hydragel 7 protein(e) - Laboratoire de biologie médicale du Quai
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1. 2 MECHES TAMPONNEES Pr paration Les m ches en ponge tamponn es sont pr tes a l emploi Chaque m che tamponn e contient tampon tris barbital pH 9 2 0 3 azoture de sodium composants sans danger aux concentrations utilis es n cessaires pour des performances optimales ATTENTION Les m ches tamponn es contiennent 0 92 de barbital 1 03 de barbital sod et 0 3 d azoture de sodium Ne pas avaler En cas d ingestion consulter imm diatement un m decin L azoture de sodium peut former des complexes explosifs ou toxiques en cas de contact avec des acides du plomb ou du cuivre Au moment de I limination des m ches viter tout contact avec ces produits Utilisation Les m ches en ponge tamponn es jouent un r le de r servoir de tampon pour l lectrophor se et assurent le contact entre le gel et les lectrodes 1 NOTICE D UTILISATION SEBIA Fran ais HYDRAGEL 7 15 amp 30 PROTEIN E 2009 12 Conservation stabilit et signes de d t rioration Les m ches tamponn es peuvent tre conserv es a temp rature ambiante ou au r frig rateur Elles doivent tre conserv es horizontalement dans leur sachet de protection la fl che sur le devant du kit doit tre point e vers le haut Elles sont stables jusqu a la date d expiration indiqu e sur le kit ou sur le sachet des m ches tamponn es NE PAS CONGELER Eliminer les m ches tamponn es si le sachet est ouvert ou si les m ches sont s2. HYDRAGEL 7 PROTEIN E Ref 4100 HYDRAGEL 15 PROTEIN E Ref 4120 HYDRAGEL 30 PROTEIN E Ref 4140 2009 12 HYDRAGEL 7 15 amp 30 PROTEIN E 2009 12 UTILISATION LHYDRAGEL 7 PROTEIN E et l HYDRAGEL PROTEIN E 15 30 sont des gels d agarose qui permettent la s paration en tampon alcalin pH 9 2 des prot ines du s rum humain et de l urine par lectrophor se dans le syst me semi automatique HYDRASYS Les prot ines du s rum normal humain sont s par es en cinq fractions majeures Le syst me HYDRASYS permet de r aliser toutes les s quences jusqu l obtention du gel pr t pour l analyse qualitative ou quantitative Les prot ines s par es sont color es par une solution d amidoschwarz et l exc s de colorant est limin en milieu acide Les profils lectrophor tiques sont analys s visuellement pour d tecter les anomalies La densitom trie donne une quantification relative pr cise de chaque zone individualis e Chaque gel d agarose est pr vu pour l analyse de 7 chantillons pour le kit HYDRAGEL 7 PROTEIN E 15 chantillons pour le kit HYDRAGEL 15 PROTEIN E 30 chantillons pour le kit HYDRAGEL 30 PROTEIN E A usage in vitro exclusivement PRINCIPE DU TEST 16 L lectrophor se des prot ines du s rum ou d autres liquides biologiques humains est une analyse tr s utile en laboratoire d analyses cliniques pour rechercher les modifications du profil prot ique Des technique
3. 0 9 0 3 1 4 0 8 Alpha 1 0 1 0 2 2 1 9 8 4 6 Alpha 2 0 1 0 3 0 9 3 1 1 8 B ta 0 1 0 3 1 1 3 8 2 0 Gamma 0 1 0 5 1 3 5 6 2 9 Exactitude Migration de quatre vingt dix chantillons diff rents s rums normaux et pathologiques sur gels HYDRAGEL PROTEIN E 15 30 et sur un autre syst me d agarose disponible dans le commerce Les param tres de corr lation entre les deux syst mes de gel y HYDRAGEL pour chaque fraction sont Fraction Coefficient de corr lation Intersection y Pente Limites des valeurs de Albumine 0 983 3 673 0 942 54 9 72 9 Alpha 1 0 984 0 937 0 972 1 2 6 7 Alpha 2 0 984 0 635 0 977 7 6 16 5 B ta 0 953 0 071 0 984 6 9 15 0 Gamma 0 976 0 435 1 033 6 0 18 9 Les valeurs sont d finies dans le syst me HYDRAGEL 15 amp 30 PROTEIN E Sensibilit Un s rum pathologique avec une prot ine monoclonale 21 2 g l est dilu en s rie puis les dilutions sont analys es sur gel HYDRAGEL PROTEIN E 15 30 Apr s analyse qualitative a l il nu la plus forte dilution permettant de voir la bande monoclonale est le 1 128 La plus faible concentration d une bande monoclonale d tect e est donc de l ordre de 0 17 g l NOTE Selon la position de la bande monoclonale et le fond polyclonal de la zone des gammaglobulines le seuil de d tection d une paraprot ine peut varier HYDRAGEL 7 15 amp 30 PROTEIN E 2009 12 Analyse des urines concentr es Les r su
