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Système CPL Agilent 1290 Infinity

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1. BOESCEEESCEEE En a CE EEE EEE LIT Ca Figure 26 Configuration de la pile de modules recommand e pour le syst me 1290 Infi nity avec la pompe binaire vue arri re 80 Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Configuration et installation du syst me 4 Configuration en deux piles Dans le cas o le thermostat de l chantillonneur automatique est ajout au syst me il est recommand d utiliser la configuration en deux piles car les deux modules lourds pompe 1290 Infinity et thermostat sont ainsi plac s en bas de chaque pile et les piles sont moins hautes Certains utilisateurs pr f rent la plus faible hauteur de cette disposition m me en l absence du thermos tat de l chantillonneur automatique Un capillaire l g rement plus long est n cessaire entre la pompe et l chantillonneur automatique voir la Figure 27 page 81 et la Figure 28 page 82 Instant Pilot E D tecteur Uo Compartiment colonnes 0000 U 0000 Q 0000 ons F
2. Compartiment solvants H el Echantillonneur automatique Thermostat pour l chantillonneur automatique facultatif Figure 27 Configuration en deux piles recommand e pour le syst me 1290 Infinity avec la pompe binaire vue avant Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 81 4 Configuration et installation du syst me Installation du module LAN vers ChemStation CPL C ble de bus CAN pour Instant Pilot Signal analogique du d tecteur facultatif CH NN i C ble de bus CAN EEEEEHE a C ble thermique facultatif
3. Figure 30 Configuration de pile recommand e pour le syst me 1290 Infinity avec pompe quaternaire vue arri re Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 85 4 Configuration et installation du syst me Configuration deux piles Si le thermostat de l chantillonneur automatique est ajout au syst me une configuration en deux piles est recommand e dans ce cas les deux modules lourds pompe Infinity 1290 et thermostat sont plac s au bas de chaque pile ce qui permet d viter les piles hautes Certains utilisateurs pr f rent la plus faible hauteur de cette disposition m me sans le thermostat de l chantillon neur automatique Un capillaire l g rement plus long est n cessaire entre la pompe et l chantillonneur automatique Voir Figure 31 page 86 et Figure 32 page 87 Instant Pilot D tecteur ego S0 888 Compartiment colonnes 888 Compar
4. iz E Gil L J Figure 25 Configuration de la pile de modules recommand e pour le syst me 1290 Infi nity avec la pompe binaire vue avant Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 79 4 Configuration et installation du syst me LAN vers ChemStation CPL C ble de bus CAN vers Instant Pilot CF 000 2 o r L Signal analogique du d tecteur facultatif o 0000000 Alimentation lectrique C ble de bus CAN bre
5. apgg0g22b0900 P EEEEEEEE WER EEE ehe Alimentation lectrique Figure 28 Configuration en deux piles recommand e pour le syst me 1290 Infinity avec la pompe binaire vue arri re 82 Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Configuration et installation du syst me 4 Optimisation de la configuration de la pile de modules syst me CPL quaternaire Configuration une seule pile Une performance optimale est garantie en installant les modules du syst me CPL quaternaire Agilent 1290 Infinity dans la configuration suivante voir Figure 29 page 84 et Figure 30 page 85 Cette configuration optimise le cir cuit pour un volume de retard minimum et une r duction de l encombrement requis La pompe quaternaire Agilent Infinity 1290 doit toujours tre install e en bas de la pile Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 83 4 Configuration et installation du syst me Instant Pilot Compartiment solvants D te cteur Co
6. jection Valve Cleaning Nettoyage de la vanne d injection njection volume Volume d injection jection with needle wash Injection avec lavage de l aiguille pen jector Cleaning Nettoyage de l injecteur nstrument Curves Courbes de l instrument ntegrate Int grer Glossaire d IU Integration OFF ON Int gration MARCHE ARR T L Launch online Lancer en ligne Load Method Chargement de m thode Location Position M ethod M thode Method and Run Control Contr le de m thode et d analyse Method History Historique de la m thode Method Information Informations sur la m thode Method M thode Needle Wash Lavage de l aiguille New Method Nouvelle m thode No Limit Aucune limite No Limit Off Aucune limite D sactiv 0 Off Arr t Online Plot Trac en ligne Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 151 Glossaire d IU P parameter Param tre Parameter Mismatch M sappariement de param tres Paste Coller PDF PDF Peak Width Largeur de pic Peakwidth Largeur de pic Post Time Temps post analyse Postrun Post analyse Post Run Command Macro Commande ou macro de post analyse Prerun Pr analyse Pre Run Command Macro Commande ou macro de pr analyse Pressure Limits Limites de pression Prime On Amorcer Printer Imprimante Pump Pompe Purge On Purger Q Quantitation setting
7. Check Method Sections to Edit Cocher les sections de m thode modifier Chromatogram Output Sortie de chromatogramme Clear all Tout effacer Column Switching Valve Vanne d inversion entre colonnes Combined Combin es Comment Commentaire Composition A Composition en A 150 Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Composition B Composition en B Control Contr le Customized Data Analysis Macro Macro d analyse de donn es person nalis e Cut Couper D Data Acquisition Acquisition de donn es Data Analysis Analyse des donn es Delete Row Supprimer Rang e Draw position Position d aspiration Draw speed Vitesse d aspiration Duration Dur e E Edit Entire Method Modifier l ensemble de la m thode Edit Integration Events Modification des v nements d int gration Edit Signal Plot Modifier le trac des signaux Eject speed Vitesse d jection Enable overlapped injection Permettre le chevauchement des injec tions Equilibration time Dur e d quilibrage F File Fichier File Setting Param tres de fichier Filename Nom de fichier Flow D bit Flush Port Voie de lavage Height Reject R jection de hauteur Hip_ALS Injector Program Programme d injection du HiP _ALS HiP ALS Injector Program Programme d injection du HiP ALS itial Events For All Signals v nements initiaux pour tous les signaux jection Mode Mode d injection
8. e Advanced High Throughput Automatic delay volume reduction ADVR bascule la vanne d injection de la voie principale vers la voie de d rivation apr s l injection et qu un volume d fini par le facteur de rin age de l chantillon ait t pomp travers l injecteur Cela r duit le volume de retard du syst me d environ 70 ul et permet aux variations de gradient d atteindre la colonne plus rapidement Enable overlapped injection bascule la vanne d injection de la voie princi pale vers la voie de d rivation apr s l injection et soit apr s que l chan tillon ait t vacu de l injecteur soit plus tardivement pendant l analyse apr s un intervalle de temps d fini L injecteur aspire ensuite l chantillon suivant de fa on tre pr t pour l injection suivante r dui sant ainsi la dur e totale de cycle et augmentant la capacit d analyse d chantillons e Injection Valve Cleaning Injector Cleaning permet de rincer le syst me d injection avec du solvant Injection Valve Cleaning permet de basculer la voie de la vanne des points donn s pendant l analyse afin de minimiser le transfert lorsque des compos s pouvant poser un probl me sont inject s Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 129 6 Annexe Configuration d une m thode l aide de la fonction Edit Entire Method Onglet de l chantillonneur automatique haute performance Hip_ALS Injector Pro
9. t amp dur e du gradient ou du segment de gradient en min e F d bit ml min V volume mort de la colonne A B modification de la fraction du solvant B en cours de gradient e S constante env 4 5 pour les petites mol cules Cette quation indique que k et par cons quent la r solution peuvent tre aug ment s en utilisant un gradient plus faible pente en g n ral une pente de 2 5 min convient un d bit plus lev et un faible volume de colonne Cette quation montre galement comment acc l rer un gradient existant si le d bit est doubl mais que la dur e du gradient est divis e par deux k reste constant et la s paration similaire mais deux fois plus rapide Les derni res recherches publi es montrent que pour une temp rature sup rieure 40 C une colonne STM courte fait preuve d une capacit de pics sup rieure une colonne STM longue parce qu elle op re plus rapidement Cf Petersson et al J Sep Sci 31 2346 2357 2008 Maximizing peak capacity and separation speed in liquid chromatography Optimisation de la capacit de pics et de la vitesse de s paration en chromatographie liquide Toute r duction du volume hors colonne r duit la dispersion et am liore la r solution Ce param tre est d j optimis dans les syst mes de LC 1290 Infi nity avec capillaires de faible diam tre narrow bore0 12 mm et la cellule cartouche Max light s assurer que
10. Volume de retard et volume hors colonne 42 Le volume de retard est d fini comme le volume du syst me entre le point de m lange dans la pompe et au sommet de la colonne Le volume suppl mentaire de la colonne est d fini comme le volume entre le point d injection et le point de d tection l exclusion du volume dans la colonne Volume de retard Dans les s parations du gradient ce volume entra ne un retard entre le chan gement de m lange dans la pompe et ce changement atteignant la colonne Le retard varie en fonction du d bit et du volume de retard du syst me En effet cela signifie que dans chaque syst me CPL il y a un segment isocratique sup pl mentaire dans le profil du gradient au d marrage de chaque analyse En g n ral le profil du gradient est rapport en termes de r glages du m lange au niveau de la pompe et le volume de retard n est pas rapport m me s il a un effet sur la chromatographie Cet effet devient plus significatif faibles d bits et faibles volumes de colonne et il peut exercer un impact important sur la transf rabilit des m thodes de gradient Il est par cons quent important pour les s parations rapides du gradient d avoir de faibles volumes de retard plus particuli rement avec des colonnes de petits diam tres par ex 2 1 mm de diam tre int rieur car elles sont souvent utilis es avec la d tection spec trom trique de masse Le volume de retard d un syst me
11. appr hender sous une forme graphique Figure 10 page 26 Comme illustr dans le sch ma la puissance de la pompe 1290 Infinity permet un fonctionnement 1200 bar un d bit de jusqu 2 ml min pression qui diminue jusqu 800 bar lorsque le d bit est augment 5 ml min Cela couvre tous les champs d application de tous les syst mes UHPLC actuellement commercialis s permettant ainsi le transfert direct sur le syst me 1290 Infinity de toutes les m thodes utilis es sur ces autres syst mes Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 25 2 26 Le syst me CPL Agilent 1290 Infinity Description du produit Nouvelles fonctionnalit s du syst me CPL Agilent 1290 Infinity bar 1200 1000 800 600 200 0 0 1 2 3 4 5 ml min Figure 10 Puissance des syst mes UHPLC plage de fonctionnement pression x d bit La plage de pression permet l utilisation des derni res particules sub 2 micro niques dans des colonnes longues pour obtenir une r solution lev e et dans des colonnes courtes pour des s parations rapides fort d bit La plage de d bit permet l utilisation non seulement de m thodes traditionnelles mais ga lement de mat riaux de remplissage pores superficielles ou pelliculaires par exemple Poroshell des d bits lev s R cemment un regain d int r t a t observ pour ces types de mat riau de remplissage qui constituent u
12. 0487 257 8 295 3 0 0132 9 730 0 749 8 0 601 3377 3 337 4 0 0147 12731 1 421 a EE DATT am RICE EEG 1071 2 Cliquez sur l ic ne Set Integration Events Table pour ouvrir le tableau comme illustr ci dessus R glez la Baseline Correction sur Advanced pour les analyses gradient R glez la Slope Sensitivity sur 50 Une valeur sup rieure int gre les pics pente plus forte en ignorant les pics pente moins lev e 5 R glez la Peak Width sur la valeur du pic d int r t le plus troit soit environ 0 01 dans cet exemple 6 Les param tres Area Reject et Height Reject peuvent tre r gl s pour rejeter les pics plus petits 7 Cliquez sur le l ic ne Integrate pour actualiser les r sultats en utilisant ces nouveaux param tres Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 113 5 Guide de d marrage rapide 8 Quittez le tableau d v nements l aide de l ic ne verte en forme de coche voir figure ci dessous ju L LE Report Short En ds LE T LONE MIX 010 0 EN a SR na Hi FA BA LA VX el M DADI Sig 24 DADI A Sig 242 4 Ret 360 100 PHENONESYPHENONE M1x 010 D mAU T 5 r u E Method Manual Evente g 5 5 S Initial Events For AII Signals g F 3 5 F 5 Integration Events Value Tangent Skim Mode Standard Tail Peak
13. 100 75 50 30 Introduction la chromatographie en phase liquide ultra haute performance Efficacit de la colonne N 5 um 12 500 8 500 6000 4 200 S 0 S 0 Figure 7 Avantages des colonnes contenant des particules sub 2 microniques Efficacit Efficacit R duction de la colonne de la colonne de la dur e 3 5 um N 1 8 pm de l analyse 21 000 35 000 14 000 23 250 Efficacit N Dur e 33 d analyse 10 500 17 500 50 Pression 7 000 12 000 Volume 67 de pic 4 200 6 500 Utilisation 80 de solvant 2 100 2 500 90 Relation entre la taille des particules l efficacit et la dur e d analyse Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 1 17 1 Introduction la chromatographie en phase liquide ultra haute performance Une r solution plus lev e L utilisation de colonnes longues remplies de particules plus fines aboutit une efficacit et une r solution plus lev es Cela est essentiel pour l analyse des chantillons complexes provenant d tudes m tabolomiques ou prot omi ques De m me des applications comme la d termination du profil des impu ret s b n ficient d un pouvoir de s paration plus lev Une capacit de pics plus lev e est avantageuse m me pour l analyse CPL MS de m dicaments dans les liquides biologiques en raison d interf rences r duites dues la sup pression ionique D une mani re g n ra
14. Avertissements Agilent Technologies Inc 2009 2011 2012 Conform ment aux lois nationales et inter nationales relatives la propri t intellectu elle toute reproduction totale ou partielle de ce manuel sous quelque forme que ce soit par quelque moyen que ce soit voie lectronique ou traduction est interdite sans le consentement crit pr alable de la soci t Agilent Technologies Inc R f rence du manuel G4220 93301 Edition 05 2012 Imprim en Allemagne Agilent Technologies Hewlett Packard Strasse 8 76337 Waldbronn Ce produit peut tre utilis en tant que composant d un dispositif de diagnos tic in vitro si ce dernier est enregistr aupr s des autorit s comp tentes et est conforme aux directives corre spondantes Faute de quoi il est exclusivement r serv un usage g n ral en laboratoire Garantie Les informations contenues dans ce document sont fournies en l tat et pourront faire l objet de modifica tions sans pr avis dans les ditions ult rieures Dans les limites de la l g islation en vigueur Agilent exclut en outre toute garantie expresse ou implicite quant ce manuel et aux informations contenues dans ce dernier notamment mais sans s y restreindre toute garantie march ande et aptitude un but particulier En aucun cas Agilent ne peut tre tenu responsable des ventuelles erreurs contenues dans ce document ni des dommages directs ou indirects po
15. instrument Yearly Operating Weeks i instnment Instrument Settings Instrument Costs USD per instrument Uptime per year 9 Maintenance Costs USD per instrument per year gt Column Costs USD per column Operators per instrument Consumable Costs Y USD per sample Method Settings Runtime min 9 Flow ml min Column Lifetime Figure 6 16 E e E n a E A E 10 20 30 40 50 SEELA NT Conventional LC Agilent 1200 Series RRLC System 2 65000 s EJ EJ a fad xj a Injections w Col Volumes U 1000 Calculateur d conomies de co ts Total Annual Operational Costs in Thousands of USD F conventonallc J Operator Costs Maintenance Costs Instruments Costs Column Costs Consumable Costs Solvent Costs Waste Costs Annual Lab Costs Total Annual Operational Ce Total Cost per Sample Savings Cost per Sample in USD Agilent 1200 Series Rapid Resolution LC RRLC System Conventional LC Agilent 1200 Series RRLC System 590277 78 USD 196759 26 USD 47222 22 USD 15740 74 USD g 8432540 USD 38541 01 USD 9 28250 00 USD 38250 00 USD 0 00 USD 0 00 USD 5928 75 USD 411 87 USD 2677 50 USD 186 01 USD 4 0 00 USD 0 00 USD 768681 65 USD 287888 89 USD g 10 05 USD 3 76 USD g 480792 76 USD W Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Longueur de la colonne mm 150
16. 68 Optimisation du syst me CPL Agilent 1290 Infinity Largeur de pic temps de r ponse et d bit de recueil des donn es Le param trage de largeur du pic le temps de r ponse et le d bit des donn es dans le d tecteur sont tous reli s entre eux Les param trages disponibles sont indiqu s dans le Il est important de param trer ceci correctement afin d obtenir une sensibilit optimale et pour pr server la r solution obtenue dans la s paration Le d tecteur acquiert en interne les points de donn es plus rapidement que n cessaire pour un chromatogramme et les traite pour produire le signal per u par le syst me de donn es Une partie du processus r duit les donn es un d bit de donn es appropri ce qui permet de tracer des pics chromatographi ques pr cis Comme pour la plupart des d terminations analytiques une moyenne des groupes de lectures est effectu e afin de r duire les erreurs dans le r sultat Le d tecteur regroupe les points de donn es et produit le signal de sortie au d bit de recueil des donn es requis au moyen d un processus lectro nique de filtrage Si le d bit de donn es r sultant est trop faible surfiltrage les hauteurs de pic seront r duites et la r solution entre eux sera r duite trop rapide et les donn es seront plus bruyantes que n cessaire pour obtenir un profil pr cis des pics troits Le param trage de la largeur du pic dans le d tecteur permet l utilisateur de
17. Avec un diam tre int rieur de 2 1 mm les volu mes d injection des colonnes varient g n ralement entre 5 et10 ul bien que cette valeur d pende largement de la chimie de l analyte et de la phase mobile Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 53 3 Optimisation du syst me CPL Agilent 1290 Infinity 54 comme expos plus haut Vous pouvez obtenir une id e approximative du volume maximal d injection en regardant le volume de la colonne voir dans une s paration de gradient des volumes d injection de 5 environ du volume de la colonne peuvent tre r alis s tout en maintenant un bon niveau de r so lution et de dispersion des pics Pour r aliser des injections plus importantes une m thode consiste utiliser une colonne de pi geage s lectionn e l aide d une vanne de commutation afin de capter et de concentrer l injection avant de la commuter c est dire de l injecter dans une colonne analytique voir La vanne peut tre commod ment situ e dans le compartiment colonne thermostat Pump A Autosampler Analytical column Position 1 _ Detector Enrichment Pump B column Pump Autosampler 1 Analytical column Position 2 Detector Enrichment Pump B column Figure 21 Enrichissement de l chantillon Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Optimisation du syst me CPL Agilent 1290 Infinit
18. Ces param tres sont g n ralement d finis dans l onglet de la Pump Cependant le temps d arr t du d tecteur peut parfois tre diff rent de celui de la pompe si par exemple l analyse des donn es se termine avant la fin de l analyse d finie pour la pompe Cela peut tre le cas lorsqu une rampe d quilibrage du gradient a t d finie la fin du gradient Par exemple si le pourcentage de B est de 95 10 min et qu il est attendu que tous les pics aient t lu s de la colonne alors l analyse peut globalement tre consid r e comme tant finie cependant un segment de gradient suppl mentaire peut tre ajout pour redescendre le pourcentage de B sa valeur initiale sur une p riode de deux minutes et r quilibrer en douceur la colonne Comme aucune don n e utile n est attendue pendant cette derni re rampe le temps d arr t du d tecteur peut tre r gl sur 10 min pour que l acquisition des donn es s arr te alors que le temps d arr t de la pompe est de 12 min pour permet tre la r alisation de la rampe Il s agit d une pr f rence de l utilisateur cer taines personnes reconnaissent que les derni res minutes du chromatogramme ne contiennent pas de donn es utiles mais les enregis trent quand m me pour viter l inconv nient de devoir d finir un temps d arr t diff rent pour le d tecteur Le temps d arr t du d tecteur n a aucun effet sur celui de la pompe et le fait qu il soit plus court ne raccourcit p
19. Guide de d marrage rapide 5 Pr paration du syst me Mise sous tension du syst me Si l ensemble du syst me n est pas encore sous tension et que le logiciel n indi que pas l tat Pr t suivez les tapes suivantes 1 Mettez l ordinateur sous tension et attendez l affichage du bureau Windows 2 Mettez sous tension les modules CPL l aide du bouton en bas gauche de chaque module Un voyant vert signalant que le module est aliment s allume au centre de chaque bouton 3 Lancez le logiciel de commande de l ordinateur en cliquant sur l ic ne appropri e le cas ch ant Sinon s lectionnez D marrer gt Tous les pro grammes gt Agilent Technologies gt OpenLAB gt Panneau de configuration OpenLAB S lectionnez l instrument appropri sous Instruments dans le panneau de navigation puis cliquez sur Launch online Le logiciel ChemStation s ouvre dans la vue Method and Run Control Au d marrage les modules se trouvent en mode Veille l tat Non pr t l exception de l chantillonneur automatique qui s initialise d embl e et atteint l tat Pr t 4 Pour allumer chaque module individuellement effectuez un clic droit sur l ic ne appropri e et s lectionnez la commande Switch module name on dans le menu contextuel Sinon vous pouvez choisir d allumer tous les modules du syst me simulta n ment en cliquant sur le bouton System On 0ff en bas droite du sch ma du syst me L tat du syst me passe d
20. Les neuf compos s sont e Ac tanilide e Ac toph none e _ Propioph none e Butyroph none e Benzoph none e _ Val roph none e Hexanoph none e Heptanoph none e Octanoph none Les param tres de m thode pour la s paration de ce m lange test sont r su m s dans le Tableau 9 page 104 Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 103 5 104 Guide de d marrage rapide Tableau 9 Param tres de m thode pour une premi re s paration test Module Param tre Valeur Pompe Solvant A Eau Solvant B Ac tonitrile D bit 0 4 ml min chantillonneur automatique TCC D tecteur Composition initiale Tableau des v nements du gradient Temps d arr t Injection Lavage de l aiguille Colonne Temp rature Signal A Largeur de pic Enregistrement des spectres 60 A 40 B 4 minutes 20 A 80 B 5 minutes 1 yl Voie de lavage 6 s ZORBAX Eclipse Plus C18 1 8 pm diam int 2 1 mm x 50 mm 40 C 250 nm bande passante 100 nm r f 360 nm bande passante 100 nm 0 025 min 10 Hz Tous Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Guide de d marrage rapide 5 Mise en place de la m thode Cette section explique comment r gler rapidement les conditions de m thode pour une analyse avec les conditions du m lange test Pour de plus amples d tails sur tous les param tres dispon
21. M langeur Jet Weaver standard 35 Pompe binaire Jet Weaver 45 Pompe quaternaire 350 Pompe quaternaire Jet Weaver V380 500 chantillonneur automatique boucle fixe de 5 pl 5 chantillonneur automatique volume variable standard 80 changeur de chaleur faible dispersion du compartiment colonnes 1 6 Tubulure de connexion diam int de 0 12 mm pour 100 mm 1 1 44 Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Optimisation du syst me CPL Agilent 1290 Infinity 3 Tableau 4 Volumes de retard des configurations du syst me CPL binaire 1290 Infinity Configurations de syst me Volume de retard pl Pompe binaire chantillonneur automatique boucle fixe MS 20 seulement Pompe binaire Jet Weaver Boucle fixe 55 Pompe binaire chantillonneur automatique standard MS 90 seulement Pompe binaire Jet Weaver chantillonneur automatique 125 15 ul sont rajout s pour comptabiliser les connexions dans les configurations de syst me Tableau 5 Volumes de retard des configurations du syst me CPL quaternaire 1290 Infinity Configurations de syst me Volume de retard pl Pompe quaternaire chantillonneur automatique boucle fixe 360 MS seulement Pompe quaternaire chantillonneur automatique standard MS 430 seulement Pompe quaternaire Jet Weaver V380 Boucle fixe 510 Pompe quaternaire Jet Weaver V380 chantillonneur 580 au
22. cessaire Pour des applications o la cuve Agilent Max Light haute sensibilit est utilis e pour obtenir une sensibilit plus lev e le volume de la cuve est optimis pour une utilisation avec des colonnes de diam tre interne de 3 mm et 4 6 mm Au niveau de la pompe il est recommand de s lectionner le bon solvant sur l cran de configuration de la pompe Malgr le syst me de commande intelli gent qui permet d abaisser automatiquement les fluctuations de pression un niveau minimum la compressibilit du solvant peut avoir un effet sur la stabi lit de la pr cision du d bit une pression lev e Ceci garantit que les bonnes valeurs de compressibilit sont toujours appliqu es pour les phases mobiles utilis es Des fonctions d talonnage sont disponibles pour les pompes binaire et quaternaire Agilent 1290 Infinity Pour la pompe binaire 1290 Infinity le volume de retard physique de la pompe d pend principalement de l utilisation du m langeur Jet Weaver Pour la d tection UV le Jet Weaver doit toujours tre utilis mais pour la d tection par spectrom trie de masse l utilisateur peut d cider de contourner le Jet Weaver et ainsi gagner 35 ul sur le volume de retard Ceci est uniquement vala ble pour un fonctionnement avec des gradients ultra rapides d une dur e inf rieure 0 5 min ou lors de l utilisation de colonnes de tr s faible volume Le Tableau 6 page 46 pr sente l effet sur le temps de reta
23. duction automatique du volume de retard ADVR dans le menu de configuration de l chantillonneur automatique Le facteur de purge g n ralement cinq fois le volume d injection garantit que suffisamment de temps est allou pour purger l chantillon de l injecteur avant de passer sur la voie de d rivation Cela per met de r duire de mani re efficace le volume de retard du syst me de 125 ul 50 ul Lors de l activation de la fonction ADVR il convient de noter que le gradient a d j d marr au niveau de la pompe au moment de l injection Il faut se poser la question de savoir si le gradient a d j atteint l chantillonneur automati que dans quel cas un petit d calage sera observ au niveau du gradient Cela se produit si le volume de retard est inf rieur au volume de purge et n est pas forc ment probl matique Toutefois il s agit d un ph nom ne qui peut tre pris en compte lors d un transfert de m thode Pour un facteur de purge de 5 et un volume d injection de 10 ul le volume qui circule travers l chantillon neur automatique avant le passage sur la voie de d rivation est de 50 ul et le volume de retard est de 50 ul ce qui signifie que le gradient vient juste d atteindre la vanne d injection Aucun effet ne sera constat pour des volu mes d injection plus petits mais un petit d calage sera observ au niveau du gradient pour des volumes d injection plus grands L utilisation de la fonction ADVR est g
