E 06 y 0 9932x 613 87 y 1 0875x 27 939 R2 0 9998 2 5E 06 R 0 9991 O Diluant d chantillon o O Diluant d chantillon 5 2 0E 06 E l E 1 5E 06 o 7 1 0E 06 y 0 9663x 27 393 ys 0 9523x 79 762 5 0E 05 R 0 9973 R 0 9999 A Urine A Urine 0 0E 00 d 0 0E 00 5 0E 05 1 0E 06 1 5E 06 2 0E 06 2 5E 06 3 0E 06 0 0E 00 3 0E 04 6 0E 04 9 0E 04 1 2E 05 PCA3 c mL pr vu PSA c mL pr vu Figure 4 Lin arit du test Progensa PCA3 pour les analytes PCA3 et PSA 5 Exactitude L exactitude du test Progensa PCA3 a t valu e conform ment CLSI EP5 A2 2004 9 La r p tabilit correspond l exactitude dans des conditions de variabilit minimum et la reproductibilit l exactitude dans des conditions de variabilit maximum Pour la r p tabilit un panel de test de 3 membres comprenant un transcrit RNA dilu in vitro a t pr par L op rateur d un des sites a test ce panel avec 20 s ries de 5 r plicats pendant 20 jours en utilisant un seul lot de calibrateurs et de contr les Test Progensa PCA3 36 501377FR Rev 001 Progensa PCA3 Caract ristiques des performances un lot de r actifs et un jeu de mat riel T
42. es r plicats d passe 600 Le test de l chantillon doit tre r p t pour cet analyte Test Progensa PCA3 26 501377FR Rev 001 Progensa PCA3 Interpr tation des r sultats Interpr tation des r sultats A Types de rapports 1 Rapport sur la s rie brute Le Rapport sur la s rie brute fournit des informations sur la validit de la s rie PASS REUSSITE ou FAIL ECHEC voir Proc dures de contr le de qualit et sur les tubes r actionnels individuels test s avec le test Progensa PCA3 Si la s rie n est pas valide FAIL ECHEC tous les tubes de cette s rie seront marqu s comme non valides Toutefois des tubes individuels peuvent tre jug s non valides dans une s rie valide PASS REUSSITE Pour les s ries cons cutives autrement dit lorsque les analytes PCA3 et PSA sont test s dans une m me s rie une s rie d analyte peut tre non valide alors que l autre s rie est valide Le R sum des exceptions se trouve la fin du Rapport sur la s rie brute Dans le cas de s ries cons cutives dans lesquelles les deux s ries d analytes sont valides les pr l vements figurant dans le R sum des exceptions peuvent n cessiter une reprise du test pour l un des analytes Bien qu un r sultat de PCA3 Score puisse figurer dans le R sum des exceptions ce r sultat n est pas consid r utilisable dans un rapport tant que la correspondance manuelle n a pas t effectu e et que le r sultat
43. espace de travail sp cifique pour la post amplification afin de minimiser la contamination par l amplicon lors du test Cette zone de travail devrait tre loign e de la zone de pr amplification l o ont lieu la pr paration des r actifs la capture de cible et l amplification Pour viter la contamination des diff rentes zones du laboratoire par l amplicon le sens de travail du laboratoire devrait tre unidirectionnel depuis la pr paration des r actifs jusqu la post amplification Les chantillons le mat riel et les r actifs ne doivent pas tre ramen s l o une tape pr c dente a t effectu e Le personnel ne doit pas retourner dans les zones de travail des tapes pr c dentes sans s entourer de pr cautions ad quates pour viter toute contamination Recommandations concernant les chantillons Une fois l urine vers e dans le tube de transport d chantillons d urine le niveau de liquide de ce tube doit se situer entre les deux lignes indicatrices noires de l tiquette du tube Dans le cas contraire l chantillon doit tre rejet Observer des conditions de conservation ad quates pendant le transport des chantillons pour pr server leur int grit La stabilit des chantillons dans des conditions de transport autres que celles recommand es n a pas t valu e Les dates de p remption indiqu es sur les kits de collecte se rapportent au site de collecte et non pas au lie
44. it preuve d une stabilit de RNA de PCA3 et de PSA jusqu 90 jours Stabilit du cycle de cong lation d cong lation Les chantillons ont t soumis 6 fois des cycles compris entre 37 C et 70 C Aucune diminution dans les taux de copie de RNA de PCA3 ou de PSA n a t observ e B R sultats analytiques 1 Sensibilit analytique Un panel de sensibilit analytique compos d un transcrit RNA dilu in vitro a t utilis pour valuer la sensibilit du test Un op rateur a test le panel sur douze s ries de cinq r plicats en utilisant un seul lot de r actifs La limite de d tection et la limite de quantification ont t calcul es conform ment CLSI EP17 A 2004 5 La limite de d tection de l analyte PCA3 a t de 80 c mL et de 1 438 c mL pour l analyte PSA Le Calibrateur 2 a repr sent la limite de quantification des deux analytes 2 Sp cificit analytique a Transcrit non piss Le test Progensa PCA3 a t con u pour d tecter uniquement le RNA de PCA3 piss des exon 3 exon 4 sp cifiques au cancer de la prostate 2 Le test n a pas d tect le 1 million c mL de RNA de PCA3 non piss de mani re significative au dessus du bruit de fond Sp cificit prostatique du RNA de PCA3 dans l urine Les chantillons de sujets ayant subi une prostatectomie radicale n 97 ont t test s avec le test Progensa PCA3 et les taux de RNA de PCA3 ont t compar s ce
