www.QuantiFERON.com Notice QuantiFERON®
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1. Ces calculs peuvent tre effectu s l aide des packs logiciels disponibles avec les lecteurs de micro plaque ainsi qu avec les tableurs standards ou logiciels statistiques comme Microsoft Excel Il est recommand d utiliser ces logiciels pour calculer l analyse de r gression le coefficient de variation CV pour les standards ainsi que le coefficient de corr lation r de la courbe de standard Contr le qualit du test l exactitude des r sultats du test d pend de l exactitude de la g n ration de la courbe de standard Ainsi les r sultats d riv s des standards doivent tre examin s avant d interpr ter les r sultats des chantillons du test Pour que le dosage ELISA soit valide La valeur DO moyenne du standard 1 doit tre gt 0 600 M Le CV des valeurs DO des r plicats du standard 1 et du standard 2 doit tre x 15 76 M Les valeurs DO des r plicats pour les standards et 4 ne doivent pas varier de plus de 0 040 unit de densit optique par rapport leur moyenne M Le coefficient de corr lation calcul partir des valeurs d absorbance moyennes des standards doit gt 0 98 Le logiciel d analyse QFT calcule et rapporte ces param tres de contr le qualit Si les crit res ci dessus ne sont pas respect s l analyse est invalide et doit tre r p t e La valeur DO moyenne du standard z ro diluant vert doit tre 0 150 Si la valeur DO moyenne est gt 0 150 la proc d2. 29 Rothel J S and Andersen P 2005 Diagnosis of latent Mycobacterium tuberculosis infection is the demise of the Mantoux test imminent Expert Rev Anti Infect Ther 3 981 30 Schoepfer A M et al 2008 Comparison of interferon gamma release assay versus tuberculin skin test for tuberculosis screening in inflammatory bowel disease Am J Gastroenterol 103 2799 31 Silverman M S et al 2007 Use of an interferon gamma based assay to assess bladder cancer patients treated with intravesical BCG and exposed to tuberculosis Clin Biochem 40 913 32 Stebler A et al 2008 Whole blood interferon gamma release assay for baseline tuberculosis screening of healthcare workers at a Swiss university hospital Infect Control Hosp Epidemiol 29 681 28 Notice QuantiFERON Gold ELISA 07 2013 12 Service technique Pour le service technique merci de contacter www QuantiFERON com Asia Pacific techservice ap qiagen com Europe techserviceQFT euGqiagen com Middle East Africa techserviceQFT euGqiagen com USA Canada techservice na aiagen com Latin America not including Brazil or Mexico techservice latam qiagen com Mexico techservice MXGqiagen com Brazil techsebr giagen com BEE Notice QuantiFERON Gold ELISA 07 2013 29 13 R sum de la proc dure du test tape 1 Incubation du sang 1 Pr lever le sang du patient dans les tubes de pr l vement sanguin et les
3. Notice QuantiFERON TB Gold LISA Wi 2 x 96 n de r f rence 0594 0201 Wi 20 x 96 n de r f rence 0594 0501 Test de sang total IFN y mesurant les r ponses aux antig nes peptidiques ESAT 6 CFP 10 et TB7 7 p4 IVD Utilisation pr vue pour le diagnostic in vitro CE 0594 0201 0594 0501 Y Cellestis a QIAGEN Company Level 2 Office Tower 2 Chadstone Centre 1341 Dandenong Road Chadstone Victoria 3148 Australie T l phone Australie 613 9840 9800 GIAGEN GmbH GIAGEN Strasse 1 40724 Hilden ALLEMAGNE 1075115FR R v 01 Cli www QuantiFERON com QIAGEN www QuantiFERON com Sommaire 1 Utilisation pr vue 4 2 R sum et explication du test 4 Principes du test 5 Temps requis pour effectuer le test 5 3 Composants et stockage 6 Mat riel n cessaire mais non fourni 4 Stockage et manipulation 7 4 Avertissements et pr cautions 8 Utilisation pr vue pour le diagnostic in vitro 8 Avertissements 8 Pr cautions 9 5 Pr l vement et manipulation des chantillons 11 Instructions d utilisation 13 tape 1 Incubation du sang et pr l vement du plasma 13 tape 2 IFN y humain ELISA 14 7 Calculs et interpr tation du test 19 G n ration de la courbe de standard 19 Contr le qualit du test 19 8 Limitations 21 Caract ristiques des performances 22 tudes cliniques 22 10 Informations techniques 24 R sultats ind termin s 24 chantillons de plasma coagul 24 Gui
4. viter le pipetage r p t ou le m lange du plasma par d autres moyens avant de le pr lever Prendre garde ne pas perturber la mati re sur la surface du gel quelle que soit l tape Solution S assurer que les dilutions du standard de kit sont pr par es correctement conform ment la notice ELISA S assurer que les pipettes sont calibr es et utilis es conform ment aux instructions du fabricant L incubation d ELISA doit tre effectu e temp rature ambiante 22 C 5 C L incubation de la microplaque avec le conjugu les standards et les chantillons doit tre effectu e pendant 120 5 minutes La solution de substrat d enzyme est incub e sur la microplaque pendant 30 minutes La microplaque doit tre lue 450 nm avec un filtre de r f rence de 620 650 nm Tous les r actifs l exception du concentr de conjugu 100 doivent tre ramen s temp rature ambiante avant de commencer le test ce qui prend environ une heure Notice QuantiFERON TB Gold ELISA 07 2013 25 D pannage ELISA Kit composants p rim s Bruit de fond lev Cause possible a Lavage incomplet de la microplaque b Temp rature d incubation trop lev e Kit composants p rim s Solution de substrat d enzyme contamin e Courbe de standard non lin aire et variabilit des duplicats Cause possible a Lavage incomplet de la microplaque b Erreur d
5. Brock et al 2006 Latent tuberculosis in HIV positive diagnosed by the tuberculosis specific interferon gamma test Respir Res 7 56 Chun J K et al 2008 The role of a whole blood interferon gamma assay for the detection of latent tuberculosis infection in bacille Calmette Guerin vaccinated children Diagn Microbiol Infect Dis 62 389 Connell T G et al 2008 A three way comparison of tuberculin skin testing QuantiFERON TB gold T SPOT TB in children PLoS ONE 3 e2624 doi 10 1371 journal pone 0002624 Detjen et al 2007 Interferon gamma release assays improve the diagnosis of tuberculosis and nontuberculous mycobacterial disease in children in a country with a low incidence of tuberculosis Clin Infect Dis 45 322 Diel R et al 2009 Comparative performance of tuberculin skin test QuantiFERON TB Gold In Tube assay and T Spot TB test in contact investigations for tuberculosis Chest 135 1010 Diel R et al 2008 Predictive value of a whole blood IFN y assay for the development of active TB disease Am J Respir Crit Care Med 177 1164 Diel R et al 2006 Tuberculosis contact investigation with a new specific blood test in a low incidence population containing a high proportion of BCG vaccinated persons Respir Res 7 77 Dogra 5 et al 2007 Comparison of a whole blood interferon gamma assay with tuberculin skin testing for the detection of tuberculosis in
6. sentant un risque de LTBI tude Total Conclusions et r sultats d individus test s Healthcare workers 726 D finition de taux tr s lev 40 positifs QFT et 41 positifs TCT in India Pai et al 10 mm Haute concordance avec TCT pas d effet du BCG des deux 2005 26 c t s Les deux tests taient associ s aux facteurs de risque que sont l ge et la p riode de travail dans le secteur de la sant Danish HIV La pr valence g n rale de la LTBI par QFT tait de 4 6 27 590 chez patients Brock et les personnes VIH Les r sultats positifs taient associ s aux risques al 2006 5 Deux sujets positifs QFT ont progress vers la TB active en 1 an Les r ponses ind termin es n 20 3 4 taient associ es de mani re significative un compte CD4 lt 100 yl Hospitalized Les enfants chez qui la TB taient suspect e ou qui pr sentaient des children in India ant c dents de contact avec la TB ont t test s avec QFT et TCT 10 5 Dogra et al taient positifs au QFT et 9 5 taient positifs au TCT 10 mm La 2006 10 concordance entre les tests tait de 95 2 sur l ensemble et de 100 chez les enfants non vaccin s contre le BCG Contact Les contacts rapproch s de 15 cas diff rents ont t test s 51 taient investigations in vaccin s contre le BCG 27 taient n s l tranger 70 des Germany Diel et vaccin s contre le BCG et 18 des non vaccin s ta
