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1. REFERENZWERTE Jedes Labor sollte seine eigenen Normalwerte f r das Instrumenten Reagenzien System im Routinebetrieb bestimmen Referenzwerte k nnen je nach Technik und verwendetem System von Labor zu Labor unterschiedlich sein Aus diesem Grund sollte jedes Labor seinen eigenen Normalwertbereich erstellen Erwartete Werte f r die Ristocetin Ko Faktor Aktivit t bei Erwachsenen sind 58 166 0 58 1 66 Units ml LEISTUNGSEIGENSCHAFTEN Folgende Leistungseigenschaften sind von Helena BioSciences selbst oder in ihrem Auftrag als Richtlinie bestimmt worden Jede Labor muss seine eigenen Werte ermitteln Der Helena BioSciences Ristocetin Ko Faktor Test ist zur Angabe einer linearen Kalibrations Kurve von 10 60 ohne Vorverd nnung entwickelt worden Erwartete VKs innerhalb der Tests sind lt 10 LITERATUR 1 Zimmerman T S and Ruggeri Z M von Willebrands Disease Progress in Thrombosis and Haemostasis Spaett Ed 1982 6 203 236 Ratnoff O D and Bennett B Clues to Pathogenesis of Bleeding in von Willebrands Disease N Eng J Med 1973 289 1182 1183 Blatt P M et al Antinemophilic factor Concentrate Therapy in von Willebrands Disease J Am Med Assn 1976 236 2770 2772 Green D and Potter E V Failure of AHF Concentrate to Control Bleeding in von Willebrands Disease Am J Med 1976 60 357 360 Mannucci P M et al Studies on the Prolonged Bleeding Time in von Willebrands Di2. Bleeding in von Willebrands Disease Am J Med 1976 60 357 360 5 Mannucci P M et al Studies on the Prolonged Bleeding Time in von Willebrands Disease J Lab Clin Med 1976 88 662 671 6 Ruggeri Z M et al Heightened Interaction Between Platelets and Factor VIll von Willebrand Factor in a New Subtype of von Willebrands Disease N Eng J Med 1980 302 1047 1051 ES helena Biosciences Europe Partners in Good Science Ristocetin Reagent Instructions for use REF 5372 R actif Ristoc tine Fiche technique Ristocetin Reagenz Anleitung Reagente a base di ristocetina Istruzioni per luso Reactivo ristocetina Instrucciones de uso Helena Biosciences Europe Queensway South Team Valley Trading Estate Gateshead Tyne and Wear NE11 0SD Tel 44 0 191 482 8440 Fax 44 0 191 482 8442 Email info helena biosciences com www helena biosciences com HL 2 0652P 2007 08 5
3. 1976 236 2770 2772 4 Green D and Potter E V Failure of AHF Concentrate to Control Bleeding in von Willebrands Disease Am J Med 1976 60 357 360 5 Mannucci P M et al Studies on the Prolonged Bleeding Time in von Willebrands Disease J Lab Clin Med 1976 88 662 671 6 Ruggeri Z M et al Heightened Interaction Between Platelets and Factor VIll von Willebrand Factor in a New Subtype of von Willebrands Disease N Eng J Med 1980 302 1047 1051 UTILISATION Le r actif Ristoc tine Helena est utilis dans la d termination quantitative d une activit qui refl te l activit du facteur von Willebrand dans le plasma ll sert mesurer la capacit d un plasma patient agglutiner des plaquettes fix es au formol en pr sence de ristoc tine Le taux d agglutination plaquettaire induit par la ristoc tine est proportionnel la concentration du facteur von Willebrand PR CAUTIONS Les r actifs du kit sont usage diagnostic in vitro uniquement NE PAS ING RER Porter des gants pour la manipulation de tous les composants Se reporter aux fiches de s curit des composants du kit pour la manipulation et l limination Un d pistage des produits base de plasma a t r alis et a donn un r sultat n gatif sauf indication contraire sur la bo te du kit ou sur le flacon pour les antig nes de l h patite B AgHBs les anticorps anti VIH 1 et 2 et les anticorps anti VHC
4. SARP en abscisse en fonction du taux d agr gation en ordonn e sur du papier logarithmique vous devez obtenir une ligne droite Interpoler le taux du patient partir du graphique pour obtenir le activit Corriger ces r sultats suivant la dilution et l activit dos e du plasma SARP CONTR LE QUALIT Chaque laboratoire doit tablir un programme de contr le qualit Les plasmas de contr le normaux et anormaux doivent tre test s avant chaque lot d chantillons patients afin de s assurer que l instrument et lop rateur offrent des performances satisfaisantes Si les contr les ne donnent pas les r sultats pr vus les r sultats du patient doivent tre consid r s comme non valables Helena BioSciences distribue