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BACTEC SIRE Drug Kit

1. INH 0 1 110 81 4 25 96 4 INH 0 4 29 5 3 21 89 7 RIF 2 0 110 92 1 17 99 1 EMB 2 5 110 93 3 1 13 96 4 EMB 7 5 17 y 3 7 82 4 STR 2 0 110 76 9 25 91 8 STR 6 0 34 12 10 12 70 6 Tests insgesamt 520 366 33 1 120 93 5 tE empfindlich R resistent Eine Untersuchung von Bergmann und Woods verglich die BACTEC 460TB S I R E Arzneimittel Ethambutol und Streptomycin mit der Proportionsmethode Die Ergebnisse sind in der folgenden Tabelle aufgef hrt 23 Tabelle 3 Erste Ergebnisse des Ethambutol und Streptomycin Empfindlichkeitstests erzielt mit dem BACTEC System und der Proportionsmethode Anz der Ergebnisse mit folgenden Charakteristika Arzneimittel BACTEC System MOP Anz der Isolate Ethambutol E E 63 R R 3 Streptomycin E E 59 R R 14 R E 1 tAbk rzungen MOP Methode of Proportions Proportionsmethode E empfindlich R resistent In einer separaten Studie untersuchten Bergmann und Woods zudem die BACTEC 460TB S I R E Arzneimittel Isoniazid und Streptomycin und verglichen diese mit der Proportionsmethode 24 13 Tabelle 4 Ergebnisse des Empfindlichkeitstests erzielt mit der Proportionsmethode und dem BACTEC 460TB System Anz der Isolate mit spezifischen Ergebnissen Arzneimittel und MOP BACTEC Ergebnis 460TB Isoniazid gering Empfindlich 16 16 Resistent 4 4 Isoniazid hoch Empfindlich 19 18 Resistent 1 2 Rifampin Empfindlich 17 17 Resistent MOP Pro
2. UTILIZAC O PRETENDIDA O BACTEC S I R E Drug Kit Kit de f rmacos BACTEC S I R E cont m antimicrobianos para utiliza o com o BACTEC 12B Medium para teste de Mycobacterium tuberculosis A sua utilizac o principal com o instrumento BACTEC 460TB Os f rmacos BACTEC S I R E estreptomicina isoniazida rifampicina e etambutol s o recomendados como aditivos para o BACTEC 12B Culture Medium para o teste de sensibilidade qualitativo de M tuberculosis a partir de cultura Portugu s RESUMO E EXPLICAC O O procedimento BACTEC para teste de sensibilidade de micobact rias a f rmacos baseia se no mesmo princ pio b sico utilizado no m todo convencional exceptuando o facto de ser utilizado um meio l quido e de em vez de se contarem col nias ap s cerca de 3 semanas o crescimento ser monitorizado radiometricamente e os resultados serem apresentados num per odo de 4 a 12 dias Com o BACTEC a sensibilidade a f rmacos determinada atrav s de uma vers o modificada do m todo de proporc o convencional A proporc o cr tica para a resist ncia considerada como 1 para todos os f rmacos anti tuberculose Isto significa que se 1 ou mais da populac o de micobact rias em teste for resistente a cultura considerada resistente para fins de elaborac o dos relat rios laboratoriais A resist ncia determinada comparando a velocidade de crescimento no frasco de controlo com os frascos de 12B Medium que cont m o f rmaco
3. liminer ces flacons conform ment aux proc dures en vigueur Des certificats de contr le de qualit se trouvent dans chaque trousse S I R E Drug Kit Les certificats de contr le de qualit identifient les microorganismes de contr le utilis s pour ce type de produit Avant l emploi inspecter les flacons et s assurer qu ils ne sont pas d t rior s Ne pas utiliser un flacon dont le milieu est trouble contamin ou d color fonc Ne pas utiliser les flacons d antibiotiques S I R E pr sentant des signes d humidit n ayant pas un aspect velout Contr ler les performances des antibiotiques en effectuant des antibiogrammes avec une ou plusieurs souches de contr le de qualit pour chacun des tests de sensibilit pr par s R f ATCC Souche 27294 M tuberculosis H37Rv Sensible aux antibiotiques S I R E 35820 M tuberculosis H37Rv R sistant la streptomycine 35822 M tuberculosis H37Rv R sistant l isoniazide 35837 M tuberculosis H37Rv R sistant l thambutol 35838 M tuberculosis H37Rv R sistant la rifampicine Inclure syst matiquement la souche ATCC 27294 H37Rv qui devrait toujours tre sensible Si cette culture pr sente une r sistance l un des antibiotiques ou si le contr le de test de sensibilit d une culture ne se d veloppe pas dans les 12 jours ne pas rapporter les r sultats R p ter le test Des flacons t moins BACTEC Performance Test Kit sont test s sur le systeme BACTEC d
4. Arzneimittel Rekonstituiert Verd nnungs Konzen Zum 12B Medium Endkonzentration faktor tration mL zugegebene Menge im 12B Medium mL Streptomycin 5mL 240 ug 0 1 mL 6 0 ug Streptomycin 5mL Verd nnung 1 3 80 ug 0 1 mL 2 0 ug Isoniazid 5mL 4 ug 0 1 mL 0 1 ug Rifampin 5mL 80 ug 0 1 mL 2 0 ug Ethambutol 5mL 300 ug 0 1 mL 7 5 ug Ethambutol 5mL Verd nnung 1 3 100 ug 0 1 mL 2 5 ug Gleich den kritischen von den CDC empfohlenen Konzentrationen Beispiele herk mmlicher Medien die den Konzentrationen f r prim ren und sekund ren Arzneien gleichen sind dem Produkt und Verfahrenshandbuch Abschnitt IV f r das BACTEC 460TB Ger tesystem zu entnehmen Wenn eine Verd nnung erforderlich ist um die gew nschte Arzneimittelkonzentration zu erreichen siehe oben aseptisch in sterilem destilliertem deionisiertem Wasser verd nnen Gut sch tteln Vorbereitung des PZA Mediums Eine frisch vorbereitete PZA L sung verwenden oder ein R hrchen mit gefrorener Stamm PZA L sung auftauen Mit einer 1 mL Einmalspritze genau 0 1 mL in ein 4 mL Flaschchen mit BACTEC 12B Medium geben F r jede Arznei eine separate Spritze verwenden Darauf achten dass keine Luftblasen in der Spritze sind und dass die letzten 0 1 mL in der Spritze nicht verwendet werden Alle im Test verwendeten 12B Mediumflaschchen sollten auf einem BACTEC 460TB Ger t vorgetestet werden um eine CO Atmosph re im Fl schchen zu erzeugen und alle Fl s
5. 2 ug mL INH 0 2 ug mL RMP 1 0 pg mL and EMB 5 ug mL tS susceptible R resistant A study by Bemer et al compared the BACTEC 460TB S I R E system with BACTEC MGIT 960 S I R E system One hundred and ten strains were tested with an overall agreement of 93 5 The turnaround times were between 4 0 to 10 0 days of the BACTEC 460TB S l R E with a median of 7 0 days 22 Table 2 Drug susceptibility results of clinical strains of M tuberculosis as determined by BACTEC MGIT 960 AND BACTEC 460TB system No of results that were Drug No of tests S by both tests R by MGIT 960 S by MGIT 960 R by both tests Agreement concn in pg mL S by 460TB R by 460TB INH 0 1 110 81 4 25 96 4 INH 0 4 29 5 3 21 89 7 RIF 2 0 110 92 1 17 99 1 EMB 2 5 110 93 3 1 13 96 4 EMB 7 5 17 7 3 7 82 4 STR 2 0 110 76 9 25 91 8 STR 6 0 34 12 10 12 70 6 Total of tests 520 366 33 1 120 93 5 S susceptible R resistant A study by Bergmann and Woods compared the BACTEC 460TB S I R E drugs ethambutol and streptomycin with the method of proportions The results are demonstrated in the table below 23 Table 3 Initial ethambutol and streptomycin susceptibility test results by BACTEC and the method of proportion No of results that were Drug BACTEC system MOP No of isolates Ethambutol S S 63 R R 8 S R 3 Streptomycin S S 59 R R 14 R S 1 Abbreviations MOP method of proportions S susceptible R resistan
6. ATCC N Cepa 27294 M tuberculosis H37Rv sensible a antibi ticos S l R E 35820 M tuberculosis H37Rv resistente a la estreptomicina 35822 M tuberculosis H37Rv resistente a la isoniazida 35837 M tuberculosis H37Rv resistente a etambutol 35838 M tuberculosis H37Rv resistente a la rifampicina ATCC 27294 H37Rv siempre debe incluirse y debe ser siempre sensible Si este cultivo muestra resistencia a cualquier antibi tico o si el control de la prueba de sensibilidad de cualquier cultivo no presenta crecimiento dentro de los 12 d as no informar los resultados Repetir la prueba Dentro del programa diario de mantenimiento los frascos para pruebas de rendimiento equipo BACTEC para pruebas de rendimiento deben analizarse en el instrumento BACTEC Si se obtienen lecturas bajas a pesar de haber analizado los frascos para pruebas de rendimiento seg n los procedimientos establecidos esto podr a indicar alguna anomal a en el instrumento v ase el prospecto BACTEC PTK PP046JAA El control de calidad debe llevarse a cabo conforme a la normativa local y o nacional a los requisitos de los organismos de acreditaci n y a los procedimientos est ndar de control de calidad del laboratorio Se recomienda consultar las instrucciones de CLSI antes NCCLS y normativas de CLIA correspondientes para obtener informaci n acerca de las pr cticas adecuadas de control de calidad INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS Cuando los frascos de control muestren u
7. It is very important to select an equivalent concentration of a test drug for the BACTEC susceptibility testing if the results obtained by the two methods are to be compared Addition of the accurate amount of a test drug into the culture medium is a critical step in the susceptibility testing Storage Instructions BACTEC S I R E Drug vials should be stored in a cool 2 8 C dry place out of direct sunlight Once reconstituted they can be stored for not more than 3 days at 2 8 C or frozen at 20 C or colder for up to six months Freeze in small aliquots Do not freeze and thaw repeatedly The expiration date applies to the unopened lyophilized bottle when stored as recommended SPECIMEN COLLECTION Isolated pure actively growing cultures are used for susceptibility testing For details see the 12B Medium Package Insert PP116JAA and the BACTEC 460TB System Product and Procedure Manual MA 0029 PROCEDURE Material Provided BACTEC S l R E Drug Kit Materials Required But Not Provided BACTEC 12B Medium BACTEC 460TB Instrument BACTEC Diluting Fluid 5 mL syringe distilled deionized water tuberculin syringe with permanently attached needle disinfectant solution 7096 isopropyl alcohol Test Procedure BACTEC S R E Drugs Streptomycin Isoniazid Rifampin and Ethambutol are provided in lyophilized form The standard procedure and drug concentrations should be followed The concentration of drugs after reconstituting with 5 mL