24. il est configur dans la zone en dessous e Needle Wash si l option est s lectionn e au dessus lt Mode indique comment l ext rieur de l aiguille est rinc soit activement au moyen de la Flush Port soit par immersion dans un Wash Vial d termi n Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 127 128 Annexe Time dur e en secondes de pompage du solvant de lavage par la pompe p ristaltique reli e la voie de lavage La pompe fonctionne pendant 15 s suppl mentaires pour rincer la voie de lavage Location indique quel flacon ou puits de plaque est utilis dans le cas o l option Wash Vial est s lectionn e Les flacons ne doivent pas comporter de membrane ils doivent tre ouverts afin d viter toute transmission de mat riel par transfert sur la membrane Repeat indique si l option Flacon de lavage est s lectionn e comment de fois l aiguille est immerg e dans le flacon par d faut 3 fois maximum 5 Stop Time Post Time sont r gl s sur No Limit Off Ces param tres sont d fi nis dans l onglet de la pompe Advanced Auxiliary Draw speed indique la vitesse d aspiration de l chantillon travers l aiguille La valeur par d faut est 100 ul min La vitesse doit tre dimi nu e pour des chantillons visqueux ou pour une plus grande pr cision avec des petits volumes d chantillon lt 2 uL Eject speed indique la vitesse de sortie
25. sante 100 nm Largeur de pic 0 012 min r ponse de 0 25 s 20 Hz b Dans la section Advanced r glez Spectrum Store sur All c Les autres param tres peuvent conserver leurs r glages par d faut Cli quez sur 0K pour quitter la fen tre Les modifications sont transmises au module du DAD Tous les param tres de module n cessaires ont maintenant t saisis S lec tionnez M thode gt Enregistrer la m thode sous pour sauvegarder la m thode sous un nouveau nom Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Guide de d marrage rapide 5 Pour ne pas modifier le mod le de m thode par d faut le logiciel ChemSta tion ne vous laissera pas enregistrer la m thode avec le nom DEF LC M 7 Laissez le syst me s quilibrer pendant au moins 10 min et v rifiez que la ligne de base dans le Online Plot est stable avant de d marrer l analyse Ex cution de la m thode pour une injection unique Cette section explique comment ex cuter l analyse d une injection unique de m lange test l aide des conditions saisies dans la section pr c dente Deux modes d ex cution d analyses existent avec ChemStation Run Method pour des injections uniques par exemple lors du d veloppe ment interactif de m thodes l aide des r glages des param tres actifs un moment donn e Run Sequence pour des s ries d injections automatis es partir de plu sieurs flacons vent
26. Program 4 BinPump a TCC amp DAD lt Instrument Curves BinPump Ca TEG lt lt DAD Pressure bar Flow ml min Solvent Ratio A Solvent Ratio B _ Left Temperature C _ Right Temperature C Board Temperature C _ Optical Unit Temperature C C UV Lamp Anode Voltage V C Show timetable graph DK amp pply Cancel Help Figure 42 cran de configuration de m thode Onglet Courbes de l instrument L onglet Courbes de l instrument permet de suivre les flux de donn es autres que les signaux du d tecteur Leur enregistrement avec les donn es est activ en cochant les cases appropri es Ces courbes servent essentiellement des fins de diagnostic Les courbes possibles sont e Pompe Pression D bit Composition A B peut se r v ler utile pour superposer le profil du gra dient sur un chromatogramme e Compartiment colonne thermostat Temp rature gauche droite e D tecteur Temp rature de la carte Temp rature de l unit optique Tension de l anode de la lampe UV Annexe 6 Analyse des donn es D tails des signaux Vous pouvez galement acc der directement l cran Signal Details par l inter m diaire de la vue Method and Run Control effectuez un clic droit sur l ic ne Calibration de l interface utilisateur puis s lectionnez Signal Details dans le menu contextuel Dans la vue Analyse
27. W gt HiP ALS QE BinPump AJ DEMOCALZ M J Offline D ofime AJ DGALSTST M sS EA R AJ DGCALAS M POREN AJ DGCALOQ1 M en QJ D amp CALOQZ M EI GS Sn p AJ DGCALOQS M AJ DGCALOQ4 M AJ DGCALOQS M AJ DGCALOQE M La LAT MACA PS M La m thode par d faut DEF_LC M comprend un ensemble de param tres par d faut qui peuvent tre modifi s pour cr er une nouvelle m thode Par exem ple le d bit est r gl sur z ro et les Method Information et Method History sont vierges Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Guide de d marrage rapide 5 Pr paration du syst me REMARQUE Il est noter qu il est impossible d craser cette m thode lorsque les param tres sont modifi s Ainsi lorsque vous cliquez sur Save vous serez redirig vers la fonction Save As pour saisir un nouveau nom de m thode Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 99 5 Guide de d marrage rapide Pr paration du syst me Configuration du trac en ligne 1 Si la fen tre Online Plot n est pas visible Cliquez sur Vue gt Signaux en ligne gt Fen tre de signal 1 pour afficher la fen tre E Ontine Pot DAD1A DAD Signal A 2 Pour configurer le ou les signaux souhait s dans la fen tre Online Plot cli quez sur Change La fen tre de configuration Edit Signal Plot s affiche Edit Signal Plot Available S
28. actif des pulsations de pression fournit un d bit sans fluctuations L entra nement des pistons se r gle de mani re autonome pour int grer les caract ristiques de compressibilit du solvant et les caract ristiques hydrauliques du syst me afin pr venir toute fluctuation En association avec le contr le de la fluidit du mouvement qui r duit les pulsations de pression provoqu es par le mouve ment des pistons et l efficacit du m lange de volumes faibles cela garantit un bruit de fond de la pompe le plus bas possible sur les spectres UV Dans la Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 29 2 30 Le syst me CPL Agilent 1290 Infinity Description du produit Composants du syst me pompe un microprocesseur est d di au contr le de la fluidit du mouvement et l optimisation en temps r el du d placement des pistons en fonction des param tres statiques et dynamiques En outre d am liorer les performances chromatographiques ces fonctions contribuent rendre le fonctionnement de la pompe tr s peu bruyant Lorsque la phase mobile est compos e de solutions tampons concentr es l accessoire de rin age actif des joints est disponible pour rallonger la dur e de vie des joints de la pompe Une vanne de s lection de solvant permet de g n rer des m langes binaires isocratiques ou gradient partir d un ou deux solvants par voie Les gra dients binaires sont g n
29. avoir diffus le long des tuyaux de solvant et la purge est recommand e e En cas de remplissage des r servoirs solvant la pompe doit tre purg e pour distribuer le solvant frais dans le syst me Si un solvant diff rent va tre utilis assurez vous que le nouveau solvant est miscible avec le solvant pr c dent Si ce n est pas le cas effectuez une tape interm diaire avec un solvant co miscible l isopropanol est souvent un bon solvant interm diaire consultez le tableau de miscibilit des solvants Pour des informations d taill es concernant la proc dure de purge consultez la section Purge de la pompe page 90 102 Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Guide de d marrage rapide 5 Acquisition de donn es dans la vue Contr le de m thode et d analyse Toutes les proc dures et configurations de m thodes sont d crites pour la pompe binaire 1290 Infinity Elles peuvent tre ex cut es de la m me mani re pour la pompe quaternaire 1290 Infinity Param tres de m thode pour le m lange test et la colonne ZORBAX RRHD Le syst me CPL 1290 Infinity est livr avec la colonne ZORBAX RRHD Eclipse Plus C18 1 8 um 2 1 mm x 50 mm et un m lange test contenant des ph nones utiliser avec cette proc dure d entra nement Le m lange test de ph nones r f rence 5188 6529 contient 100 ng ul de neuf compos s dissous dans de l eau ac tonitrile 65 35
30. bo tier Le d gazeur augmente la stabilit du d bit particuli re ment des d bits faibles et la sensibilit du d tecteur Figure 11 Pompe binaire Agilent 1290 Infinity 28 Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Le syst me CPL Agilent 1290 Infinity Description du produit 2 Vers l chantillonneur automatique Depuis les r servoirs solvant t Vanne d inversion M langeur de solva 4 D gazeur D uxi me t te de pompe Vers l vacuation Figure 12 Identification des pi ces et sch ma de la pompe binaire 1290 Infinity Chaque t te de pompe comprend deux pistons en s rie et est command e par un nouveau micrologiciel Les pistons sont fabriqu s dans un nouveau mat riau le carbure de silicium qui permet d liminer la chaleur de la pompe de fa on efficace Le capillaire qui relie le premier piston au deuxi me piston comprend un changeur de chaleur int gr pour liminer la chaleur g n r e par les pressions et les d bits lev s Chaque t te de pompe a un clapet d entr e passif et un clapet de sortie passif sur la chambre du premier piston Les pistons sont ind pendants et entra n s de mani re pr cise l aide d un moteur 65000 pas d pla ant un volume de 300 picolitres par pas Le mouvement des pistons est assur par un syst me de commande intelli gente dot d une boucle de r troaction pour v rifier que l amortissement
31. comporte le volume dans la pompe depuis le point de m lange les connexions entre la pompe et l chantillonneur automa tique le volume du circuit via l chantillonneur automatique et les connexions entre l chantillonneur automatique et la colonne Par exemple pour les m thodes CPL utilisant un mat riau d emballage de 5 um des d bits de 1 ml min sont typiquement employ s dans une colonne avec un diam tre int rieur de 4 6 mm et environ 0 2 ml min pour une colonne avec un diam tre int rieur de 2 1 mm m me v locit lin aire dans la colonne Sur un syst me ayant un volume de retard type de 1 000 ul et utili sant une colonne de 2 1 mm il y aura un segment isocratique initial cach Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Optimisation du syst me CPL Agilent 1290 Infinity 3 de 5 min alors que sur un syst me avec un volume de retard de 600 ul le retard sera de 3 min Ces volumes de retard seraient trop lev s pour des ana lyses d une dur e d une deux minutes Avec des emballages de moins de 2 um le d bit optimal d apr s la courbe de Van Deemter est l g rement sup rieur et une chromatographie rapide peut donc utiliser trois cinq fois ces d bits entra nant ainsi des volumes de retard d environ une minute Toute fois le volume de retard doit ensuite tre r duit pour parvenir des retards d une fraction de la dur e d analys
32. de la pompe AVERTISSEMENT Cette proc dure est n cessaire lorsque e la pompe est utilis e pour la premi re fois e un ou plusieurs des tuyaux d entr e contiennent des bulles d air ou sont secs pour d autres raisons Le but de l amor age est d liminer toutes les bulles d air de la pompe et des tuyaux d entr e Le propan 2 ol autres d nominations isopropanol alcool isopropylique IPA est le meilleur solvant pour l amor age de la pompe et pr sente l avantage d tre miscible avec la plupart des solvants pour phase normale ou inverse v rifiez l aide du tableau de miscibilit des solvants si n cessaire Solvants chantillons et r actifs toxiques inflammables et dangereux La manipulation de solvants d chantillons et de r actifs peuvent comporter des risques pour la sant et la s curit gt Lors de la manipulation de ces produits respectez les r gles de s curit lunettes gants et v tements de protection telles qu elles figurent dans la fiche de s curit fournie par le fournisseur et respectez les bonnes pratiques de laboratoire gt Le volume des substances doit tre r duit au minimum requis pour l analyse gt L instrument ne doit pas fonctionner dans une atmosph re explosive 88 vitez de vider en totalit les r servoirs solvant l aide de l cran de contr le du remplissage des bouteilles Utilisez une seringue pour remplir les tuyaux de solvant car la pompe ne peu
33. depuis la th o rie statistique l erreur c d que le bruit dans ce cas est r duit par la racine carr e du nombre de d terminations Il est important que la bande passante de r f rence ne s tende pas jusqu une partie du spectre ayant quelque absorbance car cela r duirait alors le signal r sultant et la sensibilit serait galement r duite L utilisation d une longueur d ondes de r f rence peut aider r duire la d rive ou les variations dans le chromatogramme induites par les changements de l indice de r fraction dus aux fluctuations de la temp rature ambiante ou l op ration du gradient On peut facilement tester l effet d un signal de r f rence en param trant deux signaux autrement identiques l un avec un signal de r f rence et l autre sans signal de r f rence Si aucune partie du spectre ne pr sente une absorbance z ro il sera alors pr f rable de d sactiver le signal de r f rence Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 65 3 66 Optimisation du syst me CPL Agilent 1290 Infinity signal ei wavelength Anisic Acid reference bandwidth 10 0 nm 30 nm reference bandwidth wavelength 350 nm 220 240 260 280 300 320 Wavelength nm Figure 23 Spectre de l acide anisique Largeur de fente G4212A uniquement La transmission de la lumi re dans le spectrographe et dans la bande passante optique est contr l
34. e Indique qu il est dangereux pour les yeux de regarder directement la 22 lumi re produite par la lampe au deut rium utilis e dans ce produit L appareil comporte ce symbole pour indiquer qu il pr sente des surfaces chaudes et que l utilisateur ne doit pas les toucher lorsqu elles sont A chaudes Un AVERTISSEMENT vous met en garde contre des situations qui pourraient causer des blessures corporelles ou entra ner la mort gt N allez pas au del d un avertissement tant que vous n avez pas parfaitement compris et rempli les conditions indiqu es Le message ATTENTION vous pr vient lors de situations risquant d entra ner la perte de donn es ou d endommager l quipement gt N allez pas au del d une mise en garde Attention tant que vous n avez pas parfaitement compris et rempli les conditions indiqu es 120 Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Annexe 6 Informations sur les solvants Cuve circulation Pour assurer un fonctionnement optimal de votre cuve circulation vitez d utiliser des solutions alcalines PH gt 9 5 susceptibles d attaquer le quartz et de nuire aux propri t s optiques de la cuve circulation Utilisation de solvants Respectez les recommandations suivantes lors de l utilisation de solvants e L utilisation de verre ambr peut emp cher le d veloppement d algues vitez d utiliser les solvants
35. et la t te de pompe B Si une vanne de s lection de solvant SSV est install e dans la pompe effectuez les tapes suivantes pour tous les tuyaux solvant encore vides a D connectez la tubulure vide au niveau de la vanne de s lection de sol vant Installez la seringue d amor age munie de l adaptateur filet sur la tubulure b Aspirez lentement du solvant travers la tubulure jusqu limination de toutes les bulles c Retirez rapidement la seringue et l adaptateur de la tubulure et recon nectez la tubulure la vanne de s lection de solvant 4 Dans le logiciel ChemStation effectuez un clic droit sur la partie pompe du sch ma du syst me puis s lectionnez Prime On dans le menu contextuel attention ne pas la confondre avec la commandePurge On Les autres logiciels de commande fonctionnent de mani re similaire Le clapet de purge basculera pr sent les voies A et B vers l vacuation et amorcera simultan ment les deux voies Le module aspire du solvant un d bit lev en utilisant les quatre pompes en m me temps et l envoie vers l va cuation par le biais du clapet de purge automatique Cette op ration est renou vel e 20 fois puis le processus d amor age s arr te Le clapet de purge rebascule le circuit hydraulique vers le syst me Ensuite il est conseill de purger chaque voie avec 30 ml de propan 2 ol Sui vez la proc dure Purge de la pompe page 90 Syst me CLP Agilent 1290 Inf
36. illustr e dans Figure 22 page 57 Position 1 gt Column 2 Eluent 10 pump Autosampler 1 Waste Regeneration Detector pump Column 1 Position 2 Column 2 Eluent pump Autosampler Regeneration gt Detector pump Column 1 Figure 22 Alterner la r g n ration des colonnes Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 57 3 Optimisation du syst me CPL Agilent 1290 Infinity Comment am liorer la r solution 58 L augmentation de la r solution d une s paration am liore les donn es sur les plans qualitatif et quantitatif permet de s parer plus de pics et ouvre des perspectives sur l acc l ration de la s paration Ce chapitre examine comment am liorer la r solution partir des points suivants e optimisation de la s lectivit e remplissage avec des particules de granulom trie plus faible e utilisation de colonnes plus longues e utilisation de gradients moins abrupts de d bits plus lev s e r duction maximale des volumes hors colonne e optimisation de l injection du solvant et du volume inject e acquisition suffisamment rapide des donn es La r solution entre deux pics est obtenue en r solvant l quation suivante 1 a 1 k 1 Rs VN a k avec R r solution e N nombre de plateaux plate count mesure de l efficacit de la colonne e a s lectivit entre deux pics k facteur d
37. interne de 2 1 mm de 0 2 ml min pour un diam tre interne de 3 0 mm et de 0 4 ml min pour un diam tre interne de 4 6 mm Augmentez le d bit jusqu atteindre le d bit souhait sur une p riode de 5 minutes 11 Une fois que la pression s est stabilis e connectez la colonne au d tecteur 12 quilibrez la colonne et le d tecteur avec 10 volumes de colonne de phase mobile avant utilisation voir le Tableau 7 page 46 pour les volumes de colonne 13 vitez toute surpression Contr lez la plage de pression de votre gradient avant de lancer toute analyse 14 Si les chantillons sont dissous dans un solvant organique concentr envi sagez l utilisation d un programme d injection qui intercale l envoi des chantillons avec des flux de solvant moins concentr afin de r duire le ris que de pr cipitation avec des phases mobiles tamponn es concentration lev e Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 73 3 Optimisation du syst me CPL Agilent 1290 Infinity Comment emp cher les obstructions de colonne 74 Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide oiran et installation du syst me Installation du logiciel 76 Installation du module 78 Optimisation de la configuration de la pile de modules syst me CPL binaire 78 Optimisation de la config
38. la Run Time Checklist par l interm diaire du menu M thode gt Liste de contr le de l ex cution ou en cliquant sur l ic ne Run Time Checklist en haut droite de l cran R n aime Checklist Instrument z Check Method Sections to Run Data Acquisition M Standard Data Analysis C Customized Data Analysis Macro C Save GLP Data C Post Bun Command Macro C Save Method with Data Figure 47 cran Liste de contr le de l ex cution La Run Time Checklist permet de choisir si la m thode doit effectuer la fois l acquisition de donn es et l analyse des donn es Elle permet galement d incorporer des macros ou des programmes diff rents points pendant la proc dure op rationnelle Dans la plupart des cas les cases Data Acquisition et Standard Data Analysis sont coch es Si aucune analyse des donn es n est n ces saire par exemple lors d une s rie d analyses pour le d veloppement d une m thode la case Standard Data Analysis peut tre d coch e afin de ne pas cr er de rapport les donn es pourront tre valu es par la suite dans la vue Data Analysis Pour lier un macro un des points d acc s il faut cocher la case appropri e et saisir le nom du macro dans la zone de texte droite Le logiciel cherche le macro dans le r pertoire C Chem32 Core il faut donc inclure le chemin d acc s s il est localis dans un autre r pertoire 148 Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et gu
39. la colonne doit tre rinc e avec de trois cinq fois le volume de la colonne pour la stabiliser et qu elle soit pr te pour l injec tion suivante et ceci peut repr senter 50 ou plus du temps de s paration dans certaines applications C est un processus tr s important mais il peut tre limin de la dur e du cycle en utilisant la r g n ration altern e automa tique de la colonne Pour ce faire une t te de vanne deux positions dix voix 1 200 bars est requise dans le compartiment colonnes une seconde colonne analytique identique la premi re et une deuxi me pompe est n cessaire tant donn qu une colonne est utilis e dans l analyse de s para tion l autre colonne est en cours de rin age avec la composition de d marrage du gradient de phase mobile et pour d marrer l injection la colonne r cem ment restabilis e est commut e au circuit analytique Les deux colonnes sont donc altern es de cette mani re pour toute la s quence des injections La deuxi me pompe sert uniquement rincer un m lange isocratique dans la colonne et peut donc tre une pompe plus simple que les pompes Infinity 1290 Par exemple une pompe isocratique de la s rie 1200 sera suffi Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Optimisation du syst me CPL Agilent 1290 Infinity 3 Comment am liorer la capacit d analyse sante pour ex cuter cette t che L installation est
40. la longueur la plus faible possible est utili s e entre la colonne et le d tecteur Enfin toute am lioration de la r solution sera pr serv e si l acquisition des donn es est suffisamment rapide pour chantillonner finement les pics les plus troits Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Optimisation du syst me CPL Agilent 1290 Infinity 3 Comment am liorer la sensibilite Comment obtenir une sensibilit plus lev e La sensibilit d une m thode de s paration est li e au choix des phases stati que et mobile car il est souhaitable d obtenir une bonne s paration avec des pics troits et une ligne de base stable avec un minimum de bruit Le choix de configuration de l instrument exerce un effet et l impact principal r side dans la configuration du d tecteur Cette section tudie de quelle fa on la sensibili t est affect e par les aspects suivants e Volume de la pompe du m langeur e Colonnes de plus faible diam tre e Cuve circulation du d tecteur e Param tres du d tecteur En outre l tude des param tres du d tecteur mentionne galement les th mes li s de s lectivit et de lin arit Volume de la pompe du m langeur Pour obtenir le plus faible bruit de ligne de base avec une d tection UV la configuration du volume mort standard avec le Jet Weaver 35 ul est conseill e pour le module de pompe 1290 Infinity Cela est valable pour prat
41. la plage de complexit des chantillons En d veloppant la m thode la plage du gradient doit tre conserv e au minimum requis pour parvenir la s paration Dans de nombreux gradients de syst me d acc s ouvert analysant de 5 95 des solvants organiques sont utilis s pour disposer d une plus grande flexibilit quand il s agit de traiter une gamme de composants inconnus Dans la situation de haut d bit il faut essayer de d terminer si une plage plus petite suffira sur la base que la plage de composants attendue pour l analyse est r duite et cela permettra de non seulement r duire le temps d analyse mais aussi de r duire le temps de stabi lisation entre les analyses La dur e du cycle se d compose en plusieurs l ments Dur e du cycle injection s paration stabilisation traitement des donn es Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 55 3 56 Optimisation du syst me CPL Agilent 1290 Infinity Avec un grand nombre d chantillons traiter m me une petite r duction de la dur e du cycle peut s ajouter une grande r duction de la dur e globale pour achever le travail Pour cette raison le traitement des donn es peut tre mis hors ligne pour permettre au syst me de se concentrer sur l analyse des chantillons et le recueil des donn es L injection peut tre optimis e pour la vitesse en n oubliant pas qu une aspi ratio
42. le flacon plusieurs reprises Cette m thode est effi Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Optimisation du syst me CPL Agilent 1290 Infinity 3 cace pour liminer un l ger effet m moire mais il est pr f rable d utiliser l ori fice de rin age pour plus d efficacit l ext rieur de l aiguille L orifice de rin age est situ au dessus et l arri re du si ge de l aiguille et une pompe p ristaltique distribue le solvant de rin age Sa capacit est de 0 68 ml et la pompe p ristaltique distribue 6 ml min ce qui signifie que le volume de l orifice de rin age est enti rement remplit de solvant propre en 7 s Si vous choisissez l orifice de rin age vous pouvez d finir la dur e de rin age de l ext rieur de l aiguille dans le solvant propre Cette dur e peut tre limit e deux ou trois secondes dans les circonstances o l effet m moire ne pose gu re de probl me ou atteindre 10 20 s pour un rin age plus complet Le rin age de l ext rieur de l aiguille dans l orifice de rin age est conseill en proc dure standard pour viter de contaminer le si ge de l aiguille Une fois contamin le si ge de l aiguille doit faire l objet d un r trobalayage en chan geant manuellement les raccords du circuit pour le nettoyer C est l une des t ches qui peuvent tre automatis es avec le module Flexible Cube L orifice de rin age et sa pompe de distribution de so
43. le net toyage Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 71 3 Optimisation du syst me CPL Agilent 1290 Infinity Comment emp cher les obstructions de colonne 72 Comme pour tout syst me HPLC il faut veiller viter toute obstruction par tielle ou totale de la colonne ou de la tubulure du syst me par inadvertance Les probl mes dus l introduction involontaire de mat riaux dans le syst me peuvent g n ralement tre vit s en prenant les mesures suivantes e Filtrez les solvants e Filtrez les chantillons e Remplacez r guli rement les phases mobiles liminez les sels des solutions tampon du syst me par rin age Une source in vitable de particules est le syst me lui m me Comme pour tous les syst mes HPLC les joints s usent en lib rant des particules qui se retrou vent pi g es dans les fritt s du syst me ce qui rend le remplacement syst ma tique des ces derniers n cessaire Les colonnes remplies de particules sub 2 microniques n cessitent en plus des fritt s avec des pores de faible dia m tre pour emp cher le mat riau de remplissage d tre entra n hors de la colonne Cela accro t le risque d obstruer ces fritt s avec des particules conte nues dans les chantillons ou la phase mobile et provenant de l instrument lui m me Respectez les recommandations d utilisation simples suivantes afin d optimi ser vos r sultats 1 Installe
