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Cortisol ELISA - DRG Diagnostics GmbH

1. 11 7 ERWARTETE WERTE 12 8 ASSAY CHARACTERISTIKA 13 9 GRENZEN DES TESTS 13 10 RECHTLICHE GRUNDLAGEN 14 11 REFERENZEN u 14 1 INTRODUZIONE ni 15 2 PRINCIPIO DEL TEST 15 3 PRECAUZIONI i 15 4 COMPONENTI DEL KIT 16 5 CAMPIONI 2 ar 17 6 ATTUAZIONE DEL TEST 17 7 VALORI NORMALI i 18 8 CARATTERISTICHE DEL TEST 19 9 LIMITAZIONE DEL TEST ee 19 10 ASPETTI LEGALI ee 20 11 BIBLIOGRAFIA renee 20 1 INTRODUCCI N HE whe 21 2 FUNDAMENTO DEL ENSAYO 21 3 PRECAUCIONES ni 21 4 COMPONENTES DEL KIT 22 5 MUESTRAS un felpa 23 6 PROCEDIMIENTO DE ENSAYO 23 7 VALORES ESPERADOS 24 8 CARACTER STICAS DEL ENSAYO 25 9 LIMITACIONES DE USO ee 25 10 ASPECTOS LEGALES 26 11 REFERENCIAS eee 26 Vers 10 0 Effective 08 2006 vk 1 DRG Cortisol ELISA EIA 1887 1 INTRODUCTION The DRG Cortisol Enzyme Immunoassay Kit provides materials for the quantitative determination of Cortisol in serum and plasma This assay is intended for in vitro diagnostic use only Cortisol hydrocortisone compound F is the main corticosteroid secreted in humans by the adrenal cortex This steroid hormone has a molecular weight of 363 5 In mos
2. Come regola generale vale che la reazione enzimatica si svolge linearmente proporzionale con il tempo e con la temperatura Vers 10 0 Effective 08 2006 vk 17 DRG Cortisol ELISA EIA 1887 6 2 Eseguimento del test Ogni analisi deve includere una curva standard 1 Fissare i pozzetti necessari sul supporto 2 Pipettare 20 uL di ogni Standard Control e campione nei pozzetti cambiando ogni volta la punta monouso Pipettare 200 uL Enzyme Conjugate in ogni pozzetto Agitare bene per 10 secondi molto importante raggiungere un completo mescolamento Incubare per 60 minuti a temperatura ambiente senza coptire la piastra Rovesciare la piastra per vuotare i pozzetti Lavare i pozzetti 3 volte con Wash Solution 400 uL in ogni pozzetto Rimuovere le gocce d acqua rimanenti rivoltando la piastra su carta assorbente Importante La sensibilit e la precisazione di questo kit sono fortemente influenzate dal corretto eseguimento del lavaggio 7 Aggiungere 100 uL della Substrate Solution ad ogni pozzetto 8 Incubare per 15 minuti a temperatura ambiente 9 Fermare la reazione enzimatica aggiungendo 100 uL della Stop Solution ad ogni pozzetto oa kw 10 Determinare la densita ottica a 450 10 nm con un fotometro per microtiter piastre entro 10 minuti dopo l aggiunta della Stop Solution 6 3 Rilevamento dei risultati Determinare i valori medi della densit ottica per ogni set di standard controlli e campioni C
3. Die Verunreinigung von Reagenzien oder Proben mit Mikroben kann zu falschen Ergebnissen f hren e Der Gebrauch sollte gem der Vorschriften einer entsprechenden nationalen Gefahrenstoff Sicherheitsrichtlinie erfolgen e Reagenzien nicht nach dem auf dem Kit Etikett angegebenen Verfallsdatum verwenden e Alle im Kit Protokoll angegebenen Mengen m ssen genau eingehalten werden Optimale Ergebnisse k nnen nur durch Verwendung kalibrierter Pipetten und Mikrotiterplatten Leseger te erreicht werden e Komponenten von Kits mit unterschiedlichen Lotnummern nicht untereinander vertauschen Es wird empfohlen keine Wells von verschiedenen Platten zu verwenden auch nicht wenn es sich um das gleiche Lot handelt Die Kits k nnen unter anderen Bedingungen gelagert oder versendet worden sein so dass die Bindungscharakteristik der Platten leicht unterschiedlich ausf llt e Chemikalien und zubereitete oder bereits benutzte Reagenzien m ssen gem den nationalen Gefahrenstoffvorschriften wie gef hrlicher Abfall behandelt werden e Materialsicherheitsdatenbl tter f r dieses Produkt sind auf Anfrage direkt von der Firma DRG Instruments GmbH erh ltlich Die Materialsicherheitsdatenbl tter entsprechen den Verordnungen der EU Richtlinie 91 155 EC Vers 10 0 Effective 08 2006 vk 9 DRG Cortisol ELISA EIA 1887 4 BESTANDTEILE DES KITS 4 1 Kitinhalt 1 Microtiterwells 96 Wells 12x8 Wells einzeln brechbar mit anti Cortisol Antik rpe
4. Mittelwert minus der zweifachen Standardabweichung des Standards 0 n 20 betr gt 2 5 ng mL 6 9 nmol L 8 4 Pr zision Die Daten entnehmen Sie bitte der ausf hrlichen englischen Arbeitsanleitung 8 5 Testgenauigkeit 8 5 1 Qualit ts Kontrolle Es wird empfohlen die Kontrollproben gem den nationalen gesetzlichen Bestimmungen einzusetzen Durch die Verwendung von Kontrollproben wird eine Tag zu Tag berpr fung der Ergebnisse erzielt Es sollten Kontrollen sowohl mit normalem als auch pathologischem Level eingesetzt werden Die Kontrollen mit den entsprechenden Ergebnissen des QC Labors sind im QC Zertifikat das dem Kit beiliegt aufgef hrt Die im QC Blatt angegebenen Werte und Bereiche beziehen sich stets auf die aktuelle Kitcharge und sollten zum direkten Vergleich der Ergebnisse verwendet werden Es wird ebenfalls empfohlen an nationalen oder internationalen Qualit tssicherungs Programmen teilzunehmen um die Genauigkeit der Ergebnisse zu sichern Es sollten geeignete statistische Methoden zur Analyse von Kontroll Werten und Trends angewendet werden Wenn die Ergebnisse des Assays nicht mit den angegebenen Akzeptanzbereichen des Kontrollmaterials bereinstimmen sollten die Patientenergebnisse als ung ltig eingestuft werden In diesem Fall berpr fen Sie bitte die folgenden Bereiche Pipetten und Zeitnehmer Photometer Verfallsdatum der Reagenzien Lagerungs und Inkubationsbedingungen Absaug und Waschmethode Sollten S
5. Testergebnisse sind nur g ltig wenn alle Kontrollen in den vorgegebenen Bereichen liegen und wenn alle anderen Testparameter die vorgegebenen Spezifikationen f r diesen Assay erf llen Wenn Sie bez glich eines Ergebnisses Zweifel oder Bedenken haben setzen Sie sich bitte mit der Firma DRG in Verbindung 10 2 Therapeutische Konsequenzen Therapeutische Konsequenzen sollten keinesfalls nur aufgrund von Laborergebnissen erfolgen selbst dann nicht wenn alle Testergebnisse mit den in 10 1 genannten Voraussetzungen bereinstimmen Jedes Laborergebnis ist nur ein Teil des klinischen Gesamtbildes eines Patienten Nur in F llen in denen die Laborergebnisse in akzeptabler Ubereinstimmung mit dem allgemeinen klinischen Bild des Patienten stehen sollten therapeutische Konsequenzen eingeleitet werden Das Testergebnis allein sollte niemals als alleinige Grundlage f r die Einleitung therapeutischer Konsequenzen dienen 10 3 Haftung Jegliche Ver nderungen des Testkits und oder Austausch oder Vermischung von Komponenten unterschiedlicher Chargen von einem Testkit zu einem anderen k nnen die gew nschten Ergebnisse und die G ltigkeit des gesamten Tests negativ beeinflussen Solche Ver nderungen und oder Austausch haben den Ausschluss jeglicher Ersatzanspr che zur Folge Reklamationen die aufgrund von Falschinterpretation von Laborergebnissen durch den Kunden gem Punkt 10 2 erfolgen sind ebenfalls abzuweisen Im Falle jeglicher Reklamati
6. au dela de cette date Les r actifs contenus dans des flacons ouverts doivent tre stock s 2 8 C Les micro plaques doivent tre stock es 2 8 C Une fois la capsule d aluminium ouverte attention bien refermer le flacon 4 3 Pr paration des r actifs Amener tous les r actifs et le nombre de barrettes n cessaires au test temp rature ambiante avant utilisation Wash Solution Diluer 30 mL de solution de lavage concentr e avec 1170 mL d eau d sionis e pour un volume final de 1200 mL Remarque La solution de lavage dilu e est stable deux semaines temp rature ambiante 4 4 Elimination des d chets relatifs au kit L limination des d chets relatifs au kit doit tre r alis e selon les r gles nationales en vigueur Les informations sp cifiques au kit sont pr sent es dans la fiche de s curit voir chapitre 13 4 5 Kits endommag s Dans le cas de dommages importants survenus au kit ou ses composants informer la DRG au plus tard une semaine apr s r ception du kit Les composants endommag s ne doivent pas tre utilis s pour le test IIs doivent tre stock s jusqu ce qu une solution adapt e ait t trouv e Apr s cela ils doivent tre limin s selon les directives officielles en vigueur Vers 10 0 Effective 08 2006 vk 28 DRG Cortisol ELISA EIA 1887 5 ECHANTILLON S rum ou plasma EDTA H parine ou citrate plasma peuvent tre utilis s pour ce test Ne pas u
7. axe des abscisses L utilisation de la densit optique moyenne pour chaque chantillon d termine la concentration correspondante a partir de la courbe talon M thode automatique Les r sultats dans le IFU ont t calcul s de fa on automatique en utilisant une courbe de r gression 4 PL 4 Parameter Logistics D autres fonctions logistiques peuvent donner des r sultats l g rement diff rents La concentration des chantillons peut tre lue directement partir de cette courbe talon Les chantillons avec une concentration sup rieure celle du plus haut standard doivent tre dilu s de nouveau Pour le calcul des concentrations ce facteur de dilution doit tre pris en consid ration Ci dessous est repr sent un exemple typique de courbe talon r alis e avec le DRG Cortisol ELISA Standard Unit s optiques 450 nm Standard 0 0 ng mL Standard 1 20 ng mL Standard 2 50 ng mL Standard 3 100 ng mL Standard 4 200 ng mL Standard 5 400 ng mL 7 Standard 6 800 ng mL VALEURS ATTENDUES Il est fortement recommand chaque laboratoire de d terminer ses propres valeurs normales ou anormales 50 30 ng mL 230 ng mL 138 635 nmol L 8 00 h 10 00 h ng mL 150 ng mL 82 8 414 nmol L 16 00 h Tietz s Textbook 2 Vers 10 0 Effective 08 2006 vk 30 DRG Cortisol ELISA EIA 1887 8 CARACTERISTIQUES DU TEST 8 1 Zone de mesure Les limites du dosage sont comp
8. exactamente de acuerdo a las instrucciones del fabricante Mas a n el usuario debe ajustarse estrictamente a las reglas BPL Buenas Pr cticas de Laboratorio o a otros est ndares y o leyes nacionales aplicables Esto es especialmente relevante para el uso de reactivos control Es importante incluir siempre dentro del procedimiento de ensayo un n mero suficiente de controles para validar la exactitud y la precisi n del ensayo Los resultados del ensayo son v lidos s lo si todos los controles se encuentran dentro de los rangos especificados y si todos los otros par metros del ensayo se encuentran dentro de las especificaciones dadas para el ensayo En cado de alguna duda o inquietud por favor contactar con DRG 10 2 Consecuencias Terap uticas Las consecuencias terap uticas nunca deben basarse s lo en los resultados de laboratorio incluso si todos los resultados del ensayo est n de acuerdo con los asuntos fijados en el punto 10 1 Cualquier resultado de laboratorio es solamente una parte del cuadro cl nico de un paciente Solamente en los casos donde los resultados de laboratorio est n en acuerdo con todo el cuadro cl nico de un paciente se pueden derivar consecuencias terap uticas Nunca deben derivarse consecuencias terap uticas a partir de solamente el resultado obtenido en el ensayo 10 3 Responsabilidad Cualquier modificaci n del kit y o cambio o mezcla de cualquier componente procedentes de kits de lotes diferentes puede
