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hPL ELISA - DRG Diagnostics GmbH

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1. Vers 9 0 2013 08 vk 22 DRG hPL ELISA EIA 1283 1 INTRODUCCI N El Kit de inmunoensayo enzimatico DRG hPL proporciona los materiales necesarios para la determinaci n cuantitativa del Lact geno Placentario Humano hPL en suero Este ensayo est dise ado solo para diagn stico in vitro 2 FUNDAMENTO DEL ENSAYO El Kit DRG hPL ELISA es un ensayo en fase s lida de inmunoadsorci n unido a enzimas ELISA basado en el principio del s ndwich Los pocillos de las placas est n recubiertos con un anticuerpo monoclonal dirigido contra un nico foci antig nico en una mol cula de hPL Se incuba una al cuota de una muestra perteneciente a un paciente que contiene hPL end gena en los pocillos recubiertos con el enzima conjugado que es un anticuerpo anti hPL conjugado con la peroxidasa end gena Despu s de la incubaci n se lava el conjugado que no se ha unido La cantidad de peroxidasa unida es proporcional a la concentraci n de hPL en la muestra Cuando se a ade la soluci n del sustrato de la peroxidasa la intensidad del color desarrollado es proporcional a la concentraci n de hPL en la muestra del paciente 3 PRECAUCIONES Este kit es solamente para diagn stico in vitro Por favor se usa solo la version valida de la metodico t cnico incluido aqui en el kit Para obtener informaci n de las sustancias peligrosas incluidas en el kit por favor mirar las hojas de los datos de seguridad del material T
2. Contain non mercury preservative 6 Substrate Solution 1 vial 14 mL ready to use Tetramethylbenzidine TMB 7 Stop Solution 1 vial 14 mL ready to use contains 0 5M H SO Avoid contact with the stop solution It may cause skin irritations and burns Note Additional Zero Standard for sample dilution is available upon request 4 2 Materials required but not provided A microtiter plate calibrated reader 450 10 nm e g the DRG Instruments Microtiter Plate Reader Calibrated variable precision micropipettes Absorbent paper Distilled or deionized water Timer Tubes for sample dilution 12 x 75 mm Semi logarithmic graph paper or software for data reduction 4 3 Storage Conditions When stored at 2 C to 8 C unopened reagents will retain reactivity until expiration date Do not use reagents beyond this date Opened reagents must be stored at 2 C to 8 C Microtiter wells must be stored at 2 C to 8 C Once the foil bag has been opened care should be taken to close it tightly again Opened kits retain activity for six weeks if stored as described above 4 4 Reagent Preparation Bring all reagents and required number of strips to room temperature prior to use 4 5 Disposal of the Kit The disposal of the kit must be made according to the national regulations Special information for this product is given in the Material Safety Data Sheet 4 6 Damaged Test Kits In case of any sev
3. lidos En este caso por favor comprobar las siguientes reas t cnicas Pipeteo y tiempo empleado fot metro fecha de caducidad de los reactivos condiciones de almacenamiento e incubaci n m todos de aspiraci n y lavado Despu s de comprobar los asuntos mencionados arriba sin encontrar ning n error contactar con su distribuidor o con DRG directamente 9 CARACTER STICAS DEL ENSAYO 9 1 Rango din mico del ensayo El rango del ensayo se encuentra entre 0 04 20 mg L 9 2 Especificidad de los Anticuerpos Reactividad Cruzada Consultar el manual de usuario en ingl s 9 3 Sensibilidad Anal tica La sensibilidad anal tica se calcul a partir de la media mas dos desviaciones est ndar de veinte 20 r plicas del Zero Standard y result ser 0 043 mg L Vers 9 0 2013 08 vk 27 DRG hPL ELISA EIA 1283 9 4 Precision Consultar el manual de usuario en ingl s 9 5 Recuperaci n Consultar el manual de usuario en ingl s 9 6 Linealidad Consultar el manual de usuario en ingl s 10 LIMITACIONES DE USO Cualquier manipulaci n inadecuada de las muestras o modificaciones del ensayo pueden influenciar los resultados 10 1 Sustancias que pueden interferir Hemoglobina hasta 4 mg mL Bilirrubina hasta 0 5 mg mL y Triglic ridos hasta 30 mg mL no influencian los resultados del ensayo 10 2 Interferencias con drogas Hasta ahora no se han encontrado sustancias drogas conocidas por nosotros que tengan in
4. uso BE In vitro diagnostic device In vitro Diagnostikum Usage Diagnostic in vitro Para uso Diagn stico in vitro Per uso Diagnostica in vitro Nur f r Seulement dans le S lo para uso en na RUO For research use only Forschungszwecke cadre de recherches investigaci n Solo a scopo di ricerca Catalogue number Katalog Nr R f rence N mero de cat logo No di Cat Lot No Batch code Chargen Nr No de lot N mero de lote Lotto no Contains sufficient for lt n gt tests Ausreichend f r n Ansatze Contenu suffisant pour n tests Contenido suficiente para lt n gt ensayos Contenuto sufficiente per n saggi Storage Temperature Lagerungstemperatur Temp rature de conservation Temperatura de conservacion Temperatura di conservazione Expiration Date Mindesthaltbarkeits datum Date limite d utilisation Fecha de caducidad Data di scadenza EE Legal Manufacturer Hersteller Fabricant Fabricante Fabbricante Distributed by Distributor Vertreiber Distributeur Distribuidor Distributore Content Content Inhalt Contenu Contenido Contenuto Volume No Volume No Volumen Anzahl Volume Num ro Volumen N mero Volume Quantita Microtiterwells Microtiterwells Mikrotiterwells fae SES Placas multipocillo Micropozzetti Antiserum Antiserum Antiserum Antis rum Antisuero Antisiero Enzy me Enzyme Conjugate Enzymkonjugat Conjugu e
5. Como regla general la reacci n enzim tica es linealmente proporcional al tiempo y a la temperatura Vers 9 0 2013 08 vk 25 DRG hPL ELISA EIA 1283 6 2 Procedimiento de ensayo NOTA Pipetear manualmente Se recomienda que no se usen mas de 32 pocillos por ensayo El pipeteo de todos los estandares muestras y controles debe estar completado en 3 minutos Pipeteo automatico Se puede utilizar una placa de 96 pocillos completa en cada ensayo Sin embargo se recomienda que el pipeteo de todos los estandares muestras y controles debe estar completado en 3 minutos Cada uno debe incluir una curva de estandares 1 Asegurar el n mero deseado de pocillos en el recipiente 2 Dispensar 10 pL de cada Standard controle y muestra prediluida con puntas nuevas en los pocillos adecuados 3 Dispensar 100 uL de Enzyme Conjugate a cada pocillo Mezclar totalmente durante 10 segundos Es importante mezclar completamente en este paso 4 Incubar durante 30 minutes a temperatura ambiente 5 Sacudir en rgicamente el contenido de los pocillos Lavar los pocillos 5 veces con agua destilada 400 uL por pocillo Realizar un golpe seco de los pocillos contra el papel absorbente para eliminar las gotas residuales Nota importante La sensibilidad y la precisi n de este ensayo se ve marcadamente influenciada por la realizaci n correcta del proceso de lavado Adicionar 100 uL de Substrate Solution a cada pocillo Incubar durante 10 minutes a temp
6. Plasma enthalten wurden mit FDA gepr ften Methoden auf HIV I II HosAg und HCV getestet und als negativ best tigt Jedoch sollten alle Bestandteile im Umgang und bei der Entsorgung wie m gliche Gefahrenstoffe betrachtet werden Der Kontakt mit der Stop Solution sollte vermieden werden da sie 0 5 M H2SO enth lt Schwefels ure kann Hautreizungen und Verbrennungen verursachen Nicht mit dem Mund pipettieren und den Kontakt von Kitbestandteilen und Proben mit Haut und Schleimh uten vermeiden Inden Bereichen in denen Proben oder Kitbestandteile verwendet werden nicht rauchen essen oder Kosmetika verwenden Beim Umgang mit Proben oder Reagenzien Einweg Latexhandschuhe tragen Die Verunreinigung von Reagenzien oder Proben mit Mikroben kann zu falschen Ergebnissen f hren Der Gebrauch sollte gem der Vorschriften einer entsprechenden nationalen Gefahrenstoff Sicherheitsrichtlinie erfolgen Reagenzien nicht nach dem auf dem Kit Etikett angegebenen Verfallsdatum verwenden Alle im Kit Protokoll angegebenen Mengen m ssen genau eingehalten werden Optimale Ergebnisse k nnen nur durch Verwendung kalibrierter Pipetten und Mikrotiterplatten Leseger te erreicht werden Komponenten von Kits mit unterschiedlichen Lotnummern nicht untereinander vertauschen Es wird empfohlen keine Wells von verschiedenen Platten zu verwenden auch nicht wenn es sich um das gleiche Lot handelt Die Kits k nnen unter anderen Bedingungen
7. de lavage 13 Ajouter 100 uL de Substrate Solution chaque puits 14 Incuber pendant 10 minutes temp rature ambiante 15 Stopper la r action enzymatique en ajoutant 50 uL de Stop Solution chaque puits 16 Lire la densit optique 450 10 nm l aide d un spectrophotom tre lecteur de micro plaques dans les 10 minutes apr s avoir ajout la Stop Solution 6 3 Calcul des r sultats 1 Calculer les valeurs moyennes des densit s optiques pour chaque s rie de standards contr les et chantillons 2 Etablir la courbe talon en reportant la densit optique moyenne de chaque valeur standard en fonction de sa concentration en posant la densit optique en axe des ordonn es et la concentration en axe des abscisses 3 L utilisation de la densit optique moyenne pour chaque chantillon d termine la concentration correspondante partir de la courbe talon 4 M thode automatique Les r sultats dans les instructions d utilisation ont t calcul s de fa on automatique en utilisant une courbe de r gression 4 Param tres 4 param tres Rodbard ou 4 param tres Marquardt sont les m thodes favorites D autres fonctions logistiques peuvent donner des r sultats l g rement diff rents 5 La concentration des chantillons peut tre lue directement partir de cette courbe talon Les chantillons avec une concentration sup rieure celle du plus haut standard doivent tre dilu s de nouveau Pour le ca
8. est dire un anticorps anti hPL conjugu e avec la peroxidase de Raifort horseradish peroxidase HRP Apres l incubation le conjugu non li est limin durant le lavage des puits La quantit de conjugu HRP li e est proportionnelle a la concentration de hPL contenu dans l chantillon Suite l addition de solution substrat l intensit de la coloration obtenue est proportionnelle la concentration de hPL contenu dans l chantillon 3 PRECAUTIONS D UTILISATION Ce kit est uniquement destin aux tests diagnostiques in vitro Les informations concernant la toxicit des r actifs contenus dans ce kit sont pr sent es dans la fiche de s curit Material Safety Data Sheets Tous les r actifs de ce kit contenant du s rum ou du plasma humain ont t test s avec des r sultats n gatifs pour le VIH I II le HBsAg et le HCV selon les normes FDA en vigueur N anmoins lors de leur utilisation tous les r actifs de ce kit doivent tre manipul s avec pr caution Eviter les contacts avec la Stop Solution celle ci contient 0 5 M de H2SO Cela pourrait engendrer irritations ou br lures de la peau Ne jamais pipeter avec la bouche et viter tout contact de la peau ou des muqueuses avec les r actifs ou les chantillons Ne pas fumer manger boire ou utiliser des produits cosm tiques dans les zones o les chantillons ou le kit ont t mani s Porter des gants d examen lors