8. Se tiver d vidas quanto viabilidade ou idade da cultura efectue a repicagem para 12B Medium para obter uma cultura nova Inoculac o Disponha os frascos de 12B Medium num suporte e identifique os correctamente normalmente controlo estreptomicina isoniazida rifampicina etambutol Necessitar de um frasco para cada concentrac o de f rmaco e um para o controlo Os tabuleiros de transporte em cart o podem ser utilizados como suportes Usando luvas de borracha e trabalhando numa c mara de seguranca biol gica inocule 0 1 mL da suspens o bacteriana em cada um dos frascos de BACTEC 12B Medium com f rmaco Para esta inoculac o utilize uma seringa de tuberculina com agulha fixa descart vel Para o frasco de controlo n o inocule a suspens o directamente primeiro fa a uma dilui o de 1 100 transferindo 0 1 mL da suspens o para 9 9 mL de L quido de diluic o especial Depois de misturar totalmente invertendo pelo menos 10 vezes inocule 0 1 mL desta diluic o para o frasco de 12B Medium de controlo sem f rmaco Com uma compressa de gaze embebida em desinfectante adequado limpe o topo de cada frasco inoculado e em seguida limpe com uma zaragatoa com alcool a 7096 Incube a 37 C 1 C Plano de leitura Plano de testes di rios Teste os frascos diariamente incluindo fins de semana e feriados aproximadamente mesma hora 2 h num instrumento BACTEC 460TB at se obter um IC igual ou superior a 30 no frasco de c
9. Sin embargo si los organismos son resistentes se produce una supresi n escasa o nula Para determinar la proporci n de resistencia del 196 el in culo bacteriano utilizado en el frasco de control es un cent simo del utilizado en el frasco con el antibi tico Los frascos con antibi tico y los frascos de control se analizan diariamente despu s de la inoculaci n La velocidad de aumento en el ndice de crecimiento o la cantidad de cambio en el transcurso del d a anterior denominada ndice de crecimiento delta A se compara entre el frasco de control y los frascos con los antibi ticos Si el aumento del ndice de crecimiento diario en el frasco de antibi tico es igual o mayor que el del frasco de control los organismos de prueba se consideran resistentes al antibi tico Para una poblaci n sensible el aumento del ndice de crecimiento diario para el control deber a ser mayor que el presentado por el frasco con antibi tico Por ejemplo si el 1 de la poblaci n micobacteriana es resistente a la isoniazida INH entonces el 99 de los organismos deber an ser inhibidos por INH y solamente el 196 crecer en el frasco con antibi tico La velocidad de crecimiento en el frasco con antibi tico deber a ser similar a la velocidad de crecimiento en el frasco de control en el que el in culo bacteriano original era una cent sima del in culo en el frasco con antibi tico REACTIVOS Antes de realizar el procesamiento los frascos con antibi t
10. organismos sensibles y resistentes los valores de ndice de crecimiento A con relaci n al tiempo variar an seg n el porcentaje de la poblaci n sensible Para la prueba de sensibilidad directa los resultados satisfactorios generales y el tiempo necesario para realizar un informe dependen de la positividad del frotis Se han informado en publicaciones un promedio de 10 12 d as con una buena concordancia con los resultados de prueba convencionales 3 2 CARACTERISTICAS DE RENDIMIENTO Varios estudios publicados han resefiado que los resultados obtenidos con el m todo de sensibilidad BACTEC han tenido una buena comparaci n en relaci n con el m todo de proporci n convencional que emplea medios 7H10 7H11 o el m todo de la proporci n de resistencia que utiliza el medio de huevo Lowenstein Jensen 1 10 15 La exactitud y la reproducibilidad del m todo de sensibilidad BACTEC tambi n fueron sometidas a evaluaci n con resultados que a menudo se lograron dentro de los 4 6 d as 16 20 25 Un estudio realizado por Huang et al compar el sistema BACTEC 460TB con el m todo de proporciones y dio los siguientes resultados 21 Tabla 1 Resultados de la prueba de sensibilidad antimicrobiana y los ndices de rendimiento de diagn stico determinados por el sistema BACTEC 460TB en comparaci n con el m todo de diluci n en agar basado en 47 aislados de M tuberculosis N de aislados con resultados espec ficos ndice de rendimiento d
11. 1 1 94 1 96 7 RMP BACTEC 2 0 ug mL 30 14 1 2 96 8 87 5 EMB BACTEC 2 0 ug mL 35 2 4 6 89 7 25 Nella metodica di diluizione in agar i farmaci sono stati testati alle concentrazioni seguenti STR 2 ug mL INH 0 2 ug mL RMP 1 0 pg mL e EMB 5 ug mL tS sensibile R resistente Uno studio di Bemer et al ha comparato il sistema BACTEC 460TB S I R E al sistema BACTEC MGIT 960 S I R E Sono stati testati centodieci ceppi con una concordanza complessiva del 93 5 tempi di completamento sono risultati tra 4 0 10 0 giorni di BACTEC 460TB S I R E con una mediana di 7 0 giorni 22 Tabella 2 Risultati dei test di sensibilit ai farmaci di ceppi clinici di M tuberculosis determinati dai sistemi BACTEC MGIT 960 E BACTEC 460TB N di risultati Farmaco N di test S con entrambi R con MGIT 960 S con MGIT 960 R con entrambi Concordanza conc in pg mL i test S con 460TB R con 460TB test 96 INH 0 1 110 81 4 25 96 4 INH 0 4 29 5 3 21 89 7 RIF 2 0 110 92 1 17 99 1 EMB 2 5 110 93 3 1 13 96 4 EMB 7 5 17 7 3 7 82 4 STR 2 0 110 76 9 25 91 8 STR 6 0 34 12 10 12 70 6 Tests insgesamt 520 366 33 1 120 93 5 S sensibile R resistente Uno studio di Bergmann e Woods ha comparato i farmaci BACTEC 460TB S I R E etambutolo e streptomicina con la metodica delle proporzioni La tabella seguente riporta i risultati 23 17 Tabella 3 Risultati iniziali dei test di sensibilit a etambutolo e streptomici
12. 10 jours pour le systeme BACTEC 460TB S I R E avec une m diane de 7 jours 22 Tableau 2 Comparaison des r sultats de test de sensibilit de M tuberculosis aux antimicrobiens obtenus avec le systeme BACTEC MGIT 960 et le systeme BACTEC 460TB Nb de r sultats Antibiotique Nb de tests S avec les R avec MGIT 960 S avec MGIT 960 R avec les Concordance ug mL deux tests S avec 460TB R avec 460TB deux tests 96 INH 0 1 110 81 4 25 96 4 INH 0 4 29 5 3 21 89 7 RIF 2 0 110 92 1 17 99 1 EMB 2 5 110 93 3 1 13 96 4 EMB 7 5 17 7 3 7 82 4 STR 2 0 110 76 9 25 91 8 STR 6 0 34 12 10 12 70 6 Total des tests 520 366 33 1 120 93 5 tS sensible R r sistant Bergmann et Woods ont compar les r sultats obtenus pour l thambutol et la streptomycine avec le systeme BACTEC 460TB S I R E et la m thode des proportions Les r sultats sont r capitul s dans le tableau ci dessous 23 Tableau 3 Comparaison des r sultats de test de sensibilit obtenus initialement pour l thambutol et la streptomycine avec le syst me BACTEC et la m thode des proportions Nb de r sultats Antibiotique Syst me BACTEC MOP Nb d isolats Ethambutol S S 63 R R 8 S R 3 Streptomycine S S 59 R R 14 R S 1 Abr viations MOP m thode des proportions S sensible R r sistant Dans une autre tude Bergmann et Woods ont compar les r sultats obtenus pour l isoniazide et la streptomycine avec le system
13. Alle Fl schchen sollten vor Verwendung auf Anzeichen von Verfall berpr ft werden Fl schchen die Tr bheit Kontaminierung oder Verf rbung Verdunkelung zeigen sollten nicht verwendet werden S l R E Arzneifl schchen die feucht geworden sind Fehlen des lockeren Aussehens sollten nicht verwendet werden Die Leistung der Arzneimittel kann durch Empfindlichkeitstests oder durch weitere Qualitats Kontrollorganismen bei jeder Durchf hrung von Empfindlichkeitstests gepr ft werden ATCC Nr Stamm 27294 M tuberculosis H37Rv empfindlich gegen ber S I R E Arzneimitteln 35820 M tuberculosis H37Rv Streptomycin resistent 35822 M tuberculosis H37Rv Isoniazid resistent 35837 M tuberculosis H37Rv Ethambutol resistent 35838 M tuberculosis H37Rv Rifampin resistent ATCC 27294 H37Rv sollte stets mitgetestet und stets empfindlich sein Wenn diese Kultur eine Resistenz gegen ber einem beliebigen Arzneimittel zeigt oder wenn die Kontrolle des Empfindlichkeitstests bei einer beliebigen Kultur innerhalb von 12 Tagen kein Wachstum aufweist die Ergebnisse nicht dokumentieren Den Test wiederholen Als Teil des t glichen Wartungsplans sollten Funktionstest Flaschchen BACTEC Performance Test Kit auf dem BACTEC Ger t getestet werden Wenn die Werte niedrig sind die Funktionstest Fl schchen jedoch korrekt getestet wurden kann dies ein Hinweis auf m gliche Ger test rungen sein siehe BACTEC PTK Packungsbeilage PPO46JAA Es sind die geltend
14. Diluir el concentrado de muestra a 1 10 e inocular 0 1 mL en el frasco de control Incubar a 37 C y analizar los frascos en el instrumento de sistema BACTEC 460TB cada 2 3 d as durante un m ximo de 21 d as Con muestras de frotis altamente positivas realizar la prueba diariamente Interpretar los resultados cuando se logra un ndice de crecimiento de 20 o m s Confirmar los resultados mediante prueba de sensibilidad indirecta Resefiar los resultados una vez confirmada la identificaci n de M tuberculosis mediante la prueba BACTEC NAP u otras pruebas 24 Control de calidad NO UTILIZAR los frascos despu s de la fecha de caducidad NO UTILIZAR los frascos que muestran indicios de agrietamientos o defectos desechar el frasco de la forma apropiada En cada equipo de antibi ticos S I R E se incluyen certificados de control de calidad Los certificados de control de calidad muestran los organismos de prueba utilizados para este tipo de producto El usuario debe examinar todos los frascos para determinar si presentan deterioro antes de su utilizaci n Los frascos que muestren turbidez contaminaci n o decoloraci n oscurecimiento no deben utilizarse Los frascos con antibi ticos S I R E que muestren humedad sin apariencia suave y esponjosa no deben utilizarse El rendimiento de los antibi ticos puede comprobarse mediante an lisis de sensibilidad de uno o m s organismos de control de calidad con cada prueba de sensibilidad definida
15. Drug Kit trousse d antibiotiques BACTEC S I R E contient des agents antimicrobiens servant conjointement avec le BACTEC 12B Medium milieu BACTEC 12B r aliser les tests de sensibilit de Mycobacterium tuberculosis Ce milieu s utilise principalement avec le BACTEC 460TB Instrument systeme BACTEC 460TB Les BACTEC S l R E Drugs antibiotiques BACTEC S I R E streptomycine isoniazide rifampicine et thambutol sont recommand s comme additifs au BACTEC 12B Culture Medium milieu de culture BACTEC 12B pour r aliser des tests de sensibilit qualitatifs de Mycobacterium tuberculosis en culture Francais RESUME ET EXPLICATION La m thode BACTEC de test de sensibilit des mycobact ries aux antibiotiques reprend le principe de base employ pour l antibiogramme conventionnel mais s effectue en phase liquide Dans ce milieu le suivi de la croissance bact rienne par radiom trie remplace l num ration des colonies apres environ 3 semaines et les r sultats peuvent tre rapport s d s 4 12 jours Dans la m thode BACTEC la sensibilit aux antibiotiques est d termin e selon une version modifi e de la m thode des proportions traditionnelle La proportion critique de r sistance est de 1 pour tous les antituberculeux ce qui signifie que si 1 au moins de la population de mycobact ries test e est r sistante la culture est consid r e comme r sistante et rapport e comme telle par le laboratoire La r sistance est d