4. applicateurs pour HYDRAGEL PROTEIN E 15 30 30 chantillons a plat sur la paillasse num rotations puits vers le haut Fig 1 D poser 10 pl de s rum pur ou d urine concentr e dans chaque puits le chargement de chaque applicateur ne doit pas exc der 2 minutes Placer I es applicateur s dans la chambre humide dents vers le haut en manipulant l es applicateur s par la protection en plastique Laisser diffuser 5 minutes apr s le d p t du dernier chantillon Pour une conservation prolong e 8 heures maximum placer la chambre humide au r frig rateur Voir la notice de la chambre humide pour les instructions d utilisation 3 Ouvrir le capot du module de migration et relever les chariots porte applicateurs et porte lectrodes ATTENTION Ne pas fermer le capot de l appareil si les chariots sont relev s 4 S lectionner le programme de migration 7 PROTEIN E pour HYDRAGEL 7 PROTEIN E ou 15 30 PROTEIN E pour HYDRAGEL PROTEIN E 15 30 dans le menu 5 Sortir les m ches tamponn es de leur emballage en les manipulant par les languettes plastiques Fixer les m ches sur le chariot porte lectrodes l aide des languettes perfor es La face de la m che fix e sur la languette vient en contact avec l lectrode Fig 2 6 Sortir le gel de son emballage Eliminer rapidement l exc s de liquide en surface en effleurant le gel avec un papier filtre fin ATTENTION Ne surtout pas laisser le papier filtr
5. au r frig rateur II est stable jusqu la date d expiration indiqu e sur le kit ou sur l tiquette du flacon de d colorant NE PAS CONGELER Le d colorant dilu est stable pendant 1 semaine a temp rature ambiante en flacon ferm Eliminer le d colorant dilu s il y a un changement d aspect ou apparition d un trouble d a une contamination microbienne Ne pas ajouter d azoture de sodium En cas de conservation prolong e au del d une semaine de la solution dilu e ajouter 50 pl de ProClin 300 pour pr venir toute prolif ration microbienne Le d colorant dilu contenant du ProClin est stable en flacon ferm a temp rature ambiante ou au r frig rateur jusqu a la date d expiration indiqu e sur le kit ou sur l tiquette du flacon de d colorant 2 SOLUTION DE LAVAGE HYDRASYS Pr paration Chaque flacon de solution de lavage HYDRASYS concentr e SEBIA r f rence N 4541 10 flacons de 80 ml chacun doit tre compl t a 5 litres avec de l eau distill e ou d min ralis e Apr s dilution la solution de lavage contient tampon alcalin pH 8 8 0 3 azoture de sodium ATTENTION La solution de lavage concentr e contient 0 625 d azoture de sodium Ne pas avaler En cas d ingestion consulter imm diatement un m decin L azoture de sodium peut former des complexes explosifs ou toxiques en cas de contact avec des acides du plomb ou du cuivre Au moment de l limination des solutions laver abondamm
6. ches 3 DILUANT COLORANT Pr paration Le diluant colorant concentr doit tre utilis comme d crit dans le paragraphe COLORANT AMIDOSCHWARZ II contient une solution acide Utilisation Pour la pr paration du colorant amidoschwarz Conservation stabilit et signes de d t rioration Le diluant colorant concentr peut tre conserv a temp rature ambiante ou au r frig rateur II est stable jusqu la date d expiration indiqu e sur le kit ou sur l tiquette du flacon de diluant NE PAS CONGELER Ne pas ajouter d azoture de sodium 4 COLORANT AMIDOSCHWARZ Pr paration Le n ng amidoschwarz concentr est une solution visqueuse qui peut ventuellement g lifier ce qui n affecte absolument pas la qualit de la solution finale et son pouvoir de coloration Dans tous les cas pour obtenir une parfaite reconstitution du colorant il faut respecter le protocole suivant 1 Ajouter environ 15 mL de diluant colorant au flacon d amidoschwarz concentr Refermer soigneusement le flacon Agiter tr s vigoureusement le flacon pendant au minimum 5 secondes Verser la solution obtenue dans le r cipient de pr paration de la solution de coloration Renouveler cette op ration deux fois trois fois si n cessaire Verser le reste du diluant dans le r cipient de pr paration de la solution de coloration Compl ter 300 mL avec de l eau distill e ou d min ralis e Agiter parfaitement cette solution pendant 5