7. CO non requis Pipettes multicanaux calibr es 50 yl et 100 pl avec embouts jetables Agitateur de microplaque Eau d ionis e ou distill e 2 litres Laveur de microplaque laveur automatique recommand 650 nm Stockage et manipulation Tubes de pr l vement sanguin M Stocker les tubes de pr l vement sanguin entre 4 C et 25 Notice QuantiFERON TB Gold QFT ELISA 07 2013 Pack de laboratoire de r f rence 0594 0501 20 jeux de bandelettes pour microplaques 12 x 8 puits x flacons 8 Ul ml si reconstitu 10 x 30 ml 10 x 0 3 ml si reconstitu 10 x 100 ml 10 x 30 ml 10x15 ml Pipettes volume variable calibr es de 10 pl 1 000 yl avec embouts jetables Laveur de microplaque quip d un filtre de 450 nm et d un filtre de r f rence de 620 nm R actifs de kit M Stocker les r actifs de kit au r frig rateur entre 2 C et 8 C M Toujours prot ger la solution de substrat d enzyme de la lumi re directe du soleil R actifs reconstitu s et inutilis s Pour des instructions sur la reconstitution des r actifs voir la section 6 page 14 M Le standard de kit reconstitu peut tre conserv jusqu 3 mois s il est stock entre 2 C et 8 C Noter la date laquelle le standard de kit a t reconstitu Une fois reconstitu le concentr conjugu 100X inutilis doit tre stock entre 2 C et 8 C et utilis dans les 3 mois Noter la d
8. antig ne TB QuantiFERON sont utilis s 8 Limitations Les r sultats du test QFT doivent tre utilis s en combinaison avec les ant c dents pid miologiques le statut m dical actuel et d autres valuations diagnostiques de chaque individu Les individus dont les valeurs z ro sont sup rieures 8 Ul ml sont consid r s comme lt ind ter min s car une r ponse plus grande de 25 aux antig nes TB peut se situer hors de la plage de mesure du test Les r sultats non fiables ou ind termin s peuvent survenir dans les cas suivants D viations par rapport la proc dure d crite dans la notice QuantiFERON TB Gold QFT ELISA M Niveaux excessifs d IFN y circulant ou pr sence d anticorps h t rophiles Plus de 16 heures entre le pr l vement de l chantillon sanguin et l incubation 37 C Notice QuantiFERON TB Gold ELISA 07 2013 21 9 Caract ristiques des performances tudes cliniques Comme il n existe pas de standard d finitif pour l infection tuberculeuse latente LTBI une estimation de la sensibilit et de la sp cificit pour QFT ne peut pas tre valu e sur le plan pratique La sp cificit de QFT a t approch e valuant les taux de faux positifs chez les personnes pr sentant un faible risque pos de facteur de risque connu de l infection tuberculeuse La sensibilit a t approch e en valuant des groupes de patients souffrant de la tuberculose active confi
9. mycobact riennes peuvent aussi r pondre ESAT 6 CFP 10 et TB7 7 p4 car les g nes codant ces prot ines sont pr sents dans kansasii M szulgai et M marinum 1 23 Le test est la fois un test de LTBI et un outil utile permettant de diagnostiquer l infection complexe M tuberculosis chez les patients malades Un r sultat positif taie le diagnostic de tuberculose mais des infections par d autres mycobact ries ex M kansasii peuvent aussi entra ner des r sultats positifs D autres valuations m dicales et diagnostiques sont n cessaires pour confirmer ou exclure la tuberculose Principes du test Le syst me QFT emploie des tubes sp ciaux de pr l vement sanguin qui sont utilis s pour pr lever le sang total L incubation du sang est r alis e dans les tubes pendant 16 24 heures avant que le plasma soit pr lev et test la recherche d IFN y produit en r ponse aux antig nes peptidiques Le test QFT est effectu en deux tapes Dans un premier temps le sang total est pr lev dans chacun des tubes de pr l vement sanguin qui incluent un tube de valeur z ro un tube antig ne TB et un tube mitog ne Le tube mitog ne peut tre utilis avec le tube QFT comme contr le positif en particulier en cas de doute sur le statut immunitaire de l individu Le tube mitog ne peut aussi servir de contr le pour la bonne manipulation et la bonne incubation du sang Les tubes doivent tre incub
10. sujet pr lever 1 ml de sang par ponction veineuse directement dans chaque tube de pr l vement sanguin QFT Cette proc dure doit tre effectu e par un phl botomiste exp riment e les tubes de pr l vement sanguin QFT standard peuvent tre utilis s une altitude allant jusqu 810 m tres Les tubes de pr l vement sanguin haute altitude HA QFT peuvent tre utilis s une altitude de 1 020 1 875 m tres e En cas d utilisation des tubes de pr l vement sanguin QFT en dehors de ces intervalles d alti tude ou en cas de faible volume de sang le sang peut tre pr lev l aide d une seringue avant d en transf rer imm diatement 1 ml dans chacun des trois tubes Pour des raisons de s curit la meilleure m thode consiste retirer l aiguille de la seringue en respectant les proc dures de s curit ad quates retirer les bouchons des 3 tubes QFT et ajouter 1 ml de sang dans chacun des tubes jusqu la marque noire situ e sur le c t de l tiquette du tube Replacer correctement les bouchons et m langer comme d crit ci dessous e Comme le pr l vement sanguin pour des tubes de 1 ml est relativement lent conserver le tube sur l aiguille pendant 2 secondes une fois qu il semble s tre rempli la hauteur souhait e afin de s assurer que le bon volume est pr lev La marque noire situ e sur le c t des tubes indique un volume de remplissage 1 ml Les tubes de pr l vement sanguin QFT ont
11. sultat QFT Rapport interpr tation UI ml UI ml 0 35 N gatif Infection M tuberculosis improbable gt 0 35 et 25 de la valeur z ro N gatif Infection M tuberculosis improbable gt 0 35 et gt 25 de la valeur eS SC Y Positif Infection M tuberculosis probable z ro Les r sultats de la r ponse des antig nes Tous Ind termin HR E TB sont ind termin s Si l infection par M tuberculosis n est pas suspect e les r sultats initialement positifs peuvent tre confirm s en retestant les chantillons de plasma originaux en duplicats dans le dosage ELISA Si le test r p t d un ou de plusieurs r plicats est positif l individu doit tre consid r comme positif au test t Dans les tudes cliniques moins de 0 25 des sujets pr sentaient des niveaux IFN y gt 8 0 Ul ml pour la valeur z ro Voir la section D pannage pour les causes possibles La magnitude du niveau IFN y mesur ne peut pas tre corr l e au stade ou au degr d infection au niveau de la r ponse immunitaire ou la probabilit pour la progression d activer la maladie Antig ne valeur z ro Interpr tation gt 0 35 Antig ne TB valeur z ro gt 25 de la valeur Ul ml de la valeur z ro Oui Non Validation lt _ Valeur z ro lt 8 0 Ul ml Oui Positif Figure 4 Organigramme d interpr tation lorsque seuls les tubes de valeur z ro et