45. l avec de l eau pour viter toute piq re de corrosion Rampe d aspiration TC Apr s chaque utilisation a D placez la rampe de distribution de fa on ce qu elle ne g ne pas b Placez une nouvelle TTC dans le portoir TTC Mettez la pompe vide en marche Fixez la rampe d aspiration aux embouts de la TTC Aspirez tout r sidu ventuel de solution de lavage dans la cuve d amor age du poste de distribution c Versez au moins 100 mL de solution d hypochlorite de sodium dos e de 0 5 0 7 0 07 M 0 1 M ou si vous le pr f rez dos e de 2 5 3 5 0 35 M 0 5 M dans la cuve d amor age Aspirez la totalit de la solution au moyen de la rampe d aspiration d Versez au moins 100 mL d eau d sionis e dans la cuve d amor age Aspirez la totalit de l eau au moyen de la rampe d aspiration e Ejectez les embouts dans leur TTC d origine f Laissez fonctionner la pompe vide jusqu ce que la tubulure de la rampe soit s che pour viter tout refoulement environ 3 minutes g D contaminez les surfaces de la rampe d aspiration comme expliqu sous Unit TCS R cipient d chets TCS Nettoyez le flacon d chets au moins une fois par semaine ou avant qu il ne soit rempli 25 si cela se produit avant a Eteignez la pompe vide et laissez la pression s quilibrer b D branchez les raccords d connexion rapide entre le flacon d chets et le flacon de trop plein ainsi que
46. le fond des tubes ou tapoter les embouts de mani re rapide car cela peut entra ner la formation de mousse dans le pi ge vide Une fois l aspiration termin e jectez les embouts dans leur cassette d origine Recommencez les tapes d aspiration pour les unit s TTU restantes en r servant un embout pour chaque tube r actionnel Placez la rampe de distribution sur chaque unit TTU et l aide de la pompe du poste de distribution versez 1 0 mL de solution de lavage dans chacun des tubes de l unit TTU Couvrez les tubes avec une carte de protection et retirez le portoir du TCS Vortexez le portoir une fois sur le vortexeur m langeur tourbillon multi tubes Consultez la section Remarques concernant la proc dure pour de plus amples informations Placez le portoir sur la base magn tique du TCS pendant 5 10 minutes Aspirez la totalit du liquide comme dans les tapes 11 et 12 Apr s l aspiration finale retirez le portoir du socle TCS et inspectez visuellement les tubes pour v rifier que le liquide a t totalement aspir et que tous les tubes contiennent des billes de particules magn tiques S il reste visiblement du liquide remettez le portoir sur la base TCS pendant 2 minutes et refaites l aspiration pour cette unit TTU en prenant les m mes embouts que ceux utilis s pr c demment pour chaque tube r actionnel Si la MOINDRE bille de particule magn tique est visible une fois l aspiration termin e le
47. lect aupr s G du patient 7 L chantillon ne contient pas suffisamment Rorement hors Faiblement hors N de RNA pour des analyses pr cises Un A pag E on nouvel chantillon doit tre collect aupr s G du patient L chantillon ne contient pas suffisamment Faiblement hors Faiblement hors de RNA pour des analyses pr cises Un DS a OR nouvel chantillon doit tre collect aupr s du patient Consulter le Manuel d utilisation du logiciel de test Progensa PCA3 pour une liste compl te des codes d analyse S applique uniquement aux chantillons non valides d une s rie valide Si des chantillons ne sont pas valides parce qu une s rie n tait pas valide les r sultats figureront dans le R sum des exceptions voir Interpr tation des r sultats du R sum des exceptions pour de plus amples informations Test Progensa PCA3 30 501377FR Rev 001 Progensa PCA3 Interpr tation des r sultats D Nouveau test 1 Directives pour effectuer un deuxi me test a Bien qu il ne soit pas imp ratif que les deux analytes soient test s dans la m me s rie les r sultats des deux analytes doivent venir du m me flacon d chantillon pour obtenir un PCA3 Score pouvant tre utilis dans un rapport Toutes les s ries non valides doivent tre reprises ainsi que tous les chantillons non valides des s ries valides Testez nouveau le ou les chantillons en utilisant un nouveau jeu