9. gut sch tteln Es ist sehr wichtig in diesem Schritt eine komplette Durchmischung zu erreichen 60 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren 6 Den Inhalt der Wells kr ftig aussch tteln Wells 3mal mit verd nnter Wash Solution waschen Verbleibende Fl ssigkeit durch Ausklopfen der Wells auf saugf higem Papier entfernen Achtung Die Sensitivit t und Pr zision dieses Assays wird erheblich beeinflusst von der korrekten Durchf hrung des Waschschrittes 7 100 HL Substrate Solution in jedes Well geben 8 15 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren 9 Die enzymatische Reaktion durch Zugabe von 100 uL Stop Solution in jedes Well abstoppen 10 Die Optische Dichte bei 450110 nm mit einem Mikrotiterplatten Leseger t innerhalb von 10 Minuten nach Zugabe der Stop Solution bestimmen IS a 6 3 Ergebnisermittlung 1 Die durchschnittlichen Werte der Optischen Dichte OD f r jedes Set von Standards Controls und Patientenproben bestimmen 2 Eine Standardkurve ermitteln durch Auftragen der mittleren Optischen Dichte jedes Standards gegen die Konzentration wobei der OD Wert auf der vertikalen Y Achse und die Konzentration auf der horizontalen X Achse eingetragen wird 3 Unter Verwendung der mittleren OD wird f r jede Probe die entsprechende Konzentration aus der Standardkurve ermittelt 4 Automatische Methode Die in der Arbeitsanleitung ermittelten Werte wurden automatisch mit Hilfe der 4 Parameter Gleichung 4PL 4 Parameter Logis
10. la concentration de cortisol contenue dans l chantillon Suite l addition de solution substrat l intensit de coloration obtenue est inversement proportionnelle la concentration de cortisol contenue dans l chantillon 3 PRECAUTIONS D UTILISATION e Ce kit est uniquement destin aux tests diagnostiques in vitro e Les informations concernant la toxicit des r actifs contenus dans ce kit sont pr sent es dans la fiche de s curit Material Safety Data Sheets e Tous les r actifs de ce kit contenant du s rum ou du plasma humain ont t test s avec des r sultats n gatifs pour le VIH I II le HBsAg et le HCV selon les normes FDA en vigueur N anmoins lors de leur utilisation tous les r actifs de ce kit doivent tre manipul s avec pr caution e Eviter les contacts avec la Stop Solution celle ci contient 0 5 M de H2SO Cela pourrait engendrer irritations ou br lures de la peau e Ne jamais pipeter avec la bouche et viter tout contact de la peau ou des muqueuses avec les r actifs ou les chantillons e Ne pas fumer manger boire ou utiliser des produits cosm tiques dans les zones o les chantillons ou le kit ont t mani s e Porter des gants d examen lors de l utilisation des chantillons ou des r actifs Une contamination microbienne des chantillons ou des r actifs pourrait fausser les r sultats e L utilisation de ce kit devra tre en accord avec les normes ou recommandations nationales d
11. utilizzare pozzetti di piastre diversi anche se si tratta dello stesso lotto kit potrebbero essere stati magazzinati o spediti a condizioni diverse cosicch le caratteristiche di legame potrebbero divergere leggermente e componenti chimici e reagenti preparati o gi utilizzati devono essere trattati e smaltiti secondo le norme di sicurezza nazionali sulle sostanze nocive e regolamenti di sicurezza di questo prodotto possono essere richiesti direttamente dalla ditta DRG Instruments GmbH regolamenti di sicurezza corrispondono alle norme EU 91 155 EC Vers 10 0 Effective 08 2006 vk 15 DRG Cortisol ELISA EIA 1887 4 COMPONENTI DEL KIT 4 1 Contenuto del kit 1 Microtiterwells Micropozetti 12x8 file separatamente staccabili 96 pozzetti Pozzetti ricoperti con l anti cortisolo anticorpo monoclonale 2 Standard Standard 0 6 7 flaconi 1 mL pronto all uso Concentrazioni 0 20 50 100 200 400 800 ng mL 0 55 2 138 276 552 1104 2208 nmol L Conversione 1 ng mL 2 76 nmol L Contiene 0 3 proclina come conservante 3 Enzyme Conjugate Tracciante enzimatico 1 flacone 25 mL pronto all uso cortisolo coniugato alla perossidasi di rafano Contiene 0 3 proclina come conservante 4 Substrate Solution Soluzione di substrato 1 flacone 14 mL pronto all uso TMB benzidine tetrametilico 5 Stop Solution Soluzione d arresto 1 flacone 14 mL pronto all uso contiene 0 5M H280 Evitare il contatto con l
12. 0 ng mL 138 635 nmol L 8 00 h 10 00 h 30 ng mL 150 ng mL 82 8 414 nmol L 16 00 h Tietz s Textbook 2 Vers 10 0 Effective 08 2006 vk 24 DRG Cortisol ELISA EIA 1887 8 CARACTERISTICAS DEL ENSAYO 8 1 Rango din mico del ensayo El rango del ensayo se encuentra entre 0 800 ng mL 8 2 Especificidad de los Anticuerpos Reactividad Cruzada Consultar el manual de usuario en ingl s 8 3 Sensibilidad Anal tica La sensibilidad anal tica se calcul a partir de la media menos dos desviaciones est ndar de veinte 20 r plicas del Est ndar 0 y result ser 2 5 ng mL 6 9 nmol L 8 4 Precisi n Consultar el manual de usuario en ingl s 8 5 Exactitud 8 5 1 Control de Calidad Se recomienda usar muestras control de acuerdo con las leyes estatales y federales El uso de muestras control ser recomienda para asegurar la validez diaria de los resultados Usar controles tanto a niveles normal como patol gico Los controles y los correspondientes resultados del Laboratorio de control de calidad est n fijados en el certificado de control de calidad que acompa an al kit Los valores y los rangos fijados en la hoja del control de calidad se refieren siempre al kit actual y deben usarse para la comparaci n directa de los resultados Es recomendable tambi n hacer uso de programas de Aseguramiento de la Calidad nacionales o internacionales para asegurar la exactitud de los resultados Utilizar m todos esta
13. 6 vk 5 DRG Cortisol ELISA EIA 1887 8 ASSAY CHARACTERISTICS 8 1 Assay Dynamic Range The range of the assay is between 0 800 ng mL 8 2 Specificity of Antibodies Cross Reactivity The following substances were tested for cross reactivity of the assay Seria Gross reactviy _ i 2 2 8 3 Analytical Sensitivity The analytical sensitivity was calculated from the mean minus two standard deviations of twenty 20 replicate analyses of Standard 0 and was found to be 2 5 ng mL 6 9 nmol L 8 4 Precision 8 4 1 Intra Assay Variation The within assay variability is shown below Sample n Mean ngm even 8 4 2 Inter Assay Variation The between assay variability is shown below Sample Mean ngimt cv EEE SE 5 8 5 Accuracy 8 5 1 Quality Control It is recommended to use control samples according to state and federal regulations The use of control samples is advised to assure the day to day validity of results Use controls at both normal and pathological levels The controls and the corresponding results of the QC Laboratory are stated in the QC certificate added to the kit The values and ranges stated on the QC sheet always refer to the current kit lot and should be used for direct comparison of the results It is also recommended to make use of national or international Quality Assessment programs in order to ensure the accuracy of the results Employ appropriate statistical methods for an
14. Cortisol antibody monoclonal 2 Standard Standard 0 6 7 vials 1 mL ready to use Concentrations 0 20 50 100 200 400 800 ng mL thus corresponding to 0 55 2 138 276 552 1104 2208 nmol L Conversion factor 1 ng mL 2 76 nmol l contain 0 3 Proclin as a preservative 3 Enzyme Conjugate 1 vial 25 mL ready to use Cortisol conjugated to horseradish Peroxidase contains 0 3 Proclin as a preservative 4 Substrate Solution 1 vial 14 mL ready to use Tetramethylbenzidine TMB 5 Stop Solution 1 vial 14 mL ready to use contains 0 5M H2S04 Avoid contact with the stop solution It may cause skin irritations and burns 6 Wash Solution 1 vial 30 mL 40X concentrated see Preparation of Reagents Note Additional Standard 0 for sample dilution is available upon request 4 1 1 Equipment and material required but not provided A microtiter plate calibrated reader 450 10 nm e g the DRG Instruments Microtiter Plate Reader Calibrated variable precision micropipettes Absorbent paper Aqua dest 4 2 Storage and stability of the Kit When stored at 2 8 C unopened reagents will retain reactivity until expiration date Do not use reagents beyond this date Opened reagents must be stored at 2 8 C Microtiter wells must be stored at 2 8 C Once the foil bag has been opened care should be taken to close it tightly again 4 3 Preparation of Reagents Allow all reagents and required number of
15. ST 8 1 Assay Dynamic Range Le concentrazioni determinabili con questo test stanno tra 0 800 ng mL 8 2 Specificit degli anticorpi reazioni ad incrocio Per dettagli pi precisi consultare la metodica in inglese 8 3 Sensitivita analitica La sensitivit analitica amp stata calcolata dai valori medi meno due deviazioni standard di venti 20 repliche dello Standard 0 ed erano 2 5 ng mL 6 9 nmol L 8 4 Precisione Per dettagli pi precisi consultare la metodica in inglese 8 5 Esattezza 8 5 1 Controllo qualit consigliabile utilizzare i campioni controllo secondo le norme di legge Attraverso l utilizzo dei campioni controllo si pu raggiungere una verifica dei risultati giorno per giorno Dovrebbero essere adoperati campioni controllo sia con un livello normale sia con uno patologico Le referenze con i rispettivi risultati del laboratorio QC sono elencati nel QC certificato che allegato al kit valori riportati nel QC certificato si riferiscono al lotto del kit attuale e dovrebbero essere utilizzati per un raffronto dei risultati altres consigliabile di partecipare a programmi di sicurezza sulla qualit nazionali o internazionali per assicurarsi dell esattezza dei risultati Appropriati metodi statistici per l analisi dei valori controllo e delle rappresentazioni grafici dovrebbero essere adoperati Nel caso che i risultati del test non combaciano con il campo di accettazione indicato dal materiale di
16. User Manual Cortisol ELISA EIA 1887 Y 96 Wells 08 06 m Legal Manufacturer Distributed by DRG C DRG Instruments GmbH Germany Division of DRG International Inc Frauenbergstr 18 D 35039 Marburg Telefon 49 0 6421 17000 Fax 49 0 642 1 1700 50 Internet www drg diagnostics de E mail drg drg diagnostics de CE DRG Cortisol ELISA EIA 1887 Contents Inhaltsverzeichnis Contenuti Contenido Content 1 INTRODUCTION 2 1 INTRODUCTION ii 27 2 PRINCIPLE OF THE TEST 2 2 PRINCIPE DU TEST ni 27 3 PRECAUTIONS aussi 2 3 PRECAUTIONS D UTILISATION 27 4 KIT COMPONENTS i 3 4 COMPOSITION DU KIT 28 5 AAA O San cates 4 5 ECHANTILLON iii 29 6 TEST PROCEDURE eee eee 4 6 R ALISATION BUTEST Aa a 29 7 EXPECTED VALUES i 5 7 VALEURS ATTENDUES 30 8 ASSAY CHARACTERISTICS 6 8 CARACTERISTIQUES DU TEST 31 9 LIMITATIONS OF USE 7 9 LIMITES D UTILISATION 31 10 LEGAL ASPECTS L iii 8 10 ASPECTSLEGAUX ii 32 11 SREFERENGES i NG 8 11 REFERENCES iaia 32 1 EINLEITUNG ya er 9 SYMBOLS USED WITH DRG ELISA S 33 2 TESTPRINZIP iene ni near an 9 3 VORSICHTSMARNAHMEN 9 4 BESTANDTEILE DES KITS 10 5 PROBENVORBEREITUNG 11 6 TESTDURCHFUHRUNG