les contr les suivants utiliser avec ce produit REF 5301 SAC 1 REF 5302 SAC 2 REF 5373 Kit de contr le anormal cofacteur de la ristoc tine LIMITES L activit du cofacteur de la ristoc tine ne refl te pas avec exactitude existence de la maladie de von Willebrand en cas de grossesse2 d injection de concentrats du facteur VII vendus dans le commerce3 4 ou d administration de DDAVP5 Dans ces cas vWF R Co peut tre corrig mais le temps de saignement reste allong En outre l activit vWF R Co peut tre normale dans le type II B de la maladie de von Willebrand m me si le temps de saignement est allong 6 VALEURS DE R F RENCE Chaque laboratoire doit d terminer ses propres valeurs n
5. als 5 Minuten bei 37 C lassen SCHRITT FUR SCHRITT METHODE Alle Reagenzien gem der dem Pack beiliegenden Gebrauchsanweisung vorbereiten Das Thrombozyten Aggregometer wie in der Bedienungsanleitung beschrieben vorbereiten 1 Erstellung der Standardkurve Mit Tris gepufferter Kochsalz L sung die folgenden Verd nnungen M langer sans agiter 2 Pr paration de l chantillon patient Pr parer des dilutions 1 1 et 1 3 du plasma patient ou du plasma de contr le avec de la solution saline tamponn e au Tris M langer sans agiter 3 Pr paration du blanc d agr gation Pipeter 0 25mI de suspension de plaquette et 0 25ml solution saline tamponn au Tris dans la cuvette de lagr gom tre avec une tige d agitateur Ceci sert d finir l activit 100 4 Analyse a D finir l activit 100 dans chaque canal en utilisant l chantillon de blanc d agr gation b Pipeter 400ul de suspension de plaquettes dans la cuvette de lagr gom tre pour chaque chantillon analyser Ajouter une tige d agitateur dans chaque cuvette c Placer la cuvette dans l agr gome tre et ajouter 50yl de ristoc tine dans la cuvette Incuber 37 C pendant exactement 3 minutes d Ajouter 50ul de dilution de plasma t moin patient ou contr le e Surveiller l agr gation plaquettaire pendant 5 minutes INTERPR TATION DES R SULTATS Tracer point par point une courbe repr sentant l activit de la dilution de
6. il est malgr tout n cessaire de les manipuler avec les m mes pr cautions que pour les chantillons de plasma humain er A R actif Ristoc tine 5 x 1 5ml Chaque flacon contient 15mg de ristoc tine lyophilis e additionn e de stabilisants Pr paration Reconstituer chaque flacon avec 1 5ml d eau distill e Remuer doucement et laisser reposer 10 minutes M langer doucement avant utilisation Ne pas agiter 2 Autres composants du kit Chaque kit contient une fiche technique EE ET CONSERVATION R actif Ristoc tine Les flacons non ouverts sont stables jusqu la date de p remption indiqu e s ils sont conserv s dans les conditions indiqu es sur l tiquette du kit ou du flacon Une fois reconstitu le r actif est stable 8 heures entre 2 6 C ou 30 jours 20 C MAT RIELS N CESSAIRES NON FOURNIS REF 5371 Plaquettes lyophilis es 5 x 5ml ou REF 5356 Plaquettes lyophilis es 5 x 10ml REF 5185 SARP 10 x 1ml REF 5365 Solution saline tamponn e au Tris 1x 125ml ou REF 5355 Solution saline tamponn e au Tris 10 x 35ml PR LEVEMENTS DES CHANTILLONS Utiliser tout au long du pr l vement du plastique ou du verre silicon M langer 9 volumes de sang et 1 volume de citrate de sodium 3 2 ou 3 8 S parer le plasma apr s centrifugation 2000 3000 x g pendant 15 minutes Conserver le plasma entre 2 GC L analyse doit tre termin e dans les 2 heures suivant le pr l vement de l chantillon sinon il est
7. possible de congeler le plasma 2 semaines 20 C ou un mois 70 C D congeler rapidement 37 C avant de r aliser l analyse Ne pas laisser 37 C plus de 5 minutes M THODOLOGIE Pr parer tous les r actifs suivant les instructions du kit R gler l agr gom tre plaquettaire conform ment au manuel d utilisation 1 Pr paration de la courbe d talonnage Pr parer les dilutions suivantes avec de la solution saline tamponn e au Tris ANWENDUNGSBEREICH Das Helena Ristocetin Reagenz wird bei der quantitativen Bestimmung einer Aktivit t die der Aktivit t des von Willebrand Faktors im Plasma entspricht verwendet Dabei misst es im Patientenplasma die F higkeit Formalin fixierte Thrombozyten in Anwesenheit von Ristocetin zu agglutinieren Der Anteil der Ristocetin induzierten Thrombozyten Agglutination steht dabei im Bezug zur Konzentration des Willebrand Faktors WARNHINWEISE UND VORSICHTSMASSNAHMEN Die Reagenzien dieses Kits sind nur zur in vitro Diagnostik bestimmt NICHT EINNEHMEN Beim Umgang mit den Kit Komponenten ist das Tragen von Handschuhen erforderlich Siehe die Sicherheitsdatenbl tter mit Gefahrenhinweisen und Sicherheitsvorschl gen sowie Informationen zur Entsorgung Die Plasmaprodukte sind mit negativem Befund auf Hepatitis B Antigen HBsAg HIV 1 und HIV 2 Antik rper und HCV Antik rper getestet worden wenn auf Kit Verpackung oder Fl schchen nicht anders angegeben Sie sollten trotzdem mi
