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300-5052 Rev G Xpert EV CE-IVD PI MultiLang.book

1. Organism No organisms test HHV 6 3 1x 10 particles HHV 7 1 4 x 107 particles CMV 700 TCID EBV 140 TCID HSV 1 1 4 x 10 TCID HSV 2 1 4 x 10 TCID AdV 2 1 4 x 10 TCID Measles 700 TCID Mumps 1 4 x 104 TCID Parainfluenza 1 4 X 103 TCID o Parainfluenza 2 7 X 103 TCID Parainfluenza 3 1 4 x 104 TCID Influenza A 3 5 x 104 TCID Influenza B 3 5 x 104 TCID VZV 14 TCID Group B Streptococcus 7 x10 cells H influenzae B 7X 10 cells H influenzae non B 7 x 10 cells E coli 7x 10 cells N meningitides 7 x 10 cells C freundii 7 x 108 cells C koseri 7X 10 cells 300 5052 Rev G October 2009 15 English Analytical Sensitivity The analytical sensitivity or limit of detection LOD is defined as the lowest concentration or amount of an analyte that has been demonstrated by laboratory analysis to be reproducibly distinguished from a negative sample at a 95 confidence level The dilutions were made in pooled EV negative human sample For statistical confidence determination of the LOD replicates of 20 along with 20 EV negative samples were run The samples run were Coxsackievirus A6 CVA6 Coxsackievirus A9 CVA9 Coxsackievirus A17 CVA17 Enterovirus 70 EV70 and Poliovirus 1 PV1 Not all 63 serotypes were run in statistically significant numbers since the primer and probe binding sites are conserved across all serotypes and the amplicon length is the same for all se
2. Figura 2 Risultato positivo finestra GeneXpert Dx System View Results Visualizza risultati I SPC IC visualizzato come CIC 90 300 5052 Rev G October 2009 Interpretazione dei risultati NEGATIVE NEGATIVO Figura 3 L acido nucleico bersaglio dell EV non viene rilevato ma l SPC soddisfa i criteri di accettazione finestra GeneXpert Dx System View Results Visualizza risultati l SPC IC visualizzato come CIC H Assay Name Xpert EV Version 2 EV NEG CIC SPC IC PASS Probe Check PASS I risultati negativi di Xpert EV non escludono altre cause di meningite ma che l enterovirus non stato rilevato Test Result NEGATIVE Analyte Result i Analyte ct EndPt Name CIC vi 4 CIC Primary Figura 3 Risultato negativo finestra GeneXpert Dx System View Results Visualizza risultati l SPC C visualizzato come CIC 300 5052 Rev G October 2009 91 Italiano INVALID NON VALIDO Figura 4 La presenza o assenza dell acido nucleico bersaglio dell EV non pu essere determinata ripetere l analisi con campioni supplementari L SPC IC non soddisfa i criteri di accettazione il campione non stato elaborato correttamente o la PCR inibita finestra GeneXpert Dx System View Results Visualizza risultati l SPC IC visualizzato come CIC EV INVALID e CIC SPC IC FAIL Probe Check PASS
3. North America For technical support use the following contact details Tel 1 888 838 3222 Email techsupport cepheid com You can reach Cepheid Technical Support by telephone Monday through Friday from 6 A M to 5 P M Pacific Time European Union For technical support use the following contact details Tel 33 563 82 53 19 Email techsupport cepheideurope fr Other Locations Contact your local Cepheid representative 300 5052 Rev G October 2009 Table of Symbols Meaning Y lt 3 o o Catalog number In vitro diagnostic medical device Do not reuse Caution consult accompanying document Manufacturer Contains sufficient for lt n gt tests Expiration date CONTROL Control Authorized representative in the European Community Temperature limitation N o oO Biological hazard Sp wi Manufacturer Cepheid 904 Caribbean Drive Sunnyvale CA 94089 1189 USA Phone 1 408 541 4191 Fax 1 408 541 4192 EC REP Authorized Representative Cepheid Europe Vira Solelh 81470 Maurens Scopont France Tel 33 563 82 53 00 Fax 33 563 82 53 01 Email cepheid cepheideurope fr C 1vD 300 5052 Rev G October 2009 Table of Symbols English 20 300 5052 Rev G October 2009 Frangais Dispositif m dical pour diagnostic in vitro Nom d pos Xpert EV Nom d usage Test EV Xpert Utilisation pr vue Le test EV Xpert de Cepheid est une trans
4. 12 13 97 2 69 71 100 0 14 14 98 1 51 52 de 2 mois 17 ans Adultes 0 0 100 0 10 10 100 0 5 5 100 0 27 27 18 ans et plus Total 96 3 26 27 97 2 103 106 100 0 23 23 97 0 96 99 Des cultures virales ont t r alis es sur 73 7 320 434 des chantillons admissibles les chantillons restants disposaient de trop peu de LCR pour la culture Les chantillons de 263 sujets dont le volume de LCR tait en exc s suffisant ont t envoy s un laboratoire central d sign pour la culture virale En outre des cultures virales de 114 chantillons de patient ont t r alis es sur les sites de s lection Sur ces 114 sujets 57 ont permis de r aliser des cultures virales sur les sites de s lection et dans le laboratoire central Sur 57 sujets 56 pr sentaient des r sultats de culture concordants et un sujet pr sentait des r sultats de culture locale et centrale divergents Le laboratoire central utilisait des flacons chantillons cylindriques Super E Mix pour la culture virale et les cellules taient color es par des anticorps d ent rovirus Les cellules qui taient positives l anticorps des ent rovirus se coloraient davantage avec un anticorps d immuno fluorescence indirecte pour l identification d ent rovirus Chaque site de s lection utilisait sa propre proc dure standard pour la culture virale 32 300 5052 Rev G October 2009 Caracteristiques des performances Table
5. CVAg 80 0 EV70 1 3 PVI 4 0 CVA17 1 0 CVA6 33 0 Riproducibilit La riproducibilit stata valutata in uno studio multicentrico condotto in cieco con l utilizzo di un pannello di precisione costituito da quattro campioni Tre laboratori hanno analizzato ciascun pannello tre volte al giorno per 10 giorni di test per un totale di 90 risultati per campione del pannello Il pannello di precisione comprendeva un campione negativo e tre campioni positivi ciascuno con un sierotipo EV specifico aggiunto a LCS sintetico a una concentrazione vicina al limite di rilevamento Tabella 8 Riepilogo dei risultati di riproducibilit La percentuale di concordanza i valori Ct medi per ogni concentrazione le deviazioni standard associate la percentuale del coefficiente di variazione per tra giorno e tra laboratorio per lo studio multicentrico di riproducibilit sono illustrati nella tabella riportata sotto Nr di campioni correttamente classificati Tra giorno Tra laboratorio Totale Ct EV Sierotipo TCID mL Laboratorio Laboratorio 2 Laboratorio 3 medio DS CV DS CV DS CV Negativo 30 30 30 30 30 30 CVA6 134 30 30 30 30 29 29 35 0 0 343 098 0 175 0 50 1101 3 15 CVAg 320 30 30 30 30 30 30 34 4 o 0 00 o 0 00 0 61 1 77 CVA17 3 30 30 30 30 29 29 33 8 o 0 00 o 0 00 0 414 1 22 Concordanza totale 120 120 120 120 118 18 concordanza 100 00 100 00 100 00 Due campioni non hanno restituito alcun risu
6. Fabricante Contiene suficiente cantidad para lt n gt pruebas Fecha de caducidad CONTROL Control Representante autorizado en la Uni n Europea le le LE Y L mite de temperatura e Riesgo biol gico Sp wa Fabricante Cepheid 904 Caribbean Drive Sunnyvale CA 94089 1189 EE UU Tel fono 1 408 541 4191 Fax 1 408 541 4192 EC REP Representante autorizado Cepheid Europe Vira Solelh 81470 Maurens Scopont Francia Tel 33 563 82 53 00 Fax 33 563 82 53 01 Correo electr nico cepheid cepheideurope fr C ID 84 300 5052 Rev G October 2009 Italiano Dispositivo medico per diagnostica in vitro Nome registrato Xpert EV Nome comune o usuale Saggio Xpert EV Uso previsto Il saggio Cepheid Xpert EV una PCR con retrotrascrizione RT PCR che utilizza GeneXpert Dx System per il rilevamento qualitativo presuntivo dell RNA di enterovirus EV nei campioni di liquido cerebrospinale LCS di individui con segni e sintomi della meningite Questa analisi contestualmente agli altri risultati di laboratorio e informazioni cliniche pu essere utilizzata come strumento nella diagnosi di laboratorio dell infezione da enterovirus in pazienti con sospetto clinico di meningite o meningoencefalite Le caratteristiche sulle prestazioni del saggio non sono state stabilite per i pazienti immunodepressi o immunosoppressi ATTENZIONE I risultati ottenuti con il saggio Xpert EV de
7. Inicio de la prueba Importante Antes de iniciar la prueba aseg rese de que ha importado la definici n del ensayo Xpert EV al software consulte las instrucciones suministradas con el CD de ensayos Sino tiene el CD del ensayo Xpert EV p ngase en contacto con el servicio t cnico de Cepheid En esta secci n se incluyen los pasos b sicos para realizar la prueba Si desea obtener instrucciones detalladas consulte el Manual del operador del sistema GeneXpert Dx 1 Encienda el equipo y a continuaci n el instrumento GeneXpert Dx 2 En el escritorio de Windows haga doble clic en el icono de acceso directo a GeneXpert Dx 3 Inicie una sesi n en el software del sistema GeneXpert Dx con su nombre de usuario y contrase a 4 En la ventana del sistema GeneXpert Dx haga clic en Create Test Crear prueba Aparece el cuadro de di logo Scan Cartridge Barcode Escanear c digo de barras de cartucho 5 Escanee el c digo de barras del cartucho Xpert EV Aparece la ventana Create Test Crear prueba Utilizando la informaci n del c digo de barras el software rellenar autom ticamente los siguientes cuadros Select Assay Seleccionar ensayo Reagent Lot ID Id de lote de reactivos Cartridge S N N de serie del cartucho y Expiration Date Fecha de caducidad 6 En el cuadro Sample ID Id de muestra escanee o escriba el Id de muestra Aseg rese de escribir el Id de muestra correcto El Id de muestra est aso
8. Sterile 200 uL pipette tips Warnings and Precautions For In Vitro Diagnostic Use Only Lysis Reagent contains guanidine thiocyanate which can form highly reactive compounds when combined with bleach If liquid containing this reagent is spilled clean the area with laboratory detergent and water Treat all biological specimens including cartridges as if they are capable of transmitting infectious agents Because it is often impossible to know which might be infectious all human specimens should be treated with universal precautions Guidelines for specimen handling are available from the U S Centers for Disease Control and Prevention and the Clinical and Laboratory Standards Institute formerly National Committee for Clinical Laboratory Standards 6 Dispose of all hazardous or biologically contaminated materials according to the practices of your institution Discard all materials in a safe and acceptable manner and in compliance with all federal state and local requirements Specimen Collection and Transport Collect CSF in a sterile container and transport to the laboratory according to standard operating procedure at your institution Keep specimens at 2 8 C until testing or freeze specimens if test will not be performed within 72 hours of collection Do not freeze and thaw the specimens more than two times Centrifugation of the specimen is not recommended 300 5052 Rev G October 2009 3 English Procedure Cautions
9. TCID o Masern 700 TCID Mumps 1 4 x 104 TCID Parainfluenza 1 4 X 103 TCID Parainfluenza 2 7x 103 TCID Parainfluenza 3 1 4 x 104 TCID Influenza A 3 5 X 104 TCID Influenza B 3 5 X 10 TCID VZV 14 TCID o Streptokokken der Gruppe B 7x 108 Zellen H influenzae B 7X 10 Zellen H influenzae Non B 7 x 10 Zellen E coli 7 x 10 Zellen N meningitides 7 x 10 Zellen C freundii 7 x 10 Zellen C koseri 7x 10 Zellen 300 5052 Rev G October 2009 59 Deutsch Analytische Sensitivit t Die analytische Sensitivit t oder Nachweisgrenze Limit Of Detection LOD wird als die geringste Konzentration bzw die geringste Menge eines Analyts definiert bei der durch Laboranalyse nachgewiesen wurde dass sie reproduzierbar mit einer Zuverl ssigkeit von 95 von einer negativen Probe unterschieden werden kann Die Verd nnungen wurden mit gepoolten humanen EV negativen Proben durchgef hrt Zur statistisch zuverl ssigen Ermittlung der LOD wurden 20 Replikate sowie 20 EV negative Proben ausgef hrt Die Proben bestanden aus Coxsackievirus A6 CVA6 Coxsackievirus A9 CVA9 Coxsackievirus A17 CVA17 Enterovirus 70 EV70 und Poliovirus 1 PV1 Nicht alle 63 Serotypen wurden in statistisch signifikanter Zahl ausgef hrt da die Primer und Sondenbindungsstellen bei allen Serotypen erhalten bleiben und die Amplikonl nge bei allen Seroty
10. Washington DC American Society for Microbiology 2003 1427 1438 4 Robinson CC Willis M Meagher A et al Impact of rapid polymerase chain reaction results on management of pediatric patients with enteroviral meningitis Pediatric Infectious Disease Journal 2002 21 283 6 5 Centers for Disease Control and Prevention Biosafety in microbiological and biomedical laboratories Richmond JY and McKinney RW eds 1993 HHS Publication number CDC 93 8395 6 Clinical and Laboratory Standards Institute formerly National Committee for Clinical Laboratory Standards Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections Approved Guideline Document M29 refer to latest edition 7 Wright HT McAllister RM Ward R Mixed Meningitis Report of a Case with Isolation of Haemophilus Influenzae Type B and ECHO Virus Type 9 from the Cerebrospinal Fluid New England Journal of Medicine 1962 267 142 144 8 Sferra TJ Pacini DL Simultaneous recovery of bacteria and viral pathogens from cerebrospinal fluid Pediatric Infectious Disease Journal 1988 7 552 556 9 Dronkert ML Ketel AG de Groot R Simultaneous occurrence of group B Streptococcus and echovirus 20 European Journal of Pediatrics 1996 155 915 Assistenza Per ricevere assistenza contattare Cepheid a uno dei seguenti recapiti Quando si contatta l Assistenza tramite telefono o posta elettronica accertarsi di fornire il numero di serie dello strumento e
11. comme r ussi s il r pond aux crit res d acceptation valid s Notez que dans le logiciel GeneXpert Dx System CIC est le nom donn au SPC IC Contr le de la sonde avant le d but de la r action PCR le syst me proc de un contr le de la sonde la fois sur EV cible et sur le SPC IC pour v rifier la r hydratation des billes de r actifs et le remplissage du tube de r action Chaque contr le de la sonde est consid r comme r ussi s il r pond aux crit res d acceptation valid s Contr les externes ils doivent tre utilis s pour la formation l essai d aptitude et le contr le qualit externe de GeneXpert Dx System Les contr les externes doivent tre utilis s en accord avec les organisations d accr ditation locales nationales f d rales comme appropri Les contr les externes peuvent tre pr par s en diluant une souche A9 de virus Coxsackie souche de Bozek ou A6 de virus Coxsackie C G Gdula avec du LCR de patient n gatif connu ou du LCR synth tique par exemple r f rence HSP 515 de SeraCare Life Sciences Inc d environ 10 1 000 DICT 59 mL donnant une plage du C d ent rovirus de 32 35 pour le test EV Xpert 300 5052 Rev G October 2009 25 Frangais Interpr tation des r sultats Les r sultats sont disponibles dans la fen tre View Results Afficher les r sultats de GeneXpert Dx System Les r sultats possibles sont d crits dans cette section Remarque Dans la fen tre View
12. G October 2009 2 28 c Warnungen und Vorsichtshinweise Elutionsreagenz 3 10 x 2 0 ml Ammoniumsulfat EDTA Ethylenediamin Tetraazetat e Tris pH 7 0 Wasser Lysereagenz 4 10 x 300 pl N Acetyl L Cystein e Guanidin Thiocyanat e N lauroylsarkosin e Natriumcitrat pH 6 8 Wasser Hinweis Fir alle Reagenzien dieses Tests sind Sicherheitsdatenbl tter beim Technischen Support von Cepheid auf Anfrage erh ltlich Das Rinderserum Albumin BSA in diesem Produkt wurde ausschlie lich aus Rinderplasma hergestellt das aus den USA stammt Auch die Herstellung des BSA erfolgte in den USA Die Tiere erhielten keinerlei Wiederk uer oder anderes Tierprotein mit dem Futter und wurden ante und post mortem Tests unterzogen Bei der Verarbeitung wurde das Material nicht mit anderen Tiermaterialien vermischt Lagerung und Handhabung Die Xpert EV Kartuschen und Reagenzien bei 2 28 C lagern Kartuschen d rfen erst unmittelbar vor Testdurchf hrung ge ffnet werden Die Kartuschen und Reagenzien sind innerhalb von 30 Minuten nach ffnen der Verpackung zu verwenden Kartuschen und Reagenzien die das Verfallsdatum berschritten haben d rfen nicht verwendet werden Keine tr ben oder farblosen Reagenzien verwenden Materialien die nicht im Lieferumfang enthalten sind GeneXpert Dx System die Katalognummer h ngt von der Konfiguration ab GeneXpert Instrument Computer Barcode Leseger t und Benutzerhandbuch
13. G October 2009 Caracteristicas de funcionamiento Tabla 3b Muestras clinicas recogidas prospectivamente y evaluadas con respecto al cultivo viral De las 235 muestras retrospectivas elegibles 211 dieron resultados en el cultivo viral Las correspondencias positivas y negativas entre el Xpert EV y el cultivo viral se muestran en la siguiente tabla Cultivo viral Xpert EV 22 35 1 153 Totales 23 188 Correspondencia positiva 95 7 22 23 95 Cl 78 1 99 9 Correspondencia negativa 81 4 153 188 95 Cl 75 1 86 7 300 5052 Rev G October 2009 77 Espanol Tabla 4 Valores esperados para Xpert EV en una poblaci n con signos y sintomas consistentes con la meningitis Los 434 pacientes elegibles fueron agrupados por edad y sexo el n mero y porcentaje de casos positivos calculados se muestran en la siguiente tabla Resultado del Xpert EV Rango de edad a os Sexo n positivo nnegativo Total lt 1 M 34 29 3 82 70 7 116 F 26 28 3 66 71 7 92 ics M 8 25 0 24 75 0 32 F 3 11 1 24 88 9 27 6 10 M 3 31 4 24 68 6 35 F 3 17 6 14 82 4 17 1 15 M 8 33 3 16 66 7 24 F 3 15 0 17 85 0 20 16 21 M 3 20 0 12 80 0 15 F 3 25 0 9 75 0 12 gt 21 M 2 10 0 18 90 0 20 F 3 12 5 21 87 5 24 Total 107 24 7 327 75 3 434 Prueba de serotipo del enterovirus reactividad analitica Se probaron un total de 60 serotipos de entero
14. Note that the SPC IC is displayed as CIC 300 5052 Rev G October 2009 Interpretation of Results NEGATIVE Figure 3 EV target nucleic acid is not detected but SPC meets acceptance criteria GeneXpert Dx System View Results window Note that the SPC IC is displayed as CIC e EV NEG CIC SPC IC PASS Probe Check PASS Negative Xpert EV results do not rule out enterovirus as causes of meningitis but that enterovirus was not detected Test and Analyte Result Assay Name Xpert EV Test Result NEGATIVE i Analyte ct Name EV cic vi 4 CIC Primary Fluorescence Figure 3 Negative Result GeneXpert Dx System View Results Window Note that the SPC IC is displayed as CIC 300 5052 Rev G October 2009 7 English INVALID Figure 4 The presence or absence of EV target nucleic acid cannot be determined repeat test with extra specimen SPC IC does not meet acceptance criteria the sample was not properly processed or PCR is inhibited GeneXpert Dx System View Results window Note that the SPC IC is displayed as CIC e EV INVALID e CIC SPC IC FAIL Probe Check PASS Test and Analyte Result Assay Name Xpert EV Version 2 Test Result INVALID EndPt u 1 0 Analyte Ct Analyte Result Name 0 INVALID EV j CIC 1 0 FAIL 0 0 0 0 za Legend A ane lv 7 EV Prim
15. PVI 4 0 CVA17 1 0 CVA6 33 0 300 5052 Rev G October 2009 37 Frangais Reproductibilite La reproductibilit a t contr l e lors d une tude multicentrique et en aveugle l aide d un panel de pr cision compos de quatre chantillons Trois sites ont test chaque panel trois fois par jour pendant 10 jours pour un total de 90 r sultats par chantillon de panel Le panel de pr cision tait compos d un chantillon n gatif et de trois chantillons positifs chacun pr sentant un s rotype d ent rovirus sp cifique tudi en solution dans du LCR synth tique une concentration proche de la limite de d tection Tableau 8 R sum des r sultats de reproductibilit Le pourcentage d accord les valeurs de Ct moyennes pour chaque concentration les d viations standard associ es le pourcentage de variation entre les jours et entre les sites de l tude de reproductibilit multicentrique sont indiqu s dans le tableau ci dessous Nombre d chantillons classifi s correctement Entre les jours Entre les sites Total Ct S rotype d ent rovirus D viations D viations D viations DICT ml Site 1 Site 2 Site 3 moyen standard CV standard CV standard CV N gatif 30 30 30 30 30 30 CVA6 134 30 30 30 30 29 29 35 0 0 343 0 98 0 175 0 50 1 101 3 15 CVAg 320 30 30 30 0 30 30 34 4 o 0 00 o 0 00 0 61 1 77 CVA17 3 30 30 30 30 29 29 33 8 o 0 00 o 0 00 0 414 1 22 Accord total 12
16. end wird die CDNA mit PCR Trockenreagenzien gemischt und zur Echtzeit PCR bzw zum Echtzeit Nachweis in das Reaktionsgef bertragen Mit den EV Primern und der Sonde wird eine bereinstimmende Region der enteroviralen 5 untranslatierten Region UTR amplifiziert und nachgewiesen Der Test dauert ca 2 5 Stunden Reagenzien und Instrumente Y Im Lieferumfang enthaltenes Material Das Xpert EV Test Kit GXEV 100N 10 enth lt Reagenzien zur Verarbeitung von 10 Proben Das Kit enth lt Folgendes Xpert EV Kartuschen 10 Kartuschen Kit Kiigelchen 1 gefriergetrocknet 1 pro Kartusche e Reverse Transkriptase e RNase Inhibitor dNTPs BSA Rinderserum Albumin K gelchen 2 gefriergetrocknet 1 pro Kartusche e R ckw rts Oligonukleotid Primer BSA Rinderserum Albumin K gelchen 3 gefriergetrocknet 1 pro Kartusche DNA Polymerase dNTPs BSA Rinderserum Albumin Kiigelchen 4 gefriergetrocknet 1 pro Kartusche e Vorwarts Oligonukleotid Primer Mit Fluoreszenzfarbstoff markierte Oligonukleotid Sonden BSA Rinderserum Albumin Kiigelchen 5 gefriergetrocknet 1 pro Kartusche Probenverarbeitungskontrolle Pseudovirus mit enkapsidierter CIC RNA BSA Rinderserum Albumin Bindungsreagenz 1 10 x 1ml Ethanol e Wasser Waschreagenz 2 10 x 3 2 ml e Cysteamin HCl EDTA Ethylenediamin Tetraazetat KCI e MTG Monothioglyzerin PEG Polyethylenglycol e Tris pH 7 0 e Tween 20 Wasser 44 300 5052 Rev
17. la concentration totale des prot ines du LCR la num ration des leucocytes du LCR et la d tection du g nome d un ent rovirus dans le LCR et ou la culture positive d ent rovirus dans le LCR l origine 475 patients se sont pr sent s Quarante et un patients ne r pondaient pas aux crit res d inclusion dans l tude et ont donc t limin s de l analyse sur les 434 sujets analysables 255 ont produit des r sultats pour tous les tests d crits ci dessus Tableau 2a chantillons cliniques prospectifs valu s par rapport au diagnostic clinique Au total 199 futurs patients admissibles ont t retenus 133 patients ont produit les 6 r sultats de laboratoire pour l valuation de la v rit clinique La sensibilit et la sp cificit cliniques du test EV Xpert sont pr sent es dans le tableau ci dessous Diagnostic clinique 26 3 Xpert EV ES 1 103 Total 27 106 Sensibilit clinique 96 3 26 27 95 Cl 81 0 99 9 300 5052 Rev G October 2009 31 Frangais Sp cificit clinique 97 2 103 106 95 CI 91 9 99 4 Tableau 2b Echantillons cliniques collect s de mani re prospective conserv s et valu s par rapport au diagnostic clinique Au total 235 anciens patients admissibles ont t retenus 122 patients ont produit les 6 r sultats de laboratoire pour l valuation de la v rit clinique La sensibilit et la sp cificit cliniques
18. nicas y dem s informaci n a disposici n del m dico Un resultado positivo en el ensayo Xpert EV no descarta otra causas de meningitis incluyendo bacterias micobacterias otros virus por ejemplo virus de la familia del herpes arbovirus virus de paperas etc y hongos Resumen y explicaci n El ensayo Xpert EV de Cepheid es un ensayo de reacci n en cadena de la polimerasa de transcripci n inversa TI RCP que se utiliza para detectar ARN de enterovirus en muestras de l quido cefalorraqu deo LCR Los enterovirus se clasifican taxon micamente como aquellos virus incluidos en las especies de poliovirus coxsackievirus echovirus y enterovirus Los enterovirus causan una amplia variedad de infecciones y son los virus que se contagian m s f cilmente por contacto con secreciones respiratorias de una persona infectada Los s ntomas m s comunes son fiebre fuerte dolor de cabeza rigidez en el cuello luces brillantes que da an los ojos somnolencia o confusi n y n useas y v mitos En los ni os los s ntomas incluyen fiebre inquietud o irritabilidad dificultad para permanecer despierto o p rdida de apetito Aunque la mayor a de las infecciones son asintom ticas o provocan peque os cuadros febriles a menudo requieren hospitalizaci n especialmente en beb s y ni os Cerca del 90 de los casos de meningitis viral est n causados por enterovirus y los enterovirus son la causa m s com n de meningitis en los Estados Un
19. ou limite de detection LDD est d finie pour la concentration la plus basse ou quantit d analyte pouvant tre d tect e plusieurs reprises dans un chantillon n gatif avec un niveau de confiance de 95 selon l analyse de laboratoire Les dilutions ont t r alis es dans un m lange d chantillons humains n gatifs aux ent rovirus Pour la d termination de la confiance statistique de la LDD 20 r plicats et 20 chantillons n gatifs d ent rovirus ont t r alis s Des chantillons ont t r alis s pour le virus Coxsackie A6 CVA6 le virus Coxsackie A9 CVA9 le virus Coxsackie A17 CVA17 l ent rovirus 70 EV70 et le poliovirus 1 PV1 Les 63 s rotypes n ont pas tous t test s en un nombre de fois statistiquement significatif car les sites de fixation de l amorce et de la sonde sont conserv s dans tous les s rotypes et la longueur des amplicons est identique pour tous les s rotypes ainsi l efficacit de l amplification est cens e tre la m me pour tous les s rotypes Les cinq s rotypes indiqu s ci dessus ont t s lectionn s pour repr senter chacune des esp ces d ent rovirus CVA6 A CVA9 B CVA17 C EV70 D et PV1 poliovirus Tableau 7 Limite de d tection des cinq 5 s rotypes LDD des cinq 5 s rotypes une pour chacune des esp ces d ent rovirus indiqu es dans le tableau ci dessous Limite de d tection S rotype DICT mi CVAg 80 0 EV70 1 3
20. para aproximadamente 10 1000 TCID50 mL que proporciona un rango Ct de EV de 32 35 para elensayo Xpert EV 300 5052 Rev G October 2009 69 Espanol Interpretaci n de los resultados Los resultados se muestran en el sistema GeneXpert Dx en la ventana View Results Ver resultados En esta secci n se describen los diferentes resultados posibles Nota En la ventana View Results Ver resultados del sistema GeneXpert Dx el SPC IC se muestra como CIC en la columna Analyte Name Nombre de analito PRECAUCI N Los resultados del ensayo Xpert EV deben utilizarse nicamente como complemento de la observaci n clinica y dem s informaci n a disposici n del m dico Un resultado positivo en el ensayo Xpert EV no descarta otra causas de meningitis incluyendo bacterias micobacterias otros virus por ejemplo virus de la familia del herpes arbovirus virus de paperas etc y hongos POSITIVE POSITIVO Figura 2 Se ha detectado el cido nucleico del EV objetivo Sistema GeneXpert Dx Ventana View Results Ver resultados Observe que el SPC IC se muestra como CIC EV POS CIC SPC IC NA Cuando el t tulo de EV es elevado se puede suprimir el TI RCP para el SPC Comprobaci n de sonda APROBADO Un resultado positivo en el ensayo Xpert EV no descarta otra causas de meningitis incluyendo bacterias micobacterias otros virus P yo Ap gl y por ejemplo virus de la familia del herpes arbovirus virus de pape