16. Drugs streptomycine isoniazide rifampicine et thambutol sont fournis sous forme lyophilis e Suivre le mode op ratoire standard et respecter les concentrations d antibiotiques indiqu es Apres reconstitution dans 5 mL d eau distill e ou d sionis e et dilution le cas ch ant les concentrations d antibiotiques sont les suivantes Facteur de Quantit ajout e au Quantit finale Antibiotique Reconstitu dilution Concentration 12B Medium mL de 12B Medium Streptomycine 5mL 240 ug 0 1 mL 6 0 ug Streptomycine 5mL Dilution au 1 3 80 ug 0 1 mL 2 0 ug Isoniazide 5mL 4 ug 0 1 mL 0 1 ug Rifampicine 5mL 80 ug 0 1 mL 2 0 ug Ethambutol 5mL 300 ug 0 1 mL 7 5 ug Ethambutol 5mL Dilution au 1 3 100 ug 0 1 mL 2 5 ug Equivalent aux concentrations critiques recommand es par le CDC La section IV du manuel d utilisation du systeme BACTEC 460TB donne des exemples de concentrations quivalentes en milieux conventionnels pour les antibiotiques primaires et secondaires S il est n cessaire de diluer l antibiotique pour parvenir la concentrations souhait e voir ci dessus diluer en conditions aseptiques avec de l eau distill e ou d sionis e Bien agiter Milieu contenant l antibiotique Utiliser une solution d antibiotique fraichement pr par e ou d congeler un tube de solution m re d antibiotique congel A l aide d une seringue de 1 mL usage unique ajouter exa
17. Esaminare lo striscio AFB Se risulta positivo con la metodica Ziehl Neelsen o al fluorocromo allestire il test di sensibilit il giorno stesso Dispensare BACTEC PANTA in tutti i flaconi contenenti farmaci e di controllo senza farmaco Dispensare 0 1 mL di concentrato di campione accuratamente mescolato nei flaconi contenenti farmaco Diluire il concentrato di campione 1 10 e inoculare 0 1 mL nel flacone di controllo Incubare a 37 C e testare i flaconi con lo strumento BACTEC 460TB ogni 2 3 giorni per un massimo di 21 giorni In caso di campioni altamente positivi allo striscio testare ogni giorno Interpretare i risultati quando il GI del controllo raggiunge almeno 20 Confermare i risultati con un test indiretto di sensibilit Refertare i risultati dopo aver confermato l identificazione di M tuberculosis mediante test BACTEC NAP o altri test Controllo di qualit NON USARE i flaconi oltre la data di scadenza Non usare flaconi che presentano incrinature o difetti eliminare il flacone in modo appropriato Certificati di controllo qualita sono allegati a ogni kit di farmaci S I R E I certificati di controllo di qualit riportano i microrganismi per il test utilizzati per questo tipo di prodotto Prima dell uso l utente deve esaminare tutti i flaconi per verificare se presentano segni di deterioramento Non usare flaconi che presentano torbidit contaminazione alterazione di colore assunzione di una colorazione pi scura Non u
18. Prostudujte pokyny k pou it L s brugsanvisningen Raadpleeg gebruiksaanwijzing Lugeda kasutusjuhendit Tarkista k ytt ohjeista Consulter la notice d emploi Gebrauchsanweisung beachten Zuu oukeureite Tig oonyleg xprjong Olvassa el a haszn lati utas t st Consultare le istruzioni per l uso Skaitykite naudojimo instrukcijas Se i bruksanvisningen Zobacz instrukcja uzytkowania Consulte as instruc es de utilizac o Pozri Pokyny na pou vanie Consultar las instrucciones de uso Se bruksanvisningen Hanpasere cnpaska B WHCTPYKUMUTe 3a ynoTpeGa Consulta i instruc iunile de utilizare Kullan m Talimatlar na ba vurun Pogledajte uputstvo za upotrebu CM pykoBoncrBo no Skenr yaraunn Na nanaHy Hyckaynbirbimen TaHbicbIn anbiHbI3 Koristi upute za upotrebu 28 29 til Becton Dickinson and Company Benex Limited 7 Loveton Circle Rineanna House Sparks MD 21152 USA Shannon Free Zone 800 638 8663 Shannon County Clare Ireland www bd com ds ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection BD BD Logo BACTEC MGIT PANTA and Luer Lok are trademarks of Becton Dickinson and Company 2010 BD
19. S I R E devem ser armazenados num local fresco e seco 2 a 8 C ao abrigo da luz solar directa Ap s a reconstitui o podem ser armazenados durante um per odo n o superior a 3 dias entre 2 e 8 C ou congelados a uma temperatura igual ou inferior a 20 C durante um per odo de at seis meses Congelar em pequenas al quotas N o congelar e descongelar repetidamente O prazo de validade refere se ao produto contido no frasco liofilizado n o aberto e armazenado conforme recomendado COLHEITA DE AMOSTRAS Para o teste de sensibilidade s o utilizadas culturas puras isoladas em crescimento Para obter pormenores consulte o 12B Medium Package Insert Folheto Informativo do 12B Medium PP116JAA e o BACTEC 460TB System Product and Procedure Manual Manual de Procedimentos e Produtos do Sistema BACTEC 460TB MA 0029 PROCEDIMENTO Material fornecido BACTEC S l R E Drug Kit Material necess rio mas n o fornecido BACTEC 12B Medium Instrumento BACTEC 460TB BACTEC Diluting Fluid seringa de 5 mL gua destilada desionizada seringa de tuberculina com agulha fixa soluc o desinfectante lcool isoprop lico a 7096 Procedimento do teste Os f rmacos BACTEC S I R E estreptomicina isoniazida rifampicina e etambutol s o fornecidos sob a forma liofilizada Deve ser seguido o procedimento padr o e utilizadas concentrac es padronizadas dos f rmacos As concentrag es dos f rmacos ap s a reconstituic o com 5 mL de gua destilada des
20. aria nella siringa e non usare l ultima porzione di 0 1 mL nella siringa Tutti i flaconi di terreno 12B usati nel test devono essere pretestati con lo strumento BACTEC 460TB per stabilire un atmosfera di CO nel flacone ed escludere eventuali flaconi con un GI pari o superiore a 20 Preparazione dell inoculo batterico Per allestire i test di sensibilit si usano colture di M tuberculosis in fase di crescita attiva in terreno 12B o in terreni solidi Quando un flacone BACTEC 12B ha una lettura gt 10 reincubare e testare ogni giorno Per definire quando allestire il test di sensibilit consultare la tabella seguente LETTURA GIORNALIERA AZIONE GI 300 499 Incubare ancora per un giorno e quindi allestire il test GI 500 799 Allestire il test il giorno stesso GI 2 800 Diluire 1 2 con 1 mL di fluido di diluizione allestire il test Se necessario rinviare il test di sensibilit refrigerare il flacone 12B A questo punto il test di sensibilit deve essere allestito entro una settimana Preparare un inoculo batterico uniforme aspirando alternativamente il terreno in una siringa monouso con ago fisso ed espellendolo nel flacone varie volte senza rimuovere l ago dal setto del flacone Questo inoculo viene usato direttamente per il test di sensibilit ai farmaci Coltura in terreno solido Preparare una sospensione omogeneizzata di alcune colonie in terreno solido La coltura non deve essere di pi di 4 5 settimane Correggere la so
21. controlo nao for satisfat rio o teste deve ser repetido Contaminac o Dever ter cuidado para evitar a contaminac o durante a inoculac o no frasco BACTEC 12B Uma amostra contaminada apresentar uma leitura positiva mas n o indicar uma amostra clinicamente relevante Tal determinac o dever ser efectuada pelo utilizador com base em determinados factores tais como o tipo de microrganismo isolado a ocorr ncia do mesmo microrganismo em m ltiplas culturas a hist ria do doente as verificac es do equipamento apropriadas etc A contaminac o poder tamb m resultar de uma manutenc o incorrecta das agulhas e tubagem BACTEC limpeza inadequada do septo ou avaria da unidade de aquecimento da agulha BACTEC consulte o TB Hood Operation and Maintenance Manual Manual de Funcionamento e Operac o de TB Hood Devido natureza dos materiais biol gicos existentes nos produtos dos meios e variabilidade inerente ao microrganismo o utilizador dever estar informado sobre a potencial variac o dos resultados no isolamento de determinados microrganismos VALORES ESPERADOS Com a rifampicina estreptomicina e isoniazida verifica se habitualmente uma diminuic o pronunciada do IC no prazo de alguns dias caso a populac o seja sens vel Com o etambutol ocorre normalmente um pequeno aumento inicial no IC antes de os valores de IC comecarem a diminuir A velocidade de diminui o do IC depende da rapidez de ac o do f rmaco e da sensibili
22. dizem respeito a este assunto para obter orientac es sobre pr ticas de controlo de qualidade apropriadas 20 INTERPRETAC O DOS RESULTADOS Quando os frascos de controlo atingirem um IC igual ou superior a 30 os resultados devem ser interpretados da seguinte forma se a AIC for menor no frasco do f rmaco do que no frasco do controlo a populac o sens vel se for maior ent o a populac o resistente AIC Controlo AIC f rmaco sens vel AIC Controlo AIC f rmaco resistente AIC Controlo AIC f rmaco limiar A tabela seguinte apresenta os dados obtidos com o M tuberculosis cultivado em meio s lido e testado com o m todo de sensibilidade BACTEC Foram obtidos dados id nticos com o M tuberculosis cultivado inicialmente em 12B Medium No entanto devido ao menor n mero de c lulas do in culo as leituras iniciais podem ser mais baixas Leitura do IC di ria Dia Controlo Estreptomicina Isoniazida Rifampicina Etambutol 1 5 40 50 38 76 2 11 20 100 19 100 3 24 12 250 10 100 65 14 500 12 91 AIC 41 2 250 2 9 Resultados Sens vel Resistente Sens vel Sens vel LIMITAC ES DO PROCEDIMENTO As variac es na preparac o do in culo influenciam os resultados do teste de sensibilidade especialmente devido presenca de aglomerados de grandes dimens es e a uma diluic o de 1 100 incorrecta para o frasco de controlo Se o crescimento do frasco de
