SeroHSV™ IgG - Savyon Diagnostics Ltd
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1. 2 ml MA151 01F 08 06 15 11 12 13 14 Substrat TMB Solution pr te l emploi contenant du 3 3 5 5 Tetramethylbenzidine en tant que chromog ne et du p lroxyde comme substrat 1 Flacon de 14 ml Solution d arr t de la r action Solution pr te l emploi de HS0 1M 1 Flacon de 15 ml Couvercle pour la micro Plaque 1 Unit Manuel d instructions 1 Mat riel additionnel n cessaire non fourni l 2 a a 10 11 Tubes essais propres pour proc der la dilution des s rums de patients tester Flacon de dilution usage unique en mati re plastique pour diluer le conjugu la p roxydase concentr Micro pipettes volume ajustable et pipettes multi canaux gamme de 5 50 50 200 et 200 1000ul avec embouts jetables Une fiole jaug e de 1000 ml Un cylindre gradu de 50 ml Une bouteille de lavage Papier absorbant Vortex Un bain marie 37 C quip d un couvercle ou une chambre humide au sein d un incubateur 37 C Un lecteur de micro plaques ELISA avec filtres de 450 et 620nm Eau distill e ou d min ralis e 2 fois Pr cautions d emploi Pour usage DIAGNOSTIC In Vitro l Ce coffret contient du s rum humain test par des m thodes approuv es par la FDA et r v l N gatif pour l AgHBs et pour les anticorps de PHCYV et de l HIV Toutefois compte tenu du fait qu aucune m thode reconnue ne permet de garantir que les pro2. et 50ul de chaque dilution au 1 105 des chantillons de s rum tester dans les puits respectifs des barrettes de la micro plaque 7 Couvrir avec le couvercle et laisser incuber durant 1h 37 C en chambre humide 8 Jeter le liquide contenu dans les puits 9 Etapes de Lavages Lavage Manuel Remplir chaque puits ras bord avec le tampon de lavage vider le liquide et r p ter l op ration 3 fois au total Lavage automatique Remplir chaque puits avec 350ul de tampon de lavage vider le liquide et r p ter l op ration 3 fois au total MA151 01F 08 06 15 S cher les barrettes et le support en les retournant et en les tapotant doucement sur un papier absorbant propre C Incubation avec le conjugu HRP 12 Le conjugu anti IgG humaine HRP concentr doit tre dilu sa concentration d usage juste avant son utilisation Diluer le conjugu anti IgG humaine HRP au 1 300 avec le diluant pour conjugu Par exemple pour 2 barrettes pr parer un minimum de 3ml de conjugu dilu en proc dant comme suit M langer 10ul de conjugu concentr avec 3ml de diluant pour conjugu D poser 50ul de conjugu HRP dilu dans chaque puits 13 Couvrir les barrettes avec le couvercle et laisser incuber durant 1h 37 C en chambre humide Jeter le liquide contenu dans les puis proc der l tape de lavage telle qu elle est d crite ci dessus Incubation avec le Substrat TMB D pos
3. CE SeroHSV IgG M thode immuno enzymatique ELISA pour le dosage semi quantitatif des anticorps anti IgG sp cifiques de L Herpes Simplex Virus Type I 2 Coffret de 96 tests Num ro de r f rence SAV 151 096 Pour usage diagnostic In Vitro Pour usage professionnel uniquement Conserver entre 2 et 8 C Ne pas congeler Mall Savyon Diagnostics Ltd 3 Habosem St Ashdod 7761003 ISRAEL Tel 972 8 8562920 Fax 972 8 8523176 E mail support savyondiagnostics com Utilisation SeroHSVTM I9G est destin effectuer le dosage semi quantitatif des anticorps anti IgG sp cifiques des Virus 1 et 2 de L HERPES SIMPLEX par m thode immuno enzymatique ELISA Pour Usage DIAGNOSTIC In Vitro Int r t diagnostic du test L Herpes Simplex Virus HSV est le virus le plus fr quemment rencontr dans les infections aig es r cidives chez les tres humains Une fois la maladie contract e l HSV infecte les cellules nerveuses sensorielles innervant les muqueuses infect es lors de l infection aig e et migre dans les ganglions sensoriels localis s pour y demeurer l tat latent A l tat actif le virus provoque l apparition de v sicules et d ulc res La plupart des personnes infect es par l HSV peuvent produire des particules virales p riodiquement m me en l absence de signes cliniques 7 1 Il existe deux types d HSV L HSV type 1 connu sous le nom d Herp s labial qui le