9. ver cap tulo 13 4 6 Kits de ensayo da ados En caso de que exista cualquier da o severo del kit de ensayo o de sus componentes ha de informarse por escrito a DRG no mas tarde de una semana despu s de recibir el kit No deben utilizarse componentes da ados para llevar a cabo un ensayo Han de almacenarse hasta que se encuentre una soluci n Despu s de esto deben ser eliminados de acuerdo con las leyes oficiales Vers 9 0 2013 08 vk 24 DRG hPL ELISA EIA 1283 5 MUESTRAS En este ensayo pueden usarse suero No usar muestras hemoliticas ict ricas o lip micas Tener en cuenta No deben usarse muestras que contengan acida s dica 5 1 Toma de muestras Suero Recoger la sangre por punci n en la vena ej Sarstedt Monovette para el suero permitir coagulaci n y separar el suero por centrifugaci n a temperatura ambiente No centrifugar antes de la coagulaci n completa Las muestras de pacientes que reciben terapia anticoagulante requieren m s tiempo para coagular 5 2 Almacenamiento de las muestras Las muestras deben ser tapadas y pueden ser almacenadas hasta 5 d as a 2 C a 8 C antes del ensayo Las muestras almacenadas por un per odo de tiempo mas largo han de congelarse s lo una vez a 20 C antes del ensayo Las muestras descongeladas deben invertirse varias veces antes del ensayo 5 3 Dilucion de las muestras Antes de comenzar el ensayo la muestra debe estar prediluida 1 100 con el Zero Standard E
10. 0 22 24 1 3 5 8 24 26 1 6 6 7 26 28 2 0 7 7 28 30 2 7 8 5 30 32 3 2 9 5 32 34 3 7 10 1 34 36 4 0 10 7 36 38 4 3 11 2 38 40 4 4 11 7 40 42 4 3 11 6 The results alone should not be the only reason for any therapeutic consequences The results should be correlated to other clinical observations and diagnostic tests 8 QUALITY CONTROL Good laboratory practice requires that controls be run with each calibration curve A statistically significant number of controls should be assayed to establish mean values and acceptable ranges to assure proper performance It is recommended to use control samples according to state and federal regulations The use of control samples is advised to assure the day to day validity of results Use controls at both normal and pathological levels The controls and the corresponding results of the QC Laboratory are stated in the QC certificate added to the kit The values and ranges stated on the QC sheet always refer to the current kit lot and should be used for direct comparison of the results It is also recommended to make use of national or international Quality Assessment programs in order to ensure the accuracy of the results Employ appropriate statistical methods for analysing control values and trends If the results of the assay do not fit to the established acceptable ranges of control materials patient results should be considered invalid In this cas
11. 0 mg mL n ont aucune influence sur les r sultats du dosage 10 2 Drogues parasites Jusqu pr sent nous ne connaissons aucune substance drogues capable d influencer la mesure de hPLdans un chantillon 10 3 Effet de surdosage Jusqu 700 mg L of hPL aucun effet de surdosage n a t d tect avec ce test 11 ASPECTS LEGAUX 11 1 Fiabilit des r sultats Ce test doit tre exactement utilis selon les instructions d utilisation du fabricant De plus les utilisateurs doivent strictement respecter les r gles de la bonne pratique de laboratoire ou autres lois nationales Cela est sp cialement le cas pour l utilisation des r actifs contr les Pour chaque test il est important d inclure un nombre suffisant de contr les afin de pouvoir valider l exactitude et la pr cision du test Les r sultats du test sont valides si et seulement si tous les contr les sont compris dans les gammes de mesure mentionn es et si tous les autres param tres du test sont galement compris dans les instructions de ce test En cas de doute ou d inqui tude contacter la DRG 11 2 Cons quences th rapeutiques Les suites th rapeutiques ne devront jamais tre bas es sur les r sultats de laboratoire seuls m me si les tous les r sultats du test sont en accord avec les points mentionn s dans le paragraphe 11 1 Tout r sultat n est qu une partie du tableau clinique complet d un patient Les suites th rapeutiques peuvent d couler de
12. 12x8 file separatamente staccabili 96 pozzetti Pozzetti ricoperti con l anti hPL anticorpo monoclonale 2 Standard Standard 1 4 4 flaconi 0 5 mL pronto all uso Concentrazioni 1 25 5 0 10 0 20 0 mg L Conversione 1 mg L 1 mIU L Gli standard sono calibrati contro lo Standard Internazionale NIBSC per hPL IRP 73 545 Contiene conservante senza mercurio 3 Zero Standard Standard zero e diluente dei campioni 1 flacone 90 mL pronto all uso 0 mg L Contiene conservante senza mercurio 4 Control Low amp High Controllo 2 flaconi 0 5 mL pronto all uso valori dei controlli sono indicati sull etichetta dei flaconi o sulla descrizione QC Contiene conservante senza mercurio 5 Enzyme Conjugate Tracciante enzimatico 1 flacone 11 mL pronto all uso Anti hPL anticorpo coniugato alla perossidasi di rafano Contiene conservante senza mercurio 6 Substrate Solution Soluzione di substrato 1 flacone 14 mL pronto all uso TMB benzidine tetrametilico 7 Stop Solution Soluzione d arresto 1 flacone 14 mL pronto all uso contiene 0 5M H SO4 Evitare il contatto con la soluzione d arresto Pu causare irritazioni cutanee e ustioni Nota Ulteriore Zero Standard per la diluizione dei campioni pu essere richiesto alla ditta 4 2 Materiali richiesti ma non contenuti nel kit Uno spettrofotometro calibrato per micropozzetti 450 10 nm p es il DRG Instruments Microtiterplate Reader Micr
13. Instructions for Use hPL ELISA EIA 1283 Y 96 W Legal Manufacturer DRG DRG Instruments GmbH Germany Division of DRG International Inc Frauenbergstr 18 D 35039 Marburg Telefon 49 0 6421 17000 Fax 49 0 642 1 1700 50 Internet www drg diagnostics de E mail drg drg diagnostics de CE Distributed by DRG hPL ELISA EIA 1283 Contents Inhaltsverzeichnis Contenuti Contenido Contenu 1 INTRODUCTION isidro did did 2 1 INTRODUCCI N aeaeaie rrn riean rnana rinena rnan 23 2 PRINCIPLE OF THE TEST 2 2 FUNDAMENTO DEL ENSAYO ice 23 3 WARNINGS AND PRECAUTIONS ss 3 3 PRECAUCIONES aiitem a 23 AU REAGENTS en 4 A COMPONENTES DEL KIT 24 5 SPECIMEN COLLECTION AND PREPARATION 5 5 MUESTRAS cnnccccccnnananananananannnnaannnnnanannnnnnnnnnn 25 6 ASSAY PROCEDURE esse 5 6 PROCEDIMIENTO DE ENGANVO 25 7 EXPECTED NORMAL VALUES 7 7 VALORES ESPERADOS eee 27 8 QUALITY CONTROL un 7 8 CONTROL DECALUIDAD 27 9 PERFORMANCE CHARACTERISTICS 8 9 CARACTER STICAS DEL ENSAYO 27 10 LIMITATIONS OF USE 10 10 LIMITACIONES DE USO nenn 28 11 LEGAL AGbPECTG e iiaa 10 11 ASPECTOS LEGALES 28 1 EINLEITUNG 2 28 aid 11 1 INTRODUCTION 2 22 22 2 2224 leese 29 2 TESIPRINZIP egene aia 11 2 PRINCIPE DU TEST 29 3 VORSICHTSMABNAHMEN ossen 11 3 PRECAUTIONS D UTILISATION 29 4 BESTANDTEILE DES KITS i
14. ON DU KIT 4 1 Contenu du kit 1 Microtiterwells Plaques de micro titratio 12x8 d tacher barrettes plaques de 96 puits Les puits sont recouverts avec un anticorps anti hPL monoclonal 2 Standard Standard 1 4 4 flacons 0 5 mL pr t l emploi Concentrations 1 25 5 0 10 0 20 0 mg L Conversion 1 mg L 1 mlU L Les standards ont t calibr s selon le NIBSC International Standard for hPL IRP 73 545 Contient agent de conservation sans mercure 3 Zero Standard Zero Standard et Solution pour dilution de l chantillon 1 flacon 90 mL pr t a l emploi 0 mg L Contient agent de conservation sans mercure 4 Control Low amp High Contr le 2 flacons 0 5 mL pr t l emploi Les valeurs contr les et limites sont indiqu es sur l tiquette du flacon ou sur la fiche QC Contient agent de conservation sans mercure 5 Enzyme Conjugate Conjugu enzymatique 1 flacon 11 mL pr t l emploi Anticorps anti hPL conjugu la HRP Contient agent de conservation sans mercure 6 Substrate Solution Solution substrat 1 flacon 14 mL pr t l emploi T tram thylbenzidine TMB 7 Stop Solution Solution d arr t 1 flacon 14 mL pr t l emploi contient 0 5 M de H SO4 Eviter les contacts avec la solution stop Cela pourrait engendrer irritations ou br lures de la peau Remarque Un Zero Standard suppl mentaire peut tre fourni sur demande 4 2 Equipement et mat riel requis mais
15. aph paper construct a standard curve by plotting the mean absorbance obtained from each standard against its concentration with absorbance value on the vertical Y axis and concentration on the horizontal X axis 3 Using the mean absorbance value for each sample determine the corresponding concentration from the standard curve 4 Automated method The results in the Instructions for Use have been calculated automatically using a 4 Parameter curve fit 4 Parameter Rodbard or 4 Parameter Marquardt are the preferred methods Other data reduction functions may give slightly different results 5 The concentration of the samples can be read directly from this standard curve Samples with concentrations higher than that of the highest standard have to be further diluted or reported as gt 20 mg L For the calculation of the concentrations this dilution factor has to be taken into account 6 3 1 Example of Typical Standard Curve The following data is for demonstration only and cannot be used in place of data generations at the time of assay Vers 9 0 2013 08 vk 6 DRG hPL ELISA EIA 1283 7 EXPECTED NORMAL VALUES It is strongly recommended that each laboratory should determine its own normal and abnormal values In a study using the DRG hPL ELISA the following values are observed Pregnancy week Value mg L 10 12 0 05 1 00 12 14 0 10 1 7 14 16 0 3 2 8 16 18 0 5 3 5 18 20 0 9 4 0 20 22 1 1 5
16. avoid foaming The internal controls Control Low amp High are ready to use and need not to be diluted External controls such as Bio Rad controls has to be handled like samples If in an initial assay a specimen is found to contain more than the highest standard the specimens can be further diluted with Zero Standard and reassayed as described in Assay Procedure For the calculation of the concentrations this dilution factor has to be taken into account 6 ASSAY PROCEDURE 6 1 General Remarks All reagents and specimens must be allowed to come to room temperature before use All reagents must be mixed without foaming Once the test has been started all steps should be completed without interruption Use new disposal plastic pipette tips for each standard control or sample in order to avoid cross contamination Absorbance is a function of the incubation time and temperature Before starting the assay it is recommended that all reagents are ready caps removed all needed wells secured in holder etc This will ensure equal elapsed time for each pipetting step without interruption Asa general rule the enzymatic reaction is linearly proportional to time and temperature Vers 9 0 2013 08 vk 2 51 DRG hPL ELISA EIA 1283 6 2 Test Procedure NOTE Manual Pipetting It is recommended that no more than 32 wells be used for each assay run Pipetting of all standards samples and controls should be completed wi