17. a soluzione d arresto Pu causare irritazioni cutanee e ustioni 6 Wash Solution Soluzione di lavaggio 1 flacone 30 mL concentrata 40X vedi preparazione dei reagenti Nota Ulteriore Standard 0 per la diluizione dei campioni pu essere richiesto alla ditta 4 1 1 Materiali richiesti ma non contenuti nel kit Uno spettrofotometro calibrato per micropozzetti 450 10 nm p es il DRG Instruments Microtiterplate Reader Micropipette calibrate di precisione a volume variabile Carta assorbente Acqua distillata 4 2 Magazzinaggio e stabilit del kit A 2 8 C i reagenti non aperti rimangono reattivi fino alla data di scadenza indicata Non usare reagenti oltre questa data Tutti i reagenti aperti devono essere magazzinati a 2 8 C micropozzetti devono essere magazzinati a 2 8 C Una volta aperti i pacchi questi devono essere richiusi accuratamente 4 3 Preparazione dei reagenti Prima dell uso portare tutti i reagenti e il numero necessario di pozzetti a temperatura ambiente Wash Solution Diluire 30 mL della soluzione di lavaggio concentrata con 1170 mL di acqua deionizzata fino ad un volume finale di 1200 mL La soluzione di lavaggio diluita stabile per 2 settimane a temperatura ambiente 4 4 Smaltimento del kit Lo smaltimento del kit deve avvenire secondo le regole a norma di legge Informazioni particolareggiate per questo prodotto si trovano nel regolamento di sicurezza capitolo 13 4 5 Te
18. afectar negativamente a los resultados esperados y en la validez de todo el test Esas modificaciones y o cambios invalidad cualquier reclamaci n de reposici n Las reclamaciones emitidas debidas a una mala interpretaci n de los resultados de laboratorio por parte del comprador referidos al punto 10 2 son tambi n inv lidas A pesar de todo en el caso de cualquier reclamaci n la responsabilidad del fabricante no excede el valor del kit Cualquier da o provocado al kit durante su transporte no est sujeto a la responsabilidad del fabricante 11 REFERENCIAS Consultar el manual de usuario en ingl s Vers 10 0 Effective 08 2006 vk 26 DRG Cortisol ELISA EIA 1887 1 INTRODUCTION Le kit de dosage immuno enzymatique DRG Cortisol ELISA propose les mat riaux requis pour la mesure quantitative de cortisol dans le s rum ou le plasma Ce kit est utiliser uniquement dans le cadre de tests diagnostiques in vitro 2 PRINCIPE DU TEST Le kit DRG Cortisol ELISA est bas sur une r action immuno enzymatique comp titive Les micro plaques sont recouvertes avec un anticorps monoclonal dirig contre un antig ne sp cifique de la mol cule cortisol Cortisol endog ne contenu e dans l chantillon du patient entre en comp tition avec le conjugu e la HRP pour la liaison l anticorps Apr s incubation le conjugu non li est limin durant le lavage des puits La quantit de peroxidase li e est inversement proportionnelle
19. alysing control values and trends If the results of the assay do not fit to the established acceptable ranges of control materials patient results should be considered invalid In this case please check the following technical areas Pipetting and timing devices photometer expiration dates of reagents storage and incubation conditions aspiration and washing methods After checking the above mentioned items without finding any error contact your distributor or DRG directly Vers 10 0 Effective 08 2006 vk 6 DRG Cortisol ELISA EIA 1887 8 5 2 Recovery Samples have been spiked by adding Cortisol solutions with known concentrations in a 1 1 ratio The expected values were calculated by addition of half of the values determined for the undiluted samples and half of the values of the known solutions The Recovery has been calculated by multiplication of the ratio of the measurements and the expected values with 100 1 1 viv ng mL ng mL ng mL 57 100 200 110 86 400 216 800 436 240 200 210 400 356 800 514 378 200 263 400 355 800 558 8 5 3 Linearity Dilution Mean Conc ng mL Recovery 92 108 100 93 99 107 100 89 91 94 94 9 LIMITATIONS OF USE 9 1 Interfering Substances Any improper handling of samples or modification of this test might influence the results Haemoglobin up to 4 mg mL Bilirubin up to 0 5 mg mL and Triglyceride up to 7 5 mg mL have no influence on
20. amations soumises relatives au paragraphe 10 2 et dues une mauvaise interpr tation des r sultats de laboratoire de la part du client sont galement invalides N anmoins en cas de r clamation la responsabilit du fabricant n est pas de d passer les limites de la valeur du kit Tout dommage caus au kit lors de son transport n est pas du ressort de la responsabilit du fabricant 11 REFERENCES Voir le manuel de l utilisateur en version anglaise Vers 10 0 Effective 08 2006 vk 32 DRG Cortisol ELISA EIA 1887 SYMBOLS USED WITH DRG ELISA S Sym bol English Deutsch Francais Espanol Italiano European Conformity FEE Conforme aux normes Conformidad europea Conformit europea kennzeichnung europ ennes Consult instructions for use Gebrauchsanweisung beachten Consultez le Mode d emploi Consulte las Instrucciones Consulti le istruzioni In vitro diagnostic device In vitro Diagnostikum Diagnostic in vitro Diagn stico in vitro Diagnostica in vitro Catalogue number Katalog Nr R f rence N mero de cat logo No di Cat Lot No Batch code Chargen Nr No de lot N mero de lote Lotto no Contains sufficient for lt n gt tests Storage Temperature Ausreichend f r n Ans tze Lagerungstemperatur Contenu suffisant pour n tests Temperature de conservation Contenido suficiente para lt n gt ensayos Temperatura
21. assay it is recommended that all reagents are ready caps removed all needed wells secured in holder etc This will ensure equal elapsed time for each pipetting step without interruption Asa general rule the enzymatic reaction is linearly proportional to time and temperature Vers 10 0 Effective 08 2006 vk 4 DRG Cortisol ELISA EIA 1887 6 2 Assay Procedure Each run must include a standard curve Secure the desired number of Microtiter wells in the holder Dispense 20 uL of each Standard Control and samples with new disposable tips into appropriate wells Dispense 200 uL Enzyme Conjugate into each well Thoroughly mix for 10 seconds It is important to have a complete mixing in this step Incubate for 60 minutes at room temperature without covering the plate Briskly shake out the contents of the wells Rinse the wells 3 times with diluted Wash Solution 400 uL per well Strike the wells sharply on absorbent paper to remove residual droplets Important note The sensitivity and precision of this assay is markedly influenced by the correct performance of the washing procedure 7 Add 100 uL of Substrate Solution to each well 8 Incubate for 15 minutes at room temperature 9 Stop the enzymatic reaction by adding 100 uL of Stop Solution to each well 10 Read the OD at 450410 nm with a microtiter plate reader within 10 minutes after adding the Stop Solution Oak ND gt 6 3 Calculation of Results 1 Calcul
22. ate the average absorbance values for each set of standards controls and patient samples Construct a standard curve by plotting the mean absorbance obtained from each standard against its concentration with absorbance value on the vertical Y axis and concentration on the horizontal X axis 3 Using the mean absorbance value for each sample determine the corresponding concentration from the standard curve 4 Automated method The results in the IFU have been calculated automatically using a 4 PL 4 Parameter Logistics curve fit Other data reduction functions may give slightly different results 5 The concentration of the samples can be read directly from this standard curve Samples with concentrations higher than that of the highest standard have to be further diluted For the calculation of the concentrations this dilution factor has to be taken into account Below is listed a typical example of a standard curve with the DRG Cortisol ELISA Standard Optical Units 450 nm Standard 0 0 ng mL Standard 1 20 ng mL Standard 2 50 ng mL 7 EXPECTED VALUES It is strongly recommended that each laboratory should determine its own normal and abnormal values Cortisol values in serum or plasma ranges from 50 ng mL to 230 ng mL 138 635 nmol L between 8 00 10 00 a m and from 30 ng mL to 150 ng mL 82 8 414 nmol L at 4 00 p m These values are from Tietz s Textbook 2 and may be used as main guideline Vers 10 0 Effective 08 200
23. ben sollten nicht verwendet werden Achtung Proben die Natriumazid enthalten sollten nicht verwendet werden 5 1 Probenentnahme Serum Blut durch Venenpunktion entnehmen z B mit Sarstedt Monovette 02 1388 001 gerinnen lassen und das Serum durch Zentrifugation bei Raumtemperatur abtrennen Vor der Zentrifugation muss die Gerinnung vollst ndig abgeschlossen sein Bei Patienten die Antikoagulantien erhalten kann die Gerinnungszeit l nger dauern Plasma Die Blutentnahme erfolgt mit R hrchen die ein Antikoagulans enthalten Das Plasma wird als Uberstand nach einer Zentrifugation gewonnen z B f r EDTA Plasma Sarstedt Monovette roter Deckel 02 166 001 f r Heparinplasma Sarstedt Monovette oranger Deckel 02 165 001 f r Zitratplasma Sarstedt Monovette griner Deckel 02 167 001 5 2 Probenaufbewahrung Proben sollten stets gut verschlossen sein und k nnen vor Testbeginn bis zu 5 Tage bei 2 8 C gelagert werden F r eine l ngere Aufbewahrung sollten die Proben eingefroren bei 20 C bis zum Testbeginn gelagert werden Nur einmal einfrieren Aufgetaute Proben sollten vor Testbeginn vorsichtig durchmischt werden ohne Schaumbildung 5 3 Probenverd nnung Wenn in einem ersten Testdurchlauf bei einer Probe eine Konzentration h her als der h chste Standard gefunden wird kann diese Probe mit Standard 0 weiter verd nnt und nochmals bestimmt werden Die Verd nnung muss jedoch bei der Berechnun
24. bes containing anti coagulant and centrifuged immediately after collection E g for EDTA plasma Sarstedt Monovette red cap 02 166 001 for Heparin plasma Sarstedt Monovette orange cap 02 165 001 for Citrate plasma Sarstedt Monovette green cap 02 167 001 5 2 Specimen Storage Specimens should be capped and may be stored for up to 5 days at 2 8 C prior to assaying Specimens held for a longer time should be frozen only once at 20 C prior to assay Thawed samples should be inverted several times prior to testing 5 3 Specimen Dilution If in an initial assay a specimen is found to contain more than the highest standard the specimens can be diluted with Standard 0 and reassayed as described in Assay Procedure For the calculation of the concentrations this dilution factor has to be taken into account Example a Dilution 1 10 10 uL Serum 90 uL Standard O mix thoroughly b Dilution 1 100 10 uL dilution a 1 10 90 uL Standard O mix thoroughly 6 TEST PROCEDURE 6 1 General Remarks All reagents and specimens must be allowed to come to room temperature before use All reagents must be mixed without foaming Once the test has been started all steps should be completed without interruption Use new disposal plastic pipette tips for each standard control or sample in order to avoid cross contamination Absorbance is a function of the incubation time and temperature Before starting the