4. Calibration y 0 0142x 0 2988 R 0 9949 2 Inter essai ECHANTILLONS OD 450 620 nm Valeur C V moyenne 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 N gatif aE HE HSV IgG BU mi Interpr tation des r sultats Bibliographie IgG RESULTAT DIAGNOSTIC BU ml l lt 10 BU ml N gatif Absence Absence d anti d infection HSV Ashley R L Wold P clinical Microbiology reviews Jan 1999 12 1 1 8 2 Di Carlo R P Medscape 1999 Preventing genital HSV RE S s infections on a large scale 13 meeting of the international gt 10 BU ml Positif Ea Pr sence d une society for STD research July 11 14 1999 pres 3 Diaz Mitoma F Sibbald R et al JAMA 1998 280 887 92 Oral Famiciclovir for the suppression of recurrent genital Herpes A randomized controlled trial The International Herpes Management Forum IHMF The 12 ro management strategies in Herpes 1997 1 70 lev e d anti chronique en 5 Steben M Sacks S L The Canadian Journal of Human IgG a Sexuality November 1997 1 14 http hwcweb hwc ca r o 1 ant rieure Genital Herpes The epidemiology and control of a common l La diff rentiation entre infection en cours et ant rieure se fait en sexually transmitted disease testant un deuxi me chantillon pr lev 2 4 semaines apr s le 6 Screening for genital Herpes Simplex Guide to clinical premier Si la concentration en BU ml est augment e de mani re preventive servic
5. ampon de dilution du conjugu vert Tampon pr t l emploi Contient moins de 0 05 de Procline comme conservateur 1 Flacon de 40 ml Calibrateur P 10 S rum humain Positif en IgG de l HSV pr t l emploi une concentration de 10BU ml Unit s Arbitraires de Fixation Contient moins de 0 1 d azide de Sodium et de 0 05 de Procline comme conservateurs 1 Flacon de 2 ml Calibrateur P 50 S rum humain Positif en IgG de l HSV pr t l emploi une concentration de 50 BU ml Unit s Arbitraires de Fixation Contient moins de 0 1 d azide de Sodium et de 0 05 de Procline comme conservateurs 1 Flacon de 2 ml Calibrateur P 100 S rum humain Positif en IgG de l HSV pr t l emploi une concentration de 100 BU ml Unit s Arbitraires de Fixation Contient moins de 0 1 d azide de Sodium et de 0 05 de Procline comme conservateurs 1 Flacon de 2 ml Contr le N gatif S rum humain N gatif en IgG de l HSV pr t l emploi Contient moins de 0 05 de Procline et de 0 1 d azide de sodium comme conservateurs 1 Flacon de 2 ml Contr le Positif S rum humain Positif en IgG de l HSV pr t l emploi Contient moins de 0 05 de Procline et de 0 1 d azide de sodium comme conservateur 1 Flacon de 2 ml Conjugu la Peroxydase concentr 300X Conjugu anti IgG humaine sp cifique chaine y coupl la p roxydase Contient moins de 0 05 de Procline comme conservateur 1 Flacon de 0
6. ation d anticorps sp cifiques fix s sur l antig ne de la plaque Mode op ratoire Dans les puits de la microplaque sensibilis s avec les antig nes de l Herp s simplex 1 et 2 4 Introduire 50ul de calibrateur P10 P50 P100 de contr le N gatif de contr le Positif ainsi pu une dilution au 1 105 de chacun des chantillons 4 Couvrir la plaque et laisser incuber 1h 37 C en chambre humide 4 Laver 3 fois avec le tampon de lavage 4 Ajouter 50ul de Conjugu HRP dilu au 1 300 4 Couvrir la plaque et laisser incuber 1h 37 C en chambre humide 4 Laver 3 fois avec le tampon de lavage 4 Ajouter 100ul de Substrat TMB 4 Couvrir la plaque et laisser incuber 15 min temp rature ambiante Composition du coffret 4 Ajouter 100ul de solution d arr t 4 Lire la densit optique 450 620nm 4 Calculer et interpr ter les r sultats Coffret de 96 tests Le 10 Micro Plaque sensibilis e PHSV 96 puits 8X12 s cables puits par puits sensibilis s avec les antig nes HSV type 1 et 2 pr sent s dans une pochette d aluminium scell e contenant une plaquette de produit d shydratant 1 Plaque Tampon de lavage concentr 20 X Tampon PBS Tween Contient moins de 0 05 de Procline comme conservateur 1 Flacon de 100ml Tampon de dilution des chantillons et des contr les bleu Tampon pr t l emploi Contient moins de 0 05 de Procline comme conservateur 1 Flacon de 30 ml T