17. d values with 100 Endogenous hPL Added Conc Measured Conc Expected Conc Recovery mg L mg L mg L mg L 0 00 0 00 0 00 0 63 0 55 0 63 88 60 1 2 50 2 40 2 50 96 20 5 00 5 21 5 00 104 20 10 00 8 58 10 00 85 80 1 93 0 00 1 93 0 63 1 39 1 59 87 60 2 2 50 3 16 3 46 91 40 5 00 5 21 5 96 87 40 10 00 9 81 10 96 89 50 9 6 Linearity Vers 9 0 2013 08 vk 9 DRG hPL ELISA EIA 1283 10 LIMITATIONS OF USE Reliable and reproducible results will be obtained when the assay procedure is performed with a complete understanding of the package insert instruction and with adherence to good laboratory practice Any improper handling of samples or modification of this test might influence the results 10 1 Interfering Substances Haemoglobin up to 4 mg mL Bilirubin up to 0 5 mg mL and Triglyceride up to 30 mg mL have no influence on the assay results 10 2 Drug Interferences Until today no substances drugs are known to us which have an influence to the measurement of hPL in a sample 10 3 High Dose Hook Effect No hook effect was observed in this test up to 700 mg L of hPL 11 LEGAL ASPECTS 11 1 Reliability of Results The test must be performed exactly as per the manufacturer s instructions for use Moreover the user must strictly adhere to the rules of GLP Good Laboratory Practice or other applicable national standards and or laws This is especially relevant for the use of control reagents It i
18. de l utilisation des chantillons ou des r actifs Une contamination microbienne des chantillons ou des r actifs pourrait fausser les r sultats L utilisation de ce kit devra tre en accord avec les normes ou recommandations nationales de s curit en vigueur concernant les produits risque biologique Ne pas utiliser les r actifs au del de la date d expiration inscrite sur l emballage Tous les volumes indiqu s doivent tre scrupuleusement respect s comme indiqu dans le protocole exp rimental Seule l utilisation de pipettes calibr es ou d un spectrophotom tre lecteur de micro plaques calibr garantit l obtention de r sultats optimaux ce test Ne pas m langer ou utiliser des r actifs contenus dans des kits de lots diff rents Il est conseill de ne pas changer les puits de diff rentes plaques m me si celles ci proviennent du m me lot Les kits peuvent avoir t transport s ou stock s diff remment et les caract ristiques de liaison de chaque plaque pourraient ainsi tre modifi es L limination des solutions chimiques et des r actifs contenus dans ce kit utilis s ou non doit tre en accord avec la r glementation nationale en vigueur concernant l limination des d chets risque biologique La fiche de s curit concernant ce produit peut tre obtenue en contactant directement DRG Instruments GmbH Vers 9 0 2013 08 vk 29 DRG hPL ELISA EIA 1283 4 COMPOSITI
19. den haber sido enviados o almacenados bajo diferentes condiciones y las caracter sticas de uni n de las placas pueden resultar diferentes Los compuestos qu micos y los reactivos preparados o utilizados han de tratarse como residuos peligrosos de acuerdo con las gu as o regulaci n nacionales de seguridad de sustancias biopeligrosas Las hojas de los datos de seguridad de este producto est n disponibles bajo pedido directamente a DRG Instruments GmbH Vers 9 0 2013 08 vk 23 DRG hPL ELISA EIA 1283 4 COMPONENTES DEL KIT 4 1 Componentes del Kit 1 Microtiterwells Placas multipocillo 12 x 8 tiras separables 96 pocillos Pocillos recubiertos con anticuerpo anti hPL monoclonal 2 Standard Standard 1 4 Estandar 4 viales 0 5 mL listo para usar Concentraciones 1 25 5 0 10 0 20 mg L Conversi n 1 mg mL 1 mlU L Los estan calibrados segun NIBSC International Standard parar hPL IRP 73 545 Contiene conservante sin mercurio 3 Zero Standard Estandar cero y Soluci n para diluci n de la muestra 1 vial 90 mL listo para usar Contiene conservante sin mercurio 4 Control Low amp High 2 viales 0 5 mL listo para usar Referir los valores y rangos del control a la etiqueta del vial o a la Hoja de datos QC Contiene conservante 5 Enzyme Conjugate Conjugado enzimatico 1 vial 11 mL listo para usar Anticuerpo anti hPL conjudado con la Peroxidasa de rabano Contiene conservante sin mercu
20. due deviazioni standard di venti 20 repliche dello Zero Standard ed erano 0 043 mg L Vers 9 0 2013 08 vk ele DRG hPL ELISA EIA 1283 9 4 Precisione Per dettagli pi precisi consultare la metodica in inglese 9 5 Ritrovato Per dettagli pi precisi consultare la metodica in inglese 9 6 Linearita Per dettagli pi precisi consultare la metodica in inglese 10 LIMITAZIONE DEL TEST Ogni manutenzione impropria dei campioni o modificazione del protocollo pu influenzare risultati 10 1 Sostanze interferenti Emoglobina fino a 4 mg mL bilirubina fino a 0 5 mg mL e trigliceridi fino a 30 mg mL non influenzano i risultati di questo test 10 2 Droghe interferenti Fino ad oggi nessuna sostanza farmaco conosciuta a noi che abbia influenzato la determinazione di hPL nel campione 10 3 Effetto Hook di alti dosaggi Nessun effetto hook di aglomerazione stato osservato in questo test fino a 700 mg L di hPL 11 ASPETTI LEGALI 11 1 Affidabilit dei risultati Il test deve essere eseguito esattamente secondo il protocollo dato dal produttore Inoltre l utente deve seguire le regole del GLP Good Laboratory Practice o eventualmente altre regole comportamentali o disposizioni legali Questo vale soprattutto per l uso delle referenze E molto importante utilizzare un numero appropriato di referenze in parallelo ai campioni test per poter controllare l esattezza e la precisione del test risultati del test sono va
21. e please check the following technical areas Pipetting and timing devices photometer expiration dates of reagents storage and incubation conditions aspiration and washing methods After checking the above mentioned items without finding any error contact your distributor or DRG directly Vers 9 0 2013 08 vk Zw DRG hPL ELISA EIA 1283 9 PERFORMANCE CHARACTERISTICS 9 1 Assay Dynamic Range The range of the assay is between 0 04 20 mg L 9 2 Specificity of Antibodies Cross Reactivity The following substances were tested for cross reactivity of the assay Antigen tested Equivalent to hPL hCG 2000 IU L undetectable AFP 300 KIU L undetectable hGH 100 ug L undetectable Prolactin 200 ug L undetectable 9 3 Sensitivity The analytical sensitivity of the DRG ELISA was calculated by adding 2 standard deviations to the mean of 20 replicate analyses of the Zero Standard and was found to be 0 043 mg L 9 4 Reproducibility 9 4 1 Intra Assay The within assay variability is shown below n Mem teta even 9 4 2 Inter Assay The between assay variability is shown below Sampie n mean mgt La Vers 9 0 2013 08 vk 8 DRG hPL ELISA EIA 1283 9 5 Recovery Samples have been spiked by adding hPL solutions with known concentrations to three different sera containing different amounts of endogenous analyt The Recovery has been calculated by multiplication of the ratio of the measurements and the expecte
22. e sans interruption En r gle g n rale la r action enzymatique est lin airement proportionnelle au temps et la temp rature Vers 9 0 2013 08 vk 31 DRG hPL ELISA EIA 1283 6 2 R alisation du dosage Remarque Pipettage manuel Il est recommand de ne pas utiliser plus de 32 puits pour chaque essai Le pipettage de tous les standards chantillons et contr les doit tre r alis en 3 minutes Pipettage automatique Une plaque de 96 puits peut tre entierement utilis e pour chaque essai N anmoins il est recommand de r aliser le pipettage de tous les standards chantillons et contr les en 3 minutes Chaque test doit inclure une courbe talon 8 Disposer le nombre de puits de micro titration d sir dans le support 9 D poser 10 uL de chaque Standard contr le et les chantillons dilu avec de nouveaux c nes de pipette dans les puits appropri s 10 D poser 100 uL d Enzyme Conjugate dans chaque puits Bien m langer pendant 10 secondes II est important d obtenir un m lange parfait lors de cette tape 11 Incuber pendant 30 minutes temp rature ambiante 12 D canter le contenu des puits et rincer les puits 5 fois avec de l eau distill e 400 uL par puits Tapoter les puits sur du papier absorbant afin d liminer les gouttelettes r siduelles Remarque importante La sensibilit et la pr cision de ce test sont fortement d pendantes de la bonne r alisation des tapes
23. entration beachtet werden 6 3 1 Beispiel f r eine Standardkurve Nachfolgend wird ein typisches Beispiel f r eine Standardkurve mit dem DRG ELISA gezeigt Diese Werte sollten nicht zur Berechnung von Patientendaten verwendet werden Zero Standard 0 mg L 0 03 Standard 1 1 25 mg L 0 17 Vers 9 0 2013 08 vk 14 DRG hPL ELISA EIA 1283 7 ERWARTETE WERTE Es wird empfohlen dass jedes Labor seine eigenen normalen und abnormalen Werte ermittelt In einer Studie ergaben sich mit dem DRG hPL ELISA folgende Werte Schwangerschaftswoche Konzentration mg L 26 28 2 0 7 7 38 40 4 4 11 7 4 3 11 6 8 QUALITATS KONTROLLE Es wird empfohlen die Kontrollproben gem B den nationalen gesetzlichen Bestimmungen einzusetzen Durch die Verwendung von Kontrollproben wird eine Tag zu Tag berpr fung der Ergebnisse erzielt Es sollten Kontrollen sowohl mit normalem als auch pathologischem Level eingesetzt werden Die Kontrollen mit den entsprechenden Ergebnissen des QC Labors sind im QC Zertifikat das dem Kit beiliegt aufgef hrt Die im QC Blatt angegebenen Werte und Bereiche beziehen sich stets auf die aktuelle Kitcharge und sollten zum direkten Vergleich der Ergebnisse verwendet werden Es wird ebenfalls empfohlen an nationalen oder internationalen Qualitatssicherungs Programmen teilzunehmen um die Genauigkeit der Ergebnisse zu sichern Es sollten geeignete statistische Methoden zur Analyse von Kontroll Werten und Trend
24. eratura ambiente Parar la reacci n enzim tica mediante la adici n de 50 uL de Stop Solution a cada pocillo Leer la OD a 450 10 nm con un lector de microplacas dentro de los 10 minutos despu s de la adici n de la Stop Solution Ae 6 3 C lculo de los Resultados 1 Calcular los valores de absorbancia media para cada conjunto de est ndares controles y muestras de pacientes 2 Construir una curva est ndar mediante la representaci n de la absorbancia media obtenida para cada est ndar frente a su concentraci n con el valor de absorbancia en el eje vertical Y y la concentraci n en el eje horizontal X 3 Usando el valor de absorbancia media de cada muestra determinar la concentraci n correspondiente a partir de la curva est ndar 4 M todo automatizado Los resultados en las instrucciones de uso se han calculado autom ticamente usando una curva de regresi n 4 Par metros 4 Par metros Rodbard o 4 Par metros Marquardt son los m todos preferidos Otras funciones de regresi n dar n lugar a resultados sensiblemente diferentes 5 La concentraci n de las muestra puede leerse directamente de la curva de est ndares Las muestras con concentraciones superiores al mayor est ndar han de diluirse Para el c lculo de las concentraciones hay que tener en cuenta el factor de diluci n 6 3 1 Ejemplo de una Curva Est ndar Tipica Los siguientes datos son solamente para la explicaci n y no pueden ser utilizados en luga