8. questi casi il vWF R Co pu essere corretto ma il tempo delllemorragia rimane prolungato Inoltre i livelli di vWF R Co possono essere normali nella malattia di von Willebrand di tipo II B anche se il tempo dell emorragia prolungato6 VALORI DI RIFERIMENTO Ogni singolo laboratorio dovrebbe determinare i propri valori normali per lo strumento sistema reagente usato di routine I valori di riferimento possono variare da un laboratorio all altro in funzione delle tecniche e dei sistemi in uso Per tale motivo ciascun laboratorio dovr elaborare un proprio range normale I valori previsti per l attivit del cofattore ristocetina negli adulti sono 58 166 0 58 1 66 unit ml CARATTERISTICHE PRESTAZIONALI Le caratteristiche prestazionali sotto riportate sono state determinate da Helena BioSciences o dai propri rappresentanti a titolo di linee guida Ciascun laboratorio dovr pertanto elaborare i propri dati prestazionali Il dosaggio del cofattore ristocetina Helena BioSciences concepito per ottenere una curva di calibrazione lineare dal 10 al 60 senza pre diluizione CV entro la serie si prevedono lt 10 BIBLIOGRAFIA 1 Zimmerman T S and Ruggeri Z M von Willebrands Disease Progress in Thrombosis and Haemostasis Spaett Ed 1982 6 203 236 2 Ratnoff O D and Bennett B Clues to Pathogenesis of Bleeding in von Willebrands Disease N Eng J Med 1973 289 1182 1183 3 Blatt P M et al Antihe
9. von Willebrand de tipo Il incluso aunque el tiempo de sangrado est prolongado6 VALORES DE REFERENCIA Cada laboratorio deber establecer sus propios valores normales esperados para el sistema instrumento reactivo en uso habitual Los valores de referencia pueden variar entre los laboratorios dependiendo de las t cnicas y sistemas usados Por esta raz n cada laboratorio debe establecer su propio intervalo normal Los valores esperados de actividad del cofactor de ristocetina para adultos son 58 166 0 58 1 66 unidades m CARACTER STICAS FUNCIONALES Las siguientes caracter sticas de rendimiento han sido determinadas por Helena BioSciences o sus representantes como gu a Cada laboratorio debe establecer sus propios datos de rendimiento La valoraci n del cofactor de ristocetina Helena BioSciences est dise ada para dar una curva de calibraci n lineal del 10 60 sin prediluci n Se espera que los CV dentro de cada prueba sean lt 10 BIBLIOGRAF A 1 Zimmerman T S and Ruggeri Z M von Willebrands Disease Progress in Thrombosis and Haemostasis Spaett Ed 1982 6 203 236 2 Ratnoff O D and Bennett B Clues to Pathogenesis of Bleeding in von Willebrands Disease N Eng J Med 1973 289 1182 1183 3 Blatt P M et al Antihemophilic factor Concentrate Therapy in von Willebrands Disease J Am Med Assn 1976 236 2770 2772 4 Green D and Potter E V Failure of AHF Concentrate to Control
10. INTENDED PURPOSE Helena Ristocetin Reagent is intended for use in the quantitative determination of an activity that reflects von Willebrand factor activity in plasma lt is used to measure the ability of a patients plasma to agglutinate formalin fixed platelets in the presence of ristocetin The rate of ristocetin induced platelet agglutination is related to the concentration of von Willebrand factor WARNINGS AND PRECAUTIONS The reagents contained in this kit are for in vitro diagnostic use only DO NOT INGEST Wear gloves when handling all kit components Refer to the product safety data sheets for risk and safety phrases and disposal information Plasma products have been screened and found negative unless otherwise stated on the kit box or vial for the presence of Hepatitis B Antigen HbsAg HIV 1 and 2 antibody and HCV antibody however they should be handled with the same precautions as a human plasma sample FOMPOSITON Ristocetin Reagent 5 x 1 5ml Each vial contains 15mg of Ristocetin lyophilised with stabilisers Preparation Reconstitute each vial with 1 5ml of purified water Swirl gently and allow to stand for 10 minutes Mix gently before use Do not shake 2 Other kit components Each kit contains Instructions For Use STORAGE AND SHELF LIFE Ristocetin Reagent Unopened vials are stable until the given expiry date when stored under conditions indicated on the vial or kit label Once reconstituted the reagent is sta