44. le volume de dispersion du pic cal cul en multipliant la largeur de pic par le d bit doit tre sup rieur d environ 2 uL pour cette cuve par exemple 0 02 min x 200 uL min 4 uL La cuve haute sensibilit Max Light a une longueur de trajet de 60 mm et ceci augmentera de trois cinq fois les valeurs signal vers bruit en fonction des conditions de l application Le volume de dispersion augmente l g rement plus que celui de la cuve standard Longueur d ondes et bande passante Le d tecteur mesure l absorbance simultan ment des longueurs d onde de 190 nm 640 nm l aide d une d tection barrette de diodes Une lampe UV donne une bonne sensibilit sur toute la gamme de longueurs d onde Le d tecteur barrette de diodes DAD peut simultan ment calculer et envoyer au syst me de donn es jusqu huit signaux chromatographiques et toute la gamme de spectres chaque point temporel Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 63 3 64 Optimisation du syst me CPL Agilent 1290 Infinity Un chromatogramme ou un signal UV est un trac de donn es d absorbance en fonction de la dur e et il est d fini par sa longueur d ondes et sa bande pas sante e La longueur d ondes indique le centre de la bande de d tection e La bande passante d finit la gamme de la longueur d ondes sur laquelle est calcul e la valeur moyenne de l absorbance pour donner un r sult
45. les purger leur d bit maximum individuel de 5 ml min ce qui fournit un d bit de purge total de 10 ml min avec une composition de 50 50 Solvants chantillons et r actifs toxiques inflammables et dangereux La manipulation de solvants d chantillons et de r actifs peuvent comporter des risques pour la sant et la s curit gt Lors de la manipulation de ces produits respectez les r gles de s curit lunettes gants et v tements de protection telles qu elles figurent dans la fiche de s curit fournie par le fournisseur et respectez les bonnes pratiques de laboratoire gt Le volume des substances doit tre r duit au minimum requis pour l analyse gt L instrument ne doit pas fonctionner dans une atmosph re explosive 90 1 Pour acc dez la fen tre de contr le du clapet de purge effectuez un clic droit sur la partie pompe et s lectionnez Control dans le menu contextuel Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Configuration et installation du syst me 4 Sinon vous pouvez s lectionner Instrument gt PompeBin 1290 Infinity plus d options gt Contr le Pump i Of Standby Seal Wash off Single Wash Duration min Periodic Period min on for min Automatic Tum On Tum on at Purge On Duration 1 00 min Off Flow 0000 mL min Composition 4 X B DO z Prime On of Dk Cancel Hep 2 Dans la section Purge d fini
46. ouvre l cran suivant Il s agit d un processus sens unique Si vous cliquez accidentellement sur OK avant d avoir effectu toutes les modifications cliquez sur Cancel et recommencez Edit Entire Method depuis le d but Sinon continuez effectuez vos modifications et revenez l cran non termin la fin du processus Lorsque vous cliquez sur Cancel un bouton Skip appara t et permet de sauter les crans restants Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Annexe 6 Configuration d une m thode l aide de la fonction Edit Entire Method Informations sur la m thode Vous pouvez galement acc der l cran Method Information en utilisant le menu M thode gt Informations sur la m thode ou en effectuant un clic droit sur l interface utilisateur Cette fen tre permet de saisir des informations concernant la m thode Ces informations seront affich es au dessus du sch ma du syst me sur l cran Method and Run Control lorsque cette m thode est charg e et r side dans la m moire Method Intormation Instrument 2 Method Comments This method runs the test sample to demonstrate how to run an analysis Figure 36 Informations sur la m thode Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 125 126 Annexe Instrument Acquisition Configuration de la m thode de l instrument Vous pouvez acc der directement l
47. qu il est indispensable de choisir des propri t s de phase mobile et de phase stationnaire ainsi qu une temp rature ad quates pour r ussir la s para tion Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Introduction la chromatographie en phase liquide ultra haute performance 1 Figure 4 quation de r solution R f 4 3 f N 2 t k 1 20000 40000 60000 80000 N 1 05 1 10 1 15 1 20 5 10 15 20 k Figure 5 Effet du nombre de plateaux du facteur de s paration et du facteur de r ten tion sur R Que la m thode de s paration r solution rapide soit nouvelle ou simplement transf r e partir d un protocole conventionnel existant il est clair qu il est n cessaire de disposer d une gamme tendue de phases stationnaires aux pro pri t s diff rentes avec de nombreux formats de colonne Agilent proposait d j une gamme de plus de 140 colonnes 1 8 umZORBAX r solution rapide et haut d bit RRHT 14 niveaux de s lectivit longueur de 15 150 mm et diam tre interne de 2 1 3 0 et 4 6 mm pr sent avec le lan cement du syst me CPL Agilent 1290 Infinity la gamme de produits STM est tendue pour inclure les colonnes r solution rapide et haute d finition RRHD r sistants 1200 bar Cela permet de s lectionner la phase station naire optimale pour atteindre une s lectivit maximale La r solution le d bit et la dur e d analyse peuvent tre opt
48. r gler correctement ces param tres sans connaissances n cessaires autres que la lecture des r sultats d int gration du chromatogramme pour voir la lar geur des pics Le param tre de largeur du pic doit tre r gl pour la largeur de pic la plus troite observ e dans le chromatogramme S il est r gl sur une trop grande largeur les pics seront moins hauts et plus larges et avec une r solution ventuellement plus faible s il est r gl sur une largeur trop troi te cela augmentera inutilement le bruit de la ligne de base Le logiciel utilise principalement cette valeur pour r gler le d bit de recueil des donn es de mani re ce qu il recueille suffisamment de points de donn es au dessus des pics les plus troits visant obtenir de 15 25 points par pic Le DAD Infinity 1290 peut recueillir des donn es un maximum de 160 Hz si n cessaire ce qui permettrait de recueillir suffisamment de points de donn es au dessus d un pic d une largeur de 0 1 s seulement Le param trage du temps de r ponse est un autre moyen d identification du r glage du filtrage Il est mesur en secon des et repr sente environ un tiers de la valeur de largeur du pic qui est mesu r e en minutes Il indique avec efficacit la vitesse laquelle le signal trac r pond un changement de pas dans le signal d entr e Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Optimisation du syst
49. site Internet l adresse suivante http www agilent com S lectionnez Produits Analyse chimique Vous y trouverez galement la derni re version t l chargeable du micrologiciel des modules Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Annexe 6 Configuration d une m thode l aide de la fonction Edit Entire Method Toutes les proc dures et configurations de m thodes sont d crites pour la pompe binaire 1290 Infinity Elles peuvent tre ex cut es de la m me mani re pour la pompe quaternaire 1290 Infinity Dans le logiciel ChemStation une m thode contient tous les param tres n ces saires l acquisition des donn es gestion du syst me et l analyse des don n es traitement des donn es pour obtenir des r sultats quantitatifs et qualitatifs Les param tres sont accessibles au moyen d une s rie d crans qui traitent chacun d un module ou d une fonction Vous pouvez acc der ces crans en cliquant sur une ic ne de l interface utilisateur ou sur la barre de menus et ses menus d roulants Une nouvelle m thode est cr e en chargeant et modifiant une m thode existante ou en chargeant et modifiant le mod le de m thode vierge DEF_LC M Pour modifier quelques param tres seulement vous pouvez acc der directe ment aux fen tres de configuration appropri es correspondant ces param tres Cependant les utilisateurs moins exp riment s peuvent trouver q
50. suivants qui sont corrosifs sur l acier Les solutions d halog nures alcalins et de leurs acides par exemple l iodure de lithium le chlorure de potassium etc Les concentrations lev es d acides inorganiques tels que l acide sulfuri que ou nitrique et des solvants organiques en particulier aux temp ratu res lev es si votre m thode chromatographique le permet remplacez ces acides par de l acide phosphorique ou un tampon phosphate moins corrosifs pour l acier inoxydable Les solvants ou m langes halog n s qui forment des radicaux et ou des acides comme 2CHCl Op 2COCl 2HCI Cette r action dans laquelle l acier inoxydable joue sans doute le r le de catalyseur se produit rapidement avec le chloroforme sec si le processus de s chage limine l alcoo l stabilisant Les thers de qualit chromatographique qui peuvent contenir des peroxydes par exemple le THF le dioxane le di isopropyl ther De tels thers doivent tre filtr s avec de l oxyde d aluminium sec qui adsorbe les peroxydes Les solvants contenant des agents complexants forts l EDTA par exem ple Les m langes de t trachlorure de carbone avec l isopropanol ou le THF Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 121 6 Annexe Agilent Technologies sur Internet 122 Pour les toutes derni res informations sur les produits et les services Agilent Technologies visitez notre
51. sur l ic ne v nements d int gration de l interface utilisateur puis en cliquant sur Specify Report dans le menu contextuel Vous pouvez galement acc der cet cran dans la vue Data Analysis par l interm diaire du menu Rapport gt D finition du rapport ou l ic ne de la t che D finition du rapport Specify Report Instrument 1 Reporting settings Quantitation settings Report mode Use Intelligent Reporting Use Classic Reporting Style Chromatogram output Report style Quantitative result sorted by C Sample info on each page Add chromatogram output Signal Add fraction table and ticks Add summed peaks table of pages Portrait Time 100 Landscape Add compound custom fields Response 40 amp Add sample custom fields ta sample info Multi page Landscape Report layout for uncalibrated peaks Pages Separately With calibrated peaks O Do not report Signal options Destination File setting Printer File prefix Report Screen Eile Unique PDF file name Cancel Help Figure 45 cran D finition du rapport Pour obtenir un rapport simple avec les pourcentages des aires avec le mode Rapport classique qui permet d envoyer le rapport l imprimante et de cr er un fichier PDF entrez les param tres suiva
52. tre configur s pour tous les modules du syst me le temps d arr t de la pompe sert de r f rence et celui des autres modu les est g n ralement r gl sur cette valeur e Post Time d finit la dur e d un compte rebours la fin de l analyse pen dant laquelle l injection suivante ne peut tre effectu e Cela permet au sys t me de se r quilibrer apr s une analyse gradient Pour une m thode isocratique ce param tre peut tre r gl sur Off Pour des m thodes gra dient cette valeur peut tre d termin e exp rimentalement en observant le comportement de la ligne de base G n ralement il correspond au temps n cessaire pour rincer le syst me avec le volume de retard du syst me plus au moins trois cinq volumes de colonne e Pressure Limits permettent de contr ler le comportement de la pompe en fonction de la pression La pression maximale de la pompe 1290 Infinity est de 1200 bar mais certaines colonnes ne r sistent pas ce niveau de pres sion et il est n cessaire de les prot ger en fixant une limite de pression Une situation d erreur est g n r e par la pompe si cette pression est atteinte l analyse en cours est arr t e et la pompe passe en mode Veille avec un d bit nul Les informations relatives la pression maximum support e par cha que colonne sont fournies avec la colonne La colonnes Agilent ZORBAX RRHD peuvent tre utilis es 1200 bar La limite de pression inf rieure est
53. 0 0208 10 633 0518 a Es oam Fie Path CACHEM3A2 DATAIPHENONES 2 01 2922 2235 0089 11 030 0509 Date 083u 09 13 45 06 3 029 2575 2331 o06s 9720 0545 Report Layout Sample Phenones Test Mix 41 03 245 168 0020 0929 205 aiia Sample Info 5 037 2324 21 oosa 8771 0702 D verification 0Q P4 Barcode G 0 422 239 296 0 0124 9023 0661 Operator Rob 7 0487 2578 259 00132 3730 0749 gt Method PHENONES2M el om 3373 337 4 oma 1271 1421 z Method PHENONES2 M saved T Figure 34 Vue Analyse des donn es Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 111 5 Guide de d marrage rapide Vue Analyse des donn es Pour ouvrir un chromatogramme dans la vue Data Analysis 1 Lancez une session de ChemStation hors connexion 2 Cliquez sur Analyse des donn es dans le coin inf rieur gauche de l cran voir la Figure 34 page 111 3 Dans le panneau de navigation recherchez le r pertoire de donn es conte nant les fichiers de donn es Toutes les donn es d injections uniques sont regroup s dans un sous groupe nomm Single Runs Double cliquez sur Single Runs pour charger ces fichiers de donn es dans le tableau de naviga tion 4 S lectionnez un fichier dans le tableau de navigation et double cliquez sur le fichier pour afficher le chromatogramme dans la visionneuse 112 Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Guide
54. 10 ul du circuit de la pompe Les applications habituelles sont des m thodes haut d bit d analyses avec des gradients rapi des sur des colonnes haute r solution de 2 1 mm La pompe binaire 1290 Infinity est con ue et fournie pour que des rails vanne suppl mentaires puissent tre install s droite ou gauche de la pompe Jusqu deux vannes de s lection de solvant 12 voies suppl mentai res peuvent tre install es sur ces rails Cela permet d utiliser un maximum de 26 solvants diff rents pour le d veloppement de m thodes analytiques gra dients binaires Une carte de commande group est disponible pour int grer les vannes de s lection de solvant ext rieures l interface utilisateur de la pompe par cons quent la s lection des solvants est facilit e par l utilisation de leur nom Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 31 2 32 Le syst me CPL Agilent 1290 Infinity Description du produit Pompe quaternaire 1290 Infinity En revanche la pompe quaternaire 1290 Infinity ne comprend qu une t te de pompe mais dispose d une vanne gradient multivoie MCGV en plus pour fractionner les luants conform ment au gradient programm Selon le prin cipe de ce m lange faible pression les solvants se rejoignent dans le m lan geur d entr e et sont donc m lang s aussi bien avant que dans la t te de pompe La t te de pompe est identique cell
55. 6 Annexe Informations relatives la s curit Informations g n rales de s curit AVERTISSEMENT Les consignes g n rales de s curit suivantes doivent tre respect es lors de toutes les phases de fonctionnement d entretien et de r paration de cet ins trument Le non respect de ces consignes ou des avertissements sp cifiques nonc s ailleurs dans ce manuel est en violation des normes de s curit appli cables la conception la fabrication et l usage pr vu de l instrument Agi lent Technologies ne peut tre tenu responsable du non respect de ces exigences par le client V rifiez la bonne utilisation des quipements La protection fournie par l quipement peut tre alt r e gt Il est recommand l op rateur de cet instrument de l utiliser conform ment aux indications du pr sent manuel Normes de s curit Cet instrument est un instrument de classe de s curit I comportant une borne de mise la terre et a t fabriqu et contr l conform ment aux nor mes de s curit internationales Fonctionnement 118 Avant de brancher l alimentation lectrique effectuez chaque tape de la pro c dure d installation Par ailleurs vous devez respecter les consignes suivan tes Ne retirez pas les capots de l instrument pendant son fonctionnement Avant la mise sous tension de l instrument toutes les bornes de mise la terre ral longes lectriques transformateurs et dis
56. BAX RRHD et RRHT StableBond peuvent tre utilis es dans la fourchette haute de la plage La temp rature est r gul e une pr cision de 0 15 C jusqu 10 C en dessous de la temp rature ambiante bien qu il soit noter que tr s peu d applications fonctionnent en dessous de 12 15 C vitez d utili ser le TCC une temp rature tellement basse que l humidit de l air se condense car cela pourrait d clencher le capteur de fuites e Column Switching Valve cette option n est active que si une vanne est instal l e entre les supports de colonne Trois types de vanne sont disponibles 2 positions 6 voies pour permuter entre deux colonnes 2 positions 10 voies pour alterner avec la r g n ration des colonnes 8 positions 9 voies utilis e pour la s lection de colonnes multiples avec MDS Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 135 6 Annexe Configuration d une m thode l aide de la fonction Edit Entire Method Onglet du d tecteur Barrette de diodes DAD Setup Method Q HiP LS Signals Use Wave Signal length Signal A Q HIP ALS Injector Program Band width sj BinPump TCC S7 DAD Timetable Advanced Reference Bandwidth Reference Wavelength spacium m Store en nm Signal B 0 nm Range from LE Signal C 0 nm Signal D Step 20 Es 1000 nm Signal E 100 0 nm Thresh
57. Cette l vation de temp rature peut avoir un effet sur la s lectivit contre pression inf rieure les pertes en performance dues l chauffement par frottement sont minimis es de fa on ce que les efficacit s des colonnes sub 2 microniques de diam tre interne de 4 6 ou 3 mm restent toujours sup rieures celles des colonnes correspondantes de diam tre interne de 2 1 mm Un exemple de transfert d une m thode gradient vers une colonne de diam tre interne de 2 1 mm pour laquelle la s paration a t acc l r e est pr sent dans la Figure 9 page 20 L analyse initiale sur la colonne de 2 1 mm a t r a lis e un d bit de 0 22 ml min ce qui g n rait une pression de 380 bar pour un r glage de la temp rature 37 C tous les pics taient s par s en 12 5 min chromatogramme non illustr Le d bit a t augment 0 66 ml min et les temps de gradient r duits par un facteur trois ce qui g n rait une pression de 1020 bar tous les pics ont t lu s en 4 2 min Figure 9 page 20 en haut Cela aurait d permettre une s paration identique cependant une perte de r solution a t observ e entre les pics 7 et 8 et entre le pic 5 et le pic princi pal L origine de cette perte de r solution tait l chauffement de la colonne qui modifiait sa s lectivit pour ces compos s Il a t constat qu une ther mostatisation une temp rature de 5 C de moins tait suffisante pour com p
58. D sactiv e si sa valeur est de z ro mais pour toute autre valeur une Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 133 6 Annexe Configuration d une m thode l aide de la fonction Edit Entire Method situation d erreur sera g n r e par la pompe si la pression de fonctionne ment descend en dessous de ce seuil Ce param tre correspond une mesure pr ventive lorsque la colonne ne se trouve pas l int rieur d un module quip d un capteur de fuites ou dans le cas o le syst me serait ass ch Habituellement cette valeur est r gl e entre 10 et 20 bar Onglet du compartiment colonne thermostat TCC Setup Method Q HiP 8LS Injector Program sk Bi TCC DAD X Instrument Curves Temperature Timetable Left Advanced Not Controlled Not Controlled Enable Analysis 40 0 i W when front door open amp s Detector Cell As Detector Cell Left Right D With any temperature with any temperature When temperature is within When temperature is within 08 C EE C Column Switching Valve Port 1 gt 2 Stoptime Posttime As Pump injector of L m Figure 40 cran de configuration de m thode cran onglet Compartiment colonne thermostat Temperature permet de d finir la temp rature des supports de colonne des c t s gauche et droit Les temp ratures peuvent tre r gul es de mani re ind pendante ou a
59. Description du produit Figure 19 Vanne remplacement rapide sur le TCC Jusqu trois TCC peuvent tre regroup s pour permettre des op rations com plexes telles que la permutation entre huit colonnes pour le d veloppement de m thodes automatis ou lorsqu il est souhaitable que des colonnes suppl mentaires soient disponibles pour diff rentes applications De cette fa on la colonne utiliser devient un param tre de m thode simple Cette configura tion requiert deux t tes de vanne 8 positions 9 voies une dans deux des TCC Pour faciliter leur utilisation les TCC regroup s sont repr sent s dans le logiciel sous la forme d une unit unique avec une seule interface Par rapport des mod les plus anciens d autres am liorations sont le renfor cement de l isolation thermique des guides capillaire mieux adapt s et un capteur d ouverture de la porte pour que les m thodes puissent int grer le param tre porte ferm e particuli rement utile pour les m thodes temp rature lev e ou basse Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Le syst me CPL Agilent 1290 Infinity Description du produit 2 D tecteur barrette de diodes 1290 Infinity Le syst me optique du d tecteur barrette de diodes 1290 Infinity est de conception innovante avec une cuve de type cartouche incorporant la techno logie de guide d ondes optofluidique Il offre une sensib
60. L Agilent 1290 Infinity 5 Connectez le capillaire d entr e du Jet Weaver au port 2 du clapet multifonction Connectez le capillaire de sortie au port 1 Port 1 Port 2 JE CE LS 52 Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Optimisation du syst me CPL Agilent 1290 Infinity 3 Comment augmenter le volume d injection La configuration standard de l chantillonneur automatique Agilent 1290 Infi nity inclut une boucle d chantillonnage volume variable pour un maximum de 20 ul injections Le doseur peut injecter un volume maximal de 40 ul et vous pouvez changer la cartouche de la boucle d chantillonnage dans ce but consultez le Guide de l chantillonneur automatique 1290 Infinity pour des informations plus d taill es Le volume mort du syst me d l chantillon neur automatique augmente en cons quence Lorsqu une m thode est r duite pour une plus petite colonne il importe que la conversion de la m thode tienne compte de la r duction du volume d injection proportionnellement au volume de la colonne pour conserver le niveau de per formance de la m thode Ceci permet de maintenir un pourcentage identique du volume d injection par rapport la colonne Cet aspect est d autant plus important que le solvant d injection est plus fort plus luotropique q
61. Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 33 2 Le syst me CPL Agilent 1290 Infinity Description du produit La configuration standard 1 est utilis e pour la plupart des analyses alors que la configuration volume de m lange accru 2 sert aux applications exi geantes pour ce qui est de la ligne de base pour ces derni res les performan ces de m lange et la ligne de base UV peuvent tre am lior es significativement par l utilisation du m langeur Jet Weaver Agilent Une fonc tion de purge automatique 3 est install e ainsi qu une fonction de r trolava ge du filtre en ligne 4 Cela vous permet de nettoyer le filtre et de prolonger sa dur e de vie 34 Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Le syst me CPL Agilent 1290 Infinity Description du produit 2 L chantillonneur automatique Agilent 1290 Infinity L chantillonneur automatique Agilent 1290 Infinity fonctionne selon le prin cipe d coulement en continu bien tabli d Agilent qui permet une injection volume variable et perfectionne encore ses performances Des nouveaux mat riaux inertes ont t utilis s pour les joints du dispositif doseur et le si ge de l aiguille et contribuent maintenir une transfert de niveau extr mement fai ble Le volume hydraulique r duit du circuit est mieux adapt des gradients plus rapides et la possibilit de r aliser des injections chevauchantes et la fonct
62. Skim Height Ratio 0 00 Front Peak Skim Height Ratio 0 00 Skim Valley Ratio 20 00 Baseline Correction Advanced Peak to Valley Ratio 500 00 Specific Events For Signal T r r T aml o 02 o4 08 os DAD Default rl t Time Area Height Width Area Symmetry Time Integration Events Value 1 0 122 270 4 206 5 0 0195 15 507 0 474 Initial Slope Sensitivity 50 2 0 192 255 6 2243 0 0171 14 672 0 527 Initial Peak width 001 3 0 279 208 5 230 2 0 0138 11 956 0 574 Initial Area Reject 20 4 0 376 188 8 254 8 00108 10825 0664 Initial Height Reject 20 5 0 421 183 6 285 4 9 7431E 3 10 530 0 723 Initial Shoulders OFF 6 0 497 177 6 300 2 8 9037E 3 10 187 0 767 Ed 0 601 173 2 3248 8 2216E 3 9 935 0 952 8 ung 143 1 280 1 47116 3 8207 0 883 114 Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Guide de d marrage rapide 5 Analyse des donn es D finition du rapport 1 Dans la barre de menus cliquez sur Rapport gt D finition du rapport pour affi cher la fen tre illustr e dans la figure ci dessous Specify Report Instrument 1 ings Quantitation settings Report mode Use Intelligent Reporting Style Report style l Short Quantitative result sorted by Sample info on each page Add chromatogram output Add sample custom fields to sample info Report layout for uncalibrated peaks Separately Destination File setting Printer File pre
63. Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Contenu de ce manuel Contenu de ce manuel Ce manuel d crit le syst me CPL Agilent 1290 Infinity 1 Introduction la chromatographie en phase liquide ultra haute performance Ce chapitre pr sente le syst me CPL Agilent 1290 Infinity et ses principes de fonctionnement 2 Le syst me CPL Agilent 1290 Infinity Description du produit Ce chapitre pr sente les caract ristiques du syst me CPL 1290 Infinity 3 Optimisation du syst me CPL Agilent 1290 Infinity Ce chapitre traite de l application des notions th oriques et de l utilisation des caract ristiques du syst me CPL pour d velopper des s parations optimis es 4 Configuration et installation du syst me Ce chapitre d crit l installation du logiciel les configurations de pile et la pr paration du syst me avant fonctionnement 5 Guide de d marrage rapide Ce chapitre traite de l acquisition de donn es et de l analyse des donn es avec le syst me CPL 1290 Infinity 6 Annexe Ce chapitre apporte des informations compl mentaires concernant la s curi t les aspects juridiques l Internet et la configuration d une m thode Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 3 Sommaire Sommaire Introduction la chromatographie en phase liquide ultra haute performance 7 Th orie de l utilisation de particules plus fi
64. alement d pendante du d bit utilis un d bit de 0 2 ml min le Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 47 3 48 Optimisation du syst me CPL Agilent 1290 Infinity retard est diminu de 21 secondes alors qu un d bit de 1 0 ml min il n est que de 4 secondes La fonction ADVR ne convient en g n ral pas aux applications impliquant des compos s r put s causer des probl mes de transfert Pour r duire au minimum la dispersion des pics et le volume de retard dans le compartiment colonnes thermostat l changeur de chaleur faible disper sion doit tre install L changeur de chaleur faible dispersion est un l ment des kits de capillaires recommand s pour les applications faible dispersion Le kit de capillaires classique comporte galement des capillaires troits diam tre interne de 0 12 mm Les changeurs de chaleur int gr s de 3 ul et 6 ul sont destin s des fins de r trocompatibilit et doivent unique ment tre utilis s dans le cas o une m thode conventionnelle doit tre lanc e sur le syst me m me si dans ce cas aussi l changeur de chaleur faible dis persion doit tre utilis Pour pr server la r solution dans le d tecteur barrette de diodes Agilent 1290 Infinity la cuve de type cartouche Max Light pr sente un faible volume de dispersion volume o de 1 0 ul et aucune optimisation de volume suppl mentaire n est n