25. ere damage to the test kit or components DRG has to be informed in writing at the latest one week after receiving the kit Severely damaged single components should not be used for a test run They have to be stored until a final solution has been found After this they should be disposed according to the official regulations Vers 9 0 2013 08 vk 4 DRG hPL ELISA EIA 1283 5 SPECIMEN COLLECTION AND PREPARATION Serum must be used in this assay Do not use haemolytic icteric or lipaemic specimens Please note Samples containing sodium azide should not be used in the assay 5 1 Specimen Collection Serum Collect blood by venipuncture e g Sarstedt Monovette for serum allow to clot and separate serum by centrifugation at room temperature Do not centrifuge before complete clotting has occurred Patients receiving anticoagulant therapy may require increased clotting time 5 2 Specimen Storage and Preparation Specimens should be capped and may be stored for up to 5 days at 2 C to 8 C prior to assaying Specimens held for a longer time should be frozen only once at 20 C prior to assay Thawed samples should be inverted several times prior to testing 5 3 Specimen Dilution Before starting the assay the sample must be prediluted 1 100 with Zero Standard 1 Add for each sample 1 mL of Zero Standard in one test tube 2 Add 10 uL of each sample to the appropriate test tube Mix all tubes for 10 seconds on a Vortex mixer
26. es Assays wird erheblich beeinflusst von der korrekten Durchf hrung des Waschschrittes 100 uL Substrate Solution in jedes Well geben 10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren Die enzymatische Reaktion durch Zugabe von 50 uL Stop Solution in jedes Well abstoppen Die Optische Dichte bei 450 10 nm mit einem Mikrotiterplatten Leseger t innerhalb von 10 Minuten nach Zugabe der Stop Solution bestimmen OND 6 3 Ergebnisermittlung 1 Die durchschnittlichen Werte der Optischen Dichte OD f r jedes Set von Standards Controls und Patientenproben bestimmen 2 Eine Standardkurve ermitteln durch Auftragen der mittleren Optischen Dichte jedes Standards gegen die Konzentration wobei der OD Wert auf der vertikalen Y Achse und die Konzentration auf der horizontalen X Achse eingetragen wird 3 Unter Verwendung der mittleren OD wird f r jede Probe die entsprechende Konzentration aus der Standardkurve ermittelt 4 Automatische Methode Die in der Gebrauchsanweisung angegebenen Werte wurden automatisch mit Hilfe der 4 Parameter Gleichung bestimmt 4 Parameter Rodbard oder 4 Parameter Marquardt sind die bevorzugten Methoden Andere Auswertungsfunktionen k nnen leicht abweichende Werte ergeben 5 Die Konzentration der Proben kann direkt von der Standardkurve abgelesen werden Proben die eine h here Konzentration als die des h chsten Standards enthalten m ssen verd nnt werden Dieser Verd nnungsfaktor muss bei der Berechnung der Konz
27. fluencia en la medida de hPL en una muestra 10 3 Efecto Gancho Dosis Elevada No se ha observado efecto gancho en este ensayo hasta 700 mg L de hPL 11 ASPECTOS LEGALES 11 1 Fiabilidad de los Resultados El ensayo debe realizarse exactamente de acuerdo a las instrucciones del fabricante Mas aun el usuario debe ajustarse estrictamente a las reglas BPL Buenas Practicas de Laboratorio o a otros estandares y o leyes nacionales aplicables Esto es especialmente relevante para el uso de reactivos control Es importante incluir siempre dentro del procedimiento de ensayo un numero suficiente de controles para validar la exactitud y la precisi n del ensayo Los resultados del ensayo son v lidos s lo si todos los controles se encuentran dentro de los rangos especificados y si todos los otros par metros del ensayo se encuentran dentro de las especificaciones dadas para el ensayo En cado de alguna duda o inquietud por favor contactar con DRG 11 2 Consecuencias Terap uticas Las consecuencias terap uticas nunca deben basarse s lo en los resultados de laboratorio incluso si todos los resultados del ensayo est n de acuerdo con los asuntos fijados en el punto 11 1 Cualquier resultado de laboratorio es solamente una parte del cuadro cl nico de un paciente Solamente en los casos donde los resultados de laboratorio est n en acuerdo con todo el cuadro cl nico de un paciente se pueden derivar consecuencias terap uticas Nunca deben derivar
28. gebnis 10 2 Beeinflussung durch Medikamente Uns sind bislang keine Stoffe Medikamente bekannt geworden deren Einnahme die Messung des hPL Gehaltes der Probe beeinflussen w rde 10 3 High Dose Hook Effekt Ein Hook Effekt tritt bei Proben mit bis zu 700 mg L hPL nicht auf 11 RECHTLICHE GRUNDLAGEN 11 1 Zuverl ssigkeit der Ergebnisse Der Test muss exakt gem der Testanleitung des Herstellers abgearbeitet werden Dar ber hinaus muss der Benutzer sich strikt an die Regeln der GLP Good Laboratory Practice oder andere eventuell anzuwendende Regeln oder nationale gesetzliche Vorgaben halten Dies betrifft besonders den Gebrauch der Kontrollreagenzien Es ist sehr wichtig bei der Testdurchf hrung stets eine ausreichende Anzahl Kontrollen zur berpr fung der Genauigkeit und Pr zision mitlaufen zu lassen Die Testergebnisse sind nur g ltig wenn alle Kontrollen in den vorgegebenen Bereichen liegen und wenn alle anderen Testparameter die vorgegebenen Spezifikationen f r diesen Assay erf llen Wenn Sie bez glich eines Ergebnisses Zweifel oder Bedenken haben setzen Sie sich bitte mit der Firma DRG in Verbindung 11 2 Therapeutische Konsequenzen Therapeutische Konsequenzen sollten keinesfalls nur aufgrund von Laborergebnissen erfolgen selbst dann nicht wenn alle Testergebnisse mit den in 11 1 genannten Voraussetzungen bereinstimmen Jedes Laborergebnis ist nur ein Teil des klinischen Gesamtbildes eines Patienten Nur in F l
29. gelagert oder versendet worden sein so dass die Bindungscharakteristik der Platten leicht unterschiedlich ausf llt Chemikalien und zubereitete oder bereits benutzte Reagenzien m ssen gem den nationalen Gefahrenstoffvorschriften wie gef hrlicher Abfall behandelt werden Sicherheitsdatenblatter f r dieses Produkt sind auf Anfrage direkt von der Firma DRG Instruments GmbH erh ltlich Vers 9 0 2013 08 vk 11 DRG hPL ELISA EIA 1283 4 BESTANDTEILE DES KITS 4 1 Kitinhalt 1 Microtiterwells 96 Wells 12x8 Wells einzeln brechbar Mit anti hPL Antik rper monoklonal beschichtet 2 Standard Standard 1 4 4 Fl schchen je 0 5 mL gebrauchsfertig Konzentrationen 1 25 5 0 10 0 20 0 mg L Umrechnungsfaktor 1 mg L 1 mlU L Die Standards sind kalibriert gegen den Internationalen NIBSC Standard f r hPL IRP 73 545 Enth lt quecksilberfreies Konservierungsmittel 3 Zero Standard Nullstandard und Probenverd nnungsmedium 1 Fl schchen 90 mL gebrauchsfertig 0 mg L Enthalt quecksilberfreies Konservierungsmittel 4 Control Low amp High Kontrolle 2 Fl schchen je 0 5 mL gebrauchsfertig Kontrollwerte und bereiche entnehmen Sie bitte dem Flaschchenetikett oder dem QC Datenblatt Enthalt quecksilberfreies Konservierungsmittel 5 Enzyme Conjugate Enzymkonjugat 1 Flaschchen 11 mL gebrauchsfertig Anti hPL Antik rper mit Meerrettichperoxidase konjugiert Enthalt quecksilberfreies Konservierungsmitte
30. he Dichte ist abh ngig von Inkubationszeit und Temperatur Deshalb ist es notwendig vor Beginn der Testdurchf hrung alle Reagenzien in einen arbeitsbereiten Zustand zu bringen die Deckel der Fl schchen zu ffnen alle ben tigten Wells in den Halter zu setzen Nur eine solche Vorbereitung garantiert gleiche Zeiten f r jeden Pipettiervorgang ohne Pausen Als generelle Regel gilt dass die enzymatische Reaktion linear proportional zu Zeit und Temperatur ist Vers 9 0 2013 08 vk 13 DRG hPL ELISA EIA 1283 6 2 Testdurchf hrung Achtung Um optimale Resultate zu erreichen ist es notwendig die Gr e eines Testansatzes auf 32 Wells zu beschr nken Die Standards Proben und Kontrollen sollten innerhalb von 3 Minuten in die Wells pipettiert werden Jeder Lauf muss eine Standardkurve beinhalten 1 Die ben tigte Anzahl Wells in der Halterung befestigen 2 Je 10 uL Zero Standard Standard Kontrolle und vorverd nnte Proben mit neuen Plastikspitzen in die entsprechenden Wells geben 3 100 pL Enzyme Conjugate in jedes Well geben F r 10 Sekunden gut sch tteln Es ist sehr wichtig in diesem Schritt eine komplette Durchmischung zu erreichen 4 30 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren 5 Den Inhalt der Wells kr ftig aussch tteln Wells 5 mal mit destilliertem Wasser 300 uL waschen Verbleibende Fl ssigkeit durch Ausklopfen der Wells auf saugf higem Papier entfernen Achtung Die Sensitivit t und Pr zision dies
31. ipio sandwich micropozzetti sono ricoperti con un anticorpo monoclonale diretto contro un unico sito antigenico su una molecola hPL Un aliquota di un campione di paziente contenente hPL endogeno viene incubato nel pozzetto ricoperto dell enzima coniugato che un anticorpo anti hPL coniugato alla perossidasi di rafano Dopo l incubazione il coniugato non legato eliminato attraverso lavaggi La quantit della perossidasi legata proporzionale alla concentrazione hPL nel campione Dopo l aggiunta della soluzione substrato l intensit del colore sviluppato proporzionale alla concentrazione di hPL nel campione del paziente 3 PRECAUZIONI Questo kit adatto soltanto per l uso diagnostico in vitro Si prega di usare la versione valida dell inserto del pacco a disposizione con il kit Informazioni su sostanze pericolose contenute nel kit sono riportate nel regolamento di sicurezza Tutti i componenti del kit che contengono siero o plasma umano sono controllati e confermati negativi per la presenza di HIV I II HosAg e HCV con metodi conformi alle norme FDA Ciononostante tutti i componenti dovrebbero essere trattati come potenziali sostanze nocive nella manutenzione e nello smaltimento Il contatto con la Stop Solution dovrebbe essere evitato perch contiene 0 5 M H2SQ L acido solforico pu provocare irritazioni cutanee e ustioni Non pipettare con la bocca ed evitare il contatto con componenti del k
32. it con la pelle o con le mucose Nelle aree in cui il test viene utilizzato non fumare mangiare bere o fare uso di prodotti cosmetici Nella manutenzione dei campioni o reagenti del kit portare guanti di latex monouso La contaminazione dei reagenti o dei campioni con microbi pu dare risultati falsi L utilizzo dovrebbe avvenire secondo regole che seguono le rispettive norme di sicurezza nazionali sulle sostanze nocive Non utilizzare i reagenti dopo la scadenza indicata sul kit Ogni indicazione sulla quantit indicata del protocollo del kit deve essere accuratamente seguito Risultati ottimali possono essere ottenuti soltanto con l uso di pipette calibrate e spettrofotometro calibrato Componenti del kit con numeri di lotto diversi non devono essere combinati consigliabile di non utilizzare pozzetti di piastre diversi anche se si tratta dello stesso lotto kit potrebbero essere stati magazzinati o spediti a condizioni diverse cosicch le caratteristiche di legame potrebbero divergere leggermente componenti chimici e reagenti preparati o gi utilizzati devono essere trattati e smaltiti secondo le norme di sicurezza nazionali sulle sostanze nocive regolamenti di sicurezza di questo prodotto possono essere richiesti direttamente dalla ditta DRG Instruments GmbH Vers 9 0 2013 08 vk 17 DRG hPL ELISA EIA 1283 4 COMPONENTI DEL KIT 4 1 Contenuto del kit 1 Microtiterwells Micropozetti