7. d coup s usage unique pour le d p t des chantillons Conservation Les applicateurs doivent tre conserv s dans un endroit sec temp rature ambiante ou au r frig rateur 6 PAPIERS FILTRES FINS Utilisation Feuilles de papier filtre usage unique pour l absorption de l exc s de liquide la surface du gel avant l application des chantillons Conservation Les papiers filtres fins doivent tre conserv s dans un endroit sec temp rature ambiante ou au r frig rateur R ACTIFS N CESSAIRES NON FOURNIS 1 D COLORANT Pr paration Chaque flacon de d colorant concentr SEBIA r f rence N 4540 10 flacons de 100 ml chacun doit tre dilu au 1 1 000 avec de l eau distill e ou d min ralis e il permet d obtenir 100 litres de solution d colorante Pr lever par quantit de 5 ml et compl ter 5 litres avec de l eau distill e ou d min ralis e Apr s dilution la solution d colorante contient acide citrique 0 5 g l Utilisation Pour la d coloration c est dire l limination de l exc s de colorant apr s coloration du gel Pour le rin age de la cuve de coloration apr s lavage Pour neutraliser l acidit du d colorant mettre dans le flacon de vidange vide 15 ml de soude 50 solution du commerce D HYDRAGEL 7 15 amp 30 PROTEIN E 2009 12 Conservation stabilit et signes de d t rioration Le d colorant concentr peut tre conserv a temp rature ambiante ou
8. peuvent donner au point de d p t une trace due la d naturation de prot ines ou de lipoprot ines Plus le s rum vieillit plus les b ta lipoprot ines sont anodiques De m me apr s cong lation les b ta lipoprot ines sont beaucoup plus anodiques que sur s rums frais leur migration varie de la zone b ta la zone alpha 2 voire alpha 1 Pr paration des chantillons 1 S rums Utiliser directement les chantillons de s rum non dilu s Apr s conservation au r frig rateur entre 2 et 8 C ou cong lation certains s rums en particulier ceux qui contiennent une cryoglobuline ou un cryogel deviennent visqueux ou troubles Ces s rums pr sentent des difficult s de manipulation lors du d p t avec l applicateur HYDRASYS car ils ne diffusent que tr s difficilement sur les dents de l applicateur Pr traiter ces s rums avec le Fluidil ajouter 25 pl de Fluidil 75 ul de s rum agiter 15 secondes au vortex puis suivre la technique HYDRAGEL 7 15 amp 30 PROTEIN E 2009 12 2 Urines concentr es L analyse est r alis e sur des chantillons dont la concentration prot ique est ramen e a environ 15 20 g l par concentration au moyen d un dispositif appropri IMPORTANT Certaines urines contiennent une concentration importante de sels Il s ensuit une d formation du gel au cours de la migration qui risque de conduire a une perturbation des profils apr s lectrophor se Il convient d liminer cet exc s de
9. BIA r f rence N 1216 ou HYDRAPLUS 2 SEBIA r f rence N 1217 pour le chargement des applicateurs Chambre humide r f rence N 1270 fournie avec le syst me HYDRASYS Bidons plastiques fournis avec le syst me HYDRASYS Pipettes de 10 pl et 200 pl Densitom tre scanner capable de lire un film de 82 x 51 mm ou 82 x 102 mm 570 nm filtre jaune HYRYS SEBIA GELSCAN SEBIA DVSE SEBIA ou scanner quip du logiciel PHORESIS SEBIA Se reporter aux instructions de chaque appareil pour son utilisation et sa calibration 7 Porte film pour le traitement des demi gels SEBIA r f rence N 1278 N D VF o CHANTILLONS ANALYSER Pr l vement et conservation des chantillons L analyse se fait sur chantillons frais Les s rums ou les urines doivent tre pr lev s selon la proc dure utilis e pour tout test de laboratoire d analyses cliniques Les chantillons peuvent tre conserv s une semaine au r frig rateur entre 2 et 8 C Pour des conservations prolong es congeler les chantillons les chantillons congel s sont stables au minimum 1 mois La conservation des s rums congel s est am lior e par addition l chantillon d azoture de sodium 0 2 g l La conservation des urines congel es est am lior e par addition l chantillon de tampon HEPES 0 1 M pH 6 75 et d azoture de sodium 0 2 g l IMPORTANT Ne pas utiliser de conservateur contenant de l acide borique Les chantillons d congel s