12. t valid s pour des volumes allant de 0 8 1 2 ml Si le niveau de sang d un tube ne se rapproche pas de la ligne d indication il est recomman d d obtenir un nouvel chantillon sanguin Notice QuantiFERON TB Gold QFT ELISA 07 2013 11 e Si une aiguille lt papillon gt est utilis e pour le pr l vement sanguin un tube de purge doit tre utilis pour veiller ce que la tubulure soit remplie de sang avant que les tubes QFT ne soient employ s e Le sang peut aussi tre pr lev dans un seul tube de pr l vement sanguin g n rique contenant de l h parine de lithium comme anticoagulant avant d tre transf r vers les tubes QFT Utiliser uniquement l h parine de lithium comme anticoagulant car les autres anticoagulants peuvent interf rer avec le test Remplir un tube de pr l vement sanguin volume minimal 5 ml et m langer doucement en retournant le tube plusieurs fois pour dissoudre l h parine Le sang doit rester temp rature ambiante 22 C 5 C avant d tre transf r dans les tubes OFT pour incubation qui doit imp rativement tre lanc e dans les 16 heures suivant le pr l vement sanguin 2 Imm diatement apr s avoir rempli les tubes les secouer dix 10 fois suffisamment fort pour s assurer que toute la paroi interne du tube est tapiss e de sang et ce afin de dissoudre les antig nes pr sents sur les parois du tube e les tubes doivent tre une temp rature de 17 C 25 C au mome
13. 4 24 heures ELISA environ 3 heures pour une microplaque ELISA 28 44 individus heure de travail Ajouter 10 15 minutes pour chaque microplaque suppl mentaire Notice QuantiFERON TB Gold QFT ELISA 07 2013 5 3 Composants et stockage Blood Collection Tubes tubes de pr l vement sanguin 300 tubes N de r f rence T0590 0301 Nombre de pr parations 100 QuantiFERON Nil Tube tube de valeur z ro 100 tubes bouchon gris anneau blanc QuantiFERON TB Antigen Tube tube antig ne 100 tubes bouchon rouge anneau blanc QuantiFERON Mitogen Tube tube 100 tubes bouchon violet anneau blanc Notice des tubes de pr l vement QFT 1 High Altitude Blood Collection Tubes 300 tubes tubes de pr l vement sanguin haute altitude utiliser entre 1 020 et 1 875 m tres N de r f rence T0590 0505 QuantiFERON Nil Tube tube de valeur z ro 100 tubes bouchon gris anneau jaune QuantiFERON HA TB Antigen Tube tube antig ne TB 100 tubes bouchon rouge anneau jaune QuantiFERON HA Mitogen Tube tube mitog ne 100 tubes bouchon violet anneau jaune Notice des tubes de pr l vement QFT 200 tubes 0590 0201 100 100 tubes 100 tubes 100 tubes 0590 0501 100 tubes 100 tubes 100 tubes 10593 0201 100 100 tubes 100 tubes T0593 0501 100 tubes Toutes les configurations de produits ne sont pas disponibles dans chaque pays Veu
14. SERIA Notice QuantiFERON TB Gold ELISA 07 2013 8 Ajouter 100 pl de solution de substrat d enzyme aux puits M langer 124244 avec l agitateur LILI L 9 Incuber pendant 30 minutes temp rature ambiante 10 Ajouter 50 pl de solution de blocage d enzyme aux puits M langer 124244 avec l agitateur 11 Lire les r sultats 450 nm avec un filtre de r f rence de 620 650 nm 12 Analyser les r sultats Notice QuantiFERON TB Gold ELISA 07 2013 31 Changements significatifs Les changements significatifs de cette dition 10751 15FR 01 de la notice ELISA sont r sum s dans le tableau ci dessous Section Page Changements Avertissements et 8 10 Amendement l utilisation de certains composants ELISA pr cautions entre les lots de kit 12 Service technique 29 Nouvelle adresse e mail du service technique ma s 32 Notice QuantiFERON Gold ELISA 07 2013 Notes Notice QuantiFERON Gold ELISA 07 2013 33 Marques d pos es QIAGEN QFT QuantiFERONS groupe QIAGEN Microsoft Excel Microsoft ProClin Rohm and Haas Col Accord de licence limit pour QuantiFERON TB Gold QFT ELISA En utilisant ce produit l acheteur ou l utilisateur accepte les conditions suivantes 1 uer tup SE Le produit ne doit tre utilis que conform ment aux protocoles fournis et cette notice et un
15. ate la laquelle le conjugu a t reconstitu M Le conjugu concentr pr t l emploi doit tre utilis dans les 6 heures suivant sa pr paration M Le tampon de lavage concentr pr t l emploi peut tre stock temp rature ambiante jusqu 2 semaines 4 Avertissements et pr cautions Utilisation pr vue pour le diagnostic in vitro Avertissements Un r sultat QFT n gatif n exclut pas le risque d infection par M tuberculosis ou de tuberculose les r sultats faux n gatifs peuvent tre dus l tape de l infection p ex chantillon obtenu avant le d veloppement de la r ponse immunitaire cellu laire des troubles comorbides qui affectent les fonctions immunitaires une mau vaise manipulation des tubes de pr l vement sanguin apr s la ponction veineuse une mauvaise ex cution du test ou d autres variables immunologiques Un r sultat QFT positif ne doit pas constituer la base unique ou d finitive de la d ter mination d une infection par M tuberculosis Une mauvaise ex cution du test peut entrainer des faux positifs Un r sultat QFT positif doit tre suivi d autres valuations m dicales et diagnostiques de la tuberculose active p ex frottis et culture du BAAR radiographie du thorax Si ESAT 6 CFP 10 et TB7 7 pA sont absents de toutes les souches BCG et de la plupart des mycobact ries non tuberculeuses connues il est possible qu un r sultat QFT positif soit d une in
16. de de d pannage 25 11 Bibliographie 27 12 Service technique 29 13 R sum de la proc dure du test 30 tape 1 Incubation du sang 30 tape 2 IFN y ELISA 30 Changements significatifs 32 Notice QuantiFERON TB Gold QFT ELISA 07 2013 3 1 Utilisation pr vue QuantiFERON TB Gold QFT est un test de diagnostic in vitro qui utilise un cocktail peptidique pour simuler les prot ines ESAT 6 CFP 10 et TB7 7 p4 dans le sang total h parinis La d tection de l interf ron y IFN y par le dosage d immunoabsorption par enzyme li e ELISA enzyme linked immunosorbent assay est utilis e pour identifier les r ponses in vitro aux antig nes peptidiques associ s l infection par Mycobacterium tuberculosis QFT est un test indirect de recherche de l infection par M tuberculosis y compris de la maladie destin tre utilis en combinaison avec une valuation des risques des examens radiographiques ainsi que d autres valuations m dicales et diagnostiques 2 R sum et explication du test La tuberculose est une maladie contagieuse provoqu e par une infection par les organismes com plexes M tuberculosis tuberculosis M bovis M africanum qui se propagent g n ralement de nouveaux h tes via des noyaux de gouttelettes transmis par voie respiratoire par les patients atteints de tuberculose respiratoire Un individu nouvellement infect peut tomber malade en l espace de quelques semaines quelques mois
17. dehors de la plage du lecteur de microplaques Cela n a pas d impact sur les r sultats du test t Si l infection par M tuberculosis n est pas suspect e les r sultats initialement positifs peuvent tre confirm s en retestant les chantillons de plasma originaux en duplicats dans le dosage ELISA QFT Si le test r p t d un ou de plusieurs r plicats est positif l individu doit tre consid r comme positif au test t Voir la section lt D pannage gt pour les causes possibles 3 Dans les tudes cliniques moins de 0 25 des sujets pr sentaient des niveaux IFN y gt 8 0 Ul ml pour la valeur z ro La magnitude du niveau IFN y mesur ne peut pas tre corr l e au stade ou au degr d infection au niveau de la r ponse immunitaire ou la probabilit pour la progression d activer la maladie n Antig ne TB valeur z ro Interpr tation gt 0 35 Ul ml Antig ne TB valeur z ro gt 25 de la valeur Ul ml de la valeur z ro Ou Mitog ne valeur z ro Oui Non Validation lt 0 50 Ul ml et ou Ind termin Valeur z ro lt 8 0 Ul ml valeur z ro gt 8 0 Ul ml Nos Oui Figure 3 Organigramme d interpr tation lorsque les tubes de valeur z ro antig ne TB et mitog ne sont utilis s 20 Notice QuantiFERON Gold ELISA 07 2013 Tableau 3 Lorsque seuls les tubes de valeur z ro et antig ne QuantiFERON sont utilis s Valeur z ro Antig ne TB moins valeur z ro R