11. IONE Reagente a base di ristocetina 5 x 1 5ml Ogni fiala contiene 15mg di ristocetina liofilizzata con stabilizzatori Preparazione Ricostituire ogni fiala con 1 5ml di acqua distillata Agitare delicatamente e lasciare riposare per 10 minuti Miscelare delicatamente prima dell uso Non scuotere 2 Altri componenti del kit Ogni kit contiene un foglio procedurale FONSERVAZIONE E STABILIT Reagente a base di ristocetina flaconi non aperti sono stabili fino alla data di scadenza indicata se conservati nelle condizioni riportate sul flacone o sull etichetta del kit Dopo la ricostituzione il reagente stabile per 8 ore a 2 6 C o per 30 giorni a 20 C MATERIALI NECESSARI MA NON IN DOTAZIONE REF 5371 Piastrine liofilizzate 5 x 5ml o REF 5356 Piastrine liofilizzate 5 x 10ml REF 5185 SARP 10x1ml REF 5365 Salina tamponata con Tris 1 x 125ml o REF 5355 Salina tamponata con Tris 10 x 35ml RACCOLTA E PREPARAZIONE DEI CAMPIONI Nel corso dell intera procedura necessario utilizzare plastica o vetro siliconizzato I sangue 9 parti deve essere raccolto in sodio citrato al 3 2 o al 3 8 come anticoagulante 1 parte Separare il plasma in seguito a centrifugazione a 2000 3000 x g per 15 minuti ll plasma deve essere conservato a 2 6 C test devono essere completati entro 2 ore dalla raccolta dei campioni in alternativa il plasma pu essere conservato congelato a 20 C per 2 settimane o a 70 C per un mese Decongelar
12. ands Disease J Lab Clin Med 1976 88 662 671 6 Ruggeri Z M et al Heightened Interaction Between Platelets and Factor VIll von Willebrand Factor in a New Subtype of von Willebrands Disease N Eng J Med 1980 302 1047 1051 herstellen Tube Dilution SARP ml Tampon ml Activit 1 1 2 0 1 0 1 50 R hrchen Verd nnung SARP mi Puffer ml Aktivit t 2 1 4 0 1 0 3 25 1 T2 0 1 0 1 50 3 1 8 0 1 0 7 12 5 2 1 4 0 1 0 3 25 3 1 8 0 1 0 7 12 5 Ohne zu sch tteln mischen 2 Vorbereitung der Patientenprobe In Tris gepufferter Kochsalz L sung von jedem Patientenplasma oder Kontrollplasma 1 1 und 1 3 Verd nnungen herstellen Ohne zu sch tteln mischen 3 Herstellen des Aggregations Leerwerts 0 25mI Thrombozyten Suspension und 0 25ml Tris gepufferte Kochsalz L sung in ein Aggregometer K vette pipettieren und ein R hrst bchen beif gen Dieser Leerwert wird zum Einstellen der 100 Aktivit tsstufe ben tigt 4 Testdurchfihrung a Mit Hilfe des Aggregations Leerwerts die 100 Aktivit t in jedem Kanal einstellen b F r jede zu testende Probe 400ul Thrombozyten Suspension in eine Aggregometer K vette pipettieren In jede K vette ein R hrst bchen geben c K vette in das Aggregometer stellen und 50pl Ristocetin hinzuf gen Bei 37 C genau 3 Minuten inkubieren d 50ul Standard Patienten oder Kontrollplasma Verd nnung hinzuf gen e Thrombozyten Aggregation 5 Minuten lang berwac
13. ble for 8 hours at 2 6 C or 30 days at 20 C ITEMS REQUIRED BUT NOT PROVIDED REF 5371 Lyophilised Platelets 5x 5ml or REF 5356 Lyophilised Platelets 5x 10ml REF 5185 SARP 10x 1ml REF 5365 Tris Buffered Saline 1 x 125ml or REF 5355 Tris Buffered Saline 10 x 35ml SAMPLE COLLECTION AND PREPARATION Plastic or siliconised glass should be used throughout Blood 9 parts should be collected into 3 2 or 3 8 sodium citrate anticoagulant 1 part Separate plasma after cetrifugation at 2000 3000 x g for 15 minutes Plasma should be kept at 2 6 C Testing should be completed within 2 hours of sample collection or plasma can be stored frozen at 20 C for 2 weeks or 70 C for one month Thaw quickly at 37 C prior to testing Do not keep at 37 C for more than 5 minutes STEP BY STEP PROCEDURE Prepare all reagents as instructed with each pack Set up platelet aggregometer as indicated in the instruction manual 1 Standard Curve Preparation Prepare the following dilutions in Tris buffered saline Tube Dilution SARP ml Buffer ml Activity 1 1 2 0 1 0 1 50 2 1 4 0 1 0 3 25 3 1 8 0 1 0 7 12 5 Mix without shaking 2 Patient Sample Preparation Prepare 1 1 and 1 3 dilutions of the patient plasma or control plasma in Tris buffered saline Mix without shaking 3 Aggregation Blank Preparation Pipette 0 25ml of platelet suspension and 0 25ml of Tris buffered saline into an aggregometer cuvette with a s