21. s de l Assistance technique de Cepheid Le s rum albumine bovin SAB de ce produit a t extrait exclusivement partir de plasma bovin provenant des tats Unis La fabrication du SAB est galement r alis e aux tats Unis Les aliments donn s aux animaux ne contenaient pas de prot ines de ruminants ou d autres prot ines animales les animaux ont subi des tests ante et post mortem Au cours du processus aucun m lange ne s est produit avec d autres mati res animales Stockage et manipulation Stockez les cartouches EV Xpert et les r actifs entre 2 et 28 C N ouvrez pas de cartouche tant que vous n tes pas pr t effectuer un test Utilisez la cartouche et les r actifs dans les 30 minutes qui suivent l ouverture de l emballage N utilisez pas les cartouches ou les r actifs dont la date d expiration est d pass e N utilisez aucun r actif devenu trouble ou d color Mat riel requis mais non fourni GeneXpert Dx System la r f rence varie en fonction de la configuration Appareil GeneXpert ordinateur lecteur de code barres et manuel d utilisation Imprimante consultez le Manuel d utilisation du GeneXpert Dx System pour obtenir des indications de compatibilit CD du test EV Xpert r f rence 950 0125 Pipette de 200 ul Embouts de pipette steriles de 200 ul Avertissements et pr cautions Uniquement pour une utilisation de diagnostic in vitro Le r actif de lyse contient de la guanidine thiocy
22. 5052 Rev G October 2009 27 Frangais NON VALIDE Figure 4 S il est impossible de d terminer la pr sence ou l absence d acide nucl ide cible d ent rovirus r p tez le test avec un chantillon suppl mentaire Le SPC IC ne satisfait pas aux crit res d acceptation l chantillon n a pas t trait correctement ou la PCR est inhib e fen tre View Results Afficher les r sultats du GeneXpert Dx System Notez que le SPC IC est affich en tant que CIC EV INVALID e CIC SPC IC FAIL Probe Check PASS Contr le de la sonde R USSITE Test and Analyte Result Assay Name Xpert EV Version 2 Test Result INVALID Analyte Ct EndPt Analyte Result Probe Name Check Result l EV 00 1 0 INVALID PASS FAIL 0 0 0 0 0 1 0 Legend A m i Z Ev Primary A MN vi CIC Primary A o 60 A E A 5 2 T A 20 A 0 Z 10 20 30 40 Cycles Figure 4 R sultat non valide fen tre View Results Afficher les r sultats du GeneXpert Dx System Notez que le SPC IC est affich en tant que CIC ERREUR S il est impossible de d terminer la pr sence ou l absence d acide nucl ide cible d ent rovirus r p tez le test avec un chantillon suppl mentaire L chec du contr le de la sonde est probablement d au remplissage incorrect du tube de r action un probl me d int grit de la sonde a t d tect ou le test a t interr
23. CAUTION The results obtained with the Xpert EV assay should be used only as an adjunct to clinical observation and other information available to the physician Positive Xpert EV results do not rule out other causes of meningitis including bacteria mycobacteria other viruses e g herpes family viruses arboviruses mumps virus etc and fungi POSITIVE Figure 2 EV target nucleic acid is detected GeneXpert Dx System View Results window Note that the SPC IC is displayed as CIC EV POS CIC SPC IC NA When EV titer is high the RT PCR for the SPC might be suppressed Probe Check PASS Positive Xpert EV results do not rule out other causes of meningitis including bacteria mycobacteria other viruses e g herpes family viruses arboviruses mumps virus etc and fungi Test and Analyte Result Detail Errors Assay Name Xpert EV Test Result POSITIVE 416 456 0 POS CIC 35 4 161 0 NA Analyte EndPt Analyte Result Name Disclaimer For In Vitro Diagnostic Use Only Positive Xpert EV results do not rule out other causes of meningitis including bacteria mycobacteria other viruses e g herpes family viruses arboviruses mumps virus etc and fungi Probe Check Result Fluorescence vi Z EV Primary v CIC Primary Figure 2 Positive Result GeneXpert Dx System View Results Window
24. Day 2 Day 3 Day 4 All Days Agreement NEGATE Total Agreement 20 20 18 18 20 20 20 20 78 78 100 Average NA NA NA NA NA SD NA NA NA NA NA CV NA NA NA NA NA CA9 2X LOD Total Agreement 4 5 5 5 4 5 5 5 18 20 90 Average 36 65 36 54 36 53 36 54 36 56 SD 0 56 0 46 0 21 0 69 0 48 CV 1 53 1 26 0 57 1 89 1 31 ED Tatal Agreement 5 5 5 5 5 5 4 43 19 19 100 Average 34 98 35 56 35 52 35 03 35 28 SD 0 53 0 67 0 7 0 3 0 6 CV 1 52 1 88 1 97 0 86 1 70 A oazi Agreement 5 5 5 5 5 54 5 5 20 20 100 Average 37 38 37 3 37 55 36 88 37 2 SD 1 78 0 74 2 01 0 81 1 3 CV 4 76 1 98 5 35 2 20 3 49 IN ta Agreement 5 5 5 5 5 5 5 5 20 20 100 Average 36 50 36 60 36 12 35 94 36 29 SD 0 58 0 97 0 29 0 84 0 72 CV 1 59 2 65 0 80 2 34 1 98 Number of instruments used 10 n 10 10 31 Number of modules used 40 41 41 40 121 Total runs 21 2 No Result 1 Invalid Total runs 5 1 negative instead of positive result 3 Total runs 5 1 Invalid 4 Total runs 6 1 No Result 300 5052 Rev G October 2009 17 English References 1 Viral Aseptic Meningitis Centers for Disease Control and Prevention National Center for Infectious Diseases Respiratory and Enteric Viruses Branch http www cdc gov ncidod dvrd revb enterovirus viral_meningitis htm accessed April 11 2006 2 Rotbart HA Viral meningitis Semin Neurol 2000 20 3 277 92 3 Romero JR Rotbart HA Enteroviruses In Murray PR Baron EJ eds Manual of Cl
25. Do not substitute Xpert EV reagents with other reagents Do not open the Xpert EV cartridge lid except when adding sample and reagents Do not load a Xpert EV cartridge that has been dropped or shaken after you have inserted the sample and reagents Do not load a cartridge that has a damaged reaction tube Do not open used Xpert EV cartridges Do not reuse spent Xpert EV cartridges Do not freeze and thaw the specimens more than two times Do not use specimens that have been centrifuged Preparing the Cartridge To add the sample and reagents into the cartridge Figure 1 1 2 3 Remove a cartridge and the reagents from the package Open the Binding Reagent 1 ampule by twisting and breaking off the cap Insert the tip of the Binding Reagent 1 ampule into cartridge chamber 1 and squeeze the ampule until the entire content is emptied Open the Wash Reagent 2 ampule by twisting and breaking off the cap Insert the tip of the Wash Reagent 2 ampule into cartridge chamber 2 and squeeze the ampule until the entire content is emptied Open the Elution Reagent 3 ampule by twisting and breaking off the cap Insert the tip of the Elution Reagent 3 ampule into cartridge chamber 3 and squeeze the ampule until the entire content is emptied Using the 200 uL pipette add 140 uL of the Lysis Reagent 4 to cartridge chamber 4S Discard the Lysis Reagent 4 vial Using the 200 uL pipette add 140 uL of the sample to cartridge
26. Drucker Kompatibilit tshinweise finden Sie im Benutzerhandbuch zum GeneXpert Dx System Xpert EV Test CD ROM Teilenr 950 0125 e 200 ul Pipette Sterile 200 ul Pipettenspitzen Warnungen und Vorsichtshinweise Nur zur Verwendung in der In vitro Diagnostik A Das Lysereagenz enth lt Guanidin Thiocyanat welches hochreaktive Komponenten bilden kann wenn es mit Bleiche vermischt wird Sollten Fl ssigkeiten versch ttet werden die dieses Reagenz enth lt ist der Bereich mit Laborreinigungsmitteln und Wasser zu reinigen e Alle biologischen Proben und auch die Kartuschen sind als infekti s zu behandeln Da es oft unm glich ist zu bestimmen welche Probe infekti s ist sollten alle Proben vom Menschen mit den m glichen Sorgfaltsma nahmen behandelt werden Die Richtlinien zum Umgang mit Proben sind bei der US amerikanischen CDC Center for Disease Control and Prevention US amerikanische staatliche Beh rde f r den Schutz der Bev lkerung vor Krankheiten und Seuchen und beim Clinical and Laboratory Standards Institute US amerikanisches Institut f r Standards in Klinik und Labor fr her National Committee for Clinical Laboratory Standards erh ltlich Alle gef hrlichen oder biologisch kontaminierten Substanzen gem den Vorgehensweisen der jeweiligen Institution entsorgen Alle Substanzen auf sichere und akzeptable Weise und gem den Bundes Landes und kommunalen Vorschriften entsorgen 300 5052 Rev G October
27. EV 7 0 16 B Coxsackie Ag 20 00 B Coxsackie B1 4 00 B Coxsackie B2 0 20 B Coxsackie B3 0 028 B Coxsackie B4 0 40 B Coxsackie Bs 0 04 B Coxsackie B6 0 01 B Echo 0 10 B Echo 2 0 032 B Echo 3 200 00 B Echo 4 0 00032 B cho 5 0 032 B cho 6 200 00 B cho 7 2 00 B cho 8 0 10 B cho 9 2 00 B cho n 40 00 B cho 12 1 58 B cho 13 0 01 B cho 14 0 0005 B Echo 15 0 0032 B Echo 16 0 0005 B Echo 17 0 05 B Echo 18 0 0002 B Echo 19 2 51 B Echo 20 0 032 B Echo 21 1 00 B Echo 24 0 02 B Echo 25 0 50 B Echo 26 0 032 B Echo 27 0 00032 B Echo 29 5 01 B Echo 30 0 01 B Echo 31 0 0032 B Echo 32 0 10 B Echo 33 0 05 B EV 69 0 0002 Coxsackie An 0 11 Coxsackie A13 13 27 C Coxsackie A15 0 0032 C Coxsackie A17 1 58 Cc Coxsackie A18 0 02 Coxsackie A19 0 03 Cc Coxsackie A2o 0 002 C Coxsackie A21 0 03 C Coxsackie A22 0 02 C Coxsackie A24 0 10 D EV 68 199 53 D EV 70 2 00 Poliovirus Poliovirus 1 2 00 Poliovirus Poliovirus 2 0 40 Poliovirus Poliovirus 3 20 00 300 5052 Rev G October 2009 35 Frangais Specificite analytique Les s quences de l amorce et de la sonde utilis es dans le test EV Xpert ne d tectent pas l acide nucl ique extrait des organismes suivants connus pour provoquer des sympt mes proches de ceux de la m ningite VEB HSV 1 HSV 2 HHV 6 HHV 7 AdV 2 rougeole oreillons Parainfluenza 1 3 grippe grippe B VZV CMV streptocoques du groupe B Haemophilus influenz
28. ID del lotto reagenti Nord America Per l assistenza tecnica utilizzare i seguenti recapiti Tel 1 888 838 3222 E mail techsupport cepheid com E possibile contattare telefonicamente l Assistenza tecnica Cepheid dal lunedi al venerdi dalle 6 alle 17 Pacifico Unione Europea Per l assistenza tecnica utilizzare i seguenti recapiti Tel 33 563 82 53 19 E mail techsupport cepheideurope fr Altri Paesi Contattare il rappresentante Cepheid locale 104 300 5052 Rev G October 2009 Tabella dei simboli u 3 o a o Significato Numero di catologo Dispositivo medico per diagnostica in vitro Non riutilizzare Attenzione consultare la documentazione allegata Produttore Contiene quantita sufficiente per lt n gt analisi Data di scadenza CONTROL Controllo Rappresentante autorizzato nella Comunit europea EE Limitazione della temperatura Rischio biologico Sp Produttore Cepheid 904 Caribbean Drive Sunnyvale CA 94089 1189 USA Telefono 1 408 541 4191 Fax 1 408 541 4192 EC Rappresentante autorizzato PP Cepheid Europe Vira Solelh 81470 Maurens Scopont Francia Tel 33 563 82 53 00 Fax 33 563 82 53 01 E mail cepheid cepheideurope fr C 1vD 300 5052 Rev G October 2009 Tabella dei simboli 105 Italiano 106 300 5052 Rev G October 2009
29. Introduzca el extremo de la ampolla de reactivo de uni n 1 en el compartimento 1 del cartucho y sacuda la ampolla hasta que se haya vaciado todo su contenido Abra la ampolla del reactivo de lavado 2 girando y rompiendo el tap n Introduzca el extremo de la ampolla de reactivo de lavado 2 en el compartimento 2 del cartucho y sacuda la ampolla hasta que se haya vaciado todo su contenido Abra la ampolla del reactivo de diluci n 3 girando y rompiendo el tap n Introduzca el extremo de la ampolla de reactivo de diluci n 3 en el compartimento 3 del cartucho y sacuda la ampolla hasta que se haya vaciado todo su contenido Usando la pipeta de 200 uL a ada 140 uL del reactivo de lisis 4 en el compartimento 4S del cartucho Deseche el vial del reactivo de lisis 4 Usando la pipeta de 200 uL a ada 140 uL de la muestra en el compartimento 4S del cartucho Para evitar que se formen grandes burbujas de aire aseg rese de mantener la punta de la pipeta en la parte superior del compartimento y de dispensar la muestra lentamente 10 Cierre la tapa del cartucho Importante Aseg rese de cargar el cartucho en el instrumento GeneXpert Dx e inicie la prueba en los 30 minutos siguientes a la adici n de los reactivos 1 Reactivo de uni n 2 Reactivo de lavado 3 Reactivo de diluci n 4S Reactivo de lisis y Muestra Figura 1 Cartucho Xpert EV vista superior 68 300 5052 Rev G October 2009 Control de calidad
30. Test and Analyte Result Assay Name Xpert EV Version 2 Test Result INVALID Analyte Ct EndPt Analyte Result Probe Name Check Result l EV 00 1 0 INVALID PASS FAIL 00 0 0 1 0 Legend Y 100 vi Z EVs Primary lt A vi CIC Primary A 80 H g 60 A o A S 4 q A 20 4 0 7 10 20 30 40 Cycles Figura 4 Risultato non valido finestra GeneXpert Dx System View Results Visualizza risultati l SPCAC visualizzato come CIC ERROR ERRORE La presenza o assenza dell acido nucleico bersaglio dell EV non pu essere determinata ripetere l analisi con campioni supplementari Il controllo per il controllo sonda non riuscito probabilmente a causa del riempimento scorretto della provetta di reazione stato rilevato un problema di integrit della sonda o il saggio stato interrotto EV NO RESULT CIC SPC IC NO RESULT Probe Check FAIL NO RESULT NESSUN RISULTATO La presenza o assenza dell acido nucleico bersaglio dell EV non pu essere determinata ripetere l analisi con campioni supplementari Sono stati raccolti dati insufficienti per produrre un risultato del test per esempio l operatore ha interrotto un analisi in corso EV NO RESULT CIC SPC IC NO RESULT Probe Check NA 92 300 5052 Rev G October 2009 A Limitazioni Motivi per ripetere il saggio Ripetere il saggio con un campione fresco se v
31. Verf gung stehenden Informationen verwendet werden Durch ein positives Xpert EV Testergebnis werden andere Ursachen der Meningitis wie Bakterien Mykobakterien andere Viren z B Viren aus der Herpesfamilie Arboviren Mumpsviren etc oder Pilze nicht ausgeschlossen Zusammenfassung und Erkl rung Der Cepheid Xpert EV Test wird mittels reverser Transkriptase Polymerase Kettenreaktion RT PCR durchgef hrt und zum Nachweis von enteroviraler RNA in Proben zerebrospinaler Fl ssigkeit CSF eingesetzt Der Begriff Enterovirus bezeichnet taxonomisch die Gruppe von Viren die aus Polioviren Coxsackieviren Echoviren und Enteroviren besteht 3 Enteroviren sind die Ursache vieler verschiedener Infektionen Sehr h ufig erfolgt ihre Verbreitung durch direkten Kontakt mit den respiratorischen Sekreten infizierter Personen In der Regel sind die Symptome Fieber starke Kopfschmerzen Nackensteifigkeit schmerzende Augen bei hellem Licht Schl frigkeit oder Verwirrung sowie belkeit und Erbrechen Bei Kleinkindern sind die Symptome u a Fieber Gereiztheit bzw Reizbarkeit Schwierigkeiten beim Aufwachen und Appetitverlust Zwar sind die meisten Infektionen entweder asymptomatisch oder sie ziehen leichtere fiebrige Erkrankungen nach sich Oftmals f hren Sie jedoch bei den Patienten insbesondere bei Kleinkindern und Kindern zu einem Krankenhausaufenthalt Etwa 90 der F lle viraler Meningitis werden von Enteroviren hervorgerufen und
32. cefalorraqu deo Las sustancias probadas han sido leucocitos prote na sangre total y hemoglobina El contenido de leucocitos fue comprobado usando leucocitos c lulas de leucemia humana K562 a adidos al LCR Para detectar la posible interferencia de las punciones hem ticas se comprobaron muestras de LCR humano contaminadas con varios niveles hasta 125 000 gl bulos rojos mm de sangre Los rangos de concentraci n y las sustancias interferentes encontradas en el LCR normal se indican en la Tabla 1a Tambi n se muestran los rangos potenciales encontrados en el LCR durante la meningitis Cada sustancia fue a adida a niveles que podr an encontrarse en pacientes normales o con meningitis Todas las pruebas se realizaron con LCR con enterovirus de serotipo CVA9 a adido a 80 TCID y mL 3x LOD 300 5052 Rev G October 2009 73 Espanol Tabla 1a Muestras de sustancias end genas potencialmente interferentes comprobadas en Xpert EV Rango de concentraci n Rango de concentraci n encontrado potencial de LCR Sustancia en LCR normal durante la meningitis Muestra probada con Xpert EV Concentraciones probadas Leucocitos 0 5 c lulas mm3 5 5000 c lulas mm3 c lulas K562 C lulas mm3 0 3 57 35 7 357 7140 Prote nas de 13 40 mg dL 15 217 mg dL BSA IgG Concentraci n de proteina mg dL LCR relaci n 1 1 0 30 300 1 071 Sangre Ninguna No aplicable LCR humano de punci n 0 a aproximadamente 2 5 v v hem tic
33. chamber 4S To prevent large air bubbles from forming be sure to hold the pipette tip at the top of the chamber and dispense the sample slowly 10 Close the cartridge lid Important Be sure to load the cartridge into the GeneXpert Dx instrument and start the test within 30 minutes of adding the reagents 1 Binding Reagent 2 Wash Reagent 3 Elution Reagent 4S Lysis Reagent and Sample Figure 1 Xpert EV cartridge top view Starting the Test Important Before you start the test make sure the Xpert EV assay definition is imported into the software see the instructions provided with the assay CD If you do not have the Xpert EV assay CD contact Cepheid Technical Support 300 5052 Rev G October 2009 Quality Control This section lists the basic steps of running the test For detailed instructions see the GeneXpert Dx System Operator Manual 1 Turn on the computer and then turn on the GeneXpert Dx instrument On the Windows desktop double click the GeneXpert Dx shortcut icon Log on to the GeneXpert Dx System software using your user name and password In the GeneXpert Dx System window click Create Test The Scan Cartridge Barcode dialog box appears Sta DR Scan the bar code on the Xpert EV cartridge The Create Test window appears Using the bar code information the software automatically fills the following boxes Select Assay Reagent Lot ID Cartridge S N and Expiration Date 6 In the
34. du test EV Xpert sont pr sent es dans le tableau ci dessous Diagnostic clinique 23 3 Xpert EV o 96 Total 23 99 Un patient est d clar porteur d une m ningite ent rovirus diagnostic clinique si les crit res suivants sont rencontr s preuve clinique de m ningite r sultats de laboratoire pour la coloration Gram du LCR la culture bact rienne du LCR le glucose du LCR le rapport glucose du LCR glyc mie la concentration totale des prot ines du LCR la num ration des leucocytes du LCR et d tection du g nome d un ent rovirus dans le LCR ou culture d ent rovirus positive dans le LCR Sensibilit clinique 100 23 23 95 CI 85 2 100 Sp cificit clinique 97 0 96 99 95 Cl 91 4 99 4 Tableau 2c Performance cliniques du test EV Xpert en ce qui concerne le diagnostic clinique par ge Les 133 chantillons cliniques prospectifs et les 122 chantillons cliniques collect s de mani re prospective et conserv s taient regroup s par ge La sensibilit et la sp cificit cliniques de chaque groupe d ge sont indiqu es dans le tableau ci dessous Echantillons cliniques collect s de mani re Echantillons cliniques prospectifs prospective et conserves ge Sensibilit clinique Sp cificit clinique Sensibilit clinique Sp cificit clinique N onatal 100 0 14 14 96 0 24 25 100 0 4 4 90 0 18 20 moins de 2 mois P diatrie 92 3
35. durante la meningite Ogni sostanza stata aggiunta a livelli che potrebbero essere riscontrati in pazienti normali o con meningite Tutte le analisi sono state eseguite con LCS aggiunto al sierotipo di enterovirus CVA9 a 80 TCIDsy mL 3x LOD Tabella 1a Campioni di sostanze endogene potenzialmente interferenti analizzate in Xpert EV Intervallo di concentrazione Potenziale intervallo di riscontrato nel LCS concentrazione nel LCS Campione analizzato con Sostanza normale durante la meningite Xpert EV Concentrazioni analizzate Leucotici o 5 cellule mm3 5 5 000 cellule mm3 Cellule K562 Cellule mm3 WBC 0 3 57 35 7 357 7140 Proteine LCS 13 40 mg dL 15 217 mg dL BSA IgG Concentrazione di proteine mg dL rapporto 1 1 0 30 300 1 071 Sangue Nessuno Non applicabile LCS umano 14 punture con Da 0 a circa 2 5 v v sangue sangue Emoglobina 12 18 g dL RBC Non applicabile eccetto in Emoglobina polvere HgB g dL eritrociti punture con sangue ferrosa aggiunta al LCS 0 0 36 0 71 2 14 3 6 Rappresenta circa v v sangue nel LCS rispettivamente 0 2 5 5 15 25 94 300 5052 Rev G October 2009 Caratteristiche sulle prestazioni Come indicato nella Tabella 1b sono stati ottenuti risultati positivi per enterovirus persino quando era stato introdotto nel saggio il livello pi alto di sostanza potenzialmente interferente Tabella b Risultati dello studio con sostanze endogene potenzialmente interfe
36. g dl 12 18 g dl denn es ist Blut versetzt mit CSF 0 0 36 0 71 2 14 3 6 eingedrungen Stellt ca v v Blut in CSF dar bzw 0 2 5 5 15 25 52 300 5052 Rev G October 2009 Leistungsmerkmale Wie in Tabelle 1b dargestellt gab es bei den Tests zum Nachweis von Enteroviren Ergebnisse die selbst dann positiv waren wenn ein H chstma an potenziellen Hemmstoffen in den Test eingeleitet wurde Tabelle b Ergebnisse von Studien mit in Xpert EV getesteten potenziellen endogenen Hemmstoffen Hemmstoff Konzentration EVC Keine Kontrolle n 8 Nicht zutreffend 36 1 Protein n 4 1 071 mg dl 38 2 Leukozyten n 4 7 140 Zellen mm3 37 2 Eingedrungenes Blut Probe 1 2 5 VW Blut 35 9 Eingedrungenes Blut Probe 2 2 5 VW Blut 35 0 Eingedrungenes Blut Probe 3 2 5 VW Blut 35 3 H moglobin n 4 3 6 g dl 36 9 Leistungsmerkmale Klinische Leistung Die Leistungsmerkmale des Xpert EV Tests wurden in einer multizentrischen Forschungsstudie an sechs Institutionen festgelegt F r die Teilnahme an der Studie war es erforderlich dass der behandelnde Arzt f r den Patienten aufgrund von Meningitissymptomen eine Lumbalpunktion und einen EV Test und oder Viruskulturtest angeordnet hatte Der Patient musste ausreichend bersch ssiges CSF Volumen mindestens 0 5 ml aufweisen und ggf nach umfassender Information schriftlich sein Einverst ndnis erkl rt haben Patientenproben wurden von der Studi
37. il nome per SPC IC Probe check Controllo sonda prima dell avvio della reazione PCR il sistema esegue un controllo della sonda sia sull EV bersaglio sia sull SPC IC per verificare la reidratazione delle microsfere dei reagenti e il riempimento della provetta di reazione Ogni controllo sonda viene accettato se soddisfa i criteri di accettazione validati External Controls Controlli esterni i controlli esterni devono essere utilizzati per il training il test di competenza e il CQ esterno di GeneXpert Dx System I controlli esterni devono essere utilizzati in accordo con le organizzazioni di accreditamento locali regionali e nazionali se applicabile I controlli esterni possono essere preparati diluendo il ceppo di virus coxsackie A9 Bozek o il ceppo di virus coxsackie A6 C G Gdula con LCS di paziente di negativit accertata o LCS sintetico per esempio SeraCare Life Sciences Inc numero di catalogo HSP 515 a circa 10 1 000 TCIDs0 mL che fornisce un intervallo EV C di 32 35 per il saggio Xpert EV 300 5052 Rev G October 2009 89 Italiano Interpretazione dei risultati I risultati sono disponibili nella finestra GeneXpert Dx System View Results Visualizza risultati I risultati possibili sono descritti in questa sezione Nota nella finestra View Results Visualizza risultati di GeneXpert Dx System l SPC IC viene visualizzato come CIC nella colonna Analyte Name Nome analita ATTENZIONE i risultati
38. l quido cefalorraqu deo superior o igual a 0 5 mL y en caso necesario deb a haber firmado la autorizaci n de consentimiento por escrito Las muestras de los pacientes fueron excluidas del estudio si el LCR necesario para la prueba de cidos nucleicos hab a sido centrifugado o si no se hab an realizado el ensayo Xpert EV ni ensayos para la determinaci n de verdad cl nica dentro del mismo ciclo de congelaci n descongelaci n de la muestra El historial cl nico de los pacientes tambi n fue tenido en consideraci n signos y s ntomas cl nicos d as transcurridos desde la aparici n de los s ntomas temperatura m xima historial de contacto gl bulos rojos leucocitos y diferencial del LCR glucosa y prote na total de LCR cultivo bacteriano y tinci n de Gram de LCR glucosa en sangre cultivo viral de otras muestras si se dispon a de ellas e 4 300 5052 Rev G October 2009 Caracteristicas de funcionamiento Se consider que un paciente presentaba meningitis asociada a EV Diagn stico clinico si se cumplian los siguientes criterios evidencia clinica consistente con la meningitis resultados de laboratorio para tinci n de Gram de LCR cultivo bacteriano de LCR glucosa en LCR relaci n glucosa en sangre LCR concentraci n de proteina total de LCR recuento leucocitario de LCR y cualquier detecci n de un genoma de EV en LCR y o cultivo positivo de EV en LCR Inicialmente se seleccionaron 475 pacientes para el estudio Cu
39. otro pat geno como bacterias en el l quido cefalorraqu deo Al igual que en cualquier ensayo molecular siempre existe la posibilidad de falsos positivos En la literatura se han descrito casos raros de mezclas simult neas de meningitis viral y bacteriana Elrendimiento del ensayo Xpert EV se ha validado mediante los procedimientos suministrados con estas instrucciones y nicamente con el sistema GeneXpert Dx de Cepheid Estos procedimientos no deben modificarse ya que podr an alterar el rendimiento de la prueba El ensayo Xpert EV est dise ado nicamente para la detecci n de enterovirus Un resultado negativo en esta prueba no descarta la presencia de enterovirus Esta prueba no excluye la posibilidad de una meningitis inducida por Herpes o de una meningitis mic tica para descartar estas infecciones es necesario llevar a cabo pruebas adicionales Aan Al igual que sucede con otros procedimientos diagn sticos los resultados obtenidos en el ensayo Xpert EV deben utilizarse nicamente como complemento de la observaci n cl nica y dem s informaci n a disposici n del m dico Un resultado positivo en el ensayo Xpert EV no descarta otra causas de meningitis incluyendo bacterias micobacterias otros virus por ejemplo virus de la familia del herpes arbovirus virus de paperas etc y hongos Sustancias interferentes Se han llevado a cabo estudios con sustancias potencialmente interferentes presentes en el l quido
40. ottenuti con il saggio Xpert EV devono essere utilizzati solo come integrazione all osservazione clinica e alle altre informazioni disponibili al medico I risultati positivi di Xpert EV non escludono altre cause di meningite compresi batteri micobatteri altri virus per esempio virus della famiglia degli herpes arbovirus virus della parotite ecc e funghi POSITIVE POSITIVO Figura 2 L acido nucleico bersaglio dell EV viene rilevato finestra GeneXpert Dx System View Results Visualizza risultati l SPC IC visualizzato come CIC EV POS CIC SPC IC NA quando il titolo EV alto la RT PCR per SPC potrebbe essere soppressa Probe Check PASS e Trisultati positivi di Xpert EV non escludono altre cause di meningite compresi batteri micobatteri altri virus per esempio virus della famiglia degli herpes arbovirus virus della parotite ecc e funghi N Test and Analyte Result Assay Name Xpert EV Version 2 Test Result SSH Analyte ct EndPt Analyte Result Probe Name Check Result te EV 31 6 456 0 POS PASS CIC 35 4 161 0 NA PASS f Disclaimer For In Vitro Diagnostic Use Only Positive Xpert EV results do not rule out other causes of meningitis including bacteria mycobacteria other viruses e g herpes family viruses arboviruses mumps virus etc and fungi _ Legend v Z Ev Primary vi CIC Primary vaj Fluorescence