7. duits d riv s de sang humain ne transmettent pas d infection tous les composants de ce coffret issus de sang humain doivent tre manipul s comme des produits potentiellement infectieux La solution de substrat TMB est un produit irritant pour la peau et pour les muqueuses Tout contact direct est viter Tous les composants de ce coffret ont t calibr s et test s par lot Par cons quent il est recommand de ne pas m langer les composants provenant de lots diff rents car cela peut fausser les r sultats L acide sulfurique dilu H2SO4 1M est un produit irritant pour les yeux et pour la peau En cas de contact avec les yeux rincer abondamment l eau courante et consulter un m decin sp cialis Conservation des r actifs l Tous les r actifs fournis doivent tre conserv s entre 2 et 8 C Avant que les flacons ne soient ouverts les r actifs sont stables jusqu la date de p remption indiqu e sur le coffret Les r actifs encore bouch s ou scell s peuvent tre conserv s durant quelques heures temp rature ambiante sans provoquer de d t riorations de ces derniers NE PAS CONGELER Apr s ouverture du coffret la p remption est de 90 jours Les barrettes de micro puits non utilis es doivent tre replac es dans la pochette en papier d aluminium en pr sence de la plaquette de produit d shydratant Rouler l extr mit et obturer l aide de papier adh sif tout le long de l ou
8. er 100ul de Substrat TMB dans chaque puits couvrir les barrettes avec le couvercle et laisser incuber 15 minutes temp rature ambiante La r action est arr t e par addition de 100ul de solution d arr t H SO 1M dans chaque puits E D termination des r sultats 17 Lire la densit optique 450 620nm et enregistrez les r sultats obtenus Cette lecture doit tre effectu e moins de 30 minutes apr s l addition de solution d arr t qui interrompt la r action chromog nique Note Avant la lecture liminer toute bulle d air pouvant se trouver dans le liquide contenu dans les puits et essuyer soigneusement le dessous de la plaque ELISA Crit res de validation du test Le test est valide si les crit res suivant sont atteints l 2 P100 D O gt 1 1 Contr le N gatif lt 10BU ml Voir le paragraphe Calcul des r sultats du test Contr le Positif gt 30 BU ml Voir le paragraphe Calcul des r sultats du test Si ces crit res ne sont pas atteints le test est consid r comme n tant pas valide et doit tre recommenc Calcul des r sultats des tests M thode de calcul manuel sur papier millim tr l Reporter en ordonn es axe des Y les densit s optiques obtenues pour les 3 calibrateurs P10 P50 et P100 et en abscisses axe des X les concentrations correspondantes BU ml Tracer la courbe d talonnage reliant ces points Sur la courbe d talonna
9. es 2 ed Infectious diseases Columbia significative 1l s agit d une infection en cours Presbyterian Medical Center http cpmenet columia edu lt 50 BU m IgG en cours ou ant rieure gt 50 BU ml Fortement positif Pr sence d une 4 Concentration infection HSV Pour valuer si la diff rence entre les 2 mesures est r ellement 7 Atlanta Maternal Fetal Medicine P G Clinical Discussions significative le rapport des valeurs obtenues entre les 2 1996 4 4 http www atlanta mfm com chantillons doit tre le suivant 8 Riott I Riott s Essential Immunology 9 edition Pp 112 129 R BU2 15 9 Tortora G S Grabowski S R Principles of anatomy and BORIS physiology 8 edition Pp 88 950 BU1 Concentration en BU ml du ler chantillon 10 Erlich Kims Safrim Sharon June 1998 Herpes Simplex Virus The Aids Knowledge Base BU2 Concentration en BU ml du 2 me chantillon T EEE T EEEE E Si R 21 7 la diff rence est statistiquement significative p 0 005 11 Brown Z Selke S Zeh S N Engl J Med 1997 337 509 15 Cette quation n est pas valid e si les 2 chantillons ont une valeur The acquisition of Herpes Simplex Virus during pregnancy inf rieure 10 BU ml q Ip p 8 preg y MA151 01F 08 06 15 4 CE European Authorized Representative Obelis s a Boulevard G n ral Wahis 53 B 1030 Brussels Belgium Tel 32 2 732 59 54 Fax 32 2 732 60 03 E mail mail obelis n