18. des Etats Unis et du Canada 1 703 527 3887 appels frais vir s accept s Autres informations Fiches de donn es de s curit www giagen com safety M Toute variation de la notice QuantiFERON TB Gold QFT ELISA peut entra ner des r sultats erron s Lire attentivement les instructions avant toute utilisation E Ne pas utiliser le kit si un flacon de r actif pr sente des signes d endommagement ou de fuite avant son utilisation R36 38 irritant pour les yeux et la peau 526 en cas de contact avec les yeux laver imm diatement et abondamment avec de l eau et consulter un sp cialiste S36 37 39 porter des v tements de protection et des gants adapt s ainsi qu une protection pour les yeux le visage Notice QuantiFERON TB Gold ELISA 07 2013 9 E Ne pas m langer ou utiliser les bandelettes pour microplaque le contr le IFN y humain le diluant vert ou le concentr conjugu 100X de diff rents lots de kit QFT Les autres r actifs concentr de tampon de lavage 20X solution de substrat d enzyme et solution de blocage d enzyme peuvent tre interchang s entre les kits si les r actifs ne sont pas p rim s et si les d tails du lot sont enregistr s liminer les r actifs inutilis s et chantillons biologiques conform ment aux r glementations locales r gionales et nationales Ne pas utiliser les tubes de pr l vement sanguin ou le kit ELISA apr s la date d expiration S assurer que l quipement de
19. doucement avant de les ajouter la microplaque l ajout des chantillons et des standards doit tre effectu de mani re continue Tous les r actifs doivent tre pr par s avant de commencer le test Une vid o de proc dure du test et des solutions la plupart des probl mes techniques sont disponibles sur Gnowee en s inscrivant directement sur www gnowee net pour un acc s en ligne Les informations produit et les guides techniques sont disponibles gratuitement aupr s de QIAGEN via votre distributeur ou sur le site www QuantiFERON com 26 Notice QuantiFERON Gold ELISA 07 2013 11 Bibliographie Une liste compl te de r f rences QFT est disponible sur Gnowee la biblioth que de r f rence QuantiFERON accessible sur www gnowee net le 2 Andersen P et al 2000 Specific immune based diagnosis of tuberculosis Lancet 356 1099 Balcells et al 2008 comparative study of two different methods for the detection of latent tuberculosis in HIV positive individuals in Chile Int J Infect Dis 12 645 Bartalesi F et al 2009 QuantiFERON TB Gold and TST are both useful for latent TB screening in autoimmune diseases Eur Respir J 33 586 Bocchino M et al 2008 Performance of two commercial blood IFN gamma release assays for the detection of Mycobacterium tuberculosis infection in patient candidates for anti TNF alpha treatment Eur J Clin Microbiol Infect Dis 27 907
20. e 51 S2 et m langer soigneusement soigneusement Le DV seul sert de standard z ro 54 Transf rer 70 pl de S2 S3 et m langer soigneusement Le DV seul sert de standard z ro 54 14 Notice QuantiFERON TB Gold GFT ELISA 07 2013 150 yl Weg Standard de kit Standard 1 Standard 2 Standard 3 Standard 4 reconstitu 4 0 Ul ml 1 0 Ul ml 0 25 Ul ml O Ul ml Diluant vert Figure 1 Pr paration de la courbe de standard Pr parer des dilutions fraiches du standard de kit pour chaque session ELISA 4 Reconstituer le concentr de conjugu 100X lyophilis avec 0 3 ml d eau d ionis e ou distill e M langer doucement pour r duire la formation de mousse et pour garantir une solubilisation compl te du conjugu Le conjugu concentr pr t l emploi est pr par en diluant la quantit requise de concentr de conjugu 100X dans le diluant vert comme indiqu dans le Tableau 1 Pr paration du conjugu Tableau 1 Pr paration du conjugu Nombre de bandelettes Volume du concentr de Volume de diluant vert conjugu 100X 10 yl 1 0 ml 15 yl 1 5 ml 20 yl 2 0 ml 25 yl 2 5 ml 30 pl 3 0 ml 35 pl 3 5 ml 40 yl 4 0 ml 45 yl 4 5 50 yl 5 0 ml 55 pl 5 5 ml 60 6 0 ml 0 N OV O A O N N Notice QuantiFERON TB Gold QFT ELISA 07 2013 15 M langer soigneusement mais doucement pour viter la formation de mousse e Ramener tout concentr de conjugu 1 non ut
21. e dilution du standard M lange insuffisant Technique de pipetage incoh rente ou interruption pendant la mise en place du test S assurer que le kit est utilis avant la date de p remption S assurer que le standard reconstitu et que le concentr de conjugu 100X sont utilis s dans les trois mois suivant la date de reconstitution Solution Laver la microplaque au moins 6 fois avec 400 yl puits de tampon de lavage Plus de 6 cycles de lavage peuvent tre requis en fonction du laveur utilis Une p riode de trempage d au moins 5 secondes doit tre effectu e entre chaque cycle L incubation d ELISA doit tre effectu e temp rature ambiante 22 C 5 C S assurer que le kit est utilis avant la date de p remption S assurer que le standard reconstitu et que le concentr de conjugu 100X sont utilis s dans les trois mois suivant la date de reconstitution Rejeter le substrat en cas de coloration bleue S assurer que les r servoirs de r actif sont propres Solution Laver la microplaque au moins fois avec 400 yl puits de tampon de lavage Plus de 6 cycles de lavage peuvent tre requis en fonction du laveur utilis Une p riode de trempage d au moins 5 secondes doit tre effectu e entre chaque cycle S assurer que les dilutions du standard sont pr par es correctement conform ment la notice QFT ELISA M langer soigneusement les r actifs par inversion ou en les vortexant
22. e facteurs techniques M Plus de 16 heures entre le pr l vement sanguin et l incubation 37 C Stockage du sang hors de l intervalle de temp ratures recommand de 17 C 27 C E M lange insuffisant des tubes de pr l vement sanguin M Lavage incomplet de la microplaque ELISA Si des probl mes techniques sont suspect s avec le pr l vement ou la manipulation des chantillons sanguins r p ter tout le test QFT avec un nouvel chantillon sanguin est possible de r p ter le test ELISA de plasmas stimul s si un lavage insuffisant ou une autre d viation de proc dure avec le test ELISA sont suspect s Les r sultats ind termin s dus des valeurs mitog nes faibles ou des valeurs z ro lev es changeront pas si le test est r p t sauf en cas d erreur avec le test ELISA Les r sul tats ind termin s doivent tre report s tels quels Les m decins peuvent choisir de pr lever nouveau un chantillon ou d effectuer d autres proc dures s ils le jugent n cessaire Echantillons de plasma coagul Si des caillots de fibrine apparaissent avec le stockage long terme des chantillons de plasma centrifuger les chantillons pour s dimenter la mati re coagul e et faciliter le pipetage du plasma 24 Notice QuantiFERON TB Gold ELISA 07 2013 Guide de d pannage Ce guide de d pannage peut vous aider r soudre les probl mes qui pourraient se poser Pour de plus amples informations v
23. endre garde ne pas perturber la mati re sur la surface du gel quelle que soit l tape e les chantillons de plasma peuvent tre charg s directement depuis les tubes de pr l vement sanguin centrifug s vers la microplaque QFT ELISA y compris lorsque des stations de travail ELISA automatiques sont utilis es e les chantillons de plasma peuvent tre stock s jusqu 28 jours entre 2 et 8 C s ils sont pr lev s au dessous de 20 C pendant des p riodes prolong es e Pour des chantillons de test corrects pr lever au moins 150 yl de plasma Notice QuantiFERON TB Gold QFT ELISA 07 2013 13 tape 2 IFN y humain ELISA Mat riel fourni SS Kit QFT ELISA voir la section 3 Mat riel n cessaire mais non fourni M Voir la section 3 Proc dure 1 Tous les chantillons de plasma et r actifs sauf le concentr de conjugu 100X doivent tre ramen s temp rature ambiante 22 C 5 C avant d tre utilis s Attendre au moins 60 minutes pour l quilibration 2 Retirer du cadre les bandelettes superflues les resceller dans la poche en aluminium et les replacer au r frig rateur pour stocker jusqu leur utilisation Pr voir au moins une bandelette pour les standards QFT et suffisamment de bandelettes pour le nombre de sujets test s voir les figures 2A et 2B pour les formats respectifs 3 tubes et 2 tubes Apr s utilisation conserver le cadre et le couvercle pour un emploi