48. ne copie d acide d soxyribonucl ique DNA contenant un site promoteur de la polym rase RNA T7 de la s quence de la cible La RNA polym rase T7 produit de multiples copies de l amplicon du RNA partir de la matrice de copie du DNA La d tection s effectue au moyen du test HPA avec des sondes monocat naires et chimiluminescentes d acide nucl ique marqu et qui sont compl mentaires l amplicon Des sondes distinctes sont utilis es pour chaque amplicon cible Les sondes d acide nucl ique marqu es s hybrident sp cifiquement l amplicon Le r actif de s lection diff rencie les sondes hybrid es de celles qui ne le sont pas en d sactivant le marqueur sur les sondes non hybrid es Lors de l tape de d tection un signal chimiluminescent produit par la sonde hybrid e est mesur dans un luminom tre et transcrit en Unit s relatives de lumi re RLU Les RNA du PCA3 et du PSA sont quantifi s dans des tubes distincts et le PCA3 Score est tabli Des calibrateurs contenant des quantit s connues de transcrits RNA de PCA3 ou PSA sont inclus dans chaque s rie de test et utilis s pour g n rer une courbe standard Des contr les PCA3 et PSA sont galement inclus pour v rifier la pr cision des r sultats interpol s partir de la courbe standard Test Progensa PCA3 3 501377FR Rev 001 R actifs et mat riels fournis Progensa PCA3 R actifs et mat riels fournis Remarque Pour obtenir des informati
49. ne figure pas dans le Rapport sur les ratios Si un seul analyte a t test ou si une s rie d analyte n est pas valide tous les chantillons test s figureront dans le R sum des exceptions Rapport sur les ratios Le logiciel de test g n re automatiquement un Rapport sur les ratios lors des s ries cons cutives o les deux s ries d analyte sont valides Le logiciel calcule et donne le PCA3 Score des pr l vements dans le Rapport sur les ratios Les pr l vements figurant dans le Rapport sur les ratios ne n cessitent pas de test suppl mentaire ou alors ce sont les deux analytes qui doivent tre test s nouveau Les pr l vements ne figurant pas dans le Rapport sur les ratios sont indiqu s dans la partie R sum des exceptions du Rapport sur la s rie brute Il est possible de g n rer un Rapport sur les ratios apr s une correspondance manuelle voir Mise en correspondance manuelle pour de plus amples informations Rapport QC Le Rapport QC donne les crit res de validit de la s rie du test les concentrations assign es et interpol es ainsi que les r cup rations des calibrateurs et contr les Ce rapport indique galement les param tres qui d finissent la courbe de calibration de la r ponse la dose logistique 3 quatre param tres Pour de plus amples renseignements consultez le Manuel de l op rateur du logiciel de test Progensa PCA3 B Mise en correspondance 1 Mise en correspondance
50. normales pas de RNA de PCA3 ou de PSA d tectable et les concentrations mesur es dans le test Progensa PCA3 Le pourcentage de r cup ration a t calcul comme ratio du c mL mesur divis par le c mL ajout multipli par 100 Test Progensa PCA3 35 501377FR Rev 001 Caract ristiques des performances Progensa PCA3 Tableau 9 R cup ration des copies du test Progensa PCA3 Concentration Concentration Analyte connue 5 F ET cImL mesur e c mL R cup ration 750 808 108 7 500 7 618 102 PCA3 18 750 18 722 100 75 000 70 287 94 20 000 23 684 118 250 000 278 373 111 PSA 2 500 000 599 941 120 1 750 000 1 960 775 112 4 Lin arit et fourchette L chelle lin aire du test Progensa PCA3 a t d termin e conform ment CLSI EP6 A 2003 8 en se basant sur l analyse de la r gression lin aire m thode des plus petits carr s Deux jeux de s ries de dilution ont t pr par s partir des chantillons contenant de fortes concentrations de RNA de PCA3 et de PSA Un jeu a t dilu dans de l urine f minine trait e et un autre dans un diluant d chantillon Les dilutions s talaient sur la totalit de la fourchette du test allant des calibrateurs positifs les plus lev s aux plus bas pour chaque analyte Les r sultats de test mesur s des deux analytes PCA3 et PSA ont montr une relation proportionnelle directe entre les dilutions test
51. ns le r sum des exceptions peuvent n cessiter une action suppl mentaire et ne peuvent pas tre utilis s dans un rapport Le PCA3 Score est calcul comme ratio des copies RNA du PCA3 divis par les copies RNA du PSA et multipli par 1 000 Les PCA3 Scores ne peuvent tre calcul s qu en utilisant les r sultats des s ries et chantillons valides Les s ries et chantillons non valides doivent tre test s nouveau pour l analyte concern voir Nouveau test pour de plus amples informations Si le PCA3 Score valid est inf rieur au seuil le r sultat doit tre interpr t comme tant NEGATIF Si le PCA3 Score est sup rieur ou gal au seuil le r sultat doit tre interpr t comme tant POSITIF Le directeur du laboratoire tablira le seuil voir Caract ristiques des performances pour de plus amples informations Dans certaines conditions une fourchette du PCA3 Score gt PCA3 Score calcul ou lt Score calcul est fournie Si le lt PCA3 Score calcul est inf rieur au seuil le r sultat doit tre interpr t comme tant NEGATIF Si le gt PCA3 Score calcul est sup rieur au seuil le r sultat doit tre interpr t comme tant POSITIF S il faut une valeur num rique la dilution et la reprise de test de l chantillon peuvent produire un PCA3 Score au lieu d une fourchette de PCA3 Score voir Nouveau test Dilution des chantillons fortement hors normes Interpr tation des codes d ta