65. ances de fa on significative Les valeurs de hauteur du plateau sont deux trois fois plus petites avec des parti cules de 1 8 um et ce avec une efficacit proportionnellement plus lev e Cela permet l utilisation d une colonne plus courte sans perdre en r solution ainsi la dur e de l analyse est galement divis e par un facteur deux trois L aug mentation de l efficacit est en grande partie due au nombre r duit de trajets d coulement diff rents en raison de la taille r duite des particules la valeur de la constante A est plus petite diffusion turbulente De surcro t une taille de particules plus petite signifie que les dur es de transfert de masse sont plus courtes diminuant ainsi la valeur de la constante C L effet global est une r duction importante de la perte de l efficacit lorsque le d bit augmente la pente de la courbe est moins forte Cela signifie que l utilisation de particules plus fines permet d acc l rer encore la s paration en augmentant le d bit sans toutefois perdre significativement en efficacit 0 0045 0 0040 0 0035 0 0030 0 0025 5 0 um 0 0020 HETP cm plateau 0 0015 3 5 um 0 0010 0 0005 1 8 um 0 0000 2 ml min 5 0 ml min 0 0005 0 0 0 2 0 4 0 6 0 8 1 0 1 2 1 4 1 6 Vitesse lin aire interstitielle p m s Figure 2 Courbe de van Deemter pour des tailles de particules diff rentes Syst me CLP Agilent 1290 Infi
66. art des applications Threshold d finit la valeur seuil de hauteur de pic mDO au dessus de laquelle les spectres sont enregistr s Advanced Analog Output Le d tecteur 1290 Infinity dispose d un connecteur de sortie de signal ana logique pour utilisation avec des syst mes de donn es qui n acceptent pas une entr e num rique Les options sont Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Annexe 6 Zero Offset d finit le niveau z ro sur un pourcentage fixe du signal de sortie Cela permet une certaine marge pour la d rive n gative Attenuation r gle l chelle de la sortie sur l absorbance d finie Advanced Margin for Negative Absorbance La valeur par d faut est de 100 mAU ce qui signifie que la plage dynamique du d tecteur est suffisante au vu du niveau sur lequel a t r gl le z ro pour mesurer jusqu cette limite inf rieure Pour mesurer des pics n gatifs plus importants ou pour suivre une ligne de base pr sentant une forte d ri ve n gative cette valeur doit tre ajust e vers le bas pour viter l obtention d un signal plat sur la limite inf rieure de la plage Toutefois cette valeur ne doit pas tre modifi e sans bonne raison car sa diminution augmente le bruit de la ligne de base et r duit la plage disponible pour la mesure des pics positifs Advanced Slit La fente d entr e du spectrographe contr le la r solution spectrale et a
67. as l analyse comme cela serait le cas avec les temps d arr t des autre modu les Le plus facile est donc de r gler tous les temps d arr t sur As Pump e Le Timetable fonctionne de la m me mani re que pour les autres modules vous pouvez ajouter une ligne s lectionner la fonction faire varier et entrer de nouvelles valeurs pour cette fonction Toute variation des param tres du d tecteur s applique imm diatement au temps d fini Les param tres suivants peuvent varier au cours d une analyse Stabilisation Signal Seuil Largeur de pic du d tecteur Mode d acquisition des spectres Contacts Advanced Spectrum Les spectres peuvent tre enregistr s durant l analyse de mani re continue ou en fonction des pics cela est vrai pour le logiciel ChemStation certains autres logiciels p ex EZChrom ne prennent en charge que l acquisition continue de tous les spectres et les options d enregistrement en fonction des Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 137 138 Annexe pics n apparaissent pas L acquisition des spectres et l acquisition des signaux sont des op rations ind pendantes ex cut es par le micrologiciel du d tecteur elles ne d pendent pas de l extraction des donn es de la matrice des donn es 3D par le logiciel de l ordinateur La vitesse d acquisi tion des spectres est d termin e par le param tre Peakwidth et huit spectres sont acquis pendant la d
68. at cha que point temporel Par exemple un signal d une longueur d onde de 250 nm avec une bande pas sante de 16 nm sera une moyenne des donn es d absorbance de 242 nm 258 nm Il est de plus possible de d finir une longueur d ondes de r f rence et une bande passante de r f rence pour chaque signal L absorbance moyenne calcul e depuis la bande passante de r f rence centr e sur la longueur d ondes de r f rence sera soustraite de sa valeur quivalente la longueur d ondes du signal pour produire le chromatogramme de sortie On peut choisir la longueur d ondes et la bande passante du signal afin de pou voir les optimiser pour e d tection universelle de bande large e d tection s lective de bande troite e sensibilit pour une analyte particuli re La bande large ou la d tection universelle travaillent avec une large bande pas sante permettant de d tecter toute esp ce ayant une absorbance dans cette gamme Par exemple pour d tecter toutes les mol cules absorbantes entre 200 nm et 300 nm param trez un signal 250 nm avec une bande passante de 100 nm L inconv nient de cette m thode est que la sensibilit ne sera pas optimale pour une quelconque de ces mol cules On utilise plus souvent une bande troite ou une d tection s lective Le spectre UV pour une mol cule par ticuli re est analys et un maximum d absorbance appropri est s lectionn Si possible vitez la gamme dans laq
69. auche de la cuve de type cartouche Max Light du d tecteur 1290 Infinity 4 Raccordez la tubulure d vacuation la sortie indiqu e par l inscription CELL OUT droite de la cuve de type cartouche Max Light du d tecteur 1290 Infinity et placez la sortie du tuyau dans un r cipient d chets liqui des appropri Int gration au r seau Pour des informations concernant l int gration de votre syst me au r seau reportez vous aux manuels d utilisation des diff rents modules chapitre Configuration r seau Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 93 4 Configuration et installation du syst me Installation du module 94 Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide e 5 Guide de d marrage rapide propos du guide de d marrage rapide 96 Pr paration du syst me 97 Mise sous tension du syst me 97 Chargement de la m thode par d faut 98 Configuration du trac en ligne 100 Purge de la pompe 102 Acquisition de donn es dans la vue Contr le de m thode et d analyse 103 Param tres de m thode pour le m lange test et la colonne ZORBAX RRHD 103 Mise en place de la m thode 105 Ex cution de la m thode pour une injection unique 107 Ex cution plus rapide de la m thode 109 Analyse des donn es 111 Vue Analyse des donn es 112 Int gration
70. cement du m langeur Jet Weaver sur la pompe binaire 1290 Infinity 1 D brancher les connexions capillaires du Jet Weaver 2 Retirez les vis six pans qui fixent le m langeur Jet RS Weaver sur le bo tier de la pompe 9 gt Les volumes internes des c t s avant et arri re du Jet L entr e du bas du Jet Weaver est branch au port Weaver sont diff rents 35 100 pl ils sont central une du clapet de la pompe par un capillaire optimis s respectivement pour un volume de retard longueur 300 mm 0 17 mm de d i La sortie du dessus faible et une efficacit de m lange lev e est branch e sur l auto chantillonneur 50 Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Optimisation du syst me CPL Agilent 1290 Infinity 3 Mise en place du m langeur Jet Weaver V380 sur la pompe quaternaire 1290 Infinity 2 Retirez le couvercle m tallique en le soulevant 1 et en le tirant hors du panneau avant 2 3 Ins rez le Jet Weaver dans l ouverture du panneau avant 4 Montez les deux connexions des capillaires sur le Jet 1 et enfoncez le 2 Weaver en respectant la bonne orientation Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 51 3 Optimisation du syst me CP
71. cran Setup Method en utilisant le menu Instrument gt Configuration de la m thode de l instrument ou en effectuant un clic droit sur toute ic ne de module de l interface utilisateur et en s lectionnant Method dans le menu contextuel La prochaine tape de la fonction Edit Entire Method est l cran Setup Method qui comprend six onglets pour les diff rents modules et fonctions Les onglets sont _ chantillonneur automatique haute performance HiP ALS HiP ALS Injector Program e Pompe binaire BinPump Compartiment colonne thermostat TCC _ D tecteur barrette de diodes DAD _ Instrument Curves Pour changer d onglet cliquez sur le nom de l onglet en haut de l cran Lors que vous changez des param tres vous pouvez transmettre chaque modifica tion l instrument imm diatement en cliquant sur Apply Sinon si vous pouvez cliquer sur OK une fois que vous avez termin de modifier tous les onglets pour transmettre tous les param tres modifi s aux modules fermer l cran et pas ser l tape suivante Les onglets de saisie des param tres sont d aspect similaire dans tous les logi ciels de commande ChemStation EZChrom MassHunter etc gr ce l utili sation par Agilent de pilotes RC Net communs pour les modules de l instrument Pour ex cuter l exemple de s paration comme pour la plupart des m thodes il n est pas n cessaire de modifier tous les param tres disponibles Cependant pa
72. d injection fixe qui utilise la pompe seringue et les vannes du module Flexible Cube pour remplir la boucle d chantillonnage L avantage de cette configuration est d liminer le volume de retard de l chantillonneur automatique elle convient donc bien certaines applications haut d bit gradient rapide L inconv nient est que la flexibilit de l injection volume variable est d sactiv e et qu une partie de l chantillon est perdue lors du rin age de la boucle D autres fonctions telles que le r trolavage automatique du si ge de l aiguille d injection apr s l injection sont disponibles avec le module Flexible Cube et permettent de rassurer l utilisateur en vitant le transfert de compos s difficiles ou les obstructions provoqu es par des chantillons sales Le portoir d chantillons de l chantillonneur automatique propose dix posi tions fixes pour des flacons de 2 ml et deux plateaux amovibles qui peuvent tre identiques ou non s lectionn s parmi les choix suivants _ Plateau 54 positions pour flacons de 2 ml e Plaque de microtitrage 96 puits plusieurs hauteurs possibles e Plaque de microtitrage 384 puits plusieurs hauteurs possibles S il y a lieu l chantillonneur automatique peut tre thermostat une temp rature comprise entre 4 C et 40 C par ajout du module de contr le de la tem p rature de l chantillonneur automatique Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du sy
73. d un signal 113 D finition du rapport 115 Ce chapitre traite de l acquisition de donn es et de l analyse des donn es avec le syst me CPL 1290 Infinity he Agilent Technologies 95 5 Guide de d marrage rapide propos du guide de d marrage rapide 96 Ce chapitre apporte des informations relatives au fonctionnement du syst me CPL Agilent 1290 Infinity Vous pouvez vous en servir comme guide pour lan cer rapidement une premi re analyse apr s l installation l utilisant la fois comme exemple et pour v rifier le fonctionnement global du syst me Il com prend galement des informations plus d taill es sur les param tres des m thodes Cet exemple explique comment mettre en place et effectuer une analyse avec la colonne et l chantillon test fournis avec le syst me CPL Agilent 1290 Infi nity L exemple fait r f rence aux menus et aux commandes du logiciel Open LAB CDS ChemStation Edition mais les m mes fonctions sont disponibles en utilisant les autres possibilit s de commande de l instrument savoir Open LAB CDS EZChrom Edition le logiciel Instant Pilot et le logiciel MassHunter Il est suppos pour cet exemple que le syst me a t install mis sous tension et amorc voir Amorcage de la pompe page 88 La lampe UV doit tre allum e au moins 30 minutes avant de d marrer toute analyse quantitative Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide
74. dans Sample Info 4 Lorsque la ligne de base est stable et quilibr e lancez l analyse l aide du bouton Start Single Sample Le chromatogramme doit tre similaire celui illustr ci dessous avec une dur e d analyse d environ 1 min MAU 400 Figure 33 Exemple de chromatogramme pour le m lange test de ph nones en utili sant des conditions de d marrage rapides Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 109 5 Guide de d marrage rapide En fait cette s paration n est optimis e dans ces conditions et il est conseill l utilisateur d acqu rir davantage d exp rience sur le fonctionnement du syst me en essayant d optimiser la m thode Pour cela vous pouvez essayer de e r duire la concentration de l chantillon en le diluant au 1 10 e augmenter la plage du gradient augmenter la temp rature e examiner le spectre de pics et s lectionner une bande troite appropri e pour la d tection Pour de plus amples d tails concernant l optimisation consultez la section Optimisation du syst me CPL Agilent 1290 Infinity page 41 110 Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Guide de d marrage rapide 5 ion Analys Analyse des donn es Dans le logiciel ChemStation une m thode contient tous les param tres n cessaires l acquisition des donn es gestion du syst me et l analy
75. de d marrage rapide 5 Int gration d un signal 1 S lectionnez l outil T che d int gration voir la figure ci dessous Les ic nes Integrate et Set Integration Events Table sont entour es dans la figure illus tr e ci dessous RE Calibration ul Signal MPi Purify Le Spectrum aak Z Revort Short Ei E3 g 5 DADI A 5ig 242 ONE MIX 010 D EN C4 es Alu Li 7 ii Ea LA wy fj od SEE Fi DAD1 A Sig 242 4 Ref 360 100 PHENONES PHENONE MIX 010 0 mAU 5 2 Method Manual Events I 2 5 3 5 300 E Initial Events For AII Signals 7 g E g 250 l z o 3 5 Integration Events Value Sasa Tangent Skim Mode Standard ia 2 Tail Peak Skim Height Ratio 0 00 1 Front Peak Skim Height Ratio 0 00 oi Skim Walley Ratio 20 00 1 Baseline Correction Classical 502 F Peak to Walley Ratio 500 00 X J RE BEN i Specific Events For Signal r T T d o o2 04 06 08 DAD Default Ea Time Area Height Width Areaz Symmetiy Time Integration Events Value R ni122 281 7 208 1 0 0208 10 633 0518 Initial Slope Sensitivity 5 2 me 2922 229 5 0 0189 11 030 0 509 Initial Peak Width 005 3 0279 2575 233 1 0 0166 3 720 0545 Initial rea Reject 5 4 0349 246 16 8 0 020 0 929 205 Initial Height Reject 1 5 037 232 4 261 0 0144 8 771 0 702 Initial Shoulders DFF 6 0422 239 296 0 0124 9 023 0 661 7
76. de l aiguille Draw position indique le d calage vertical par rapport la position d injection nominale de 10 mm au dessus du fond d un flacon Pour un flacon de 2 ml cela correspond environ la moiti de la hauteur du flacon donc un d calage n gatif permet de pr lever l chantillon plus pr s du fond du flacon Par exemple un d calage de 7 mm positionne l extr mit de l aiguille 3 mm au dessus du fond du flacon Equilibration time indique l intervalle de temps entre l aspiration de l chantillon et le d placement de l aiguille Sample flush out factor correspond au temps d attente de l chantillon neur automatique apr s l injection et avant de permettre la valve de revenir la position de d rivation Cela garantit que l chantillon a t vacu de l aiguille du si ge et de la vanne d injection La valeur par d faut est 5 Vial Well bottom sensing repr sente une alternative l utilisation du d calage de la position d aspiration L aiguille se d place lentement jusqu toucher le fond du flacon ou du puits puis remonte de 1 mm Il s agit d un moyen ing nieux de s assurer que l aiguille est proche du fond Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Annexe 6 du flacon mais par cons quent l injection est l g rement plus longue Cette option ne doit pas tre utilis e s il existe des particules au fond du flacon qui pourraient obstruer l aiguille
77. des donn es vous pouvez acc der cet cran par l interm diaire du menu talonnage gt D tails des signaux L cran Signal Details est l tape suivante de la fonction Edit Entire Method et il permet d identifier les signaux acquis qui doivent tre trait s par l Analyse des donn es La liste d roulante num re les signaux disponibles y compris les signaux analytiques d finis dans les param tres du d tecteur et des param tres enregistr s tels que la temp rature le d bit la composition la pression et les trac s diagnostiques S lectionnez un signal et cliquez sur Add to Method pour l envoyer vers le tableau Signal Details affich dans la partie inf rieure de l cran Vous pouvez s lectionner un plusieurs ou tous les signaux acquis par le d tecteur Si aucun signal n est s lectionn le tableau est vide dans ce cas de figure le logiciel ChemStation traite par d faut tous les signaux acquis par le d tecteur Parfois l utilisateur modifie une m thode existante pour cr er une nouvelle m thode et se trouve confront une erreur de Parameter Mismatch lorsqu il essaie de lancer la m thode L origine de cette erreur vient d un signal d fini dans Signal Details par exemple 250 nm avec une largeur de bande de 8 nm alors que dans la nouvelle m thode ces valeurs ont t r gl es sur 254 nm 12 nm par exemple Le tableau Signal Details contient toujours les informations initiales et le syst me cherche trai
78. e Non pr t indiqu en jaune Pr t indiqu en vert apr s un court d lai n cessaire pour atteindre les points de consigne Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 97 5 98 Guide de d marrage rapide Chargement de la m thode par d faut Le logiciel ChemStation dispose d une m thode par d faut appel DEF_LC M qui est charg e lors de la premi re mise en route ou lorsqu un nouveau mod le de m thode vierge est requis Celle ci comprend les param tres par d faut pour tous les modules Cette proc dure vous indique comment charger la m thode DEF_LC M Vous pouvez l utiliser pour r gler tous les param tres sur les valeurs par d faut ou pour obtenir un mod le de m thode vierge pour la mise en place d une nou velle m thode 1 Acc dez la vue Method and Run Control de ChemStation 2 Dans la barre de menus s lectionnez Method gt New Method et s lectionnez DEF_LC M dans le menu contextuel Sinon vous pouvez utiliser l ic ne Load Method Lg dans la barre de menus ou double cliquer sur le nom de m thode DEF_LC M dans l onglet M thodes du panneau de navigation Fie RunControl Instrument Method Sequence View Abort Help a Fl Methods rl PHENONES2 M Sequences DR Ed 0er 1c s Method and Run Control A j Method and Run Control Main Automation Controls SA C CHEM32121METHODS AU BATCH M 2 Single Sample mr
79. e de la pompe binaire 1290 Infinity ses caract ristiques techniques et ses performances sont donc les m mes Elle peut galement tre quip e de l accessoire de rin age actif des joints lorsque des solutions tampons concentr es sont utilis es pour rallonger la dur e de vie des joints de la pompe Un capteur de pression contr le la pression pendant l analyse avant que les solvants p n trent dans la vanne de s lection de flux 4 voies dont la fonction est polyvalente comme illustr dans les figures ci dessous La vanne polyva lente est quip e d un filtre en ligne utilis quelque soit l analyse d un m lan geur Jet Weaver de 380 uL qui peut tre install en option pour garantir un m lange optimal des solvants d un capillaire r ducteur facultatif et d une connexion vers le syst me d vacuation Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Le syst me CPL Agilent 1290 Infinity Description du produit 2 Composants du syst me Tableau 2 Fonctionnalit s de la vanne Pompe Pompe _ Agilent A Jet Weaver vacuation vacuation Filtre Filtre Figure 14 Configuration standard Figure 15 Configuration volume de m lange accru Pompe Pompe Agilent Jet Weaver Agilent Jet Weaver vacuation vacuation Filtre Filtre Figure 16 Fonction de purge automatique Figure 17 R trolavage du filtre en ligne Syst me CLP Agilent 1290 Infinity
80. e par la fente d entr e ouverture variable Le param tre par d faut pour la largeur de fente est 4 nm ce qui est appropri pour la majo rit des applications car il permet d obtenir une bonne performance globale Les caract ristiques de performance affect es sont la sensibilit la r solution spectrale et la lin arit Pour une longueur d ondes particuli re entrant dans le spectrographe sa lumi re tombera sur une petite bande de diodes dont la largeur est proportionnelle celle de la fente d entr e La description de la fente de 4 nm d crit ce comportement la lumi re tombe sur le nombre de diodes qui d tectent une bande passante de 4 nm Il s ensuit que la r solution optique minimum sera de 4 nm par cons quent la bande passante de la bar rette de diodes ou num rique devra tre param tr e sur 4 nm ou plus Pour obtenir une sensibilit optimale le r glage sur 8 nm permettra de laisser entrer plus de lumi re et r duira le bruit au maximum mais la r solution spectrale sera sa plus faible valeur Ce n est g n ralement pas un probl me avec les spectres UV car leurs bandes passantes naturelles sont habituellement sup rieures 25 nm sans aucune structure fine La bande passante optique de 8 nm r duit la gamme de lin arit par rapport une fente de 4 nm il est donc important qu une m thode valid e emploie la largeur de fente utilis e pour la validation Pour obtenir une r solution spectrale
81. e passante optimisation 63 longueur d ondes du signal 65 154 Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide M m thode ex cution plus rapide 109 injection unique 107 mise en place 105 modifier l ensemble de la m thode 123 par d faut 123 0 obstruction de la colonne 72 recommandations d utilisation 72 optimisation parvenir de hauts d bits 55 optimisation conditions de HPLC 12 largeur de fente 66 longueur d onde et bande passante 63 obtention d un effet m moire plus faible 70 obtention d une haute sensibilit 61 Obtention d une meilleure r solution 58 pr vention de l obstruction de la colonne 72 sensibilit du d tecteur 63 s paration chromatographique 12 utilisation des colonnes 61 volume de la pompe du m langeur 61 volumes d injection 53 P param tres de m thode 103 particules sub 2 microniques 15 plateaux th oriques 12 Pompe binaire description 28 purge de la pompe 90 rapport d finition 115 r duction automatique du volume mort 70 r solution 12 18 Optimisation 58 S s curit informations g n rales 118 symboles 120 sensibilit optimisation 61 signal int gration 113 solvants 121 Syst me CPL Agilent 1290 Infinity Composants du syst me 28 nouvelles fonctionnalit s 24 plage de puissance 24 syst me mise sous tension 97 T tableau d v nements d int gration temps de r ponse 68 trac en ligne configuration 100 vol
82. e pr vue On peut parvenir ceci gr ce au syst me CPL Agilent Infinity 1290 en raison du faible volume de retard du cir cuit de la pompe du faible volume du m langeur Jet Weaver et du faible volume du circuit de l chantillonneur automatique Volume hors colonne Le volume suppl mentaire de la colonne est une source de dispersion du pic qui r duira la r solution de la s paration il doit donc tre r duit Les colonnes d un plus petit diam tre requi rent proportionnellement de plus faibles volu mes suppl mentaires de la colonne afin de conserver la dispersion du pic un minimum Dans un chromatographe en phase liquide le volume suppl mentaire de la colonne d pendra des tuyaux de raccordement entre l chantillonneur auto matique la colonne et le d tecteur et galement du volume de la cuve circu lation dans le d tecteur Le syst me CPL Agilent Infinity 1290 r duit le volume suppl mentaire de la colonne gr ce aux tuyaux de petits diam tres 0 12 mm de diam tre int rieur aux changeurs de chaleur faible volume situ s dans le compartiment colonnes et la cuve de type cartouche Max Light situ e dans le d tecteur Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 43 3 Optimisation du syst me CPL Agilent 1290 Infinity Configuration d un volume de retard optimal Les Tableau 3 page 44 et Tableau 4 page 45 montrent les volumes de compo sant qui contr
83. e r tention du second pic param tre autrefois d nomm fac teur de capacit Le terme ayant la plus grande influence sur la r solution est la s lectivit a Dans la pratique on agit sur ce terme en changeant le type de phase station naire C18 C8 ph nyle nitrile etc la phase mobile et la temp rature afin de rechercher la s lectivit maximale entre les diff rents solut s s parer Cela repr sente un travail consid rable que l on effectue au mieux l aide d un sys t me de d veloppement automatis de m thodes Un tel syst me permet d va luer le comportement de diff rentes colonnes dans toute une gamme de conditions au moyen d un protocole exploratoire Ce chapitre s int resse l obtention de la r solution la plus lev e possible pour toutes les associations Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Optimisation du syst me CPL Agilent 1290 Infinity 3 de phases stationnaires et mobiles Si un syst me de d veloppement automati s des m thodes est utilis pour le choix des phases il est probable que des colonnes courtes soient utilis es pour acc l rer les analyses et chaque tape de l exploration L quation de la r solution fait appara tre que le terme le plus important est le nombre de plateaux ou l efficacit N Il peut tre optimis de bien des fa ons diff rentes N est inversement proportionnel la granulom trie et directe ment pr
84. enser l chauffement l int rieur de la colonne et restaurer la s paration Figure 9 page 20 en bas La pression a augment jusqu 1070 bar indi quant galement que la temp rature l int rieur de la colonne tait plus basse Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 19 1 20 Introduction la chromatographie en phase liquide ultra haute performance Echauffement par frottement 0 0 5 1 15 2 25 3 35 4 45 min B 32 C mAU 0 0 5 1 1 5 2 25 35 4 4 5 min Figure 9 Influence de l chauffement par frottement sur la s lectivit et effet de la r duction de la temp rature de la colonne En r sum l utilisation d un mat riau de remplissage sub 2 micronique per met d am liorer l efficacit et la r solution et d acc l rer les s parations Le syst me CPL Agilent 1290 Infinity et les colonnes RRHD augmentent l espace de s paration disponible et permettent d acc der ces avantages Les caract ristiques du syst me CPL 1290 Infinity sont d crites la section Le syst me CPL Agilent 1290 Infinity Description du produit page 28 et la section Optimisation du syst me CPL Agilent 1290 Infinity page 41 traite de la Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Introduction la chromatographie en phase liquide ultra haute performance 1 Echauffement par frottement mise en applicat