14. cial factor VIII concentrates 3 4 or administration of DDAVP 5 In such instances vWF R Co may be corrected yet the bleeding time remains prolonged In addition vWF R Co levels may be normal in Type ll B von Willebrands disease even though the bleeding time is prolonged 6 REFERENCE VALUES Each laboratory should determine its own normal values for the instrument reagent system in routine use Reference values can vary between laboratories depending on the techniques and systems in use For this reason each laboratory should establish it s own normal range Expected values for Ristocetin Cofactor Activity in adults are 58 166 0 58 1 66 units ml PERFORMANCE CHARACTERISTICS The following performance characteristics have been determined by Helena BioSciences or their representatives as a guideline Each laboratory should establish it s own performance data The Helena BioSciences Ristocetin Cofactor assay is designed to give a linear calibration curve from 10 60 without pre dilution Within run CV s are expected to be lt 10 BIBLIOGRAPHY 1 Zimmerman T S and Ruggeri Z M von Willebrands Disease Progress in Thrombosis and Haemostasis Spaett Ed 1982 6 203 236 2 Ratnoff O D and Bennett B Clues to Pathogenesis of Bleeding in von Willebrands Disease N Eng J Med 1973 289 1182 1183 3 Blatt P M et al Antihemophilic factor Concentrate Therapy in von Willebrands Disease J Am Med Assn
15. e rapidamente a 37 C prima di eseguire i test Non conservare a 37 C per oltre 5 minuti PROCEDURA Preparare tutti i reagenti come da istruzioni per ogni singola confezione Installare laggregometro per piastrine come indicato nel manuale d istruzioni 1 Preparazione della curva standard Preparare le diluizioni indicate di seguito in salina tamponata con Tris USO PREVISTO El reactivo ristocetina Helena est dise ado para la determinaci n cuantitativa de una actividad que refleja la actividad del factor de von Willebrand en el plasma Se usa para medir la capacidad del plasma de un paciente para aglutinar plaquetas fijadas en formol en presencia de ristocetina La velocidad de la aglutinaci n plaquetaria inducida por la ristocetina tiene relaci n con la concentraci n de factor de von Willebrand ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES Los reactivos contenidos en este kit son s lo para uso diagn stico NO SE DEBEN INGERIR Usar guantes para manejar todos los componentes del kit Consultar la hoja con los datos de seguridad del producto acerca de los riesgos de los componentes avisos de seguridad y consejos para su eliminaci n Los productos plasm ticos se han sometido a pruebas y han resultado negativos a menos que se indique otra cosa en la caja del kit o en el vial para la presencia de ant geno de la hepatitis B HbsAg anticuerpos de VIH 1 y 2 y anticuerpo del VHC sin embargo deben manipularse con las mismas precaucion
16. ere 50ul di ristocetina alla cuvetta Incubare a 37 C per 3 minuti esatti d Aggiungere 50ul di diluizione standard di plasma del controllo o del paziente e Monitorare l aggregazione piastrinica per 5 minuti INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI Rappresentare l attivit di diluizione SARP asse X rispetto alla discesa d aggregazione asse Y su carta millimetrata log log Tracciare una retta di regressione Interpolare i valori di discesa del paziente dal grafico per indicare l attivit Correggere i risultati ottenuti per la diluizione e l attivit dosata del plasma SARP CONTROLLO DI QUALIT Ogni laboratorio deve definire un programma di controllo qualit plasmi di controllo normali e anormali devono essere testati prima di ogni lotto di campioni di pazienti per garantire un livello prestazionale soddisfacente sia per quanto riguarda lo strumento che per l operatore Qualora i controlli non funzionassero come previsto i risultati relativi ai pazienti dovranno essere considerati come non validi Helena BioSciences mette a disposizione i seguenti controlli utilizzabili con questo prodotto REF 5301 SAC 1 REF 5302 SAC 2 REF 5373 Kit di controllo anormale cofattore ristocetina LIMITI L attivit del cofattore ristocetina non in grado di rispecchiare con precisione la malattia di von Willebrand in parecchie situazioni quali gravidanza2 infusione di concentrati commerciali del fattore VIII3 4 o somministrazione di DDAVP5 In