52. nservation des chantillons avant le test 1 Les chantillons d urine trait s doivent tre transport s au laboratoire dans le tube de transport d chantillons d urine Ils peuvent tre exp di s temp rature ambiante sans contr le de temp rature ou bien congel s Prenez les dispositions n cessaires concernant l exp dition des chantillons pour s assurer qu ils sont r ceptionn s par le site de test dans les 5 jours suivant leur collecte Une fois l chantillon re u le laboratoire doit v rifier la date de collecte de l chantillon sur le tube Si les chantillons ont t exp di s temp rature ambiante et qu ils sont re us plus de 5 jours apr s la collecte l chantillon doit tre refus et un nouvel chantillon doit tre demand Le laboratoire peut conserver les chantillons entre 2 C et 8 C pendant 14 jours maximum avant qu il ne faille les jeter Si des p riodes plus longues sont n cessaires se r f rer au Tableau 2 pour les dur es de conservation autoris es diff rentes temp ratures Tableau 2 Dur es de conservation des chantillons d urine trait s Temp rature de conservation Dur e Conservation et exp dition des chantillons trait s jusqu 5 jours Apr s r ception par le site conduisant les tests 2 C 8 C jusqu 14 jours 35 C 15 C jusqu 11 mois 65 C ou en dessous jusqu 36 mois Dur e autoris e pour un envoi
53. nsommer une quantit d eau importante environ 500 mL pour obtenir un volume d urine suffisant collecter Effectuez le toucher rectal comme indiqu ci dessous imm diatement avant la collecte d urine Exercez une pression suffisante sur la prostate pour enfoncer sa surface d environ 1 cm de la base l apex prostatique et de la ligne lat rale la ligne m diane pour chaque lobe comme illustr en Figure 1 Effectuez exactement trois effleurages par lobe Cette technique n est pas destin e tre un massage prostatique Lobe Base Lobe gauche droit Apex Figure 1 Direction correcte de la pression exerc e sur la prostate Apr s le toucher rectal demandez au patient de collecter l urine de premier jet environ 20 30 mL du jet d urine initial dans un r cipient de collecte d urine correctement tiquet Il doit s agir du premier chantillon d urine limin e apr s le toucher rectal Utilisez un r cipient de collecte ne contenant aucun conservateur Si le patient ne parvient pas arr ter son flux d urine et qu il fournit plus que les 20 30 mL requis conservez la totalit de ce volume Si le patient est dans l incapacit de fournir le volume d urine requis 2 5 mL au moins seront n cessaires pour effectuer le test Progensa PCA3 Dans le cas contraire l chantillon doit tre rejet Remarque Des volumes d urine tr s lev s peuvent baisser les concentrations d analytes PCA3 et PSA et peuvent moin
54. on des lots des kits de calibrateurs et de contr le Progensa PCA3 et PSA test s ont t saisies Pour de plus amples informations consultez le Guide de r f rence rapide pour le test Progensa PCA3 Manuel de r f rence rapide ou le Manuel de l administrateur syst me du logiciel de test Progensa PCA3 Remarque La saisie des donn es de concentration est indispensable avant la premi re utilisation de chaque nouveau lot de kit de calibrateurs et de contr les Les s ries ult rieures utilisant les calibrateurs et contr les du m me lot de kit ne n cessitent aucune v rification suppl mentaire E Configuration du Worklist Editor G n rez une liste de travail pour la s rie de tests au moyen du Worklist Editor Hologic sur un ordinateur situ dans la zone de pr amplification Concernant l utilisation du Worklist Editor consultez le Guide de r f rence rapide ou le Manuel de l op rateur du Worklist Editor Hologic Si l on utilise l appareil TECAN Freedom EVO 100 4 se r f rer galement la Fiche d application du TECAN Freedom EVO pour un compl ment d information F Pr paration des chantillons 1 Laissez les calibrateurs et les contr les parvenir temp rature ambiante avant le test M langez les flacons d licatement par retournement 2 Laissez les chantillons parvenir temp rature ambiante avant le test Ne pas vortexer les chantillons Les chantillons doivent tre m lang s d licatement et occasi
55. onnellement par inversion pendant la p riode de r chauffement Voir les Test Progensa PCA3 18 501377FR Rev 001 Progensa PCA3 Proc dure de test Remarques concernant la proc dure pour de plus amples informations sur les pr cipit s qui ne se mettent pas en solution et la manipulation des chantillons congel s G Pr amplification La pr amplification doit s effectuer dans un environnement dont la temp rature est situ e entre 15 C et 30 C et sur deux portoirs en parall le Run both racks in parallel Si vous utilisez le SB100 Dry Heat Bath vortexeur r f rez vous la Fiche d application du SB100 Si vous utilisez l appareil TECAN Freedom EVO 100 4 r f rez vous la Fiche d application du TECAN Freedom EVO pour un compl ment d information 1 10 M langez soigneusement en tournant ou en inversant le r actif Target Capture TCR A l aide d un pipeteur r p tition ajoutez 100 uL du TCR sp cifique l analyte dans le tube r actionnel correspondant Percez le bouchon du flacon du calibrateur l aide du micro pipeteur et ajoutez 400 uL du calibrateur dans le tube r actionnel correctement tiquet Utilisez le m me embout de pipette pour retirer les ajouts de r plicats du flacon travers le bouchon perc Utilisez de nouveaux embouts de pipette avec chaque flacon de calibrateur Recommencez pour l ajout des contr les et chantillons Couvrez et conservez le surplus d chantillon