33. l 6 Substrate Solution Substratl sung 1 Fl schchen 14 mL gebrauchsfertig Substratl sung TMB 7 Stop Solution Stoppl sung 1 Fl schchen 14 mL gebrauchsfertig enthalt 0 5M H2SO Kontakt mit der Stoppl sung vermeiden Kann Hautreizungen und Verbrennungen verursachen Anmerkung Zus tzlicher Zero Standard zur Probenverd nnung ist auf Anfrage erh ltlich 4 2 Erforderliche aber nicht enthaltene Ger te und Materialien Kalibriertes Mikrotiterplattenleseger t mit 450 10 nm Filter z B das DRG Instruments Mikrotiterplattenleseger t Kalibrierte variable Prazisions Mikropipette Saugf higes Papier Aqua dest R hrchen zur Probenvorverd nnung 12 x 75 mm 4 3 Lagerung und Haltbarkeit des Kits Die unge ffneten Reagenzien behalten bei Lagerung um 2 bis 8 C ihre Reaktivit t bis zum Verfallsdatum Nach dem Verfallsdatum die Reagenzien nicht mehr verwenden Nach dem Offnen sollten alle Reagenzien bei 2 C bis 8 C gelagert werden Die Mikrotiterwells sollten bei 2 C bis 8 C gelagert werden Der einmal ge ffnete Folienbeutel sollte stets sehr sorgf ltig wieder verschlossen werden Unter den beschriebenen Lagerbedingungen behalten ge ffnete Kits 6 Wochen ihre Reaktivit t 4 4 Vorbereitung der Reagenzien Alle Reagenzien sowie die ben tigte Anzahl von Wells sollen vor dem Gebrauch auf Raumtemperatur gebracht werden 4 5 Entsorgung des Kits Die Entsorgung des Kits muss gem den
34. lcul des concentrations ce facteur de dilution doit tre pris en consid ration 6 3 1 Exemple d une courbe standard typique Les r sultats suivants sont ici pr sent s titre d exemple et ne peuvent tre utilis s au moment de l essai Vers 9 0 2013 08 vk 32 DRG hPL ELISA EIA 1283 7 VALEURS ATTENDUES Il est fortement recommand a chaque laboratoire de d terminer ses propres valeurs normales ou anormales Dans une tude l aide du kit DRG hPL ELISA les valeurs suivantes sont observ es 8 CONTROLE DE QUALITE Il est recommand d utiliser les chantillons contr les selon les r glementations nationales en vigueur L utilisation des chantillons contr les est recommand afin de s assurer jour apr s jour de la validit des r sultats Utiliser les contr les de valeurs normales et pathologiques Les contr les et les r sultats correspondants issus du laboratoire QC sont mentionn s dans le certificat QC fourni avec le kit Les valeurs et les limites mentionn es sur la fiche QC font toujours r f rence au lot de kit courant et doivent tre utilis es pour une comparaison directe avec les r sultats Il est galement recommand d utiliser les programmes d valuation de qualit nationaux ou internationaux afin de s assurer de l exactitude des r sultats Utiliser les m thodes d analyses statistiques appropri es pour l analyse des valeurs contr les et des tendances Si les r sultats ne correspondent
35. len in denen die Laborergebnisse in akzeptabler bereinstimmung mit dem allgemeinen klinischen Bild des Patienten stehen sollten therapeutische Konsequenzen eingeleitet werden Das Testergebnis allein sollte niemals als alleinige Grundlage f r die Einleitung therapeutischer Konsequenzen dienen 11 3 Haftung Jegliche Ver nderungen des Testkits und oder Austausch oder Vermischung von Komponenten unterschiedlicher Chargen von einem Testkit zu einem anderen k nnen die gew nschten Ergebnisse und die G ltigkeit des gesamten Tests negativ beeinflussen Solche Ver nderungen und oder Austausch haben den Ausschluss jeglicher Ersatzanspr che zur Folge Reklamationen die aufgrund von Falschinterpretation von Laborergebnissen durch den Kunden gem Punkt 11 2 erfolgen sind ebenfalls abzuweisen Im Falle jeglicher Reklamation ist die Haftung des Herstellers maximal auf den Wert des Testkits beschr nkt Jegliche Sch den die w hrend des Transports am Kit entstanden sind unterliegen nicht der Haftung des Herstellers Vers 9 0 2013 08 vk 16 DRG hPL ELISA EIA 1283 Italiano 1 INTRODUZIONE Il test immuno enzimatico DRG hPL ELISA contiene materiale per la determinazione quantitativa di lattogeno placentare umano hPL in siero Questo test kit adatto soltanto per l uso diagnostico 2 PRINCIPIO DEL TEST Il test kit DRG hPL ELISA un test immunologico in fase solida con enzimi ancorati su un substrato ELISA basato sul princ
36. lidi soltanto se tutte le referenze cadono nei margini prestabiliti e se tutti gli altri parametri del test soddisfano la specificazione per questo test Se esistono dubbi o domande su questi risultati si prega di contattare la ditta DRG 11 2 Conseguenze terapeutiche Soltanto sulla base dei risultati dei laboratori non dovrebbero essere intraprese delle conseguenze terapeutiche di alcun tipo anche se i risultati del test sono d accordo con gli aspetti articolati nel punto 11 1 Ogni risultato di laboratorio soltanto una parte di un quadro clinico completo di un paziente Soltanto in casi in cui i risultati di un test del laboratorio si accordano con il quadro clinico dell ammalato si possono intraprendere delle conseguenze terapeutiche Il risultato del test da solo non base sufficiente per lo stabilimento di una terapia 11 3 Responsabilit legali Ogni cambiamento del protocollo del test e o lo scambio o il mescolamento di componenti provenienti da cariche diverse possono influenzare negativamente i risultati e compromettere la validit del test Questi cambiamenti e o scambi annullano ogni diritto al risarcimento Si respingano inoltre tutti i richiami risultanti da interpretazioni sbagliate da parte dell utente secondo il paragrafo 11 2 Nel caso di reclamazione la garanzia del produttore limitato al valore massimo del test kit Ogni danno provocato durante il trasporto del kit non sottost alla responsabilit del produttore
37. mente determinato Della diluizione deve essere per tenuto conto 6 ATTUAZIONE DEL TEST 6 1 Indicazioni generali Tutti i reagenti e i campioni devono essere portati a temperatura ambiente e ben mescolati prima dell uso Evitare la formazione di schiume Una volta iniziato il procedimento del test questo deve essere portato alla fine senza interruzione Per ogni componente standard controllo o campione necessario utilizzare una nuova punta monouso per evitare reazioni incrociate La densit ottica dipende dal tempo d incubazione e dalla temperatura Perci si rende necessario di preparare tutti i reagenti di aprire i tappi dei flaconi e di appostare tutti i pozzetti nelle appropriate posizioni Soltanto una tale preparazione garantisce gli stessi tempi per ogni processo di pipettamento Come regola generale vale che la reazione enzimatica si svolge linearmente proporzionale con il tempo e con la temperatura Vers 9 0 2013 08 vk 19 DRG hPL ELISA EIA 1283 6 2 Eseguimento del test NOTA Pipettamento manuale Si raccomanda di non utilizzare piu di 32 pozzetti per ogni analisi contemporaneamente Il pipettamento di tutti gli standard i campioni e i controlli dovrebbe essere completato entro 3 minuti Pipettamento automatico Una micropiastra di 96 pozzetti puo essere usata interamente Si raccomanda comunque che il pipettamento degli standard dei campioni e dei controlli dovrebbe essere comple
38. mici Attenzione Se i campioni contengono sodio azide non devono essere utilizzati per questo test 5 1 Collezione dei campioni Siero Collezionare sangue tramite puntura venale p es Sarstedt Monovette per siero far coagulare e separare il siero centrifugando a temperatura ambiente Non centrifugare prima che la coagulazione sia completata Campioni di pazienti con una terapia anticoagulante possono richiedere pi tempo per la coagulazione 5 2 Magazzinaggio dei campioni campioni dovrebbero essere magazzinati ben chiusi fino a 5 giorni a 2 C a 8 C Campioni magazzinati per un periodo pi lungo dovrebbero essere congelati solo una volta a 20 C prima dell analisi Congelare soltanto una volta Invertire campioni scongelati alcune volte prima dell uso 5 3 Diluizione dei campioni Prima di procedere all analisi i campioni devono essere diluiti 1 100 con lo Zero Standard 1 Aggiungere per ogni campione 1 mL dello Standard Zero in una microcuvetta 2 Aggiungere 10 uL di campione per ogni microcuvetta Mescolare tutte le microcuvette per 10 secondi con un vortex evitando la formazione di schiume controlli interni Control Low amp High sono pronti all uso e non devono essere diluiti controlli esterni p es i controlli Bio Rad deve essere gestito come campioni Se in un campione di siero viene trovata una concentrazione oltre lo standard piu alto questo campione pu essere diluito con lo Zero Standard e nuova
39. n 12 4 COMPOSITION DU KIT 30 5 PROBENVORBEREITUNG unununnsssnnennnnnnnnnnnenenn 13 5 ECH ANTIEEON ee een 31 6 TESTDURCHFUHRUNG 13 6 REALISATION DU TEST 31 7 ERWARTETE WERTEN 15 7 VALEURS ATTENDUES 33 8 QUALIT TS KONTROLLE seision 15 8 CONTROLE DE QUALITE nn 33 9 ASSAYCHARACTERISTIKA 0 15 9 CARACTERISTIQUES DU TEST 33 10 GRENZEN DES TESTIG nn 16 10 LIMITES D UTILISATION 34 11 RECHTLICHE GRUNDLAGEN nn 16 11 ASPECTSLEGAUX num nn 34 1 INTRODUZIONE c ccccccccccccccccccccconcncncnnononononcnnncnononon 17 SYMBOLS USED WITH DRG ELISAS oaia 35 2 PRINCIPIO DEL TEST 17 3 PRECAUZIONI in ae a ne 17 4 COMPONENTI DEL KIT nn 18 5 CAMPIONI E22 ili ser 19 6 ATTUAZIONE DEL TEST 19 7 VALORI NORMALI 000 0 21 8 CONTROLLO QUALIT inn 21 9 CARATTERISTICHE DEL TEST 21 10 LIMITAZIONE DEL TEST nn 22 NEE CAR HR RE EE 22 Vers 9 0 2013 08 vk 1 DRG hPL ELISA EIA 1283 English 1 INTRODUCTION 1 1 Intended Use The DRG hPL ELISA is an enzyme immunoassay for the quantitative in vitro diagnostic measurement of human Placental Lactogen hPL in serum 1 2 Summary and Explanation The physiological role of HPL has not yet been established but the great similarity to human growth hormone has stim
40. nationalen gesetzlichen Vorschriften erfolgen Spezielle Informationen f r dieses Produkt finden Sie im Materialsicherheitsdatenblatt Kapitel 13 4 6 Besch digte Testkits Im Falle einer starken Besch digung des Testkits oder der Komponenten muss die Firma DRG in schriftlicher Form sp testens eine Woche nach Erhalt des Kits informiert werden Stark besch digte Einzelkomponenten sollten nicht f r den Testlauf verwendet werden Sie m ssen gelagert werden bis eine endg ltige L sung gefunden wurde Danach sollten Sie gem den offiziellen Richtlinien entsorgt werden Vers 9 0 2013 08 vk 12 DRG hPL ELISA EIA 1283 5 PROBENVORBEREITUNG Serum muss in diesem Test als Probenmaterial eingesetzt werden Lipamische ikterische und oder stark hamolysierte Proben sollten nicht verwendet werden Achtung Proben die Natriumazid enthalten sollten nicht verwendet werden 5 1 Probenentnahme Serum Blut durch Venenpunktion entnehmen z B mit Sarstedt Monovette f r Serum gerinnen lassen und das Serum durch Zentrifugation bei Raumtemperatur abtrennen Vor der Zentrifugation muss die Gerinnung vollstandig abgeschlossen sein Bei Patienten die Antikoagulantien erhalten kann die Gerinnungszeit langer dauern 5 2 Probenaufbewahrung Proben sollten stets gut verschlossen sein und k nnen vor Testbeginn bis zu 5 Tage bei 2 C bis 8 C gelagert werden F r eine l ngere Aufbewahrung sollten die Proben eingefroren bei 20 C bis zum Tes