10. es anticorps de l HSVI de ceux de l HSV2 est la technique Western Blot WB qui est un test difficile r aliser et interpr ter Si l on tient compte du fait qu une prise de sang est un acte facile r aliser le diagnostic s rologique sera la m thode de d pistage la plus ais e Le test SeroHSV IgG permet la recherche des IgG anti HSV par m thode ELISA Principe du test 1 Un m lange de prot ines de virus partiellement purifi es de PHSV1 et de l HSV2 est adsorb sur la micro plaque du test SeroHSV IgG 2 Le s rum tester est dilu au 1 105 et incub dans la plaque de SeroHSV IgG Durant cette tape les anticorps sp cifiques se fixent l antig ne 3 Les anticorps non sp cifiques sont limin s par lavages 4 On ajoute ensuite un conjugu anti IgG humaine coupl la p roxydase HRP Durant cette tape l HRP se fixe au complexe antig ne anticorps form au pr alable 5 L exc s de conjugu non fix est limin par lavages On ajoute alors un substrat TMB qui hydrolys par la p roxydase va d velopper une coloration bleue du substrat 6 la r action enzymatique est stopp e par l addition d une solution d acide sulfurique La couleur bleue devient alors jaune 7 La densit optique de la solution ainsi obtenue est lue sur un lecteur de plaques ELISA une longueur d onde de 450 620 nm 8 La densit optique est proportionnelle la concentr
11. et y i Limitation de temp rature TE MA151 01F 08 06 15 Dispositif m dical pour le diagnostic in vitro Repr sentant autoris en Europe Fabriqu par Savyon Diagnostics Ltd 3 Habosem St Ashdod 7761003 israel Tel 972 8 856 2920 Fax 972 8 852 3176 Distribu par Thea ATD FOR BAT Ral Theradiag 14 Rue Ambrioise Croizat 77183 Crossy Beaubourg Tel 33 1 64 62 10 12 Fax 33 1 64 62 09 66 info theradiag com
12. ge lire la concentration des contr les positif et n gatif en BU ml Le contr le n gatif doit tre lt 10BU ml Le contr le positif doit tre gt 30BU ml Si le contr le n gatif et ou positif ne se trouve pas compris dans ces limites le test doit tre r p t Lire les concentrations des chantillons en BU ml sur la courbe d talonnage partir des densit s optiques obtenues voir exemple 1 Exemple 1 Interpolation des r sultats Limites du test Lire en ordonn es Y1 la densit optique de l chantillon et tracer une ligne horizontale jusqu la courbe d talonnage A partir de 1 ce point d interception tracer une ligne verticale jusqu en abscisses X1 Lire la concentration de l chantillon en BU ml En aucun cas un test s rologique unique ne peut tre d terminant pour tablir un diagnostic d finitif Toutes les donn es cliniques doivent tre prises en consid ration 2 Un chantillon pr lev trop t t durant la p riode d infection primaire est susceptible de ne pas contenir d anticorps un Calibrateurs IgG BU ml D O taux d c labl 450 620nm Si une infection par l HSV est soup onn e pr levez un chantillon 2 4 semaines apr s le premier et testez les 2 en P 100 1 742 Performances du test Echantillon Y 1 256 Pr cision 1 Intra essai ECHANTILLONS Valeur CV Moyenne Syst me de calibration SeroHSV IgG Signal en SeroHSV IgG
13. gnostic exact et pr coce est d terminant pour initier une th rapeutique appropri e et pour ma triser la fr quence des risques de r cidive Durant ces derni res ann es on a pu constater un accroissement consid rable des cas rapport s d Herp s g nital Aux Etats Unis lorsque l on a atteint l ge de 40 ans le risque d infection par l HSV 2 est compris entre 20 et 25 La pr valence est plus lev e parmi les femmes que parmi les hommes L Herp s peut repr senter jusqu 50 des Maladies Sexuellement Transmissibles MST L isolement du virus la d tection de l antig ne par immuno fluorescence directe IFD et les tests de s rologie sont les plus couramment utilis s pour le diagnostic in vitro des infections par PHSV La culture positive et PIFD permettent de d terminer le type du virus donnent des r sultats consid r s comme tant cat goriques Toutefois les difficult s de pr l vement et de transport la longueur et la complexit de ces m thodes de d tection directe font que ces m thodes ne peuvent tre utilis es comme test de d pistage La plupart des tests s rologiques disponibles bas s sur une technique ELISA IFI ou d agglutination bien que plus ais s r aliser posent le probl me crucial de diff rentiation entre les deux types d HSV du fait de la similitude antig nique importante entre l HSVI et l HSV2 Le standard universel pour diff rentier l