17. es que una muestra de plasma humano COMPOSICION Reactivo ristocetina 5 x 1 5ml Cada vial contiene 15mg de ristocetina liofilizada con estabilizadores Preparaci n Reconstituir cada vial con 1 5ml de agua destilada Agitar suavemente y dejar reposar durante 10 minutos Mezclar suavemente antes de su uso No agitar 2 Otros componentes del kit Cada kit contiene instrucciones de uso eg erh SA Y PER ODO DE VALIDEZ Reactivo ristocetina Los viales no abiertos son estables hasta la fecha de caducidad indicada cuando se conservan en las condiciones indicadas en el vial o en la etiqueta del kit Una vez reconstituido el reactivo es estable durante 8 horas a 2 6 C o 30 d as a 20 C ART CULOS NECESARIOS NO SUMINISTRADOS REF 5371 Plaquetas liofilizadas 5 x 5ml o REF 5356 Plaquetas liofilizadas 5 x 10ml REF 5185 SARP 10x 1 ml REF 5365 Soluci n salina tamponada con Tris 1 x 125ml o REF 5355 Soluci n salina tamponada con Tris 10 x 35ml RECOGIDA Y PREPARACI N DE MUESTRAS Debe usarse siempre pl stico o vidrio siliconizado Debe recogerse sangre 9 partes en el anticoagulante citrato s dico al 3 2 o al 3 8 1 parte Se separa el plasma despu s de la centrifugaci n a 2000 3000 xg durante 15 minutos El plasma debe conservase a 2 6 C Las pruebas deber an terminarse en 2 horas desde la recogida de las muestras o el plasma puede conservarse congelado a 20 C durante 2 semanas o 70 C durante un mes Descongelar r pidamen
18. hen AUSWERTUNG DER ERGEBNISSE Die Aktivit t der SARP Verd nnung x Achse gegen die Steigung der Aggregations Kurve y Achse auf doppeltlogarithmischem Millimeterpapier auftragen Durch diese Punkte eine Ausgleichsgerade ziehen Aus dieser Kurve die Steigungswerte des Patienten interpolieren um die Aktivit t in Prozent zu erhalten Diese Ergebnisse in Bezug auf Verd nnung und getesteter Aktivit t des SARP Plasmas korrigieren QUALITATSKONTROLLE Jedes Labor muss f r eine eigene Qualit tskontrolle sorgen Vor jeder Testreihe mit Patientenproben m ssen normale und pathologische Kontrollplasmen getestet werden um eine zufrieden stellende Ger teleistung und Bedienung zu gew hrleisten Liegen die Kontrollen au erhalb des Normbereichs sind die Patientenergebnisse nicht zu verwenden In Verbindung mit diesem Produkt bietet Helena BioSciences die folgenden Kontrollen an REF 5301 SAC 1 REF 5302 SAC 2 REF 5373 Ristocetin Ko Faktor Abnormales Kontroll Kit EINSCHRANKUNGEN Unter einigen Bedingungen wie Schwangerschaft2 Infusion von kommerziellen Faktor VIII Konzentraten3 4 oder Gabe von DDAVP5 kann die Ristocetin Ko Faktor Aktivit t eine von Willebrand Erkrankung nicht genau widerspiegeln In solchen F llen kann der vWF R Co korrigiert werden doch bleiben die Blutungszeiten weiterhin verl ngert Dar ber hinaus k nnen beim Typ Il B der von Willebrand Erkrankung die vWF R Co Werte auch bei verl ngerter Blutungszeit normal sein6
19. iluci n del plasma est ndar del paciente o control e Vigilar la agregaci n plaquetaria durante 5 minutos INTERPRETACI N DE RESULTADOS Representar la actividad de diluci n SARP eje X frente a la pendiente de agregaci n eje Y en un papel de gr ficos log log Dibujar una l nea recta de mejor ajuste Interpolar los valores de pendiente del paciente del gr fico para dar una actividad en Corregir estos resultados en cuanto a diluci n y actividad valorada del plasma SARP CONTROL DE CALIDAD Cada laboratorio debe establecer un programa de control de calidad Los plasmas de control normales y anormales deben estudiarse antes de cada lote de muestras del paciente para asegurar un funcionamiento adecuado del instrumento y el operador Si los controles no se realizan como se esperaba los resultados del paciente deben considerarse inv lidos Helena BioSciences suministra los siguientes controles disponibles para usar con este producto REF 5301 SAC 1 REF 5302 SAC 2 REF 5373 Kit de control anormal en cofactor de ristocetina LIMITACIONES La actividad del cofactor de la ristocetina no refleja con exactitud la enfermedad de von Willebrand en varias situaciones como el embarazo2 la infusi n de concentrados comerciales de factor VII13 4 o la administraci n de DDAVP5 En tales casos podr a corregirse el vWF R Co pero el tiempo de sangrado sigue prolongado Adem s los niveles de vWF R Co pueden ser normales en la enfermedad de