24. fection in hospitalized children in rural India J Infect 54 267 Drobniewski F et al 2007 Rates of latent tuberculosis in health care staff in Russia PLoS Med 4 e55 Gerogianni et al 2008 Whole blood interferon gamma assay for the diagnosis of tuberculosis infection in an unselected Greek population Respirology 13 270 Harada et al 2008 Comparison of the sensitivity and specificity of two whole blood interferon gamma assays for M tuberculosis infection J Infect 56 348 Higuchi K et al 2009 Comparison of performance in two diagnostic methods for tuberculosis infection Med Microbiol Immunol 198 33 Kang et al 2005 Discrepancy between the tuberculin skin test and the whole blood interferon gamma assay for the diagnosis of latent tuberculosis infection in an intermediate tuberculosis burden country JAMA 293 2756 Katiyar S K et al 2008 Use of the QuantiFERON TB Gold In Tube test to monitor treatment efficacy in active pulmonary tuberculosis Int J Tuberc Lung Dis 12 1146 Notice QuantiFERON TB Gold ELISA 07 2013 27 19 Kipfer et al 2008 Tuberculosis Swiss army training camp contact investigation using an Interferon gamma release assay Swiss Med Wkly 138 267 20 Luetkemeyer et al 2007 Comparison of an interferon gamma release assay with tuberculin skin testing in HIV infected individuals Am J Respir Crit Ca
25. fection par M kansasii M szulgai ou M marinum Si l on suspecte de telles infections d autres tests doivent tre effectu s 8 Notice QuantiFERON Gold ELISA 07 2013 Pr cautions Utilisation pr vue uniquement pour le diagnostic in vitro Lors de la manipulation des produits chimiques toujours porter une blouse de laboratoire des gants jetables et des lunettes de protection ad quats Pour plus d informations consulter les fiches de donn es de s curit FDS appropri es Celles ci sont disponibles en ligne dans un format PDF pratique et compact sur le site www qiagen com safety r pertoriant les FDS imprimables pour chaque kit QIAGEN et chaque composant A AVERTISSEMENT le sang humain doit tre manipul comme s il tait potentiellement infectieux Observer les directives correspondantes de manipulation du sang Les d clarations de risque et de s curit suivantes s appliquent aux composants du QuantiFERON TB Gold ELISA Solution de blocage d enzyme QuantiFERON Xi Contient de l acide sulfurique irritant D clarations de risque et de s curit R36 38 526 36 37 39 Le diluant vert contient du s rum et de la cas ine normale de souris ce qui peut entra ner des r actions allergiques viter le contact avec la peau En cas d urgence chimique Renversement fuite exposition ou accident Appeler CHEMTREC nuit et jour Aux tats Unis et au Canada 1 800 424 9300 Hors
26. ient positifs au TCT al 2006 9 5 mm tandis que respectivement 9 et 11 taient positifs au QFT Le QFT tait associ un risque de TB Le TCT tait uniquement associ la vaccination BCG De nombreuses autres publications d crivent la performance de la version antig ne liquide moins sensible de QuantiFERON TB Gold pr curseur de et du test QFT Ces tudes incluent l utilisa tion du ou des tests chez des contacts de cas de TB actifs 9 11 19 25 des enfants 6 10 25 28 des patients VIH positifs 2 5 20 des professionnels de la sant 13 26 32 des patients immunod prim s 3 4 22 23 27 30 31 des patients chez qui la TB est suspect e 7 8 10 18 et des individus faible risque 15 Notice QuantiFERON TB Gold ELISA 07 2013 23 R p tabilit et effet du sur le test QFT effectu ult rieurement Dans le cadre de l tude de sp cificit des tats Unis un sous groupe de volontaires a t retest entre 4 et 5 semaines apr s le test QFT et le TCT originaux Les r sultats QFT des 260 individus taient disponibles aux deux moments et le niveau de concordance tait de 99 6 259 260 Un TCT fait en premier n induit pas de r ponses QFT positives 10 Informations techniques R sultats ind termin s Les r sultats ind termin s doivent rester peu fr quents et peuvent tre li s au statut immunologique de l individu test mais aussi un certain nombre d
27. ilis de 2 C 8 C imm diatement apr s emploi e Utiliser uniquement du diluant vert 5 Pour les chantillons de plasma pr lev s dans les tubes de pr l vement sanguins puis congel s ou stock s pendant plus de 24 heures avant le test m langer soigneusement avant l ajout au puits ELISA e Siles chantillons de plasma sont ajout s directement depuis les tubes centrifug s tout m lange du plasma doit tre vit 6 Ajouter 50 pl du conjugu concentr pr t l emploi fra chement pr par dans les puits ELISA requis l aide d une pipette multicanaux 7 Ajouter 50 pl d chantillons de plasma de test dans les puits appropri s l aide d une pipette multicanaux voir la configuration recommand e de microplaque pages 16 et 17 figures 2A et 2B Enfin ajouter 50 pl chaque standard 1 4 e an a am S2 S2 S2 1an aA ram 22N 22a 22 D a am 4 sa s4 en ie 16M 2 24 ra E mn mm nm VAN 17A VM 25N 25A 254 F on ea om mim rom IN 18A rem 26N 26A 26H en SA em 12n rom 20N 20A 20 26N 28A 298 Figure 2A Configuration d chantillons recommand e pour les tubes de valeur z ro antig ne TB et mitog ne 28 tests par microplaque e 51 standard 1 S2 standard 2 53 standard 3 54 standard 4 e IN chantillon 1 plasma de valeur z ro chantillon 1 plasma antig ne chantillon 1 plasma mitog ne 16 N
28. illez vous adresser au service client QIAGEN coordonn es sur www giagen com pour de plus amples informations sur les configurations disponibles la commande 6 Notice QuantiFERON Gold ELISA 07 2013 Composants ELISA Kit 2 plaques ELISA N de r f rence 0594 0201 Bandelettes pour microplaques 12 x 8 puits enduites 2 jeux de bandelettes d anticorps monoclonaux IFN y murins anti humains pour microplaques 12 x 8 puits Human IFN y Standard lyophilized standard humain 1 x flacon 8 Ul ml IFN y lyophilis contient de l IFN y humain recombinant si reconstitu de la cas ine bovine du thim rosal 0 01 m v Green Diluent diluant vert contient de la cas ine bovine 1 x 30 ml du s rum normal de souris du thim rosal 0 01 Conjugate 100 Concentrate lyophilized concentr 1 x 0 3 ml de conjugu 100X lyophilis IFN y murin anti si reconstitu humain contient du thim rosal 0 01 m v Wash Buffer 20X Concentrate concentr de tampon 1 x 100 ml de lavage 20X pH 7 2 contient du ProClin 300 0 05 v v Enzyme Substrate Solution solution de substrat d enzyme 1 x 30 ml contient du 3 3 5 5 t tram thylbenzidine Enzyme Stopping Solution solution de blocage d enzyme 1 x 15 ml contient 0 5M 504 Notice QFT ELISA t Contient de l acide sulfurique Voir page 9 pour les pr cautions d emploi Mat riel n cessaire mais non fourni Incubateur 37