10. a 10 minutes Le colorant est pr t a l emploi REMARQUE Une reprise incompl te du colorant peut entra ner une mauvaise coloration de la fraction albumine baisse du pourcentage ou trou blanc dans la fraction Apr s dilution la solution colorante contient solution acide pH 2 amidoschwarz 4 g L thyl ne glycol 6 7 composants sans danger aux concentrations utilis es n cessaires pour des performances optimales ATTENTION Nocif en cas d ingestion Utilisation Pour la coloration des gels apr s s paration lectrophor tique des prot ines IMPORTANT Le colorant est uniquement destin a la coloration de 10 gels Renouveler le colorant apr s 10 utilisations ONO uh or Conservation stabilit et signes de d t rioration Les solutions de colorant concentr e et dilu e peuvent tre conserv es temp rature ambiante ou au r frig rateur en flacons ferm s pour viter l vaporation La solution concentr e est stable jusqu la date d expiration indiqu e sur le kit ou sur l tiquette du flacon de colorant La solution dilu e est stable pendant 1 mois La p riode de stabilit peut tre prolong e 3 mois si la solution dilu e est conserv e au r frig rateur II est imp ratif de replacer le flacon ferm au r frig rateur imm diatement apr s chaque utilisation Ne pas stocker la solution de colorant dilu e proximit d une source de chaleur 5 APPLICATEURS Utilisation Applicateurs pr
11. anomalies des immunoglobulines plasmatiques Ig E exclues La Revue du Praticien n 9 21 03 91 p 782 a 785 Garnier J P Laurent D Clauvel J P Danon F Bousquet B Dreux C Dosages des prot ines s riques cause d erreur en cas d immunoglobuline monoclonale Act Pharm Biol Clin 1987 4 p 275 278 Guinan J E C Kenny D F Gatenby P A Detection and typing of paraproteins comparison of different methods in a routine diagnostic laboratory Pathology 1989 21 p 35 41 Keren D F High Resolution Electrophoresis and Immunofixation Techniques and Interpretation Butterworth Heinemann Woburn Ma USA 2nd ed 1994 397 pp Le Carrer D Gammapathies monoclonales mise au point sur leur exploration biochimique en 1991 Premi re partie Les techniques de diagnostic prot inologique principes et limites L Eurobiologiste 1991 Tome XXV n 194 p 203 212 Le Carrer D Gammapathies monoclonales mise au point sur leur exploration biochimique en 1991 Seconde partie Diagnostic prot inologique du my lome de la maladie de Waldenstr m et des autres gammapathies monoclonales L Eurobiologiste 1991 Tome XXV n 195 p 283 285 Le Carrer D Int r t du profil prot ique cible immunitaire en biologie clinique Revue Fran aise des Laboratoires 1993 Le Carrer D Electrophor se et Immunofixation des Prot ines S riques Interpr tations illustr es Laboratoires SEBIA 1994 120 pp Ed Hatier Pari
12. chnique SEBIA PERFORMANCES Analyse des s rums Reproductibilit intra essai Migration de trois 3 chantillons diff rents de s rum sur 3 gels HYDRAGEL PROTEIN E 15 30 d un m me lot Les moyennes carts types ET et coefficients de variation CV n 15 sont calcul s pour chaque chantillon et chaque fraction Le tableau suivant pr sente les r sultats obtenus pour les 3 chantillons FRACTION MOYENNE ET CV S rum il 2 3 1 2 3 1 2 3 Albumine 70 4 68 8 65 9 0 2 0 7 0 6 0 3 1 0 0 9 Alpha 1 1 9 1 9 1 3 0 1 0 1 0 1 3 5 3 9 7 3 Alpha 2 9 9 9 4 7 6 0 2 0 2 0 2 1 6 2 6 2 4 B ta 10 6 8 6 7 8 0 4 0 3 0 1 3 3 3 5 1 8 Gamma 7 2 11 4 17 4 0 2 0 3 0 3 3 4 2 8 2 0 Reproductibilit inter essais Migration de quinze 15 chantillons diff rents de s rum sur 5 gels HYDRAGEL PROTEIN E 15 30 d un m me lot Les coefficients de variation moyens CV carts types ET et coefficients de variation n 5 sont calcul s pour chaque chantillon et chaque fraction Les r sultats sont sensiblement les m mes pour tous les chantillons Le tableau suivant pr sente les valeurs extr mes d cart type et de coefficient de variation repr sentant tous les chantillons et un coefficient de variation moyen calcul partir de l ensemble de tous les coefficients de variation de tous les chantillons n 15 FRACTION ET CV CV MOYEN Albumine 0 2