41. verr 300 5052 Rev G October 2009 Italiano eseguita entro 72 ore dalla raccolta Non congelare e scongelare i campioni pi di due volte La centrifugazione del campione non consigliata Procedura Precauzioni Non sostituire i reagenti Xpert EV con altri reagenti Non aprire il coperchio della cartuccia Xpert EV eccetto quando si aggiungono il campione e i reagenti Non caricare una cartuccia Xpert EV che caduta o stata scossa dopo aver inserito il campione e i reagenti Non caricare una cartuccia con una provetta di reazione danneggiata Non aprire le cartucce Xpert EV usate e Non riutilizzare le cartucce Xpert EV usate Non congelare e scongelare i campioni pi di due volte Non utilizzare campioni che sono stati centrifugati Preparazione della cartuccia Per aggiungere il campione e i reagenti nella cartuccia Figura 1 1 Rimuovere la cartuccia e i reagenti dalla confezione 2 Aprire la fiala del reagente legante 1 ruotando e spezzando il tappo 3 Inserire la punta della fiala del reagente legante 1 nella camera 1 della cartuccia e comprimere la fiala finch non completamente vuota 4 Aprire la fiala del reagente di lavaggio 2 ruotando e spezzando il tappo 5 Inserire la punta della fiala del reagente di lavaggio 2 nella camera 2 della cartuccia e comprimere la fiala finch non completamente vuota 6 Aprire la fiala del reagente di eluizione 3 ruotando e spezzando il t
42. zus tzlicher Probe wiederholen Die SPC IC erf llt die Akzeptanzkriterien nicht die Probe wurde nicht ordnungsgem verarbeitet oder die PCR ist gehemmt Fenster View Results Ergebnisse anzeigen im GeneXpert Dx System Bitte beachten Sie dass die SPC IC als CIC angezeigt wird EV INVALID UNG LTIG e CIC SPC IC FAIL NICHT BESTANDEN Sondenpr fung PASS BESTANDEN Test and Analyte Result Di Assay Name ma EV Version 2 Test Result INVALID Analyte EndPt Analyte Result Probe Name Check Result INVALID PASS FAIL PASS Legend 100 Wi 7 Ev Primary a gt vi 2 CIC Primary 8 S 60 a S 40 20 0 10 20 30 40 Cycles Abbildung 4 Ung ltiges Ergebnis Fenster View Results Ergebnisse anzeigen im GeneXpert Dx System Bitte beachten Sie dass die SPC IC als CIC angezeigt wird ERROR FEHLER Es kann nicht ermittelt werden ob EV Nukleins ure vorhanden ist oder nicht Test mit zus tzlicher Probe wiederholen Die Sondenpr fungskontrolle ist wahrscheinlich bedingt dadurch fehlgeschlagen dass das Reaktionsgef unsachgem bef llt ein Problem mit der Sondenintegrit t festgestellt oder der Test abgebrochen wurde EV NO RESULT KEIN ERGEBNIS CIC SPC IC NO RESULT KEIN ERGEBNIS Probe Check FAIL Sondenpr fung FEHLGESCHLAGEN NO RESULT KEIN ERGEBNIS Es kann nicht ermittelt werden ob EV Nuklei
43. 0 e Tween 20 Agua 66 300 5052 Rev G October 2009 Advertencias y precauciones Reactivo de diluci n 3 10 x 2 0 mL Sulfato am nico EDTA cido etilendiaminotetraac tico e Tris pH 7 0 Agua Reactivo de lisis 4 10 x 300 uL N acetil L cisteina Tiocianato de guanidina e N lauroilsarcosina e Citrato s dico pH 6 8 Agua Notas Se pueden solicitar las hojas de datos de seguridad de los materiales MSDS correspondientes a todos los reactivos suministrados con este equipo al servicio t cnico de Cepheid La seroalb mina bovina BSA contenida en este producto se ha fabricado exclusivamente a partir de plasma bovino recogido en los Estados Unidos Tambi n la BSA se fabrica en Estados Unidos No se aliment a los animales con prote nas de rumiante ni otras prote nas de origen animal los animales fueron sometidos a pruebas ante y post mortem Durante el procesamiento no se produjo mezcla alguna del material con otras materias de origen animal Almacenamiento y manipulaci n 28 fe Ca Guarde los cartuchos Xpert EV y los reactivos a 2 28 C No abra un cartucho hasta que est preparado para realizar la prueba Use el cartucho y los reactivos en los 30 minutos siguientes a la apertura del envase No utilice cartuchos o reactivos despu s de la fecha de caducidad expirada No utilice los reactivos si observa que est n turbios o se han decolorado Material necesario no suministr
44. 0 CVA6 134 30 30 30 30 29 29 35 0 0 343 0 98 0 175 050 1101 3 15 CVA9 320 30 30 30 30 30 30 34 4 o 0 00 o 0 00 0 61 1 77 CVA17 3 30 30 30 30 29 29 33 8 o 0 00 o 0 00 0 414 1 22 Total Agreement 120 120 120420 118 18 Agreement 100 00 100 00 100 00 Two samples did not give any GeneXpert result 16 300 5052 Rev G October 2009 Reproducibility In order to further stress the system a second study was performed An internal reproducibility study was conducted over four different days on multiple GeneXpert instruments 31 and ICORE modules 121 Two representative whole virus subtypes i e Coxsackievirus CVA9 and Enterovirus EV70 were spiked into human negative CSF to create simulated specimens at both 2x LOD and 4x LOD The negative sample was tested 20 times whereas two positive samples at the two concentrations were tested five 5 times per day Of the total samples tested there were two samples with Invalid and three samples with No Result by instrument software control definitions Of the 157 reportable results 155 were correctly classified Table 9 Summary of the second reproducibility study results The level of agreement the average Ct values for each concentration the associated standard deviations and percent coefficient of variation for each day are shown in the table below Total Agreement C Results Total Specimen ID Day 1
45. 0120 120 120 118 118 Accord 100 00 100 00 100 00 1 Deux chantillons n ont produit aucun r sultat GeneXpert Pour prouver davantage le syst me une seconde tude a t r alis e Une tude de reproductibilit interne a t men e pendant quatre jours distincts sur plusieurs appareils GeneXpert 31 et modules ICORE 121 Deux sous types repr sentatifs de tous les virus par exemple le virus Coxsackie CVA9 et l ent rovirus EV70 ont t tudi s en solution dans du LCR humain n gatif pour cr er des chantillons simul s 2 x LDD et 4 x LDD L chantillon n gatif a t test 20 fois alors que deux chantillons positifs ont t test s aux deux concentrations cinq 5 fois par jour Sur tous les chantillons test s les d finitions de contr le du logiciel de l appareil ont fourni deux chantillons Non valide et trois chantillons Pas de r sultat Sur les 157 r sultats significatifs 155 ont t classifi s correctement 38 300 5052 Rev G October 2009 Reproductibilite Tableau 9 R sum des r sultats de la deuxi me tude de reproductibilite Le niveau d accord les valeurs de Ct moyennes pour chaque concentration les d viations standard associ es et le pourcentage de variation pour chaque jour sont indiqu s dans le tableau ci dessous Accord total R sultats C Identifiant de Tous les l chantillon Jour Jou
46. 1 Ung ltig Tests insgesamt 5 1 negatives an Stelle eines positiven Ergebnisses 3 Tests insgesamt 5 1 Ung ltig 4 Tests insgesamt 6 1 Kein Ergebnis 300 5052 Rev G October 2009 61 Deutsch Quellenangaben 1 Viral Aseptic Meningitis Centers for Disease Control and Prevention National Center for Infectious Diseases Respiratory and Enteric Viruses Branch http www cdc gov ncidod dvrd revb enterovirus viral_meningitis htm Abruf 11 April 2006 2 Rotbart HA Viral meningitis Semin Neurol 2000 20 3 277 92 3 Romero JR Rotbart HA Enteroviruses In Murray PR Baron EJ eds Manual of Clinical Microbiology 8th edition Washington DC American Society for Microbiology 2003 1427 1438 4 Robinson CC Willis M Meagher A et al Impact of rapid polymerase chain reaction results on management of pediatric patients with enteroviral meningitis Pediatric Infectious Disease Journal 2002 21 283 6 5 Centers for Disease Control and Prevention Biosafety in microbiological and biomedical laboratories Richmond JY und McKinney RW eds 1993 HHS Publikationsnummer CDC 93 8395 6 Clinical and Laboratory Standards Institute formerly National Committee for Clinical Laboratory Standards Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections Approved Guideline Document M29 siehe letzte Ausgabe 7 Wright HT McAllister RM Ward R Mixed Meningitis Report of a Case with Isolatio
47. 15 25 300 5052 Rev G October 2009 9 English As indicated in Table 1b positive enterovirus results were obtained even when the highest level of potentially interfering substance was introduced into the assay Table b Results of study with potentially interfering endogenous substances tested in Xpert EV Interfering substance Concentration EV C None Control n 8 Not applicable 36 1 Protein n 4 1071 mg dL 38 2 WBC n 4 7140 cells mm3 37 2 Bloody tap Specimen 2 5 v blood 35 9 Bloody tap Specimen 2 2 5 v blood 35 0 Bloody tap Specimen 3 2 5 v v blood 35 3 Hemoglobin n 4 3 6 g dL 36 9 Performance Characteristics Clinical Performance Performance characteristics of the Xpert EV assay were determined in a multi site investigational study at six institutions To be enrolled in the trial a patient must have had a lumbar puncture because of meningitis symptoms and an EV test and or viral culture test ordered by the physician The patient must have had sufficient excess CSF volume greater than or equal to 0 5 mL and have given written informed consent Patient samples were excluded ifthe CSF for nucleic acid testing had been centrifuged or ifthe Xpert EV assay and assays for the clinical truth determination were not performed within the same freeze thaw cycle ofthe specimen Clinical history of the patients was also considered clinical signs and symptoms days since onset of sympt
48. 161 0 NA PASS A Disclaimer For In Vitro Diagnostic Use Only Positive Xpert EV results do not rule out other causes of meningitis including bacteria mycobacteria other viruses e g herpes family viruses arboviruses mumps virus etc and fungi P N Legend v EV Primary wi _ CIC Primary Fluorescence Figure 2 R sultat positif fen tre View Results Afficher les r sultats du GeneXpert Dx System Notez que le SPC IC est affich en tant que CIC 26 300 5052 Rev G October 2009 Interpretation des resultats NEGATIF Figure 3 L acide nucl ide cible d ent rovirus n est pas d tect mais le SPC satisfait aux crit res d acceptation fen tre View Results Afficher les r sultats du GeneXpert Dx System Notez que le SPC IC est affich en tant que CIC EV NEG CIC SPC IC PASS Probe Check PASS Contr le de la sonde R USSITE Des r sultats EV Xpert n gatifs n excluent pas que les ent rovirus sont une cause de m ningite mais qu ils n ont pas t d tect s Test and Analyte Result Assay Name Xpert EV Version 2 Test Result NEGATIVE Analyte Name EV CIC vi EV Primary vi 4 CIC Primary Figure 3 Resultat n gatif fen tre View Results Afficher les r sultats du GeneXpert Dx System Notez que le SPC IC est affich en tant que CIC 300
49. 2 2 months to 17 years Adults 0 0 100 0 10 10 100 0 5 5 100 0 27 27 18 years and older Overall 96 3 26 27 97 2 103 106 100 23 23 97 0 96 99 Viral cultures were performed in 73 7 320 434 of the eligible specimens the remaining had insufficient CSF for culture CSF samples from 263 subjects with sufficient excess volume were sent to a designated central laboratory for viral culture In addition viral cultures for 114 patient specimens were performed at the enrolling sites Of these 114 subjects 57 had viral cultures performed at both the enrolling sites and the central laboratory Fifty six of 57 subjects had concordant culture results one subject had discrepant local and central culture results The central laboratory used Super E Mix Shell Vials for viral culture and the cells were stained with pan enterovirus antibody The cells that were positive for the pan enterovirus antibody were further stained with indirect immuno fluorescence antibody for enterovirus identification Each enrolling site used its own standard procedure for viral culture 300 5052 Rev G October 2009 1 English Table 3a Prospective clinical samples evaluated against viral culture Of the 199 eligible prospective specimens 131 had viral culture results There were no discrepant results relative to enrolling sites and central laboratory viral culture testing The positive and negative agreements between the Xpert EV and viral culture are s
50. 2009 45 Deutsch Probensammlung und transport CSF in einem sterilen Beh lter sammeln und gem den Richtlinien der jeweiligen Institution ins Labor transportieren Proben bei 2 8 C lagern oder einfrieren falls der Test nicht innerhalb von 72 Stunden nach Entnahme durchgef hrt wird Die Proben d rfen maximal zweimal eingefroren und wieder aufgetaut werden Es ist nicht empfehlenswert die Proben zu zentrifugieren Prozedur Vorsichtshinweise Xpert EV Reagenzien nicht durch andere Reagenzien ersetzen Der Xpert EV Kartuschendeckel darf nur ge ffnet werden um Proben und Reagenzien hinzuzuf gen Eine Xpert EV Kartusche die nach dem Bef llen mit der Probe oder Reagenzien hinuntergefallen ist oder gesch ttelt wurde darf nicht in das Instrument geladen werden Kartuschen mit besch digtem Reagenzglas d rfen nicht geladen werden Gebrauchte Xpert EV Kartuschen nicht ffnen Gebrauchte Xpert EV Kartuschen nicht erneut verwenden Die Proben d rfen maximal zweimal eingefroren und wieder aufgetaut werden Keine zentrifugierten Proben verwenden Vorbereiten der Kartusche Laden der Probe und der Reagenzien in die Kartusche Abbildung 1 1 2 3 Eine Kartusche und die Reagenzien aus der Verpackung nehmen Die Ampulle mit dem Bindungsreagenz 1 durch Drehen und Abbrechen der Kappe ffnen Die Spitze der Ampulle mit dem Bindungsreagenz 1 in die Kartuschenkammer 1 einsetzen und so lange auf die Ampulle dr cken b
51. 5052 Rev G October 2009 23 Frangais les 72 heures suivant leur collecte Ne congelez et ne d congelez pas les chantillons plus de deux fois Il n est pas recommand de centrifuger l chantillon Proc dure Pr cautions Ne remplacez pas les r actifs EV Xpert par d autres r actifs N ouvrez pas le couvercle de la cartouche EV Xpert sauf pour ajouter un chantillon et des r actifs Ne chargez pas une cartouche EV Xpert qui est tomb e ou qui a t secou e apr s avoir ins r l chantillon et les r actifs Ne chargez pas une cartouche dont le tube de r action est endommag N ouvrez pas les cartouches EV Xpert utilis es Ne r utilisez pas les cartouches EV Xpert utilis es Ne congelez et ne d congelez pas les chantillons plus de deux fois N utilisez pas des chantillons qui ont t centrifug s Pr paration de la cartouche Pour ajouter l chantillon et les r actifs dans la cartouche Figure 1 1 2 3 10 Enlevez la cartouche et Les r actifs de l emballage Ouvrez l ampoule 1 de r actif de fixation en tordant et en d tachant la pointe Ins rez l embout de l ampoule 1 de r actif de fixation dans la chambre de la cartouche 1 et pressez l ampoule jusqu ce que tout le contenu soit vid Ouvrez l ampoule 2 de r actif de lavage en tordant et en d tachant la pointe Ins rez l embout de l ampoule 2 de r actif de lavage dans la chambre de la cartouche 2 et pressez l ampoule
52. 6 95 CI 91 9 99 4 Tabella 2b Campioni clinici depositati raccolti in maniera prospettica valutati contro diagnosi clinica E stato arruolato un totale di 235 pazienti retrospettivi idonei 122 pazienti avevano i risultati dei 6 laboratori per la valutazione della realt clinica La sensibilit e la specificit cliniche per Xpert EV sono illustrate nella tabella riportata sotto Diagnosi clinica 23 3 Xpert EV a o 96 Totali 23 99 1 Un paziente veniva definito come affetto da meningite EV diagnosi clinica se erano soddisfatti i seguenti criteri evidenza clinica coerente con la meningite risultati di laboratorio per colorazione gram del LCS coltura batterica del LCS glucosio nel LCS rapporto glicemia LCS concentrazione di proteine totali nel LCS conta leucocitaria nel LCS e rilevamento di un genoma EV nel liquido cerebrospinale o coltura EV di LCS positiva Sensibilit clinica 100 23 23 95 Cl 85 2 100 Specificit clinica 97 0 96 99 95 CI 91 4 99 4 300 5052 Rev G October 2009 Caratteristiche sulle prestazioni Tabella 2c Prestazioni cliniche del saggio Xpert EV con riferimento alla diagnosi clinica per eta Ciascuno dei 133 campioni clinici prospettici e 122 campioni clinici depositati raccolti in maniera prospettica sono stati raggruppati per et La sensibilit e la specificit cliniche di ogni gruppo di et sono illustrate nella tabella r
53. 7 3 33 A Coxsackie A10 2 81 A Coxsackie A12 19 95 A Coxsackie A14 0 10 A Coxsackie A16 0 002 A EV 7 0 16 B Coxsackie Ag 20 00 B Coxsackie B 4 00 B Coxsackie B2 0 20 B Coxsackie B3 0 028 B Coxsackie B4 0 40 B Coxsackie Bs 0 04 B Coxsackie B6 0 01 B Echo 0 10 B Echo 2 0 032 B Echo 3 200 00 B Echo 4 0 00032 B Echos 0 032 B Echo 6 200 00 B Echo 7 2 00 B Echo 8 0 10 B Echo 9 2 00 B Echo n 40 00 B Echo 12 1 58 B Echo 13 0 01 B Echo 14 0 0005 B Echo 15 0 0032 B Echo 16 0 0005 B Echo 17 0 05 B Echo 18 0 0002 B Echo 19 2 51 B Echo 20 0 032 B Echo 21 1 00 B Echo 24 0 02 B Echo 25 0 50 B Echo 26 0 032 B Echo 27 0 00032 B Echo 29 5 01 B Echo 30 0 01 B Echo 31 0 0032 B Echo 32 0 10 B Echo 33 0 05 B EV 69 0 0002 C Coxsackie An on C Coxsackie A13 13 27 Coxsackie A15 0 0032 Coxsackie A17 1 58 C Coxsackie A18 0 02 C Coxsackie A19 0 03 C Coxsackie A2o 0 002 C Coxsackie A21 0 03 Coxsackie A22 0 02 C Coxsackie A24 0 10 D EV 68 199 53 D EV 70 2 00 Poliovirus Poliovirus 1 2 00 Poliovirus Poliovirus 2 0 40 Poliovirus Poliovirus 3 20 00 100 300 5052 Rev G October 2009 Specificita analitica Caratteristiche sulle prestazioni Le sequenze dei primer e delle sonde utilizzate nel saggio Xpert EV non rilevano l acido nucleico estratto dai seguenti organismi che sono notoriamente la causa dei sintomi della meningite EBV HSV 1 HSV 2 HHV 6 HHV 7 AdV 2 morbillo parotite Parainf
54. An lisis totales 5 1 Inv lido 4 An lisis totales 6 1 Sin resultado 82 300 5052 Rev G October 2009 Bibliografia Bibliografia 1 Viral Aseptic Meningitis Centers for Disease Control and Prevention National Center for Infectious Diseases Respiratory and Enteric Viruses Branch http www cdc gov ncidod dvrd revb enterovirus viral_meningitis htm acceso el 11 de abril de 2006 2 Rotbart HA Viral meningitis Semin Neurol 2000 20 3 277 92 3 Romero JR Rotbart HA Enteroviruses In Murray PR Baron EJ eds Manual of Clinical Microbiology 8th edition Washington DC American Society for Microbiology 2003 1427 1438 4 Robinson CC Willis M Meagher A et al Impact of rapid polymerase chain reaction results on management of pediatric patients with enteroviral meningitis Pediatric Infectious Disease Journal 2002 21 283 6 5 Centros para el control y la prevenci n de enfermedades Biosafety in microbiological and biomedical laboratories Richmond JY and McKinney RW eds 1993 HHS Publication number CDC 93 8395 6 Instituto de Est ndares Clinicos y de Laboratorio anteriormente denominado Comit Nacional de Est ndares Clinicos y de Laboratorio Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections Approved Guideline Document M29 refer to latest edition 7 Wright HT McAllister RM Ward R Mixed Meningitis Report of a Case with Isolation of Haemophilus Influenz
55. Bakterien in der CSF vorliegen Wie auch bei molekularen Tests besteht immer die M glichkeit falsch positiver Ergebnisse In der Literatur wird von seltenen Meningitisf llen berichtet die sowohl durch Bakterien als auch durch Viren hervorgerufen werden 8 Die Leistung des Xpert EV Tests wurde nur anhand der mit dem Cepheid GeneXpert Dx System durchgef hrten Prozeduren gepr ft die in der Packungsbeilage beschrieben sind Diese Prozeduren sollten nicht ge ndert werden da dadurch die Leistung des Tests beeintr chtigt werden k nnte Der Xpert EV Test ist nur zum Nachweis von Enteroviren vorgesehen Bei einem negativen Testergebnis ist das Vorhandensein von Enteroviren nicht auszuschlie en Dieser Test schlie t nicht die M glichkeit einer durch Herpesviren oder durch Pilze hervorgerufenen Meningitis aus um diese Infektionen ausschlie en zu k nnen sind weitere Tests erforderlich NAT Wie auch bei anderen Diagnoseverfahren sollten die Ergebnisse des Xpert EV Tests lediglich erg nzend zu den klinischen Beobachtungen und den sonstigen dem Arzt zur Verfiigung stehenden Informationen verwendet werden Durch ein positives Xpert EV Testergebnis werden andere Ursachen der Meningitis wie Bakterien Mykobakterien andere Viren z B Viren aus der Herpesfamilie Arboviren Mumpsviren etc oder Pilze nicht ausgeschlossen Hemmstoffe Es wurden Studien mit potenziellen Hemmstoffen durchgef hrt die in CSF vorliegen Getestet wurden Leukozy
56. C Coxsackie A13 13 27 C Coxsackie A15 0 0032 C Coxsackie A17 1 58 C Coxsackie A18 0 02 C Coxsackie A19 0 03 e Coxsackie A20 0 002 E Coxsackie A21 0 03 E Coxsackie A22 0 02 E Coxsackie A24 0 10 D EV 68 199 53 D EV 70 2 00 Poliovirus Poliovirus 2 00 Poliovirus Poliovirus 2 0 40 Poliovirus Poliovirus 3 20 00 1 WARNING When working with Polioviruses ensure that appropriate biosafety level containment procedures are followed 14 300 5052 Rev G October 2009 Performance Characteristics Analytical Specificity The primer and probe sequences used in the Xpert EV assay do not detect nucleic acid extracted from the following organisms known to cause meningitis like symptoms EBV HSV 1 HSV 2 HHV 6 HHV 7 AdV 2 Measles Mumps Parainfluenza 1 3 Influenza A Influenza B VZV CMV Group B Streptococcus Haemophilus influenzae B H influenzae non B Escherichia coli Neisseria meningitides Citrobacter freundii and Citrobacter koseri nor did the Xpert EV assay generate any detectable amplicons when whole organisms of the listed pathogens were processed through the Xpert EV cartridge The table below presents the organisms tested and the concentration for each organism tested Table 6 Analytical specificity for the Xpert EV assay Whole organisms were tested for specificity in the Xpert EV assay and the concentrations of the organisms tested are shown in the table below
57. Common or Usual Name Xpert EV Assay Intended Use The Cepheid Xpert EV assay is a reverse transcription polymerase chain reaction RT PCR using the GeneXpert Dx System for the presumptive qualitative detection of enterovirus EV RNA in cerebrospinal fluid CSF specimens from individuals with signs and symptoms of meningitis This test in conjunction with other laboratory results and clinical information may be used as an aid in the laboratory diagnosis of enterovirus infection in patients with a clinical suspicion of meningitis or meningoencephalitis Assay performance characteristics have not been established for immunocompromised or immunosuppressed patients CAUTION The results obtained with the Xpert EV assay should be used only as an adjunct to clinical observations and other information available to the physician Positive Xpert EV results do not rule out other causes of meningitis including bacteria mycobacteria other viruses e g herpes family viruses arboviruses mumps virus etc and fungi Summary and Explanation The Cepheid Xpert EV assay is a reverse transcription polymerase chain reaction RT PCR assay used to detect enterovirus RNA in cerebrospinal fluid CSF specimens Enterovirus is taxonomically classified as those viruses consisting of polioviruses coxsackieviruses echoviruses and enteroviruses 3 Enteroviruses cause a wide range of infections and are most often spread through direct contact with
58. Des tudes ont t r alis es avec des substances interf rentes potentielles rencontr es dans le LCR Ces substances ont t test es avec des globules blancs des prot ines du sang total et de l h moglobine Le contenu des leucocytes a t test gr ce des leucocytes cellules leuc miques humaines K562 tudi s en solution dans du LCR Pour traiter les interf rences potentielles provenant de ponctions sanglantes des chantillons de LCR humain contamin s avec P P P g plusieurs niveaux de sang ont t test s jusqu 125 000 h maties mm3 Les gammes de concentration et les substances interf rentes trouv es dans du LCR normal sont indiqu es dans le Tableau 1a Les gammes ventuelles trouv es dans le LCR en cas de m ningite sont galement indiqu es Chaque substance a t tudi e en solution des niveaux pouvant tre rencontr s chez des patients sains ou atteints de m ningite Tous les tests ont t r alis s avec du LCR tudi en solution avec le s rotype d ent rovirus CVA9 80 DICTsy ml 3x LDD Tableau 1a Echantillons de substances endog nes potentiellement interf rentes test s dans le Xpert EV Gamme de Gamme de concentration concentrationtrouv e LCR potentielle en cas de Substance dans du LCR normal m ningite chantillon test avec le Xpert EV Concentrations test es Leucocytes o scellules mmi 5 5 000 cellules mm3 Cellules K562 Cellules mm3 0 3 57 35 7 357 7140 P
59. GeneXpert P d By CEPHEID INNOVATION Xpert EV GXEV 100N 10 E Cepheid in Vire Diagnostic Medical Davies CE 300 5052 Rev G October 2009 Copyright Cepheid Cepheid the Cepheid logo GeneXpert and Xpert are trademarks of Cepheid FAM is a trademark of Applera Corporation Texas Red and is a registered trademark of Molecular Probes Inc Armored RNA is a registered trademark of Asuragen Inc Armored RNA is a patented technology jointly developed by Asuragen Inc and Cenetron Diagnostics LLC under U S Patent Nos 5 677 124 5 919 625 5 939 262 and other patents pending This product is sold under license from Molecular Probes Inc THE PURCHASE OF THIS PRODUCT ALLOWS THE PURCHASER TO USE IT FOR THE PERFORMANCE OF DIAGNOSTIC SERVICES FOR HUMAN IN VITRO DIAGNOSTICS NO GENERAL PATENT OR OTHER LICENSE OF ANY KIND OTHER THAN THIS SPECIFIC RIGHT OF USE FROM PURCHASE IS GRANTED HEREBY NO OTHER RIGHTS ARE CONVEYED EXPRESSLY BY IMPLICATION OR BY ESTOPPEL TO ANY OTHER PATENTS FURTHERMORE NO RIGHTS FOR RESALE ARE CONFERRED WITH THE PURCHASE OF THIS PRODUCT CEPHEID CEPHEID EUROPE 904 CARIBBEAN DRIVE VIRA SOLELH SUNNYVALE CA 94089 1189 81470 MAURENS SCOPONT FRANCE TEL 408 541 4191 TEL 33 5 63 82 53 00 Fax 408 541 4192 FAX 33 5 63 8253 01 TECHNICAL SUPPORT TOLL FREE 888 838 3222 TECHNICAL SUPPORT 33 5 63 82 53 19 English In Vitro Diagnostic Medical Device Proprietary Name Xpert EV
60. L Ammonium sulfate EDTA ethylenediaminetetraacetic acid e Tris pH 7 0 Water Lysis Reagent 4 10 x 300 uL e N acetyl L cysteine e Guanidine thiocyanate N lauroylsarcosine Sodium citrate pH 6 8 Water Notes Material Safety Data Sheets MSDS for all reagents provided in this assay are available upon request from Cepheid Technical Support The bovine serum albumin BSA in this product was produced exclusively from bovine plasma sourced in the United States The manufacturing of the BSA is also performed in the United States No ruminant protein or other animal protein was fed to the animals the animals passed ante and post mortem testing During processing there was no commingling of the material with other animal materials Storage and Handling Store the Xpert EV cartridges and reagents at 2 28 C Do not open a cartridge until you are ready to perform testing Use the cartridge and reagents within 30 minutes after opening the package Do not use cartridges or reagents that have passed the expiration date Do not use any reagents that have become cloudy or discolored Materials Required but Not Provided GeneXpert Dx System catalog number varies by configuration GeneXpert instrument computer barcode scanner and p y 8 y g P gt puter gt Operator Manual Printer See GeneXpert Dx System Operator Manual for compatibility guidelines Xpert EV Assay CD Part No 950 0125 200 uL pipette