25. brados e No mezclar o usar componentes de kits con distinto n mero de lote Se recomienda no intercambiar pocillos de distintas placas incluso si son del mismo lote Los kits pueden haber sido enviados o almacenados bajo diferentes condiciones y las caracter sticas de uni n de las placas pueden resultar diferentes e Los compuestos qu micos y los reactivos preparados o utilizados han de tratarse como residuos peligrosos de acuerdo con las gu as o regulaci n nacionales de seguridad de sustancias biopeligrosas e Las hojas de los datos de seguridad de este producto est n disponibles bajo pedido directamente a DRG Instruments GmbH e Las hojas de los datos de seguridad se ajustan a las demandas de las gu a europea EU Guideline 91 155 EC Vers 10 0 Effective 08 2006 vk 21 DRG Cortisol ELISA EIA 1887 4 COMPONENTES DEL KIT 4 1 Componentes del Kit 1 Microtiterwells Placas multipocillo 12x8 tiras separables 96 pocillos Pocillos recubiertos con anticuerpo anti cortisol monoclonal 2 Standard Standard 0 6 Est ndar 7 viales 1 mL listo para usar Concentraciones 0 20 50 100 200 400 800 ng mL 0 55 2 138 276 552 1104 2208 nmol L Conversi n 1 ng mL 2 76 nmol L contiene 0 3 Proclina como conservante 3 Enzyme Conjugate Conjugado enzim tico 1 vial 25 mL listo para usar cortisol conjugado con la Peroxidasa de r bano Contiene 0 3 Proclina como conservante 4 Substrate Solution Soluc
26. cessary to perform dynamic tests suppression or stimulation in order to localize the defect at one of the three main levels i e adrenal pituitary hypothalamus 2 PRINCIPLE OF THE TEST The DRG Cortisol ELISA Kit is a solid phase enzyme linked immunosorbent assay ELISA based on the principle of competitive binding The microtiter wells are coated with a monoclonal antibody directed towards an antigenic site on the Cortisol molecule Endogenous Cortisol of a patient sample competes with a Cortisol horseradish peroxidase conjugate for binding to the coated antibody After incubation the unbound conjugate is washed off The amount of bound peroxidase conjugate is inversely proportional to the concentration of Cortisol in the sample After addition of the substrate solution the intensity of colour developed is inversely proportional to the concentration of Cortisol in the patient sample 3 PRECAUTIONS e This kit is for in vitro diagnostic use only e For information on hazardous substances included in the kit please refer to Material Safety Data Sheets e All reagents of this test kit which contain human serum or plasma have been tested and confirmed negative for HIV I II HBsAg and HCV by FDA approved procedures All reagents however should be treated as potential biohazards in use and for disposal Avoid contact with Stop Solution containing 0 5 M H2SO It may cause skin irritation and burns Never pipet by mouth and avoid contact of
27. cillo 10 Leer la OD a 450 10 nm con un lector de microplacas dentro de los 10 minutos despu s de la adici n de la Stop Solution oak wWN 6 3 C lculo de los Resultados 1 Calcular los valores de absorbancia media para cada conjunto de est ndares controles y muestras de pacientes 2 Construir una curva est ndar mediante la representaci n de la absorbancia media obtenida para cada est ndar frente a su concentraci n con el valor de absorbancia en el eje vertical Y y la concentraci n en el eje horizontal X 3 Usando el valor de absorbancia media de cada muestra determinar la concentraci n correspondiente a partir de la curva est ndar 4 M todo automatizado Los resultados en la IFU se han calculado autom ticamente usando una curva de regresi n 4 PL 4 Par metros Log sticos Otras funciones de regresi n dar n lugar a resultados sensiblemente diferentes 5 La concentraci n de las muestra puede leerse directamente de la curva de est ndares Las muestras con concentraciones superiores al mayor est ndar han de diluirse Para el c lculo de las concentraciones hay que tener en cuenta el factor de diluci n Abajo aparece un ejemplo t pico de una curva est ndar con el DRG Cortisol ELISA Standard 0 0 ng mL Standard 1 20 ng mL Standard 2 50 ng mL Standard 6 800 ng mL 7 VALORES ESPERADOS Se recomienda encarecidamente que cada laboratorio determine sus valores normales e inusuales 50 ng mL 23
28. controllo i risultati dei pazienti devono essere considerati invalidi In questo caso si prega di controllare i seguenti fattori d errore pipette cronometri fotometro data di scadenza dei reagenti condizione di magazzinaggio e d incubazione metodi di aspirazione e di lavaggio Se dopo il controllo dei suddetti fattori non rilevabile alcun errore si prega di contattare il fornitore o direttamente la ditta DRG 8 5 2 Ritrovato Per dettagli pi precisi consultare la metodica in inglese 8 5 3 Linearit Per dettagli pi precisi consultare la metodica in inglese 9 LIMITAZIONE DEL TEST 9 1 Sostanze interferenti Ogni manutenzione impropria dei campioni o modificazione del protocollo pu influenzare risultati Emoglobina fino a 4 mg mL bilirubina fino a 0 5 mg mL e trigliceridi fino a 7 5 mg mL non influenzano i risultati di questo test 9 2 Droghe interferenti Fino ad oggi nessuna sostanza farmaco conosciuta a noi che abbia influenzato la determinazione di cortisolo nel campione 9 3 Effetto Hook di alti dosaggi Nessun effetto gancio effetto hook stato osservato in questo test Vers 10 0 Effective 08 2006 vk 19 DRG Cortisol ELISA EIA 1887 10 ASPETTI LEGALI 10 1 Affidabilit dei risultati Il test deve essere eseguito esattamente secondo il protocollo dato dal produttore Inoltre l utente deve seguire le regole del GLP Good Laboratory Practice o eventualmente altre regole comportamentali
29. d sticos apropiados para el an lisis de los valores y tendencia de los controles Si los resultados del ensayo no se ajustan a los rangos aceptables establecidos en los controles los resultados obtenidos de los pacientes han de considerarse inv lidos En este caso por favor comprobar las siguientes reas t cnicas Pipeteo y tiempo empleado fot metro fecha de caducidad de los reactivos condiciones de almacenamiento e incubaci n m todos de aspiraci n y lavado Despu s de comprobar los asuntos mencionados arriba sin encontrar ning n error contactar con su distribuidor o con DRG directamente 8 5 2 Recuperaci n Consultar el manual de usuario en ingl s 8 5 3 Linealidad Consultar el manual de usuario en ingl s 9 LIMITACIONES DE USO 9 1 Sustancias que pueden interferir Cualquier manipulaci n inadecuada de las muestras o modificaciones del ensayo pueden influenciar los resultados Hemoglobina hasta 4 mg mL Bilirrubina hasta 0 5 mg mL y Triglic ridos hasta 7 5 mg mL no influencian los resultados del ensayo 9 2 Interferencias con drogas Hasta ahora no se han encontrado sustancias drogas conocidas por nosotros que tengan influencia en la medida de cortisol en una muestra 9 3 Efecto Gancho Dosis Elevada No se ha observado efecto gancho en este ensayo Vers 10 0 Effective 08 2006 vk 25 DRG Cortisol ELISA EIA 1887 10 ASPECTOS LEGALES 10 1 Fiabilidad de los Resultados El ensayo debe realizarse
30. de conservacion Contenuto sufficiente per n saggi Temperatura di conservazione Expiration Date Mindesthaltbarkeits datum Date limite d utilisation Fecha de caducidad Data di scadenza ENEE E Legal Manufacturer Hersteller Fabricant Fabricante Fabbricante Distributed by Distributor Vertreiber Distributeur Distribuidor Distributtore Content Content Inhalt Contenu Contenido Contenuto Volume No Volume No Volumen Anzahl Volume Num ro Volumen N mero Volume Quantit Microtiterwells Microtiterwells Mikrotiterwells o de men Placas multipocillo Micropozzetti Antiserum Antiserum Antiserum Antis rum Antisuero Antisiero Enzyme Enzyme Conjugate Enzymkonjugat Conjugu enzymatique Conjugado enzim tico Tracciante enzimatico Conjugate Enzyme Enzyme Complex Enzymkomplex Complexe Complex enzim tico Complesso enzimatico Complex enzymatique Substrate Substrate Solution Substratl sung Solution substrat Soluci n de sustrato Soluzione di substrato Solution Stop Solution Stop Solution Stoppl sung Solution d arr t Soluci n de parada Soluzione d arresto Zero Standard Zero Standard Nullstandard Standard 0 Est ndar 0 Standard zero Standard Standard Standard Standard Est ndar Standard Control Control Kontrolle Contr le Control Controllo Assay Buffer Assay Buffer Assaypuffer Tampon d essai Tamp n de ensayo Tampone del test Wash Solution Was
31. e du standard le plus concentr alors l chantillon doit tre dilu avec le Standard O et test de nouveau comme d crit dans R alisation du test Pour le calcul des concentrations ce facteur de dilution doit tre pris en consid ration Exemple a dilution 1 10 10 ul Serum 90 uL Standard O bien m langer b dilution 1 100 10 uL dilution a 1 10 90 uL Standard O bien m langer 6 R ALISATION DU TEST 6 1 Remarques g n rales Tous les r actifs et chantillons doivent tre amen s temp rature ambiante avant utilisation Tous les r actifs doivent tre m lang s sans formation de mousse Une fois la proc dure engag e toutes les tapes doivent tre r alis es sans interruption Utiliser un nouveau c ne de pipette pour chaque standard contr le ou chantillon ceci afin d viter toute contamination L absorbance est fonction du temps d incubation et de la temp rature Avant de commencer le test il est recommand de pr parer tous les r actifs bouchons ouverts de pr parer les puits des microplaques etc Cela garantira un intervalle de temps quivalent entre chaque tape sans interruption En r gle g n rale la r action enzymatique est lin airement proportionnelle au temps et la temp rature Vers 10 0 Effective 08 2006 vk 29 6 2 DRG Cortisol ELISA EIA 1887 R alisation du dosage Chaque test doit inclure une courbe talon 1 2 oak w Dispo
32. e s curit en vigueur concernant les produits risque biologique e Ne pas utiliser les r actifs au del de la date d expiration inscrite sur l emballage e Tous les volumes indiqu s doivent tre scrupuleusement respect s comme indiqu dans le protocole exp rimental Seule l utilisation de pipettes calibr es ou d un spectrophotom tre lecteur de micro plaques calibr garantit l obtention de r sultats optimaux ce test e Ne pas m langer ou utiliser des r actifs contenus dans des kits de lots diff rents Il est conseill de ne pas changer les puits de diff rentes plaques m me si celles ci proviennent du m me lot Les kits peuvent avoir t transport s ou stock s diff remment et les caract ristiques de liaison de chaque plaque pourraient ainsi tre modifi es e L limination des solutions chimiques et des r actifs contenus dans ce kit utilis s ou non doit tre en accord avec la r glementation nationale en vigueur concernant l limination des d chets risque biologique e La fiche de s curit concernant ce produit peut tre obtenue en contactant directement DRG Instruments GmbH Les fiches de s curit sont en accord avec les directives europ ennes EU 91 155 EC Vers 10 0 Effective 08 2006 vk 27 DRG Cortisol ELISA EIA 1887 4 COMPOSITION DU KIT 4 1 Contenu du kit 1 Microtiterwells Plaques de micro titratio 12x8 d tacher barrettes plaques de 96 puits Les puits sont recouve