23. hlen 2 8 C trockenen Ort aufbewahrt werden wo sie nicht direkter Sonneneinstrahlung ausgesetzt sind Nach der Rekonstituierung d rfen sie nicht l nger als 3 Tage bei 2 8 C oder in gefrorenem Zustand bei mindestens 20 C bis zu sechs Monate aufbewahrt werden In geringen Mengen einfrieren Nach dem Auftauen nicht erneut einfrieren Das Verfallsdatum bezieht sich auf unge ffnete Lyophilisat Fl schchen die vorschriftsmaBig gelagert wurden PROBENENTNAHME F r Empfindlichkeitstests werden isolierte aktiv wachsende Reinkulturen verwendet Einzelheiten entnehmen Sie bitte der Packungsbeilage zum 12B Medium PP116JAA und dem Produkt und Verfahrenshandbuch MA 0029 f r das BACTEC 460TB Ger tesystem 10 VERFAHREN Mitgeliefertes Arbeitsmaterial BACTEC S I R E Drug Kit Ben tigtes jedoch nicht mitgeliefertes Arbeitsmaterial BACTEC 12B Medium BACTEC 460TB Instrument BACTEC Diluting Fluid 5 mL Spritze destilliertes entionisiertes Wasser Tuberkulinspritze mit fest eingesetzter Kan le Desinfektionsl sung 70 Isopropylalkohol Testverfahren BACTEC S I R E Arzneimittel Streptomycin Isoniazid Rifampin und Ethambutol werden in lyophilisierter Form zur Verf gung gestellt Das Standardverfahren und die Arzneimittelkonzentrationen sind zu beachten Die Arzneimittelkonzentration nach der Rekonstituierung mit 5 mL sterilem destilliertem entionisiertem Wasser und nach der Verd nnung sofern erforderlich ist folgende
24. termin e en comparant le taux de croissance du flacon de contr le et des flacons de 12B Medium contenant l antibiotique tester 5 PRINCIPES DE LA METHODE Le principe de base du test radiom trique BACTEC de sensibilit des mycobact ries est similaire celui utilis dans la m thode d isolement primaire Les mycobact ries cultiv es en milieu 7H12 m tabolisent le substrat marqu au 14C et produisent du 14CO La quantit de 14C0 d gag e est proportionnelle au taux de croissance dans le milieu exprim en indice de croissance IC Lorsqu un antituberculeux est ajout au milieu la croissance est inhib e si les microorganismes tester sont sensibles cet antituberculeux Cette inhibition se traduit par une diminution ou une tr s faible augmentation de l IC quotidien comparativement au contr le Cependant si les microorganismes sont r sistants la croissance bact rienne est peu inhib e voire pas du tout Pour d terminer la proportion de r sistance de 1 96 l inoculum bact rien destin au flacon de contr le est 100 fois moins concentr que celui utilis dans le flacon contenant l antibiotique Les flacons d antibiotique et de contr le ensemenc s sont analys s quotidiennement Le taux d accroissement de I IC ou variation par rapport au jour pr c dent appel e delta A IC est compar entre le flacon de contr le et les flacons contenant les antibiotiques Si l augmentation de I IC quotidien dans le flacon con
25. teste de sensibilidade no mesmo dia Adicione BACTEC PANTA a todos os frascos com f rmacos e sem f rmacos controlo Adicione 0 1 mL de concentrado da amostra bem misturado aos frascos com f rmacos Fa a uma dilui o do concentrado da amostra de 1 10 e inocule 0 1 mL no frasco de controlo Incube a 37 C e teste os frascos no instrumento do Sistema BACTEC 460TB com intervalos de 2 a 3 dias durante um per odo m ximo de 21 dias Com amostras fortemente positivas em esfregacos teste diariamente Interprete os resultados quando o IC do controlo for igual ou superior a 20 Confirme os resultados com um teste indirecto de sensibilidade Apresente os resultados logo que a identificac o de M tuberculosis tenha sido confirmada por um teste BACTEC NAP ou outros testes Controlo de qualidade NAO UTILIZAR os frascos que tenham ultrapassado o prazo de validade NAO UTILIZAR os frascos que apresentem rachas ou defeitos eliminar o frasco de forma apropriada Com cada S I R E Drug Kit s o fornecidos Certificados do Controlo de Qualidade Estes certificados apresentam os microrganismos de teste utilizados para este tipo de produto Antes de utilizar os frascos o utilizador dever examin los relativamente a sinais de deteriorac o Os frascos que apresentem turvac o contamina o ou descolora o escurecimento n o devem ser utilizados Os frascos de f rmacos S I R E que apresentem humidade aus ncia de aspecto aveludado n o devem ser util
26. 0 dilution for the control vial If growth in the control vial is unsatisfactory the test should be repeated Contamination Care must be taken to prevent contamination during inoculation into the BACTEC 12B vial A contaminated sample will give a positive reading but will not indicate a relevant clinical sample Such a determination must be made by the user based on such factors as type of organism recovered occurrence of the same organism in multiple cultures patient history appropriate equipment checks etc Contamination may also result from improper maintenance of BACTEC needles and tubing poor septum cleansing or malfunction of the BACTEC needle heating unit see TB Hood Operation and Maintenance Manual Due to the nature of biological materials in media products and inherent organism variability the user shall be cognizant of potential variable results in the recovery of certain organisms EXPECTED VALUES With Rifampin Streptomycin and Isoniazid there is usually a sharp decrease in the GI within a few days if the population is susceptible With Ethambutol there is usually a small initial increase in the GI before the GI values start to decline The rate of GI decrease depends on the speed of action of the drug and the susceptibility of the bacteria If a culture of M tuberculosis has a mixed population of susceptible and resistant organisms the AGI values versus time would vary depending on the percentage of the population that is sus
27. 12 giorni La sensibilit ai farmaci BACTEC si determina seguendo una versione modificata della metodica proporzionale tradizionale 1 1 viene assunto come proporzione soglia di resistenza per tutti i farmaci antitubercolari Ci significa che se almeno l 1 della popolazione micobatterica testata resistente l isolato considerato resistente ai fini del referto di laboratorio La resistenza si determina comparando la percentuale di crescita nel flacone di controllo e nei flaconi di terreno 12B contenenti il farmaco testato PRINCIPI DELLA PROCEDURA Il principio di base del dosaggio radiometrico di sensibilit BACTEC per i micobatteri simile a quello utilizzato nella procedura di isolamento primario micobatteri quando crescono in un terreno 7H12 contenente substrato marcato con 14C utilizzano tale substrato e producono cos 14CO La quantit di 14CO rilevata riflette la percentuale e l entit di crescita che ha luogo nei flaconi ed espressa in termini di Indice di Crescita GI L aggiunta di un farmaco antitubercolare al terreno determina la soppressione della crescita se i microrganismi testati sono sensibili Questa soppressione pu essere evidenziata da un calo o da un aumento leggerissimo del GI giornaliero rispetto al controllo Se i microrganismi sono resistenti la soppressione e tuttavia minima o inesistente Per determinare la proporzione 1 di resistenza l inoculo batterico usato nel flacone di controllo cento v
28. Inoculum Actively growing M tuberculosis cultures in 12B Medium or on solid media are used for setting up susceptibility testing When a BACTEC 12B vial reads gt 10 reincubate and test daily Refer to the following chart as to when to set up the susceptibility test DAILY READING ACTION GI 300 499 Incubate one additional day and then set up test GI 500 799 Set up test same day GI 2 800 Dilute 1 2 with 1 mL diluting fluid set up test If susceptibility testing is to be delayed refrigerate 12B vial At this point susceptibility test must be set up within one week Prepare a uniform bacterial inoculum by alternately pulling the medium into a single use syringe with a permanently attached needle and pushing it back into the vial several times without removing the needle from the septum of the vial This inoculum is used directly for the drug susceptibility test Solid Medium Culture Make a homogenized suspension of several colonies on solid medium The culture should not be more than 4 5 weeks old Adjust the suspension to McFarland No 1 0 if using the daily schedule and 0 5 for the non weekend schedule If viability or age of the culture is uncertain subculture into a 12B Medium to obtain fresh growth Inoculation Arrange the 12B Medium vials in a rack and label them properly usually control Streptomycin Isoniazid Rifampin Ethambutol You will need one vial for each drug concentration and one for the control The cardboard shi
29. MUESTRAS Se utilizan cultivos puros aislados de crecimiento activo para an lisis de sensibilidad Para obtener los detalles consular el prospecto del medio 12B PP116JAA y el manual de procedimiento y del producto del sistema BACTEC 460TB MA 0029 PROCEDIMIENTO Material suministrado BACTEC S I R E Drug Kit 23 Materiales necesarios pero no suministrados Medio BACTEC 12B instrumento BACTEC 460TB l quido diluyente BACTEC jeringa de 5 mL agua destilada desionizada jeringa de tuberculina con aguja fija soluci n desinfectante alcohol isoprop lico al 7096 Procedimiento de an lisis Se suministran antibi ticos BACTEC S I R E estreptomicina isoniazida rifampicina y etambutol en forma liofilizada Se debe cumplir con el procedimiento est ndar y las concentraciones de antibi ticos La concentraci n de antibi ticos despu s de su reconstituci n con 5 mL de agua destilada desionizada est ril y despu s de la diluci n seg n sea lo apropiado se realiza de la manera siguiente Factor de Concentra Cant afiadida Concentraci n final en Antibi tico Reconstituido diluci n ci n mL al medio 12B el medio 12B mL Estreptomicina 5mL 240 ug 0 1 mL 6 0 ug Estreptomicina 5mL Diluci n 1 3 80 ug 0 1 mL 2 0 ug Isoniazida 5mL 4 ug 0 1 mL 0 1 ug Rifampicina 5mL 80 ug 0 1 mL 2 0 ug Etambutol 5 mL 300 ug 0 1 mL 7 5 ug Etambutol 5mL Diluci n 1 3 100 ug 0 1 mL 2 5 ug Equival
30. NOT USE vials that exhibit any cracks or defects discard the vial in an appropriate manner Quality Control Certificates are provided with each S I R E Drug Kit Quality Control Certificates show test organisms utilized for this type of product The user should examine all vials for evidence of deterioration prior to use Vials displaying turbidity contamination or discoloration darkening should not be used S I R E Drug vials displaying moisture absence of fluffy appearance should not be used The performance of the drugs may be checked by susceptibility testing one or more quality control organisms with each susceptibility test set up ATCC No Strain 27294 M tuberculosis H37Rv Susceptible to S I R E Drugs 35820 M tuberculosis H37Rv Streptomycin resistant 35822 M tuberculosis H37Rv Isoniazid resistant 35837 M tuberculosis H37Rv Ethambutol resistant 35838 M tuberculosis H37Rv Rifampin resistant ATCC 27294 H37Rv should always be included and should always be susceptible If this culture shows resistance to any drug or if the control of the susceptibility test of any culture fails to grow within 12 days do not report the results Repeat the test As part of the daily maintenance schedule Performance Test Vials BACTEC Performance Test Kit should be tested on the BACTEC instrument If low readings are obtained yet Performance Test Vials were tested properly possible instrument problems may be indicated see the BACTEC PTK p