20. mophilic factor Concentrate Therapy in von Willebrands Disease J Am Med Assn 1976 236 2770 2772 4 Green D and Potter E V Failure of AHF Concentrate to Control Bleeding in von Willebrands Disease Am J Med 1976 60 357 360 5 Mannucci P M et al Studies on the Prolonged Bleeding Time in von Willebrands Disease J Lab Clin Med 1976 88 662 671 6 Ruggeri Z M et al Heightened Interaction Between Platelets and Factor VIll von Willebrand Factor in a New Subtype of von Willebrands Disease N Eng J Med 1980 302 1047 1051 Mezclar sin agitar 2 Preparaci n de la muestra del paciente Preparar diluciones 1 1 y 1 3 del plasma del paciente o el plasma control en soluci n salina tamponada con Tris Mezclar sin agitar 3 Preparaci n del blanco de agregaci n Pipetear 0 25ml de suspensi n de plaquetas y 0 25ml de soluci n salina tamponada con Tris en una cubeta de agreg metro con una barra de agitaci n Esto se usa para establecer el nivel de actividad del 100 4 Realizaci n de las pruebas a Establecer la actividad 100 en cada canal usando la muestra blanco de agregaci n b Pipetear 400ul de la suspensi n de plaquetas en una cubeta de agreg metro para cada muestra a estudiar A adir una barra de agitaci n a cada cubeta c Colocar la cubeta en el agreg metro y a adir 50ul de ristocetina a la cubeta Incubar a 37 C durante 3 minutos exactos d A adir 50ul de d
21. ormales pour le syst me instrument r actif utilis Les valeurs de r f rence peuvent varier d un laboratoire l autre suivant les techniques et les syst mes utilis s C est pour cette raison qu il appartient chaque laboratoire de d terminer sa propre plage normale Les valeurs pr vues pour lactivit du cofacteur de la ristoc tine sont de 58 166 chez un adulte 0 58 1 66 unit ml PERFORMANCES Helena BioSciences ou ses repr sentants ont d termin titre indicatif les caract ristiques de performance suivantes Chaque laboratoire doit tablir ses propres donn es de performance Le dosage du cofacteur de la ristoc tine Helena BioSciences doit donner une courbe d talonnage lin aire sur plage 10 60 sans pr dilution Les CV intra analyse sont pr vus lt 10 BIBLIOGRAPHIE 1 Zimmerman T S et Ruggeri Z M von Willebrands Disease Progress in Thrombosis and Haemostasis Spaett d 1982 6 203 236 2 Ratnoff O D et Bennett B Clues to Pathogenesis of Bleeding in von Willebrands Disease N Eng J Med 1973 289 1182 1183 3 Blatt P M et al Antihemophilic factor Concentrate Therapy in von Willebrands Disease J Am Med Assn 1976 236 2770 2772 4 Green D et Potter E V Failure of AHF Concentrate to Control Bleeding in von Willebrands Disease Am J Med 1976 60 357 360 5 Mannucci P M et al Studies on the Prolonged Bleeding Time in von Willebr
22. sease J Lab Clin Med 1976 88 662 671 Ruggeri Z M et al Heightened Interaction Between Platelets and Factor VIll von Willebrand Factor in a New Subtype of von Willebrands Disease N Eng J Med 1980 302 1047 1051 DP E 0 O PRINCIPIO ll reagente a base di ristocetina Helena concepito per Putilizzo nella determinazione quantitativa di un attivit che rispecchia l attivit del fattore von Willebrand nel plasma L uso previsto consiste nel misurare la capacit del plasma di un paziente nell agglutinare le piastrine fissate con formalina in presenza di ristocetina La percentuale d agglutinazione delle piastrine indotta da ristocetina correlata alla concentrazione del fattore von Willebrand AVVERTENZE E PRECAUZIONI reagenti contenuti in questo kit sono destinati esclusivamente alla diagnostica in vitro NON INGERIRE Indossare guanti protettivi durante luso dei componenti del kit Fare riferimento alle schede tecniche e dati di sicurezza per le avvertenze sui componenti dei Kit e per le informazione sullo smaltimento prodotti plasmatici sono stati esaminati dando esito negativo salvo diversamente indicato sulla confezione del kit o sul flacone relativamente alla presenza dell antigene dell epatite B HbsAg dell anticorpo anti HIV 1 e 2 e dell anticorpo anti HCV questi prodotti devono tuttavia essere manipolati con le stesse misure precauzionali adottate per un campione di plasma umano COMPOSIZ