29. iquement avec les composants contenus dans kit QIAGEN n accorde aucune licence sous sa propri t intellectuelle pour utiliser ou int grer les composants fournis dans ce kit avec tout autre composant non fourni dans ce kit l exception de ce qui est stipul dans les protocoles fournis avec le produit et cette notice En dehors des licences nonc es express ment QIAGEN n offre aucune garantie indiquant que ce kit et ou son ou ses utilisations ne violent pas les droits de tiers Ce kit et ses composants sont sous licence pour une utilisation unique et ne peuvent pas tre r utilis s remis neuf ou revendus sauf mention contraire de QIAGEN QIAGEN rejette notamment toutes les autres licences expresses ou tacites autres que celles nonc es express ment L acheteur et l utilisateur du kit consentent ne pas prendre ni autoriser quiconque prendre de quelconques mesures pouvant entra ner ou faciliter la r alisation d actes interdits par les conditions pr c dentes QIAGEN peut faire appliquer les interdictions de cet Accord de licence limit e par tout tribunal et pourra recouvrir tous ses frais de recherche et de justice y compris les frais d avocats en cas d action en application de cet Accord de licence limit e ou de tous ses droits de propri t intellectuelle li s au kit et ou ses composants Pour consulter les mises jour de la licence voir www qiagen com 2013 Cellestis a QIAGEN Company tous droits r ser
30. laboratoire tel que les laveurs et lecteurs de microplaque ont t calibr s valid s pour utilisation RE SR DO A T 10 Notice QuantiFERON TB Gold ELISA 07 2013 5 Pr l vement et manipulation des chantillons QFT utilise les tubes de pr l vement suivants 1 Tubes de valeur z ro QuantiFERON bouchon gris avec anneau blanc utiliser entre le niveau de la mer et 810 m d altitude 2 Tubes antig nes TB QuantiFERON bouchon rouge avec anneau blanc utiliser entre le niveau de la mer et 810 m d altitude 3 Tubes mitog nes QuantiFERON bouchon violet avec anneau blanc utiliser entre le niveau de la mer et 810 m d altitude Tubes haute altitude HA 4 Tubes de valeur z ro HA QuantiFERON bouchon gris avec anneau jaune utiliser entre 1 020 et 1 875 m d altitude 5 Tubes antig nes TB HA QuantiFERON bouchon rouge avec anneau jaune utiliser entre 1 020 et 1 875 m d altitude 6 Tubes mitog nes QuantiFERON bouchon violet avec anneau jaune utiliser entre 1 020 et 1 875 m d altitude Les antig nes ont t s ch s sur la paroi interne des tubes de pr l vement sanguin il est donc essentiel que le contenu des tubes soit soigneusement m lang avec le sang Les tubes doivent tre transf r s dans un incubateur 37 C d s que possible et dans les 16 heures suivant le pr l vement Pour des r sultats optimaux respecter les proc dures suivantes 1 Pour chaque
31. m langer en les secouant dix 10 fois suffisamment fort pour s assurer que toute la paroi interne du tube est tapiss e de sang et ce afin de dissoudre les antig nes pr sents sur les parois du tube Incuber les tubes debout 37 C 1 C pendant 16 24 heures Apr s l incubation centrifuger les tubes pendant 15 minutes de 2 000 3 000 FCR pour s parer le plasma et les globules rouges Apr s la centrifugation viter le pipetage r p t ou le m lange du plasma par d autres moyens avant de le pr lever Prendre garde ne pas perturber la mati re sur la surface du gel quelle que soit l tape tape 2 IFN y ELISA b 30 Ramener les composants ELISA l exception du concentr de conjugu temp rature ambiante 22 C 5 C pendant au moins 60 minutes Reconstituer le standard du kit 8 0 Ul ml avec de l eau distill e ou d ionis e Pr parer quatre 4 dilutions de standard Reconstituer le concentr de conjugu 100 lyophilis avec de l eau distill e ou d ionis e Pr parer le conjugu concentr pr t l emploi dans le diluant vert et ajouter 50 yl dans tous les puits Ajouter 50 pl d chantillons de plasma test et 50 pl de standards dans les puits correspondants M langer avec l agitateur Incuber pendant 120 gt 5 minutes temp rature ambiante Laver les puits au moins 6 fois avec 400 pl puits de tampon de lavage N
32. mais la plupart des individus infect s restent en bonne sant L infection tuberculeuse latente LTBI un trouble asymptomatique non contagieux persiste chez certaines personnes qui peuvent d velopper une tuberculose quelques mois ou quelques ann es plus tard Le principal objectif du diagnostic de la LTBI est d envisager un traitement m dical pour pr venir la tuberculose Le test cutan tuberculinique TCT tait jusqu r cemment la seule m thode disponible de diagnostic de la LTBI La sensibilit cutan e la tuberculine se d veloppe de 2 semaines apr s l infection Toutefois certains individus infect s ne r pondent pas la tuber culine notamment ceux souffrant d une vari t de troubles bloquant les fonctions immunitaires mais aussi d autres ne souffrant pas de ces probl mes l inverse certains individus ayant peu de risques de pr senter une infection par M tuberculosis montrent une sensibilit la tuberculine et pr sentent des r sultats positifs au TCT apr s vaccination par le bacille Calmette Gu rin apr s une infection par mycobact rie autre que le complexe M tuberculosis ou en raison d autres facteurs ind termin s faut distinguer la LTBI de la tuberculose un trouble d claration obligatoire qui affecte g n ra lement les poumons et les voies respiratoires inf rieures m me si d autres syst mes organiques peuvent aussi tre touch s La tuberculose est diagnostiqu e pa
33. nt du remplissage e le secouement trop nergique des tubes peut provoquer une perturbation du gel et peut entra ner des r sultats aberrants e Si le sang a t pr lev dans le tube h parin les chantillons doivent tre m lang s de mani re homog ne avant d tre r partis dans les tubes QFT S assurer que le sang est bien m lang en retournant doucement le tube juste avant de r partir les chantillons D poser des aliquots d 1 0 ml un par tube QFT dans les tubes correspondants de valeur z ro antig ne TB et mitog ne La meilleure m thode r aliser dans des conditions d asepsie en respectant les proc dures de s curit ad quates consiste retirer les bouchons des trois tubes QFT et ajouter 1 ml de sang dans chacun des tubes jusqu la marque noire situ e sur le c t de l tiquette du tube Replacer correctement les bouchons des tubes et m langer comme d crit ci dessus 3 tiqueter correctement les tubes e Veiller ce que chaque tube valeur z ro antig ne TB mitog ne soit identifiable par son tiquette ou par d autres moyens une fois que le bouchon est retir 4 Apr s les avoir remplis secou s et tiquet s les tubes doivent tre transf r s dans un incubateur 37 C 1 C d s que possible et dans les 16 heures suivant le pr l vement Avant l incubation maintenir les tubes temp rature ambiante 22 C 5 C Ne pas r frig rer ou congeler les chantillons sanguin
34. oir galement les informations techniques fournies sur www QuantiFERON com Pour les coordonn es voir la quatri me de couverture D pannage ELISA D veloppement de couleur non sp cifique Cause possible a Lavage incomplet de la microplaque b Contamination crois e des puits ELISA c Kit composants p rim s Solution de substrat d enzyme contamin e el M lange du plasma dans les tubes QFT avant le pr l vement Lectures de faible densit optique pour les standards Cause possible a Erreur de dilution du standard b Erreur de pipetage Temp rature d incubation trop faible P riode d incubation trop courte el Mauvais filtre de lecteur de microplaque utilis Les r actifs sont trop froids Solution Laver la microplaque au moins 6 fois avec 400 yl puits de tampon de lavage Plus de 6 cycles de lavage peuvent tre requis en fonction du laveur utilis Une p riode de trempage d au moins 5 secondes doit tre effectu e entre chaque cycle Prendre garde lors du pipetage et du m lange des chantillons pour r duire les risques S assurer que le kit est utilis avant la date de p remption S assurer que le standard reconstitu et que le concentr de conjugu 100X sont utilis s dans les trois mois suivant la date de reconstitution Rejeter le substrat en cas de coloration bleue S assurer que les r servoirs de r actif sont propres Apr s la centrifugation