61. Results Afficher les r sultats de GeneXpert Dx System le SPC IC est affich en tant que CIC dans la colonne Analyte Name Nom de l analyte ATTENTION Les r sultats obtenus avec le test EV Xpert doivent venir uniquement en compl ment des observations cliniques et des autres informations la disposition du m decin Des r sultats EV Xpert positifs n excluent pas d autres causes de m ningite y compris les bact ries les mycobact ries d autres virus par exemple les virus de la famille des herp s les arbovirus le virus des oreillons etc etles champignons POSITIF Figure 2 L acide nucl ide cible de l ent rovirus est d tect fen tre View Results Afficher les r sultats du GeneXpert Dx System Notez que le SPC IC est affich en tant que CIC EV POS CIC SPC IC NA lorsque la concentration de l ent rovirus est lev e la RT PCR pour le SPC doit tre supprim e Probe Check PASS Contr le de la sonde R USSITE Des r sultats EV Xpert positifs n excluent pas d autres causes de m ningite y compris les bact ries les mycobact ries d autres virus par exemple les virus de la famille des herp s les arbovirus le virus des oreillons etc et les champignons Test and Analyte Result Detail Errors Assay Name Xpert EV Version 2 Test Result SH 14 A Was Analyte Ct EndPt Analyte Result Probe A Name Check BA Result A EV 31 6 456 0 POS PASS A CIC 35 4
62. Rev G October 2009 Limitations Limitations Results from the Xpert EV assay should be interpreted in conjunction with other laboratory and clinical data available to the clinician An Xpert EV assay positive result does not rule out the presence of another pathogen like bacteria in CSF As with any molecular assay false positive results are always a possibility Rare occurrences of simultaneous mixed bacterial viral meningitis have been reported in the literature The performance of the Xpert EV assay was validated using the procedures provided in this package insert and with the Cepheid GeneXpert Dx System only Modifications should not be made to these procedures as they might alter the performance of the test The Xpert EV assay is for the detection of enterovirus only Negative test results do not rule out the presence of enterovirus This test does not rule out the possibility of Herpes induced meningitis or fungal meningitis additional testing is required to rule out these infections are As with other diagnostic procedures the results obtained with the Xpert EV Assay should be used only as an adjunct to clinical observation and other information available to the physician Positive Xpert EV results do not rule out other causes of meningitis including bacteria mycobacteria other viruses e g herpes family viruses arboviruses mumps virus etc and fungi Interfering Substances Studies were conducted with potential i
63. S NA NA NA NA NA CV NA NA NA NA NA CAg 2X LOD Concordanza totale als 5 5 als 5 5 18 20 90 Media 36 65 36 54 36 53 36 54 36 56 DS 0 56 0 46 0 21 0 69 0 48 CV 1 53 1 26 0 57 1 89 1 31 CA9 4X LOD Concordanza totale 5 5 5 5 5 5 ala 19 19 190 Media 34 98 35 56 35 52 35 03 35 28 DS 0 53 0 67 0 7 0 3 0 6 CV 1 52 1 88 1 97 0 86 1 70 EV70 2XLOD Concordanza totale 5 5 5 5 5 54 5 5 20 20 100 Media 37 38 37 3 37 55 36 88 37 2 DS 1 78 0 74 2 01 0 81 1 3 CV 4 76 1 98 5 35 2 20 3 49 EV70 4X LOD Concordanza totale 5 5 5 5 5 5 5 5 20 20 100 Media 36 50 36 60 36 12 35 94 36 29 DS 0 58 0 97 0 29 0 84 0 72 CV 1 59 2 65 0 80 2 34 1 98 Numero di strumenti usati 10 n 10 10 31 Numero di moduli usati 40 41 41 40 121 Corse totali 21 2 Nessun risultato 1 Non valido Corse totali 5 1 risultato negativo anzich positivo 3 Corse totali 5 1 Non valido 4 Corse totali 6 1 Nessun risultato 300 5052 Rev G October 2009 103 Italiano Riferimenti bibliografici 1 Viral Aseptic Meningitis Centers for Disease Control and Prevention National Center for Infectious Diseases Respiratory and Enteric Viruses Branch http www cdc gov ncidod dvrd revb enterovirus viral_meningitis htm accessed April 11 2006 2 Rotbart HA Viral meningitis Semin Neurol 2000 20 3 277 92 3 Romero JR Rotbart HA Enteroviruses In Murray PR Baron EJ eds Manual of Clinical Microbiology 8th edition
64. SPC IC El SPC IC es un ARN de pseudovirus encapsidado en forma de perlas secas y est incluido en cada cartucho El SPC IC verifica la adecuada lisis del EV objetivo y el adecuado procesamiento de la muestra y detecta cualquier tipo de interferencia en el ensayo Se mezcla con la muestra para controlar el adecuado procesamiento de la misma y la integridad del ensayo TI RCP El SPC IC se considera aprobado si cumple los criterios de aceptaci n validados Tenga en cuenta que en el software del sistema GeneXpert Dx el nombre empleado para el SPC IC es CIC Probe check Comprobaci n de sonda Antes de iniciar la reacci n RCP el sistema realiza una comprobaci n de la sonda en el EV objetivo y en el SPC IC para verificar la rehidrataci n de las perlas de reactivo y el llenado del tubo de reacci n Cada una de las comprobaciones de sonda se considera aprobada si cumple los criterios de aceptaci n validados External Controls Controles externos Los controles externos deben utilizarse para formaci n prueba de evaluaci n y CC externo del sistema GeneXpert Dx Los controles externos deben emplearse de acuerdo con las organizaciones de acreditaci n locales estatales y federales seg n corresponda Los controles externos pueden prepararse diluyendo la cepa Coxsackievirus A9 Bozek o cepa tipo Coxsackievirus A6 C G Gdula con LCR de paciente negativo o con LCR sint tico negativo por ejemplo ref HSP 515 deSeraCare Life Sciences Inc
65. Sample ID box scan or type the sample ID Make sure you type the correct sample ID The sample ID is associated with the test results and is shown in the View Results window and all the reports 7 Click Start Test In the dialog box that appears type your password 8 Open the instrument module door with the blinking green light and load the cartridge 9 Close the module door Be sure the green light is solid green 10 When the test is finished the instrument module light turns off 11 Wait until the system releases the door lock before opening the module door and removing the cartridge 12 Follow your laboratory safety guidelines for discarding the cartridge Viewing and Printing Results For detailed instructions on how to view and print the results see the GeneXpert Dx System Operator Manual Quality Control Quality control requirements must be performed in conformance with local state and or federal regulations or accreditation requirements and your laboratory s standard Quality Control procedures q y y P Each test includes two internal controls to validate the assay Sample processing control internal control and probe check Test samples are controlled according to the following procedures Sample processing control internal control SPC IC The SPC IC is an encapsidated RNA pseudovirus in the form of a dry bead and is included in each cartridge The SPC IC verifies adequate lysis of target EV and sample processing and det
66. a 14 de sangre Hemoglobina 12 18 g dL No aplicable excepto en Hemoglobina polvo HgB g dL gl bulos rojos punciones hem ticas ferroso a adida al LCR 0 0 36 0 71 2 14 3 6 Representa aproximadamente v v de sangre en LCR respectivamente 0 2 5 5 15 25 Como se indica en Tabla 1b se obtuvieron resultados positivos para enterovirus incluso cuando se introdujo en el ensayo el nivel m s elevado de sustancia potencialmente interferente Tabla 1b Resultados del estudio con sustancias end genas potencialmente interferentes comprobadas en Xpert EV Sustancia interferente Concentraci n C de EV Ninguna Control n 8 No aplicable 36 1 Prote na n 4 1071 mg dL 38 2 Gl bulos rojos n 4 7 140 c lulas mm3 37 2 Punci n hem tica Muestra 1 2 5 v de sangre 35 9 Punci n hem tica Muestra 2 2 5 v de sangre 35 0 Punci n hem tica Muestra 3 2 5 v de sangre 35 3 Hemoglobina n 4 3 6 g dl 36 9 Caracter sticas de funcionamiento Resultados cl nicos Las caracter sticas de funcionamiento del ensayo Xpert EV se determinaron en un estudio de investigaci n multicentro realizado en seis instituciones Para ser incluido en el ensayo al paciente se le deb a haber realizado una punci n lumbar como consecuencia de la aparici n de s ntomas de meningitis y el m dico deb a haber solicitado una prueba de EV y o un cultivo viral El paciente deb a haber tenido un exceso suficiente de
67. abricant Cepheid 904 Caribbean Drive Sunnyvale CA 94089 1189 USA Tel 1 408 541 4191 Fax 1 408 541 4192 EC REP Repr sentant agr Cepheid Europe Vira Solelh 81470 Maurens Scopont France T l 33 563 82 53 00 Fax 33 563 82 53 01 Courrier lectronique cepheid cepheideurope fr C 1vD 300 5052 Rev G October 2009 Tableau des symboles 41 Frangais 42 300 5052 Rev G October 2009 Deutsch Medizinisches Ger t zur In vitro Diagnostik Markenname Xpert EV blicher Name Xpert EV Test Verwendungszweck Beim Cepheid Xpert EV Test der mit dem GeneXpert Dx System ausgef hrt wird handelt es sich um einen Test bei dem mittels reverser Transkriptase Polymerase Kettenreaktion RT PCR der mutma liche qualitative Nachweis von enteroviraler EV RNA in Proben zerebrospinaler Fl ssigkeit CSF von Personen mit Anzeichen und Symptomen von Meningitis gef hrt wird Dieser Test kann in Verbindung mit anderen Laborergebnissen und klinischen Informationen unterst tzend bei der Labordiagnose von enteroviralen Infektionen bei Patienten mit klinischem Verdacht auf Meningitis oder Meningoenzephalitis eingesetzt werden Die Leistungsmerkmale des Tests wurden nicht f r Patienten mit geschw chtem Immunsystem oder immunsupprimierte Patienten nachgewiesen VORSICHT Die Ergebnisse des Xpert EV Tests sollten lediglich erg nzend zu den klinischen Beobachtungen und den sonstigen dem Arzt zur
68. ado Sistema GeneXpert Dx el n mero de referencia var a seg n la configuraci n Instrumento GeneXpert ordenador esc ner de c digos de barras y Manual del operador Impresora consulte el Manual del operador del sistema GeneXpert Dx para conocer las indicaciones sobre compatibilidad CD del ensayo Xpert EV Ref 950 0125 Pipeta de 200 pL Puntas de pipeta est riles de 200 pL Advertencias y precauciones Para uso diagn stico in vitro exclusivamente El reactivo de lisis contiene tiocianato de guanidina que puede formar compuestos altamente reactivos si se combina con lej a Si el l quido que contiene este reactivo se derrama debe limpiar el rea con detergente de laboratorio y agua Trate todas las muestras biol gicas incluyendo los cartuchos como posibles agentes de transmisi n de infecciones Dado que es imposible determinar los posibles focos de infecci n todas las muestras de origen humano se deben tratar teniendo en cuenta las precauciones universales Las directrices para la manipulaci n de muestras se pueden consultar en U S Center for Disease Control and Prevention Centros para el Control y la Prevenci n de Enfermedades de EE UU y el Clinical and Laboratory Standards Institute Instituto de Est ndares Cl nicos y de Laboratorio anteriormente National Committee for Clinical Laboratory Standards Comit Nacional de Control de Est ndares de Laboratorio Deseche todos los materiales peligrosos o b
69. ae B H influenzae non B Escherichia coli Neisseria meningitidis Citrobacter freundii et Citrobacter koseri le test EV Xpert ne g n re pas d amplicon detectable lorsque tous les organismes des agents pathog nes r pertori s sont trait s par le biais de la cartouche EV Xpert Le tableau ci dessous pr sente les organismes test s et leur concentration Tableau 6 Sp cificit analytique du test EV Xpert La sp cificit de tous les organismes a t test e dans le test EV Xpert et les concentrations des organismes test s sont indiqu es dans le tableau ci dessous Organisme Concentration test HHV 6 3 1x 106 particules HHV 7 1 4 x 107 particules CMV 700 DICT VEB 140 DICT HSV 1 1 4 x 10 DICT HSV 2 1 4 x 10 DICT AdV 2 1 4 x 10 DICT Rougeole 700 DICT Oreillons 1 4 x 104 DICT Parainfluenza 1 1 4 x 10 DICT o Parainfluenza 2 7x10 DICT Parainfluenza 3 1 4 x10 DICT Grippe A 3 5 X10 DICT y Grippe B 3 5 X10 DICT y VZV 14 DICT 9 Streptocoques du groupe Bs 7x 10 cellules H influenzae B 7 x 10 cellules H influenzae non B 7 x 10 cellules E coli 7 x 108 cellules N meningitidis 7 x 10 cellules C freundii 7x 10 cellules C koseri 7X 10 cellules 36 300 5052 Rev G October 2009 Caracteristiques des performances Sensibilite analytique La sensibilit analytique
70. ae Type B and ECHO Virus Type 9 from the Cerebrospinal Fluid New England Journal of Medicine 1962 267 142 144 8 Sferra TJ Pacini DL Simultaneous recovery of bacteria and viral pathogens from cerebrospinal fluid Pediatric Infectious Disease Journal 1988 7 552 556 9 Dronkert ML Ketel AG de Groot R Simultaneous occurrence of group B Streptococcus and echovirus 20 European Journal of Pediatrics 1996 155 915 Asistencia Si desea obtener asistencia puede ponerse en contacto con Cepheid mediante los siguientes datos de contacto No olvide facilitar el n mero de serie del instrumento y el Id del lote de reactivos si realiza una llamada o env a un correo electr nico Estados Unidos Para acceder al servicio t cnico utilice los siguientes datos de contacto Tel 1 888 838 3222 Correo electr nico techsupport cepheid com Puede ponerse en contacto con Cepheid por tel fono de lunes a viernes y de 6 a m a 5 p m hora del Pac fico Uni n Europea Para acceder al servicio t cnico utilice los siguientes datos de contacto Tel 33 563 82 53 19 Correo electr nico techsupport cepheideurope fr Otras oficinas P ngase en contacto con su representante local de Cepheid 300 5052 Rev G October 2009 83 Espanol Tabla de simbolos u 3 o o o Significado N mero de referencia Producto sanitario para diagn stico in vitro No reutilizar Precauci n consultar el documento adjunto
71. alcul s et indiqu s dans le tableau ci dessous R sultat du Xpert EV Tranche d ge Nombre de cas Nombre de cas ann es Sexe positifs n gatifs Total lt 1 M 34 29 3 82 70 7 116 F 26 28 3 66 71 7 92 1 5 M 8 25 0 24 75 0 32 F 3 11 1 24 88 9 27 6 a10 M 3 31 4 24 68 6 35 F 3 17 6 14 82 4 17 nal M 8 33 3 16 66 7 24 F 3 15 0 17 85 0 20 16 21 M 3 20 0 12 80 0 15 F 3 25 0 9 75 0 12 gt 21 M 2 10 0 18 90 0 20 F 3 12 5 21 87 5 24 Total 107 24 7 327 75 3 434 Test de r activit analytique s rotype d ent rovirus Au total 60 s rotypes d ent rovirus ont t test s avec le test EV Xpert Chaque s rotype constituant le stock viral a t dilu en trois r plicats la LDD pr sum e Les dilutions ont t r alis es dans un m lange d chantillons humains n gatifs aux ent rovirus La sensibilit analytique estim e est indiqu e dans le Tableau 5 ci dessous 34 300 5052 Rev G October 2009 Caracteristiques des performances Tableau 5 Sensibilit analytique estim e Soixante s rotypes ont t test s et les DICT s9 ml estim s d tect s dans ces s rotypes sont indiqu s dans le tableau ci dessous Esp ces S rotype DICT ml estim A Coxsackie A3 5 01 A Coxsackie A5 12 59 A Coxsackie A6 12 59 A Coxsackie A7 3 33 A Coxsackie A10 2 81 A Coxsackie A12 19 95 A Coxsackie A14 0 10 A Coxsackie A16 0 002 A
72. am de LCR cultivo bacteriano de LCR glucosa en LCR relaci n glucosa en sangre LCR concentraci n de prote na total de LCR recuento leucocitario de LCR y detecci n de un genoma de EV en LCR o cultivo positivo de EV en LCR Sensibilidad cl nica 100 23 23 95 Cl 85 2 100 Especificidad clinica 97 0 96 99 95 CI 91 4 99 4 300 5052 Rev G October 2009 75 Espanol Tabla 2c Resultados clinicos del ensayo Xpert EV en referencia al Diagn stico clinico por edad Las 133 muestras prospectivas y las 122 muestras clinicas recogidas prospectivamente se agruparon por edades La sensibilidad yespecificidad clinica de cada grupo de edad se muestra en la siguiente tabla Muestras clinicas prospectivas Muestras clinicas recogidas prospectivamente Edad Sensibilidad clinica Especificidad clinica Sensibilidad cl nica Especificidad cl nica Neonatal 100 0 14 14 96 0 24 25 100 0 4 4 90 0 18 20 edad inferior a 2 meses Pedi trica 92 3 12 13 97 2 69 71 100 0 14 14 98 1 51 52 2 meses a 17 a os Adulta 0 0 100 0 10 10 100 0 5 5 100 0 27 27 mayores de 18 afios Total 96 3 26 27 97 2 103 106 100 23 23 97 0 96 99 Se realizaron cultivos virales en el 73 7 320 434 de las muestras elegibles el resto no disponfan de suficiente LCR para realizar un cultivo Las muestras de LCR de 263 sujetos con suficiente exceso de volumen fueron enviadas a un laboratorio central designado para
73. anate qui peut former des compos s hautement r actifs lorsqu elle est combin e avec de l eau de Javel Si du liquide contenant ce r actif est renvers nettoyez la zone avec du d tergent de laboratoire et de l eau Traitez tous les chantillons biologiques y compris les cartouches comme s ils taient susceptibles de transmettre des agents infectieux Tous les chantillons humains doivent tre trait s avec des pr cautions identiques car il est souvent impossible de savoir lequel peut tre infectieux Les U S Centers for Disease Control and Prevention centres am ricains pour le contr le et la pr vention des maladies et le Clinical and Laboratory Standards Institute Institut des normes cliniques et de laboratoire anciennement National Committee for Clinical Laboratory Standards tiennent disposition des directives concernant la manipulation des chantillons Eliminez toutes les substances dangereuses ou biologiquement contamin es conform ment aux directives de votre institution Jetez toutes les substances de mani re acceptable et s re conform ment aux exigences f d rales nationales et locales Collecte d chantillons et transport Pr levez le LCR dans un r cipient st rile et transportez le dans le laboratoire conform ment aux consignes d utilisation standard de votre institution Conservez les chantillons entre 2 et 8 C jusqu ce que vous les testiez ou congelez les si le test n est pas r alis dans 300
74. appo 7 Inserire la punta della fiala del reagente di eluizione 3 nella camera 3 della cartuccia e comprimere la fiala finch non completamente vuota 8 Utilizzando la pipetta da 200 uL aggiungere 140 uL del reagente di lisi 4 alla camera 4S della cartuccia Gettare il flacone del reagente di lisi 4 9 Utilizzando la pipetta da 200 pL aggiungere 140 uL del campione alla camera 4S della cartuccia Per impedire la formazione di grandi bolle d aria accertarsi di tenere il puntale per pipetta sulla parte superiore della camera e dispensare il campione lentamente 10 Chiudere il coperchio della cartuccia Importante accertarsi di caricare la cartuccia nello strumento GeneXpert Dx e avviare l analisi entro 30 minuti dall aggiunta dei reagenti 1 Reagente legante 2 Reagente di lavaggio 3 Reagente di eluizione 45 Reagente di lisi e campione Figura 1 Cartuccia Xpert EV vista superiore 88 300 5052 Rev G October 2009 Controllo di qualit Avvio dell analisi Importante prima di avviare l analisi accertarsi che la definizione del saggio Xpert EV sia importata nel software vedere le istruzioni fornite nel CD del saggio Se non si possiede il CD del saggio Xpert EV contattare l Assistenza tecnica Cepheid Questa sezione elenca i passaggi di base dell esecuzione dell analisi Per istruzioni dettagliate vedere il Manuale dell operatore di GeneXpert Dx System 1 Accendere il computer quindi accendere
75. arenta y un pacientes no cumplieron los criterios de inclusi n en el estudio y fueron eliminados del an lisis dejando asi 434 sujetos analizables de los cuales 255 dieron resultados para todas las pruebas descritas anteriormente Tabla 2a Muestras clinicas prospectivas evaluadas con respecto al Diagn stico clinico Se incluyeron un total de 199 pacientes prospectivos elegibles 133 pacientes dieron los 6 resultados para la evaluaci n de la verdad clinica Los datos de sensibilidad y especificidad clinica para Xpert EV se muestran en la siguiente tabla Diagn stico clinico 26 3 Xpert EV E 1 103 Totales 27 106 Sensibilidad cl nica 96 3 26 27 95 Cl 81 0 99 9 Especificidad cl nica 97 2 103 106 95 Cl 91 9 99 4 Tabla 2b Muestras cl nicas recogidas prospectivamente y evaluadas con respecto al Diagn stico cl nico Se incluyeron un total de 235 pacientes retrospectivos elegibles 122 pacientes dieron los 6 resultados para la evaluaci n de la verdad cl nica Los datos de sensibilidad y especificidad cl nica para Xpert EV se muestran en la siguiente tabla Diagn stico clinico 23 3 Xpert EV o 96 Totales 23 99 Se consider que un paciente presentaba meningitis asociada a EV Diagn stico clinico si se cumpl an los siguientes criterios evidencia clinica consistente con la meningitis resultados de laboratorio para tinci n de Gr
76. ary 3 i CIC Primary Gi 80 A a A A g a 20 2 Figure 4 Invalid Result GeneXpert Dx System View Results Window Note that the SPC C is displayed as CIC ERROR The presence or absence of EV target nucleic acid cannot be determined repeat test with extra specimen The Probe Check control failed probably due to the reaction tube being filled improperly a probe integrity problem was detected or the assay aborted EV NO RESULT e CIC SPC IC NO RESULT Probe Check FAIL NO RESULT The presence or absence of EV target nucleic acid cannot be determined repeat test with extra specimen Insufficient data were collected to produce a test result for example the operator stopped a test that was in progress EV NO RESULT e CIC SPC IC NO RESULT Probe Check NA Reasons to Repeat the Assay Repeat the assay with fresh sample if the following results are generated e An INVALID result indicates that the controls SPC IC failed The sample was not properly processed or PCR is inhibited An ERROR result indicates that the Probe Check control failed and the assay was aborted possibly due to the reaction tube being filled improperly a reagent probe integrity problem was detected or because the maximum pressure limits were exceeded ANO RESULT indicates that insufficient data were collected For example the operator stopped a test that was in progress 8 300 5052
77. au 3a chantillons cliniques prospectifs valu s par rapport la culture virale Sur les 199 chantillons prospectifs admissibles 131 ont produit des r sultats de culture virale Aucun r sultat divergent relatif au test de culture virale des sites de s lection et du laboratoire central n a t produit Les accords positifs et n gatifs entre le test EV Xpert et la culture virale sont indiqu s dans le tableau ci dessous Culture virale 8 13 Xpert EV o 110 Total 8 123 Accord positif 100 0 8 8 95 Cl 63 1 100 0 Accord n gatif 89 4 110 123 CI 82 65 94 3 Tableau 3b Echantillons cliniques collect s de mani re prospective conserv s et valu s par rapport la culture virale Sur les 235 chantillons r trospectifs admissibles 211 ont produit des r sultats de culture virale Les accords positifs et n gatifs entre le test EV Xpert et la culture virale sont indiqu s dans le tableau ci dessous Culture virale Xpert EV 22 35 1 153 Total 23 188 Accord positif 95 7 22 23 95 CI 78 1 99 9 Accord n gatif 81 4 153 188 95 CI 75 1 86 7 300 5052 Rev G October 2009 Frangais Tableau 4 Valeurs attendues du test EV Xpert pour une population pr sentant des signes et des sympt mes de m ningite Les 434 patients admissibles sont regroup s par ge et par sexe le nombre et le pourcentage de cas positifs sont c
78. auf Die positiven und negativen Ubereinstimmungen zwischen dem Xpert EV und der Viruskultur sind in der folgenden Tabelle dargestellt Viruskultur Xpert EV 22 35 1 153 Insgesamt 23 188 Positive bereinstimmung 95 7 22 23 95 CI 78 1 99 9 Negative bereinstimmung 81 4 153 188 95 Cl 75 1 86 7 56 300 5052 Rev G October 2009 Leistungsmerkmale Tabelle 4 F r Xpert EV erwartete Werte bei den Personen deren Anzeichen und Symptome auf eine Meningitis hinwiesen Die 434 geeigneten Patienten wurden nach Alter und Geschlecht gruppiert Die Zahl und der prozentuale Anteil der positiven F lle wurden ermittelt und in der folgenden Tabelle dargestellt Xpert EV Ergebnis Alter Jahre Geschlecht Positiv n Negativ n Insgesamt lt 1 M 34 29 3 82 70 7 116 F 26 28 3 66 71 7 92 1 5 M 8 25 0 24 75 0 32 F 3 11 1 24 88 9 27 6 10 M 3 31 4 24 68 6 35 F 3 17 6 14 82 4 17 1 15 M 8 33 3 16 66 7 24 F 3 15 0 17 85 0 20 16 21 M 3 20 0 12 80 0 15 F 3 25 0 9 75 0 12 gt 21 M 2 10 0 18 90 0 20 F 3 12 5 21 87 5 24 Insgesamt 107 24 7 327 75 3 434 Analytische Reaktivit t Enterovirus Serotyp Testverfahren Insgesamt wurden 60 Enterovirus Serotypen mit dem Xpert EV Test getestet F r jeden Serotyp wurde der Virus berstand unter Anwendung der angenommenen Nachweisgrenze in drei Replikaten verd nnt Die Verd nnungen wur
79. ch zum GeneXpert Dx System zu finden Der Xpert EV Test ist zum Nachweis von enteroviraler EV RNA enterovirales Genom 5 untranslatierte Region UTR zwischen Nukleotid 452 und 596 in CSF Proben vorgesehen Der Test arbeitet zum gleichzeitigen Nachweis von Nukleins uren in einer Zielsequeur in der EV RNA und der Probenverarbeitungskontrolle internen Kontrolle SPC IC mit Reagenzien Primern und Sonden Er beinhaltet die SPC IC um eine angemessene Verarbeitung des Zielvirus sicherzustellen Der Test kontrolliert ob im RT PCR Test Inhibitoren vorhanden sind um zu verhindern dass es f lschlicherweise zu einem negativen Ergebnis kommt Bitte beachten Sie dass in der Software des GeneXpert Dx Systems CIC die Bezeichnung f r die SPC IC ist Der Test umfasst ferner eine Kontrolle zur Sondenpr fung welche die Rehydrierung der Reagenzien die unversehrtheit der Sonden und die Bef llung des Reaktionsgef es in der Kartusche kontrolliert 300 5052 Rev G October 2009 43 Deutsch Zur Testdurchf hrung werden die CSF Probe und vier Reagenzien in vorbezeichnete Kammern der Xpert EV Kartusche gegeben Das GeneXpert DX System f hrt die Probenvorbereitung durch Lysierung des Virus und der Probenverarbeitungskontrolle Pseudovirus mit enkapsidierter RNA durch wodurch die RNA an die Suchmatrix bindet und eluiert wird Die RNA wird mit RT Trockenreagenzien gemischt und zur Vorbereitung der cDNA in das Reaktionsgef eingeleitet Anschlie
80. chi il meccanismo di chiusura dello sportello prima di aprire lo sportello del modulo e rimuovere la cartuccia 12 Attenersi alle linee guida sulla sicurezza del proprio laboratorio per lo smaltimento della cartuccia Visualizzazione e stampa dei risultati Per istruzioni su come visualizzare e stampare i risultati vedere il Manuale dell operatore di GeneXpert Dx System Controllo di qualit I requisiti per il controllo di qualit devono essere in conformit con le normative locali regionali e o nazionali o i requisiti di certificazione e le procedure per il controllo di qualit standard del proprio laboratorio Ogni analisi include due controlli interni per validare il saggio controllo elaborazione del campione controllo interno e controllo sonda I campioni di analisi sono controllati secondo le procedure seguenti Sample processing control internal control SPC IC Controllo elaborazione del campione controllo interno SPC IC l SPC IC uno pseudovirus di RNA incapsidato sotto forma di una microsfera secca ed incluso in ogni cartuccia L SPC IC verifica l adeguatezza della lisi dell EV bersaglio e dell elaborazione del campione nonch rileva l interferenza del saggio Viene miscelato al campione per controllare l adeguatezza dell elaborazione del campione e per monitorare l integrit del saggio RT PCR L SPC IC viene accettato se soddisfa i criteri di accettazione validati Nel software del sistema GeneXpert Dx CIC