23. t derselben Vorsicht wie humane Plasmaproben behandelt werden MAART Ristocetin Reagenz 5 x 1 5ml Jedes Fl schchen enth lt 15mg mit Stabilisatoren lyophilisiertes Ristocetin Vorbereitung Jedes Fl schchen mit 1 5ml destilliertem Wasser rekonstituieren Leicht schwenken und 10 Minuten stehen lassen Vor Gebrauch leicht mischen Nicht sch tteln 2 Weitere Kit Komponenten Jedes Kit enth lt eine Gebrauchsanweisung LAGERUNG UND STABILIT T Ristocetin Reagenz Unge ffnete Fl schchen sind unter den auf Verpackung oder Fl schchen angegebenen Lagerbedingungen bis zum aufgedruckten Verfallsdatum stabil Rekonstituiert ist das Reagenz bei einer Temperatur von 2 6 C 8 Stunden oder bei 20 C 30 Tage stabil NICHT MITGELIEFERTES ABER BENOTIGTES MATERIAL REF 5371 Lyophilisierte Thrombozyten 5 x 5ml oder REF 5356 Lyophilisierte Thrombozyten 5x 10ml REF 5185 SARP 10x1ml REF 5365 Tris gepufferte Kochsalz L sung 1 x 125ml oder REF 5355 Tris gepufferte Kochsalz L sung 10 x 35ml PROBENENTNAHME UND VORBEREITUNG Nur Plastik oder Silikonglas verwenden Blut 9 Teile sollte in 3 2 oder 3 8 Natriumcitrat als Antikoagulanz 1 Teil entnommen werden 15 Minuten bei 2000 3000 g zentrifugieren und Plasma abpipettieren Plasma bei 2 6 C lagern Plasma sollte innerhalb von 2 Stunden verarbeitet oder tief gefroren bei 20 C f r 2 Wochen oder 70 C f r einen Monat gelagert werden Vor dem Testen schnell bei 37 C auftauen Nicht l nger
24. te a 37 C antes de realizar la prueba No conservar a 37 C durante m s de 5 minutos PROCEDIMIENTO PASO A PASO Preparar todos los reactivos siguiendo las instrucciones de cada paquete Configurar el agreg metro de plaquetas como se indica en el manual de instrucciones 1 Preparaci n de la curva est ndar Preparar las siguientes diluciones en soluci n salina tamponada con Tris Tubo Diluci n SARP mil Tampon ml Actividad Provetta Diluizione SARP ml Tampone ml Attivit 1 1 2 0 1 0 1 50 1 1 2 0 1 0 1 50 2 1 4 0 1 0 3 25 2 1 4 0 1 0 3 25 3 1 8 0 1 0 7 12 5 3 1 8 0 1 0 7 12 5 Miscelare senza scuotere 2 Preparazione del campione del paziente Preparare diluizioni 1 1 e 1 3 del plasma del paziente o del plasma di controllo in una salina tamponata con Tris Miscelare senza scuotere 3 Preparazione in bianco dell aggregazione Pipettare 0 25ml di sospensione piastrinica e 0 25ml di salina tamponata con Tris nella cuvetta di un aggregometro con una sbarretta d agitazione Ci serve per impostare il livello d attivit al 100 4 Esecuzione dei test a Impostare il 100 di attivit in ciascun canale utilizzando il campione in bianco dell aggregazione b Pipettare 400ul di sospensione piastrinica in una cuvetta delllaggregometro per ogni campione da testare Aggiungere una sbarretta d agitazione a ciascuna cuvetta c Collocare la cuvetta nelllaggregometro ed aggiung
25. tir bar This is used to set the 100 activity level 4 Testing a Set the 100 activity in each channel using the Aggregation Blank sample b Pipette 400pl of platelet suspension into an aggregometer cuvette for each sample to be tested Add a stir bar to each cuvette c Place the cuvette into the aggregometer and add 50pl of Ristocetin to the cuvette Incubate at 37 C for exactly 3 minutes Add 50ul of standard patient or control plasma dilution Monitor platelet aggregation for 5 minutes e INTERPRETATION OF RESULTS Plot SARP dilution activity X axis versus Aggregation Slope Y axis on log log graph paper Draw a straight line of best fit Interpolate patient slope values from the graph to give activity Correct these results for dilution and assayed activity of the SARP plasma QUALITY CONTROL Each laboratory should establish a quality control program Normal and abnormal control plasmas should be tested prior to each batch of patient samples to ensure satisfactory instrument and operator performance If controls do not perform as expected patient results should be considered invalid Helena BioSciences supply the following controls available for use with this product REF 5301 SAC 1 REF 5302 SAC 2 REF 5373 Ristocetin CoFactor Abnormal Control Kit LIMITATIONS The Ristocetin Cofactor Activity fails to reflect accurately von Willebrands disease in several situations such as pregnancy 2 infusion of commer
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