85. entionnel des changeurs de temp rature int gr s de 3 ul et de 6 ul sont galement dis ponibles Chaque TCC peut accueillir une commande de vanne interne pour faciliter les op rations de permutation entre diff rentes types d applications permuta tion entre deux colonnes r g n ration de colonne automatique pr paration d chantillons ou r trolavage de colonne Chaque t te de vanne est fournie sous la forme d un kit complet contenant tous les capillaires n cessaires des changeurs de temp rature faible dispersion suppl mentaires et d autres pi ces Les vannes d inversion sont d une facilit d utilisation exceptionnelle et offrent une grande flexibilit pour les raccordements sur simple pression l unit de commande de la vanne remplacement rapide se coulisse vers l avant permet tant un acc s facile voir Figure 19 page 38 gauche Les diff rentes t tes de vanne peuvent tre chang es par l utilisateur et positionn es sur le m canis me de commande en fonction du type d application souhait voir Figure 19 page 38 droite Une tiquette RFID identifie chaque t te de vanne 1 Ces sp cifications ont t valid es avec de l eau distill e une temp rature ambiante de 25 C un point de consigne de 40 C et une plage de d bit de 0 2 5 ml min Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 37 2 38 Le syst me CPL Agilent 1290 Infinity
86. eption du syst me CPL Agilent 1290 Infinity ont t modifi s de mani re radicale afin d atteindre cet objectif sans toutefois perdre la fiabilit et la qualit qui sont l origine de la r ussite des syst mes HPLC Agilent Ce syst me offre e Des d bits de 0 05 ml min 5 ml min pour des analyses chromatographi ques conventionnelles ou rapides avec toute colonne analytique de diam tre interne de 1 5 mm et tout type de mat riau de remplissage e Une plage de pression de jusqu 1200 bar gt 17400 psi permettant d utili ser un mat riau de remplissage sub 2 micronique pour r aliser des analyses chromatographiques rapides avec des colonnes courtes et d obtenir une r solution lev e avec des colonnes longues et ce avec un plus grand choix de viscosit s de la phase mobile e Des volumes de retard ultra faibles pour les gradients les plus rapides cou pl s une d tection par spectrom trie de masse ou spectrophotom trie UV visible e La possibilit d ex cuter toutes les m thodes transf r es partir d un autre syst me HPLC ou UHPLC analytique e Une commande de pompe sophistiqu e avec un bruit de fond chromatogra phique et un bruit acoustique tr s faibles permettant d am liorer simulta n ment les r sultats et l environnement de travail e Un d gazeur et un clapet de purge automatique int gr s au module de la pompe e Un chantillonneur automatique volume variable avec un volume de reta
87. es v nements param tres d int gration qui s appliquent tous les signaux acquis avec la m thode le tableau Specific Events For Signal contient les v nements qui s appliquent un type de d tecteur ou des signaux diff rents d un m me d tecteur Les param tres principaux de ce tableau sont Slope Sensitivity indique la pente et la courbure de la ligne de base qui d finissent le d but et la fin d un pic Peak Width il faut saisir la largeur mi hauteur du pic d int r t le plus troit Cela aide l int grateur distinguer entre le bruit et des pics tr s petits Area Reject Height Reject valeurs seuil d terminant l aire et la hauteur minimales n cessaire pour inclure un pic dans les r sultats Integration OFF ON annule l int gration entre des limites d finies Fonc tion presque toujours utilis e pour emp cher l int gration de la r gion entre l injection et le front de solvant ou le pic du marqueur non retenu Les lignes comme Integration OFF ON sont ajout es au tableau l aide des ic nes en haut de la fen tre Cliquez sur 0Kpour quitter et ouvrir l cran suivant du processus Modifier l ensemble de la m thode 144 Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Annexe 6 D finition du rapport Vous pouvez acc der directement l cran Specify Report par l interm diaire de la vue Method and Run Control en effectuant un clic droit
88. es d une dur e inf rieure 0 5 min possibles uni quement avec les syst me CPL binaire Agilent 1290 Infinity le volume de retard du syst me peut tre diminu facilement sans modifier physiquement la configuration du syst me Cette modification est appliqu e en changeant le comportement de l chantillonneur automatique Le volume de retard de 80 ul de l chantillonneur automatique Agilent 1290 Infinity est d au circuit hydraulique depuis la vanne d injection via le dispositif doseur l aiguille le si ge de l aiguille et les capillaires de connexion qui reviennent la vanne d injection voir la Figure 18 page 35 Lors de l injection la vanne passe de la voie principale la voie de d rivation afin que le dispositif doseur puisse aspirer l chantillon dans le capillaire de l aiguille L injection a lieu lorsque la vanne revient sur la voie principale et l chantillon est purg vers la colonne La vanne reste dans cette position pendant l analyse pour que l chantillonneur automatique soit purg en continu le gradient doit donc emprunter ce circuit volume de retard avant d atteindre la colonne Ce volume de retard peut donc tre limin en faisant passer la vanne d injection de la voie principale la voie de d rivation juste apr s l injection de l chan tillon et sa purge vers la colonne En pratique cette op ration peut tre r ali s e en quelques secondes apr s l injection en activant la fonction R
89. es des autres points de consigne de l cran Toutefois certains utilisateurs aiment voir l ensemble du tableau des v nements et entrent les valeurs pour le temps 0 00 min Cela ne pose pas de probl me mais il est noter que si les conditions initiales sont modifi es par la suite les nouvelles valeurs doivent tre entr es dans le tableau des v nements et les points de consigne modifi s dans la zone Solvants de l cran _ Show timetable graph affiche une version graphique de la variation des para m tres dans le temps si la case est coch e Stop Time indique la dur e totale pour la s paration ou l analyse Appel parfois Temps d ex cution par certains utilisateurs Il s agit de la dur e mesur e en minutes partir de l injection de l analyse Lorsque cette dur e est coul e l acquisition de donn es s arr te et le d bit la composition et les autres param tres du syst me reviennent leurs valeurs initiales pour la m thode Le syst me devient de nouveau disponible pour l injection sui vante Le temps d arr t doit toujours tre au moins aussi long que la derni re entr e du tableau des v nements car si ce n est pas le cas l analyse s arr te et le syst me revient aux conditions initiales avant que l ensemble des v nements aient pu tre effectu Le Stop Time peut tre r gl sur No Limit dans ce cas l utilisateur doit terminer manuellement l analyse M me si des temps d arr t peuvent
90. es entr es du tableau ne sont pas saisies par ordre chronologique elles sont tri es automatiquement en fonction du temps Les lignes du tableau des v nements peuvent tre modifi es directement et les boutons Cut Paste et Remove peuvent tre utili s s pour ajouter et supprimer des lignes Plusieurs lignes peuvent tre ajou t es pour cr er une s rie de segments de gradient lin aires et d finir le profil de gradient souhait Pour cr er un gradient simple pour l exemple de s paration effacez d abord tout le contenu du tableau l aide du bouton Clear all si celui ci contient des entr es puis ajoutez une ligne 4 00 min pour passer une composition de 90 L affichage graphique montrera un gradient lin aire de 50 de B 90 de B sur une dur e de 4 min Si vous souhaitez utiliser un gradient par paliers effectuez deux entr es avec les param tres avant palier et apr s palier s par s par 0 01 min Ce type de gradient est souvent utilis pour luer rapidement des pics r tention longue de la colonne vers la fin de l analyse en augmentant le solvant plus fort et ou le d bit l aide d un palier Par exemple le de B peut tre aug ment de 75 95 Il n est pas n cessaire d entrer les valeurs des para m tres pour le temps 0 00 min dans le tableau des v nements ces valeurs Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Annexe 6 sont r cup r
91. finity 1290 Infinity DAD DAD 1290 Infinity 1290 Infinity TCC TCC 1290 Infinity A Add Ajouter Add Chromatogram Output Ajouter sortie de chromatogramme Add to Method Ajouter la m thode Adjust Ajuster Advanced Avanc Advanced Analog Output Avanc Sortie analogique Advanced Autobalance Avanc Stabilisation automatique Advanced Auxiliary Avanc Param tres suppl mentaires Advanced High Throughput Avanc Haut d bit Advanced Lamps on required for analysis Avanc Lampes allum es requise pour l analyse Advanced Margin for Negative Absor bance Avanc Marge pour absorbance n gative Advanced Slit Avanc Fente Advanced Spectrum Avanc Spectre All Tous Apply Appliquer Apply to Method Appliquer la m thode Area Reject R jection d aire Area Reject Height Reject R jection d aire R jection de hauteur As Detector Cell Identique la cuve du d tecteur As Pump Identique la pompe Attenuation Att nuation Automatic delay volume reduction R duction du volume de retard auto matique Available Signals Signaux disponibles Balance Stabilisation Bandwidth Bande passante Based on Bas s sur Baseline Correction Correction de la ligne de base BinPump PompeBin C Calculate Calculs Calculation mode Module de calcul Calibration talonnage Cancel Annuler Change Solvent Composition Modifier la composition du solvant Change Modifier
92. fix Screen with calibrated peaks Eile Unique PDF file name Use Classic Reporting K Signal v Add fraction table and ticks Add summed peaks table Add compound custom fields O Do not report R eport Chromatogram output Portrait Landscape Multi page Landscape 1 Pages of pages 100 a Response Signal options ok Cancel Help Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 115 5 Guide de d marrage rapide Analyse des donn es Specify Report Instrument 1 Reporting settings Quantitation settings Calculation mode Calculate v Based on ISTD correction E Use multiplier and dilution factor with ISTDs Calculation factors Use sample data Compound ISTD Amount Amount Multiplier Dilution OK Cancel Help 2 A l aide des exemples de param tres montr s dans les figures ci dessus vous pouvez faire afficher un rapport en pourcentage d aire l cran 3 Dans la section Destination s lectionnez Printer pour imprimer une version papier ou File puis PDF pour obtenir un fichier de rapport en format PDF enregistr dans le fichier de donn es Le fichier de donn es avec le suffixe D est en r alit un r pertoire Le fichier de rapport peut tre vis
93. git sur le bruit de la ligne de base et la sensibilit La valeur par d faut est de 4 nm ce qui convient la plupart des applications Reportez vous la sec tion Comment obtenir une sensibilit plus lev e page 61 pour une des cription plus d taill e de ce param tre Advanced Autobalance r gle le niveau d absorbance sur z ro pour toutes les longueurs d onde c d tous les points du spectre sont stabilis s sur z ro le signal de la ligne de base est donc galement r gl sur z ro L option Prerun est s lectionn e pour stabiliser avant le d but de l analyse il s agit du choix habituel dans des situations normales Parfois l option Postrun peut tre s lectionn e pour stabiliser la fin de l analyse apr s coulement du Temps post analyse Par exemple si le signal pr sente toujours une d ri ve n gative et que l utilisateur souhaite finir l analyse avec une absorbance sur z ro cette option permet de ramener l absorbance sur le niveau z ro pour l analyse suivante Cela ne modifie pas r trospectivement l analyse la fin de laquelle la stabilisation est ex cut e Advanced Lamps on required for analysis le DAD ou MWD 1290 Infinity dis pose d une lampe deut rium qui doit tre allum e pour l analyse cette case doit donc tre coch e Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 139 Onglet Instrument Curves K HiP ALS L HiP ALS Injector
94. gram Setup Method Q HIP ALS Injector Program Dj BinPump eg TCC 7 DAD X Instrument Curves Parameter Draw default volume from sample with default speed using default offset ppend Insert 1 Delete Clear all Move up Cut Copy Paste Move down Figure 38 cran de configuration de m thode onglet Programme d injection de l chantillonneur automatique HiP Cet onglet permet de cr er des programmes d injection sp cifiques compre nant la manipulation d aliquots partir de flacons multiples comme par exemple lors de la d rivatisation pr colonne Des r actifs chimiques sont alors m lang s automatiquement avec l chantillon pour am liorer sa d tec tion ou la sensibilit Un exemple courant est la d rivatisation d acides amin s avec les r actifs OPA et FMOC Pour de plus amples informations consultez le manuel de l chantillonneur automatique Agilent 1290 Infinity 130 Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Annexe 6 Configuration d une m thode l aide de la fonction Edit Entire Method Onglet de la pompe binaire BinPump Setup Method Qa HiP LS Injector Program Timetable 0 000 mL min Time Function Parameter Solvents Stoptime Posttime NoLimit Pressure Limits Min E 400 00 bar Figure 39 cran de configuration de m thode onglet Pompe binaire Flow per
95. ibles consultez la section de l Annexe Configuration d une m thode l aide de la fonction Edit Entire Method page 123 La m thode par d faut DEF_LC M a t charg e pour la pr paration de la nouvelle m thode Maintenant vous pouvez modifier les param tres cl s pour cr er la nouvelle m thode Pour l exemple de s paration d crit ici utilisez les r glages des conditions du Tableau 9 page 104 1 Pour acc der rapidement la fen tre Method pour chaque module effectuez un clic droit sur le module dans le sch ma du syst me et s lectionnez Method dans le menu contextuel Vous pouvez configurer chaque module de cette mani re 2 Effectuez un clic droit sur la zone de la pompe puis s lectionnez Method dans le menu contextuel a Dans la fen tre Method pour la 1290 Infinity Binary Pump entrez les param tres suivants D bit 0 4 ml min Solvant A S lectionnez Water dans la liste d roulante Compressibili t Solvant B Cochez la case pour activer le solvant B B Valeur initiale 40 Temps d arr t 5 min Limite de pression maximum 1200 bar b Cliquez sur le symbole pour ouvrir le Timetable c Ajoutez une ligne s lectionnez Change Solvent Composition puis r glez B sur 80 d Les autres param tres peuvent conserver leurs r glages par d faut Cli quez sur 0K pour quitter la fen tre Les modifications sont transmises au module de la pompe 3 Effectuez un clic droit sur la
96. ibuent au volume de retard dans le syst me CPL Agilent 1290 Infinity Dans la configuration standard avec la pompe binaire Agilent 1290 Infinity le m langeur Jet Weaver l chantillonneur automatique 1290 Infinity et le compartiment colonnes thermostat le volume de retard du syst me est d environ 125 ul Ce volume de retard standard convient pour la plupart des applications Par exemple une s paration rapide sur une colonne de 50 mm x2 1 mm mm remplie avec des particules sub 2 microniques un d bit mod r de 0 6 ml min aboutira un retard de gradient typique d environ 0 2 min ce qui est g n ralement acceptable pour des dur es de gradient de deux trois minutes voir le Tableau 6 page 46 Il est souvent utile de consi d rer le d bit en termes de volumes de colonne Par exemple pour la colonne du Tableau 7 page 46 avec un d bit de 0 6 ml min environ six volumes de la colonne circulent dans le syst me par minute et le volume de retard repr sen te environ 1 2 fois le volume de la colonne Une configuration comprenant la pompe quaternaire Agilent 1290 Infinity l chantillonneur automatique 1290 Infinity et le compartiment colonne thermostat a un volume de retard de 430 uL et donc un retard de 0 7 min Ces valeurs correspondent au seuil d acceptabilit pour des gradients d une dur e de 3 min Tableau 3 Volumes de retard des modules CPL 1290 Infinity Composants Volume de retard pl Pompe binaire 10
97. ide de r f rence rapide Annexe 6 Les points d acc s dans la proc dure op rationnelle de la m thode sont Pre Run Command Macro e Customized Data Analysis Macro Post Run Command Macro Save Method with Data permet d enregistrer une copie de la m thode dans le fichier de donn es sous le nom RUN M Avec la configuration habituelle du logiciel ChemStation il n est pas n cessaire d utiliser cette option car ce der nier enregistre syst matiquement la m thode dans le fichier de donn es tou tes les versions sup rieures B 02 01 Cette option n est utile que si le logiciel ChemStation a t configur pour que l option Unique Sequence Folder Creation soit d sactiv e dans ce cas de figure les m thodes ne sont pas enregistr es syst matiquement dans le fichier de donn es Puisque cet cran est le dernier du processus en cliquant sur OK vous quitte rez en m me temps la Run Time Checklist et le processus Edit Entire Method Vous devez maintenant enregistrer la m thode dans le r pertoire principal des m thodes par d faut C Chem32 1 Methods l aide du menu Fichier gt Enregis trer sous gt M thode ou du menu M thode gt Enregistrer la m thode sous Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 149 Glossaire d IU Glossaire d IU 1 1290 Infinity Autosampler chantillonneur automatique 1290 Infi nity 1290 Infinity Binary Pump Pompe binaire 1290 In
98. ignals Selected Signals PMP1B BinPump Pressure PMP1C BinPump Flow PMP1D BinPump Solvent Ratio A PMP1E BinPump Solvent RatioB HM1A TCC Left Temperature MIE TEC Right Temperature PEER 3 D Signal B _ lt Remove DAD1C DAD Signal C me r Window x axis 3 4 min DAD14 DAD Signal Type acquired y axis range 100 Amau D auto y adjust offset 10 H Method Settings F Use method settings Apply to Method OK Cancel Help draw zero line Fraction Collector action collection ticks 100 Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Guide de d marrage rapide 5 3 Dans la liste Available Signals s lectionnez les signaux n cessaires puis cli quez sur Add pour les d placer vers la liste Selected Signals 4 Pour r gler les param tres individuels pour chaque signal s lectionnez le signal dans la liste Selected Signal et r glez les valeurs souhait es dans la partie inf rieure de la fen tre En plus des signaux provenant des d tecteurs vous pouvez afficher les trac s de param tres tels que la temp rature et la pression l aide du bouton Apply to Method vous pouvez enregistrer les param tres de cette fen tre dans la m thode La fen tre Online Plot se comporte comme du papier graphique lectronique et enregistre en continu la sortie du ou des d tecteurs ainsi q
99. ilit lev e avec une faible dispersion une plage lin aire tendue et une ligne de base tr s stable pour les applications CPL standard ou ultra rapides La cuve de type cartou che Agilent Max Light augmente de mani re importante la transmission de la lumi re selon le principe de r flexion interne totale le long d un capillaire en verre de silice non recouvert Un nouveau niveau de sensibilit est ainsi atteint sans perdre en r solution en raison d effets de dispersion de la cuve Ce for mat r duit au minimum les variations de la ligne de base provoqu es par l indice de r fraction ou des effets thermiques et permet une int gration plus fiable de l aire des pics Miroir R seau Guides d ondes optofluidique D Lampe deut rium Cuve de type cartouche Max Light R Fente programmable Barrette de diodes 1024 l ments Figure 20 Faisceau lumineux du d tecteur barrette de diodes 1290 Infinity Ce module comprend aussi une r gulation de la temp rature lectronique pour am liorer encore la r sistance aux effets dus des variations de la tem p rature ambiante Bien que le volume hydraulique de la cuve de type cartou che Max Light soit tr s petit la longueur du trajet est standard soit 10 mm Toutefois pour des sensibilit s encore sup rieures la cuve Agilent Max Light haute sensibilit est disponible avec une longueur du trajet de 60 mm Les cuves peuvent tre remplac es ais ment en les fai
100. imis s en choisissant une longueur et un Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 13 1 14 Introduction la chromatographie en phase liquide ultra haute performance diam tre de colonne appropri s rendant l utilisation des colonnes STM encore plus facile qu avant De nombreux laboratoires r alisent un processus de s lection approfondi pour d finir la meilleure combinaison de phase stationnaire de phase mobile et la temp rature optimale pour leurs s parations chromatographiques Avec les syst mes de s rie 1200 et CPL 1290 Infinity Agilent propose des solutions de d veloppement de m thodes Ces solutions permettent d automatiser l int gra lit de ce processus de s lection tr s long ce qui facilite et rend plus fiable le d veloppement ou le transfert de m thodes chromatographiques Les colonnes ZORBAX RRHD et RRHT de 1 8 um ont les m mes propri t s chimiques que les colonnes ZORBAX avec des particules de 3 5 et 5 um En cons quence pour toute phase ZORBAX donn e la s lectivit des particules de 5 0 3 5 et 1 8 um est identique permettant ainsi un transfert de m thodes bidirectionnel ais rapide et s curis entre la CPL conventionnelle l UHPLC et la CPL pr parative Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Introduction la chromatographie en phase liquide ultra haute performance 1 Avantages des colonne
101. inition du rapport 152 Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Spectrum Store Enregistrement des spectres Standard Data Analysis Analyse de donn es standard Standard injection Injection standard Start Single Sample D marrer l chantillon unique Step Pas Stop Time Temps d arr t Stop Time Post Time Temps d arr t Temps post analyse Store Enregistrer Subdirectory sous r pertoire Switch module name on Allumer le nom du module System On Off Syst me Marche arr t T Temperature Temp rature Threshold Seuil Time Dur e Timetable Tableau des v nements U Unique PDF file name Nom fichier PDF unique Unique Sequence Folder Creation S quence unique de cr ation de dos sier Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Use Signal Utiliser le signal V Vial Well bottom sensing D tection du fond de flacon puits wW Wash Vial Flacon de lavage Water Eau Wavelength Longueur d onde Z Zero Offset D calage z ro Glossaire d IU 153 Index Index A Agilent sur Internet 122 algues 121 analyse donn es 111 bande passante 65 C calculateur co ts 15 chargement par d faut 98 chromatographie en phase liquide utilisation de particules plus fines 8 classe de s curit 118 colonne temp rature 19 thermostatisation 19 colonnes particules sub 2 microniques 15 Compartime
102. inity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 89 4 Configuration et installation du syst me Purge de la pompe AVERTISSEMENT La proc dure de purge d crite est celle de la pompe binaire 1290 Infinity Elle peut tre r alis e de la m me mani re pour la pompe quaternaire 1290 Infi nity e Apr s que la pompe a t amorc e pour la premi re fois e Lorsque la pompe doit tre purg e avec du solvant frais avant d utiliser le syst me ou lorsque le solvant doit tre remplac par un autre solvant e Si la pompe n a pas t utilis e depuis plusieurs heures de l air peut avoir diffus le long des tuyaux de solvant et la purge est recommand e e En cas de remplissage des r servoirs solvant la pompe doit tre purg e pour distribuer le solvant frais dans le syst me Si un solvant diff rent va tre utilis assurez vous que le nouveau solvant est miscible avec le solvant pr c dent Si ce n est pas le cas effectuez une tape interm diaire avec un solvant co miscible l isopropanol est souvent un bon solvant interm diaire consultez le tableau de miscibilit des solvants Les tuyaux d entr e de la pompe doivent d j tre remplis de solvant Si les tuyaux d entr e de la pompe sont partiellement ou totalement secs proc dez un amor age complet voir Amor age de la pompe page 88 Le clapet de purge permet de connecter les deux t tes de pompe l vacuation en m me temps et de
103. ion L exp rience permet de savoir si c est en bien ou en mal Comme le d bit et la pression sont aug ment s il faut tenir compte que l chauffement d aux frictions l int rieur de la colonne augmente et que cela peut entra ner une augmentation notable de la dispersion et le cas ch ant un l ger changement de s lectivit qui pour raient tous deux entra ner une perte de r solution Cette derni re ventualit peut tre combattue en r duisant la temp rature du thermostat de quelques degr s Une nouvelle analyse permettra alors de trancher La courbe de van Deemter indique que le d bit optimal dans une colonne STM est plus lev pour les particules les granulom tries les plus lev s On notera que la pente de la courbe reste faible au del du d bit optimal En g n ral pour les colonnes STM les d bits utilis s proches de l optimum sont 2 ml min pour un d i de colonne de 4 6 mm et 0 4 ml min pour un d i de colonne de 2 1 mm Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 59 3 60 Optimisation du syst me CPL Agilent 1290 Infinity Dans les s parations isocratiques l augmentation du facteur de r tention k entra ne une augmentation de la r solution car les solut s sont retenus plus longtemps Dans les s parations en gradient k repr sente la r tension dans l quation suivante ue fa F 100 A B V S m avec k valeur moyenne de k
104. ion de r duction automatique du volume de retard ADVR permet de raccourcir la dur e des cycles et la distribution du gradient vers la colonne Le syst me aspire le volume exact de solution d chantillon d fini sans d chets et atteint une reproductibilit lev e sur toute la plage allant d un volume d injec tion inf rieur au microlitre un maximum de 40 ul Le capillaire d injection standard permet des injections d un volume allant jusqu 20 ul 1 Vanne en position de voie principale circulation 2 Vanne en position de d rivation aspiration d chantillon Peristaltic ump 3 Vanne en position de d rivation aiguille de lavage 4 Vanne en position de voie principale chantillon inject Figure 18 Sch ma des tapes d injection pour l chantillonneur automatique 1290 Infi nity Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 35 2 36 Le syst me CPL Agilent 1290 Infinity Description du produit Un module facultatif compl mentaire tout neuf le Flexible Cube s int gre l chantillonneur automatique de mani re transparente pour offrir des fonc tions suppl mentaires En cas d ajout du nouveau module Flexible Cube qui inclut une pompe seringue de 500 ul il devient possible d installer en option une vanne basse pression et deux vannes d inversion haute pression Par exemple le syst me d injection coulement continu peut tre remplac par une boucle