81. ciado a los resultados de la prueba y se muestra en la ventana View Results Ver resultados y en todos los informes 7 Haga clic en Start Test Iniciar prueba En el cuadro de di logo que aparece escriba su contrase a 8 Abra la puerta del m dulo del instrumento mientras la luz est parpadeando en verde y cargue el cartucho 9 Cierre la puerta del m dulo Aseg rese de que la luz verde permanece encendida 10 Una vez finalizada la prueba la luz del m dulo del instrumento se apaga 11 Espere hasta que el sistema desbloquee la puerta para abrir la puerta del m dulo y retirar el cartucho 12 Siga las normas de seguridad del laboratorio para desechar el cartucho Visualizaci n e impresi n de los resultados Si desea obtener instrucciones detalladas sobre c mo ver e imprimir los resultados consulte el Manual del operador del sistema GeneXpert Dx Control de calidad El necesario control de calidad debe realizarse conforme a la reglamentaci n local estatal y o federal o a los requisitos de acreditaci n as como conforme a los procedimientos de control de calidad est ndares de su laboratorio Cada prueba incluye dos controles internos para validar el ensayo Control de procesamiento de muestra control interno y comprobaci n de sonda Las muestras sometidas a prueba se controlan de acuerdo con los siguientes procedimientos Sample processing control internal control Control de procesamiento de muestra control interno
82. corpo di immunofluorescenza indiretta per l identificazione dell enterovirus Ogni centro di arruolamento ha usato la propria procedura standard per la coltura virale Tabella 3a Campioni clinici prospettici valutati contro la coltura virale Dei 199 campioni prospettici idonei 131 avevano risultati della coltura virale Non ci sono stati risultati discrepanti relativi ai test su colture virali eseguiti nei centri di arruolamento e nel laboratorio centrale Le concordanze positive e negative tra Xpert EV e coltura virale sono illustrate nella tabella riportata sotto Coltura virale 8 13 Xpert EV o 110 Totali 8 123 Concordanza positiva 100 0 8 8 95 CI 63 1 100 0 Concordanza negativa 89 4 110 123 Cl 82 65 94 3 300 5052 Rev G October 2009 97 Italiano Tabella 3b Campioni clinici depositati raccolti in maniera prospettica valutati contro coltura virale Dei 235 campioni retrospettivi idonei 211 avevano risultati della coltura virale Le concordanze positive e negative tra Xpert EV e coltura virale sono illustrate nella tabella riportata sotto Coltura virale 2 Xpert EV 22 35 1 153 Totali 23 188 Concordanza positiva 95 7 22 23 95 CI 78 1 99 9 Concordanza negativa 81 4 153 188 95 CI 75 1 86 7 98 300 5052 Rev G October 2009 Caratteristiche sulle prestazioni Tabella 4 Valori previsti per Xpert EV nella popolazione con segni e s
83. cription inverse amplification en cha ne par polym rase RT PCR effectu e sur le GeneXpert Dx System pour la d tection qualitative pr sum e d ARN d ent rovirus dans des chantillons de liquide c phalorachidien LCR de patients pr sentant des signes ou des sympt mes de m ningite Ce test conjointement avec d autres r sultats de laboratoire et d autres informations cliniques peut tre utilis comme une aide pour le diagnostic de laboratoire d infections ent rovirus chez des patients pr sentant une suspicion clinique de m ningite ou de m ningo enc phalite Les caract ristiques des performances du test n ont pas t tablies pour les patients immunocompromis ou immunod prim s ATTENTION Les r sultats obtenus avec le test EV Xpert doivent venir uniquement en compl ment des observations cliniques et des autres informations la disposition du m decin Des r sultats EV Xpert positifs n excluent pas d autres causes de m ningite y compris les bact ries les mycobact ries d autres virus par exemple les virus de la famille des herp s les arbovirus le virus des oreillons etc et les champignons R sum et explication Le test EV Xpert de Cepheid est une transcription inverse amplification en cha ne par polym rase RT PCR utilis e pour d tecter l ARN d ent rovirus dans des chantillons de liquide c phalorachidien LCR L ent rovirus entre dans la classification taxonomique des virus c
84. d clinical samples evaluated against Clinical Diagnosis A total of 235 eligible retrospective patients were enrolled 122 patients had the 6 laboratory results for the clinical truth evaluation The clinical sensitivity and specificity for Xpert EV are shown in the table below Clinical Diagnosis 23 3 Xpert EV o 96 Totals 23 99 Clinical Sensitivity 100 23 23 95 CI 85 2 100 Clinical Specificity 97 0 96 99 95 CI 91 4 99 4 A patient was defined as having EV meningitis Clinical Diagnosis if the following criteria were met clinical evidence consistent with meningitis laboratory results for CSF Gram stain CSF bacterial culture CSF glucose CSF blood glucose ratio CSF total protein concentration CSF leukocyte count and detection of an EV genome in CSF or positive CSF EV culture Table 2c Clinical performance of Xpert EV assay in reference to Clinical Diagnosis by age The 133 prospective and 122 banked prospectively collected clinical samples were each grouped by age Clinical sensitivity and specificity of each age group are shown in the table below Prospective Clinical Samples Banked Prospectively Collected Clinical Samples Age Clinical Sensitivity Clinical Specificity Clinical Sensitivity Clinical Specificity Neonatal 100 0 14 14 96 0 24 25 100 0 4 4 90 0 18 20 younger than 2 months Pediatrics 92 3 12 13 97 2 69 71 100 0 14 14 98 1 51 5
85. den mit gepoolten humanen EV negativen Proben durchgef hrt Die gesch tzte analytische Sensitivit t ist in der folgenden Tabelle 5 dargestellt 300 5052 Rev G October 2009 57 Deutsch Tabelle 5 Gesch tzte analytische Sensitivit t Es wurden sechzig Serotypen getestet die gesch tzte TCID p ml die in diesen Serotypen nachgewiesen werden kann ist in der folgenden Tabelle dargestellt Spezies Serotyp Gesch tzte TCID ml A Coxsackie A3 5 01 A Coxsackie A5 12 59 A Coxsackie A6 12 59 A Coxsackie A7 3 33 A Coxsackie A10 2 81 A Coxsackie A12 19 95 A Coxsackie A14 0 10 A Coxsackie A16 0 002 A EV71 0 16 B Coxsackie Ag 20 00 B Coxsackie B1 4 00 B Coxsackie B2 0 20 B Coxsackie B3 0 028 B Coxsackie B4 0 40 B Coxsackie Bs 0 04 B Coxsackie B6 0 01 B Echo 0 10 B Echo 2 0 032 B Echo 3 200 00 B Echo 4 0 00032 B Echos 0 032 B Echo 6 200 00 B Echo 7 2 00 B Echo 8 0 10 B Echo 9 2 00 B Echo n 40 00 B Echo 12 1 58 B Echo 13 0 01 B Echo 14 0 0005 B Echo 15 0 0032 B Echo 16 0 0005 B Echo 17 0 05 B Echo 18 0 0002 B Echo 19 2 51 B Echo 20 0 032 B Echo 21 1 00 B Echo 24 0 02 B Echo 25 0 50 B Echo 26 0 032 B Echo 27 0 00032 B Echo 29 5 01 B Echo 30 0 01 B Echo 31 0 0032 B Echo 32 0 10 B Echo 33 0 05 B EV 69 0 0002 C Coxsackie An 0 11 Coxsackie A13 13 27 Coxsackie A15 0 0032 Coxsackie A17 1 58 Coxsackie A18 0 02 C Coxsackie A19 0 03 C Coxsackie A2o 0 002 C C
86. e 300 5052 Rev G October 2009 101 Italiano Sensibilit analitica La sensibilit analitica o limite di rilevamento LOD amp definita come la concentrazione minima o la quantit di analita che tramite analisi di laboratorio amp stata dimostrata essere riproducibilmente distinta da un campione negativo a un intervallo di confidenza del 95 Le diluizioni sono state eseguite in un pool di campioni umani negativi EV Per la determinazione della confidenza statistica del LOD sono state eseguite repliche di 20 insieme a 20 campioni negativi EV I campioni eseguiti erano Virus coxsackie A6 CVA6 Virus coxsackie A9 CVA9 Virus coxsackie A17 CVA17 Enterovirus 70 EV70 e Poliovirus 1 PV1 Non tutti i 63 sierotipi sono stati eseguiti in numeri statisticamente significativi poich i siti di legame dei primer e delle sonde sono conservati in tutti i sierotipi e la lunghezza dell amplicon la stessa per tutti i sierotipi cos ci si sarebbe aspettati la stessa efficienza di amplificazione per tutti i sierotipi I cinque sierotipi indicati sopra sono stati selezionati per rappresentare ciascuna delle specie di enterovirus CVA6 A CVA9 B CVA17 C EV70 D e PVI poliovirus Tabella 7 Limite di rilevamento per cinque 5 sierotipi Il LOD dei cinque 5 sierotipi uno da ciascuna delle specie di enterovirus illustrato nella tabella riportata sotto Limite di rilevamento Sierotipo TCID mL
87. e ausgeschlossen wenn die CSF f r den Nukleins uretest zentrifugiert wurde oder der Xpert EV Test und die Tests f r den klinischen Nachweis nicht innerhalb desselben Gefrier Auftauzyklus der Probe durchgef hrt wurden Auch die klinische Historie der Patienten wurde ber cksichtigt Klinische Anzeichen und Symptome Anzahl der Tage seit dem Einsetzen der Symptome maximale K rpertemperatur Kontakthistorie CSF Erythrozyten Leukozyten und Differential CSF Glukose und Total Protein CSF Bakterienkultur und Gram F rbung Blutglukose Viruskultur aus anderen Proben sofern verf gbar Laut Definition leidet ein Patient an EV Meningitis klinische Diagnose wenn folgende Kriterien erf llt sind Klinische Befunde sind konsistent mit Meningitis Laborergebnisse f r CSF Gram F rbung CSF Bakterienkultur CSF Glukose CSF Blutglukoseverh ltnis CSF Gesamtproteinkonzentration CSF Leukozytenanzahl und entweder Nachweis von EV Genom in der CSF und oder positive CSF EV Kultur Anf nglich wurden 475 Patienten f r eine Teilnahme in Betracht gezogen Einundvierzig Patienten erf llten die Kriterien f r eine Teilnahme an der Studie nicht und wurden in der Folge von der Analyse ausgeschlossen sodass 434 zu analysierende Patienten brig blieben von denen 255 Ergebnisse aller oben beschriebenen Tests aufwiesen 300 5052 Rev G October 2009 53 Deutsch Tabelle 2a Auswertung prospektiver klinischer Proben gegen ber der Klinischen Diagnose Ins
88. e ribonucl ases e dNTPs SAB s rum albumine bovin Bille de r actifs 2 lyophilis e Amorces antisens d oligonucl otides SAB s rum albumine bovin Bille de r actifs 3 lyophilis e Polym rase ADN dNTPs SAB s rum albumine bovin Bille de r actifs 4 lyophilis e Amorces sens d oligonucl otides Sondes d oligonucl otides aux tiquettes fluorescentes SAB s rum albumine bovin Bille de r actifs 5 lyophilis e Contr le du traitement de l chantillon pseudovirion d ARN CIC encapsid SAB s rum albumine bovin R actif de fixation 1 Ethanol e Eau Reactif de lavage 2 Cyst amine HCI EDTA acide thyl ne diamine t tra ac tique e KCI MTG monothioglycerol PEG poly thyl neglycol e Tris pH 7 0 e Tween 20 e Eau 22 10 cartouches kit 1 par cartouche 1 par cartouche 1 par cartouche 1 par cartouche 1 par cartouche 10 x1 ml 10 x 3 2 ml 300 5052 Rev G October 2009 Avertissements et pr cautions R actif d lution 3 10 x 2 0 ml Sulfate d ammonium EDTA acide thyl ne diamine t tra ac tique e Tris pH 7 0 e Eau R actif de lyse 4 10 x 300 pl N ac tyl L cyst ine e Guanidine thiocyanate N lauroylsarcosine e Citrate de sodium pH 6 8 e Eau Remarques Les fiches techniques de donn es de s curit Material Safety Data Sheets MSDS de tous les r actifs fournis dans ce test sont disponibles aupr
89. ealizar la preparaci n de ADNc El ADNc se mezcla entonces con los reactivos secos de RCP y se transfiere al tubo de reacci n para la realizaci n de la RCP y la detecci n en tiempo real Los iniciadores y la sonda de EV amplifican y detectan una regi n consenso de la regi n 5 no transcrita UTR del enterovirus La prueba dura aproximadamente 2 5 horas Reactivos e instrumentos Y Material suministrado El kit del ensayo Xpert EV GXEV 100N 10 contiene reactivos suficientes para procesar 10 muestras El kit incluye lo siguiente Cartuchos Xpert EV 10 cartuchos kit Perla 1 liofilizada 1 por cartucho e Transcriptasa inversa e Inhibidor de ARNasa dNTPs BSA alb mina s rica bovina Perla 2 liofilizada 1 por cartucho Oligonucle tidos iniciadores inversos BSA alb mina s rica bovina Perla 3 liofilizada 1 por cartucho ADN polimerasa dNTPs BSA alb mina s rica bovina Perla 4 liofilizada 1 por cartucho e Iniciadores oligonucle tidos directos Sondas de oligonucle tidos marcados fluorescentemente BSA alb mina s rica bovina Perla 5 liofilizada 1 por cartucho Control de procesamiento de muestra ARN de pseudovirus encapsidado CIC BSA alb mina s rica bovina Reactivo de uni n 1 10 x 1mL Etanol e Agua Reactivo de lavado 2 10 x 3 2 mL e Clorhidrato de cisteamina EDTA cido etilendiaminotetraac tico e KCI MTG monotioglicerol e PEG polietilenglicol e Tris pH 7
90. ects assay interference It is mixed with the sample to control for adequate sample processing and to monitor the integrity of the RT PCR assay The SPC IC is considered to pass if it meets the validated acceptance criteria Note that in the GeneXpert Dx System software CIC is the name for the SPC IC Probe check Before the start of the PCR reaction the system performs a probe check on both the EV target and the SPC IC to verify reagent bead rehydration and reaction tube filling Each probe check is considered to pass if it meets the validated acceptance criteria External Controls External controls must be used for training proficiency testing and external QC of the GeneXpert Dx System External controls should be used in accordance with local state and federal accrediting organizations as applicable External Controls can be prepared by diluting Coxsackievirus A9 strain Bozek or Coxsackievirus A6 strain C G Gdula with known negative patient CSF or Synthetic CSF e g SeraCare Life Sciences Inc Catalog number HSP 515 to approximately 10 1000 TCIDso mL that gives an EV C range of 32 35 for the Xpert EV assay 300 5052 Rev G October 2009 5 English Interpretation of Results The results are available in the GeneXpert Dx System View Results window Possible results are described in this section Note In the GeneXpert Dx System View Results window the SPC IC is displayed as CIC in the Analyte Name column
91. egativo Sistema GeneXpert Dx ventana View Results Ver resultados Observe que el SPC IC se muestra como CIC 300 5052 Rev G October 2009 71 Espanol INVALID NO V LIDO Figura 4 No se puede determinar la presencia o ausencia de cido nucleico del EV objetivo repita la prueba con m s muestra El SPC IC no cumple los criterios de aceptaci n la muestra no se ha procesado correctamente o se ha inhibido la reacci n en cadena de la polimerasa Sistema GeneXpert Dx Ventana View Results Ver resultados Observe que el SPC IC se muestra como CIC EV INVALID e CIC SPC IC FAIL Probe Check PASS Test and Analyte Result Assay Name Xpert EV Version 2 Test Result INVALID Analyte ct EndPt Analyte Result Probe Name Check Result 1 H 1 0 INVALID EV i PASS cic 1 0 FAIL PASS 0 0 0 0 Legend 2 100 vi EV Primary A vi 2 CIC Primary A 80 A E 60 A A 5 e A E dA A 20 A A 0 10 20 30 40 Cycles Figura 4 Resultado no v lido Sistema GeneXpert Dx ventana View Results Ver resultados Observe que el SPC IC se muestra como CIC ERROR No se puede determinar la presencia o ausencia de cido nucleico del EV objetivo repita la prueba con m s muestra El control de Comprobaci n de sonda ha fallado probablemente debido a que el tubo de reacci n se ha llenado de forma inadecuada se ha detectado un problema de inte
92. eina e Guanidina tiocianato e N lauroilsarcosina e Citrato di sodio pH 6 8 e Acqua Note Le schede dei dati sulla sicurezza dei materiali MSDS Material Safety Data Sheet per tutti i reagenti forniti in questo saggio sono disponibili su richiesta all Assistenza tecnica Cepheid La sieroalbumina bovina BSA di questo prodotto stata prodotta esclusivamente da plasma bovino di origine statunitense Anche la produzione della BSA viene eseguita negli Stati Uniti Gli animali non sono stati nutriti con proteine bovine o altre proteine animali gli animali hanno superato i test ante mortem e post mortem Durante l elaborazione il materiale non stato miscelato con altro materiale animale Conservazione e manipolazione 28 de bd Conservare le cartucce Xpert EV e i reagenti a 2 28 C Non aprire una cartuccia finch non si pronti per eseguire l analisi Utilizzare la cartuccia e i reagenti entro 30 minuti dall apertura della confezione Non utilizzare reagenti o cartucce oltre la data di scadenza Non utilizzare reagenti diventati torbidi o scoloriti Materiali necessari ma non forniti GeneXpert Dx System il numero di catalogo varia in base alla configurazione strumento GeneXpert computer scanner dei codici a barre e manuale dell operatore Stampante per le linee guida sulla compatibilit consultare il Manuale dell operatore di GeneXpert Dx System CD del saggio Xpert EV numero di parte 950 0125 P
93. ema consulte el Manual del operador del sistema GeneXpert Dx El ensayo Xpert EV ha sido dise ado para detectar ARN de enterovirus EV regi n 5 no transcrita del genoma del enterovirus UTR entre los nucle tidos 452 y 596 en muestras de LCR El ensayo incluye los reactivos iniciadores y sondas necesarios para la detecci n simult nea de cido nucleico del EV objetivo y del control de procesamiento de la muestra control interno SPC IC El ensayo incluye el SPC IC para que poder verificar el adecuado procesamiento del virus objetivo y realiza el seguimiento de la presencia de inhibidores en el ensayo TI RCP para evitar un resultado falso negativo Tenga en cuenta que en el software del sistema GeneXpert Dx el nombre empleado para el SPC IC es CIC El ensayo tambi n incluye un control de comprobaci n de sonda que permite comprobar la rehidrataci n de los reactivos la integridad de la sonda y el llenado del tubo de reacci n en el cartucho 300 5052 Rev G October 2009 65 Espanol Para realizar una prueba la muestra de LCR y los cuatro reactivos se transfieren a los compartimentos especificos del cartucho Xpert EV El sistema GeneXpert Dx realiza la preparaci n de las muestras mediante la lisis del virus y del SPC ARN de pseudovirus encapsidado la uni n del ARN a la matriz de captura y la diluci n del ARN EI ARN se mezcla a continuaci n con los reactivos secos de TI y se transfiere al tubo de reacci n donde se va a r
94. engono generati i seguenti risultati Un risultato INVALID NON VALIDO indica che i controlli SPC IC non sono riusciti Il campione non stato elaborato correttamente o la PCR inibita Un risultato ERROR ERRORE indica che il controllo per il controllo sonda non riuscito e il saggio stato interrotto probabilmente a causa del riempimento scorretto della provetta di reazione stato rilevato un problema di integrit della sonda o sono stati superati i limiti della pressione massima Un risultato NO RESULT NESSUN RISULTATO indica che sono stati raccolti dati insufficienti Per esempio l operatore ha interrotto un analisi in corso Limitazioni I risultati del saggio Xpert EV devono essere interpretati contestualmente agli altri dati clinici e di laboratorio a disposizione del medico Un risultato positivo del saggio Xpert EV non esclude la presenza di un altro batterio patogeno nel liquido cerebrospinale Come con qualsiasi saggio molecolare i risultati falsi positivi sono sempre possibili In letteratura sono stati riportati casi rari di meningite batterica virale Le prestazioni del saggio Xpert EV sono state validate con le procedure fornite esclusivamente in questo foglio illustrativo e con Cepheid GeneXpert Dx System Non devono essere apportate modifiche a queste procedure poich possono alterare le prestazioni dell analisi Il saggio Xpert EV destinato esclusivamente al rilevamento dell enterovirus I risul
95. ente Tabla 9 Resumen de los resultados del segundo estudio de reproducibilidad En la tabla siguiente se muestran el nivel de correspondencia los valores Ct medios para cada concentraci n las desviaciones est ndares asociadas y el porcentaje del coeficiente de desviaci n para cada d a Correspondencia total Resultados de C de Todos los correspondenci ID de muestra Dia 1 Dia 2 Dia 3 Dia 4 dias a total Negativo Correspondencia total 20 20 18 18 20 20 20 20 78 78 100 Media ND ND ND ND ND DE ND ND ND ND ND CV ND ND ND ND ND CA9 2X LOD Correspondencia total als 5 5 als 5 5 18 20 90 Media 36 65 36 54 36 53 36 54 36 56 DE 0 56 0 46 0 21 0 69 0 48 CV 1 53 1 26 0 57 1 89 1 31 CA9 4X LOD Correspondencia total 5 5 5 5 5 5 4 43 19 19 100 Media 34 98 35 56 35 52 35 03 35 28 DE 0 53 0 67 0 7 0 3 0 6 CV 1 52 1 88 1 97 0 86 1 70 EV70 2X LOD Correspondencia total 5 5 5 5 5 54 5 5 20 20 100 Media 37 38 373 37 55 36 88 37 2 DE 1 78 0 74 2 01 0 81 1 3 CV 4 76 1 98 5 35 2 20 3 49 EV70 4XLOD Correspondencia total 5 5 5 5 5 5 5 5 20 20 100 Media 36 50 36 60 36 12 35 94 36 29 DE 0 58 0 97 0 29 0 84 0 72 CV 1 59 2 65 0 80 2 34 1 98 N mero de instrumentos usados 10 n 10 10 31 N mero de m dulos usados 40 41 41 40 121 An lisis totales 21 2 Sin resultado 1 Inv lido An lisis totales 5 1 resultado negativo en lugar de positivo 3
96. er 2009 Leistungsmerkmale Tabelle 2c Klinische Leistung des Xpert EV Tests im Zusammenhang mit der Klinischen Diagnose nach Alter Die 133 prospektiven klinischen Proben und die 122 konservierten prospektiv gesammelten klinischen Proben wurden jeweils nach Alter gruppiert Die klinische Sensitivit t und Spezifit t der einzelnen Altersgruppen ergeben sich aus der folgenden Tabelle Prospektive klinische Proben Konservierte prospektiv gesammelte klinische Proben Alter Klinische Sensitivit t Klinische Spezifit t Klinische Sensitivit t Klinische Spezifit t Neugeborene 100 0 14 14 96 0 24 25 100 0 4 4 90 0 18 20 maximal 2 Monate alt Kinder 92 3 12 13 97 2 69 71 100 0 14 14 98 1 51 52 zwischen 2 Monaten und 17 Jahren Erwachsene 0 0 100 0 10 10 100 0 5 5 100 0 27 27 18 Jahre und lter Insgesamt 96 3 26 27 97 2 103 106 100 23 23 97 0 96 99 Bei 73 7 320 434 der geeigneten Proben wurden Viruskulturen angesetzt bei den verbleibenden reichte die CSF f r eine Kultivierung nicht aus CSF Proben von 263 Patienten mit ausreichend bersch ssigem Volumen wurden zur Kultivierung der Viren an ein im Voraus bestimmtes Zentrallabor geschickt Ferner wurden von Proben von 114 Patienten in den Studieneinrichtungen selbst Viruskulturen angesetzt Von diesen 114 Patienten entwickelten sich bei 57 sowohl in den Studieneinrichtungen als auch im Zentrallabor Viruskulturen 56 de
97. euchtet 10 Wenn der Test abgeschlossen ist erlischt die Anzeige des Instrumentenmoduls 11 Die Modult r kann erst ge ffnet und die Kartusche entnommen werden wenn das System die T r entriegelt hat 12 Bei der Entsorgung der Kartusche die Sicherheitsrichtlinien des Labors beachten Anzeigen und Drucken der Ergebnisse Siehe das Benutzerhandbuch zum GeneXpert Dx System f r genaue Informationen zum Anzeigen und Drucken der Ergebnisse CONTROL Qualit tskontrolle Die Qualit tskontrolle ist gem den kommunalen Landes und oder Bundesvorschriften bzw gem den Akkreditierungsanforderungen und den Qualit tskontrollrichtlinien des jeweiligen Labors durchzuf hren Jeder Test umfasst zwei interne Kontrollen zur Validierung des Tests und zwar die Probenverarbeitungskontrolle interne Kontrolle und die Sondenpr fung Die Testproben werden wie folgt kontrolliert Probenverarbeitungskontrolle Interne Kontrolle SPC IC Bei der SPC IC handelt es sich um einen Pseudovirus mit enkapsidierter RNA in Form eines Trockenk gelchens das Bestandteil jeder Kartusche ist Bei der SPC IC wird die 300 5052 Rev G October 2009 47 Deutsch 48 Angemessenheit der Lysis Zielsequencer des EV und der Probenverarbeitung berpr ft Ferner werden Testst rfaktoren festgestellt Sie wird mit der Probe vermischt um die angemessene Probenverarbeitung zu kontrollieren und die Integrit t des RT PCR Tests zu berwachen Die SPC IC gilt als bes
98. ewing the results The system requires the use of Xpert single use disposable GeneXpert cartridges that hold the PCR reagents and host the PCR process Because the cartridges are self contained cross contamination between samples is eliminated For a full description of the system see the GeneXpert Dx System Operator Manual The Xpert EV assay is designed to detect enterovirus EV RNA enterovirus genome 5 untranslated region UTR between nucleotide 452 and 596 in CSF samples The assay includes reagents primers and probes for the simultaneous detection of nucleic acid from the target EV and the sample processing control internal control SPC IC The assay includes the SPC IC to verify adequate processing of the target virus and monitors the presence of inhibitors in the RT PCR assay to avoid a false negative result Note that in the GeneXpert Dx System software CIC is the name for the SPC IC The assay also includes a probe check control to verify reagent rehydration probe integrity and reaction tube filling in the cartridge 300 5052 Rev G October 2009 1 English To run a test the CSF sample and four reagents are transferred into designated chambers of the Xpert EV cartridge The GeneXpert Dx System performs sample preparation by lysing the virus and SPC encapsidated RNA pseudovirus binding the RNA to the capture matrix and eluting the RNA The RNA is mixed with dry RT reagents and transferred into the reaction tube for p
99. gesamt nahmen 199 geeignete prospektive Patienten teil 133 Patienten wiesen die 6 Laborergebnisse f r den klinischen Nachweis auf Die klinischen Sensitivit ts und Spezifit tsdaten des Xpert EV Tests sind in der folgenden Tabelle aufgef hrt Klinische Diagnose _ 26 3 Xpert EV 1 103 Insgesamt 27 106 Klinische Sensitivit t 96 3 26 27 95 CI 81 0 99 9 Klinische Spezifit t 97 2 103 106 95 CI 91 9 99 4 Tabelle 2b Auswertung von konservierten prospektiv gesammelten klinischen Proben gegen ber der Klinischen Diagnose Insgesamt nahmen 235 geeignete retrospektive Patienten teil 122 Patienten wiesen die 6 Laborergebnisse f r den klinischen Nachweis auf Die klinischen Sensitivit ts und Spezifit tsdaten des Xpert EV Tests sind in der folgenden Tabelle aufgef hrt Klinische Diagnose _ 23 3 Xpert EV o 96 Insgesamt 23 99 1 Laut Definition leidet ein Patient an EV Meningitis klinische Diagnose wenn folgende Kriterien erf llt sind Klinische Befunde sind konsistent mit Meningitis Laborergebnisse f r CSF Gram F rbung CSF Bakterienkultur CSF Glukose CSF Blutglukoseverh ltnis CSF Gesamtproteinkonzentration CSF Leukozytenanzahl und Nachweis von EV Genom in der CSF oder positive CSF EV Kultur Klinische Sensitivit t 100 23 23 95 CI 85 2 100 Klinische Spezifit t 97 0 96 99 95 CI 91 4 99 4 300 5052 Rev G Octob