31. Revisions SO 0191 5 Rev from Rev to ECO 0607 2010 06 5378 10 Notes 1 BD Cat Number 442102 2 Blank Sheet Size Length N A Width N A Number of Pages N A Number of Sheets N A Page Size Length N A Width N A Final Folded Size N A Style see illustrations below N A an HEADER HEADER d ni DER 3 4 HEADER mA 5 6 7 See Specification Control Number VS 0250 for Material Information Ink Colors Printed two sides Yes _ No No of Colors 1 PMS 199 Red Graphics are approved by Becton Dickinson and Company Supplier has the responsibility for using the most current approved revision level Label Design COMPANY CONFIDENTAL THIS DOCUMENT IS a BD Becton Dickinson and Company THE PROPERTY OF BECTON DICKINSON AND RI 7 Laveton Circle Proofer COMPANY AND IS NOT TO BE USED OUTSIDE THE COMPANY WITHOUT WRITTEN PERMISSION Sparks MD 21152 USA Category and Description Sheet 1 of 31 Part Number Package Insert _ A Checked By Scale 1 1 amp BD BACTEC S I R E Drug Kit English pages 1 5 Italiano pagine 14 18 C PP118JAA Francais pages 5 9 Portugu s p ginas 18 22 2010 06 Deutsch Seiten 10 14 Espanol paginas 23 27 Pokyny vam poskytne m stn z stupce spole nosti BD Kontakt den lokale BD repraesentant for at fa instruktioner Kasutusjuhiste suhtes kontakteeruge oma kohaliku BD esindajaga Um Anleitungen zu erhalten wen
32. TEC 12B Una muestra contaminada dar una lectura positiva pero no indicar una muestra cl nicamente relevante El usuario debe tomar tal determinaci n sobre la base de factores tales como tipo de organismo aislado presencia del mismo organismo en varios cultivos historia cl nica del paciente revisi n apropiada del equipo etc La contaminaci n tambi n puede ser resultado del mantenimiento inadecuado de las agujas y los tubos BACTEC de una desinfecci n inadecuada de la membrana o del funcionamiento defectuoso de la unidad de calentamiento de agujas del sistema BACTEC v ase el manual de uso y mantenimiento de la campana para tuberculosis Debido a la naturaleza de los materiales biol gicos en productos de medios y la variabilidad inherente del organismo el usuario debe estar consciente de posibles los resultados variables en la recuperaci n de determinados organismos VALORES PREVISTOS Con rifampicina estreptomicina e isoniazida por lo general existe una reducci n marcada en el ndice de crecimiento en el lapso de unos d as si la poblaci n presenta sensibilidad Con etambutol por lo general se produce un pequefio aumento inicial en el ndice de crecimiento antes de que comiencen a bajar los valores de ndice de crecimiento La velocidad de la reducci n del ndice de crecimiento depende de la velocidad del efecto del antibi tico y la sensibilidad de las bacterias Si un cultivo de M tuberculosis presenta una poblaci n mixta de
33. Tagen einen starken Abfall des GI Wertes wenn die Population empfindlich ist Bei Ethambutol gibt es blicherweise einen geringen anf nglichen Anstieg des GI Wertes bevor die Gl Werte langsam fallen Inwieweit der Gl Wert abf llt ist von der Wirkungsgeschwindigkeit der Arznei und der Empfindlichkeit der Bakterien abh ngig Wenn eine Kultur von M tuberculosis eine Mischpopulation empfindlicher und resistenter Organismen aufweist variieren die zeitspezifischen A GI Werte bez glich des empfindlichen Populationsprozentsatzes F r den direkten Empfindlichkeitstest ist der Gesamterfolg und die f r die Befundung erforderliche Zeit abh ngig vom positiven Ausstrichergebnis In bereinstimmung mit herk mmlichen Testergebnissen werden durchschnittlich 10 12 Tage in der Fachliteratur angegeben 8 9 12 LEISTUNGSMERKMALE Mehrere ver ffentlichte Studien zeigen dass die mit der BACTEC Empfindlichkeitsmethode erzielten Ergebnisse dem Vergleich mit der herk mmlichen Proportionsmethode mit 7H10 7H11 Medien oder der Resistenzverh ltnismethode mit Lowenstein Jensen Eimedium gut standhalten 1 10 15 Die Genauigkeit und Reproduzierbarkeit der BACTEC Empfindlichkeitsmethode die h ufig bereits nach 4 6 Tagen Ergebnisse liefert wurde ebenfalls untersucht 16 20 Eine Untersuchung von Huang et al bei dem das BACTEC 460TB Ger t mit der Proportionsmethode verglichen wurde lieferte folgende Ergebnisse Tabelle 1 Ergebnisse des Antibiotika E
34. Un estudio realizado por Bergmann y Woods compar los antibi ticos BACTEC 460TB S I R E etambutol y estreptomicina con el m todo de proporciones Los resultados se muestran en la tabla a continuaci n 23 Tabla 3 Resultados de prueba a etambutol y estreptomicina con el sistema BACTEC y el m todo de proporciones N de resultados que fueron Antibi tico Sistema BACTEC MOP Cantidad de muestras Etambutol S S 63 R S R 3 Estreptomicina S S 59 14 R S 1 tAbreviaturas MOP m todo de proporciones S sensible R resistente En otro estudio Bergmann y Woods tambi n examinaron los antibi ticos BACTEC 460TB S I R E isoniazida y estreptomicina y los compararon con el m todo de proporciones 24 26 Tabla 4 Resultados de pruebas de sensibilidad resueltas para los aislados de M tuberculosis mediante el m todo de proporciones BACTEC 460TB N de aislados con resultados seg na Antibi tico y MOP BACTEC resultado 460TB Isoniazida bajo Sensible 16 16 Resistente 4 4 Isoniazida alto Sensible 19 18 Resistente 1 2 Rifampicina Sensible 17 17 Resistente 2MOP m todo de proporciones bBajo 0 2 ug mL para el m todo de proporciones y 0 1 g mL para BACTEC 460TB Alto 1 0 g mL para el m todo de proporciones y 0 4 ug mL para BACTEC 460TB DISPONIBILIDAD N de cat Descripci n 442102 BACTEC S I R E Drug Kit 2 frascos de estreptomicina liofilizada 2 frascos de rifampicina li
35. a UH Burpo Aparatur medical de diagnosticare in vitro In Vitro Diyagnostik Tibbi Cihaz Medicinski ure aj za in vitro dijagnostiku MeanunHckn npu6op ana AnarHhoctukn in vitro JKacanabi xarnalga xyprizerih MEAULMHANEIK AUATHOCTUKA acnaGbi Medicinska pomagala za In Vitro Dijagnostiku Temperature limitation Teplotn omezen Temperaturbegraensning Temperatuurlimiet Temperatuuri piirang L mp tilarajoitus Temp rature limite Zul ssiger Temperaturenbereich Opio depuoxpagia H m rs kleti hat r Temperatura limite Laikymo temperat ra Temperaturbegrensning Ograniczenie temperatury Limitag o da temperatura Ohrani enie teploty Limitaci n de temperatura Temperaturbegr nsning TemnepatypHu orpaHuyeHua Limitare de temperatura S cakl k s n rlamas Ograni enje temperature OrpaHvueHve reMneparypbl TemneparypaHb wekrey Dozvoljena temperatura Batch Code Lot K d slo ar e Batch kode Lot Chargenummer lot Partii kood Er koodi LOT Code de lot Lot Chargencode Chargenbezeichnung Kwdik g Trapridag Maprida T tel sz ma Lot Codice del lotto partita Partijos numeris Lot Batch kode Serie Kod partii seria C digo do lote Lote K d s rie ar a C digo de lote Lote Satskod parti Koa Naptuga Num r lot Lotul Parti Kodu Lot Kod serije Kon naptuu nor Tontama konb Lot kod Consult Instructions for Use
36. ackage insert PPO46JAA Quality control requirements must be performed in accordance with applicable local state and or federal regulations or accreditation requirements and your laboratory s standard Quality Control procedures It is recommended that the user refer to pertinent CLSI formerly NCCLS guidance and CLIA regulations for appropriate Quality Control practices INTERPRETATION OF RESULTS When the control vials reach a GI of 30 or more the results should be interpreted as follows if the AGI is less in the drug vial than the control the population is susceptible if more it is resistant AGI Control AGI drug susceptible AGI Control AGI drug resistant AGI Control AGI drug borderline The following table represents data obtained from M tuberculosis grown on solid medium and tested using the BACTEC susceptibility method Similar data is obtained from M tuberculosis initially grown in a 12B Medium However because of fewer cells in the inoculum initial readings may be lower Daily GI Reading Day Control Streptomycin Isoniazid Rifampin Ethambutol 5 40 50 38 76 11 20 100 19 100 24 12 250 10 100 65 14 500 12 91 AGI 41 2 250 2 9 Results Susceptible Resistant Susceptible Susceptible LIMITATIONS OF THE PROCEDURE Variations in preparation of inoculum affect the outcome of susceptibility test results especially the presence of large clumps and improper 1 10
37. ans le cadre du programme d entretien journalier Si les valeurs mesur es sont basses alors que les flacons t moins ont t test s correctement il est possible que l appareil soit en cause voir la notice d emploi BACTEC PTK PPO46JAA Effectuer les contr les de qualit conform ment la r glementation nationale et ou internationale aux exigences des organismes d homologation concern s et aux proc dures de contr le de qualit en vigueur dans l tablissement Il est recommand l utilisateur de consulter les directives CLSI pr c demment NCCLS et la r glementation CLIA concern es pour plus d informations sur les modalit s de contr le de qualit INTERPR TATION DES R SULTATS Lorsque l IC des flacons de contr le est sup rieur ou gal 30 interpr ter les r sultats comme suit Si le A IC du flacon contenant l antibiotique est inf rieur celui du flacon de contr le la population et sensible s il est sup rieur elle est r sistante A IC contr le gt A IC antibiotique sensible A IC contr le lt A IC antibiotique r sistant A IC contr le A IC antibiotique faible Le tableau suivant r capitule les r sultats obtenus pour M tuberculosis cultiv sur milieu solide et analys avec le test de sensibilit BACTEC Des donn es similaires ont t obtenues pour M tuberculosis cultiv initialement sur 12B Medium Cependant en raison du plus faible nombre de cellules dans