33. erwells microtitula o Mikrotiterbr nde Mikrotiterplatta M KpoTITAO80TNOEWG Antiserum Anti soro Antiserum Antiserum AvTIop g Enzyme Conjugado enzim tico Enzymkonjugat Enzymkonjugat ZuCeuyu vo EVZUUO Conjugate Enzyme Complexo enzim tico Enzymkompleks Enzymkomplex ZUNTT OKO EVZUNOU Complex Substrate Solug o de substrato Substratopl sning Substratl sning Ap Solution UTTOOTPWNATOG Stop Solution Solu o de paragem Stopopl sning Stopp l sning AiGAuua TEPPATIGHOU Zero Standard Padr o zero Standard 0 Standard 0 NMp rutro Mnd v Standard Calibrador Standard Standard Mp tuTTa Control Controlo Kontrol Kontroll E EYXOS Assay Buffer Tamp o de teste Assay buffer Assay Buffer Li Aupa Wash Solution Solu o de lavagem Vaskebuffer Tv tt l sning Al amp AUpa T OEW 1N NaOH 1N NaOH 1N NaOH 1N NaOH 1N NaOH 1 N HCI 1N HCI 1N HCI 1N HCI 1N HCI Sample Diluent Conjugate Diluent Vers 10 0 Effective 08 2006 vk 34
34. es de comenzar el ensayo se recomienda que todos los reactivos est n preparados tapas removidas todos los pocillos que se necesiten asegurados en recipiente etc Esto asegurar un tiempo similar para cada paso de pipeteo sin que haya interrupciones Como regla general la reacci n enzim tica es linealmente proporcional al tiempo y a la temperatura Vers 10 0 Effective 08 2006 vk 23 DRG Cortisol ELISA EIA 1887 6 2 Procedimiento de ensayo Cada uno debe incluir una curva de est ndares Asegurar el nimero deseado de pocillos en el recipiente Dispensar 20 uL de cada Standard Control y muestras con puntas nuevas en los pocillos adecuados Dispensar 200 uL de Enzyme Conjugate a cada pocillo Mezclar totalmente durante 10 segundos Es importante mezclar completamente en este paso Incubar durante 60 minutes a temperatura ambiente sin cubrir la placa Sacudir en rgicamente el contenido de los pocillos Lavar los pocillos 3 veces con Wash Solution diluida 400 uL por pocillo Realizar un golpe seco de los pocillos contra el papel absorbente para eliminar las gotas residuales Nota importante La sensibilidad y la precisi n de este ensayo se ve marcadamente influenciada por la realizaci n correcta del proceso de lavado 7 Adicionar 100 pL de Substrate Solution a cada pocillo 8 Incubar durante 15 minutes a temperatura ambiente 9 Parar la reacci n enzim tica mediante la adici n de 100 uL de Stop Solution a cada po
35. g der Konzentration beachtet werden Beispiel a Verd nnung 1 10 10 ul Serum 90 uL Standard O gr ndlich mischen b Verd nnung 1 100 10 uL Verd nnung a 1 10 90 uL Standard O gr ndlich mischen 6 TESTDURCHF HRUNG 6 1 Allgemeine Hinweise Alle Reagenzien und Proben m ssen vor Gebrauch auf Raumtemperatur gebracht und gut durchgemischt werden Dabei sollte Schaumbildung vermieden werden Wenn die Testdurchf hrung einmal begonnen wurde muss sie ohne Unterbrechung zu Ende gef hrt werden F r jeden Standard jede Kontrolle oder Probe eine neue Plastikspitze verwenden um Verschleppungen zu vermeiden Die Optische Dichte ist abh ngig von Inkubationszeit und Temperatur Deshalb ist es notwendig vor Beginn der Testdurchf hrung alle Reagenzien in einen arbeitsbereiten Zustand zu bringen die Deckel der Fl schchen zu ffnen alle ben tigten Wells in den Halter zu setzen Nur eine solche Vorbereitung garantiert gleiche Zeiten f r jeden Pipettiervorgang ohne Pausen Als generelle Regel gilt dass die enzymatische Reaktion linear proportional zu Zeit und Temperatur ist Vers 10 0 Effective 08 2006 vk 11 DRG Cortisol ELISA EIA 1887 6 2 Testdurchf hrung Jeder Lauf muss eine Standardkurve beinhalten Die ben tigte Anzahl Wells in der Halterung befestigen Je 20 uL Standards Control und Proben mit neuen Plastikspitzen in die entsprechenden Wells geben 200 uL Enzyme Conjugate in jedes Well geben F r 10 Sekunden
36. h Solution Waschl sung Solution de lavage Soluci n de lavado Soluzione di lavaggio 1N NaOH 1N NaOH 1N NaOH 1N NaOH 1N NaOH he AG idrossido di 1 N HCI 1N HCI 1N HCI 1N HCI 1N HCI Sample Diluent Sample Diluent er ee a diluci n Diluente dei campioni pr ate Conjugate Diluent Si N dilution E paia diluci n Diluente del tracciante Vers 10 0 Effective 08 2006 vk 33 DRG Cortisol ELISA EIA 1887 Sym bol Portugues Dansk Svenska EAAnvik C Conformidade comas Europaeisk Europeisk EupwTraikr normas europeias overensstemmelse verensst mmelse ZUNN PPWON Instrug es de uso Brugermanual Anv ndar manual Eyxeipidio xp oTn Diagn stico in vitro In vitro diagnostik Diagnostik in vitro in vitro DIAaYVWOTIK Ese tilsttr kkeligt til n test n tester Cat logo n Katalognummer Katalog nummer ApiBu karad you T No do lote Lot nummer Batch nummer Api8i c Naptidoc Indeholder Inneh ller tillr ckligt till Mepiex pevo errapk c YIA n EGET OEIG UE Temperatura de Opbevaringstemperatu F rvaringstempratur Oepuokpaoia conserva o r ATTOG KEUONG Prazo de validade Udl bsdato B st f re datum Huepounvia MENS Fabricante Producent Tillverkare KaTaoKEUAOT G Distributed by Content Conte do Indhold Inneh ll Mep ex nevo Volume No Volume N mero Volumen antal Volym antal Oykoc api x p Alv olos de ee Brunnar i Mnyad kia Microtit
37. i n de sustrato 1 vial 14 mL listo para usar Tetrametilbencidina TMB 5 Stop Solution Soluci n de parada 1 vial 14 mL listo para usar contiene 0 5M H SO4 Evitar el contacto con la Soluci n de parada Puede causar irritaci n y quemaduras en al piel 6 Wash Solution Soluci n de lavado 1 vial 30 mL concentrado 40X ver Preparaci n de los Reactivos Nota Se puede solicitar el Standard 0 para la diluci n de la muestra 4 1 1 Equipamiento y material requerido pero no provisto Lector de microplacas calibrado 450 10 nm ej DRG Instruments Microtiter Plate Reader Micropipetas de precisi n variable calibradas Papel absorbente Agua destilada 4 2 Almacenamiento y estabilidad del kit Cuando se almacena a 2 8 C los reactivos sin abrir mantienen su reactividad hasta la fecha de caducidad No utilizar los reactivos m s all de esta fecha Los reactivos abiertos han de almacenarse a 2 8 C Las placas multipocillo han de almacenarse a 2 8 C Una vez se ha abierto la bolsa hay que tener cuidado y cerrarla de nuevo 4 3 Preparaci n de los Reactivos Dejar que todos los reactivos y el n mero requerido de tiras alcancen la temperatura ambiente antes de usarse Wash Solution Mezclar 30 mL de la soluci n de lavado concentrada con 1170 mL de agua desionizada hasta un volumen final de 1200 mL La soluci n del lavado diluida es estable durante 2 semanas a temperatura ambiente 4 4 Elimi
38. i campioni I campioni dovrebbero essere magazzinati ben chiusi fino a 5 giorni a 2 8 C Campioni magazzinati per un periodo pi lungo dovrebbero essere congelati solo una volta a 20 C prima dell analisi Congelare soltanto una volta Invertire campioni scongelati alcune volte prima dell uso 5 3 Diluizione dei campioni Se in un campione di siero viene trovata una concentrazione oltre lo standard piu alto questo campione pu essere diluito con lo Standard 0 e nuovamente determinato Della diluizione deve essere per tenuto conto Esempio a diluizione 1 10 10 uL siero 90 uL Standard O agitare bene b diluizione 1 100 10 uL della diluizione a 90 uL Standard O agitare bene 6 ATTUAZIONE DEL TEST 6 1 Indicazioni generali Tutti i reagenti e i campioni devono essere portati a temperatura ambiente e ben mescolati prima dell uso Evitare la formazione di schiume Una volta iniziato il procedimento del test questo deve essere portato alla fine senza interruzione Per ogni componente standard controllo o campione necessario utilizzare una nuova punta monouso per evitare reazioni incrociate La densit ottica dipende dal tempo d incubazione e dalla temperatura Perci si rende necessario di preparare tutti i reagenti di aprire i tappi dei flaconi e di appostare tutti i pozzetti nelle appropriate posizioni Soltanto una tale preparazione garantisce gli stessi tempi per ogni processo di pipettamento
39. ie nach berpr fung der vorgenannten Bereiche keinen Fehler erkannt haben setzen Sie sich bitte mit Ihrem Lieferanten oder direkt mit der Firma DRG in Verbindung Die Daten zu 8 5 2 Wiederfindung 8 5 3 Linearit t entnehmen Sie bitte der ausf hrlichen englischen Arbeitsanleitung 9 GRENZEN DES TESTS 9 1 Interferenzen Jede unsachgem e Behandlung von Proben oder Modifikationen dieses Tests k nnen die Ergebnisse beeinflussen H moglobin bis zu 4 mg mL Bilirubin bis zu 0 5 mg mL und Triglyceride bis zu 7 5 mg mL haben keinen Einfluss auf das Testergebnis 9 2 Beeinflussung durch Medikamente Uns sind bislang keine Stoffe Medikamente bekannt geworden deren Einnahme die Messung des Cortisol Gehaltes der Probe beeinflussen w rde 9 3 High Dose Hook Effekt Ein Hook Effekt tritt in diesem Test nicht auf Vers 10 0 Effective 08 2006 vk 13 DRG Cortisol ELISA EIA 1887 10 RECHTLICHE GRUNDLAGEN 10 1 Zuverl ssigkeit der Ergebnisse Der Test muss exakt gem der Testanleitung des Herstellers abgearbeitet werden Dar ber hinaus muss der Benutzer sich strikt an die Regeln der GLP Good Laboratory Practice oder andere eventuell anzuwendende Regeln oder nationale gesetzliche Vorgaben halten Dies betrifft besonders den Gebrauch der Kontrollreagenzien Es ist sehr wichtig bei der Testdurchf hrung stets eine ausreichende Anzahl Kontrollen zur berpr fung der Genauigkeit und Pr zision mitlaufen zu lassen Die
40. is nationales Cela est sp cialement le cas pour l utilisation des r actifs contr les Pour chaque test il est important d inclure un nombre suffisant de contr les afin de pouvoir valider l exactitude et la pr cision du test Les r sultats du test sont valides si et seulement si tous les contr les sont compris dans les gammes de mesure mentionn es et si tous les autres param tres du test sont galement compris dans les instructions de ce test En cas de doute ou d inqui tude contacter la DRG 10 2 Cons quences th rapeutiques Les suites th rapeutiques ne devront jamais tre bas es sur les r sultats de laboratoire seuls m me si les tous les r sultats du test sont en accord avec les points mentionn s dans le paragraphe 10 1 Tout r sultat n est qu une partie du tableau clinique complet d un patient Les suites th rapeutiques peuvent d couler des r sultats de laboratoire si et seulement si ceux ci sont en accord avec l ensemble du tableau clinique du patient Le r sultat du test en lui m me ne doit en aucun cas tre le seul d terminant des suites th rapeutiques suivre 10 3 Responsabilit Toute modification du kit et ou change ou m lange d un des composants de diff rents lots d un kit un autre pourrait affecter de fa on n gative les r sultats attendus et la validit du test dans son ensemble De telles modifications ou changes invalident toute r clamation pour remplacement Toutes les r cl