100. gridad de la sonda o se ha anulado un ensayo EV NO RESULT CIC SPC IC NO RESULT Probe Check FAIL NO RESULT SIN RESULTADO No se puede determinar la presencia o ausencia de cido nucleico del EV objetivo repita la prueba con m s muestra No se han recogido suficientes datos para generar un resultado de la prueba por ejemplo si el operador ha detenido una prueba que estaba en progreso EV NO RESULT CIC SPC IC NO RESULT Probe Check NA Motivos para repetir el ensayo Repita el ensayo con muestra nueva si se generan los siguientes resultados Un resultado INVALID indica que los controles SPC IC han fallado La muestra no se ha procesado correctamente o se ha inhibido la reacci n en cadena de la polimerasa 72 300 5052 Rev G October 2009 Limitaciones Un resultado ERROR indica que el control de Comprobaci n de la sonda ha fallado y que el ensayo ha sido anulado probablemente debido a que el tubo de reacci n se ha llenado de forma inadecuada se ha detectado un problema de integridad del reactivo o se han superado los l mites de presi n m xima Un NO RESULT indica que no se han recogido suficientes datos Por ejemplo si el operador ha detenido una prueba que estaba en progreso Limitaciones Los resultados del ensayo Xpert EV se deben interpretar junto con otros datos cl nicos y de laboratorio a disposici n del m dico Un resultado positivo en el ensayo Xpert EV no descarta la presencia de
101. hown in the table below Viral Culture 8 B Xpert EV o 110 Totals 8 123 Positive agreement 100 0 8 8 95 CI 63 1 100 0 Negative agreement 89 4 110 123 CI 82 65 94 3 Table 3b Banked prospectively collected clinical samples evaluated against viral culture Of the 235 eligible retrospective specimens 211 had viral culture results The positive and negative agreements between the Xpert EV and viral culture are shown in the table below Viral Culture s Xpert EV 22 35 1 153 Totals 23 188 Positive agreement 95 7 22 23 95 CI 78 1 99 9 Negative agreement 81 4 153 188 95 CI 75 1 86 7 300 5052 Rev G October 2009 Performance Characteristics Table 4 Expected values for Xpert EV in population with signs and symptoms consistent with meningitis The 434 eligible patients are grouped by age and gender the number and percentage of positive cases are calculated and shown in the table below Xpert EV Result Age range years Gender Positive n Negativen Total lt 1 M 34 29 3 82 70 7 116 F 26 28 3 66 71 7 92 1 5 M 8 25 0 24 75 0 32 F 3 11 1 24 88 9 27 6 10 M 3 31 4 24 68 6 35 F 3 17 6 14 82 4 17 1 15 M 8 33 3 16 66 7 24 F 3 15 0 17 85 0 20 16 21 M 3 20 0 12 80 0 15 F 3 25 0 9 75 0 12 gt 21 M 2 10 0 18 90 0 20 F 3 12 5 21 87 5 24 Total 107 24 7 327 75 3 434 Analy
102. hrieben Hinweis Im GeneXpert Dx System wird im Fenster View Results Ergebnisse anzeigen die SPC IC in der Spalte Analyte Name Analytname als CIC angezeigt VORSICHT Die Ergebnisse des Xpert EV Tests sollten lediglich erg nzend zu den klinischen Beobachtungen und den sonstigen dem Arzt zur Verf gung stehenden Informationen verwendet werden Durch ein positives Xpert EV Testergebnis werden andere Ursachen der Meningitis wie Bakterien Mykobakterien andere Viren z B Viren aus der Herpesfamilie Arboviren Mumpsviren etc oder Pilze nicht ausgeschlossen POSITIVE POSITIV Abbildung 2 Es wurde EV Nukleins ure nachgewiesen Fenster View Results Ergebnisse anzeigen im GeneXpert Dx System Die SPC IC wird als CIC angezeigt e EV POS e CIC SPC IC KA Wenn der Enterovirus Titer hoch ist wird die RT PCR f r die SPC u U unterdr ckt Sondenpr fung PASS BESTANDEN Durch ein positives Xpert EV Testergebnis werden andere Ursachen der Meningitis wie Bakterien Mykobakterien andere Viren z B Viren aus der Herpesfamilie Arboviren Mumpsviren etc oder Pilze nicht ausgeschlossen Test and Analyte Result Assay Name Xpert EV Version 2 Test Result MONA Analyte ct EndPt Analyte Result Probe Name Check Result EV 31 6 456 0 POS PASS CIC 35 4 161 0 NA PASS Disclaimer For In Vitro Diagnostic Use Only Positive Xpert EV results do not rule out other causes of me
103. icien Un r sultat positif du test EV Xpert n exclut pas la pr sence d un autre agent pathog ne comme des bact ries dans le LCR Comme pour tous les tests mol culaires des r sultats positifs erron s sont toujours possibles De rares occurrences de m ningites la fois bact riennes et virales ont t signal es dans les publications 8 9 Les performances du test EV Xpert ont t valid es en utilisant uniquement les proc dures fournies dans cette notice et dans le GeneXpert Dx System de Cepheid Aucune modification ne doit tre apport e ces proc dures car cela peut modifier les performances du test Le test EV Xpert est destin la d tection d ent rovirus uniquement Des r sultats de test n gatifs n excluent pas la pr sence d ent rovirus Ce test n exclut pas l ventualit d une m ningite associ e un herp s ou d une m ningite fongique des tests suppl mentaires sont requis pour exclure ces infections JA DEREN Comme avec d autres procedures de diagnostic les r sultats obtenus avec le test EV Xpert doivent venir uniquement en compl ment des observations cliniques et des autres informations la disposition du m decin Des r sultats EV Xpert positifs n excluent pas d autres causes de m ningite y compris les bact ries les mycobact ries d autres virus par exemple les virus de la famille des herp s les arbovirus le virus des oreillons etc et les champignons Substances interf rentes
104. idos con un n mero estimado de hospitalizaciones que oscila entre 30 000 y 50 000 al a o La meningitis por enterovirus suele desaparecer por s sola en 7 10 d as Sin embargo las meningitis con causas no virales entre las que se incluye la meningitis bacteriana pueden ser graves y pueden producir discapacidad o muerte si no se tratan r pidamente por lo que la meningitis debe considerarse como una enfermedad grave Una prueba de detecci n de enterovirus junto con la observaci n cl nica y dem s informaci n cl nica puede ayudar a los m dicos a identificar a aquellos pacientes con meningitis por enterovirus para facilitar el tratamiento de los pacientes Principio del procedimiento El sistema GeneXpert Dx automatiza e integra la purificaci n de muestras la multiplicaci n del cido nucleico y la detecci n de la secuencia diana en muestras sencillas o complejas mediante ensayos de RCP y TI ROP en tiempo real El sistema consta de un instrumento un ordenador personal y un software cargado previamente para la realizaci n de pruebas con las muestras recogidas y la visualizaci n de los resultados Este sistema requiere el uso de cartuchos GeneXpert desechables de un solo uso que contienen los reactivos de amplificaci n y en el que tiene lugar el proceso completo de RCP Dado que los cartuchos son independientes se elimina el riesgo de contaminaci n cruzada entre muestras Si desea obtener una descripci n detallada del sist
105. ie circa 2 ore e mezzo Reagenti e strumenti Y Materiale fornito Il kit del saggio Xpert EV GXEV 100N 10 contiene reagenti sufficienti per elaborare 10 campioni Il kit contiene il seguente materiale Cartucce Xpert EV Microsfera 1 congelata disidratata e Transcrittasi inversa e Inibitore RNase dNTP BSA sieroalbumina bovina Microsfera 2 congelata disidratata Primer di oligonucleotidi inversi BSA sieroalbumina bovina Microsfera 3 congelata disidratata DNA polimerasi dNTP BSA sieroalbumina bovina Microsfera 4 congelata disidratata e Primer di oligonucleotidi diretti Sonde di oligonucleotidi marcate con fluorocromi BSA sieroalbumina bovina Microsfera 5 congelata disidratata Controllo elaborazione del campione pseudovirus di RNA CIC incapsidato BSA sieroalbumina bovina Reagente legante 1 e Etanolo e Acqua Reagente di lavaggio 2 e Cisteamina HCI EDTA acido etilendiamminotetracetico KCI MTG monotioglicerolo PEG polietilenglicole e Tris pH 7 0 e Tween 20 e Acqua 86 10 cartucce kit 1 per cartuccia 1 per cartuccia 1 per cartuccia 1 per cartuccia 1 per cartuccia 10 x 1mL 10 x 3 2 mL 300 5052 Rev G October 2009 Avvertenze e precauzioni Reagente di eluizione 3 10 x 2 0 mL Solfato di ammonio EDTA acido etilendiamminotetracetico e Tris pH 7 0 e Acqua Reagente di lisi 4 10 x 300 uL e N acetil L cist
106. ie gegebenenfalls beim Technischen Support von Cepheid In diesem Abschnitt werden die Grundschritte der Testausf hrung beschrieben F r genauere Anweisungen das Benutzerhandbuch zum GeneXpert Dx System verwenden 1 Den Computer und anschlie end das GeneXpert Dx Instrument einschalten 2 Auf dem Windows Desktop auf das Symbol GeneXpert Dx doppelklicken 3 Mit Ihrem Benutzernamen und Kennwort bei der GeneXpert Dx Systemsoftware anmelden 4 Im Fenster GeneXpert Dx System auf Create Test Test erstellen klicken Daraufhin wird das Dialogfeld Scan Cartridge Barcode Probenbeh lter Strichcode scannen angezeigt 5 Den Strichcode der Xpert EV Kartusche einscannen Das Fenster Create Test Test erstellen wird ge ffnet Mithilfe der Strichcodeinformationen gibt die Software automatisch Daten in die folgenden Felder ein Select Assay Test ausw hlen Reagent Lot ID Reagenzienchargen ID Cartridge SN Kartuschen SN und Expiration Date Verfallsdatum 6 Die Sample ID Proben ID in das Feld einscannen oder tippen Die Proben ID h ngt mit den Testergebnissen zusammen und wird im Fenster View Results Ergebnisse anzeigen und in allen Berichten angezeigt 7 Auf Start Test Test starten klicken Das Kennwort in das angezeigte Dialogfeld eingeben 8 Die T r des Instrumentenmoduls mit der gr n blinkenden Anzeige ffnen und die Kartusche laden 9 Das Modul schlie en Darauf achten dass die Anzeige ununterbrochen gr n l
107. in den Vereinigten Staaten sind Enteroviren die h ufigste Ursache der Meningitis mit sch tzungsweise 30 000 bis 50 000 Krankenhauseinweisungen pro Jahr Die enterovirale Meningitis heilt normalerweise innerhalb von 7 10 Tagen von selbst aus Meningitis mit nicht viralen Ursachen wie beispielsweise die bakterielle Meningitis kann jedoch ernst sein und zu Behinderungen oder zum Tod f hren wenn sie nicht sofort behandelt wird Aus diesem Grund sollte die Meningitis ernst genommen werden Ein Test zum Nachweis von Enteroviren kann in Verbindung mit klinischen Beobachtungen und sonstigen klinischen Informationen dazu beitragen dass Arzte Patienten mit enteroviraler Meningitis erkennen sodass die Behandlung der Patienten unterst tzt wird Prinzipien der Prozedur Das GeneXpert Dx System automatisiert und integriert die Probenvorbereitung die Amplifizierung von Nukleins uren und die Detektion der Zielsequenz in einfachen und komplexen Proben mittels Echtzeit PCR und RT PCR Untersuchungen Das System besteht aus einem Instrument und einem PC mit vorinstallierter Software die zur Ausf hrung von Tests an entnommenen Proben und zur Anzeige der Ergebnisse dient Das System sieht die Verwendung von GeneXpert Einwegkartuschen vor die die PCR Reagenzien enthalten und in denen der PCR Prozess abl uft Da die Kartuschen in sich abgeschlossen sind werden Kreuzkontaminationen verhindert Eine vollst ndige Beschreibung des Systems ist im Benutzerhandbu
108. inical Microbiology 8th edition Washington DC American Society for Microbiology 2003 1427 1438 4 Robinson CC Willis M Meagher A et al Impact of rapid polymerase chain reaction results on management of pediatric patients with enteroviral meningitis Pediatric Infectious Disease Journal 2002 21 283 6 5 Centers for Disease Control and Prevention Biosafety in microbiological and biomedical laboratories Richmond JY and McKinney RW eds 1993 HHS Publication number CDC 93 8395 6 Clinical and Laboratory Standards Institute formerly National Committee for Clinical Laboratory Standards Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections Approved Guideline Document M29 refer to latest edition 7 Wright HT McAllister RM Ward R Mixed Meningitis Report of a Case with Isolation of Haemophilus Influenzae Type B and ECHO Virus Type 9 from the Cerebrospinal Fluid New England Journal of Medicine 1962 267 142 144 8 Sferra TJ Pacini DL Simultaneous recovery of bacteria and viral pathogens from cerebrospinal fluid Pediatric Infectious Disease Journal 1988 7 552 556 9 Dronkert ML Ketel AG de Groot R Simultaneous occurrence of group B Streptococcus and echovirus 20 European Journal of Pediatrics 1996 155 915 Assistance For assistance contact Cepheid using one of the following contact details Make sure you provide the instrument serial number and reagent lot ID when you call or email
109. intomi coerenti con la meningite 1 434 pazienti idonei sono raggruppati per et e sesso il numero e la percentuale di casi positivi sono calcolati e illustrati nella tabella riportata sotto Risultato Xpert EV Intervallo di et anni Sesso Positivo n Negativo n Totale lt 1 M 34 29 3 82 70 7 116 F 26 28 3 66 71 7 92 POS M 8 25 0 24 75 0 32 F 3 11 1 24 88 9 27 6 10 M 3 31 4 24 68 6 35 F 3 17 6 14 82 4 17 1 15 M 8 33 3 16 66 7 24 F 3 15 0 17 85 0 20 16 21 M 3 20 0 12 80 0 15 F 3 25 0 9 75 0 12 gt 21 M 2 10 0 18 90 0 20 F 3 12 5 21 87 5 24 Totale 107 24 7 327 75 3 434 Reattivit analitica test di sierotipi di enterovirus Sono stati analizzati complessivamente 60 sierotipi di enterovirus con il saggio Xpert EV Le diluizioni di stock virale sono state eseguite in repliche di 3 per ogni sierotipo al LOD presunto Le diluizioni sono state eseguite in un un pool di campioni umani negativi EV La sensibilit analitica stimata illustrata nella Tabella 5 riportata sotto 300 5052 Rev G October 2009 99 Italiano Tabella 5 Sensibilit analitica stimata Sessanta dei sierotipi sono stati analizzati e il valore TCIDso mL stimato che pu essere rilevato in questi sierotipi illustrato nella tabella riportata sotto Specie Sierotipo TCID mL stimato A Coxsackie A3 5 01 A Coxsackie A5 12 59 A Coxsackie A6 12 59 A Coxsackie A
110. iol gicamente contaminados de acuerdo con las normas de su instituci n Deseche todos los materiales de forma segura y aceptable y de conformidad con todos los requisitos locales estatales y federales Recogida y transporte de muestras Recoja el LCR en un recipiente est ril y ll velo al laboratorio de acuerdo con el procedimiento est ndar de funcionamiento de su centro Mantenga las muestras a 2 8 C hasta que vaya a realizar la prueba o mant ngalas congeladas si la prueba no va a realizarse en las 300 5052 Rev G October 2009 67 Espanol 72 horas siguientes a la recogida No congele y descongele las muestras m s de dos veces No se recomienda la centrifugaci n de la muestra Procedimiento Precauciones No sustituya los reactivos Xpert EV por ning n otro reactivo No abra la tapa del cartucho Xpert EV salvo para a adir la muestra y los reactivos No cargue un cartucho Xpert EV que se haya caido o agitado despu s de introducir la muestra y los reactivos No cargue un cartucho con un tubo de reacci n da ado No abra los cartuchos Xpert EV usados No reutilice los cartuchos Xpert EV No congele y descongele las muestras m s de dos veces No utilice muestras que hayan sido centrifugadas Preparaci n del cartucho Para a adir la muestra y los reactivos al cartucho Figura 1 1 2 3 Saque un cartucho y los reactivos del envase Abra la ampolla del reactivo de uni n 1 girando y rompiendo el tap n
111. ion du test Pour obtenir des instructions d taill es consultez le Manuel d utilisation de GeneXpert Dx System 1 Allumez l ordinateur puis mettez l appareil GeneXpert Dx sous tension 2 Sur le bureau Windows double cliquez sur l ic ne de raccourci GeneXpert Dx 3 Ouvrez une session du logiciel GeneXpert Dx System en utilisant votre nom d utilisateur et votre mot de passe 4 Dans la fen tre du GeneXpert Dx System cliquez sur Cr er le test La bo te de dialogue Lire le code barres de la cartouche s affiche 5 Scannez le code barres sur la cartouche EV Xpert La fen tre Cr er le test appara t En utilisant les informations du code barres le logiciel remplit automatiquement les cases suivantes Select Assay S lectionner le test Reagent Lot ID Num ro d identification du lot de r actifs Cartridge SN NS de la cartouche et Expiration Date Date limite d utilisation 6 Dans la case N Id de l chantillon scannez ou saisissez le N Id de l chantillon Assurez vous de saisir le N Id exact de l chantillon Il est associ aux r sultats du test et il est affich dans la fen tre View Results Afficher les r sultats et dans tous les rapports 7 Cliquez sur D marrer le test Dans la bo te de dialogue qui appara t saisissez votre mot de passe 8 Ouvrez la porte du module de l appareil o le voyant vert clignote et chargez la cartouche 9 Fermez la porte du module Assurez vous que le voyant est bien
112. ipetta da 200 pL Puntali per pipette sterili da 200 pL Avvertenze e precauzioni Solo per uso diagnostico in vitro Il reagente di lisi contiene guanidina tiocianato che pud formare composti altamente reattivi se combinata con candeggina Se il liquido che contiene questo reagente viene versato pulire l area con acqua e detergente da laboratorio Trattare tutti i campioni biologici incluse le cartucce come se fossero in grado di trasmettere agenti infettivi Poich amp spesso impossibile sapere quale campione potrebbe essere infettivo tutti i campioni di derivazione umana devono essere trattati adottando le precauzioni universali Le linee guida per la manipolazione dei campioni sono disponibili presso gli U S Center for Disease Control and Prevention e il Clinical and Laboratory Standards Institute in precedenza denominato National Committee for Clinical Laboratory Standards Smaltire tutti i materiali pericolosi o contaminati biologicamente in conformit alle pratiche del proprio istituto Eliminare tutti i materiali in modo sicuro e accettabile nonch in conformit a tutti i requisiti locali regionali e nazionali vigenti Raccolta e trasporto dei campioni Raccogliere il liquido cerebrospinale in un contenitore sterile e trasportarlo al laboratorio secondo la procedura operativa standard in vigore presso l istituto Conservare i campioni a 2 8 C fino al momento di eseguire l analisi oppure congelarli se l analisi non
113. iportata sotto Campioni clinici depositati raccolti in maniera Campioni clinici prospettici prospettica Et Sensibilit clinica Specificit clinica Sensibilit clinica Specificit clinica Neonati 100 0 14 14 96 0 24 25 100 0 4 4 90 0 18 20 pi giovani di 2 mesi Bambini 92 3 12 13 97 2 69 71 100 0 14 14 98 1 51 52 da 2 mesi a 17 anni Adulti 0 0 100 0 10 10 100 0 5 5 100 0 27 27 18 anni e pi vecchi Complessivi 96 3 26 27 97 2 103 106 100 0 23 23 97 0 96 99 Sono state eseguite colture virali nel 73 7 320 434 dei campioni idonei i restanti avevano liquido cerebrospinale insufficiente per la coltura I campioni di liquido cerebrospinale di 263 soggetti con sufficiente volume in eccesso sono stati inviati a un laboratorio centrale designato per la coltura virale Inoltre le colture virali per 114 campioni dei pazienti sono state eseguite presso i centri di arruolamento A 57 di questi 114 soggetti sono state eseguite le colture virali sia presso i centri di arruolamento sia presso il laboratorio centrale 56 soggetti su 57 avevano risultati colturali concordanti un soggetto aveva risultati colturali locali e centrali discrepanti Il laboratorio centrale ha usato flaconi di Super E Mix Shell per la coltura virale e le cellule sono state marcate con anticorpo pan enterovirus Le cellule che erano positive per l anticorpo pan enterovirus sono state successivamente marcate con anti
114. is der gesamte Inhalt geleert ist Die Ampulle mit dem Waschreagenz 2 durch Drehen und Abbrechen der Kappe ffnen Die Spitze der Ampulle mit dem Waschreagenz 2 in die Kartuschenkammer 2 einsetzen und so lange auf die Ampulle dr cken bis der gesamte Inhalt geleert ist Die Ampulle mit dem Elutionsreagenz 3 durch Drehen und Abbrechen der Kappe ffnen Die Spitze der Ampulle mit dem Elutionsreagenz 3 in die Kartuschenkammer 3 einsetzen und so lange auf die Ampulle dr cken bis der gesamte Inhalt geleert ist Mit der Pipette 140 ul Lysisreagenz 4 in die Kartuschenkammer 4S geben Die Phiole mit dem Lysisreagenz 4 entsorgen Mit der Pipette 140 ul Probe in die Kartuschenkammer 45 geben Um zu vermeiden dass gro e Luftblasen entstehen die Pipettenspitze ber die Kammer halten und die Probe langsam pipettieren 10 Den Kartuschendeckel schlie en Wichtig Sicherstellen dass die Kartusche in das GeneXpert Dx Instrument geladen wurde und den Test innerhalb von 46 30 Minuten nach Hinzuf gung der Reagenzien starten 300 5052 Rev G October 2009 Qualit tskontrolle 1 Bindungsreagenz 2 Waschreagenz 3 Elutionsreagenz 4S Lysisreagenz und Probe Abbildung 1 Xpert EV Kartusche Draufsicht Testbeginn Wichtig Vor Beginn des Tests ist sicherzustellen dass die Definition des Xpert EV Tests in die Software importiert wurde f r Anweisungen die Test CD ROM verwenden Die Xpert EV Test CD ROM erhalten S
115. jusqu ce que tout le contenu soit vid Ouvrez l ampoule 3 de r actif d lution en tordant et en d tachant la pointe Ins rez l embout de l ampoule 3 de r actif d lution dans la chambre de la cartouche 3 et pressez l ampoule jusqu ce que tout le contenu soit vid l aide de la pipette de 200 yl ajoutez 140 pl de r actif de lyse 4 dans la chambre de la cartouche 48 Jetez le flacon de r actif de lyse 4 l aide de la pipette de 200 yl ajoutez 140 pl d chantillon dans la chambre de la cartouche 4S Afin d emp cher la formation de grosses bulles d air assurez vous de maintenir l embout de la pipette sur le haut de la chambre et versez doucement l chantillon Fermez le couvercle de la cartouche Important Assurez vous de charger la cartouche dans l appareil GeneXpert Dx et de commencer le test dans les 30 minutes qui suivent l ajout des r actifs 1 R actif de fixation 2 R actif de lavage 3 R actif d lution 4S R actif de lyse et chantillon Figure 1 Cartouche EV Xpert vue de dessus 24 300 5052 Rev G October 2009 Contr le qualite Demarrage du test Important Avant de d marrer le test EV Xpert assurez vous que sa d finition est import e dans le logiciel consultez les instructions fournies avec le CD de test Si vous ne disposez pas du CD de test EV Xpert contactez le support technique de Cepheid Cette section r pertorie les tapes de base de la r alisat
116. leotide 452 e 596 nei campioni di liquido cerebrospinale LCS Il saggio include reagenti primer e sonde per il rilevamento simultaneo dell acido nucleico dall enterovirus bersaglio e il controllo elaborazione del campione controllo interno SPC IC Il saggio include l SPC IC per verificare che l elaborazione del virus bersaglio sia adeguata e monitora la presenza di inibitori nel saggio RT PCR per evitare un risultato falso negativo Nel software di GeneXpert Dx System CIC il nome per SPC IC Il saggio include anche un controllo sonda per verificare la reidratazione dei reagenti l integrit della sonda e il riempimento della provetta di reazione nella cartuccia 300 5052 Rev G October 2009 85 Italiano Per eseguire l analisi il campione di liquido cerebrospinale e i tre reagenti vengono trasferiti nelle camere designate della cartuccia Xpert EV GeneXpert Dx System esegue la preparazione dei campioni lisando il virus e SPC pseudovirus di RNA incapsidato legando IRNA alla matrice di cattura ed eluendo l RNA L RNA viene miscelato con i reagenti RT secchi e trasferito nella provetta di reazione per la preparazione del cDNA Il cDNA viene quindi miscelato con i reagenti PCR secchi e trasferito nella provetta di reazione per la PCR in tempo reale e il rilevamento I primer EV e la sonda amplificano e rilevano una regione di consenso della regione non tradotta UTR 5 dell enterovirus Per l esecuzione dell analisi sono necessar
117. lo strumento GeneXpert Dx 2 Sul desktop di Windows fare doppio clic sull icona di collegamento GeneXpert Dx 3 Connettersi al software di GeneXpert Dx System con il proprio nome utilizzatore e la password 4 Nella finestra GeneXpert Dx System fare clic su Create Test Crea analisi Verr visualizzata la finestra di dialogo Scan Cartridge Barcode Analizza codice a barre cartuccia 5 Eseguire la scansione del codice a barre sulla cartuccia Xpert EV Verr visualizzata la finestra Create Test Crea analisi Utilizzando le informazioni del codice a barre il software completa automaticamente le caselle seguenti Select Assay Seleziona saggio Reagent Lot ID ID lotto reagenti Cartridge SN Cartuccia SN ed Expiration Date Data di scadenza 6 Nella casella Sample ID ID campione eseguire la scansione o digitare l ID del campione Accertarsi di digitare correttamente l ID del campione L ID del campione associato ai risultati dell analisi ed mostrato nella finestra View Results Visualizza risultati e in tutte le relazioni 7 Fare clic su Start Test Avvia analisi nella finestra di dialogo visualizzata digitare la password 8 Aprire lo sportello del modulo dello strumento con la spia verde lampeggiante e caricare la cartuccia 9 Chiudere lo sportello del modulo Assicurarsi che la spia verde sia fissa 10 Al termine dell analisi la spia del modulo dello strumento si spegne 11 Attendere che il sistema sbloc
118. ltato GeneXpert 102 300 5052 Rev G October 2009 Riproducibilit Per mettere in risalto ulteriormente il sistema stato eseguito un secondo studio Uno studio interno di riproducibilit stato condotto per quattro giorni diversi su pi strumenti GeneXpert 31 e moduli ICORE 121 Due sottotipi di virus intero rappresentativi Virus coxsackie CVA9 ed Enterovirus EV70 sono stati aggiunti a LCS negativo umano per creare campioni simulati a 2 x LOD e 4x LOD Il campione negativo stato analizzato 20 volte mentre i due campioni positivi a duediverse concentrazioni sono stati analizzati cinque 5 volte al giorno Il risultato dei campioni totali analizzati stato Invalid Non valido per due campioni e No Result Nessun risultato per tre campioni per le definizioni di controllo del software dello strumento 155 dei 157 risultati refertabili sono stati correttamente classificati Tabella 9 Riepilogo dei risultati del secondo studio di riproducibilit Il livello di concordanza i valori Ct medi per ogni concentrazione le deviazioni standard associate e la percentuale del coefficiente di variazione per ogni giorno sono illustrati nella tabella riportata sotto Concordanza totale risultati C ID del Tutti concordanza campione Giorno1 Giorno2 Giorno3 Giorno4 igiorni totale Negativo Concordanza totale 20 20 18 18 20 20 20 20 78 78 100 Media NA NA NA NA NA D
119. luenza 1 3 Influenza A Influenza B VZV CMV streptococco di gruppo B Haemophilus influenzae B H influenzae non B Escherichia coli Neisseria meningitides Citrobacter freundii e Citrobacter koseri n il saggio Xpert EV ha generato alcun amplicon rilevabile quando gli organismi interi dei patogeni elencati sono stati elaborati tramite la cartuccia Xpert EV La tabella seguente presenta gli organismi analizzati e la concentrazione per ogni organismo analizzato Tabella 6 Specificit analitica per il saggio Xpert EV Gli organismi interi sono stati analizzati per la specificit nel saggio Xpert EV e le concentrazioni degli organismi analizzati sono illustrate nella tabella riportata sotto Organismo Nr organismi analisi HHV 6 3 1x 108 particelle HHV 7 1 4 X 107 particelle CMV 700 TCID EBV 140 TCID HSV 1 1 4 x 10 TCID HSV 2 1 4 x 10 TCID AdV 2 1 4 x 10 TCID o Morbillo 700 TCID Parotite 1 4 x 104 TCID Parainfluenza1 1 4 x 103 TCID Parainfluenza 2 7 x103 TCID Parainfluenza 3 1 4 x 104 TCID Influenza A 3 5 X 10 TCID o Influenza B 3 5 X 10 TCID o VZV 14 TCID Streptococco di gruppo B 7 x 10 cellule H influenzae B 7 x 10 cellule H influenzae non B 7 x 10 cellule E coli 7 x 10 cellule N meningitides 7 x 108 cellule C freundii 7 x 10 cellule C koseri 7 x 10 cellul