35. otice QuantiFERON TB Gold ELISA 07 2013 Dp z a es r je p phone 5 sa oa A VA 82 8 25A 39A 33A ata D 2a roa fioa 82 S4 26a 30A 36A 42A on 7 V N ion 2IN 29N 27N am 35N son F ea ZA ma isa UA MA 29A u7A ara asa 39A o m aa en 2 16a m aan 26A 32A son 40A aaa Figure 2B Configuration d chantillons recommand e pour les tubes de valeur z ro et antig ne TB 44 tests par microplaque e 51 standard 1 S2 standard 2 S3 standard 3 SA standard 4 e IN chantillon 1 plasma de valeur z ro chantillon 1 plasma antig ne 8 M langer le conjugu et les chantillons standards de plasma soigneusement en utilisant un agitateur de microplaque pendant 1 minute 9 Couvrir chaque microplaque avec un couvercle et incuber temp rature ambiante 22 C 5 C pendant 120 5 minutes e les microplaques ne doivent pas tre expos es la lumi re directe du soleil pendant l incubation 10 Au cours de l incubation diluer une mesure du concentr du tampon de lavage 20X avec 19 mesures d eau d ionis e ou distill e et m langer soigneusement Une quantit suffisante de concentr de tampon de lavage 20X est fournie pour pr parer 2 litres de tampon de lavage concentr pr t l emploi Laver les puits avec 400 pl de tampon de lavage concentr pr t l emploi pendant au moins 6 cycles Un laveur de microplaque automati
36. que est recommand e est essentiel de proc der soigneusement au lavage avant d ex cuter le test Veiller ce que chaque puits soit compl tement rempli de tampon de lavage jusqu en haut pour chaque cycle de lavage Une p riode de trempage d au moins 5 secondes est recommand e entre chaque cycle e Un d sinfectant de laboratoire standard doit tre ajout au r servoir d effluent avant de suivre les proc dures tablies pour la d contamination de mat riel potentiellement infectieux 11 Placer les microplaques face vers le bas sur une serviette absorbante sans peluche pour liminer tout r sidu de tampon de lavage Ajouter 100 pl de solution de substrat d enzyme dans chaque puits et m langer soigneusement l aide d un agitateur de microplaque 12 Couvrir chaque microplaque avec un couvercle et incuber temp rature ambiante 22 C 5 C pendant 30 minutes e les microplaques ne doivent pas tre expos es la lumi re directe du soleil pendant l incubation Notice QuantiFERON TB Gold QFT ELISA 07 2013 17 13 Apr s les 30 minutes d incubation ajouter 50 pl de solution de blocage d enzyme chaque puits et m langer e La solution de blocage d enzyme doit tre ajout e aux puits dans le m me ordre et environ la m me vitesse que pour le substrat l tape 11 14 Mesvrer la densit optique DO de chaque puits dans les 5 minutes de blocage de la r action l aide d un lecteur de microplaque quip d
37. re Med 175 737 21 Mackensen F et al 2008 QuantiFERON TB Gold A new test strengthening long suspected tuberculous involvement in serpiginous like choroiditis Am J Ophthalmol 146 761 22 Manuel O et al 2007 Comparison of Quantiferon TB Gold with tuberculin skin test for detecting latent tuberculosis infection prior to liver transplantation Am J Transplant 7 2797 23 Matulis G et al 2007 Detection of latent tuberculosis in immunosuppressed patients with autoimmune diseases performance of a Mycobacterium tuberculosis antigen specific IFN gamma assay Ann Rheum Dis 67 84 24 Mirtskhulava V et al 2008 Prevalence and risk factors for latent tuberculosis infection among health care workers in Georgia Int J Tuberc Lung Dis 12 513 25 Nakaoka H et al 2006 Risk for tuberculosis among children Emerging Infect Dis 12 1383 26 Pai M et al 2005 Mycobacterium tuberculosis infection in health care workers in rural India comparison of a whole blood interferon g assay with tuberculin skin testing JAMA 293 2746 27 Ponce de Leon D et al 2008 Comparison of an interferon gamma assay with tuberculin skin testing for detection of tuberculosis TB infection in patients with rheumatoid arthritis in a TB endemic population J Rheumatol 35 776 28 Richeldi L et al 2008 Prior tuberculin skin testing does not boost QuantiFERON TB results in paediatric contacts Eur Respir J 32 524
38. rm e en culture Sp cificit Dans une tude am ricaine portant sur 866 volontaires du sang a t pr lev pour lorsqu un TCT tait effectu Les donn es d mographiques et les facteurs de risque pour la tuberculose ont t d termin s l aide d un sondage standard au moment du test Sur les 432 volontaires sans facteur de risque connu pour l infection par M tuberculosis 391 avaient des r sultats QFT et TCT disponibles Aucun n tait vaccin contre le BCG Une seconde tude de sp cificit a t effectu e avec le QFT chez des individus faible risque au Japon dont environ 90 avaient recu un vaccin BCG Les r sultats des 2 tudes de sp cificit sont indiqu s dans le tableau 4 Tableau 4 Sp cificit QFT r sultats des personnes sans risque connu d infection par M tuberculosis Statut BCG Total Nb de NbdeQFT Sp cificit Nb deTCT Sp cificit d indi ind termin s positifs QFT positifs nb d individus vidus nb de tests IC95 d individus 95 vaccin s test s valides test s tats Unis 391 3 390 99 2 6 391 98 5 publi 98 100 97 99 Japon 15 90 168 2 162 98 8 95 100 Total 559 7 559 5 552 99 1 1 3 98 100 l aide d un seuil TCT 10 mm chez les individus non vaccin s contre le BCG L estimation de sp cificit TCT est de 99 1 avec un seuil 15 mm Sensibilit pour la tuberculose active Les individus des
39. rtir de r sultats historiques physiques radiologiques histologiques et mycobact riologiques QFT est un test recherchant des r ponses immunitaires m diation cellulaire CMI aux antig nes peptidiques qui simulent les prot ines mycobact riennes Ces prot ines ESAT 6 CFP 10 et TB7 7 pA sont absentes de toutes les souches BCG et de la plupart des mycobact ries non tuber culeuses l exception de M kansasii M szulgai et M marinum 1 Les individus infect s par les organismes complexes M fuberculosis pr sentent g n ralement des lymphocytes dans leur sang qui reconnaissent ceux ci ainsi que d autres antig nes mycobact riens Ce processus de reconnaissance implique la g n ration et la s cr tion de la cytokine IFN y La d tection puis la quantification d IFN y constituent la base de ce test Les antig nes utilis s dans QFT forment un cocktail peptidique qui simule les prot ines ESAT 6 CFP 10 et TB7 7 p4 De nombreuses tudes ont montr que ces antig nes peptidiques stimulaient les r ponses IFN y dans les cellules T des individus infect s par M tuberculosis mais g n ralement pas chez les personnes non infect es ou vaccin es par le BCG sans maladie ni risque pour la LTBI 1 32 Toutefois les traitements m dicaux ou les troubles emp chant la fonction immunitaire peuvent r duire 4 Notice QuantiFERON TB Gold ELISA 07 2013 les r ponses IFN y Les patients souffrant de certaines autres infections