56. ons sur les mentions de danger et de mise en garde qui pourraient tre associ es ces r actifs consultez la Safety Data Sheet Library Biblioth que des fiches techniques de s curit l adresse www hologic com sds Les r actifs et le mat riel fournis dans le Progensa PCA3 PSA Assay Kit pour le test Progensa PCA3 sont indiqu s ci dessous Les symboles d identification des r actifs sont galement indiqu s c t du nom du r actif Progensa PCA3 Assay Kit 2 x 100 r actions r f rence 302355 8 bo tes Kit Progensa PCA3 100 r actions Bo te r frig r e Progensa PCA3 Conserver entre 2 C et 8 C d s la r ception et jusqu la date de p remption indiqu e Symbole Composant Quantit A R actif d amplification PCA3 1 flacon Acides nucl iques non infectieux d shydrat s dans une solution tamponn e HEPES contenant lt 10 de r actif diluant E R actif enzymatique PCA3 PSA 1 flacon Transcriptase inverse et polym rase RNA d shydrat es dans une solution tamponn e HEPES contenant lt 10 de r actif diluant P R actif de sonde PCA3 1 flacon Sondes DNA chimiluminescentes non infectieuses d shydrat es dans une solution tamponn e de succinate contenant lt 5 de r actif diluant et lt 5 de sulfate de lauryle et de lithium Bo te temp rature ambiante Progensa PCA3 Conserver entre 15 C et 30 C d s la r ception et jusqu la date de p remption indiqu e
57. peuvent tre utilis s m me s il reste des pr cipit s r siduels Apr s la remise en suspension m langez les flacons d licatement par retournement C Installation des portoirs Le pipeteur r p tition utilis pour la capture de cible le transfert d chantillons et l amplification doit tre r serv ces tapes uniquement voir Avertissements et pr cautions 1 Installez un portoir pour l analyte PCA3 et un autre pour l analyte PSA Remarque Si le nombre d chantillons est relativement peu important il est possible de tester les deux analytes sur un seul portoir Si vous utilisez l appareil TECAN Freedom EVO 100 4 il est n cessaire d avoir des portoirs distincts pour chaque analyte Il n est pas possible de tester plus de deux portoirs complets 20 TTU la fois 2 Dans le ou les portoirs pour unit s de dix tubes TTU placez un nombre suffisant d unit s TTU pour les calibrateurs les contr les et chantillons de chaque analyte 3 Inscrivez les ID d chantillon sur les unit s TTU Tableau 3 Le d crit l ajout de calibrateurs contr les et chantillons Chargez les calibrateurs PSA sur une nouvelle unit TTU Test Progensa PCA3 17 501377FR Rev 001 Proc dure de test Progensa PCA3 Remarque Les calibrateurs doivent tre analys s en trois r plicats et les contr les en deux r plicats chacun et ce sur le m me portoir que les chantillons Les chantillons doivent tre
58. qu la date de p remption 30 jours entre 15 C et 30 C Tampon pour solution de d sactivation 15 C 30 C jusqu la date de p remption 28 jours entre 15 C et 30 C Peut tre r utilis jusqu quatre fois pour d autres s ries de test dans la mesure o le temps total temp rature ambiante ne d passe pas 24 heures B Ne pas conserver le r actif Target Capture des temp ratures inf rieures 15 C C Le r actif sonde et le r actif sonde reconstitu sont photosensibles Evitez toute exposition prolong e de ces r actifs la lumi re pendant leur conservation et leur pr paration D Ne pas congeler les r actifs E Ne pas utiliser les r actifs ou liquides apr s la date de p remption F Les calibrateurs et contr les Progensa PCA3 et PSA sont des flacons pr vus pour une seule s rie et doivent tre jet s apr s utilisation G Des modifications dans l aspect physique du r actif fourni peuvent tre un signe d instabilit ou de d t rioration Si l aspect physique des r actifs remis en suspension pr sente toujours des alt rations par ex changements vidents dans la couleur du r actif ou turbidit indicative d une contamination microbienne contactez le Service technique de Hologic avant toute utilisation H Jetez le r actif reconstitu apr s 30 jours ou la date de p remption indiqu e si celle ci survient avant l Le surplus des r actifs ouverts ou