14. plus fr quemment infecte la r gion orale provoquant des boutons de fi vre L HSV type 2 connue sous le nom d Herp s g nital qui le plus souvent infecte la sph re g nitale et la zone p ri anale Toutefois les deux types d Herp s sont susceptibles de provoquer des infections des localisations diverses et peuvent galement provoquer des infections de la peau des yeux et du cerveau La fr quence de r cidives de l HSV 2 est sup rieure celle de PHSV 1 Les HSV de type 1 et 2 se transmettent en pr sence ou en absence de v sicules ou de tout autre sympt me clinique La contamination se fait par la salive les s cr tions respiratoires et par contact direct contact sexuel par la peau ete 1 Les infections par HSV pr sentent des cons quences pathologiques graves particuli rement dans le cas de patients immuno d prim s et chez les femmes enceintes La transmission du virus au nouveau n durant l accouchement peut provoquer chez celui ci une maladie n o natale mettant sa vie en danger Les infections g nitales par l HSV 2 sont associ es un risque accru de cancer du col de l ut rus Initialement les infections par l HSV se caract risent par la pr sence transitoire d IgM suivie par une apparition plus tardive MA151 01F 08 06 15 d IgG et d IgA qui ont tendance persister dans le temps Il est possible de retrouver des IgM en cas de r cidives graves Un dia
15. t les chantillons cliniques avant d effectuer le test 2 D terminer le nombre total d chantillons tester Pour chaque s rie de tests inclure 3 puits calibrateurs P 10 P 50 P 100 1 puits contr le n gatif et 1 puits contr le positif 3 Retirer la micro plaque de sa pochette d aluminium en coupant une extr mit proche de la partie scell e Laisser le nombre requis de barrettes selon le calcul effectu pr c demment sur le support Les barrettes de micro puits non utilis es doivent tre replac es dans la pochette aluminium en pr sence de la plaquette de produit d shydratant Rouler l extr mit et obturer l aide de ruban adh sif tout le long de l ouverture afin d en assurer l tanch it 4 Diluer le tampon de lavage au 1 20 avec de l eau d min ralis e 2 fois ou de l eau distill e Par exemple pour pr parer 1 litre de tampon de lavage ajoutez 50ml de tampon de lavage concentr 950ml d eau d min ralis e 2 fois ou d eau distill e B Incubation des chantillons s riques et des contr les 5 Diluer chaque s rum de patient tester au 1 105 avec le diluant pour s rum fourni comme suit Ajouter 10 ul de s rum 200ul de diluant pour s rum 1 21 et rediluer en reprenant 25ul de la dilution au 1 21 que l on ajoute 100ul de diluant pour s rum 6 D poser 50ul de chacun des 3 calibrateurs P 10 P 50 P 100 le contr le n gatif le contr le positif
16. verture afin d en assurer l tanch it Il est possible que des cristaux se forment dans le tampon de lavage concentr 20X Ce ph nom ne est parfaitement normal il suffit de r chauffer le tampon 37 C avant de le diluer Apr s dilution la solution est stable durant 21 jours conserv e entre 2 et 8 C Pr l vements Pr parer les s rums partir d chantillons sanguins pr lev s aseptiquement selon les m thodes classiques Ne pas utiliser d chantillons de s rum ayant t inactiv par la chaleur Il est recommand d viter d utiliser des chantillons lip miques troubles ou contamin s Toute pr sence de mati res en suspension ou de pr cipit peut fausser les r sultats De tels chantillons peuvent tre clarifi s par centrifugation ou par filtration avant d effectuer le test Conservation des pr l vements Les chantillons doivent tre conserv s entre 2 et 8 C et test s dans les 7 jours suivant leur pr l vement Si le d lai de stockage pr vu est plus long aliquoter les chantillons et congelez 20 C Eviter les tapes r p t es de d cong lation et recong lation Mode op ratoire Manuelle Proc dure sur automate disponible sur demande A Pr paration des r actifs l Ramener tous les composants du coffret ainsi que les chantillons cliniques temp rature ambiante Bien homog n iser les calibrateurs P 10 P 50 P 100 les contr les n gatif et positif e
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