105. ion des donn es th oriques et de l utilisation de ces caract ristiques pour d velopper des s parations optimis es Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 21 1 22 Introduction la chromatographie en phase liquide ultra haute performance chauffement par frottement Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 000 6e 2 Le syst me CPL Agilent 1290 Infinity e ee Description du produit Nouvelles fonctionnalit s du syst me CPL Agilent 1290 Infinity 24 Composants du syst me 28 Ce chapitre pr sente les caract ristiques du syst me CPL 1290 Infinity Agg Agilent Technologies 23 2 Le syst me CPL Agilent 1290 Infinity Description du produit Nouvelles fonctionnalit s du syst me CPL Agilent 1290 Infinity 24 Le syst me CPL Agilent 1290 Infinity a t con u pour apporter la plus grande flexibilit pour l analyse par chromatographie en phase liquide l aide de tou tes les technologies de colonnes actuelles et mergentes Le syst me CPL 1290 Infinity propose la plage la plus tendue de param tres de fonctionnement il peut donc reproduire tous les param tres des m thodes transf r s partir de tout syst me analytique HPLC ou UHPLC existant actuellement disponible sur le march Certains aspects de la conc
106. ionn directement dans ChemStation Il est galement accessible dans le r pertoi re en utilisant l explorateur de fichiers normal de Windows 4 Sauvegardez nouveau la m thode pour vous assurer que les param tres des rapports sont enregistr s pour les prochaines utilisations de la m tho de la prochaine utilisation de la m thode ces v nements d int gration et ces param tres de rapport serviront tablir le rapport Cette section vient compl ter le bref description des fonctionnalit s d Analyse des donn es du logiciel ChemStation Vous pouvez consulter les manuels du logiciel ChemStation ainsi que le syst me d aide en ligne pour plus de rensei gnements concernant les fonctionnalit s performantes du logiciel ChemSta tion 116 Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 6 Annexe Informations relatives la s curit 118 Informations sur les solvants 121 Agilent Technologies sur Internet 122 Configuration d une m thode l aide de la fonction Edit Entire Method 123 Informations sur la m thode 125 Instrument Acquisition 126 Analyse des donn es 141 Liste de contr le de l ex cution 148 Ce chapitre apporte des informations compl mentaires concernant la s curit les aspects juridiques l Internet et la configuration d une m thode che Agilent Technologies 117
107. iquement toutes les applications mais lorsque le TFA est utilis en phase mobile ou dans d autres circonstances exigeant davantage de m lange le c t du plus grand volume du m langeur Jet Weaver doit tre utilis pour diminuer le bruit de m lange Colonnes La sensibilit tant sp cifi e sous forme de rapport signal bruit S N il est n cessaire d optimiser la hauteur de pics et de diminuer le bruit de la ligne de base Toute r duction de la dispersion des pics contribue maintenir leur hau teur Par cons quent le volume de colonne suppl mentaire doit tre diminu en utilisant un faible diam tre int rieur des capillaires de raccordement et des raccords correctement install s L utilisation de colonnes de plus faible diam tre doit produire des hauteurs de pics sup rieures et convient donc Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 61 3 Optimisation du syst me CPL Agilent 1290 Infinity id alement aux applications avec un nombre limit d chantillons Si la m me quantit d chantillon peut tre inject e dans une colonne de plus faible dia m tre int rieur la dilution due ce m me diam tre est moindre et la sensibili t augment e Par exemple diminuer le diam tre int rieur de la colonne de 4 6 mm 2 1 mm produit un gain th orique de hauteur de pics de 4 7 times gr ce une moindre dilution dans la colonne Dans le cas d un d tecteur de spectrom t
108. l comprend un ensemble complet d informa tions et de documentation pour l utilisateur un jeu de calculateurs et d outils pour faciliter la configuration l talonnage et la maintenance de votre instru ment ainsi que des tests et des proc dures de diagnostic pour v rifier son bon fonctionnement Le logiciel Agilent Lab Advisor propose galement des infor mations et des solutions pour les ventuels erreurs d instrument qui pour raient survenir Le logiciel fonctionne avec ou sans les syst mes de donn es Agilent Le logiciel surveille e l tat du module CPL e la maintenance pr dictive pour indiquer la n cessit d une mise niveau ou du remplacement d une pi ce Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Configuration et installation du syst me 4 Inet tin r P R Installation du logicie De surcro t le logiciel e automatise diff rents tests utiles e tente d identifier les instruments du r seau local qui sont sous tension et connect s votre PC ou au r seau de votre laboratoire e sugg re automatiquement le remplacement des pi ces et les t ches de d pannage pour r soudre certains probl mes courants de l instrument Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 77 4 Configuration et installation du syst me Installation du module 78 Pour des informations d taill es relatives aux proc dures d installati
109. le un pouvoir de s paration accru apporte une plus grande confiance dans les r sultats analytiques 35 amp Capacit de pic 694 N Sz CPL avec une r solution de CPG W hd y A e n 5 10 15 20 25 30 35 40 Temps min _ o1 Absorbance mDO S _ ee Figure 8 Une capacit de pics de plus de 700 peut tre atteinte avec une colonne ZOR BAX RRHT SB C18 2 1 x 150 mm 1 8 um pour l analyse de BSA dig r e par la trypsine 18 Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Introduction la chromatographie en phase liquide ultra haute performance 1 chauffement par frottement Faire progresser une phase mobile travers une colonne des pressions et d bits plus lev s g n re de la chaleur Les gradients de temp rature ainsi cr s radial et longitudinal peuvent influencer l efficacit de la colonne Power F p o F est le d bit et p est la pression Des dispositifs de thermostatisation puissants par exemple l immersion de la colonne dans un bain marie g n rent un fort gradient de temp rature radial ce qui conduit une baisse signicative de l efficacit de la colonne La ther mostatisation de la colonne l air non ventil r duit le gradient de temp ratu re radial et donc la baisse d efficacit mais la temp rature de sortie de la colonne s en trouve augment e
110. les pourcentages de A et de B d finissent la composition d une m thode isocratique ou les conditions de d part d une m thode gradient et les conditions d quilibra ge entre deux analyses gradient Seule la valeur de B est saisie la valeur de A est actualis e pour afficher 100 moins B d s que le curseur est d plac Pour l exemple de s paration r glez A sur Eau et B sur M thanol 50 A sera de 50 Timetable d crit les variations de la composition de A et de B en pourcen tage dans la phase mobile au cours de l analyse et le cas ch ant les varia tions du d bit et la pression maximum autoris e Le tableau des v nements permet de faire varier de mani re lin aire les param tres entre des points de consigne d termin s Les valeurs des param tres d finies ailleurs sur cet cran sont utilis es comme conditions de d part et sont modifi es par la suite seulement si des valeurs sont entr es dans le tableau des v nements Par exemple si le d bit doit rester constant durant une analyse alors il n est pas n cessaire de entrer des valeurs de d bit dans le tableau des v nements Pour entrer des valeurs dans le tableau des v ne ments cliquez sur le bouton Add pour ajouter une ligne au tableau entrez le temps du point de consigne s lectionnez le type d entr e dans la liste d roulante composition d bit pression et cliquez sur la zone parameter pour afficher le champ de saisie de la valeur Si l
111. lvant et ses tubulures doi vent tre r guli rement rinc s pour obtenir l effet m moire le plus faible Par exemple amorcez la pompe de rin age avec le solvant appropri pendant trois minutes chaque jour avant d utiliser le syst me Lorsque les autres m thodes ont chou pour liminer l effet m moire il est possible que l analyte soit coll l int rieur de la vanne d injecteur La vanne d injecteur peut tre r gl e de fa on ex cuter des mouvements de commuta tion suppl mentaires pour nettoyer le circuit dans la vanne si des probl mes d effet m moire se posent Si l lution des compos s probl matiques n cessite un fort pourcentage de phase organique il est conseill de commuter la vanne d injection sur un haut pourcentage de phase organique apr s lution du der nier pic Il est galement conseill de commuter nouveau la vanne d injection une fois les conditions initiales de la phase mobile stabilis es Ainsi la rainure de d rivation dans le joint de rotor de la vanne pr sente les conditions de d part du gradient aspect particuli rement important pour les d bits inf rieurs 0 5 ml min Avec les chantillons pour lesquels l ext rieur de l aiguille ne peut pas tre net toy suffisamment avec de l eau ou de l alcool provenant de la pompe de rin a ge utilisez des flacons de rin age contenant un solvant appropri Avec un programme d injection il est possible d utiliser plusieurs flacons pour
112. masse triple quadrip le Les r glages fonctionnels de l chantillonneur automatique permettent de d finir les para m tres appropri s afin de diminuer l effet m moire dans toutes les applica tions impliquant des compos s susceptibles de coller dans le syst me Les fonctions suivantes de l chantillonneur automatique peuvent contribuer diminuer l effet m moire Rin age interne de l aiguille Rin age externe de l aiguille e R trobalayage du si ge de l aiguille e Nettoyage de la vanne d injection Le circuit int rieur de l aiguille compris est continuellement rinc en fonc tionnement normal assurant l limination ad quate de l effet m moire dans la plupart des cas La r duction automatique du volume mort ADVR diminue ce dernier mais aussi le rin age de l chantillonneur automatique elle ne doit pas tre utilis e avec des analytes susceptibles de poser un probl me d effet m moire L ext rieur de l aiguille peut tre rinc l aide d un flacon de rin age situ un emplacement sp cifique ou en utilisant l orifice de rin age Lorsque vous utili sez un flacon de rin age situ un emplacement de votre choix ce flacon doit tre exempt de septum et contenir un solvant convenant au rin age de l chan tillon de l aiguille L absence de septum vite la contamination par essuyage de l aiguille en aval pour le r appliquer lors de sa course ascendante L aiguille peut tre plong e dans
113. me CPL Agilent 1290 Infinity 3 Tableau 8 Largeur de pic Temps de r ponse D bit de donn es Largeur de pic mi hauteur mn R ponse s D bit des donn es du signal Hz lt 0 0015625 0 015625 160 gt 0 0015625 0 03125 160 gt 0 003125 0 0625 80 gt 0 00625 0 125 40 gt 0 0125 0 25 20 gt 0 025 0 5 10 gt 0 05 1 0 5 gt 0 10 2 0 2 5 gt 0 20 4 0 1 25 gt 0 40 8 0 0 625 gt 0 85 16 0 0 3125 1 Les valeurs peuvent tre arrondies dans l interface utilisateur Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 69 3 Optimisation du syst me CPL Agilent 1290 Infinity Comment minimiser le transfert 70 L effet m moire est mesur lorsque des pics r siduels issus d une injection pr c dente contenant des actifs apparaissent dans l injection suivante avec un solvant neutre L effet m moire entre injections actives peut conduire des r sultats erron s Le niveau d effet m moire est report en termes de zone de pic dans la solution neutre exprim en pourcentage de la zone dans l injection active pr c dente L chantillonneur automatique Agilent 1290 Infinity est optimis pour produire un faible effet m moire gr ce la conception tudi e du circuit et l utilisation de mat riaux qui minimisent l adsorption de l chan tillon Une valeur d effet m moire de 0 002 doit tre r alisable m me lors que le d tecteur est un spectrom tre de
114. met de r gler un d bit de jusqu 5 ml min Pour l exemple de s paration un d bit de 0 4 ml min est utilis Si la contre pression atteint transitoirement la valeur de pression maximale d finie le d bit est diminu pendant quelques secondes Cependant si la pression est limit e de cette mani re plus longuement une situation d erreur est g n r e et le d bit est arr t Solvents indique les phases mobiles disponibles et la composition en pour centage du m lange pomp dans les deux voies A et B Pour chaque voie un menu d roulant permet de s lectionner un solvant dans la liste pour opti miser les param tres de compressibilit utilis s par la commande de pompe Cela permet d optimiser la circulation des liquides comme d crit dans la section Configuration d un volume de retard optimal page 44 Une deuxi me zone de texte permet de saisir une description de la phase mobile Si une vanne de s lection de solvant est install e sur la pompe il existe deux possibilit s de solvant pour chaque voie l option appropri e Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 131 132 Annexe pour la m thode est s lectionn e l aide du bouton radio gauche de la description du solvant La pompe g n re des m langes binaires partir des voies A et B s lectionn es par exemple A2 et B1 il n est pas possible de m langer A1 et A2 ou B1 et B2 Les valeurs indiqu es pour
115. mpartiment colonnes chantillonneur automatique Pompe Figure 29 Configuration de pile recommand e pour le syst me 1290 Infinity avec pompe quaternaire vue avant 84 Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Configuration et installation du syst me 4 LAN vers logiciel de commande o D gt zZ D 2 o o ao c D 2 Li 5 H pour Instant Pilot Signal analogique du d tecteur en option d 000 f il ij D D Pe See S See mo AU Alimentation lectrique C ble de bus CAN OSS0000
116. n ou l ic ne de la t che Edit Integration Events Single Runs PHENONES a Calibretion Au Signal PL u LS T4 Report Short ES ds DADI A Sig 242 ONE MI 008 0 el h SEn BES Em E Ee Method Manual Events I Initial Events For AII Signals Integration Events Value Tangent Skim Mode Standard Tail Peak Skim Height Ratio 0 00 Front Peak Skim Height Ratio 0 00 Skim Valley Ratio 20 00 Baseline Correction Classical Specific Events For Signal DAD Default Bi Time Integration Events Value Initial Slope Sensitivity 5 Initial Peak width 0 05 Initial Area Reject 5 Initial Height Reject 1 Initial Shoulders OFF Figure 44 cran Modification des v nements d int gration L int gration l talonnage et la cr ation de rapports constituent la partie d analyse des donn es de la m thode Les param tres d int gration et le tableau d talonnage sont plus faciles configurer une fois que les donn es ont t acquises et peuvent tre examin es dans la vue Analyse des donn es Les v nements d int gration peuvent tre optimis s ce moment l et les r glages par d faut sont souvent utilis s pour les premi res acquisitions Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 143 6 Annexe L cran Edit Integration Events comprend deux tableaux le tableau Initial Events For All Signals contient l
117. n cliquez sur OK et lorsque vous tes pr t cliquez sur le bouton Start Single Sample au dessus du sch ma du syst me 6 L injection est r alis e et le chromatogramme appara t dans la fen tre Online Plot L acquisition de donn es se termine lorsque le Stop Time est atteint Le chromatogramme doit tre similaire celui de la Figure 33 page 109 toutefois la dur e de l analyse sera plus longue axe des abscisses car l ana lyse de la figure a t r alis e avec les conditions de la section suivante savoir quatre fois plus rapides 108 Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Guide de d marrage rapide 5 Ex cution plus rapide de la m thode Dans l exemple pr c dent la pression tait celle d un syst me standard Main tenant le d bit peut tre augment et le gradient ajust pour obtenir une s pa ration plus rapide 1 Modifiez les conditions de m thode de la m me mani re que dans la section pr c dente et r glez les param tres suivants D bit 1 6 ml min Gradient modifiez le gradient afin que la pente du gradient reste inchang e par rapport la premi re analyse pour ce qui est du volume Le d bit doit tre multipli par 4 il faut donc diviser la dur e du gradient par 4 R glez la dur e du gradient sur 1 min Temps d arr t 1 25 min 2 Sauvegardez la m thode sous un nouveau nom 3 Assurez vous qu un nouveau nom de fichier est utilis
118. n trop rapide du solvant peut r duire la reproductibilit On peut faire ici des gains marginaux car les volumes d chantillon utilis s tendent se diriger vers la plus petite extr mit de la plage dans tous les cas Une partie significa tive du temps d injection est le temps pris par les mouvements de l aiguille vers et depuis le flacon et vers le port de rin age Ces manipulations peuvent tre ex cut es pendant l analyse de la s paration pr c dente C est ce que l on appelle le chevauchement d injections qui peut tre facilement activ depuis l cran des r glages de l chantillonneur automatique dans le logiciel de commande de la ChemStation On peut ordonner l chantillonneur auto matique de diriger le circuit vers l chantillonneur automatique d vier apr s que l injection ait t effectu e puis apr s par exemple 3 minutes dans une analyse de 4 minutes de d marrer le processus d aspiration de l chantillon suivant et de pr paration pour l injection Ceci peut g n ralement permettre de gagner de 0 5 1 minute par injection Pour ce qui concerne les composants collants il est recommand de proc der ceci pendant la stabilisation de la colonne apr s que l chantillonneur automatique ait vu les conditions de d marrage de la prochaine analyse de gradient L tape de stabilisation de la colonne peut repr senter une partie significative de la dur e du cycle En g n ral
119. ne alternative aux mat riaux STM pour des s parations hautement efficaces La plage de d bit permet de choisir le diam tre de colonne la plus appropri que ce soit de 2 mm pour les applications faible d bit n cessaires certains sys t mes MS ou d un diam tre interne de jusqu 5 mm typiquement 4 6 mm pour des CPL plus traditionnelles ou capacit de charge accrue L tendue de la plage de d bit est aussi en accord avec de r cents travaux de recherche qui ont d montr qu il tait avantageux d utiliser un d bit maximum pour aug menter l efficacit des s parations par gradient Voir Petersson et al J Sep Sci 31 2346 2357 2008 Maximizing peak capacity and separation speed in liquid chromatography Le nouveau d tecteur barrette de diodes propose une sensibilit am lior e associ e des caract ristiques de ligne de base exceptionnelles et une facilit d utilisation en raison de la conception innovante de sa cuve Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Le syst me CPL Agilent 1290 Infinity Description du produit 2 L chantillonneur automatique fonctionne selon le principe d coulement en continu bien tabli d Agilent qui permet une injection volume variable asso ci e un faible transfert l ensemble a t revu et am lior pour supporter des applications pressions plus lev es et volumes plus faibles Un tout nou veau module le Fle
120. nes pour la chromatographie en phase liquide 8 Avantages des colonnes contenant des particules sub 2 microniques 15 chauffement par frottement 19 Le syst me CPL Agilent 1290 Infinity Description du produit 23 Nouvelles fonctionnalit s du syst me CPL Agilent 1290 Infinity 24 Composants du syst me 28 Optimisation du syst me CPL Agilent 1290 Infinity 41 Volume de retard et volume hors colonne 42 Configuration d un volume de retard optimal 44 Comment augmenter le volume d injection 53 Comment am liorer la capacit d analyse 55 Comment am liorer la r solution 58 Comment am liorer la sensibilit 61 Comment minimiser le transfert 70 Comment emp cher les obstructions de colonne 72 Configuration et installation du syst me 75 Installation du logiciel 76 Installation du module 78 Guide de d marrage rapide 95 propos du guide de d marrage rapide 96 Pr paration du syst me 97 Acquisition de donn es dans la vue Contr le de m thode et d analyse 103 Analyse des donn es 111 Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Sommaire 6 Annexe 117 Informations relatives la s curit 118 Informations sur les solvants 121 Agilent Technologies sur Internet 122 Configuration d une m thode l aide de la fonction Edit Entire Method 123 Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Sommaire 6 Syst me CLP Agilent 1290 Infi
121. nity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 1 Introduction la chromatographie en phase liquide ultra haute performance Th orie de l utilisation de particules plus fines pour la chromatographie en phase liquide 8 Avantages des colonnes contenant des particules sub 2 microniques 15 chauffement par frottement 19 Ce chapitre pr sente le syst me CPL Agilent 1290 Infinity et ses principes de fonctionnement che Agilent Technologies 7 1 Introduction la chromatographie en phase liquide ultra haute performance Th orie de l utilisation de particules plus fines pour la chromatographie en phase liquide Introduction En 2003 Agilent a commercialis ses premi res colonnes en silice poreuse avec des particules de 1 8 um Ces colonnes taient les premi res d une cat go rie de colonnes appel es par la suite les colonnes STM ou sub 2 microniques inf rieures deux microns Ces mat riaux de remplissage ont t intro duits dans des colonnes ZORBAX RRHT capables de r sister une pression de 600 bar lorsque le syst me de r solution rapide CPL Agilent s rie 1200 a t lanc en 2006 En 2009 la gamme a t tendue pour inclure les colonnes RRHD pouvant tre utilis es couramment une pression de 1200 bar lors de la commercialisation du syst me CPL Agilent 1290 Infinity dont la plage de fonctionneme
122. nity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 11 Introduction la chromatographie en phase liquide ultra haute performance La s paration chromatographique peut tre optimis e sur la base des caract ristiques physiques de la colonne HPLC telles que la taille des particules le diam tre des pores la morphologie des particules la longueur et le diam tre de la colonne la vitesse du solvant et la temp rature De surcro t la thermody namique d une s paration chromatographique peut tre prise en compte afin de modifier les propri t s du solut et des phases mobile et stationnaire pourcentage de solvant organique force ionique pH pour obtenir le temps de r tention le plus court possible et la s lectivit la plus lev e Adsorption ou d sorption lente Isothermes non lin aires Equilibre chimique pH Pression Taille des particules porosit Propri t s des phases mobile et dimensions de la colonne d bit stationnaire propri t s du solut temp rature temp rature 12 Figure 3 S lection des conditions de HPLC optimales La r solution peut tre d crite d pendant de trois param tres e l efficacit ou les plateaux th oriques N de la colonne e la s lectivit a e le facteur de r tention k D apr s l quation de la r solution Figure 4 page 13 la s lectivit est le para m tre ayant l influence la plus forte sur la r solution Figure 5 page 13 Cela signifie
123. nt colonne thermostat description 37 composants du syst me compartiment colonne thermostat 37 d tecteur barrette de diodes 39 chantillonneur automatique 35 pompe binaire 28 configuration de la m thode de l instrument 126 configuration et installation du syst me int gration au r seau 93 configuration en deux piles arri re 87 en deux piles avant 86 en deux piles arri re 82 en deux piles avant 81 en deux piles 81 86 pile unique 78 83 trac en ligne 100 cuve circulation cuve circulation de type cartouche Max Light 63 cuve haute sensibilit Max Light 63 informations sur les solvants 121 D d bit de recueil des donn es 68 DEF LCM 123 D tecteur barrette de diodes description 39 d tecteur parvenir une meilleure sensibilit 63 donn es analyse 111 E chantillonneur automatique Infinity description 35 chauffement par frottement 19 effet m moire 70 quation de van Deemter 10 F facteur de r tention 12 G guide de d marrage rapide introduction 96 hauts d bits Optimisation 55 informations sur la m thode 124 125 informations sur les solvants 121 Instrument Acquisition 124 int gration au r seau 93 int gration 113 signal 113 Internet 122 J Jet Weaver D branchement des connexions capil laires 50 L l analyse des donn es 124 largeur de fente 66 largeur du pic 68 Liste de contr le de l ex cution 124 longueur d onde et band
124. nt comprend des pressions allant jusqu 1200 bar et des d bits allant jusqu 5 ml min Ces deux colonnes particules d une taille sub 2 micronique 1 8 um peuvent tre utilis es pour atteindre deux objectifs principaux 1 Une chromatographie plus rapide Des colonnes courtes contenant des particules sub 2 microniques permet tent de r duire de mani re dramatique la dur e de l analyse en augmentant le d bit sans toutefois perdre au niveau de la performance 2 Une r solution plus lev e Des colonnes longues contenant des particules sub 2 microniques offrent une meilleure efficacit et donc la r solution plus lev e n cessaire pour la s paration d chantillons complexes La plus faible dispersion aboutit aussi l obtention de pics d analyte moins dilu s et donc une sensibilit am lio r e notamment pour les analyses CPL MS La pression requise pour faire avancer le solvant travers une colonne conte nant des particules STM s accro t rapidement lorsque le d bit est augment dans le but d acc l rer une s paration et tr s rapidement lorsque la longueur de la colonne est augment e dans le but d am liorer la r solution Ainsi le d veloppement de syst mes UHPLC a accompagn la commercialisation des colonnes STM Ces syst mes ultra HPLC permettent d appliquer des pressions sup rieures 400 bar valeur qui repr sentait un seuil non franchi depuis les 8 Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du
125. nts dans les diff rentes sections de l cran D finition du rapport Dans l onglet Reporting settings __ Report mode Utilisez le mode Rapport classique Style Report Style Court Quantitative results sorted by Signal Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 145 6 Annexe Add Chromatogram Output Coch e Chromatogram Output Portrait Size Axe Time 100 de la page Axe Response 40 de la page Destination Printer Coch Screen D coch File Coch File Setting PDF Coch Unique PDF file name Coch Dans l onglet Quantitation settings e Calculation mode Calculate Pourcentages Based on Aire Cliquez sur 0Kpour quitter et ouvrir l cran suivant du processus Modifier l ensemble de la m thode 146 Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Annexe 6 Configuration d une m thode l aide de la fonction Edit Entire Method Courbes de l instrument Instrument Curves Instrument 2 Select curves to overlay Instrument Data Curves Figure 46 cran Courbes de l instrument Les cases cocher Instrument Curves permettent de superposer ces param tres enregistr s sous la forme d un graphique sur le chromatogramme Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 147 6 Annexe Liste de contr le de l ex cution Vous pouvez acc dez directement