41. ni sull asse orizzontale X 3 Utilizzando il valore medio delle OD per ogni campione si determina la rispettiva concentrazione dalla curva standard 4 Metodo automatico valori riportati in questo istruzioni per l uso sono stati determinati tramite l equazione a 4 parametri methodi preferiti sono 4 Parameter Rodbard oppure 4 Parameter Marquardt Altri funzioni usati per l elaborazioni dei dati possono dare risultati leggermente differenti 5 La concentrazione dei campioni pu essere determinata direttamente dalla curva standard Campioni con una concentrazione piu elevata dello standard piu concentrato devono essere diluiti Di questo fattore di diluizione deve essere tenuto conto per il calcolo della concentrazione 6 3 1 Esempio di una curva standard tipica seguenti dati sono a scopo dimostrativo soltanto e non possono sostituire i dati generati dall eseguimento del test Vers 9 0 2013 08 vk 20 DRG hPL ELISA EIA 1283 7 VALORI NORMALI consigliabile che ogni laboratorio determini i propri valori normali e anormali In uno studio usando il test DRG hPL ELISA i seguenti valori sono stati ottenuti settimana di gravidanza hPL mg L 10 12 0 05 1 00 8 CONTROLLO QUALIT consigliabile utilizzare i campioni controllo secondo le norme di legge Attraverso l utilizzo dei campioni controllo si pu raggiungere una verifica dei risultati giorno per giorno Dovrebbero essere adoperati campioni cont
42. non fournis Un spectrophotom tre lecteur de micro plaques calibr 450 10 nm ex le lecteur de microplaques de DRG Instruments GmbH Des micro pipettes de pr cision variables et calibr es Du papier absorbant De l eau distill e 4 3 Stockage et stabilit du kit Les r actifs contenus dans des flacons non ouverts stock s 2 C 8 C seront stables jusqu la date d expiration inscrite sur l tiquette Ne pas utiliser les r actifs au del de cette date Les r actifs contenus dans des flacons ouverts doivent tre stock s 2 C 8 C Les micro plaques doivent tre stock es 2 C 8 C Une fois la capsule d aluminium ouverte attention bien refermer le flacon Les kits ouverts conservent leur activit durant 6 semaines s ils sont stock s comme pr c demment mentionn 4 4 Pr paration des r actifs Amener tous les r actifs et le nombre de barrettes n cessaires au test temp rature ambiante avant utilisation 4 5 Elimination des d chets relatifs au kit L limination des d chets relatifs au kit doit tre r alis e selon les r gles nationales en vigueur Les informations sp cifiques au kit sont pr sent es dans la fiche de s curit voir chapitre 13 4 6 Kits endommag s Dans le cas de dommages importants survenus au kit ou ses composants informer la DRG au plus tard une semaine apr s r ception du kit Les composants endommag s ne doivent pas t
43. nzymatique Conjugado enzim tico Tracciante enzimatico Conjugate Enzyme Enzyme Complex Enzymkomplex Complexe Complex enzim tico Complesso enzimatico Complex enzymatique Substrate Substrate Solution Substratl sung Solution substrat Soluci n de sustrato Soluzione di substrato Solution Stop Solution Stop Solution Stoppl sung Solution d arr t Soluci n de parada Soluzione d arresto Zero Standard Zero Standard Nullstandard Zero Standard Estandar cero Standard zero Standard Standard Standard Standard Estandar Standard Control Control Kontrolle Contr le Control Controllo Assay Buffer Assay Buffer Assaypuffer Tampon d essai Tampon de ensayo Tampone del test Wash Solution Wash Solution Waschl sung Solution de lavage Soluci n de lavado Soluzione di lavaggio 1N NaOH 1N NaOH 1N NaOH 1N NaOH 1N NaOH 2 nn iatsseidesdl 1 N HCI 1N HCI 1N HCI 1N HCI 1N HCI A Probenverd nnungs Solution pour dilution Soluci n para diluci n e KE Sample Diluent Sample Diluent medium de l chantillon de la muestra EEN Conjugate i Konjugatverd nnungs Solution pour dilution Soluci n para diluci n Diluent Conjugate Diluent medium du conjugu del conjugado Diluente del tracciante Vers 9 0 2013 08 vk 35
44. odos los reactivos en este kit de ensayo que contienen suero o plasma humano se han ensayado y confirmado ser negativos para HIV I II HBsAg y HCV mediante procedimientos aprobados por la FDA Sin embargo todos los reactivos deben ser tratados tanto en su uso como dispensaci n como potencialmente biopeligrosos Evitar contacto con Stop Solution que contiene HSO 0 5 M Puede provocar irritaci n y quemaduras en la piel Nunca pipetear con la boca y evitar el contacto de los reactivos y las muestras con la piel y con membranas mucosas No fumar comer beber o usar cosm ticos en reas donde las muestras o los reactivos del kit est n siendo usados Usar guantes de l tex cuando se utilicen las muestras y los reactivos La contaminaci n microbiana de los reactivos o las muestras puede dar resultados err neos El manejo debe realizarse de acuerdo a los procedimientos definidos por las gu as o regulaci n nacionales de seguridad de sustancias biopeligrosas No utilizar los reactivos despu s de su fecha de caducidad que aparece en las etiquetas del kit Todos los vol menes indicados han de ser realizados de acuerdo con el protocolo Los resultados ptimos del ensayo se obtienen solo cuando se utilizan pipetas y lectores de microplacas calibrados No mezclar o usar componentes de kits con distinto n mero de lote Se recomienda no intercambiar pocillos de distintas placas incluso si son del mismo lote Los kits pue
45. opipette calibrate di precisione a volume variabile Carta assorbente Acqua distillata 4 3 Magazzinaggio e stabilit del kit A2 a8 Ci reagenti non aperti rimangono reattivi fino alla data di scadenza indicata Non usare reagenti oltre questa data Tutti i reagenti aperti devono essere magazzinati a 2 C a 8 C micropozzetti devono essere magazzinati a 2 C a 8 C Una volta aperti i pacchi questi devono essere richiusi accuratamente Test kits aperti rimangono attivi per 6 settimane se magazzinati alle condizioni sopra descritte 4 4 Preparazione dei reagenti Prima dell uso portare tutti i reagenti e il numero necessario di pozzetti a temperatura ambiente 4 5 Smaltimento del kit Lo smaltimento del kit deve avvenire secondo le regole a norma di legge Informazioni particolareggiate per questo prodotto si trovano nel regolamento di sicurezza capitolo 13 4 6 Test kits danneggiati Nel caso di gravi danneggiamenti del kit o dei suoi componenti deve avvenire una dichiarazione scritta alla ditta DRG al piu tardi una settimana dopo il ricevimento del kit Componenti danneggiati non dovrebbero essere utilizzati per il test Questi componenti devono essere magazzinati fino ala soluzione del problema Dopo di che essi devono essere smaltiti secondo le norme ufficiali Vers 9 0 2013 08 vk 18 DRG hPL ELISA EIA 1283 5 CAMPIONI Siero pud essere usato per questo test Non usare campioni emolitici itterici o lipe
46. pas aux limites tablies des contr les les r sultats concernant ces patients doivent tre consid r es comme non valides Dans ce cas tester les zones techniques suivantes m canisme de pipettage et temps spectrophotom tre dates d expiration des r actifs conditions de stockage et d incubation m thodes d aspiration et de lavage Apr s avoir tester les points mentionn s si aucune erreur n est d tect e contacter votre distributeur ou directement la DRG 9 CARACTERISTIQUES DU TEST 9 1 Zone de mesure Les limites du dosage sont comprises entre 0 04 20 mg L 9 2 Sp cificit des anticorps R action crois e Voir le manuel d utilisateur en version anglaise 9 3 Sensibilit de l analyse La sensibilit de l analyse a t calcul e partir de la moyenne la plus lev e de deux d viations standards de l analyse de vingt r plicats du Zero Standard et a t mesur e 0 043 mg L Vers 9 0 2013 08 vk 33 DRG hPL ELISA EIA 1283 9 4 Pr cision Voir le manuel de l utilisateur en version anglaise 9 5 Recouvrement Voir le manuel de l utilisateur en version anglaise 9 6 Lin arit Voir le manuel de l utilisateur en version anglaise 10 LIMITES D UTILISATION Toute utilisation impropre des chantillons ou toute modification du test peut influencer les r sultats 10 1 Substances parasites L h moglobine jusqu 4 mg mL la bilirubine jusqu 0 5 mg mL et les triglyc rides jusqu 3
47. r de los datos generados en el momento del ensayo Estandar Unidades Opticas 450 nm Zero Standard 0 mg L 0 03 Vers 9 0 2013 08 vk 26 DRG hPL ELISA EIA 1283 7 VALORES ESPERADOS Se recomienda encarecidamente que cada laboratorio determine sus valores normales e inusuales En un estudio utilizando el DRG hPL ELISA se observaron los siguientes valores semana de embarazo hPL mg L 10 12 0 05 1 00 040 17 03 28 05 35 09 40 8 CONTROL DE CALIDAD Se recomienda usar muestras control de acuerdo con las leyes estatales y federales El uso de muestras control ser recomienda para asegurar la validez diaria de los resultados Usar controles tanto a niveles normal como patol gico Los controles y los correspondientes resultados del Laboratorio de control de calidad est n fijados en el certificado de control de calidad que acompa an al kit Los valores y los rangos fijados en la hoja del control de calidad se refieren siempre al kit actual y deben usarse para la comparaci n directa de los resultados Es recomendable tambi n hacer uso de programas de Aseguramiento de la Calidad nacionales o internacionales para asegurar la exactitud de los resultados Utilizar m todos estad sticos apropiados para el an lisis de los valores y tendencia de los controles Si los resultados del ensayo no se ajustan a los rangos aceptables establecidos en los controles los resultados obtenidos de los pacientes han de considerarse inv
48. re utilis s pour le test Ils doivent tre stock s jusqu ce qu une solution adapt e ait t trouv e Apr s cela ils doivent tre limin s selon les directives officielles en vigueur Vers 9 0 2013 08 vk 30 DRG hPL ELISA EIA 1283 5 ECHANTILLON S rum peuvent tre utilis s pour ce test Ne pas utiliser des chantillons h molys s ict riques ou lip miques Remarque Les chantillons contenant de l azide de sodium ne doivent pas tre utilis s pour ce test 5 1 Pr l vement et pr paration des chantillons S rum Pr lever le sang par ponction veineuse ex Sarstedt Monovette pour s rum laisser coaguler puis s parer le s rum par centrifugation a temp rature ambiante Ne pas centrifuger avant que la coagulation ne soit termin e Les patients sous traitement anti coagulant peuvent demander un temps de coagulation plus important 5 2 Conservation des chantillons Les tubes contenant les chantillons doivent tre ferm s et peuvent tre stock s jusqu a cing jours a 2 C 8 C avant d tre test s Les chantillons stock s pour un temps prolong doivent tre congel s 20 C avant d tre test s Les chantillons d congel s doivent tre retourn s plusieurs fois avant le test 5 3 Dilution de l chantillon Avant de commencer l essai l chantillon doit tre dilu au 1 100 avec le Zero Standard 1 Pour chaque chantillon ajouter 1 mL de Zero Standard dans un t