13. e en contact prolong avec le gel pour viter sa d shydratation D poser 120 pl d eau distill e ou d min ralis e pour HYDRAGEL 7 PROTEIN E ou 200 pl pour HYDRAGEL PROTEIN E 15 30 sur le plateau de migration dans le tiers inf rieur du cadre s rigraphi Placer le gel face gel orient e vers le haut sur le plateau contre la barrette l int rieur du cadre s rigraphi Fig 3 Donner une forme concave au gel Fig 3 et le d rouler sur le plateau jusqu au contact de la goutte d eau qui doit se r partir sur toute la largeur du gel Relever l g rement le gel pour liminer les bulles d air ventuellement pi g es puis d rouler totalement le gel au contact du plateau La goutte d eau doit s taler sous toute la surface du film 7 Abaisser l ensemble des chariots jusqu en but e Dans cette position les m ches ne touchent pas le gel NE PAS FORCER LA DESCENTE DES CHARIOTS 8 Sortir I es applicateur s de la chambre humide en le s manipulant par la protection plastique liminer la protection des dents Pour l analyse de 7 et de 15 chantillons placer l applicateur en position N 6 sur le porte applicateurs Pour l analyse de 30 chantillons placer les applicateurs en positions N 3 et 9 sur le porte applicateurs IMPORTANT Les num rotations de l applicateur sont toujours dirig es vers l op rateur Fig 4 Fermer le capot du module de migration 10 D marrer imm diatement la s quence en appuya
14. ent avec une grande quantit d eau Utilisation Pour le lavage p riodique de la cuve de coloration de l HYDRASYS Par exemple pour une utilisation journali re effectuer un lavage hebdomadaire de la cuve de coloration Voir la notice de la solution de lavage pour les instructions d utilisation Conservation stabilit et signes de d t rioration Les solutions de lavage concentr e et dilu e peuvent tre conserv es temp rature ambiante ou au r frig rateur en flacons ferm s Elles sont stables jusqu la date d expiration indiqu e sur le kit ou sur l tiquette du flacon de solution de lavage liminer la solution de lavage dilu e s il y a un changement d aspect ou apparition d un trouble d une contamination microbienne 3 FLUIDIL Pr paration Le Fluidil SEBIA r f rence N 4587 1 flacon de 5 ml est pr t l emploi Utilisation Pour la dilution des chantillons visqueux ou troubles turbidit induite par la pr sence d une cryoglobuline ou d un cryogel Conservation stabilit et signes de d t rioration Le Fluidil peut tre conserv temp rature ambiante II est stable jusqu la date d expiration indiqu e sur l tiquette du flacon de Fluidil II ne doit pas y avoir de pr cipit QUIPEMENT ET ACCESSOIRES N CESSAIRES 1 Syst me HYDRASYS SEBIA r f rence N 1200 N 1201 N 1202 N 1203 N 1210 ou N 1211 Micropipetteur manuel ou automatique tel que HYDRAPLUS SE
15. ir le porte film du compartiment ouvrir le porte film et retirer le gel sec NOTE Si des taches bleues r siduelles sont observ es sur le gel apr s coloration d coloration une tape de lavage suppl mentaire avec le programme LAV ISOENZ GEL LAVAGE ISOENZ GEL permet de les liminer ou de les att nuer fortement selon leur intensit avant lecture au densitom tre scanner 2 Si n cessaire nettoyer le dos du gel support plastique avec un papier ouat humide 3 Lire au densitom tre scanner 570 nm ou avec un filtre jaune NOTE Pour les gels rang es multiples 2 ou 3 les longueurs de migration peuvent tre sensiblement diff rentes sans aucune cons quence sur les r sultats R SULTATS Contr le Qualit Pour chaque s rie d analyses il est recommand d inclure un s rum de contr le tel que le S rum de Contr le SEBIA r f rence N 4785 Valeurs La lecture 570 nm par densitom trie permet de d finir les concentrations relatives pourcentages de chaque fraction Les valeurs normales moyenne 2 carts types pour chaque fraction s rique sur gel HYDRAGEL PROTEIN E 15 30 ont t tablies partir d une population de 158 adultes hommes et femmes en bonne sant La quantification des prot ines en UV sur CAPILLARYS donne des valeurs similaires la n ph l m trie en particulier pour l albumine SEBIA propose donc une standardisation des valeurs obtenues sur HYDRAGEL en r alisant u