126. old 10 0 m u Signal F O 1000 nm Signal G 100 0 nm Analog Output Signal H Peakwidth gt 0 025 min 0 5 s response time 10 Hz Stoptime As PumpAnjector 1 00 Posttime Output 1 0 11000 nm Zero Offset Attenuation 1000 Margin for negative Absorbance 100 4 of Autobalance Lamps on required for analysis Y Prerun v UV Lamp LI Figure 41 cran de configuration de m thode onglet D tecteur barrette de diodes e Signals Jusqu huit signaux distincts chromatogrammes peuvent tre enregistr s Pour indiquer qu un signal doit tre enregistr la case Use Sig nal correspondant au signal doit tre coch e et la longueur d onde et la bande passante d finies Le cas ch ant un signal de r f rence doit tre d fini et sa case coch e Wavelength indique la longueur d onde centrale nm du signal lt Bandwidth indique la largeur nm du signal lt Reference Wavelength indique la longueur d onde centrale nm de la bande de r f rence qui est soustraite du signal analytique lt Reference Bandwidth indique la largeur nm de la bande de r f rence e Peakwidth indique la vitesse d acquisition des donn es et le filtrage du signal 136 Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Annexe 6 Stop Time Post Time sont r gl s sur No Limit Off
127. on des modules reportez vous aux manuels sp cifiques chaque module Ces manuels comprennent aussi des informations concernant les caract ristiques des modules leur maintenance et les pi ces Optimisation de la configuration de la pile de modules syst me CPL binaire Configuration en une seule pile Une performance optimale est garantie en installant les modules du syst me CLP binaire Agilent Infinity 1290 dans la configuration suivante voir la Figure 25 page 79 et la Figure 26 page 80 Cette configuration optimise le trajet des liquides avec un volume de retard minimum et r duit l encombre ment La pompe binaire Agilent Infinity 1290 doit toujours tre install e en bas de la pile Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Configuration et installation du syst me 4 Instant Pilot Compartiment solvants ego pa r 009 D tecteur 5 288 gt 000 anD CS Compartiment colonnes chantillonneur automatique Pompe
128. oportionnel la longueur de la colonne par cons quent les particules les plus petites et les colonnes les plus longues donneront un nombre de pla teaux sup rieur La pression augmente en proportion inverse du carr de la granulom trie et en proportion directe de la longueur de la colonne C est la raison pour laquelle le syst me de LC 1290 Infinity a t con u pour atteindre 1200 bar et ainsi exploiter des particules d une granulom trie inf rieure 2 microns et les colonnes d une longueur port e 100 mm ou 150 mm Il existe m me des exemples de colonnes de 100 mm et 150 mm connect es en s rie pour obtenir une longueur de 250 mm La r solution augmente comme la racine carr e de N donc en doublant la longueur de la colonne on augmente la r solution d un facteur 1 4 La viscosit de la phase mobile d termine les pos sibilit s car elle conditionne directement la pression Les m langes base de m thanol entra nent une perte de charge plus lev e que les m langes base d ac tonitrile Au del de sa plus faible viscosit l ac tonitrile est souvent choisi parce que la forme des pics est meilleure et les pics plus troits En revanche le m thanol induit g n ralement une meilleure s lectivit coup s r pour les plus petites mol cules de moins de 500 Da Il est possible de r duire la viscosit en augmentant la temp rature mais il faut se souvenir que la temp rature influence la s lectivit de la s parat
129. optimale le meilleur param trage doit tre de 1 nm Ceci permettra de r soudre une structure fine telle Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Optimisation du syst me CPL Agilent 1290 Infinity 3 que celle du spectre du benz ne voir la Figure 24 page 67 Tr s peu de com posants affichent ces fins d tails dans les spectres d une solution Le niveau de lumi re sera plus faible et le signal mettra donc moins de bruit le niveau sonore d pend de la longueur d ondes et des solvants de phase mobile utilis s Figure 24 Benz ne une largeur de fente de 1 et 4 nm principe Le volume d injection et le solvant de dissolution de l chantillon sont impor tants pour contr ler la dispersion Il faut s assurer que les composants soient concentr s dans le haut de la colonne afin d viter une dispersion du pic due l injection ce qui pourrait r duire la hauteur du pic Pour ce faire l chan tillon doit tre dissout dans une composition de solvant d une force d lution plus faible que la phase mobile Il est possible d augmenter le volume d injec tion pour obtenir une plus grande concentration d analytes sur la colonne et par cons quent augmenter la hauteur du pic Reportez vous aux commentaires en Comment augmenter le volume d injection page 53 Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 67 3
130. pas les composants lorsque le c ble d alimentation est branch N utilisez pas l instrument en pr sence de gaz ou fum es inflammables Dans un tel environnement le fonctionnement de tout instrument lectrique repr sente un danger certain N effectuez pas de substitutions de pi ces ou des modifications non autoris es Il se peut que les condensateurs situ s l int rieur de l instrument soient encore charg s bien que l instrument ait t d branch de sa source d alimen tation Des tensions dangereuses sont pr sentes dans cet instrument capables de causer des blessures graves Vous devez proc der avec extr me pr caution lorsque vous manipulez testez et ajustez cet instrument Lorsque vous manipulez des solvants respectez les r gles de s curit lunet tes gants et v tements de protection telles qu elles figurent dans la fiche de s curit fournie par le fournisseur du solvant particuli rement s il s agit de produits toxiques ou dangereux Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 119 6 Annexe Symboles de s curit Tableau 10 Symboles de s curit Symbole Description L appareil est marqu de ce symbole quand l utilisateur doit consulter le A manuel d instructions afin d viter les risques de blessure de l op rateur et de prot ger l appareil contre les dommages Indique des tensions dangereuses Indique une borne de terre prot g
131. positifs qui y sont raccord s doivent tre reli s une terre de protection par le biais d une prise de masse Toute Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Annexe 6 interruption de la connexion la terre de protection cr e un risque d lectro cution pouvant entra ner des blessures graves Si l int grit de cette protection devient suspecte l instrument doit tre mis hors service et son utilisation doit tre interdite Assurez vous que les fusibles sont remplac s uniquement par des fusibles courant nominal sp cifi et de type sp cifi fusion normale temporis s etc N utilisez pas de fusibles r par s et ne court circuitez pas les porte fusibles Certains des r glages d crits dans le manuel sont effectu s sur un instrument sous tension dont les capots de protection ont t retir s Les potentiels pr sents en de nombreux points peuvent en cas de contact causer des blessures Il convient d viter dans la mesure du possible d effectuer des op rations de r glage de maintenance et de r paration sur un instrument ouvert sous ten sion Si c est in vitable ces op rations doivent tre effectu es par une per sonne qualifi e et consciente du danger Ne tentez pas d effectuer une op ration de maintenance interne ou un r glage sans la pr sence d une autre personne capable de donner les premiers secours et d assurer une r anima tion Ne remplacez
132. ps le module peut aussi envoyer le spectre complet au syst me de donn es la m me vitesse soit 160 Hz Il important que les param tres des m thodes puissent tre enregistr s pour les laboratoires r glement s Le DAD 1290 Infinity enregistre non seulement les points de consigne de l instrument mais est galement dot de tiquettes RFID tiquettes d identification par radiofr quence int gr es la lampe et la cartouche de la cuve circulation pour que l identit et les caract ristiques de ces composants importants soient galement enregistr es par le syst me Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 3 Optimisation du syst me CPL Agilent 1290 Infinity Volume de retard et volume hors colonne 42 Volume de retard 42 Volume hors colonne 43 Configuration d un volume de retard optimal 44 Comment augmenter le volume d injection 53 Comment am liorer la capacit d analyse 55 Comment am liorer la r solution 58 Comment am liorer la sensibilit 61 Comment minimiser le transfert 70 Comment emp cher les obstructions de colonne 72 Ce chapitre traite de l application des notions th oriques et de l utilisation des caract ristiques du syst me CPL pour d velopper des s parations optimis es che Agilent Technologies m 3 Optimisation du syst me CPL Agilent 1290 Infinity
133. r s au niveau du clapet de purge par le m lange sous haute pression des solvants de la pompe A et de la pompe B Le clapet de purge permet sous commande logicielle de basculer l coulement vers l va cuation afin de purger les nouveaux solvants travers la t te de pompe Un capteur est reli au clapet de purge pour contr ler la pression du syst me Figure 13 Le m langeur Jet Weaver Le circuit de la pompe a t optimis pour minimiser le retard des gradients et int gre un syst me de m lange innovant utilisant la technologie microfluidi que Le dispositif de m lange appel le Jet Weaver utilise un r seau de voies microfluidiques 120 um x 120 um plusieurs couches pour garantir que les solvants sont compl tement m lang s Il existe deux volumes standard pour le Jet Weaver 35 ul pour des applications classiques d tection UV et 100 ul pour des applications exigeantes telles que lorsque du TFA est utilis avec une d tection UV Pour obtenir un bruit de ligne de base r solument des plus fai bles lors de ces applications exigeantes un Jet Weaver de 380 uL est galement Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Le syst me CPL Agilent 1290 Infinity Description du produit 2 disponible Lorsque la d tection est effectu e par MS il est souvent possible de travailler sans le Jet Weaver car un niveau de m lange suffisant est obtenu avec juste le volume de base de
134. r souci d exhaustivit ils sont tous d crits dans les sections suivantes Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Annexe 6 Configuration d une m thode l aide de la fonction Edit Entire Method Onglet de l chantillonneur automatique HiP ALS Setup Method QA HiP 8LS HIP ALS Injector Program K BinPump ICC DAD x Instrument Curves Injection Mode Advanced Injection volume 1 00 ul susian pe live Draw speed 1000 yL min Standard injection Iriection with neede wash Eject speed 100 0 Ea uL min Draw position 00 D mm Equilibration time 20 sec Needle wash Sample flush out factor 50 times injection volume Mode Flush Port L Vial Well bottom sensing Time Location High throughput Repeat 3 times F Automatic delay volume reduction L Enable overlapped injection O Stoptime Posttime y gt When Sample Is Flushed Out NoLimit of After Period Of Time 100 mi Z omi 0 00 min Injection Cleaning Figure 37 cran de configuration de m thode onglet chantillonneur automatique haute performance _ Injection Mode Injection volume r gle le volume injecter par exemple 3 ul _ Standard injection indique qu aucun lavage de l ext rieur de l aiguille n est effectu Injection with needle wash permet de r duire les transferts ventuels Il s agit du mode de fonctionnement recommand
135. rd dans le syst me En cas de contournement du Jet Weaver la tubulure de raccordement l chan Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Optimisation du syst me CPL Agilent 1290 Infinity 3 tillonneur automatique est achemin e directement depuis le clapet de purge Assurez vous que le Jet Weaver a t rinc avec du solvant ne contenant pas de tampons ou d autres additifs avant de le d connecter Il est parfois pr f rable d augmenter le volume de retard dans la pompe Ceci peut plus particuli rement tre le cas si la d tection UV est utilis e et si un composant forte absorption UV a t ajout la phase mobile Ceci peut avoir pour effet d accentuer le bruit de fond de la pompe L exemple le plus courant en est l utilisation d acide trifluoroac tique TFA pour l analyse de prot ines et de peptides Cet effet peut tre att nu en augmentant le volume du m langeur Selon l orientation de son montage le Jet Weaver offre deux volumes de m lange possibles Le passage du volume le plus faible de 35 ul au volume le plus lev de 100 ul est effectu en le d montant en le tournant d avant en arri re puis en le remettant en place Le volume de m lange et par cons quent le volume de retard est augment de 65 ul et la performance de la ligne de base avec des additifs comme le TFA sera am lior e La configuration du Jet Weaver est rapport e automatiquement par une
136. rd faible et un transfert r duit qui peut fonctionner en tant qu chan tillonneur automatique en boucle fixe Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Le syst me CPL Agilent 1290 Infinity Description du produit 2 Le nouveau module Flexible Cube pour rendre l chantillonneur automati que plus performant avec de nouvelles fonctions telles que le r trolavage du si ge de l aiguille et le fonctionnement en boucle fixe Un compartiment colonne thermostat plus facile utiliser avec des solu tions de vanne int gr es et une plage de pression allant jusqu 1200 bars 17 400 psi Un d tecteur barrette de diodes avec une sensibilit et une stabilit de la ligne de base grandement am lior es gr ce un syst me de cuve de type car touche munie de guides d ondes optofluidiques Des vitesses d acquisition de donn es comprenant l int gralit des informa tions spectrales de jusqu 160 Hz Une nouvelle gamme de colonnes ZORBAX RRHD particules sub 2 micro niques fonctionnant des pressions allant jusqu 1200 bar Un m lange assist permettant un tamponnement automatique et un m lange additif au niveau de la pompe quaternaire 1290 Infinity L am lioration la plus significative est la plage de pressions et de d bits qui peuvent tre utilis s par le syst me Ce champ d application de l instrument correspond sa puissance d bit x pression il est facile
137. re de masse le d bit inf rieur des colonnes de faible diam tre peut produire une efficacit sup rieure et par cons quent une plus grande sensibi lit 62 Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Optimisation du syst me CPL Agilent 1290 Infinity 3 Comment parvenir une meilleure sensibilit pour le d tecteur Le d tecteur est dot d un certain nombre de param tres que l on peut utiliser pour optimiser ses performances Les sections suivantes d crivent la mani re dont les param tres du d tecteur affectent les caract ristiques de performance e La cuve circulation affecte la sensibilit e La longueur d onde et la bande passante affectent la sensibilit la s lectivi t et la lin arit e La largeur de fente affecte la sensibilit la r solution spectrale et la lin ari t e La largeur de pic affecte la sensibilit et la r solution Cuve circulation La cuve de type cartouche Max Light a une distance d termin e standard de 10 mm et elle est optimis e pour un volume et une dispersion minimale o volume 1 0 uL Elle est dot e d une haute transmission de lumi re r duisant au maximum le bruit afin de r duire le bruit d au guide d ondes optofluidi que Elle convient pour un usage avec une vaste gamme de colonnes analyti ques des courtes colonnes de faible diam tre aux longues colonnes d un diam tre standard 4 6 mm En g n ral
138. s Param tres de quantification Quantitative results sorted by R sultats quantitatifs tri s par Range Plage Reference Bandwidth Bande passante de r f rence Reference Wavelength Longueur d onde de r f rence Remove Supprimer Repeat R p tition Report mode Mode de cr ation de rapport Report Style Style de rapport Reporting settings Param tres des rapports Response R ponse Run Method Ex cuter une m thode Run Sequence Ex cuter une s quence Run Time Checklist Liste de contr le de l ex cution S Sample flush out factor Facteur de rin age de l chantillon Sample Info Informations sur l chantillon Sample Name Nom de l chantillon Save Enregistrer Save As Enregistrer sous Save Method with Data Enregistrer la m thode avec les don n es Screen Moniteur Select Run Method Task S lectionner la t che d ex cution de m thode Selected Signal Signaux s lectionn s Selected Signals Signaux s lectionn s Set Integration Events Table Param trer le tableau d v nements d int gration Setup Method Configuration de la m thode Show timetable graph Afficher le trac du gradient Signal Description Description du signal Signal Details D tails des signaux Signals Signaux Single Runs Analyses uniques Size Taille Skip Ignorer Slope Sensitivity Sensibilit de pente Solvents Solvants Specific Events For Signal v nements sp cifiques pour un signal Specify Report D f
139. s contenant des particules sub 2 microniques Une chromatographie plus rapide Le fait d avoir des dur es d analyse plus courtes pr sente plusieurs avantages La capacit d analyse des laboratoires utilisant des syst mes haut d bit s en trouve am lior e et plus d chantillons peuvent tre analys s dans un temps moins long Plus d chantillons en moins de temps signifie aussi des co ts moins lev s Par exemple en diminuant le temps d analyse de 20 min par chantillon 5 min le co t pour 700 chantillons est r duit de 79 Tableau 1 page 15 Tableau 1 conomies de temps et de co t sur plus de 700 analyses Dur e de cycle Dur e de cycle de 20 Dur e de cycle de 5 min min Analyses 700 700 Co t approx par analyse l 10 58 2 24 Co t approx pour 700 analyses 7400 1570 conomies de co ts 5830 Temps 10 jours 2 5 jours 1 solvants 27 1 limination des d chets 2 1 main d uvre 30 h 2 24 heures jour Le calculateur d conomies Agilent repr sente un outil d utilisation facile pour calculer les conomies g n r es par le passage d un syst me HPLC convention nel un syst me UHPLC quip de colonnes contenant des particules de 1 8 um Le calculateur ainsi qu un calculateur de transfert de m thode est accessible sur le site Internet d Agilent Technologies www chem agilent com Les r sultats sont pr sent s sous forme de graphique et de tableau Des dur e
140. s d analyse plus courtes permettent galement d obtenir des plus r ponses plus rapides Ceci est important lors du contr le du processus et des Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 15 1 Introduction la chromatographie en phase liquide ultra haute performance Avantages des colonnes contenant des particules sub 2 microniques analyses de lib ration rapide Au lieux d attendre des heures pour lib rer un lot unique de m dicament toutes les analyses concernant l ad quation du sys t me l talonnage et l chantillon peuvent tre effectu es en moins d une heure Des r ponses rapides sont importantes galement pour les chercheurs en chimie de synth se utilisant des syst mes CPL MS en libre acc s pour vali der l identit de leurs compos s et contr ler leurs r actions Des dur es d ana lyse plus courtes permettent aussi d acc l rer de fa on significative le processus de d veloppement des m thodes t i Agilent Technologies Method Translator and Cost Savings Calculator Financial View Samples per Year 76500 B o US Dhiter Waste Costs USD iten Labour Costs USD per year per operator Depreciation in Years 7 linear calculation Add Laboratory Costs USD per year Max Samples per Instrument per Year LC 6480 Max Samples per Instrument per Year RRLC 19440 50000 0 Daily Operating Hours E instrument na Weekly Operating Days
141. s faible absorbance telle qu un minimum de longueur d ondes ou en choisissant une bande passante plus large qui comporte g n ralement des valeurs d absorbance plus faibles L utilisation d un maximum et d un minimum de longueur d ondes pour quan tification remonte l poque des d tecteurs UV traditionnels qui cause des tol rances m caniques pour le d placement des r seaux devaient viter les parties en pente raide du spectre Les d tecteurs bas s sur la technologie de la barrette de diodes ne souffrent pas de cette limitation mais pour des raisons de convention le maximum et le minimum sont choisis de pr f rence d autres parties du spectre La bande passante de r f rence est normalement param tr e sur une r gion du spectre UV dans laquelle l analyte n a pas d absorbance Ceci est illustr pour le spectre de l acide anisique dans la Figure 23 page 66 Ce spectre est typique pour de nombreuses petites mol cules comportant un chromophore UV Pour obtenir de meilleurs r sultats la r f rence a t param tr e afin que ce soit une bande large aussi proche de la longueur d ondes du signal que pos sible mais sur une r gion d absorbance z ro Des bandes passantes de r f ren ce de 60 nm 100 nm sont couramment utilis es La r f rence par d faut est 360 nm avec une bande passante de 100 nm On utilise une large bande pas sante parce que cela r duit le bruit dans le signal de r f rence
142. sant coulisser dans le porte cuve elles sont align es automatiquement au niveau du banc optique Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 39 2 40 Le syst me CPL Agilent 1290 Infinity Description du produit La source de lumi re du DAD est une lampe deut rium la plage de longueurs d onde de fonctionnement est comprise entre 190 et 640 nm La d tection s effectue au moyen d une barrette 1024 diodes L entr e du spectrographe est une fente optique programmable dont la r solution spectrale est comprise entre 1 et 8 nm La fente est g n ralement utilis e au milieu de cette four chette mais l ouverture peut tre diminu e 1 nm lors d optimisations pour obtenir une r solution spectrale lev e ce qui est rarement le cas pour des spectres UV en phase liquide ou agrandie jusqu 8 nm pour maximiser la transmission de lumi re minimiser le bruit de fond du signal Les signaux chromatographiques sont extraits des donn es de la barrette de diodes par le micrologiciel du module Jusqu huit signaux individuels peu vent tre d finis chacun comprenant une longueur d ondes de signal une bande passante de paquet de diodes et s il y a lieu une longueur d ondes et une bande passante de r f rence Les signaux peuvent tre mis jusqu 160 Hz 160 points de donn es seconde pour un enregistrement pr cis des pics chromatographiques les plus rapides troits En m me tem
143. se des donn es traitement des donn es pour obtenir des r sultats quantitatifs et qualitatifs Cette section d crit bri vement l int gration et les rapports d analyse des donn es pour que les s parations effectu es plus haut dans ce chapitre puissent tre int gr es et les rapports imprim s Pour des informations suppl mentaires concernant l analyse des donn es y compris l utilisation de l talonnage pour la quantification consultez le manuel du logi ciel ChemStation a Instrument 2 offline Data Analysis Ele Method Sequence Recalculate Graphics Integration Calbration Report Spectra Batch Origine de la m thode D al Data File ample Name Method Name 08 07 2009 18 40 53 Rob vial 1 PHENONE MI Phenones Test Mix PHENONES2 M 08 07 2009 18 45 06 Rob Vial 1 PHENONE MI Phenones Test PHENONES2 M o o 1 Table de navigation Singe Runs Ca ESTD_DAD amp Ca 15TD_paD On OTHERLC_DETECT Ca PHENONES T che d int gration A mau g 5 g s S T che de spectre an z 300 e 5 250 8 200 Panneau de navigation vo 100 CE L o 02 04 08 08 mil Data Methods i Trerererr 4 g hg Method and Run Control File Information Time Area Height Width Area Symmetry A LC File PHENONE MIX 010 D 1 0122 281 7 208 1
144. ssez les param tres suivants Duration 6 min Flow 10 ml min Composition B 50 La valeur pour Composition A sera r gl e automatiquement sur 50 Laissez le bouton marche arr t sur Off Cliquez sur OKpour quitter 3 Effectuez un clic droit sur la partie pompe et s lectionnez Purge On dans le menu contextuel Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 91 4 92 Configuration et installation du syst me Attention ne pas la confondre la commande Purge On avec la commande suivante Prime On Le clapet de purge basculera pr sent le circuit hydraulique en position de purge et purgera simultan ment les deux voies vers l vacuation un d bit de 5 ml min pour chaque voie et pendant une dur e de 6 minutes Apr s la dur e d finie le d bit de purge est arr t le clapet de purge rebascule le circuit hydraulique vers le syst me et les valeurs pour le d bit et la composition sont de nouveau r gl es sur celles d finies dans la m thode actuellement en cours Dans cet exemple le d bit de la m thode est encore r gl sur z ro Les para m tres de purge d finis dans la fen tre Control lors de l tape 1 et 2 sont conserv s pour toute nouvelle purge la proc dure peut tre commenc e l tape 3 Lorsque la pompe a t amorc e et purg e initialement avec du propan 2 0l les solvants peuvent tre remplac s par des solvants de phase mobile tels que l ea
145. ssoci es en activant le bouton radio Combined Lorsque combin es les valeurs entr es pour le c t gauche s appliquent aux deux c t s cela est n cessairement le cas si la longueur de la colonne d passe 15 cm et que celle ci doit tre fix e des deux c t s du compartiment Les deux c t s peuvent fonctionner ind pendamment lorsque deux colonnes sont utilis es des temp ratures diff rentes ceci peut tre mise en uvre 134 Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Annexe 6 lorsqu une vanne de d inversion entre colonnes a t install e pour basculer le flux d une colonne l autre Un autre cas de figure o les zones de temp rature s par es sont utiles se pr sente lorsque d un c t la colonne est utili s e une temp rature lev e p ex au dessus de 60 C et de l autre c t l changeur de chaleur est utilis pour refroidir l luant avant que celui ci p n tre dans le d tecteur r duisant ainsi le bruit de fond d des effets thermiques dans la cuve circulation La s lection de l option As Detector Cell permet de r gler automatiquement la valeur de la temp rature sur celle d finie pour la cuve du d tecteur 1290 Infinity La temp rature de chaque zone peut tre r gl e sur une valeur comprise entre 5 C et 100 C l utilisateur doit v rifier que la colonne convient une utilisation cette temp rature Les phases solides Agilent ZOR
146. st me et guide de r f rence rapide Le syst me CPL Agilent 1290 Infinity Description du produit 2 Le compartiment colonnes thermostat Agilent Infinity 1290 Le compartiment colonnes thermostat Agilent Infinity 1290 TCC maintien une temp rature comprise entre 10 C en dessous de la temp rature ambiante et 100 C un d bit de 2 5 ml min et 80 C un d bit de 5 ml min La stabili t de la temp rature est de 0 05 C et la pr cision de la temp rature est de 0 5 C avec talonnage La thermostatisation est atteinte par l action com bin e de la conduction par contact avec les ailettes du thermostat de la tem p rature de l air non ventil du compartiment et surtout du pr chauffage ou refroidissement de la phase mobile lors de son passage travers un chan geur de chaleur avant de p n trer dans la colonne Il existe deux zones de tem p rature ind pendantes dans chaque TCC qui peuvent fonctionner de concert pour des colonnes longues jusqu 300 mm ou des temp ratures distinctes pour des colonnes courtes de 100 mm ou moins Le module est fourni avec un changeur de chaleur faible dispersion de 1 6 ul Chaque kit de vannes comprend des changeurs de temp rature faible dispersion suppl mentaire pour chaque colonne Un maximum de quatre changeurs de temp rature faible dispersion peuvent tre install s de fa on flexible l int rieur du TCC Pour un fonctionnement HPLC conv