38. c du flacon Cet inoculum est utilis directement pour l antibiogramme Milieu de culture solide R aliser une suspension homog ne de plusieurs colonies pr lev es sur milieu solide La culture doit tre g e de 4 5 semaines au maximum Ajuster la densit de la suspension celle d un standard McFarland 1 0 pour le programme quotidien et 0 5 pour le programme hors week end Si la viabilit ou l ge de la culture est douteuse la repiquer sur 12B Medium pour obtenir de nouvelles colonies Ensemencement Disposer les flacons de 12B Medium dans un portoir et les tiqueter comme il convient contr le streptomycine isoniazide rifampicine et thambutol habituellement Un flacon de chaque concentration d antibiotique et un flacon de contr le sont n cessaires Les supports d exp dition en carton peuvent servir de portoir Sous une hotte biologique de s curit et les mains gant es ensemencer chacun des flacons de BACTEC 12B Medium contenant un antibiotique avec 0 1 mL de la suspension bact rienne Utiliser une seringue tuberculinique jetable munie d une aiguille non amovible pour effectuer cette op ration Pour le flacon de contr le ne pas ensemencer directement la suspension mais la diluer au pr alable au 1 100 en transf rant 0 1 mL de suspension dans 9 9 mL de liquide de dilution Bien homog n iser la solution en retournant au moins 10 fois le flacon puis ensemencer le flacon de contr le de 12B Medium sans antibioti
39. ceptible For the direct susceptibility test the overall success and the required time to report is dependent on the smear positivity An average of 10 12 days with good agreement with the conventional test results has been reported in literature 8 9 PERFORMANCE CHARACTERISTICS Several published studies have reported that results obtained by the BACTEC susceptibility method compared well with the conventional proportion method employing 7H10 7H11 media or the resistance ratio method employing Lowenstein Jensen egg medium 1 10 15 The accuracy and reproducibility of the BACTEC susceptibility method has also been evaluated with results often achieved within 4 6 days 16 20 A study by Huang et al comparing the BACTEC 460TB System with the method of proportions gave the following results 21 Table 1 Antimicrobial susceptibility test results and diagnostic performance indices as determined by the BACTEC 460TB system compared to the agar dilution method based on 47 isolates of M tuberculosis No of isolates with specified results Diagnostic performance indices Drug method Both Both Agar S Agar R Specificity Sensitivity amp drug concentration S R BACTECR BACTEC S 96 96 STR BACTEC 2 0 ug mL 36 9 0 2 100 81 8 INH BACTEC 0 1 ug mL 16 29 1 1 94 1 96 7 RMP BACTEC 2 0 ug mL 30 14 1 2 96 8 87 5 EMB BACTEC 2 0 ug mL 35 2 4 6 89 7 25 In the agar dilution method the drugs were tested at the following concentrations STR
40. chchen mit einem GI Wert von 20 oder mehr vom Test auszuschlie en Vorbereitung des Inokulums Aktiv wachsende M tuberculosis Kulturen in 12B Medium oder auf festen Medien werden zur Durchf hrung der Empfindlichkeitstests verwendet Wenn ein BACTEC 12B Flaschchen einen Wert von 210 aufweist neu inkubieren und taglich testen Siehe die folgende bersicht bez glich des Zeitpunkts f r die Testdurchf hrung TAGLICHES ABLESEN MASSNAHME GI 300 499 Einen weiteren Tag inkubieren und den Test dann durchf hren GI 500 799 Den Test am selben Tag durchf hren GI 2 800 Mit 1 mL Verd nnung im Verh ltnis 1 2 verd nnen und den Test dann durchf hren Wenn die Empfindlichkeitstests verschoben werden m ssen das 12B Fl schchen im K hlschrank aufbewahren Zu diesem Zeitpunkt muss der jeweilige Empfindlichkeitstest innerhalb einer Woche durchgef hrt werden Ein gleichmaBiges bakterielles Inokulum vorbereiten Hierzu mehrere Male im Wechsel eine Einmalspritze mit einer fest eingesetzten Kan le mit dem Medium aufziehen und das Medium wieder in das Flaschchen abgeben ohne dabei die Nadel vom Septum des Flaschchens zu entfernen Dieses Inokulum wird direkt f r den Arzneimittel Empfindlichkeitstest verwendet Feste Medienkultur Eine homogenisierte Suspension mehrerer Kolonien auf festem Medium anlegen Die Kultur sollte nicht lter als 4 5 Wochen sein Die Suspension auf den McFarland Tr bungsstandard 1 0 einstellen wenn t glich getestet
41. che Tests Die Fl schchen t glich einschlieBlich an Wochenenden und Feiertagen zu ungef hr der gleichen Zeit 2 h auf einem BACTEC 460TB Ger t testen bis ein GI Wert von 30 oder mehr im Kontrollflaschchen erreicht ist Mindestens 4 Tage und maximal 12 Tage lang testen Mithilfe eines Testplans kann ein Arzneimittelempfindlichkeitstest an jedem beliebigen Wochentag angesetzt werden Tests an Werktagen ohne Wochenenden Dieses Verfahren gleicht dem oben beschriebenen t gliches Testen mit folgenden Ausnahmen a Alle positiven Kulturen zusammenfassen und mit den Empfindlichkeitstests ausschlieBlich an Freitagen beginnen Die weiter oben beschriebenen Verfahren anwenden b Wenn ein positives BACTEC Flaschchen verwendet wird der bersicht oben folgen Mit dem Test der inokulierten Fl schchen an einem Montag beginnen und dabei das Wochenende berspringen Die Fl schchen sollten wenigstens am Montag Dienstag und Mittwoch getestet werden mindestens 5 Tage ab der Inokulation bis zu max 12 Tagen Dabei stets zur gleichen Zeit 2 h testen Direkter Arzneimittelempfindlichkeitstest Wenn eine Probe s urefeste Bakterien AFB auf dem Ausstrich enth lt sind blicherweise ausreichend Mykobakterien vorhanden um einen Arzneimittel Empfindlichkeitstest im 12B Medium durchzuf hren Das Verfahren ist im Wesentlichen dasselbe wie beim indirekten Empfindlichkeitstest Folgende Abweichungen sind zu beachten 11 Nach der Behandlung der Pr
42. chstumsrate im Arzneimittelfl schchen w re gleich der Wachstumsrate im Kontrollfl schchen in dem das urspr ngliche bakterielle Inokulum nur 1 100 des Inokulums im Arzneimittelfl schchen ausmacht REAGENZIEN Die BACTEC S I R E Arzneifl schchen enthalten vor der Behandlung die folgenden aktiven Bestandteile Lyophilisierte Antibiotika jedes Flaschchen Euer D 1 2 mg Isotiiazid n recen O a Co RIFAMPIN e M H Ethambutol Warnhinweise und VorsichtsmaBnahmen In vitro Diagnostikum Dieses Produkt enthalt Naturkautschuk getrocknet Klinische Proben k nnen pathogene Mikroorganismen wie z B Hepatitis Viren und HIV enthalten Beim Umgang mit allen mit Blut und anderen K rperfl ssigkeiten kontaminierten Artikeln sind die Allgemeinen VorsichtsmaBnahmen 25 sowie die einschl gigen Institutionsrichtlinien zu beachten Vor Gebrauch muss jedes Fl schchen auf Anzeichen von Besch digung Verfall oder Kontamination berpr ft werden Fl schchen die Anzeichen von Kontamination aufweisen NICHT VERWENDEN Fl schchen die Anzeichen von Besch digung aufweisen m ssen entsorgt werden In seltenen F llen kann der gl serne Flaschchenhals einen Sprung haben und beim Entfernen des Abrissdeckels oder w hrend der Handhabung des Fl schchens brechen Bevor aus positiven Kulturflaschchen mit 12B Medium f r Mykobakterien eine Probenentnahme zur Anlage von Subkulturen oder f r F rbungen erfolgen kann ist das sic
43. cobact ries pour effectuer un antibiogramme en 12B Medium La m thode est pour l essentiel identique celle du test de sensibilit indirect Le mode op ratoire diff re sur les points suivants Une fois l chantillon trait ensemencer les milieux de culture et r aliser un frottis avec coloration acido r sistante Conserver le reste du concentr d chantillon au r frig rateur Examiner le frottis avec coloration acido r sistante S il est positif par la m thode de Ziehl Neelsen ou la m thode au fluorochrome pr parer le test de sensibilit le jour m me Ajouter du BACTEC PANTA tous les flacons contenant ou non contr le des antibiotiques Ajouter 0 1 mL de concentr d chantillon bien m lang tous les flacons contenant des antibiotiques Diluer le concentr d chantillon au 1 10 et ensemencer le flacon de contr le avec 0 1 mL de la dilution Incuber les flacons 37 C et les tester sur le systeme BACTEC 460TB tous les 2 3 jours pendant 21 jours au maximum Tester quotidiennement les chantillons dont le frottis est fortement positif Interpr ter les r sultats lorsque I IC du contr le est sup rieur ou gal 20 Confirmer les r sultats par un antibiogramme indirect Rapporter les r sultats une fois l identification de M tuberculosis confirm e par un test BACTEC NAP ou autre Contr le de qualit NE PAS UTILISER les flacons au del de leur date de p remption NE PAS UTILISER de flacon f l ou d fectueux
44. concentrazione equivalente di farmaco per il test di sensibilit BACTEC nel caso in cui si debbano comparare i risultati ottenuti con le due metodiche L aggiunta della corretta quantit di farmaco da testare nel terreno di coltura decisiva per l esito del test di sensibilit Istruzioni per la conservazione Conservare i flaconi di farmaci BACTEC S I R E in un luogo fresco 2 8 C e asciutto al riparo dalla luce solare diretta Una volta ricostituiti possono essere conservati per un massimo di 3 giorni a 2 8 C oppure congelati ad almeno 20 C per non pi di sei mesi Congelare in piccole aliquote Non congelare e scongelare ripetutamente La data di scadenza si riferisce al flacone liofilizzato sigillato e conservato come prescritto RACCOLTA DEI CAMPIONI Per i test di sensibilit si usano colture pure isolate in fase di crescita attiva Per dettagli consultare il foglietto illustrativo del terreno 12B PP116JAA e il manuale relativo alla procedura e al sistema BACTEC 460TB MA 0029 PROCEDURA Materiale fornito BACTEC S I R E Drug Kit Materiali necessari ma non forn BACTEC 12B Medium strumento BACTEC 460TB BACTEC Diluting Fluid siringa da 5 mL acqua distillata deionizzata siringa per tubercolina con ago fisso soluzione disinfettante alcol isopropilico al 7096 Procedura del test farmaci BACTEC S I R E streptomicina isoniazide rifampicina ed etambutolo sono forniti in forma liofilizzata Adottare le
45. concentrazioni di farmaci e la procedura standard La tabella seguente illustra le concentrazioni di farmaci dopo la ricostituzione con 5 mL di acqua sterile distillata deionizzata e dopo la diluizione appropriata Fattore di Concentra Quantit aggiunta Concentrazione finale Farmaco Ricostituito diluizione zione mL al terreno 12B nel terreno 12B mL Streptomicina 5mL 240 ug 0 1 mL 6 0 ug Streptomicina 5mL Diluizione 1 3 80 ug 0 1 mL 2 0 ug Isoniazide 5mL 4ug 0 1 mL 0 1 ug Rifampicina 5mL 80 ug 0 1 mL 2 0 ug Etambutolo 5mL 300 ug 0 1 mL 7 5 ug Etambutolo 5mL Diluizione 1 3 100 ug 0 1 mL 2 5 ug Equivalente alle concentrazioni critiche raccomandate da CDC Esempi di concentrazioni equivalenti in terreni tradizionali per farmaci primari e secondari sono riportati nella sezione IV del manuale relativo alla procedura e al sistema BACTEC 460TB Se per raggiungere la concentrazione di farmaco desiderata vedi sopra necessaria una diluizione diluire in asepsi in acqua sterile distillata deionizzata Agitare accuratamente Preparazione del terreno del farmaco Usare una soluzione antibiotica preparata di fresco oppure scongelare una provetta di soluzione antibiotica stock congelata Usando una siringa monouso da 1 mL dispensare esattamente 0 1 mL in un flacone di terreno BACTEC 12B da 4 mL Usare una siringa diversa per ogni farmaco Prestare attenzione a evitare bolle d