40. s EE 12 Notice QuantiFERON TB Gold ELISA 07 2013 6 Instructions d utilisation tape 1 Incubation du sang et pr l vement du plasma Mat riel fourni M Tubes de pr l vement sanguin QFT se reporter la section 3 Mat riel n cessaire mais non fourni M Voir la section 3 Proc dure 1 Sile sang n est pas incub imm diatement apr s avoir t pr lev le nouveau m lange des tubes en les retournant 10 fois doit tre effectu juste avant l incubation 2 Incuber les tubes DEBOUT 37 C 1 C pendant 16 24 heures L incubateur ne n cessite pas de CO ou d humidification 3 Apr s une incubation 37 C les tubes de pr l vement sanguin peuvent rester entre 4 C et 27 C jusqu 3 jours avant d tre centrifug s 4 Apr s l incubation des tubes 37 C le pr l vement du plasma est facilit si les tubes sont centri fug s pendant 15 minutes de 2 000 000 FCR Le module de gel s parera les cellules du plasma Si ce n est pas le cas les tubes doivent tre recentrifug s une vitesse plus lev e e est possible de pr lever le plasma sans centrifugation mais il faudra faire particuli rement attention le retirer sans perturber les cellules 5 Les chantillons de plasma doivent tre pr lev s uniquement l aide d une pipette e Apr s la centrifugation viter le pipetage r p t ou le m lange du plasma par d autres moyens avant de le pr lever Pr
41. s 37 C d s que possible et dans les 16 heures suivant le pr l ve ment Apr s une p riode d incubation de 16 24 heures les tubes sont centrifug s le plasma est retir et la quantit de IFN y Ul ml est mesur e par ELISA Un test est consid r positif en cas de r ponse IFN y au tube antig ne TB nettement sup rieure la valeur en Ul ml de la valeur z ro d IFN y Si utilis l chantillon de plasma du tube mitog ne sert de contr le positif IFN y pour chaque chantillon test Une faible r ponse au mitog ne lt 0 5 UI ml indique un r sultat ind termin lorsqu un chantillon sanguin pr sente aussi un r sultat n gatif aux antig nes TB Cela peut survenir en cas de lymphocytes insuffisants d une activit lymphocytaire r duite en raison d une mauvaise manipulation de l chantillon d un remplissage m lange incorrect du tube mitog ne ou de l incapacit des lymphocytes du patient g n rer IFN y L chantillon de valeur z ro corrige le fond les effets d anticorps h t rophiles ou l IFN y non sp cifique dans les chantillons sanguins Le niveau IFN y du tube de valeur z ro est soustrait du niveau IFN y pour le tube antig ne TB et le tube mitog ne s ils ont t utilis s Temps requis pour effectuer le test Le temps requis pour effectuer le test QFT est estim ci dessous le temps requis pour tester plusieurs chantillons en lots est aussi indiqu Incubation 37 C des tubes de sang 16
42. tats Unis d Australie et du Japon chez qui une tuberculose tait suspect e et qui ont re u la confirmation d une infection par M tuberculosis par culture ont t test s pour valuer la sensibilit de QFT S il n existe pas de test de standard d finitif pour l infection tuberculeuse latente LTBI la culture microbiologique de M tuberculosis constitue un substitut ad quat car les patients souffrant de la maladie sont par d finition infect s Les patients ont recu moins de 8 jours de traitement avant le pr l vement sanguin pour le test QFT Le tableau 5 r sume les r sultats des trois groupes de patients positifs M tuberculosis par culture La sensibilit g n rale du QFT pour la maladie tuberculeuse active tait de 89 157 177 22 Notice QuantiFERON Gold ELISA 07 2013 Tableau 5 QFT sujets avec infection par tuberculosis confirm e en culture tude Nb de OFT positifs nb de tests Sensibilit QFT 95 valides Patients TB japonais 15 86 92 93 86 97 Australiens 24 27 89 70 97 Am ricains 47 58 81 68 90 Total 157 177 89 83 93 Diagnostic de la LTBI Un certain nombre d tudes ont t publi es pour d montrer la performance du QFT dans plusieurs populations pr sentant un risque de Les principaux r sultats de certaines tudes choisies sont indiqu s dans le tableau 6 Tableau 6 tudes choisies publi es sur le QFT dans les populations pr
43. ult rieur avec les bandelettes restantes 3 Reconstituer le standard lyophilis du kit avec le volume d eau d ionis e ou distill e indiqu sur l tiquette du flacon du standard M langer doucement pour r duire la formation de mousse et pour garantir une solubilisation compl te La reconstitution du standard au volume indiqu produira une solution une concentration de 8 0 UI ml Remarque le volume de reconstitution du standard du kit diff re selon les lots Utiliser le standard du kit reconstitu pour produire une s rie de dilution 1 pour 4 de l IFN y dans le diluant vert DV voir figure 1 Le S1 standard 1 contient 4 Ul ml le S2 standard 2 contient 1 Ul ml le S3 standard 3 contient 0 25 Ul ml et le 4 standard 4 contient O Ul ml DV seul Les standards doivent tre test s au moins en duplicats Proc dure recommand e pour Proc dure recommand e pour les standards dupliqu s les standards tripliqu s tiqueter les 4 tubes S1 S2 S3 tiqueter les tubes S1 S2 gt lt S3 gt SA gt SA Ajouter 150 pl de DV S1 S2 S3 SA Ajouter 150 pl de DV 51 Ajouter 150 pl du standard du kit S1 et Ajouter 210 pl de DV S2 S3 54 m langer soigneusement Transf rer 50 pl de 51 S2 et m langer Ajouter 150 pl du standard du kit S1 et soigneusement m langer soigneusement Transf rer 50 pl de 52 53 et m langer Transf rer 70 pl d
44. un filtre 450 nm et d un filtre de r f rence de 620 nm 650 nm Les valeurs DO sont utilis es pour calculer les r sultats 18 Notice QuantiFERON TB Gold ELISA 07 2013 7 Calculs et interpr tation du test Le logiciel d analyse QFT permet d analyser les donn es brutes et de calculer les r sultats II est disponible sur www QuantiFERON com Veuillez vous assurer que vous utilisez la version la plus r cente du logiciel Le logiciel effectue une valuation de contr le qualit du test g n re une courbe de standard et fournit un r sultat de test pour chaque sujet comme d taill dans la section Interpr tation des r sultats En alternative l utilisation du logiciel d analyse QFT les r sultats peuvent aussi tre d termin s selon la m thode suivante G n ration de la courbe de standard si le logiciel d analyse QFT n est pas utilis D terminer les valeurs DO moyennes des r plicats du standard du kit sur chaque microplaque Construire une courbe de standard logi logie en tra ant le logi de la DO moyenne axe par rapport au log de la concentration IFN y des standards en Ul ml axe x en omettant le standard z ro dans ces calculs Calculer la ligne de meilleur ajustement pour la courbe de standard par analyse de r gression Utiliser la courbe de standard pour d terminer la concentration IFN y UI ml de chacun des chan tillons de plasma de test l aide de la valeur DO de chaque chantillon
45. ure de lavage de microplaque doit tre tudi e Notice QuantiFERON TB Gold QFT ELISA 07 2013 19 Interpr tation des r sultats Les r sultats QFT sont interpr t s selon les crit res suivants Remarque le diagnostic ou l exclusion de la tuberculose et l valuation de la probabilit de LTBI exige une combinaison de r sultats pid miologiques historiques m dicaux et diagnostiques qui doivent tre pris en compte dans l interpr tation des r sultats QFT tableaux 2 et 3 Tableau 2 Utilisation des tubes de valeur z ro antig ne TB et mitog ne Valeur Antig ne TB moins Mitog ne moins R sultat OFT Rapport interpr tation z ro valeur z ro UI ml valeur z ro UI ml UI ml lt 0 35 205 N gatif Infection M tuberculosis improbable gt 0 35 et 25 de la valeur z ro 2 0 35 et 2 25 76 de la valeur z ro gt 0 5 N gatif Infection M tuberculosis improbable Positif Infection M tuberculosis probable Les r sultats de la r ponse des lt 0 35 Ind termin antig nes TB sont ind termin s gt 0 35 et lt 25 a z Les r sultats de la r ponse des Ind termin mE any 27 de la valeur z ro antig nes TB sont ind termin s Les r sultats de la r ponse des Ind termin Tous antig nes TB sont ind termin s Les r ponses au contr le positif mitog ne et occasionnellement au contr le antig ne TB peuvent souvent tre situ es 7 Te 2 en
46. v s Phone Australia 613 9840 9800 E mail quantiferon giagen com 60006 00000 QIAGEN 10Z5115FR R v 01 www QuantiFERON com
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