147. syst me et guide de r f rence rapide Introduction la chromatographie en phase liquide ultra haute performance 1 d buts de la technique HPLC Les syst mes CPL ultra haute performance ou ultra haute pression ont galement des faibles volumes de retard et des dispo sitifs d acquisition des donn es rapides n cessaires pour analyser les pics troits g n r s par la chromatographie rapide ou r solution lev e Le syst me CPL Agilent 1290 Infinity constitue un jalon en UHPLC car il s agit du pre mier syst me qui englobe enti rement et am liore les plages de performance disparates de tous les syst mes UHPLC disponibles jusqu ce jour sur le mar ch Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 9 1 10 Introduction la chromatographie en phase liquide ultra haute performance La th orie L efficacit de s paration en HPLC peut tre d crite par l quation de van Deemter Figure 1 page 10 Cette quation d coule du mod le de hauteur de plateau utilis pour mesurer la dispersion des analytes lors de leur progres sion l int rieur de la colonne H est la hauteur quivalente un plateau th o rique appel e parfois HETP dy est la taille des particules de remplissage de la colonne u est la vitesse lin aire de la phase mobile et A B et C sont des constantes associ es aux diff rentes forces de dispersion La constante A cor respond la diff
148. t pas aspirer de l air Avant de d marrer la proc dure assurez vous que tous les tuyaux de solvant sont reli s la pompe comme indiqu dans le manuel d installation de la pompe et que les extr mit s des tuyaux d vacuation sont correctement positionn es dans un r cipient pour d chets liquides appropri Assurez vous que la pompe est command e par le logiciel informatique ou par Instant Pilot et que le d bit est r gl sur z ro 1 Pr parez la voie A et la t te de pompe A pour l amor age Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Configuration et installation du syst me 4 a Remplissez en partie chaque r servoir solvant avec environ 150 ml de propan 2 ol de qualit HPLC pour l amor age de la pompe et placez les extr mit s des tuyaux de solvant portant les filtres en verre fritt dans les r servoirs b D connectez la tubulure qui arrive la vanne de v rification d entr e sur la t te de pompe A Il s agit de la tubulure sortant de la voie A du d ga zeur vide c Installez la seringue d amor age munie de l adaptateur filet sur la tubu lure d Aspirez lentement du solvant travers la tubulure jusqu limination de toutes les bulles e Retirez rapidement la seringue et l adaptateur de la tubulure et recon nectez la tubulure la vanne de v rification d entr e sur la t te de pompe A R p tez l tape pr c dente pour la voie de solvant B
149. ter un signal qui n est plus acquis Pour corriger cette erreur il suffit de s lectionner l ancien signal dans le tableau et de le supprimer l aide du bouton Delete Row Si plusieurs d tecteurs sont utilis s sur un m me syst me comme par exem ple un d tecteur barrette de diodes et un spectrom tre de masse les lignes Signal Description permettent d entrer un d lai de temporisation pour le d tec teur aval pour que le logiciel puisse aligner les pics des diff rents d tecteurs Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 141 6 Annexe Configuration d une m thode l aide de la fonction Edit Entire Method Signal Details Instrument 2 Available Signals CRETE m lAddto Method Insert Row Append Row Delete Bow Signal Description Align Peak1 Peak2 Align Window Figure 43 D tails des signaux 142 Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Annexe 6 Modification des v nements d int gration Vous pouvez acc der directement l cran Edit Integration Events par l interm diaire de la vue Method and Run Control en effectuant un clic droit sur l ic ne v nements d int gration de l interface utilisateur puis en cliquant sur Edit Integration Events dans le menu contextuel Vous pouvez galement acc der cet cran dans la vue Data Analysis par l interm diaire du menu Int gration gt v nements d int gratio
150. timent solvants SE E Pompe M l g j chantillonneur automatique Thermostat pour l chantillonneur automatique en option Figure 31 Configuration en deux piles recommand e pour le syst me 1290 Infinity avec pompe quaternaire vue avant 86 Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Configuration et installation du syst me 4 Installation du module LAN vers logiciel de commande C ble de bus CAN pour Instant Pilot ET Signal analogique du d tecteur en option C ble thermique LE en option 0900009 Doomoo ELLE C ble de bus CAN Alimentation lectrique Figure 32 Configuration en deux piles recommand e pour le syst me 1290 Infinity avec pompe quaternaire vue arri re Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 87 4 Configuration et installation du syst me Amorcage
151. tiquette RFID int gr e Pour obtenir le bruit de ligne de base le plus bas possible lors d applica tions exigeantes un Jet Weaver de 380 uL est disponible Il s installe de la m me mani re que le m langeur Jet Weaver standard La proc dure de remplacement d un m langeur Jet Weaver dans la pompe binaire 1290 Infinity est illustr e dans Remplacement du m langeur Jet Weaver sur la pompe binaire 1290 Infinity page 50 En raison d une configuration et d un principe de m lange diff rents pour la pompe quaternaire Agilent 1290 Infinity le volume de retard physique est beaucoup plus important il n est donc pas n cessaire d ajouter de m langeur Jet Weaver suppl mentaire pour des applications standard Toutefois il est toujours possible d installer en option un m langeur Jet Weaver de 380 uL pour des applications exigeantes au niveau de la ligne de base par exemple les applications base de TFA Le bo tier du m langeur Jet Weaver facultatif est diff rent et adapt la forme de la pompe quaternaire 1290 Infinity La proc dure d installation d un m langeur Jet Weaver dans la pompe quater naire 1290 Infinity est illustr e dans Mise en place du m langeur Jet Weaver V380 sur la pompe quaternaire 1290 Infinity page 51 Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 49 Optimisation du syst me CPL Agilent 1290 Infinity Configuration d un volume de retard optimal Rempla
152. tomatique 15 ul sont rajout s pour comptabiliser les connexions dans les configurations de syst me Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 45 3 46 Optimisation du syst me CPL Agilent 1290 Infinity Tableau 6 Retard du syst me temps pour que le gradient atteigne la t te de la colonne D bit Volume de retard du syst me microlitres ml min 20 55 90 125 360 395 430 465 Retard minutes 0 2 0 10 0 28 0 43 0 60 1 80 2 15 2 55 2 90 0 4 0 05 0 14 0 21 0 30 0 90 1 08 1 28 1 45 0 6 0 03 0 09 0 14 0 20 0 60 0 72 0 85 0 97 0 8 0 03 0 07 0 11 0 15 0 45 0 54 0 64 0 73 1 0 0 02 0 06 0 09 0 12 0 36 0 43 0 51 0 58 1 5 0 01 0 04 0 06 0 08 0 24 0 29 0 34 0 39 2 0 0 01 0 03 0 04 0 06 0 18 0 22 0 26 0 29 3 0 0 01 0 02 0 03 0 04 0 12 0 14 0 17 0 19 4 0 0 01 0 01 0 02 0 03 0 09 0 11 0 13 0 15 5 0 0 00 0 01 0 02 0 02 0 07 0 09 0 10 0 12 Tableau 7 Volume approximatif de liquide dans des dimensions de colonne typique en supposant que la porosit est gale 0 6 Diam tre de Longueur de la colonne mm la colonne mm 30 50 100 150 250 Volume de la colonne Phase liquide microlitres 2 1 62 104 208 312 520 3 0 127 212 424 636 1060 4 0 226 377 754 1131 1885 4 6 299 499 997 1496 2493 Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Optimisation du syst me CPL Agilent 1290 Infinity 3 Pour des gradients tr s rapid
153. u il est plus facile d utiliser la fonction Modifier l ensemble de la m thode car celle ci vous am ne automatiquement de fen tre en fen tre Pour utiliser cette fonction cli quez sur le menu M thode gt Modifier l ensemble de la m thode La bo te de dialo gue Check Method Sections to Edit s affiche Edit Method Instrument Z Check Method Sections to Edit FMlMethod Ir ormatioet E instrument hcqusiioen Data Analyst 7 Bun Time Checklist Cancel Conti Figure 35 Choix des sections de m thode modifier Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 123 124 Annexe Cette bo te de dialogue r sume les sections qui seront parcourues et permet de sauter certaines sections en les d cochant En fonction des sections s lectionn es plusieurs crans seront affich s suc cessivement La section Method Information comprend un texte de description de la m tho de La section Instrument Acquisition comprend les param tres d injection les param tres de la pompe les param tres du four les param tres du d tecteur et les courbes de l instrument La section Data Analysis comprend les d tails de signal les param tres d int gration et les param tres de cr ation des rapports La section Run Time Checklist comprend les parties de la m thode ex cuter Dans la fonction Edit Entire Method le fait de cliquer sur OK ferme l cran en cours et
154. u ou le m thanol La proc dure de purge doit tre renouvel e chaque fois qu un solvant diff rent est utilis Le solvant se trouvant dans la pompe juste apr s une purge n aura pas t d gaz il faut donc faire tourner le syst me pendant au moins 10 min afin de d gazer le solvant Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Configuration et installation du syst me 4 Raccordements des liquides entre les modules Lors du raccordement des modules entre eux rincez syst matiquement cha que capillaire et la colonne avec du solvant avant de les relier au composant suivant du circuit hydraulique 1 Raccordez la sortie du m langeur Jet Weaver l chantillonneur automati que l aide d un capillaire souple en acier inoxydable de diam tre interne de 0 12 mm la couleur de l tiquette est rouge Celui ci doit tre raccord la vanne d injection de l chantillonneur automatique au niveau de la voie n 1 2 Utilisez un capillaire souple en acier inoxydable de diam tre interne de 0 12 mm pour relier la voie n 6 de la vanne d injection de l chantillonneur automatique au compartiment colonne thermostat Raccordez le capil laire directement sur l changeur de chaleur faible volume de dispersion pour un volume de retard minimal ou sur la vanne d inversion si celle ci est install e 3 Raccordez la sortie de la colonne l entr e indiqu e par l inscription CELL IN g
155. ue d autres param tres de sortie Les signaux sont trac s droite de la fen tre et se d placent ensuite vers la gauche Les derni res 90 min des donn es sont accessibles Il s agit d un outil pratique pour surveiller la ligne de base et observer les injec tions ant rieures Les chelles des axes des abscisses et des ordonn es peu vent tre ajust es directement l aide des boutons haut bas sur chaque axe Le bouton Adjust dans la fen tre Online Plot d place le point actuel du signal s lectionn sur la ligne z ro Le signal s lectionn est indiqu par la couleur des tiquettes de l axe des ordonn es Un signal en particulier peut tre s lec tionn en cliquant sur le signal ou en cliquant la description de signal appro pri e en haut du trac Le bouton Balance permet de r initialiser tous les d tecteurs Les modifications apport es la fen tre Online Plot n ont aucune influence sur les donn es stock es dans les fichiers de donn es individuels Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 101 5 Guide de d marrage rapide Purge de la pompe Il faut purger la pompe e Apr s que la pompe a t amorc e pour la premi re fois e Lorsque la pompe doit tre purg e avec du solvant frais avant d utiliser le syst me ou lorsque le solvant doit tre remplac par un autre solvant e Si la pompe n a pas t utilis e depuis plusieurs heures de l air peut
156. ue le d but de la phase mobile toute augmentation affecte la s paration en parti culier pour les pics pr coces de l analyse faible facteur de r tention Dans certains cas il est l origine de la distorsion des pics C est pourquoi la r gle g n rale consiste maintenir un solvant d injection similaire ou plus faible que la composition d origine du gradient Cela influe sur la possibilit et le niveau d augmentation du volume d injection Vous devez surveiller les signes d augmentation de la dispersion pics plus larges ou plus inclin s et de r solu tion r duite lorsque vous tentez d augmenter le volume d injection Lorsqu une injection est effectu e dans un solvant faible le volume peut pro bablement tre augment davantage car l effet obtenu tend concentrer l ana lyte en haut de la colonne au d but du gradient Inversement si l injection est effectu e dans un solvant plus fort que la phase mobile de d part le volume d injection augment r partit la bande d analyte vers le bas de la colonne avant le gradient produisant une dispersion des pics et une perte de r solu tion Le point principal pour d terminer le volume d injection est probablement le diam tre de la colonne qui exerce un impact important sur la dispersion des pics Les hauteurs de pics peuvent tre plus lev es dans une colonne troite qu avec une injection plus importante dans une colonne plus large car la dis persion des pics est moindre
157. uelle les solvants absorbent fortement inf rieure 220 nm pour le m thanol inf rieure 210 nm pour l ac tonitri le Par exemple dans la Figure 23 page 66 l acide anisique affiche un maxi mum d absorbance convenable 252 nm Une bande passante troite de 4 nm 12 nm donne g n ralement une bonne sensibilit elle est sp cifique l absorbance dans une gamme troite On peut optimiser la bande troite pour la sensibilit d une mol cule particu li re tant donn que la bande passante est augment e le signal est r duit mais il en est de m me pour le bruit et il y aura un rapport signal bruit opti mal Comme guide approximatif ce rapport optimal est souvent proche de la Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Optimisation du syst me CPL Agilent 1290 Infinity 3 bande passante naturelle mi hauteur de la bande d absorption dans le spec tre UV Dans l exemple de l acide anisique le rapport est gal 30 nm La longueur d ondes analytique est habituellement r gl e un maximum de longueur d ondes afin d augmenter la sensibilit de cette mol cule Le d tec teur est lin aire jusqu 2 AU et au del pour de nombreuses applications Ceci offre une vaste gamme lin aire pour la concentration Pour des analyses de haute concentration la gamme lin aire de concentration peut tre tendue en r glant la longueur d ondes sur un avec une plu
158. uellement avec plusieurs m thodes Pour plus de d tails reportez vous aux manuels du logiciel ChemStation 1 Cliquez sur l ic ne Select Run Method Task w f 2 Siles conditions de m thode souhait es ne sont pas charg es actuellement s lectionnez M thode gt Chargement de m thode ou l ic ne A de la barre de menus pour les charger Si des modifications ont t apport es une m thode charg e mais non encore enregistr e un ast risque jaune est affich sur l ic ne d tat de la m thode L injection peut tre r alis e sans enregistrer au pr alable les modifications des param tres Le logiciel ChemStation enregistre toujours une copie des param tres d acquisition dans le fichier de donn es ACQ TXT pour conserver les param tres de la m thode d origine 3 Placez le flacon d chantillon la position 1 il s agit de la position avant des 10 x 2 ml positions de flacons sur le c t droit du plateau flacons 4 S lectionnez Contr le de l analyse gt Informations sur l chantillon et saisissez un nom de Subdirectory facultatif Filename Location de l chantillon flacon 1 Sample Name et un Comment le cas ch ant 5 Sile syst me a d j atteint l quilibre et que la ligne de base est stable cli quez sur Run Method dans la fen tre Sample Info pour d marrer l injection Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 107 5 Guide de d marrage rapide Sino
159. ume de la pompe du m langeur volume de retard description 42 exemple 42 volume d injection obtenir des volumes sup rieurs volume suppl mentaire de la colonne description 113 61 53 Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 43 Index 155 www agilent com Contenu de ce manuel Ce manuel contient des informations techni ques relatives au syst me CPL Agilent 1290 Infinity Il aborde les points suivants e introduction e description du produit optimisation du syst me e configuration et installation e guide de d marrage rapide Agilent Technologies 2009 2011 2012 Printed in Germany 05 2012 G4220 93301 a Agilent Technologies
160. ur e indiqu e sous Peakwidth Le micrologiciel effectue une d tection de pics sur le signal A uniquement afin de d termi ner quels spectres de pic doivent tre enregistr s Pour des signaux multi ples il peut tre n cessaire de r gler le signal A comme d tecteur large bande pour s assurer que des spectres de pic sont disponibles pour tous les signaux de longueurs d onde diff rentes Store permet de choisir le mode d acquisition des spectres Les options sont Aucun aucun spectre n est enregistr Apex Lignes de base trois spectres sont enregistr s au d but au sommet et la fin du pic Apex Pentes Lignes de base cinq spectres sont enregistr s au d but dans la pente ascendante au sommet dans la pente descendante et la fin du pic Tout dans le pic tous les spectres disponibles l int rieur d un pic sont enregistr s Tous tous les spectres sont enregistr s tout au long de l analyse Un spectre sur deux enregistre seulement un spectre sur deux tout au long de l analyse Range les spectres peuvent tre enregistr s sur l ensemble de la plage du d tecteur de 190 nm 640 nm ou sur une plage r duite d finie par l uti lisateur Cela r duit aussi le volume de donn es enregistrer Step permet de d finir l intervalle nm des donn es enregistr es dans un spectre et d termine donc la r solution du spectre observ La valeur par d faut de 2 nm est une bonne choix pour la plup
161. uration de la pile de modules syst me CPL quaternaire 83 Amor age de la pompe 88 Purge de la pompe 90 Raccordements des liquides entre les modules 93 Int gration au r seau 93 Ce chapitre d crit l installation du logiciel les configurations de pile et la pr pa ration du syst me avant fonctionnement Agilent Technologies 75 4 Configuration et installation du syst me Installation du logiciel 76 Installation du logiciel de commande et du syst me de donn es Pour des informations d taill es relatives aux proc dures d installation du logiciel consultez le Manuel du d tecteur barrette de diodes 1290 Infinity et les manuels du logiciel Installation du logiciel Agilent Lab Advisor Pour des informations d taill es relatives aux proc dures d installation du logiciel Agilent Lab Advisor consultez la documentation du logiciel sur le DVD Lab Advisor Le logiciel Agilent Lab Advisor remplace et am liore les fonctions de diagnos tic jusqu alors propos es par le logiciel ChemStation Le logiciel Agilent Lab Advisor est une application fonctionnant sous Win dows qui contr le les instruments de laboratoire en temps r el et permet donc d accro tre la productivit du syst me au moyen de notifications automa tiques pour les t ches de maintenance et d entretien bas es sur des compteurs sophistiqu s Cela permet de r soudre les probl mes ventuels avant qu ils n affectent les r sultats Le logicie
162. usion turbulente ou les multiples trajets d coulement tra vers la colonne B correspond la diffusion mol culaire longitudinale le long de l axe de la colonne C correspond au transfert de masse de l analyte entre les phases mobile et stationnaire La s paration est la plus efficace lors que H atteint sa valeur minimale Les effets de chacune des variables et de l quation combin e sont illustr s dans la Figure 1 page 10 o la hauteur du plateau est fonction du d bit lin aire travers la colonne Ce type de graphi que est connu sous le nom de Courbe de van Deemter et est utilis pour d ter miner le d bit optimal au point le plus bas de la courbe permettant d obtenir la meilleure efficacit de s paration d une colonne H A d B u Cu grande particule petite particule Hauteur de plateau th orique H R sistance au transfert de masse H minn UT Harrr d F Se Uap Diffusion longitudinale Ecoulement lin aire u Figure 1 Courbe de van Deemter hypoth tique Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Introduction la chromatographie en phase liquide ultra haute performance 1 Les courbes de van Deemter de la Figure 2 page 11 montrent comment la r duction de la taille des particules am liore l efficacit Le fait de passer d une taille de particules habituelle telle que 3 5 um ou 5 0 um des particules de 1 8 um permet d am liorer les perform
163. uvant d couler des informations contenues dans ce document de la fourniture de l usage ou de la qualit de ce document Si Agilent et l utilisa teur ont souscrit un contrat crit dis tinct dont les conditions de garantie relatives au produit couvert par ce document entrent en conflit avec les pr sentes conditions les conditions de garantie du contrat distinct se sub stituent aux conditions stipul es dans le pr sent document Licences technologiques Le mat riel et le logiciel d crits dans ce document sont prot g s par un accord de licence et leur utilisation ou reproduction sont soumises aux termes et conditions de ladite licence Mentions de s curit ATTENTION Une mention ATTENTION signale un danger Si la proc dure le pro c d ou les consignes ne sont pas ex cut s correctement le produit risque d tre endommag ou les donn es d tre perdues En pr sence d une mention ATTENTION vous devez conti nuer votre op ration uniquement si vous avez totalement assimil et respect les conditions men tionn es AVERTISSEMENT Une mention AVERTISSEMENT signale un danger Si la proc dure le proc d ou les con signes ne sont pas ex cut s correctement les personnes ris quent de s exposer des l sions graves En pr sence d une men tion AVERTISSEMENT vous devez continuer votre op ration uniquement si vous avez totale ment assimil et respect les conditions mentionn es
164. xible Cube peut tre ajout l chantillonneur automati que pour b n ficier du plus petit volume de retard possible gr ce l injection en boucle fixe ainsi que d autres am liorations telles que le r trolavage du si ge de l aiguille Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 21 2 Le syst me CPL Agilent 1290 Infinity Description du produit Composants du syst me Composants du syst me Pompe binaire Agilent 1290 Infinity La pompe binaire Agilent 1290 Infinity int gre de nouveaux apports technolo giques pour surmonter les probl mes rencontr s lors du pompage de solvants CPL des pressions ultra hautes et des d bits lev s des syst mes d entra ne ment des pistons robustes un nouveau mat riel pour les pistons pour r sister non seulement la charge de travail mais galement pour assurer le transfert actif de la chaleur des joints des changeurs de chaleur microfluidiques et le Jet Weaver un dispositif de m lange microfluidique La pompe peut fournir un d bit compris dans la plage 0 05 5 mL min des pressions allant jusqu 1200 bar Le module de la pompe binaire Agilent 1290 Infinity comprend deux pompes haute pression 1200 bar identiques un d gazeur solvant deux voies et une vanne de s lection de solvant quatre voies d entr e un clapet de purge automatique et un dispositif de m lange faible volume le Jet Weaver le tout dans un seul
165. y 3 Comment am liorer la capacit d analyse Certains laboratoires fonctionnent dans un environnement de haut d bit HT o la charge de travail requiert des centaines voire des milliers d injections ex cuter pour achever un travail important Dans ces situations il est forte ment recommand de r duire les dur es de cycle car m me quelques secondes conomis es par injection r duiront la dur e globale n cessaire l ach ve ment du travail d un montant significatif et utile Les principales tapes sui vre pour parvenir des dur es de cycle plus rapides et des op rations de haut d bit sont e Utiliser des s parations rapides e Faire chevaucher les injections e R duire le temps de stabilisation e Alterner la r g n ration des colonnes La premi re tape permettant de parvenir des op rations de hauts d bits consiste s assurer que les m thodes utilis es ont de courtes dur es de cycle c d que ce sont des m thodes de chromatographie rapide L utilisation de colonnes courtes avec un emballage de taille des particules de 1 8 um est id a le cet effet en raison de la haute disponibilit efficace d une colonne courte Si les m thodes impliquent une s paration isocratique ceci permet d obtenir des dur es de cycle plus rapides car aucune stabilisation de la colonne n est requise entre les analyses Cependant les m thodes de gradient sont le plus souvent employ es en raison de
166. z et utilisez la colonne seulement dans le sens d coulement indiqu sur la colonne 2 Utilisez uniquement des solvants d un niveau de qualit lev e pour chro matographie 3 Filtrez tous les tampons aqueux et tous les chantillons l aide d un 0 2 umfiltre appropri avant de les utiliser 4 Remplacez les flacons de phase mobile au moins tous les deux jours N ajou tez pas de phase mobile un flacon d j utilis utilisez toujours un flacon neuf 5 N utilisez pas de phase mobile tamponn e forte concentration en sel 50 mM avec des concentrations lev es d ac tonitrile en raison du risque de pr cipitation Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide Optimisation du syst me CPL Agilent 1290 Infinity 3 6 Utilisez l accessoire de rin age des joints avec des phases mobiles tampon n es forte concentration en sel 7 Ilest recommand d utiliser un filtre en ligne filtre en ligne 1290 Infinity diam tre de 2 mm r f rence 5067 4638 pour pi ger les particules et ral longer la dur e de vie de la colonne 8 Remplacez le filtre lorsque la pression s accro t de 10 Purgez les pompes et les raccords jusqu la colonne de toute phase mobile tamponn e et faites passer 5 ml de solvant avant d installer la colonne dans l instrument 10 Purgez la colonne avec une phase mobile compatible en commen ant un d bit de 0 1 ml min pour une colonne de diam tre
167. zone de l chantillonneur automatique puis s lectionnez Method dans le menu contextuel Syst me CLP Agilent 1290 Infinity Manuel du syst me et guide de r f rence rapide 105 5 106 Guide de d marrage rapide a Dans la fen tre Method pour 1 1290 Infinity Autosampler entrez les param tres suivants Volume d injection 1 0 ul Injection avec lavage de l aiguille Mode Voie de lavage Dur e 6 s b Les autres param tres peuvent conserver leurs r glages par d faut Cli quez sur 0K pour quitter la fen tre Les modifications sont transmises au module de l chantillonneur auto matique Effectuez un clic droit sur la zone du compartiment colonne thermostat TCC puis s lectionnez Method dans le menu contextuel a Dans la fen tre Method pour le 1290 Infinity TCC entrez les param tres sui vants Temp rature gauche 40 C Temp rature droite Combin e b Les autres param tres peuvent conserver leurs r glages par d faut Cli quez sur 0K pour quitter la fen tre Les modifications sont transmises au module du TCC Effectuez un clic droit sur la zone du d tecteur barrette de diodes puis s lectionnez Method dans le menu contextuel a Dans la fen tre Method pour le 1290 Infinity DAD entrez les param tres sui vants Use Signal d sactivez tous les signaux sauf le Signal A en d cochant les cases appropri es Signal A 250 nm bande passante 100 nm r f 360 nm bande pas

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