41. lasma Heparina Sarstedt Monovette tapa naranja 02 165 001 para plasma Citrato Sarstedt Monovette tapa verde 02 167 001 5 2 Almacenamiento de las muestras Las muestras deben ser tapadas y pueden ser almacenadas hasta 5 d as a 2 8 C antes del ensayo Las muestras almacenadas por un per odo de tiempo mas largo han de congelarse s lo una vez a 20 C antes del ensayo Las muestras descongeladas deben invertirse varias veces antes del ensayo 5 3 Diluci n de las muestras Si en un ensayo inicial se encuentra una muestra que presenta valores mayores que el est ndar mas concentrado ha de diluirse con Standard 0 y volver a ensayarse como se describe en el Procedimiento de Ensayo Para el c lculo de las concentraciones habr que tener en cuenta el factor de diluci n Ejemplo a diluci n 1 10 10 uL Suero 90 uL Standard O mezclar totalmente b diluci n 1 100 10 uL diluci n a 1 10 90 uL Standard O mezclar totalmente 6 PROCEDIMIENTO DE ENSAYO 6 1 Consideraciones generales Todos los reactivos y muestras han de estar a temperatura ambiente antes de su uso Todos los reactivos deben mezclarse sin formar espuma Una vez se ha comenzado el ensayo deben completarse todos los pasos sin interrupci n Utilizar puntas de pipeta de pl stico nuevas para cada est ndar control o muestra para evitar combinaciones cruzadas La absorbancia es funci n del tiempo de incubaci n y la temperatura Ant
42. lle Reagenzien bei 2 8 C gelagert werden Die Mikrotiterwells sollten bei 2 8 C gelagert werden Der einmal ge ffnete Folienbeutel sollte stets sehr sorgf ltig wieder verschlossen werden 4 3 Vorbereitung der Reagenzien Alle Reagenzien sowie die ben tigte Anzahl von Wells sollen vor dem Gebrauch auf Raumtemperatur gebracht werden Wash Solution Die 40 fach konzentrierte Waschl sung 30 mL mit 1170 mL destilliertem Wasser auf ein Gesamtvolumen von 1200 mL verd nnen Die verd nnte Waschl sung ist bei Raumtemperatur f r 2 Wochen stabil 4 4 Entsorgung des Kits Die Entsorgung des Kits muss gem den nationalen gesetzlichen Vorschriften erfolgen Spezielle Informationen f r dieses Produkt finden Sie im Materialsicherheitsdatenblatt Kapitel 13 4 5 Beschadigte Testkits Im Falle einer starken Besch digung des Testkits oder der Komponenten muss die Firma DRG in schriftlicher Form sp testens eine Woche nach Erhalt des Kits informiert werden Stark besch digte Einzelkomponenten sollten nicht f r den Testlauf verwendet werden Sie m ssen gelagert werden bis eine endg ltige L sung gefunden wurde Danach sollten Sie gem den offiziellen Richtlinien entsorgt werden Vers 10 0 Effective 08 2006 vk 10 DRG Cortisol ELISA EIA 1887 5 PROBENVORBEREITUNG Serum oder Plasma EDTA Heparin oder Zitratplasma kann in diesem Test als Probenmaterial eingesetzt werden Lip mische ikterische und oder stark h molysierte Pro
43. naci n del Kit La eliminaci n del kit debe realizarse de acuerdo con las leyes nacionales En las hojas de datos de seguridad se proporciona informaci n especial de este producto ver cap tulo 13 4 5 Kits de ensayo da ados En caso de que exista cualquier da o severo del kit de ensayo o de sus componentes ha de informarse por escrito a DRG no mas tarde de una semana despu s de recibir el kit No deben utilizarse componentes da ados para llevar a cabo un ensayo Han de almacenarse hasta que se encuentre una soluci n Despu s de esto deben ser eliminados de acuerdo con las leyes oficiales Vers 10 0 Effective 08 2006 vk 22 DRG Cortisol ELISA EIA 1887 5 MUESTRAS En este ensayo pueden usarse suero o plasma plasma EDTA Heparina o citrato No usar muestras hemol ticas ict ricas o lip micas Tener en cuenta No deben usarse muestras que contengan acida s dica 5 1 Toma de muestras Suero Recoger la sangre por punci n en la vena ej Sarstedt Monovette 4 02 1388 001 permitir coagulaci n y separar el suero por centrifugaci n a temperatura ambiente No centrifugar antes de la coagulaci n completa Las muestras de pacientes que reciben terapia anticoagulante requieren m s tiempo para coagular Plasma Toda la sangre ha de recogerse en tubos de centr fuga que contengan anticoagulante y centrifugar inmediatamente tras la recogida Ej Para plasma EDTA Sarstedt Monovette tapa roja 02 166 001 para p
44. nd der Inkubation konkurriert das Cortisol aus der Probe mit dem Cortisol Enzymkonjugat um die freien Bindungsstellen auf den beschichteten Wells Das nicht gebundene Konjugat wird durch Waschen der Wells entfernt AnschlieRend wird die Substratl sung zugegeben und die Farbentwicklung nach einer definierten Zeit gestoppt Die Intensit t der gebildeten Farbe ist umgekehrt proportional der Cortisol Konzentration in der Probe Die Extinktion wird bei 450 nm mit einem Mikrotiterplattenleser gemessen 3 VORSICHTSMARNAHMEN e Dieser Kit ist nur zum in vitro diagnostischen Gebrauch geeignet e Informationen zu im Kit enthaltenen gef hrlichen Substanzen entnehmen Sie bitte dem Materialsicherheitsdatenblatt e Alle Bestandteile dieses Testkits die humanes Serum oder Plasma enthalten wurden mit FDA gepr ften Methoden auf HIV I II HbsAg und HCV getestet und als negativ best tigt Jedoch sollten alle Bestandteile im Umgang und bei der Entsorgung wie m gliche Gefahrenstoffe betrachtet werden e Der Kontakt mit der Stop Solution sollte vermieden werden da sie 0 5 M H2SO enth lt Schwefels ure kann Hautreizungen und Verbrennungen verursachen e Nicht mit dem Mund pipettieren und den Kontakt von Kitbestandteilen und Proben mit Haut und Schleimh uten vermeiden e Inden Bereichen in denen Proben oder Kitbestandteile verwendet werden nicht rauchen essen oder Kosmetika verwenden e Beim Umgang mit Proben oder Reagenzien Einweg Latexhandschuhe tragen
45. never be the sole determinant for deriving any therapeutical consequences 10 3 Liability Any modification of the test kit and or exchange or mixture of any components of different lots from one test kit to another could negatively affect the intended results and validity of the overall test Such modification and or exchanges invalidate any claim for replacement Claims submitted due to customer misinterpretation of laboratory results subject to point 10 2 are also invalid Regardless in the event of any claim the manufacturer s liability is not to exceed the value of the test kit Any damage caused to the test kit during transportation is not subject to the liability of the manufacturer 11 REFERENCES 1 L Thomas Labor und Diagnose 4 Auflage 1992 2 Tietz N W Textbook of Clinical Chemistry Saunders 1968 Vers 10 0 Effective 08 2006 vk 8 DRG Cortisol ELISA EIA 1887 Deutsch 1 EINLEITUNG Der DRG Cortisol ELISA wird zur quantitativen Bestimmung von Cortisol in Serum und Plasma eingesetzt Nur f r In vitro Diagnostik 2 TESTPRINZIP Der DRG Cortisol ELISA ist ein Festphasen Enzymimmunoassay der auf dem Prinzip der kompetitiven Bindung basiert Die Wells der Mikrotiterplatten sind mit einem monoklonalen Antik rper beschichtet der gegen eine Antik rper Bindungsstelle des Cortisol Molek ls gerichtet ist Die Proben werden in die beschichteten Wells gegeben und zusammen mit einem Cortisol Enzymkonjugat inkubiert W hre
46. o disposizioni legali Questo vale soprattutto per l uso delle referenze molto importante utilizzare un numero appropriato di referenze in parallelo ai campioni test per poter controllare l esattezza e la precisione del test I risultati del test sono validi soltanto se tutte le referenze cadono nei margini prestabiliti e se tutti gli altri parametri del test soddisfano la specificazione per questo test Se esistono dubbi o domande su questi risultati si prega di contattare la ditta DRG 10 2 Conseguenze terapeutiche Soltanto sulla base dei risultati dei laboratori non dovrebbero essere intraprese delle conseguenze terapeutiche di alcun tipo anche se i risultati del test sono d accordo con gli aspetti articolati nel punto 10 1 Ogni risultato di laboratorio soltanto una parte di un quadro clinico completo di un paziente Soltanto in casi in cui i risultati di un test del laboratorio si accordano con il quadro clinico dell ammalato si possono intraprendere delle conseguenze terapeutiche Il risultato del test da solo non base sufficiente per lo stabilimento di una terapia 10 3 Responsabilit legali Ogni cambiamento del protocollo del test e o lo scambio o il mescolamento di componenti provenienti da cariche diverse possono influenzare negativamente i risultati e compromettere la validit del test Questi cambiamenti e o scambi annullano ogni diritto al risarcimento Si respingano inoltre tutti i richiami risultanti da interpreta
47. on ist die Haftung des Herstellers maximal auf den Wert des Testkits beschr nkt Jegliche Sch den die w hrend des Transports am Kit entstanden sind unterliegen nicht der Haftung des Herstellers 11 REFERENZEN Angaben zu den Referenzen entnehmen Sie bitte der ausf hrlichen englischen Arbeitsanleitung Vers 10 0 Effective 08 2006 vk 14 DRG Cortisol ELISA EIA 1887 1 INTRODUZIONE Il test immuno enzimatico DRG Cortisol ELISA contiene materiale per la determinazione quantitativa di cortisolo in siero e plasma Questo test kit adatto soltanto per l uso diagnostico 2 PRINCIPIO DEL TEST Il test Cortisol ELISA un test immunologico in fase solida con enzimi ancorati su un substrato ELISA basato sul principio del legame competitivo I micropozzetti sono ricoperti con un anticorpo monoclonale diretto contro un unico sito antigenico della molecola cortisolo Cortisolo endogeno di un campione compete con il cortisolo coniugato alla per ossidasi di rafano per il sito di legame sull anticorpo ancorato nel micropozzo Dopo l incubazione il coniugato non legato lavato via La quantit della perossidasi coniugata legata inversamente proporzionale alla concentrazione di cortisolo nel campione Dopo l aggiunta della soluzione substrato l intensit del colore sviluppato inversamente proporzionale alla concentrazione di cortisolo nel campione del paziente 3 PRECAUZIONI e Questo kit adatto soltanto per l uso diagno