49. rio 6 Substrate Solution Soluci n de sustrato 1 vial 14 mL listo para usar Tetrametilbencidina TMB 7 Stop Solution Soluci n de parada 1 vial 14 mL listo para usar contiene 0 5M H GCH Evitar el contacto con la Soluci n de parada Puede causar irritaci n y quemaduras en al piel Nota Se puede solicitar el Zero Standard para la diluci n de la muestra 4 2 Equipamiento y material requerido pero no provisto Lector de microplacas calibrado 450 10 nm ej DRG Instruments Microtiter Plate Reader Micropipetas de precisi n variable calibradas Papel absorbente Agua destilada 4 3 Almacenamiento y estabilidad del kit Cuando se almacena a 2 8 C los reactivos sin abrir mantienen su reactividad hasta la fecha de caducidad No utilizar los reactivos mas alla de esta fecha Los reactivos abiertos han de almacenarse a 2 C 8 C Las placas multipocillo han de almacenarse a 2 C 8 C Una vez se ha abierto la bolsa hay que tener cuidado y cerrarla de nuevo Los kits abiertos conservan su actividad durante 6 semanas si se almacenan como se ha descrito arriba 4 4 Preparaci n de los Reactivos Dejar que todos los reactivos y el numero requerido de tiras alcancen la temperatura ambiente antes de usarse 4 5 Eliminaci n del Kit La eliminaci n del kit debe realizarse de acuerdo con las leyes nacionales En las hojas de datos de seguridad se proporciona informaci n especial de este producto
50. rollo sia con un livello normale sia con uno patologico Le referenze con i rispettivi risultati del laboratorio QC sono elencati nel QC certificato che allegato al kit valori riportati nel QC certificato si riferiscono al lotto del kit attuale e dovrebbero essere utilizzati per un raffronto dei risultati E altres consigliabile di partecipare a programmi di sicurezza sulla qualit nazionali o internazionali per assicurarsi dell esattezza dei risultati Appropriati metodi statistici per l analisi dei valori controllo e delle rappresentazioni grafici dovrebbero essere adoperati Nel caso che i risultati del test non combaciano con il campo di accettazione indicato dal materiale di controllo i risultati dei pazienti devono essere considerati invalidi In questo caso si prega di controllare i seguenti fattori d errore pipette cronometri fotometro data di scadenza dei reagenti condizione di magazzinaggio e d incubazione metodi di aspirazione e di lavaggio Se dopo il controllo dei suddetti fattori non rilevabile alcun errore si prega di contattare il fornitore o direttamente la ditta DRG 9 CARATTERISTICHE DEL TEST 9 1 Assay Dynamic Range Le concentrazioni determinabili con questo test stanno tra 0 04 20 mg L 9 2 Specificit degli anticorpi reazioni ad incrocio Per dettagli pi precisi consultare la metodica in inglese 9 3 Sensitivita analitica La sensitivit analitica stata calcolata dai valori medi piu
51. s angewendet werden Wenn die Ergebnisse des Assays nicht mit den angegebenen Akzeptanzbereichen des Kontrollmaterials bereinstimmen sollten die Patientenergebnisse als ung ltig eingestuft werden In diesem Fall berpr fen Sie bitte die folgenden Bereiche Pipetten und Zeitnehmer Photometer Verfallsdatum der Reagenzien Lagerungs und Inkubationsbedingungen Absaug und Waschmethode Sollten Sie nach berpr fung der vorgenannten Bereiche keinen Fehler erkannt haben setzen Sie sich bitte mit Ihrem Lieferanten oder direkt mit der Firma DRG in Verbindung 9 ASSAY CHARACTERISTIKA 9 1 Messbereich Der Messbereich des Testes liegt zwischen 0 04 20 mg L 9 2 Spezifit t der Antik rper Kreuzreaktivit t Die Daten entnehmen Sie bitte der ausf hrlichen englischen Arbeitsanleitung 9 3 Sensitivit t Die analytische Sensitivit t definiert als Mittelwert plus der zweifachen Standardabweichung des Zero Standard n 20 betr gt 0 043 mg L Vers 9 0 2013 08 vk 15 DRG hPL ELISA EIA 1283 Die Daten zu 9 4 Reproduzierbarkeit Pr zision 9 5 Wiederfindung 9 6 Linearitat entnehmen Sie bitte der ausf hrlichen englischen Arbeitsanleitung 10 GRENZEN DES TESTS Jede unsachgem e Behandlung von Proben oder Modifikationen dieses Tests k nnen die Ergebnisse beeinflussen 10 1 Interferenzen Hamoglobin bis zu 4 mg mL Bilirubin bis zu 0 5 mg mL und Triglyceride bis zu 30 mg mL haben keinen Einfluss auf das Tester
52. s important to always include within the test procedure a sufficient number of controls for validating the accuracy and precision of the test The test results are valid only if all controls are within the specified ranges and if all other test parameters are also within the given assay specifications In case of any doubt or concern please contact DRG 11 2 Therapeutic Consequences Therapeutic consequences should never be based on laboratory results alone even if all test results are in agreement with the items as stated under point 11 1 Any laboratory result is only a part of the total clinical picture of a patient Only in cases where the laboratory results are in acceptable agreement with the overall clinical picture of the patient should therapeutic consequences be derived The test result itself should never be the sole determinant for deriving any therapeutic consequences 11 3 Liability Any modification of the test kit and or exchange or mixture of any components of different lots from one test kit to another could negatively affect the intended results and validity of the overall test Such modification and or exchanges invalidate any claim for replacement Claims submitted due to customer misinterpretation of laboratory results subject to point 11 2 are also invalid Regardless in the event of any claim the manufacturer s liability is not to exceed the value of the test kit Any damage caused to the test kit during transportation i
53. s not subject to the liability of the manufacturer Vers 9 0 2013 08 vk 10 DRG hPL ELISA EIA 1283 1 EINLEITUNG Der DRG hPL ELISA wird zur quantitativen Bestimmung von humanem plazentaren Laktogen hPL in Serum eingeseizt Nur f r In vitro Diagnostik 2 TESTPRINZIP Der DRG hPL ELISA ist ein Festphasen Enzymimmunoassay der auf der Sandwichtechnik basiert Die Wells der Mikrotiterplatten sind mit einem monoklonalen Antik rper beschichtet der gegen eine definierte Antik rper Bindungsstelle des hPL Molek ls gerichtet ist Die Proben werden in die beschichteten Wells gegeben und mit einem Enzymkonjugat inkubiert Das Konjugat enth lt einen monoklonalen anti hPL Antik rper der mit Meerrettichperoxidase konjugiert ist Es wird ein Sandwichkomplex gebildet Das nicht gebundene Konjugat wird durch Waschen der Wells entfernt AnschlieBend wird die Substratl6sung zugegeben und die Farbentwicklung nach einer definierten Zeit gestoppt Die Intensitat der gebildeten Farbe ist proportional der hPL Konzentration in der Probe Die Extinktion wird bei 450 nm mit einem Mikrotiterplattenleser gemessen 3 VORSICHTSMABNAHMEN Dieser Kit ist nur zum in vitro diagnostischen Gebrauch geeignet Nur die g ltige im Testkit enthaltene Arbeitsanleitung verwenden Informationen zu im Kit enthaltenen gef hrlichen Substanzen entnehmen Sie bitte dem Materialsicherheitsdatenblatt Alle Bestandteile dieses Testkits die humanes Serum oder
54. s r sultats de laboratoire si et seulement si ceux ci sont en accord avec l ensemble du tableau clinique du patient Le r sultat du test en lui m me ne doit en aucun cas tre le seul d terminant des suites th rapeutiques suivre 11 3 Responsabilit Toute modification du kit et ou change ou m lange d un des composants de diff rents lots d un kit un autre pourrait affecter de fa on n gative les r sultats attendus et la validit du test dans son ensemble De telles modifications ou changes invalident toute r clamation pour remplacement Toutes les r clamations soumises relatives au paragraphe 11 2 et dues une mauvaise interpr tation des r sultats de laboratoire de la part du client sont galement invalides N anmoins en cas de r clamation la responsabilit du fabricant n est pas de d passer les limites de la valeur du kit Tout dommage caus au kit lors de son transport n est pas du ressort de la responsabilit du fabricant Vers 9 0 2013 08 vk 34 DRG hPL ELISA EIA 1283 SYMBOLS USED WITH DRG ELISAS Symbol English Deutsch Frangais Espafiol Italiano CN MN European Conformity CE Konformit ts kennzeichnung Conforme aux normes europ ennes Conformidad europea Conformit europea Consult instructions for use Gebrauchsanweisung beachten Consulter les instructions d utilisation Consulte las Instrucciones Consultare le istruzioni per l
55. se consecuencias terap uticas a partir de solamente el resultado obtenido en el ensayo 11 3 Responsabilidad Cualquier modificaci n del kit y o cambio o mezcla de cualquier componente procedentes de kits de lotes diferentes puede afectar negativamente a los resultados esperados y en la validez de todo el test Esas modificaciones y o cambios invalidad cualquier reclamaci n de reposici n Las reclamaciones emitidas debidas a una mala interpretaci n de los resultados de laboratorio por parte del comprador referidos al punto 11 2 son tambi n inv lidas A pesar de todo en el caso de cualquier reclamaci n la responsabilidad del fabricante no excede el valor del kit Cualquier da o provocado al kit durante su transporte no est sujeto a la responsabilidad del fabricante Vers 9 0 2013 08 vk 28 DRG hPL ELISA EIA 1283 Francais 1 INTRODUCTION Le kit de dosage immuno enzymatique DRG hPL ELISA propose les mat riaux requis pour la mesure quantitative d hormone placentaire lactog ne hPL dans le s rum Ce kit est utiliser uniquement dans le cadre de tests diagnostiques in vitro 2 PRINCIPE DU TEST Le kit DRG hPL ELISA est bas sur une r action immuno enzymatique en sandwich en phase solide Les microplaques sont recouvertes avec un anticorps monoclonal dirig contre un antig ne sp cifique de la mol cule hPL Un aliquot de l chantillon contenant le hPL endog ne est incub dans un puits avec l enzyme conjugu e c
56. st ndar cero 1 A adir a cada muestra 1 mL del est ndar cero en un tubo de ensayo 2 A adir 10 uL de cada muestra al tubo de ensayo adecuado Mezclar todos los tubos durante 10 segundos en un Vortex evitar la espuma Los controles internos Control Low 8 High est n listos para usar y no necesita ser diluido Controles externos como controles de Bio Rad tiene que ser tratado como muestras Si en un ensayo inicial se encuentra una muestra que presenta valores mayores que el est ndar mas concentrado ha de diluirse con Zero Standard y volver a ensayarse como se describe en el Procedimiento de Ensayo Para el c lculo de las concentraciones habr que tener en cuenta el factor de diluci n 6 PROCEDIMIENTO DE ENSAYO 6 1 Consideraciones generales Todos los reactivos y muestras han de estar a temperatura ambiente antes de su uso Todos los reactivos deben mezclarse sin formar espuma Una vez se ha comenzado el ensayo deben completarse todos los pasos sin interrupci n Utilizar puntas de pipeta de pl stico nuevas para cada est ndar control o muestra para evitar combinaciones cruzadas La absorbancia es funci n del tiempo de incubaci n y la temperatura Antes de comenzar el ensayo se recomienda que todos los reactivos est n preparados tapas removidas todos los pocillos que se necesiten asegurados en recipiente etc Esto asegurar un tiempo similar para cada paso de pipeteo sin que haya interrupciones