16. ltats obtenus sur gel HYDRAGEL PROTEIN E 15 30 apr s analyse quantitative et qualitative indiquent une tr s bonne r p tabilit et reproductibilit des kits HYDRAGEL 15 amp 30 PROTEIN E pour tous les aspects test s L analyse qualitative de 28 chantillons diff rents par lectrophor se sur gel HYDRAGEL PROTEIN E 15 30 et sur un autre syst me en gel d agarose disponible dans le commerce montre une parfaite corr lation entre les deux syst mes d analyse La sensibilit de la technique HYDRAGEL 15 amp 30 PROTEIN E pour l analyse d urine concentr e est telle que la limite de d tection d une paraprot ine urinaire est de l ordre de 0 48 g l PROFIL ELECTROPHORETIQUE Orosomucoide RE a1 Antitrypsine aS a 1 Antichymotrypsine Ceruloplasmine GC Globuline a2 Macroglobuline Haptoglobine a Lipoprot ine LL B Lipoprot ine HA Transferrine H mopexine Plasminog ne Fibronectine Compl ment C3 y Globulines G A M D E D tail de la zone alpha 2 2 5 2 5 1 2 3 4 5 1 2 3 4 z5 14 344 5 A B c 1 a2 Macroglobuline 2 Haptoglobine 3 Ceruloplasmine 4 GC Globuline 5 at Lipoprot ine HYDRAGEL 7 15 amp 30 PROTEIN E 2009 12 BIBLIOGRAPHIE BIBLIOGRAPHY 10 11 12 13 14 15 16 Brouet J C Les cryoglobulin mies La Presse M dicale 1983 12 p 2991 a 2996 Brouet J C Orientation diagnostiqu e en cas d
17. ne calibration des syst mes de lecture Valeurs sans standardisation Valeurs standardis es sur CAPILLARYS FRACTION HYRYS GELSCAN DVSE PHORESIS HYRYS GELSCAN DVSE PHORESIS Albumine 59 8 72 4 53 8 65 2 Alpha 1 globulines 1 0 3 2 1 1 3 7 Alpha 2 globulines 7 4 12 6 8 5 14 5 B ta globulines 7 5 12 9 8 6 14 8 Gamma globulines 8 0 15 8 9 2 18 2 II est recommand chaque laboratoire d tablir ses propres valeurs normales Interpr tation1 16 Sur certains chantillons la zone alpha 2 peut pr senter un l ger d doublement selon l intensit et la mobilit des fractions qui la composent voir PROFIL LECTROPHOR TIQUE Certains s rums ont des ph notypes diff rents d haptoglobine ou de GC globuline La position de l alpha 1 lipoprot ine d pend de sa concentration et de la conservation de l chantillon Pour des informations compl mentaires sur l interpr tation des profils lectrophor tiques obtenus voir BIBLIOGRAPHIE Interf rences et limites Les lipoprot ines LDL et HDL sont des mol cules complexes de mobilit naturelle tr s variable allant de la zone b ta la zone alpha 2 Pour viter des difficult s d int gration et d interpr tation les gels HYDRAGEL ont une composition particuli re qui positionne g n ralement les HDL en zone alpha 2 et les LDL en zone b ta Cependant cette migration est tr s sensible aux facteurs sui
18. nt sur START IMPORTANT Ne rien placer a proximit imm diate des grilles de ventilation MIGRATION DESCRIPTION DES SEQUENCES AUTOMATIQUES Descente des chariots porte lectrodes et porte applicateurs pour amener les m ches tamponn es et l es applicateur s au contact du gel Remont e du chariot porte applicateurs Migration 10 W constants pour HYDRAGEL 7 PROTEIN E ou 20 W constants pour HYDRAGEL PROTEIN E 15 30 20 C temp rature contr l e par effet Peltier jusqu 33 Vh accumul s pendant environ 7 minutes D connexion des lectrodes par remont e du chariot porte lectrodes S chage du film pendant 10 minutes 65 C par mont e en temp rature du plateau Refroidissement du plateau quand la temp rature du plateau atteint 50 C un signal sonore bip retentit et la s curit du capot du module de migration se d bloque Le plateau reste a 50 C jusqu l ouverture du capot Apr s ouverture la temp rature baisse jusqu 20 C en moins de 5 minutes Une nouvelle migration peut alors tre lanc e NOTE Pendant toutes les s quences de migration le capot du module de migration reste verrouill II PREPARATION DES SEQUENCES DE TRAITEMENT DU GEL 1 Ouvrir le capot du module de migration 2 Retirer l es applicateur s et le s jeter 3 Relever les chariots porte applicateurs et porte lectrodes retirer les m ches par les languettes et les jeter 4 R cup rer le film p