48. ostruire una curva standard riportare i valori medi della densit ottica OD di ogni standard contro la rispettiva concentrazione dove i valori delle OD si devono trovare sull asse verticale Y e le concentrazioni sull asse orizzontale X 3 Utilizzando il valore medio delle OD per ogni campione si determina la rispettiva concentrazione dalla curva standard 4 Metodo automatico risultati in IFU sono stati calcolati automaticamente usando un fitting avvicinamento con il 4 PL 4 Parameter Logistics Altri funzioni usati per l elaborazioni dei dati possono dare risultati leggermente differenti 5 La concentrazione dei campioni pu essere determinata direttamente dalla curva standard Campioni con una concentrazione piu elevata dello standard piu concentrato devono essere diluiti Di questo fattore di diluizione deve essere tenuto conto per il calcolo della concentrazione Ni In seguito riportato un esempio di una curva standard con DRG Cortisol ELISA Standard Densit ottiche 450 nm Standard 0 0 ng mL Standard 1 20 ng mL Standard 2 50 ng mL Standard 6 800 ng mL 7 VALORI NORMALI E consigliabile che ogni laboratorio determini i propri valori normali e anormali 50 ng mL 230 ng mL 138 635 nmol L 8 00 h 10 00 h 30 ng mL 150 ng mL 82 8 414 nmol L 16 00 h Tietz s Textbook 2 Vers 10 0 Effective 08 2006 vk 18 DRG Cortisol ELISA EIA 1887 8 CARATTERISTICHE DEL TE
49. r monoklonal beschichtet 2 Standard Standard 0 6 7 Fl schchen je 1 mL gebrauchsfertig Konzentrationen 0 20 50 100 200 400 800 ng mL entsprechend 0 55 2 138 276 552 1104 2208 nmol L Umrechnungsfaktor 1 ng mL 2 76 nmol L Enthalt 0 3 Proclin als Konservierungsstoff 3 Enzyme Conjugate Enzymkonjugat 1 Fl schchen 25 mL gebrauchsfertig Cortisol mit Meerrettichperoxidase konjugiert Enthalt 0 3 Proclin als Konservierungsstoff 4 Substrate Solution Substratl sung 1 Fl schchen 14 mL gebrauchsfertig Substratl sung TMB 5 Stop Solution Stoppl sung 1 Fl schchen 14 mL gebrauchsfertig Enth lt 0 5M H2S04 Kontakt mit der Stoppl sung vermeiden Kann Hautreizungen und Verbrennungen verursachen 6 Wash Solution Waschl sung 40X konzentriert 1 Fl schchen 30 mL Siehe Vorbereitung der Reagenzien Anmerkung Zus tzlicher Standard 0 zur Probenverd nnung ist auf Anfrage erh ltlich 4 1 1 Nicht im Kit enthaltene aber erforderliche Ger te und Materialien Kalibriertes Mikrotiterplattenleseger t mit 450 10 nm Filter z B das DRG Instruments Mikrotiterplattenleseger t Kalibrierte variable Pr zisions Mikropipette Saugf higes Papier Aqua dest 4 2 Lagerung und Haltbarkeit des Kits Die unge ffneten Reagenzien behalten bei Lagerung um 2 8 C ihre Reaktivit t bis zum Verfallsdatum Nach dem Verfallsdatum die Reagenzien nicht mehr verwenden Nach dem ffnen sollten a
50. reagents and specimens with skin and mucous membranes Do not smoke eat drink or apply cosmetics in areas where specimens or kit reagents are handled Wear disposable latex gloves when handling specimens and reagents Microbial contamination of reagents or specimens may give false results e Handling should be in accordance with the procedures defined by an appropriate national biohazard safety guideline or regulation e Do not use reagents beyond expiry date as shown on the kit labels e All indicated volumes have to be performed according to the protocol Optimal test results are only obtained when using calibrated pipettes and microtiterplate readers e Do not mix or use components from kits with different lot numbers It is advised not to exchange wells of different plates even of the same lot The kits may have been shipped or stored under different conditions and the binding characteristics of the plates may result slightly different e Chemicals and prepared or used reagents have to be treated as hazardous waste according the national biohazard safety guideline or regulation e Safety Data Sheets for this product are available upon request directly from DRG Instruments GmbH The Safety Data Sheets fit the demands of EU Guideline 91 155 EC Vers 10 0 Effective 08 2006 vk 2 DRG Cortisol ELISA EIA 1887 4 KIT COMPONENTS 4 1 Contents of the Kit 1 Microtiterwells 12x8 break apart strips 96 wells Wells coated with a anti
51. rises entre 0 800 ng mL 8 2 Sp cificit des anticorps R action crois e Voir le manuel d utilisateur en version anglaise 8 3 Sensibilit de analyse La sensibilit de analyse a t calcul e partir de la moyenne la plus faible de deux d viations standards de l analyse de vingt r plicats du Standard 0 et a t mesur e 2 5 ng mL 6 9 nmol L 8 4 Precision Voir le manuel de l utilisateur en version anglaise 8 5 Exactitude 8 5 1 Contr le de qualit Il est recommand d utiliser les chantillons contr les selon les r glementations nationales en vigueur L utilisation des chantillons contr les est recommand afin de s assurer jour apr s jour de la validit des r sultats Utiliser les contr les de valeurs normales et pathologiques Les contr les et les r sultats correspondants issus du laboratoire QC sont mentionn s dans le certificat QC fourni avec le kit Les valeurs et les limites mentionn es sur la fiche QC font toujours r f rence au lot de kit courant et doivent tre utilis es pour une comparaison directe avec les r sultats Il est galement recommand d utiliser les programmes d valuation de qualit nationaux ou internationaux afin de s assurer de l exactitude des r sultats Utiliser les m thodes d analyses statistiques appropri es pour l analyse des valeurs contr les et des tendances Si les r sultats ne correspondent pas aux limites tablies des contr les les r sultats conce
52. rnant ces patients doivent tre consid r es comme non valides Dans ce cas tester les zones techniques suivantes m canisme de pipettage et temps spectrophotom tre dates d expiration des r actifs conditions de stockage et d incubation m thodes d aspiration et de lavage Apr s avoir tester les points mentionn s si aucune erreur n est d tect e contacter votre distributeur ou directement la DRG 8 5 2 Recouvrement Voir le manuel de l utilisateur en version anglaise 8 5 3 Lin arit Voir le manuel de Putilisateur en version anglaise 9 LIMITES D UTILISATION 9 1 Substances parasites Toute utilisation impropre des chantillons ou toute modification du test peut influencer les r sultats L h moglobine jusqu 4 mg mL la bilirubine jusqu 0 5 mg mL et les triglyc rides jusqu 7 5 mg mL n ont aucune influence sur les r sultats du dosage 9 2 Drogues parasites Jusqu pr sent nous ne connaissons aucune substance drogues capable d influencer la mesure de cortisol dans un chantillon 9 3 Effet de surdosage Aucun effet de surdose n a t observ avec ce test Vers 10 0 Effective 08 2006 vk 31 DRG Cortisol ELISA EIA 1887 10 ASPECTS LEGAUX 10 1 Fiabilit des r sultats Ce test doit tre exactement utilis selon les instructions d utilisation du fabricant De plus les utilisateurs doivent strictement respecter les r gles de la bonne pratique de laboratoire ou autres lo
53. rts avec un anticorps anti cortisol monoclonal 2 Standard Standard 0 6 7 flacons 1 mL pr t l emploi Concentrations 0 20 50 100 200 400 800 ng mL 0 55 2 138 276 552 1104 2208 nmol L Conversion 1 ng mL 2 76 nmol L contient 0 3 de Proclin comme agent de conservation 3 Enzyme Conjugate Conjugu enzymatique 1 flacon 25 mL pr t l emploi cortisol conjugu e la HRP contient 0 3 de Proclin comme agent de conservation 4 Substrate Solution Solution substrat 1 flacon 14 mL pr t l emploi T tram thylbenzidine TMB 5 Stop Solution Solution d arr t 1 flacon 14 mL pr t l emploi contient 0 5M de H2SO4 Eviter les contacts avec la solution stop Cela pourrait engendrer irritations ou br lures de la peau 6 Wash Solution Solution de lavage 1 flacon concentr 40X voir Pr paration des r actifs Remarque Un Standard 0 suppl mentaire peut tre fourni sur demande 4 1 1 Equipement et mat riel requis mais non fournis Un spectrophotom tre lecteur de micro plaques calibr 450 10 nm ex le lecteur de microplaques de DRG Instruments GmbH Des micro pipettes de pr cision variables et calibr es Du papier absorbant De l eau distill e 42 Stockage et stabilit du kit Les r actifs contenus dans des flacons non ouverts stock s 2 8 C seront stables jusqu la date d expiration inscrite sur l tiquette Ne pas utiliser les r actifs
54. ser le nombre de puits de micro titration d sir dans le support D poser 20 uL de chaque Standard Control et les chantillons avec de nouveaux c nes de pipette dans les puits appropri s D poser 200 uL d Enzyme Conjugate dans chaque puits Bien m langer pendant 10 secondes II est important d obtenir un m lange parfait lors de cette tape Incuber pendant 60 minutes a temp rature ambiante sans couvrir la plaque D canter le contenu des puits et rincer les puits 3 fois avec Wash Solution dilu e 400 uL par puits Tapoter les puits sur du papier absorbant afin d liminer les gouttelettes r siduelles Remarque importante La sensibilit et la pr cision de ce test sont fortement d pendantes de la bonne r alisation des tapes de lavage Ajouter 100 uL de Substrate Solution a chaque puits Incuber pendant 15 minutes a temp rature ambiante Stopper la r action enzymatique en ajoutant 100 pL de Stop Solution a chaque puits Lire la densit optique 450 10 nm a l aide d un spectrophotom tre lecteur de micro plaques dans les 10 minutes apr s avoir ajout la Stop Solution Calcul des r sultats Calculer les valeurs moyennes des densit s optiques pour chaque s rie de standards contrdles et chantillons Etablir la courbe talon en reportant la densit optique moyenne de chaque valeur standard en fonction de sa concentration en posant la densit optique en axe des ordonn es et la concentration en
55. st kits danneggiati Nel caso di gravi danneggiamenti del kit o dei suoi componenti deve avvenire una dichiarazione scritta alla ditta DRG al piu tardi una settimana dopo il ricevimento del kit Componenti danneggiati non dovrebbero essere utilizzati per il test Questi componenti devono essere magazzinati fino ala soluzione del problema Dopo di che essi devono essere smaltiti secondo le norme ufficiali Vers 10 0 Effective 08 2006 vk 16 DRG Cortisol ELISA EIA 1887 5 CAMPIONI Siero o plasma EDTA Eparina or citrate plasma pud essere usato per questo test Non usare campioni emolitici itterici o lipemici Attenzione Se i campioni contengono sodio azide non devono essere utilizzati per questo test 5 1 Collezione dei campioni Siero Collezionare sangue tramite puntura venale p es Sarstedt Monovette 02 1388 001 far coagulare e separare il siero centrifugando a temperatura ambiente Non centrifugare prima che la coagulazione sia completata Campioni di pazienti con una terapia anticoagulante possono richiedere pi tempo per la coagulazione Plasma Il sangue dovrebbe essere collezionato in tubetti da centrifuga contenenti un anticoagulante e centrifugando immediatamente dopo la puntura P es per EDTA plasma Sarstedt Monovette red cap 02 166 001 per eparina plasma Sarstedt Monovette orange cap 02 165 001 per citrate plasma Sarstedt Monovette green cap 02 167 001 5 2 Magazzinaggio de