59. r en place et mettez en marche Augmentez lentement la vitesse jusqu ce que le liquide atteigne la moiti sup rieure du tube Vortexez pendant 10 secondes la dur e recommand e ou jusqu l obtention d une teinte uniforme Ensuite tournez la vitesse sur le r glage le plus bas avant d teindre le vortexeur m langeur tourbillon multi tubes et de retirer le portoir Les m langes r actionnels ne doivent jamais toucher les cartes de protection G Bains marie 1 Le niveau d eau des bains marie doit avoir une profondeur de 3 8 cm 5 0 cm 1 5 2 0 pouces depuis le plateau de support m tallique fond du bain marie la surface de l eau Cette pr caution permettra d assurer un transfert de chaleur ad quat Test Progensa PCA3 23 501377FR Rev 001 Proc dure de test Progensa PCA3 2 Pour viter une contamination crois e les bains marie doivent tre r serv s une tape sp cifique du test H D contamination 1 Surfaces et pipeteurs Les surfaces des paillasses et les pipeteurs du laboratoire doivent tre d contamin es r guli rement avec une solution d hypochlorite de sodium de 2 5 3 5 0 35 M 0 5 M Laissez la solution d hypochlorite de sodium au contact des surfaces pendant au moins 1 minute puis rincez l eau Ne laissez pas s cher la solution d hypochlorite de sodium Les solutions base de chlore peuvent piquer le m tal et le mat riel Rincez soigneusement le mat rie
60. rence 302356 302350 302351 302002C 10612513 Tecan 900932 302521 302520 103036A Test Progensa PCA3 9 501377FR Rev 001 Avertissements et pr cautions Progensa PCA3 Avertissements et pr cautions A B Pour diagnostic in vitro R serv l exportation am ricaine Recommandations concernant les laboratoires C D N utilisez que le mat riel de laboratoire jetable fourni ou recommand Prenez les pr cautions de laboratoire habituelles Il est interdit de manger de boire ou de fumer dans les zones de travail signal es Portez des gants jetables sans poudre des lunettes de protection et des blouses de laboratoire pour manipuler les chantillons d urine et les r actifs des kits Lavez vous soigneusement les mains apr s avoir manipul les chantillons d urine et les r actifs des kits Avertissement Irritants corrosifs vitez tout contact d Auto Detect 1 et Auto Detect 2 avec la peau les yeux et les muqueuses En cas de contact de ces liquides avec la peau ou les yeux lavez la zone affect e l eau En cas de d versement de ces liquides diluez le produit r pandu l eau avant de l essuyer Les plans de travail pipettes et autre mat riel doivent tre r guli rement d contamin s avec une solution d hypochlorite de sodium solution de javel dilu e entre 2 5 3 5 0 35 0 5 M voir Remarques concernant la proc dure Il est fortement recommand de r server un
61. s fr quemment produire des chantillons non valides Le patient doit donc viter de remplir le r cipient de collecte Les chantillons d urine non trait s doivent s ils ne sont pas trait s sur le champ tre conserv s entre 2 C et 8 C ou sur de la glace L chantillon d urine refroidi et non trait doit tre transf r dans le tube de transport d chantillons d urine dans les 4 heures qui suivent sa collecte Sinon l chantillon doit tre refus et un nouvel chantillon doit tre collect aupr s du patient Ne pas congeler les chantillons d urine non trait s Test Progensa PCA3 14 501377FR Rev 001 Progensa PCA3 Collecte transport et conservation des chantillons 5 Pour traiter les chantillons d urine rebouchez fermement l chantillon et retournez le 5 fois pour remettre les cellules en suspension Retirez le bouchon du tube de transport d chantillons d urine et transf rez 2 5 mL de l urine collect e dans le tube au moyen de la pipette de transfert jetable fournie cet effet Le volume d urine ajout est ad quat lorsque le niveau de liquide se situe entre les lignes indicatrices noires situ es sur l tiquette du tube de transport d chantillons d urine 6 Rebouchez le tube de transport de l chantillon d urine fermement et retournez l chantillon d urine 5 fois pour le m langer Il y sera fait maintenant r f rence sous le nom d chantillon d urine trait B Transport et co
62. seuils de sensibilit ou sp cificit diagnostiques voir Interpr tation des r sultats Tableau 6 Sensibilit et sp cificit diagnostiques du test Progensa PCA3 pour diff rents seuils du PCA3 Score Seuil du PCA3 Score 5 10 15 25 35 50 95 Sensibilit 96 85 77 63 53 41 17 Sp cificit 14 33 47 h 61 74 84 95 2 Etudes de la stabilit des chantillons a Stabilit dans lurine non centrifug e L urine de premier jet a t recueillie chez 10 sujets et conserv e entre 2 C et 8 C ou 30 C avant d tre trait e par Test Progensa PCA3 33 501377FR Rev 001 Caract ristiques des performances Progensa PCA3 l ajout de moyen de transport d urine UTM A des temp ratures comprises entre 2 C et 8 C une d gradation significative du RNA de PCA3 et de PSA a t observ e dans certains chantillons au bout de 4 heures L urine non centrifug e doit donc tre trait e dans les 4 heures 30 C une d gradation significative a t observ e en moins d une heure L urine non centrifug e doit donc tre toujours r frig r e ou conserv e sur de la glace avant la r alisation des tests Stabilit dans l urine trait e Douze chantillons ont t incub s 4 C ou 30 C jusqu 38 jours 4 C le RNA de PCA3 et de PSA tait stable pendant 21 jours 30 C il tait stable pendant 5 jours Les chantillons conserv s entre 20 C et 70 C ont fa