120. min es lors d une tude multisite r alis e dans six institutions Pour tre retenu dans le test un patient doit avoir subi une ponction lombaire r alis e suite des sympt mes de m ningite et un test d ent rovirus et ou un test viral de culture prescrit par le m decin Le patient doit disposer d un volume de LCR en exc s suffisant sup rieur ou gal 0 5 ml et avoir remis un formulaire de consentement clair crit si n cessaire Des chantillons de patients ont t exclus si le LCR destin au test d acide nucl ique avait t centrifug ou si le test EV Xpert et des tests de d termination de v rit clinique n avaient pas t r alis s au cours du m me cycle de gel d gel de l chantillon L histoire clinique des patients a galement t prise en compte signes et sympt mes cliniques nombre de jours depuis l apparition des sympt mes temp rature maximale histoire du sujet contact h maties dans le LCR leucocytes et diff rentiel glucose et prot ines totales dans le LCR culture bact rienne et coloration Gram du LCR glyc mie culture virale partir d autres chantillons si disponibles Un patient a t d clar porteur d une m ningite ent rovirus diagnostic clinique si les crit res suivants taient rencontr s preuve clinique de m ningite r sultats de laboratoire pour la coloration Gram du LCR la culture bact rienne du LCR le glucose du LCR le rapport glucose du LCR glyc mie
121. mos prueba HHV 6 3 1x 10 part culas HHV 7 1 4 x 107 part culas CMV 700 TCID EBV 140 TCID HSV 1 1 4 x 10 TCID HSV 2 1 4 x 10 TCID AdV 2 1 4 x 10 TCID o Sarampi n 700 TCID o Paperas 1 4 x 104 TCID Parainfluenza 1 4 X 103 TCID Parainfluenza 2 7x10 TCID o Parainfluenza 3 1 4 x 104 TCID Influenza A 3 5 x 104 TCID Influenza B 3 5 X 104 TCID VZV 14 TCID o Estreptococo de grupo B 7 x 10 c lulas H influenzae B 7 x 10 c lulas H influenzae no B 7 x10 gt c lulas E coli 7 x 108 c lulas N meningitides 7 x 108 c lulas C freundii 7 x 10 c lulas C koseri 7 x 108 c lulas 80 300 5052 Rev G October 2009 Reproducibilidad Sensibilidad analitica La sensibilidad analitica o limite de detecci n LOD se define como la concentraci n o cantidad minima de un analito que puede distinguirse de forma reproducible y mediante an lisis de laboratorio a partir de una muestra negativa con un nivel de confianza del 95 Las diluciones se realizaron sobre una muestra agrupada humana negativa para EV Para la determinaci n de la confianza estadistica del LOD se analizaron r plicas de 20 junto con 20 muestras negativas para EV Las muestras fueron Coxsackievirus A6 CVA6 Coxsackievirus A9 CVA9 Coxsackievirus A17 CVA17 Enterovirus 70 EV70 y Poliovirus 1 PV1 No se analizaron en cantidades significativamente estadisticas los 63 serotipos Dado que los sitios de uni n del iniciador y de la so
122. n of Haemophilus Influenzae Type B and ECHO Virus Type 9 from the Cerebrospinal Fluid New England Journal of Medicine 1962 267 142 144 8 Sferra TJ Pacini DL Simultaneous recovery of bacteria and viral pathogens from cerebrospinal fluid Pediatric Infectious Disease Journal 1988 7 552 556 9 Dronkert ML Ketel AG de Groot R Simultaneous occurrence of group B Streptococcus and echovirus 20 European Journal of Pediatrics 1996 155 915 Unterst tzung Wenn Sie Unterst tzung ben tigen wenden Sie sich mithilfe der folgenden Kontaktdaten an Cepheid Geben Sie bei Ihrem Anruf bzw in Ihrer E Mail auf jeden Fall die Seriennummer des Instruments und die Chargen ID des Reagenz an Nordamerika Kontaktdaten f r technischen Support Tel 1 888 838 3222 E Mail techsupport cepheid com Sie k nnen den technischen Support von Cepheid montags bis freitags von 6 00 bis to 17 00 Uhr pazifischer Zeit erreichen EU Kontaktdaten f r technischen Support Tel 33 563 82 53 19 E Mail techsupport cepheideurope fr Andere Standorte Wenden Sie sich an Ihre lokale Cepheid Niederlassung 62 300 5052 Rev G October 2009 Symboltabelle v lt 3 o o Bedeutung Katalog Nr Medizinisches Ger t zur In vitro Diagnostik Nicht wiederverwenden Vorsicht beiliegendes Dokument konsultieren Hersteller Reicht f r lt n gt Tests Verfallsdatum CONTROL Kontrolle a AB Autorisierte Vertretung in der Euro
123. nda se conservan en todos los serotipos y que la longitud del amplic n es la misma para todos los serotipos cabe esperar que la eficacia de amplificaci n sea la misma para todos los serotipos Se seleccionaron los 5 serotipos arriba indicados para representar a cada una de las especies de enterovirus CVA6 A CVA9 B CVA17 C EV70 D y PVI poliovirus Tabla 7 Limite de detecci n para cinco 5 serotipos El LOD de los cinco serotipos uno para cada especie de enterovirus se muestran en la tabla siguiente Limite de detecci n Serotipo TCID mL CVAg 80 0 EV70 1 3 PVI 4 0 CVA17 1 0 CVA6 33 0 Reproducibilidad La reproducibilidad fue determinada en un estudio ciego multicentro utilizando un panel de precisi n formado por cuatro muestras Tres de los centros probaron cada panel tres veces al dia durante 10 dias de pruebas obteni ndose un total de 90 resultados por muestra de panel El panel de precisi n estaba formado por una muestra negativa y tres muestras positivas cada una de ellas con un serotipo de EV especifico a adido al LCR sintetico en una concentraci n cercana al limite de detecci n Tabla 8 Resumen de los resultados de reproducibilidad En la tabla siguiente se muestran el porcentaje de correspondencia los valores Ct medios para cada concentraci n las desviaciones est ndares asociadas el porcentaje del coeficiente de desviaci n entre los diferentes dias y los diferentes cent
124. ngite enterovirale di solito si autorisolve nell arco di 7 10 giorni Tuttavia cause non virali della meningite per esempio la meningite batterica possono essere gravi e causare invalidit o morte se non trattate tempestivamente pertanto la meningite deve essere presa seriamente Un test per enterovirus insieme all osservazione clinica e ad altre informazioni cliniche pu aiutare i medici a identificare i pazienti con meningite enterovirale per facilitare la gestione del paziente Principio della procedura GeneXpert Dx System consente di automatizzare e integrare la purificazione dei campioni l amplificazione degli acidi nucleici e il rilevamento della sequenza bersaglio in campioni semplici o complessi utilizzando i saggi PCR e RT PCR real time Il sistema composto da uno strumento un personal computer e dal software gi installato per l esecuzione di analisi su campioni raccolti e per la visualizzazione dei risultati Il sistema richiede l uso di cartucce Xpert GeneXpert monouso nelle cartucce sono contenuti i reagenti per la PCR e sempre nella cartuccia avviene la reazione di PCR Poich le cartucce sono indipendenti non sussiste alcun rischio di contaminazione crociata tra campioni Per una descrizione completa del sistema vedere il Manuale dell operatore di GeneXpert Dx System Il saggio Xpert EV progettato per rilevare l RNA di enterovirus EV regione non tradotta UTR 5 del genoma di enterovirus tra il nuc
125. ningitis including bacteria mycobacteria other viruses e g herpes family viruses arboviruses mumps virus eto and fungi Legend _ vi EV Primar vi 4 CIC Prima va Fluorescence 10 20 30 40 Cycles Abbildung 2 Positives Ergebnis Fenster View Results Ergebnisse anzeigen im GeneXpert Dx System Die SPC IC wird als CIC angezeigt 300 5052 Rev G October 2009 49 Deutsch NEGATIVE NEGATIV Abbildung 3 Es wurde keine EV Nukleins ure nachgewiesen aber die SPC erf llt die Akzeptanzkriterien Fenster View Results Ergebnisse anzeigen im GeneXpert Dx System Bitte beachten Sie dass die SPC IC als CIC angezeigt wird EV NEG CIC SPC IC PASS BESTANDEN Sondenpr fung PASS BESTANDEN Ein negatives Xpert EV Ergebnis schlie t Enteroviren nicht als Ursache f r Meningitis aus Enteroviren wurden lediglich nicht nachgewiesen f Test and Analyte Result Assay Name Xpert EV Version 2 EndPt Analyte Result 0 0 NEG 144 0 PASS Fluorescence Abbildung 3 Negatives Ergebnis Fenster View Results Ergebnisse anzeigen im GeneXpert Dx System Bitte beachten Sie dass die SPC IC als CIC angezeigt wird 50 300 5052 Rev G October 2009 Interpretation der Ergebnisse INVALID UNG LTIG Abbildung 4 Es kann nicht ermittelt werden ob EV Nukleins ure vorhanden ist oder nicht Test mit
126. ns ure vorhanden ist oder nicht Test mit zus tzlicher Probe wiederholen Die erfassten Daten reichen f r ein Testergebnis nicht aus beispielsweise hat der Bediener den Test abgebrochen bevor er abgeschlossen war EV NO RESULT KEIN ERGEBNIS CIC SPC IC NO RESULT KEIN ERGEBNIS Sondenpr fung KA 300 5052 Rev G October 2009 51 Deutsch Gr nde f r eine Wiederholung des Tests Test mit einer frischen Probe wiederholen wenn die folgenden Ergebnisse generiert werden Das Ergebnis INVALID UNG LTIG weist darauf hin dass die SPC IC Kontrollen fehlgeschlagen sind Die Probe wurde nicht ordnungsgem verarbeitet oder die PCR ist gehemmt Das Ergebnis ERROR FEHLER weist darauf hin dass die Sondenpriifungskontrolle fehlgeschlagen ist und dass der Test abgebrochen wurde und zwar wahrscheinlich bedingt dadurch dass das Reaktionsgef unsachgem bef llt ein Problem mit der Sondenintegrit t festgestellt oder der Maximaldruck berschritten wurde Das Ergebnis NO RESULT KEIN ERGEBNIS weist darauf hin dass nicht gen gend Daten erfasst wurden Beispielsweise hat der Bediener den Test abgebrochen bevor er abgeschlossen war Einschr nkungen Ergebnisse des Xpert EV Tests sollten unter Ber cksichtigung anderer Labor und klinischer Daten interpretiert werden die dem Kliniker zur Verf gung stehen Bei einem positiven Xpert EV Testergebnis ist nicht auszuschlie en dass andere Krankheitserreger wie
127. nterfering substances encountered in CSF Substances tested were white blood cells protein whole blood and hemoglobin WBC content was tested using leukocytes K562 human leukemia cells spiked into CSF To address potential interference from bloody taps human CSF specimens contaminated with various levels up to 125 000 RBC mm of blood were tested The concentration ranges and the interfering substances found in normal CSF are indicated in Table 1a Also indicated are the potential ranges found in CSF during meningitis Each substance was spiked at levels that could be encountered with normal or meningitis patients All tests were performed with CSF spiked with enterovirus serotype CVA9 at 80 TCIDs0 mL 3x LOD Table 1a Samples of potentially interfering endogenous substances tested in Xpert EV Concentration range Potential CSF concentration Substance found in normal CSF range during meningitis Sample tested with XpertEV Concentrations Tested WBC 0 5 cells mm 5 5000 cells mm K562 cells Cells mm3 O 3 57 35 7 357 7140 CSF Proteins 13 40 mg dL 15 217 mg dL BSA IgG Protein Concentration mg dL 1 1 ratio 0 30 300 1 071 Blood None Not applicable 14 bloody tap Human CSF 0 to approximately 2 5 v v blood Hemoglobin 12 18 g dL RBC Not applicable except in Hemoglobin Ferrous HgB g dL bloody taps powder spiked into CSF 0 0 36 0 71 2 14 3 6 Represents approximately v v blood in CSF respectively 0 2 5 5
128. ompos s des poliovirus des virus Coxsackie des cho virus et des ent rovirus Les ent rovirus provoquent une vaste gamme d infections et se propagent le plus souvent par contact direct avec les s cr tions respiratoires d une personne infect e l Les sympt mes communs sont la fi vre de forts maux de t tes des torticolis des douleurs aux yeux caus es par les lumi res vives un tat de somnolence ou de confusion des naus es et des vomissements Chez les nourrissons les sympt mes incluent la fi vre l irritabilit des difficult s se r veiller ou une perte d app tit Alors que la plupart des infections sont asymptomatiques ou se traduisent par de faibles fi vres elles entra nent souvent l hospitalisation en particulier des nourrissons et des enfants Environ 90 des cas de m ningites virales sont provoqu s par des ent rovirus ceux ci constituent la cause la plus courante de m ningite aux tats Unis avec un nombre d hospitalisations estim de 30 000 50 000 chaque ann e 3 La m ningite ent rovirus dispara t g n ralement par elle m me au cours d une p riode de 7 10 jours Cependant des causes non virales de m ningites par exemple les m ningites bact riennes peuvent tre graves et entra ner une infirmit ou la mort si elles ne sont pas trait es rapidement par cons quent la m ningite doit tre prise au s rieux Un test de d tection d ent rovirus accompagn d observations et d autres inf
129. ompu EV NO RESULT CIC SPC IC NO RESULT Probe Check FAIL PAS DE R SULTAT S il est impossible de d terminer la pr sence ou l absence d acide nucl ide cible d ent rovirus r p tez le test avec un chantillon suppl mentaire Trop peu de donn es ont t collect es pour produire un r sultat de test par exemple l op rateur a interrompu un test en cours EV NO RESULT CIC SPC IC NO RESULT Contr le de la sonde NA 28 300 5052 Rev G October 2009 Interpretation des r sultats Raisons pour lesquelles le test doit tre recommenc R p tez le test avec un nouvel chantillon si les r sultats suivants sont produits Le r sultat NON VALIDE indique que les SPC IC ont chou L chantillon n a pas t trait correctement ou la PCR est inhib e Le r sultat ERREUR indique l chec du contr le de la sonde et l interruption du test probablement cause du remplissage incorrect du tube de r action car un probl me d int grit de la sonde de r actif a t d tect ou car les limites maximales de pression ont t d pass es Le r sultat PAS DE R SULTAT indique que trop peu de donn es ont t collect es Par exemple l op rateur a interrompu un test en cours 300 5052 Rev G October 2009 29 Frangais Restrictions Les r sultats du test EV Xpert doivent tre interpr t s conjointement avec d autres donn es de laboratoire et cliniques la disposition du clin
130. oms maximum temperature contact history CSF RBC WBC and differential CSF glucose and total protein CSF bacterial culture and gram stain blood glucose and viral culture from other specimens if available A patient was defined as having EV meningitis Clinical Diagnosis if the following criteria were met clinical evidence consistent with meningitis laboratory results for CSF Gram stain CSF bacterial culture CSF glucose CSF blood glucose ratio CSF total protein concentration CSF leukocyte count and either detection of an EV genome in CSF and or positive CSF EV culture Initially 475 patients were submitted for enrollment Forty one patients did not meet the study inclusion criteria and were subsequently eliminated from the analysis leaving 434 analyzable subjects of which 255 had results from all the tests described above Table 2a Prospective clinical samples evaluated against Clinical Diagnosis A total of 199 eligible prospective patients were enrolled 133 patients had the 6 laboratory results for the clinical truth evaluation The clinical sensitivity and specificity for Xpert EV are shown in the table below Clinical Diagnosis 26 3 Xpert EV 1 103 Totals 27 106 Clinical Sensitivity 96 3 26 27 95 CI 81 0 99 9 Clinical Specificity 97 2 103 106 95 CI 91 9 99 4 10 300 5052 Rev G October 2009 Performance Characteristics Table 2b Banked prospectively collecte
131. ormations cliniques peut aider les m decins identifier les patients atteints de m ningite ent rovirus et contribuer leur traitement Principe de la procedure Le GeneXpert Dx System automatise et int gre la purification d chantillons l amplification d acide nucl ique et la d tection de la s quence cible dans des chantillons simples ou complexes en utilisant des tests de PCR et de RT PCR en temps r el Le syst me est compos d un appareil d un ordinateur personnel et d un logiciel pr charg pour effectuer des tests sur des chantillons pr lev s et afficher les r sultats Le syst me requiert l utilisation de cartouches Xpert jetables et usage unique GeneXpert cartouches qui contiennent les r actifs PCR et abritent la proc dure de PCR La contamination crois e entre les chantillons est limin e car les cartouches sont ind pendantes Pour obtenir une description compl te du syst me consultez le Manuel d utilisation de GeneXpert Dx System Le test EV Xpert est con u pour d tecter l ARN d ent rovirus r gion non traduite en 5 du g nome de l ent rovirus entre les nucl otides 452 et 596 dans des chantillons de LCR Le test inclut des r actifs des amorces et des sondes pour la d tection simultan e d acide nucl ique partir de l ent rovirus cible et du contr le du traitement de l chantillon contr le interne SPC IC Le test comprend le SPC IC pour v rifier le traitement appropri du vir
132. oxsackie A21 0 03 C Coxsackie A22 0 02 C Coxsackie A24 0 10 D EV 68 199 53 D EV 70 2 00 Poliovirus Poliovirus 1 2 00 Poliovirus Poliovirus 2 0 40 Poliovirus Poliovirus 3 20 00 58 300 5052 Rev G October 2009 Leistungsmerkmale Analytische Spezifit t Die beim Xpert EV Test verwendeten Primer und Sondensequenzen dienen nicht zum Nachweis von Nukleins uren die aus den folgenden Organismen extrahiert wurden die meningitis hnliche Symptome hervorrufen EBV HSV 1 HSV 2 HHV 6 HHV 7 AdV 2 Masern Mumps Parainfluenza 1 3 Influenza A Influenza B VZV CMV Streptokokken der Gruppe B Haemophilus influenzae B H influenzae Non B Escherichia coli Neisseria meningitides Citrobacter freundii und Citrobacter koseri Auch hat der Xpert EV Test bei der Verarbeitung ganzer Organismen der aufgef hrten Krankheitserreger durch die Xpert EV Kartusche keine nachweisbaren Amplikone erzeugt In der folgenden Tabelle sind die getesteten Organismen und ihre jeweilige Konzentration aufgef hrt Tabelle 6 Analytische Spezifit t des Xpert EV Tests Im Xpert EV Test wurden ganze Organismen auf ihre Spezifit t hin getestet die getesteten Konzentrationen der Organismen sind in der folgenden Tabelle aufgef hrt Organismus Anzahl der Organismen Test HHV 6 3 1X 10 Partikel HHV 7 1 4 x 107 Partikel CMV 700 TCID EBV 140 TCID HSV 1 1 4 X 10 TCID HSV 2 1 4 x 10 TCID AdV 2 1 4 X 10
133. p ischen Gemeinschaft Temperaturbegrenzung Biologische Gefahr taal Hersteller Cepheid 904 Caribbean Drive Sunnyvale CA 94089 1189 USA Telefon 1 408 541 4191 Fax 1 408 541 4192 Autorisierte Vertretung Cepheid Europe Vira Solelh 81470 Maurens Scopont Frankreich Tel 33 563 82 53 00 Fax 33 563 82 53 01 E Mail cepheid cepheideurope fr C 1vD 300 5052 Rev G October 2009 Symboltabelle 63 Deutsch 64 300 5052 Rev G October 2009 Espanol Dispositivo sanitario para diagn stico in vitro Denominaci n com n Xpert EV Nombre com n o de uso frecuente Xpert EV Assay Uso previsto El ensayo Xpert EV de Cepheid es una reacci n en cadena de la polimerasa de transcripci n inversa TI RCP que utiliza el sistema GeneXpert Dx para la detecci n cualitativa presunta de ARN de enterovirus EV en muestras de l quido cefalorraqu deo LCR de individuos con signos y s ntomas de meningitis Esta prueba junto con otros resultados de laboratorio e informaci n cl nica puede usarse como una ayuda en el diagn stico en laboratorio de una infecci n por enterovirus en pacientes en los que exista sospecha cl nica de meningitis o meningoencefalitis Las caracter sticas de rendimiento del ensayo no han sido establecidas para pacientes inmunocomprometidos o inmunodeprimidos PRECAUCI N Los resultados del ensayo Xpert EV deben utilizarse nicamente como complemento de las observaciones cl
134. pen identisch ist sodass davon auszugehen ist dass die Amplifizierungseffizienz bei allen Serotypen dieselbe ist Die f nf oben genannten Serotypen wurden stellvertretend f r die einzelnen Enterovirenarten CVA6 A CVA9 B CVA17 C EV70 D und PV1 Poliovirus ausgew hlt Tabelle 7 Nachweisgrenze der f nf 5 Serotypen In der folgenden Tabelle sind die Nachweisgrenzen der f nf 5 Serotypen zu den verschiedenen Enterovirenarten aufgef hrt Nachweisgrenze LOD Serotyp TCID ml CVAg 80 0 EV70 1 3 PVI 4 0 CVA17 1 0 CVA6 33 0 Reproduzierbarkeit Die Reproduzierbarkeit wurde in einer multizentrischen blinden Studie mit einer Genauigkeitsauswahl von vier Proben gepr ft Drei Standorte testeten jede Auswahlgruppe an 10 Testtagen dreimal pro Tag sodass insgesamt 90 Ergebnisse pro Probengruppe vorlagen Die Genauigkeitsauswahl bestand aus einer negativen Probe und drei positiven Proben die jeweils einen mit synthetischem CSF versetzten spezifischen EV Serotypen in einer Konzentration nahe der Nachweisgrenze enthielten Tabelle 8 Zusammenfassung der Reproduktionsergebnisse In der folgenden Tabelle sind die prozentuale bereinstimmung die durchschnittlichen Ct Werte zu jeder Konzentration die verbundenen Standardabweichungen der prozentuale Abweichungskoeffizient der multizentrischen Reproduzierbarkeitsstudie zwischen den verschiedenen Tagen und den verschiedenen Standorten dargestellt Zwi
135. r 2 Jour 3 Jour 4 jours Accord total N gatif Accord total 20 20 18 18 20 20 20 20 78 78 100 Moyenne so so so so so Deviations standard so so so so so CV so so so so so CAg 2X LDD i Accord total 4 5 5 5 4 5 5 5 18 20 90 Moyenne 36 65 36 54 36 53 36 54 36 56 D viations standard 0 56 0 46 0 21 0 69 0 48 CV 1 53 1 26 0 57 1 89 1 31 CA9 4X LDD Accord total 5 5 5 5 5 5 4 43 19 19 100 Moyenne 34 98 35 56 35 52 35 03 35 28 D viations standard 0 53 0 67 0 7 0 3 0 6 CV 1 52 1 88 1 97 0 86 1 70 EV70 2X LDD Accord total 5 5 5 5 5 54 5 5 20 20 100 Moyenne 37 38 37 3 37 55 36 88 37 2 D viations standard 1 78 0 74 2 01 0 81 1 3 CV 4 76 1 98 5 35 2 20 3 49 EV70 4X LDD Accord total 5 5 5 5 5 5 5 5 20 20 100 Moyenne 36 50 36 60 36 12 35 94 36 29 Deviations standard 0 58 0 97 0 29 0 84 0 72 CV 1 59 2 65 0 80 2 34 1 98 Nombre d appareils utilis s 10 n 10 10 31 Nombre de modules utilis s 40 41 41 40 121 Nombre total d exp riences 21 2 Pas de r sultat 1 Non valide Nombre total d exp riences 5 1 r sultat n gatif la place d un r sultat positif 3 Nombre total d exp riences 5 1 Non valide 4 Nombre total d exp riences 6 1 Pas de r sultat 300 5052 Rev G October 2009 39 Frangais References 1 Viral Aseptic Meningitis Centers for Disease Control and Prevention National Center for Infectious Diseases Respiratory and Enteric Viruses B
136. r 57 Patienten wiesen bereinstimmende Kulturergebnisse auf bei einem Patienten wichen die Kulturergebnisse vor Ort von den Kulturergebnissen des Zentrallabors ab Das Zentrallabor verwendete zur Ansetzung der Viruskulturen Super E Mix Shell Phiolen und die Zellen wurden mit Enterovirusantik rper Pan gef rbt Die Zellen bei denen der Pan Enterovirusantik rper positiv war wurden zudem zur Identifizierung der Enteroviren mit indirektem Immunfluoreszenz Antik rper gef rbt Die Studieneinrichtungen wandten bei der Ansetzung der Viruskulturen ihre jeweiligen Standardverfahren an Tabelle 3a Auswertung prospektiver klinischer Proben gegen ber der Viruskultur Von den 199 geeigneten prospektiven Proben wiesen 131 bei der Viruskultur Ergebnisse auf Bei den Viruskulturen gab es zwischen den Studieneinrichtungen und dem Zentrallabor keine voneinander abweichenden Ergebnisse Die positiven und negativen Ubereinstimmungen zwischen dem Xpert EV und der Viruskultur sind in der folgenden Tabelle dargestellt Viruskultur _ 8 13 Xpert EV o 110 Insgesamt 8 123 Positive bereinstimmung 100 0 8 8 95 Cl 63 1 100 0 Negative bereinstimmung 89 4 110 123 Cl 82 65 94 3 300 5052 Rev G October 2009 55 Deutsch Tabelle 3b Auswertung von konservierten prospektiv gesammelten klinischen Proben gegen ber der Viruskultur Von den 235 geeigneten retrospektiven Proben wiesen 211 bei der Viruskultur Ergebnisse
137. ranch http www cdc gov ncidod dvrd revb enterovirus viral_meningitis htm accessed April 11 2006 2 Rotbart HA Viral meningitis Semin Neurol 2000 20 3 277 92 3 Romero JR Rotbart HA Enteroviruses In Murray PR Baron EJ eds Manual of Clinical Microbiology 8th edition Washington DC American Society for Microbiology 2003 1427 1438 4 Robinson CC Willis M Meagher A et al Impact of rapid polymerase chain reaction results on management of pediatric patients with enteroviral meningitis Pediatric Infectious Disease Journal 2002 21 283 6 5 Centers for Disease Control and Prevention Biosafety in microbiological and biomedical laboratories Richmond JY and McKinney RW eds 1993 HHS Publication number CDC 93 8395 6 Clinical and Laboratory Standards Institute anciennement National Committee for Clinical Laboratory Standards Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections Approved Guideline Document M29 refer to latest edition 7 Wright HT McAllister RM Ward R Mixed Meningitis Report of a Case with Isolation of Haemophilus Influenzae Type B and ECHO Virus Type 9 from the Cerebrospinal Fluid New England Journal of Medicine 1962 267 142 144 8 Sferra TJ Pacini DL Simultaneous recovery of bacteria and viral pathogens from cerebrospinal fluid Pediatric Infectious Disease Journal 1988 7 552 556 9 Dronkert ML Ketel AG de Groot R Simultaneous occurrence of group B Strep
138. ras etc y hongos N Test and Analyte Result Assay Name Xpert EV Version 2 Test Result SSH Analyte Ct EndPt Analyte Result Probe Name Check Result EV 31 6 456 0 POS PASSI CIC 35 4 161 0 NA PASS Disclaimer For In Vitro Diagnostic Use Only Positive Xpert EV results do not rule out other causes of meningitis including A bacteria mycobacteria other viruses e g herpes family viruses arboviruses mumps virus etc and fungi Gs _ Legend _ EV Primary CIC Primary NN Fluorescence Figura 2 Resultado positivo Sistema GeneXpert Dx ventana View Results Ver resultados Observe que el SPC IC se muestra como CIC 70 300 5052 Rev G October 2009 Interpretaci n de los resultados NEGATIVE NEGATIVO Figura 3 No se ha detectado el cido nucleico del EV objetivo pero SPC satisface los criterios de aceptaci n Sistema GeneXpert Dx Ventana View Results Ver resultados Observe que el SPC IC se muestra como CIC EV NEG CIC SPC IC PASS Probe Check PASS Un resultado negativo en el ensayo Xpert EV no descarta los enterovirus como causa de la meningitis pero no se ha podido detectar el enterovirus Test and Analyte Result Assay Name Xpert EV Version 2 Test Result NEGATIVE i Analyte Name EV cic Fluorescence Figura 3 Resultado n