19. our le traitement suivant HYDRAGEL 7 15 amp 30 PROTEIN E 2009 12 a Nettoyer les lectrodes et le plateau de migration avec un papier ouat humide 6 Placer le film sur le porte film face gel vers l op rateur en proc dant comme suit Fig 5 ouvrir le porte film le poser plat sur la paillasse positionner le gel dans les gorges des colonnettes refermer le porte film s assurer que le film soit bien enfonc dans les gorges des deux colonnettes 7 Introduire le porte film dans le module de traitement coloration du gel IMPORTANT Avant de lancer un cycle de coloration s assurer que le flacon de colorant contienne 300 ml de colorant le flacon de d colorant contienne 1 litre de d colorant minimum le flacon de vidange soit vide Pour le branchement des canaux r actifs se r f rer aux instructions affich es sur l cran de l appareil s lectionner la touche VISU CANAUX VISUALISATION CANAUX IMPORTANT Ne pas oublier d obturer les canaux non utilis s 8 S lectionner le programme de coloration PROTEIN E B1 82 dans le menu D marrer la s quence en appuyant sur START Pendant toutes les s quences de coloration d coloration et s chage le syst me reste verrouill Apr s refroidissement de la cuve un signal sonore bip retentit et le syst me se d bloque la ventilation se maintient jusqu la r cup ration du porte film III FIN DU TRAITEMENT DU GEL 1 Sort
20. s Le Carrer D L interpr tation de l lectrophor se des prot ines L Eurobiologiste 1989 Tome XXIII n 182 p 27 33 North M L D tection et caract risation d une immunoglobuline monoclonale Revue Fran aise des Laboratoires Mars 1990 n 203 p 54 58 Peltre G lectrophor se les trois principes de base Technique et Biologie 1990 1 p 16 23 Sicard D Du bon usage de l lectrophor se des prot ines Le Concours M dical 05 05 90 1990 112 16 p 1513 1515 Van Den Abelle lectrophor se des prot ines s riques Int r t limites apport du profil prot ique Larc Medical 1987 n 7 Vol VI p 348 351 Wicher J T Spence C E Serum protein electrophoresis An out moded test Ann Clin Biochem 1987 24 p 133 139 Wendling A Proc dures de diagnostic ou de d pistage justification et validit d un test de diagnostic ou de d pistage sensibilit sp cificit Impact Internat Septembre 1986 164 HYDRAGEL 7 15 amp 30 PROTEIN E 2009 12 SCHEMAS FIGURES Figure 2 Figure 4 Figure 1 Figure 3 Figure 5 HYDRASYS 165 HYDRAGEL 7 15 amp 30 PROTEIN E 2009 12 SCHEMAS FIGURES HYDRASYS 2 166
21. s d lectrophor se de zone ont t d velopp es sur diff rents supports chacun donnant un fractionnement des prot ines s riques en fonction de leur charge dans un tampon de pH donn L agarose d utilisation tr s facile a t choisi comme support II donne une s paration des constituants s riques humains en cinq fractions de mobilit diff rente albumine alpha 1 globulines alpha 2 globulines b ta globulines et gamma globulines Chaque zone contient un ou plusieurs constituants s riques Le profil lectrophor tique de l urine ressemble celui du s rum N anmoins la pr sence et l intensit relative des fractions d pendent fortement de la capacit de filtration des reins REACTIFS FOURNIS DANS LES KITS HYDRAGEL 7 15 ET 30 PROTEIN E COMPOSANTS REF N 4100 REF N 4120 REF N 4140 Gels d agarose pr ts l emploi 10 gels 10 gels 10 gels M ches tamponn es pr tes a l emploi 10 sachets de 2 10 sachets de 2 10 sachets de 2 Diluant colorant solution concentr e 1 fl de 60 ml 1 fl de 60 ml 1 fl de 60 ml Colorant amidoschwarz solution concentr e 1 fl de 20 ml 1 fl de 20 ml 1 fl de 20 ml Applicateurs pr ts a l emploi 1 boite de 10 7 dents 1 boite de 10 15 dents 2 boites de 10 15 dents Papiers filtres fins 1 sachet de 10 1 sachet de 10 1 sachet de 10 POUR DES RESULTATS OPTIMUMS Les l ments d un m me kit doivent tre utilis s ensemble et selon le