63. t s TTU utilis es du luminom tre et placez les dans le r cipient contenant la solution de d sactivation Laissez les unit s TTU dans le r cipient pendant au moins 15 minutes avant de les jeter Le responsable du laboratoire devra avoir tabli des m thodes de manipulation et d limination des d chets ad quates Remarques concernant la proc dure A Pr paration des chantillons 1 Si l chantillon contient des pr cipit s en suspension chauffez le 37 C pendant 5 minutes maximum avant de le m langer par retournements d licats Si le pr cipit ne se remet pas en solution v rifiez que ce pr cipit n interf re pas avec le pr l vement d chantillons Les chantillons congel s doivent tre d congel s temp rature ambiante de 15 C 30 C avec utilisation ventuelle d un bain marie avec des retournements occasionnels pendant le processus de d cong lation pour viter la formation d un bouchon insoluble M langez les flacons par retournements d licats une fois que la glace contenue l int rieur est suffisamment d congel e pour se d tacher et bouger librement Continuez r chauffer jusqu d cong lation compl te des chantillons M langez ensuite les flacons par retournements d licats a Si un bouchon se forme alors que les chantillons doivent tre pipet s l aide de l appareil TECAN Freedom EVO 100 4 recongelez les chantillons puis recommencez la proc dure de d cong
64. t et d analyse La colonne Etat du Rapport sur la s rie brute et du Rapport sur les ratios donne des informations en format s a Les codes d tat sp cifiques la s rie s sont indiqu s avant les deux points gauche et les codes d analyte sp cifiques la s rie a figurent apr s les deux points droite Les codes sp cifiques aux analytes sont donn s en minuscules pour les r sultats du PCA3 et en majuscules pour ceux du PSA Chaque rapport contient les descriptions des codes d tat et d analyse figurant dans celui ci Par exemple les codes peuvent indiquer si un r sultat d chantillon ou de r plicat est valide ou hors normes Consultez le Guide de r f rence rapide ou le Manuel de l op rateur du logiciel de test Progensa PCA3 pour une liste compl te des codes d tat et d analyse et pour de plus amples d tails Si un PCA3 Score est indiqu dans le Rapport sur les ratios et qu aucun code d tat ou d analyse ne figure dans les colonnes Etat PCA3 ou PSA ceci indique que les deux analytes test s sont valides et dans les normes Le r sultat de l chantillon est utilisable dans un rapport et aucune action suppl mentaire n est n cessaire Si un code d tat ou d analyse figure dans le R sum des exceptions ou le Rapport sur les ratios il peut tre n cessaire d effectuer un deuxi me test voir Interpr tation des r sultats du R sum des exceptions et Interpr tation des r sultats du
65. tube peut tre accept Si aucune bille n est visible l chantillon doit tre test nouveau Si le m me chantillon ne contient pas de bille de particule magn tique dans cette tape et lors d une s rie ult rieure ceci peut indiquer un probl me li l chantillon Il est alors recommand d effectuer une nouvelle collecte de l chantillon d urine Amplification Remarque L ajout d un enzyme dans un portoir r action tapes 6 et 7 ci dessous doit tre effectu en moins de 90 secondes Effectuez les tapes 6 et 7 sur le premier portoir puis recommencez sur le second portoir Si vous utilisez le SB100 Dry Heat Bath vortexeur r f rez vous la Fiche d application du SB100 Si vous utilisez l appareil TECAN Freedom EVO 100 4 r f rez vous la Fiche d application du TECAN Freedom EVO pour un compl ment d information 1 2 3 A l aide d un pipeteur r p tition ajoutez 75 uL du r actif d amplification reconstitu sp cifique l analyte dans chaque tube r actionnel Tous les m langes r actionnels du portoir doivent maintenant tre rouges Faide du pipeteur r p tition ajoutez 200 uL de r actif huileux Couvrez les tubes avec une carte de protection et vortexez les sur le vortexeur m langeur tourbillon multi tubes Test Progensa PCA3 20 501377FR Rev 001 Progensa PCA3 Proc dure de test 4 8 Incubez le portoir dans un bain marie de pr amplific