139. realizar un cultivo viral Adem s los cultivos virales de 114 muestras de pacientes fueron realizados en los centros participantes en el estudio De estos 114 sujetos 57 dispon an de cultivos virales realizados en los centros del estudio y en el laboratorio central Cincuenta y seis de los 57 sujetos presentaban resultados concordantes en los cultivos y 1 sujeto present discrepancia entre los resultados locales y los centrales El laboratorio central us viales Super E Mix Shell para el cultivo viral y las c lulas fueron te idas con anticuerpo de pan enterovirus Las c lulas que resultaron positivas para el anticuerpo del pan enterovirus fueron te idas posteriormente con anticuerpo inmunofluorescente indirecto para la identificaci n del enterovirus Cada centro participante us su propio procedimiento est ndar para el cultivo viral Tabla 3a Muestras cl nicas prospectivas evaluadas con respecto al cultivo viral De las 199 muestras prospectivas elegibles 131 dieron resultados en el cultivo viral No hubo resultados discrepantes en el cultivo viral entre los centros participantes y el laboratorio central Las correspondencias positivas y negativas entre el Xpert EV y el cultivo viral se muestran en la siguiente tabla Cultivo viral _ 8 13 Xpert EV 2 o 110 Totales 8 123 Correspondencia positiva 100 0 8 8 95 Cl 63 1 100 0 Correspondencia negativa 89 4 110 123 CI 82 65 94 3 300 5052 Rev
140. renti analizzate in Xpert EV Sostanza interferente Concentrazione EV C Nessuna Controllo n 8 Non applicabile 36 1 Proteina n 4 1 071 mg dL 38 2 Leucotici WBC n 4 7 140 cellule mm3 37 2 Puntura con sangue campione 1 2 5 v V sangue 35 9 Puntura con sangue campione 2 2 5 v V sangue 35 0 Puntura con sangue campione 3 2 5 v V sangue 35 3 Emoglobina n 4 3 6 g dL 36 9 Caratteristiche sulle prestazioni Prestazioni cliniche Le caratteristiche sulle prestazioni del saggio Xpert EV sono state determinate in uno studio sperimentale in pi laboratori presso sei istituti Per essere arruolato nello studio un paziente deve essere stato sottoposto a rachicentesi per i sintomi della meningite ed aver eseguito un test EV e o la coltura virale prescritti dal medico Il paziente deve avere sufficiente volume in eccesso di liquido cerebrospinale superiore o uguale a 0 5 mL e aver fornito il consenso scritto se richiesto I campioni dei pazienti sono stati esclusi se il liquido cerebrospinale per il test dell acido nucleico era stato centrifugato o se i saggi per la determinazione della realt clinica non erano stati eseguiti nello stesso ciclo di congelamento scongelamento del campione anche stata presa in considerazione l anamnesi clinica dei pazienti segni e sintomi clinici giorni trascorsi dalla comparsa dei sintomi temperatura massima storia del contatto eritrociti RBC leucotici WBC e formula le
141. reparation of CDNA The cDNA is then mixed with dry PCR reagents and transferred into the reaction tube for real time PCR and detection The EV primers and probe amplify and detect a consensus region of the enterovirus 5 untranslated region UTR The test takes approximately 2 5 hours Reagents and Instruments Y Material Provided The Xpert EV assay kit GXEV 100N 10 contains sufficient reagents to process 10 samples The kit contains the following Xpert EV Cartridges Bead 1 freeze dried e Reverse transcriptase RNase Inhibitor dNTPs BSA bovine serum albumin Bead 2 freeze dried Reverse Oligonucleotide Primers BSA bovine serum albumin Bead 3 freeze dried DNA Polymerase dNTPs BSA bovine serum albumin Bead 4 freeze dried Forward Oligonucleotide Primers Fluorescently labeled Oligonucleotide Probes BSA bovine serum albumin Bead 5 freeze dried Sample processing control encapsidated CIC RNA pseudovirus BSA bovine serum albumin Binding Reagent 1 Ethanol e Water Wash Reagent 2 e Cysteamine HCI EDTA ethylenediaminetetraacetic acid e KCI MTG monothioglycerol PEG polyethyleneglycol e Tris pH 7 0 e Tween 20 Water 10 cartridges kit 1 per cartridge 1 per cartridge 1 per cartridge 1 per cartridge 1 per cartridge 10 x 1mL 10 x 3 2 mL 300 5052 Rev G October 2009 Warnings and Precautions Elution Reagent 3 10 x 2 0 m
142. respiratory secretions of an infected person The common symptoms are fever severe headache stiff neck bright lights hurting the eyes drowsiness or confusion and nausea and vomiting In infants the symptoms include fever fretfulness or irritability difficulty in awakening or loss of appetite While most infections are either asymptomatic or result in minor febrile illnesses they often result in hospitalization especially of infants and children About 90 of viral meningitis cases are caused by enteroviruses and enteroviruses are the most common cause of meningitis in the United States with an estimated 30 000 to 50 000 hospitalizations each year Enteroviral meningitis usually self resolves within 7 10 days However non viral causes of meningitis for example bacterial meningitis can be serious and may result in disability or death if not treated promptly therefore meningitis should be taken seriously An enterovirus test together with clinical observation and other clinical information can help physicians identify patients with enteroviral meningitis to aid in patient management Principle of the Procedure The GeneXpert Dx System automates and integrates sample purification nucleic acid amplification and detection of the target sequence in simple or complex samples using real time PCR and RT PCR assays The system consists of an instrument personal computer and preloaded software for running tests on collected samples and vi
143. ros para el estudio de reproducibilidad multicentro N de muestras correctamente clasificadas Entre d as Entre centros Total Ct medio Serotipo TCID mL Centro Centro2 Centro3 deEV DE CV DE CV DE CV Negativo 30 30 30 30 30 30 CVA6 134 30 30 30 30 29 29 35 0 0 343 0 98 0 175 0 50 1 101 3 15 CVAg 320 30 30 30 30 30 30 34 4 o 0 00 o 0 00 0 61 1 77 CVA17 3 30 30 30 30 29 29 33 8 o 0 00 o 0 00 0 414 1 22 Correspondencia total 120 20 120 120 118 18 de correspondencia 100 00 100 00 100 00 Dos muestras no dieron ning n resultado en el GeneXpert 300 5052 Rev G October 2009 81 Espanol Con el fin de llevar al l mite a n m s el sistema se llev a cabo un segundo estudio As se realiz un estudio de reproducibilidad interno durante cuatro d as sobre m ltiples instrumentos GeneXpert 31 y m dulos ICORE 121 Se a adieron dos subtipos de virus completos representativos Coxsackievirus CVA9 y Enterovirus EV70 a LCR humano negativo para crear muestras simuladas a 2 x LOD y 4x LOD La muestra negativa fue analizada 20 veces mientras que dos muestras positivas fueron analizadas cinco 5 veces al d a en dos concentraciones Del total de muestras comprobadas dos muestras fueron definidas como Inv lido y tres muestras como Sin resultado seg n las definiciones de control del software del instrumento De los 157 resultados comunicables 155 se clasificaron correctam
144. rot ines du 13 40 mg dl 15 217 mg dl SAB IgG Concentration de prot ines mg dl LCR rapport 1 1 O 30 300 1 071 Sang Aucune Sans objet 14 ponctions sanglantes o environ 2 5 v v de sang de liquide c phalorachidien humain H moglobine 12 18 g dl Sans objet sauf dans les H moglobine poudre H moglobine g dl d h maties ponctions sanglantes ferreuse tudi e en solution 0 0 36 0 71 2 14 3 6 dans le LCR Repr sente peu pr s v v de sang dans le LCR respectivement 0 2 5 5 15 25 30 300 5052 Rev G October 2009 Caracteristiques des performances Comme indiqu dans le Tableau 1b des r sultats d ent rovirus positifs ont t obtenus m me lorsqu un niveau maximal de substances potentiellement interf rentes a t introduit lors du test Tableau 1b R sultats d tude avec des substances endog nes potentiellement interf rentes test es dans le Xpert EV Substance interf rente Concentration C d ent rovirus Aucune Contr le n 8 Sans objet 36 1 Prot ine n 4 1071 mg dl 38 2 Leucocytes n 4 7 140 cellules mm3 37 2 Ponction sanglante chantillon 1 2 5 v de sang 35 9 Ponction sanglante chantillon 2 2 5 v V de sang 35 0 Ponction sanglante chantillon 3 2 5 v V de sang 35 3 H moglobine n 4 3 6 g dl 36 9 Caract ristiques des performances Performances cliniques Les caract ristiques des performances du test EV Xpert ont t d ter
145. rotypes so it would be expected that the amplification efficiency is the same for all serotypes The five serotypes indicated above were selected to represent each of the enterovirus species CVA6 A CVA9 B CVA17 C EV70 D and PV1 poliovirus Table 7 Limit of detection for five 5 serotypes The LOD of the five 5 serotypes one from each of the enterovirus species are shown in the table below Limit of Detection Serotype TCID mL CVAg 80 0 EV70 1 3 PVI 4 0 CVA17 1 0 CVA6 33 0 Reproducibility Reproducibility was assessed in a multi center blinded study using a precision panel consisting of four specimens Three sites tested each panel three times per day over 10 testing days for a total of 90 results per panel specimen The precision panel consisted of a negative sample and three positive samples each with a specific EV serotype spiked into synthetic CSF at a concentration near the limit of detection Table 8 Summary of the first reproducibility study results The percent of agreement the average Ct values for each concentration the associated standard deviations percent coefficient of variation for between day and between site for the multi center reproducibility study are shown in the table below No of specimens correctly classified Between Day Between Site Total Mean Serotype TCID mL Site 1 Site 2 Site 3 EVCt SD CV SD CV SD CV Negative 30 30 30 30 30 3
146. schen den Zwischen den Anzahl der korrekt klassifizierten Proben Tagen Standorten Insgesamt Standort Standort Standort Mittlerer Serotyp TCID mi 1 2 3 EV Ct SD CV SD CV SD CV Negativ 30 30 30 30 30 30 CVA6 134 30 30 30 30 29 29 35 0 0 343 0 98 0 175 0 50 1101 315 CVA9 320 30 30 30 30 30 30 34 4 o 0 00 0 0 00 0 61 1 77 CVA17 3 30 30 30 30 29 29 33 8 o 0 00 o 0 00 0 414 1 22 Gesamt bereinstimmung 120 120 120 120 118 118 bereinstimmung in 100 00 100 00 100 00 1 Bei zwei Proben wurde kein GeneXpert Ergebnis erzielt 60 300 5052 Rev G October 2009 Reproduzierbarkeit Um dem System zus tzlich Nachdruck zu verleihen wurde eine zweite Studie durchgef hrt ber vier Tage wurde eine interne Reproduzierbarkeitsstudie mit mehreren GeneXpert Instrumenten 31 und ICORE Modulen 121 durchgef hrt Zwei repr sentative Whole Virus Subtypen d h Coxsackievirus CVA9 und Enterovirus EV70 wurden zur Erzeugung simulierter Proben mit zweifacher und vierfacher LOD mit negativer humaner CSF versetzt Die negative Probe wurde 20 Mal getestet w hrend zwei positive Proben in beiden Konzentrationen f nfmal 5x pro Tag getestet wurden Unter allen getesteten Proben lauteten die Ergebnisse gem den Definitionen der Softwaresteuerung des Instruments bei zwei Proben Invalid Ung ltig und bei drei Proben No Result Kein Ergebnis Von den 157 verwertbaren Ergebnissen waren 155 korrekt kla
147. ssifiziert Tabelle 9 Zusammenfassung der Ergebnisse der zweiten Reproduktionsstudie In der folgenden Tabelle sind das Ma an bereinstimmung die durchschnittlichen Ct Werte zu jeder Konzentration die verbundenen Standardabweichungen und der prozentuale Abweichungskoeffizient f r jeden Tag dargestellt Gesamt bereinstimmung C Ergebnisse Prozentuale Gesamt berein Proben ID Tag Tag 2 Tag 3 Tag 4 Alle Tage stimmung Negativ Gesamt bereinsti mmung 20 20 18 18 20 20 20 20 78 78 100 Durchschnitt KA KA KA KA KA SD KA KA KA KA KA CV KA KA KA KA KA CA9 2X LOD Gesamt bereinsti mmung 4 5 5 5 4 5 5 5 18 20 90 Durchschnitt 36 65 36 54 36 53 36 54 36 56 SD 0 56 0 46 0 21 0 69 0 48 CV 1 53 1 26 0 57 1 89 1 31 CA9 4X LOD Gesamt bereinsti mmung 5 5 5 5 5 5 ala 19 9 190 96 Durchschnitt 34 98 35 56 35 52 35 03 35 28 SD 0 53 0 67 0 7 0 3 0 6 CV 1 52 1 88 1 97 0 86 1 70 EV70 2X LOD Gesamt bereinsti mmung 5 5 5 5 5 54 5 5 20 20 100 Durchschnitt 37 38 37 3 37 55 36 88 37 2 SD 1 78 0 74 2 01 0 81 1 3 CV 4 76 1 98 5 35 2 20 3 49 EV70 4X LOD Gesamt bereinsti mmung 5 5 5 5 5 5 5 5 20 20 100 Durchschnitt 36 50 36 60 36 12 35 94 36 29 SD 0 58 0 97 0 29 0 84 0 72 CV 1 59 2 65 0 80 2 34 1 98 Anzahl der verwendeten Instrumente 10 11 10 10 31 Anzahl der verwendeten Module 40 41 41 40 121 Tests insgesamt 21 2 Kein Ergebnis
148. tanden wenn sie die vorbestimmten Akzeptanzkriterien erf llt Bitte beachten Sie dass in der Software des GeneXpert Dx Systems CIC die Bezeichnung f r die SPC IC ist Sondenpr fung Vor Beginn der PCR Reaktion f hrt das System sowohl an der EV Zielsequenz als auch an der SPC IC eine Sondenpr fung durch um die Rehydrierung der Reagenzk gelchen und die Bef llung des Reaktionsgef es zu berpr fen Eine Sondenpr fung gilt als bestanden wenn sie die vorbestimmten Akzeptanzkriterien erf llt Externe Kontrollen Externe Kontrollen m ssen f r Schulungen Leistungstests und externe Qualit tskontrollen des GeneXpert Dx System verwendet werden Externe Kontrollen sollten je nach Anwendungsgebiet nach Ma gabe der anerkannten Akkreditierungsorganisationen auf kommunaler Landes oder Bundesebene verwendet werden Externe Kontrollen k nnen durch Verd nnung von Coxsackievirus A9 Stamm Bozek oder Coxsackievirus A6 Stamm C G Gdula mit CSF von Patienten die bekannterma en negativ sind oder mit synthetischer CSF z B SeraCare Life Sciences Inc Katalognummer HSP 515 zu etwa 10 1 000 TCID50 ml bereitet werden was einen EV Ct Bereich von 32 35 f r den Xpert EV Test ergibt 300 5052 Rev G October 2009 Interpretation der Ergebnisse Interpretation der Ergebnisse Die Ergebnisse sind im GeneXpert Dx System im Fenster View Results Ergebnisse anzeigen verf gbar In diesem Kapitel werden die m glichen Ergebnisse besc
149. tati negativi dell analisi non escludono la presenza di enterovirus Questa analisi non esclude la possibilit di meningite erpetica o meningite micotica sono necessarie analisi supplementari per escludere queste infezioni ATTENZIONE come con altre procedure diagnostiche i risultati ottenuti con il saggio Xpert EV devono essere utilizzati solo come integrazione all osservazione clinica e alle altre informazioni disponibili al medico I risultati positivi di Xpert EV non escludono altre cause di meningite compresi batteri micobatteri altri virus per esempio virus della famiglia degli herpes arbovirus virus della parotite ecc e funghi 300 5052 Rev G October 2009 93 Italiano Sostanze interferenti Sono stati condotti studi con potenziali sostanze interferenti riscontrate nel liquido cerebrospinale Le sostanze analizzate erano globuli bianchi proteine sangue intero ed emoglobina Il contenuto dei globuli bianchi WBC e stato analizzato utilizzando leucociti cellule umane di leucemia K562 aggiunti al liquido cerebrospinale Per affrontare le potenziali interferenze da punture con sangue sono stati analizzati i campioni di liquido cerebrospinale umano contaminati con vari livelli fino a 125 000 RBC mm di sangue Gli intervalli di concentrazione e le sostanze interferenti rilevate nel liquido cerebrospinale normale sono indicati nella Tabella 1a Sono anche indicati i potenziali intervalli rilevati nel liquido cerebrospinale
150. ten Protein Vollblut und H moglobin Der Leukozytengehalt wurde unter Verwendung von mit CSF versetzten Leukozyten humane K562 Leuk miezellen getestet Um einer potenziellen Beeintr chtigung durch das Eindringen von Blut gerecht zu werden wurden Proben humaner CSF getestet die mit verschiedenen Erythrozytenkoncentration bis zu 125 000 Erythrozyten mms kontaminiert waren Die Konzentrationsbereiche und die Hemmstoffe in normaler CSF sind in Tabelle 1a aufgef hrt Ferner sind hier die bei einer Meningitis in der CSF nachgewiesenen potenziellen Bereiche angegeben Jede Substanz wurde mit verschiedenen Konzentrationen versetzt die bei normalen und Meningitispatienten anzutreffen sind Alle Tests wurden mit CSF durchgef hrt die mit dem Enterovirus Serotyp CVA9 in der Dosis 80 TCIDso ml 3x LOD versetzt war Tabelle 1a Proben von in Xpert EV getesteten potenziellen endogenen Hemmstoffen In normaler CSF Potenzieller nachgewiesener Konzentrationsbereich Substanz Konzentrationsbereich in CSF bei Meningitis Mit Xpert EV getestete Probe Getestete Konzentrationen Leukozyten 0 35 Zellen mm3 5 5 000 Zellen mm3 K562 Zellen Zellen mm 0 3 57 35 7 357 7140 CSF 13 40 mg dl 15 217 mg dl BSA IgG Proteinkonzentration mg dl Proteine Verh ltnis 1 1 0 30 300 1 071 Blut Keiner Nicht zutreffend Humane CSF versetzt o bis ca 2 5 VW Blut mit Blut 14 H moglobin Erythrozyten Nicht zutreffend es sei H moglobin Eisenpulver HgB
151. tical Reactivity Enterovirus Serotype Testing A total of 60 enterovirus serotypes were tested with the Xpert EV assay Dilutions of the viral stock were run in replicates of 3 for each serotype at the presumed LOD The dilutions were made in pooled EV negative human sample The estimated analytical sensitivity is shown in Table 5 below 300 5052 Rev G October 2009 13 English Table 5 Estimated analytical sensitivity Sixty of the serotypes were tested and the estimated TCID y mL that these serotypes can be detected are shown in the table below Species Serotype Estimated TCID mL Coxsackie A3 5 01 A Coxsackie A5 12 59 A Coxsackie A6 12 59 A Coxsackie A7 3 33 A Coxsackie A10 2 81 A Coxsackie A12 19 95 A Coxsackie A14 0 10 A Coxsackie A16 0 002 A EV 71 0 16 B Coxsackie Ag 20 00 B Coxsackie B1 4 00 B Coxsackie B2 0 20 B Coxsackie B3 0 028 B Coxsackie B4 0 40 B Coxsackie Bs 0 04 B Coxsackie B6 0 01 B Echo 0 10 B Echo 2 0 032 B Echo 3 200 00 B Echo 4 0 00032 B Echos 0 032 B Echo 6 200 00 B Echo 7 2 00 B Echo 8 0 10 B Echo 9 2 00 B Echo n 40 00 B Echo 12 1 58 B Echo 13 0 01 B Echo 14 0 0005 B Echo 5 0 0032 B Echo 16 0 0005 B Echo 17 0 05 B Echo 18 0 0002 B Echo 19 2 51 B Echo 20 0 032 B Echo 21 1 00 B Echo 24 0 02 B Echo 25 0 50 B Echo 26 0 032 B Echo 27 0 00032 B Echo 29 5 01 B Echo 30 0 01 B Echo 31 0 0032 B Echo 32 0 10 B Echo 33 0 05 B EV 69 0 0002 C Coxsackie An on
152. tococcus and echovirus 20 European Journal of Pediatrics 1996 155 915 Assistance Pour b n ficier d une assistance contactez Cepheid en utilisant l une des informations relatives aux contacts suivants Assurez vous de communiquer le num ro de s rie de l appareil et le num ro d identification du lot de r actifs lorsque vous appelez ou envoyez un courrier lectronique Am rique du Nord Pour b n ficier d une assistance technique utilisez les informations relatives aux contacts suivants T l 1 888 838 3222 Courrier lectronique techsupport cepheid com Vous pouvez joindre l assistance technique de Cepheid par t l phone du lundi au vendredi de 6h00 17h00 heure du Pacifique Union europ enne Pour b n ficier d une assistance technique utilisez les informations relatives aux contacts suivants T l 33 563 82 53 19 Courrier lectronique techsupport cepheideurope fr Autres sites Contactez votre repr sentant local Cepheid 40 300 5052 Rev G October 2009 Tableau des symboles v lt 3 gt o Signification R f rence Appareil a usage m dical de diagnostic in vitro Ane pas r utiliser Attention consultez le document d accompagnement Fabricant Contenu suffisant pour lt n gt tests Date limite d utilisation CONTROL Contr le Mandataire de la Communaut europ enne EL el Limitation de la temp rature Risque biologique Sp td F
153. ucocitaria nel LCS glucosio e proteina totale nel LCS coltura batterica e colorazione gram del LCS glicemia coltura virale da altri campioni se disponibile Un paziente veniva definito come affetto da meningite EV diagnosi clinica se erano soddisfatti i seguenti criteri evidenza clinica coerente con la meningite risultati di laboratorio per colorazione gram del LCS coltura batterica del LCS glucosio nel LCS rapporto glicemia LCS concentrazione di proteine totali nel LCS conta leucocitaria nel LCS e rilevamento di un genoma EV nel liquido cerebrospinale e o coltura EV di LCS positiva Inizialmente sono stati inviati per l arruolamento 475 pazienti 41 pazienti non hanno soddisfatto i criteri di inclusione dello studio e sono stati successivamente eliminati dall analisi lasciando 434 soggetti analizzabili dei quali 255 hanno avuto risultati da tutti i test descritti sopra 300 5052 Rev G October 2009 95 Italiano Tabella 2a Campioni clinici prospettici valutati contro diagnosi clinica E stato arruolato un totale di 199 pazienti prospettici idonei 133 pazienti avevano i risultati dei 6 laboratori per la valutazione della realt clinica La sensibilit e la specificit cliniche per Xpert EV sono illustrate nella tabella riportata sotto Diagnosi clinica 26 3 Xpert EV z 1 103 Totali 27 106 Sensibilit clinica 96 3 26 27 95 CI 81 0 99 9 Specificit clinica 97 2 103 10
154. us cible et il permet de contr ler la pr sence d inhibiteurs dans le test RT PCR pour viter un r sultat n gatif erron Notez que dans le logiciel GeneXpert Dx System CIC est le nom donn au SPC IC Le test inclut galement un contr le de la sonde pour v rifier la r hydratation du r actif l int grit de la sonde et le remplissage du tube de r action dans la cartouche 300 5052 Rev G October 2009 21 Frangais Pour effectuer un test l chantillon de LCR et quatre r actifs sont transf r s dans les chambres d sign es de la cartouche EV Xpert GeneXpert Dx System r alise la pr paration des chantillons en lysant le virus et le SPC pseudovirion d ARN encapsid en liant l ARN la matrice extraite et en luant l ARN L ARN est m lang des r actifs RT secs puis est transf r dans le tube de r action pour la pr paration d ADNc L ADNc est alors m lang des r actifs PCR secs puis est transf r dans le tube de r action en vue d une PCR en temps r el et d une d tection Les amorces et les sondes EV amplifient et d tectent une r gion de consensus de la r gion 5 non traduite de l ent rovirus Le test dure environ 2 5 heures R actifs et appareils Y Mat riel fourni Le kit du test EV Xpert GXEV 100N 10 contient suffisamment de r actifs pour traiter 10 chantillons Le kit contient ce qui suit Cartouches EV Xpert Bille de r actifs 1 lyophilis e e Transcriptase inverse Inhibiteur d
155. vert 10 Lorsque le test est termin le voyant du module de l appareil s teint 11 Attendez que le syst me d verrouille la porte du module avant de l ouvrir et de retirer la cartouche 12 Respectez les directives de s curit de votre laboratoire pour liminer la cartouche Affichage et impression des r sultats Pour obtenir des instructions d taill es sur la mani re d afficher et d imprimer les r sultats consultez le Manuel d utilisation de GeneXpert Dx System Contr le qualit Les contr les qualit doivent tre effectu s conform ment aux exigences des r glementations et des accr ditations locales nationales et ou f d rales et aux proc dures de contr le qualit standard de votre laboratoire Chaque test inclut deux contr les internes pour le valider Contr les du traitement contr le interne de l chantillon et de la sonde Les chantillons de test sont contr l s conform ment aux proc dures suivantes Contr le du traitement de l chantillon contr le interne SPC IC le SPC IC est un pseudovirion d ARN encapsid sous forme de billes de r actifs il est inclus dans chaque cartouche Le SPC IC v rifie la lyse ad quate de EV cible et du traitement de l chantillon et d tecte les interf rences du test Les billes de r actifs sont m lang es l chantillon pour contr ler le traitement de l chantillon appropri et pour surveiller l int grit du test RT PCR Le SPC IC est consid r
156. virus con el ensayo Xpert EV Se realizaron diluciones de stock viral en r plicas de 3 para cada serotipo al l mite de detecci n LOD esperado Las diluciones se realizaron sobre una muestra agrupada humana negativa para EV La sensibilidad anal tica estimada se muestra en la Tabla 5 siguiente 78 300 5052 Rev G October 2009 Caracteristicas de funcionamiento Tabla 5 Sensibilidad analitica estimada Se probaron 60 serotipos y en la tabla siguiente se muestran los TCID y mL estimados a los que pueden detectarse dichos serotipos Especies Serotipo TCID mL estimado A Coxsackie A3 5 01 A Coxsackie A5 12 59 A Coxsackie A6 12 59 A Coxsackie A7 3 33 A Coxsackie A10 2 81 A Coxsackie A12 19 95 A Coxsackie A14 0 10 A Coxsackie A16 0 002 A EV 7 0 16 B Coxsackie Ag 20 00 B Coxsackie B 4 00 B Coxsackie B2 0 20 B Coxsackie B3 0 028 B Coxsackie B4 0 40 B Coxsackie Bs 0 04 B Coxsackie B6 0 01 B Echo 0 10 B Echo 2 0 032 B Echo 3 200 00 B Echo 4 0 00032 B Echos 0 032 B Echo 6 200 00 B Echo 7 2 00 B Echo 8 0 10 B Echo 9 2 00 B Echo n 40 00 B Echo 12 1 58 B Echo 13 0 01 B Echo 14 0 0005 B Echo 15 0 0032 B Echo 16 0 0005 B Echo 17 0 05 B Echo 18 0 0002 B Echo 19 2 51 B Echo 20 0 032 B Echo 21 1 00 B Echo 24 0 02 B Echo 25 0 50 B Echo 26 0 032 B Echo 27 0 00032 B Echo 29 5 01 B Echo 30 0 01 B Echo 31 0 0032 B Echo 32 0 10 B Echo 33 0 05 B EV 69 0 0002 Coxsackie An 0 11 Co
157. vono essere utilizzati solo come integrazione alle osservazioni cliniche e alle altre informazioni disponibili al medico I risultati positivi di Xpert EV non escludono altre cause di meningite compresi batteri micobatteri altri virus per esempio virus della famiglia degli herpes arbovirus virus della parotite ecc e funghi Riepilogo e spiegazione Il saggio Cepheid Xpert EV un saggio in PCR con retrotrascrizione RT PCR utilizzato per rilevare l RNA di enterovirus nei campioni di liquido cerebrospinale LCS Gli enterovirus sono classificati tassonomicamente come virus che includono i poliovirus i virus coxsackie gli ecovirus e gli enterovirus Gli enterovirus causano una vasta gamma di infezioni e sono spesso diffusi attraverso il contatto diretto con le secrezioni respiratorie di una persona infetta I sintomi comuni sono febbre mal di testa grave collo rigido luci intense che feriscono gli occhi sonnolenza o confusione nausea e vomito Nei neonati i sintomi includono febbre nervosismo o irritabilit difficolt di risveglio o perdita di appetito 1 Sebbene la maggior parte delle infezioni siano asintomatiche o causino malattie febbrili minori portano spesso all ospedalizzazione in particolare dei neonati e dei bambini Circa il 90 dei casi di meningite virale causato da enterovirus che sono la causa pi comune di meningite negli Stati Uniti con una stima di 30 000 50 000 ospedalizzazioni all anno 3 La meni
158. xsackie A13 13 27 C Coxsackie A15 0 0032 C Coxsackie A17 1 58 Cc Coxsackie A18 0 02 Coxsackie A19 0 03 Cc Coxsackie A20 0 002 C Coxsackie A21 0 03 C Coxsackie A22 0 02 C Coxsackie A24 0 10 D EV 68 199 53 D EV 70 2 00 Poliovirus Poliovirus 1 2 00 Poliovirus Poliovirus 2 0 40 Poliovirus Poliovirus 3 20 00 300 5052 Rev G October 2009 79 Espanol Especificidad analitica Las secuencias del iniciador y de la sonda empleadas en el ensayo Xpert EV no detectan los cidos nucleicos extraidos de los siguientes organismos conocidos por provocar sintomas similares a los de la meningitis EBV HSV 1 HSV 2 HHV 6 HHV 7 AdV 2 sarampi n paperas Parainfluenza 1 3 Influenza A Influenza B VZV CMV estreptococos de grupo B Haemophilus influenzae B H influenzae no B Escherichia coli Neisseria menin gitides Citrobacter freundii y Citrobacter koseri y el ensayo Xpert EV no gener ning n amplic n detectable cuando los organismos completos de los pat genos enumerados fueron procesados a trav s del cartucho Xpert EV La tabla siguiente presenta los organismos probados y la concentraci n para cada organismo probado Tabla 6 Especificidad anal tica para el ensayo Xpert EV En la tabla siguiente se muestran la especificidad de los organismos completos en el ensayo Xpert EV as como las concentraciones de los organismos probados Organismo N organis

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