46. ctement 0 1 mL de solution dans un flacon de BACTEC 12B Medium de 4 mL Utiliser une seringue distincte pour chaque antibiotique Veiller ne pas introduire de bulles d air dans la seringue et ne pas utiliser la derniere portion de 0 1 mL de la seringue Pr tester tous les flacons de 12B Medium sur le systeme BACTEC 460TB Instrument afin d tablir une atmosph re de CO dans les flacons et de rep rer ceux dont I IC est sup rieur ou gal 20 Pr paration de l inoculum bact rien Utiliser des cultures de M tuberculosis en phase exponentielle de croissance en 12B Medium ou sur milieux solides pour pr parer le test de sensibilit Une fois que l IC d un flacon de BACTEC 12B est sup rieure ou gale 10 incuber de nouveau le flacon et le tester quotidiennement Le tableau suivant indique quel moment pr parer le test de sensibilit MESURE QUOTIDIENNE ACTION IC de 300 499 Incuber un jour de plus puis pr parer le test IC de 500 799 Pr parer le test le jour m me IC 2 800 Diluer au 1 2 avec 1 mL de liquide de dilution pr parer le test Si le test de sensibilit est retard r frig rer le flacon de milieu 12B A ce stade le test de sensibilit doit tre pr par dans les 7 jours Pr parer un inoculum bact rien homogene en aspirant et en expulsant a plusieurs reprises le milieu dans le flacon l aide d une seringue usage unique munie d un aiguille non amovible sans retirer l aiguille du bouchon en caoutchou
47. dade da bact ria Se uma cultura de M tuberculosis possuir uma populac o mista de microrganismos sens veis e resistentes os valores de AIC versus tempo ir o variar dependendo da percentagem da populac o que sens vel Para o teste directo da sensibilidade o sucesso global e o tempo necess rio dependem da positividade do esfregaco Na literatura tem sido referida uma m dia de 10 a 12 dias com boa concord ncia com os resultados de testes convencionais 8 9 CARACTER STICAS DO DESEMPENHO V rios estudos publicados referiram que os resultados obtidos com o m todo de sensibilidade BACTEC foram compar veis aos do m todo de proporc o convencional utilizando o meio 7H10 7H11 ou do m todo de raz o da resist ncia utilizando o meio de Lowenstein Jensen base de ovo 10 15 A exactid o e a reprodutibilidade do m todo de sensibilidade BACTEC foram igualmente avaliadas tendo os resultados sido muitas vezes alcancados ap s 4 a 6 dias 16 20 Um estudo realizado por Huang et a que comparou o Sistema BACTEC 460TB com o m todo das proporc es forneceu os seguintes resultados Tabela 1 Resultados do teste de sensibilidade aos antimicrobianos e ndices de desempenho do diagn stico conforme determinado pelo sistema BACTEC 460TB comparado com o m todo de diluic o em gar baseado em 47 isolados de M tuberculosis No de isolados com resultados especificadost ndices de desempenho do diagn stico F rmaco m todo e Amb
48. deficienza umana Manipolare tutti i materiali e gli articoli contaminati con sangue o altri fluidi biologici in conformit alle norme dell istituto e alle Precauzioni standard 25 Prima dell uso esaminare ciascun flacone per verificare se presenta segni di danni deterioramento o contaminazione NON USARE un flacone se presenta tracce di contaminazione Eliminare i flaconi che presentano segni di danni Raramente pu succedere che il collo di un flacone di vetro sia incrinato e si rompa durante la rimozione del tappo o la manipolazione Prima di prelevare campioni positivi da flaconi di coltura di terreno 12B per la subcoltura o la colorazione ecc necessario eliminare il gas eventualmente accumulato a causa del metabolismo microbico Durante tutte le procedure adottare tecniche asettiche e seguire le precauzioni standard contro i rischi microbiologici Eseguire le procedure in una cappa di sicurezza biologica appropriata in una stanza con un sistema di ventilazione adeguato in conformit alle raccomandazioni CDC 6 Durante la manipolazione di campioni e colture di potenziali patogeni usare camice maschera e guanti appropriati Seguire le raccomandazioni CDC e OSHA Per ridurre al minimo potenziali perdite durante l inoculo usare siringhe con aghi fissi o punte con raccordo di sicurezza di marca Luer Lok La concentrazione di farmaco usata nei test di sensibilit tradizionali pu variare da un laboratorio all altro E importante selezionare una
49. den Sie sich bitte an Ihren BD Kundendienst Errikoivwv ore pe rov TOTTIK avrirrp owrro rnc BD yia odnyies A haszn lati utas t st k rje a BD helyi k pviselet t l Contattare il rappresentante BD di zona per ottenere il foglietto illustrativo Naudojimo instrukcijy teiraukites vietos BD jgaliotojo atstovo Kontakt din lokale BD representant for mer informasjon Aby uzyska instrukcje uzytkowania skontaktuj sie z lokalnym przedstawicielstwem BD Contacte o seu representante local da BD para obter instru es In trukcie z skate u miestneho z stupcu spolo nosti BD Kontakta lokal Becton Dickinson representant f r anvisningar CBbpxcere ce c MecrHua npencraBMTen Ha BD 3a uncrpykawmm Contactati reprezentantul dumneavoastr local BD pentru instruc iuni Talimatlar i in yerel BD temsilcilerinize dan n Obratite se svom lokalnom predstavniku kompanije BD za uputstva Ana nonyueHna MHCTDyKUM CBMKETECE C MECTHbIM npencraBMTeneM komnannn BD OsiHisniH xeprinikri BA ekinike xyriHin Hyckay anbiHbi3 Kontaktiraj lokalnog predstavnika BD za upute INTENDED USE BACTEC S I R E Drug Kit contains antimicrobials for use with BACTEC 12B Medium in the testing of Mycobacterium tuberculosis Principal use is with the BACTEC 460TB instrument BACTEC S I R E Drugs Streptomycin Isoniazid Rifampin and Ethambutol are recommended as additives to BACTEC 12B Culture Medium for the qualitative susceptibility testing o
50. di consultare le norme CLIA e la documentazione CLSI gi NCCLS in merito INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI Quando il flacone di controllo raggiunge un GI pari ad almeno 30 i risultati vanno interpretati come segue Se AGI nel flacone del farmaco inferiore a quello del controllo la popolazione sensibile mentre se superiore la popolazione resistente AGI controllo gt AGI farmaco sensibile AGI controllo AGI farmaco resistente AGI controllo AGI farmaco borderline La tabella seguente presenta i dati ottenuti da ceppi di M tuberculosis cresciuti su terreno solido e testati usando la metodica di test di sensibilit BACTEC Dati simili sono stati ottenuti da ceppi di M tuberculosis inizialmente cresciuti in terreno 12B Data la minore quantita di cellule nell inoculo le letture iniziali possono tuttavia essere inferiori Lettura Gl giornaliera Giorno Controllo Streptomicina Isoniazide Rifampicina Etambutolo 1 5 40 50 38 76 2 11 20 100 19 100 3 24 12 250 10 100 4 65 14 500 12 91 AGI 41 2 250 2 9 Risultati Sensibile Resistente Sensibile Sensibile LIMITAZIONI DELLA PROCEDURA Variazioni nella preparazione dell inoculo incidono sull esito dei test di sensibilit ai farmaci in particolare la presenza di grumi macroscopici e una diluizione 1 100 inappropriata per il flacone di controllo Se la crescita nel flacone di controllo non amp soddisfacente rip
51. dimiento es similar al cronograma de an lisis diario que aparece anteriormente con las siguientes excepciones a Incluir en un lote todos los cultivos positivos y definir las pruebas de sensibilidad solamente los viernes Seguir los procedimientos descriptos anteriormente b Si se utiliza un frasco BACTEC positivo consultar la tabla anterior Iniciar las pruebas de los frascos inoculados un Lunes omitiendo el fin de semana Los frascos deben analizarse al menos lunes martes y mi rcoles un m nimo de 5 d as desde el d a de inoculaci n hasta un m ximo de 12 d as aproximadamente a la misma hora cada d a 2 h Prueba de Sensibilidad de Antibi tico Directa Si una muestra es positiva a AFB mediante un frotis por lo general contiene suficientes micobacterias para realizar una prueba de sensibilidad de antibi tico en medio 12B Este procedimiento es b sicamente el mismo que el de la prueba de sensibilidad indirecta Las diferencias del procedimiento son las siguientes Despu s del procesamiento de muestras inocular los medios de cultivo y realizar un frotis para tinci n AFB Refrigerar el resto del concentrado de muestra Examinar el frotis AFB Si es positivo con el m todo de Ziehl Neelsen o al fluorocromo definir la prueba de sensibilidad el mismo d a A adir BACTEC PANTA para todos los frascos con antibi tico y sin antibi tico control A adir 0 1 mL de concentrado de muestra bien mezclada en los frascos con antibi tico
52. do teste PRINC PIOS DO PROCEDIMENTO O princ pio b sico do ensaio de sensibilidade radiom trico BACTEC para micobact rias id ntico ao princ pio utilizado no procedimento de isolamento primario Quando as micobact rias crescem em meio 7H12 contendo substrato marcado com 14C estas utilizam o substrato e produzem 14CO A quantidade de 4CO detectado reflecte a velocidade e o n vel de crescimento ocorrido no frasco e expressa em termos de ndice de crescimento IC Quando um f rmaco anti tuberculose adicionado ao meio o crescimento suprimido se os microrganismos de teste forem sens veis Esta supress o pode ser detectada por um decl nio ou um aumento muito pequeno no IC di rio quando comparado com o controlo Contudo se os microrganismos forem resistentes n o ocorre supress o do crescimento ou ocorre apenas uma ligeira supress o 18 Para determinar a proporc o de 1 da resist ncia o in culo bacteriano utilizado no frasco de controlo corresponde a um cent simo do in culo utilizado no frasco que cont m o f rmaco Ap s a inoculac o os frascos do f rmaco e do controlo s o testados diariamente A taxa de aumento no IC ou seja a variac o em relac o ao dia anterior denominada delta A IC comparada entre o frasco do controlo e os frascos que cont m os f rmacos Se o aumento do IC di rio no frasco do f rmaco for igual ou superior ao do frasco do controlo os microrganismos do teste s o considerados r