57. tato entro 3 minuti Ogni analisi deve includere una curva standard 1 Fissare i pozzetti necessari sul supporto 2 Pipettare 10 pL di ogni Standard controllo e campione diluiti nei pozzetti cambiando ogni volta la punta monouso 3 Pipettare 100 uL Enzyme Conjugate in ogni pozzetto Agitare bene per 10 secondi E molto importante raggiungere un completo mescolamento 4 Incubare per 30 minuti a temperatura ambiente 5 Rovesciare la piastra per vuotare i pozzetti Lavare i pozzetti 5 volte con acqua distillata 400 uL in ogni pozzetto Rimuovere le gocce d acqua rimanenti rivoltando la piastra su carta assorbente Importante La sensibilit e la precisazione di questo kit sono fortemente influenzate dal corretto eseguimento del lavaggio Aggiungere 100 uL della Substrate Solution ad ogni pozzetto Incubare per 10 minuti a temperatura ambiente Fermare la reazione enzimatica aggiungendo 50 uL della Stop Solution ad ogni pozzetto Determinare la densit ottica a 450 10 nm con un fotometro per microtiter piastre entro 10 minuti dopo l aggiunta della Stop Solution NN MD 6 3 Rilevamento dei risultati 1 Determinarei valori medi della densit ottica per ogni set di standard controlli e campioni 2 Costruire una curva standard riportare i valori medi della densit ottica OD di ogni standard contro la rispettiva concentrazione dove i valori delle OD si devono trovare sull asse verticale Y e le concentrazio
58. tbeginn gelagert werden Nur einmal einfrieren Aufgetaute Proben sollten vor Testbeginn vorsichtig durchmischt werden ohne Schaumbildung 5 3 Probenverd nnung Vor Beginn der Testdurchf hrung muss das Patientenserum 1 100 mit Zero Standard vorverd nnt werden 1 f r jedes Patientenserum in ein entsprechend beschriftetes Plastikr hrchen 1 mL Zero Standard geben 2 10 uL Patientenserum in die entsprechenden Reaktionsr hrchen geben f r jedes Serum eine saubere Pipettenspitze verwenden Gut durchmischen vortexen Die internen Kontrollen Control Low amp High sind gebrauchsfertig und m ssen nicht verd nnt werden Externe Kontrollen wie z B Bio Rad Kontrollen m ssen wie Patientenproben behandelt werden Wenn in einem ersten Testdurchlauf bei einer Probe eine Konzentration h her als der h chste Standard gefunden wird kann diese Probe mit Zero Standard weiter verd nnt und nochmals bestimmt werden Diese weitere Verd nnung muss jedoch bei der Berechnung der Konzentration beachtet werden 6 TESTDURCHF HRUNG 6 1 Allgemeine Hinweise Alle Reagenzien und Proben m ssen vor Gebrauch auf Raumtemperatur gebracht und gut durchmischt werden Dabei sollte Schaumbildung vermieden werden Wenn die Testdurchf hrung einmal begonnen wurde muss sie ohne Unterbrechung zu Ende gef hrt werden F r jeden Standard jede Kontrolle oder Probe eine neue Plastikspitze verwenden um Verschleppungen zu vermeiden Die Optisc
59. the substrate solution the intensity of colour developed is proportional to the concentration of hPL in the patient sample Vers 9 0 2013 08 vk 2 SOON 10 Do not smoke eat drink or apply cosmetics in areas where specimens or kit reagents are handled 12 14 15 17 18 20 21 DRG hPL ELISA EIA 1283 WARNINGS AND PRECAUTIONS This kit is for in vitro diagnostic use only For professional use only All reagents of this test kit which contain human serum or plasma have been tested and confirmed negative for HIV I II HBsAg and HCV by FDA approved procedures All reagents however should be treated as potential biohazards in use and for disposal Before starting the assay read the instructions completely and carefully Use the valid version of the package insert provided with the kit Be sure that everything is understood The microplate contains snap off strips Unused wells must be stored at 2 C to 8 C in the sealed foil pouch and used in the frame provided Pipetting of samples and reagents must be done as quickly as possible and in the same sequence for each step Use reservoirs only for single reagents This especially applies to the substrate reservoirs Using a reservoir for dispensing a substrate solution that had previously been used for the conjugate solution may turn solution colored Do not pour reagents back into vials as reagent contamination may occur Mix the contents of the microplate wells thoro
60. thin 3 minutes Automated Pipetting A full plate of 96 wells may be used in each assay run However it is recommended that pipetting of all standards samples and controls be completed within 3 minutes Each run must include a standard curve 1 Secure the desired number of Microtiter wells in the frame holder 2 Dispense 10 uL of each Standard control and prediluted samples with new disposable tips into appropriate wells 3 Dispense 100 pL Enzyme Conjugate into each well Thoroughly mix for 10 seconds It is important to have a complete mixing in this step 4 Incubate for 30 minutes at room temperature 5 Briskly shake out the contents of the wells Rinse the wells 5 times with distilled water 300 uL per well Strike the wells sharply on absorbent paper to remove residual droplets Important note The sensitivity and precision of this assay is markedly influenced by the correct performance of the washing procedure Add 100 uL of Substrate Solution to each well Incubate for 10 minutes at room temperature Stop the enzymatic reaction by adding 50 uL of Stop Solution to each well Determine the absorbance OD of each well at 450 10 nm with a microtiter plate reader It is recommended that the wells be read within 10 minutes after adding the Stop Solution OND 6 3 Calculation of Results 1 Calculate the average absorbance values for each set of standards controls and patient samples 2 Using semi logarithmic gr
61. ube 2 Ajouter 10 uL de chaque chantillon dans le tube appropri M langer tous les tubes durant 10 secondes l aide d un Vortex viter la mousse Les contr les internes Control Low 8 High sont pr ts l emploi et n a pas besoin d tre dilu Les contr les externes tels que les contr les Bio Rad doit tre trait e comme chantillons Si lors d un test pr liminaire la concentration de l chantillon se r v le tre sup rieure celle du standard le plus concentr alors l chantillon doit tre dilu avec le Zero Standard et test de nouveau comme d crit dans R alisation du test Pour le calcul des concentrations ce facteur de dilution doit tre pris en consid ration 6 R ALISATION DU TEST 6 1 Remarques g n rales Tous les r actifs et chantillons doivent tre amen s a temp rature ambiante avant utilisation Tous les r actifs doivent tre m lang s sans formation de mousse Une fois la proc dure engag e toutes les tapes doivent tre r alis es sans interruption Utiliser un nouveau c ne de pipette pour chaque standard contr le ou chantillon ceci afin d viter toute contamination L absorbance est fonction du temps d incubation et de la temp rature Avant de commencer le test il est recommand de pr parer tous les r actifs bouchons ouverts de pr parer les puits des microplaques etc Cela garantira un intervalle de temps quivalent entre chaque tap
62. ughly to ensure good test results Do not reuse microwells Do not let wells dry during assay add reagents immediately after completing the rinsing steps Allow the reagents to reach room temperature 21 26 C before starting the test Temperature will affect the absorbance readings of the assay However values for the patient samples will not be affected Never pipet by mouth and avoid contact of reagents and specimens with skin and mucous membranes Wear disposable latex gloves when handling specimens and reagents Microbial contamination of reagents or specimens may give false results Handling should be done in accordance with the procedures defined by an appropriate national biohazard safety guideline or regulation Do not use reagents beyond expiry date as shown on the kit labels All indicated volumes have to be performed according to the protocol Optimal test results are only obtained when using calibrated pipettes and microtiterplate readers Do not mix or use components from kits with different lot numbers It is advised not to exchange wells of different plates even of the same lot The kits may have been shipped or stored under different conditions and the binding characteristics of the plates may result slightly different Avoid contact with Stop Solution containing 0 5 M H2SQ It may cause skin irritation and burns Some reagents contain Proclin 300 BND and or MIT as preservatives In case of contact with eyes or skin fl
63. ulated the hypothesis about a function as a regulator of feto placental growth and other physiological alterations during pregnancy It has been suggested that the maternal serum level may reflect on index of placental function Depressed levels of HPL are seen in association with intrauterine death fetal distress in labor and birth asphyxia This association is particularly strong if depressed levels are seen repeatedly implying a chronic state of placental and therefore fetal compromise Depressed levels are usually not present if the pregnancy has proceeded uneventfully to term Elevated levels of HPL are usually indicative of optimal pregnancy outcome in singleton pregnancies However high levels may indicate substantial fetal pathology in specific diseases namely diabetes mellitus and fetal macrosomia rhesus isoimmunization and hydrops fetalis 2 PRINCIPLE OF THE TEST The DRG hPL ELISA Kit is a solid phase enzyme linked immunosorbent assay ELISA based on the sandwich principle The microtiter wells are coated with a monoclonal mouse antibody directed towards a unique antigenic site of the hPL molecule An aliquot of patient sample containing endogenous hPL is incubated in the coated well with enzyme conjugate which is an anti hPL antibody conjugated with horseradish peroxidase After incubation the unbound conjugate is washed off The amount of bound peroxidase is proportional to the concentration of hPL in the sample Having added
64. ush immediately with water TMB substrate has an irritant effect on skin and mucosa In case of possible contact wash eyes with an abundant volume of water and skin with soap and abundant water Wash contaminated objects before reusing them If inhaled take the person to open air Chemicals and prepared or used reagents have to be treated as hazardous waste according to the national biohazard safety guideline or regulation For information on hazardous substances included in the kit please refer to Safety Data Sheets Safety Data Sheets for this product are available upon request directly from DRG Vers 9 0 2013 08 vk 3 DRG hPL ELISA EIA 1283 4 REAGENTS 4 1 Reagents provided 1 Microtiterwells 12x8 break apart strips 96 wells Wells coated with anti hPL antibody monoclonal 2 Standard Standard 1 4 4 vials 0 5 mL ready to use Concentrations 1 25 5 0 10 0 20 mg L Conversion 1 mg L 1 mlU L The standards are calibrated against the NIBSC International Standard for hPL IRP 73 545 Contain non mercury preservative 3 Zero Standard also used as Sample Diluent 1 vial 90 mL ready to use 0 mg L Contain non mercury preservative 4 Control Low amp High 2 vials 0 5 mL each ready to use For control values and ranges please refer to vial label or QC Datasheet Contain non mercury preservative 5 Enzyme Conjugate 1 vial 11 mL ready to use Anti hPL antibody conjugated to horseradish peroxidase

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