22. s instructions de la notice LIRE ATTENTIVEMENT LA NOTICE D UTILISATION 1 GELS D AGAROSE Pr paration Les gels d agarose sont pr ts a l emploi Chaque gel contient agarose 8 g l tampon tris barbital pH 9 2 0 1 composants sans danger aux concentrations utilis es n cessaires pour des performances optimales ATTENTION Les gels contiennent 0 31 de barbital et 0 34 de barbital sod Ne pas avaler En cas d ingestion consulter imm diatement un m decin Utilisation Support pour l lectrophor se des prot ines Conservation stabilit et signes de d t rioration Les gels doivent tre conserv s a temp rature ambiante de 15 a 30 C ou au r frig rateur entre 2 et 8 C Ils sont stables jusqu a la date d expiration indiqu e sur le kit ou sur le sachet du gel Les gels doivent tre conserv s horizontalement dans leur sachet de protection la fl che sur le devant du kit doit tre point e vers le haut Ne pas stocker les gels a proximit d une fen tre ou d une source de chaleur Eviter toute variation brutale de temp rature NE PAS CONGELER Eliminer le gel dans les cas suivants l apparition de cristaux de pr cipit en surface du gel ou texture du gel tr s molle indiquant que le gel a gel Il apparition de bact ries ou de moisissures Ill pr sence anormale de liquide dans la bo te du gel indiquant une exsudation du gel li e de mauvaises conditions de conservation
23. sels par une dialyse NOTE En cas d urines troubles concentr es ou non il est recommand d liminer les particules en centrifugeant les chantillons pendant 10 minutes a 3000 rpm ou par filtration sur filtre de 0 45 ym afin d obtenir une bonne diffusion sur les applicateurs Echantillons a viter Ne pas utiliser d chantillon h molys L h molyse entra ne une augmentation des zones alpha 2 et b ta Ne pas utiliser de plasma Le fibrinog ne donne une bande proche du point de d p t Cette bande peut fausser l interpr tation du test confusion avec une gammapathie et augmentation du pourcentage de la fraction correspondante Ne pas utiliser les chantillons d urine anciens ou conserv s dans de mauvaises conditions des d gradations enzymatiques peuvent les alt rer TECHNIQUE Le systeme HYDRASYS est un instrument multiparam trique semi automatique qui assure le traitement des HYDRAGEL selon les tapes suivantes application des chantillons migration lectrophor tique s chage coloration d coloration et s chage final Les tapes manuelles sont les suivantes pr paration des chantillons et du gel lancement des s quences automatiques LIRE ATTENTIVEMENT LE MANUEL D INSTRUCTIONS D HYDRASYS HYDRASYS 2 l PR PARATION DE LA MIGRATION 1 Mettre HYDRASYS sous tension 2 Poser un applicateur pour HYDRAGEL 7 PROTEIN E 7 chantillons et HYDRAGEL PROTEIN E 15 30 15 chantillons ou deux
24. vants fraicheur de l chantillon concentration en lipoprot ines HYDRAGEL 7 15 amp 30 PROTEIN E 2009 12 traitement m dicamenteux par exemple I h parine tat d hydratation du gel conservation du gel variations m mes tr s faibles des mati res premi res Pour ces diff rentes raisons il peut tre observ un l ger d placement anodique de ces lipoprot ines qui deviennent plus apparentes ou qui entrainent un largissement voire un d doublement de la zone alpha 2 et ou de la zone b ta 1 Les pourcentages des fractions alpha 2 et b ta restent totalement inchang s malgr le l ger d doublement d la variation de mobilit lectrophor tique 2 La forme caract ristique de la fraction b ta lipoprot ine avec une importante focalisation et une forme irr guli re ne peut en aucun cas provoquer une erreur d interpr tation seul l aspect est diff rent Voir CHANTILLONS ANALYSER Compte tenu des principes analytiques des techniques actuelles principes de l lectrophor se de zone r solution et sensibilit aucune garantie ne peut tre donn e quant la d tection totale de toutes les composantes monoclonales Assistance technique Contacter le Service Technique SEBIA en cas de test d fectueux Les fiches de donn es de s curit des diff rents r actifs du kit ainsi que les informations relatives l limination des d chets sont disponibles aupr s du Service Te
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