56. stico in vitro e Informazioni su sostanze pericolose contenute nel kit sono riportate nel regolamento di sicurezza e Tutti i componenti del kit che contengono siero o plasma umano sono controllati e confermati negativi per la presenza di HIV I II HbsAg e HCV con metodi conformi alle norme FDA Ciononostante tutti i componenti dovrebbero essere trattati come potenziali sostanze nocive nella manutenzione e nello smaltimento e Il contatto con la Stop Solution dovrebbe essere evitato perch contiene 0 5 M H2SO L acido solforico pu provocare irritazioni cutanee e ustioni e Non pipettare con la bocca ed evitare il contatto con componenti del kit con la pelle o con le mucose e Nelle aree in cui il test viene utilizzato non fumare mangiare bere o fare uso di prodotti cosmetici e Nella manutenzione dei campioni o reagenti del kit portare guanti di latex monouso La contaminazione dei reagenti o dei campioni con microbi pu dare risultati falsi e L utilizzo dovrebbe avvenire secondo regole che seguono le rispettive norme di sicurezza nazionali sulle sostanze nocive e Non utilizzare i reagenti dopo la scadenza indicata sul kit e Ogni indicazione sulla quantit indicata del protocollo del kit deve essere accuratamente seguito Risultati ottimali possono essere ottenuti soltanto con l uso di pipette calibrate e spettrofotometro calibrato e Componenti del kit con numeri di lotto diversi non devono essere combinati consigliabile di non
57. strips to reach room temperature prior to use Wash Solution Dilute 30 mL of concentrated Wash Solution with 1170 mL deionized water to a final volume of 1200 mL The diluted Wash Solution is stable for 2 weeks at room temperature 4 4 Disposal of the Kit The disposal of the kit must be made according to the national regulations Special information for this product is given in the Material Safety Data Sheets see chapter 13 4 5 Damaged Test Kits In case of any severe damage of the test kit or components DRG have to be informed written latest one week after receiving the kit Severely damaged single components should not be used for a test run They have to be stored until a final solution has been found After this they should be disposed according to the official regulations Vers 10 0 Effective 08 2006 vk 3 DRG Cortisol ELISA EIA 1887 5 SPECIMEN Serum or plasma EDTA Heparin or citrate plasma can be used in this assay Do not use haemolytic icteric or lipaemic specimens Please note Samples containing sodium azide should not be used in the assay 5 1 Specimen Collection Serum Collect blood by venipuncture e g Sarstedt Monovette 02 1388 001 allow to clot and separate serum by centrifugation at room temperature Do not centrifuge before complete clotting has occurred Patients receiving anticoagulant therapy may require increased clotting time Plasma Whole blood should be collected into centrifuge tu
58. t physiological conditions only about 10 of plasma cortisol circulates unbound from transcortin and albumin Among the products of the human adrenal cortex only cortisol is involved in the regulation of ACTH secretion As the level of free non protein bound cortisol in blood rises the release of ACTH is inhibited by the negative feedback effect Conversely if cortisol levels are subnormal the negative feedback decreases ACTH levels rise and the adrenal cortex secretes cortisol until normal blood levels are restored The release of ACTH is under control of hypothalamic corticotrophin releasing hormone CRH the negative feedback system involving cortisol has been identified at both hypothalamic and pituitary levels 1 Normally during the day there is a fluctuation of cortisol achieving the highest level in the morning and the lowest in the night Useful information is given when cortisol measurement is done in samples withdrawn at a fixed hour 8 00 a m The main biological effects of cortisol are promotion of gluconeogenesis deposition of liver glycogen increase in blood glucose concentration when the carbohydrate utilization is reduced effect on fat metabolism and anti inflammatory action Cortisol measurement is a powerful tool for the evaluation of suspected abnormalities in glucocorticoid production Cushing s Syndrome hypercortisolism Addison s disease or secondary adrenal insufficiency hypocortisolism In many cases it is ne
59. te kit es solamente para diagn stico in vitro e Para obtener informaci n de las sustancias peligrosas incluidas en el kit por favor mirar las hojas de los datos de seguridad del material e Todos los reactivos en este kit de ensayo que contienen suero o plasma humano se han ensayado y confirmado ser negativos para HIV III HBsAg y HCV mediante procedimientos aprobados por la FDA Sin embargo todos los reactivos deben ser tratados tanto en su uso como dispensaci n como potencialmente biopeligrosos e Evitar contacto con Stop Solution que contiene H2SO 0 5 M Puede provocar irritaci n y quemaduras en la piel e Nunca pipetear con la boca y evitar el contacto de los reactivos y las muestras con la piel y con membranas mucosas e No fumar comer beber o usar cosm ticos en reas donde las muestras o los reactivos del kit est n siendo usados e Usar guantes de l tex cuando se utilicen las muestras y los reactivos La contaminaci n microbiana de los reactivos o las muestras puede dar resultados err neos e El manejo debe realizarse de acuerdo a los procedimientos definidos por las gu as o regulaci n nacionales de seguridad de sustancias biopeligrosas e No utilizar los reactivos despu s de su fecha de caducidad que aparece en las etiquetas del kit e Todos los vol menes indicados han de ser realizados de acuerdo con el protocolo Los resultados ptimos del ensayo se obtienen solo cuando se utilizan pipetas y lectores de microplacas cali
60. the assay results 9 2 Drug interferences Until today no substances drugs are known to us which have an influence to the measurement of Cortisol in a sample 9 3 High Dose Hook Effect No hook effect was observed in this test Vers 10 0 Effective 08 2006 vk 7 DRG Cortisol ELISA EIA 1887 10 LEGAL ASPECTS 10 1 Reliability of Results The test must be performed exactly as per the manufacturer s instructions for use Moreover the user must strictly adhere to the rules of GLP Good Laboratory Practice or other applicable national standards and or laws This is especially relevant for the use of control reagents It is important to always include within the test procedure a sufficient number of controls for validating the accuracy and precision of the test The test results are valid only if all controls are within the specified ranges and if all other test parameters are also within the given assay specifications In case of any doubt or concern please contact DRG 10 2 Therapeutical Consequences Therapeutical consequences should never be based on laboratory results alone even if all test results are in agreement with the items as stated under point 10 1 Any laboratory result is only a part of the total clinical picture of a patient Only in cases where the laboratory results are in acceptable agreement with the overall clinical picture of the patient should therapeutical consequences be derived The test result itself should
61. tics 4 Parameter Rodbard bestimmt Andere Auswertungsfunktionen k nnen leicht abweichende Werte ergeben 5 Die Konzentration der Proben kann direkt von der Standardkurve abgelesen werden Proben die eine h here Konzentration als die des h chsten Standards enthalten m ssen verd nnt werden Dieser Verd nnungsfaktor muss bei der Berechnung der Konzentration beachtet werden Nachfolgend wird ein typisches Beispiel f r eine Standardkurve mit dem DRG Cortisol ELISA gezeigt Standard Optische Dichte 450nm Standard 0 0 ng mL Standard 1 20 ng mL Standard 2 50 ng mL Standard 6 800 ng mL 7 ERWARTETE WERTE Es wird empfohlen dass jedes Labor seine eigenen normalen und abnormalen Werte ermittelt Die folgenden Normalwerte nach Tietzes Textbook of Clinical Chemistry 2 k nnen als Richtwerte gelten Wegen der zirkadianen Rhythmik des Plasma Cortisols kann der Normalbereich nur f r eine definierte Tageszeit angegeben werden Morgens 8 00 10 00 Uhr 50 230 ng mL 138 635 nmol l Nachmittags 16 00 Uhr 30 150 ng mL 82 8 414 nmol l Vers 10 0 Effective 08 2006 vk 12 DRG Cortisol ELISA EIA 1887 8 ASSAY CHARACTERISTIKA 8 1 Messbereich Der Messbereich des Testes liegt zwischen 0 800 ng mL 8 2 Spezifit t der Antik rper Kreuzreaktivit t Die Daten entnehmen Sie bitte der ausf hrlichen englischen Arbeitsanleitung 8 3 Analytische Sensitivit t Die analytische Sensitivit t definiert als
62. tiliser des chantillons h molys s ict riques ou lip miques Remarque Les chantillons contenant de l azide de sodium ne doivent pas tre utilis s pour ce test 5 1 Pr l vement et pr paration des chantillons S rum Pr lever le sang par ponction veineuse ex Sarstedt Monovette 02 1388 001 laisser coaguler puis s parer le s rum par centrifugation temp rature ambiante Ne pas centrifuger avant que la coagulation ne soit termin e Les patients sous traitement anti coagulant peuvent demander un temps de coagulation plus important Plasma Le sang total doit tre pr lev dans des tubes de centrifugation contenant un anti coagulant et centrifug imm diatement apr s le pr l vement ex pour EDTA plasma Sarstedt Monovette bouchon rouge 02 166 001 pour h parine plasma Sarstedt Monovette bouchon orange 02 165 001 pour citrate plasma Sarstedt Monovette bouchon vert 02 167 001 5 2 Conservation des chantillons Les tubes contenant les chantillons doivent tre ferm s et peuvent tre stock s jusqu cinq jours 2 8 C avant d tre test s Les chantillons stock s pour un temps prolong doivent tre congel s 20 C avant d tre test s Les chantillons d congel s doivent tre retourn s plusieurs fois avant le test 5 3 Dilution de l chantillon Si lors d un test pr liminaire la concentration de l chantillon se r v le tre sup rieure cell
63. zioni sbagliate da parte dell utente secondo il paragrafo 10 2 Nel caso di reclamazione la garanzia del produttore limitato al valore massimo del test kit Ogni danno provocato durante il trasporto del kit non sottost alla responsabilit del produttore 11 BIBLIOGRAFIA Per dettagli pi precisi consultare la metodica in inglese Vers 10 0 Effective 08 2006 vk 20 DRG Cortisol ELISA EIA 1887 1 INTRODUCCI N El Kit de inmunoensayo enzim tico DRG Cortisol proporciona los materiales necesarios para la determinaci n cuantitativa del cortisol en suero y plasma Este ensayo est disefiado solo para diagn stico in vitro 2 FUNDAMENTO DEL ENSAYO El Kit DRG Cortisol ELISA es un ensayo en fase s lida de inmunoadsorci n unido a enzimas ELISA basado en el principio de uni n competitiva Los pocillos de las placas est n recubiertos con un anticuerpo monoclonal dirigido contra un foci antig nico en la mol cula cortisol En las muestras de los pacientes cortisol compite con un conjugado cortisol peroxidasa de r bano en la uni n al anticuerpo inmovilizado Despu s de la incubaci n el conjugado no unido se lava La cantidad de conjugado de peroxidasa unido es inversamente proporcional a la concentraci n de cortisol en la muestra Despu s de la adici n de la soluci n sustrato la intensidad de color desarrollado es inversamente proporcional a la concentraci n de cortisol en la muestra del paciente 3 PRECAUCIONES e Es

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