66. u de r alisation du test Les chantillons collect s avant la date de p remption du kit de collecte puis transport s et conserv s conform ment la notice du test sont valides pour tre test s m me si la date de p remption du tube de collecte est d pass e Test Progensa PCA3 10 501377FR Rev 001 Progensa PCA3 Avertissements et pr cautions L Conservez tous les chantillons aux temp ratures indiqu es La performance du test peut tre affect e par l utilisation d chantillons mal conserv s Voir Collecte transport et conservation des chantillons pour des instructions pr cises Les chantillons d urine peuvent tre infectieux Respectez les pr cautions universelles lors de la r alisation de ce test Le responsable du laboratoire devra avoir tabli des m thodes de manipulation et d limination des d chets ad quates Seul le personnel ayant re u une formation ad quate pour utiliser le test Progensa PCA3 et manipuler correctement des substances infectieuses doit tre autoris effectuer cette proc dure vitez toute contamination crois e lors des tapes de manipulation des chantillons Les chantillons d urine peuvent contenir des taux lev s de RNA cible Veillez viter tout contact entre les diff rents r cipients d chantillons et ne pas passer au dessus d un r cipient ouvert en jetant des l ments usag s Changez de gants en cas de contact avec un chantillon pour
67. ux de ces sujets avant la biopsie n 464 La m diane c mL du RNA de PCA3 tait inf rieure la limite de d tection du test pour les chantillons des sujets ayant subi une prostatectomie alors que la m diane c mL du RNA de PCA3 des chantillons de sujets avant la biopsie tait de 7 243 c mL ces donn es confirment que le RNA de PCA3 dans l urine vient de la prostate Sp cificit des tissus Le RNA total a t extrait des tissus de deux donneurs m les uniques par type tissulaire ajout au diluant d chantillon 10 ng par r action et analys avec le test Progensa PCA3 Le tissu prostatique a t le seul type de tissu d tect au dessus de la limite de d tection de RNA de PCA3 pour les types de tissus indiqu s au Tableau 7 Test Progensa PCA3 34 501377FR Rev 001 Progensa PCA3 Caract ristiques des performances Tableau 7 Test du RNA de PCA3 sur diff rents types de tissus masculins Type de tissu Vessie normal Rein Vessie tumeur P nis Moelle osseuse Prostate Canal d f rent V sicule s minale Epididyme Testicule d Substances interf rentes Les substances indiqu es dans le Tableau 8 ont t ajout es aux aliquotes des urines masculines group es et trait es Les chantillons ont t test s avec le test Progensa PCA3 conform ment CLSI EP7 A2 2005 6 Pour les concentrations indiqu es aucune interf rence n a t observ e avec le test Tableau 8
68. ux pipeteurs r p tition pour ce test un premier qui sera utilis lors des tapes de pr amplification et l autre pour celles de post amplification R servez un micro pipeteur au transfert des chantillons sauf si vous utilisez l appareil TECAN Freedom EVO 100 4 Tous les pipeteurs doivent tre r guli rement nettoy s conform ment la section Remarques concernant la proc dure Si vous utilisez des pipeteurs r p tition pour ajouter des r actifs ne touchez pas le tube r actionnel avec l embout de la pipette afin d viter toute contamination d un tube l autre Un m lange ad quat est n cessaire pour obtenir des r sultats de test pr cis Pour de plus amples d tails consultez la Remarques concernant la proc dure Test Progensa PCA3 11 501377FR Rev 001 Progensa PCA3 Avertissements et pr cautions V R servez des bains marie distincts aux tapes de pr amplification d amplification et de post amplification lors du test W Certains r actifs de ce kit sont accompagn s de symboles de risque et de s curit conform ment la directive europ enne 1999 45 EC et doivent tre manipul s en cons quence Les fiches techniques de s curit peuvent tre consult es sur le site www hologic com et sont disponibles sur demande Test Progensa PCA3 12 501377FR Rev 001 Progensa PCA3 Conditions de conservation et de manipulation Conditions de conservation et de manipulation A Consultez
69. valides C est le r sultat combin des r plicats qui d termine la validit des chantillons et toute diff rence importante entre r plicats a pour effet d invalider un chantillon voir Proc dures de contr le de qualit pour de plus amples informations Tableau 4 Conditions du R sum des exceptions du test Progensa PCA3 R sultat PCA3 R sultat PSA Test PCA3Score h Code Code list suppl men Action commentaire d analyse d analyse taire ERA Reprenez le test de PSA voir Nouveau Dans AS je ne Oui test et tablissez manuellement la pas de code A B E H ou I correspondance des r sultats Faiblement hors N lid Reprenez le test de PSA voir Nouveau normes A DEN e Oui test et tablissez manuellement la g A B E H ou I correspondance des r sultats N lid D la fi hett Testez nouveau le PCA3 voir Nouveau SA N pe TS 7 ae LS Oui test et tablissez manuellement la a b e h ou i pas de code correspondance des r sultats 1 Faites une correspondance manuelle pour obtenir le lt PCA3 Score calcul OU Fortement hors 2 Diluez l chantillon dans un diluant Dans la e Ai normes Ta Sue Optionnel d chantillon voir Dilution des chantillons pasde code F carcul fortement hors normes retestez le PSA et mettez manuellement les r sultats en correspondance si un PCA3 Score est requis 1 Faites une correspondance manuelle pour Fort th obtenir le gt

Test Progensa PCA3

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