53. e celle d un antibiotique tester pour le test de sensibilit BACTEC si l on envisage de comparer les r sultats obtenus par les deux m thodes Il est primordial d ajouter la quantit exacte d antibiotique tester au milieu de culture pour le bon fonctionnement du test de sensibilit Instructions pour la conservation Conserver les flacons d antibiotiques BACTEC S I R E entre 2 8 C dans un endroit sec l abri de la lumi re directe du soleil Une fois reconstitu s les r actifs se conservent jusqu 3 jours entre 2 8 C ou jusqu 6 mois une temp rature de 20 C ou inf rieure Congeler en aliquotes de petits volumes Ne pas multiplier les cycles de cong lation et d cong lation La date de p remption s applique aux flacons lyophilis s non entam s conserv s selon les instructions PRELEVEMENT DES ECHANTILLONS Le test de sensibilit n cessite des isolats de culture pure en phase exponentielle de croissance Pour plus d informations consulter la notice d emploi du 12B Medium PP116JAA et le manuel d utilisation du systeme BACTEC 460TB MA 0029 METHODE Mat riaux fournis BACTEC S l R E Drug Kit Mat riaux requis mais non fournis BACTEC 12B Medium BACTEC 460TB Instrument BACTEC Diluting Fluid seringue de 5 mL eau distill e ou d sionis e seringue tuberculinique munie d une aiguille non amovible solution d sinfectante alcool isopropylique 70 96 Mode op ratoire du test Les BACTEC S I R E
54. e BACTEC 460TB S I R E et la m thode des proportions 24 Tableau 4 Comparaison des r sultats d finitifs de test de sensi M tuberculosis avec le systeme BACTEC 460TB et la m thode des proportions Nb d isolats Antibiotique et MOP BACTEC r sultat 460TB Isoniazide faibleb Sensible 16 16 Resistant 4 4 Isoniazide lev c Sensible 19 18 R sistant 1 2 Rifampin Sensible 17 17 R sistant 3 3 2MOP m thode des proportions bFaible 0 2 g mL pour la m thode des proportions et 0 1 ug mL pour BACTEC 460TB Elev 1 0 pg mL pour la m thode des proportions et 0 4 ug mL pour BACTEC 460TB CONDITIONNEMENT it obtenus sur des isolats cliniques de No r f Description 442102 BACTEC S I R E Drug Kit 2 flacons de streptomycine lyophilis e 2 flacons d isoniazide lyophilis e 2 flacons de rifampicine lyophilis e 2 flacons d thambutol lyophilis 442146 BACTEC Isoniazid 1 flacon d isoniazide lyophilis e 442004 BACTEC 12B Medium 4 mL 100 par carton BIBIOGRAPHIE voir la section References dans la notice en anglais amp BD BACTEC S I R E Drug Kit VERWENDUNGSZWECK Das BACTEC S l R E Arzneimittelkit enth lt Antibiotika zur Verwendung mit dem BACTEC 12B Medium beim Test auf Mycobacterium tuberculosis Die Fl schchen werden vornehmlich zusammen mit dem BACTEC 460TB Ger t verwendet BACTEC S I R E Arzneimittel Streptomycin Isoniazid Rifampin und Ethambutol werden als Zus tze
55. e diagn stico Antibi tico m todo Ambos Ambos Agar S Agar R Specificit Sensibilit concentraci n de S R BACTECR BACTEC S 96 96 antibi tico STR BACTEC 2 0 ug mL 36 9 0 2 100 81 8 INH BACTEC 0 1 ug mL 16 29 1 1 94 1 96 7 RMP BACTEC 2 0 ug mL 30 14 1 2 96 8 87 5 EMB BACTEC 2 0 ug mL 35 2 4 6 89 7 25 En el m todo de diluci n en agar los antibi ticos se analizaron con las siguientes concentraciones STR 2 uig mL INH 0 2 ug mL RMP 1 0 g mL and EMB 5 pg mL tS sensible R resistente Un estudio realizado por Bemer et al compar el sistema BACTEC 460TB S I R E con el sistema BACTEC MGIT 960 S I R E Se analizaron 110 cepas con una concordancia general del 93 5 Los tiempos de proceso fueron entre 4 y 10 d as con el sistema BACTEC 460TB S I R E con un promedio de 7 d as 22 Tabla 2 Resultados de sensibilidad de antibi tico con las cepas cl nicas de M tuberculosis seg n la determinaci n mediante el sistema BACTEC MGIT 960 y BACTEC 460TB N de resultados que fueron Antibi tico concen N de S por ambas R por MGIT 960 S por MGIT 960 R por ambas Concordancia traci n en pg mL pruebas pruebas S por 460TB R por 460TB pruebas INH 0 1 110 81 4 25 96 4 INH 0 4 29 5 3 21 89 7 RIF 2 0 110 92 1 17 99 1 EMB 2 5 110 93 3 1 13 96 4 EMB 7 5 17 7 3 7 82 4 STR 2 0 110 76 9 25 91 8 STR 6 0 34 12 10 12 70 6 Total de pruebas 520 366 33 1 120 93 5 1S sensible R resistente
56. e du mat riel biologique pr sent dans les milieux de culture et de la variabilit inh rente aux microorganismes l utilisateur doit savoir qu une variation des r sultats est possible lors de la mise en vidence de certains microorganismes VALEURS ATTENDUES Avec la rifampicine la streptomycine et l isoniazide lorsque la population est sensible on observe habituellement une diminution marqu e de l indice de croissance IC en quelques jours Avec l thambutol on observe habituellement une l g re augmentation initiale de l IC suivie d une diminution Le taux de d croissance de l IC est fonction de la vitesse d action de l antibiotique et de la sensibilit des bact ries Si une culture de M tuberculosis comporte une population mixte de microorganismes sensibles et r sistants les valeurs de AIC voluent en fonction du temps suivant le pourcentage de population sensible La r ussite globale du test de sensibilit direct et le d lai moyen d obtention des r sultats d pendent de la positivit du frottis Le d lai moyen rapport par diff rents auteurs d obtention de r sultats pr sentant une bonne concordance avec les tests conventionnels est de 10 12 jours 8 9 CARACTERISTIQUES DE PERFORMANCES Plusieurs tudes rapportent que les r sultats obtenus avec le test de sensibilit BACTEC se comparent favorablement ceux obtenus avec la m thode des proportions traditionnelle sur milieux 7H10 7H11 ou avec la m thode du ratio d
57. e r sistance sur milieu l oeuf de Lowenstein Jensen 1 10 15 La pr cision et la reproductibilit du test de sensibilit BACTEC ont galement t valu es sur des r sultats obtenus habituellement en 4 6 jours 16 20 Une tude par Huang et al comparant le systeme BACTEC 460TB la m thode des proportions a donn les r sultats suivants 21 Tableau 1 Comparaison entre des r sultats de test de sensibilit aux antimicrobiens et des indices de performance diagnostique obtenus sur 47 isolats de M tuberculosis avec le systeme BACTEC 460TB et la m thode de dilution en g lose Nb d isolats ayant des r sultats sp cifi s Indices de performance diagnostique Antibiotique m thode BLes deux Les deux Agar S Agar R Sp cificit Sensibilit et concentration de S R BACTEC R BACTEC S l antibiotique STR BACTEC 2 0 ug mL 36 9 0 2 100 81 8 INH BACTEC 0 1 ug mL 16 29 1 1 94 1 96 7 RMP BACTEC 2 0 ug mL 30 14 1 2 96 8 87 5 EMB BACTEC 2 0 ug mL 35 2 4 6 89 7 25 Dans la m thode de dilution en g lose les antibiotiques taient test s aux concentrations suivantes STR 2 ug mL INH 0 2 ug mL RMP 1 0 pg mL et EMB 5 pg mL TS sensible R r sistant Bemer et al ont compar le systeme BACTEC 460TB S I R E au systeme BACTEC MGIT 960 S I R E 110 souches ont t test es et un pourcentage de concordance globale de 93 5 a t obtenu Le d lai moyen d obtention d un r sultat tait de 4
58. emploi inspecter les flacons et s assurer qu ils ne sont pas endommag s d t rior s ou contamin s NE PAS UTILISER les flacons pr sentant des signes de contamination Jeter les flacons visiblement endommag s Il peut arriver que le goulot d un flacon en verre soit f l et se rompe lors du retrait de la capsule de protection ou pendant les manipulations Avant d effectuer un prelevement dans les flacons de 12B Medium positifs en vue d un repiquage ou d une coloration il est n cessaire de lib rer tout gaz accumul r sultant du m tabolisme bact rien Respecter les techniques d asepsie et prendre les pr cautions en vigueur contre les dangers microbiologiques Effectuer les manipulations sous une hotte biologique de s curit dans un local quip d une ventilation ad quate conform ment aux recommandations du CDC U S Centers for Disease Control and Prevention 6 Porter une blouse protectrice ad quate un masque et des gants pour manipuler des chantillons et des cultures potentiellement pathogenes Suivre les recommandations des CDC et de l OSHA U S Occupational Safety and Health Administration Pour minimiser le risque de fuite pendant l ensemencement utiliser des seringues munies d aiguilles non amovibles ou d embouts Luer Lok solidement fix s Les concentrations d antibiotiques utilis es pour les antibiogrammes conventionnels sont variables d un laboratoire l autre Il est tr s important de retenir une concentration quivalent
59. en gesetzlichen und beh rdlichen und in den Akkreditierungsbedingungen festgelegten Vorschriften zur Qualit tskontrolle sowie die laborinternen Standardvorgaben zur Qualitatskontrolle zu beachten Benutzer sollten die relevanten CLSI ehemals NCCLS Dokumente und CLIA Vorschriften ber geeignete Testverfahren zur Qualit tskontrolle einsehen INTERPRETATION DER ERGEBNISSE Wenn die Kontrollflaschchen einen Gl Wert von 30 oder mehr erreichen sollten die Ergebnisse wie folgt interpretiert werden Wenn A Gl im Arzneimittelfl schchen geringer ist als in der Kontrolle ist die Population empfindlich ist A GI im Arzneimittelfl schchen h her als in der Kontrolle ist die Population resistent A GI Kontrolle gt A GI Arznei empfindlich A GI Kontrolle lt A Gl Arznei resistent A GI Kontrolle A Gl Arznei Grenzbereich Die folgende Tabelle zeigt die gewonnenen Daten von M tuberculosis gewachsen auf einem festen Medium und getestet mit der BACTEC Empfindlichkeitsmethode Gleiche Daten wurden von urspr nglich auf einem 12B Medium kultivierten M tuberculosis erhalten Aufgrund eines geringeren Zellanteils im Inokulum k nnen die urspr nglichen Werte jedoch niedriger ausfallen T gliche GI Werte Kontrolle Streptomycin Isoniazid Rifampin Ethambutol 1 5 40 50 38 76 2 11 20 100 19 100 3 24 12 250 10 100 4 65 14 500 12 91 AGI 41 2 250 2 9 Ergebnisse Empfindlich Resistent Empfindlic
60. ente a las concentraciones cr ticas recomendadas por los CDC Los ejemplos de concentraciones equivalentes de los medios convencionales para antibi ticos primarios y secundarios se encuentran en el manual de procedimiento y del producto BACTEC 460TB en la secci n IV Si se requiere diluci n para lograr una concentraci n de antibi tico deseada v ase la secci n anterior diluir as pticamente en agua destilada desionizada Agitar bien Preparaci n del medio de antibi tico Utilizar una soluci n de antibi tico preparada recientemente o descongelar un tubo de soluci n de antibi tico de referencia congelado Utilizar una jeringa de 1 mL de un solo uso afiadir exactamente 0 1 mL en un frasco de medio BACTEC 12B de 4 mL Utilizar una jeringa diferente para cada antibi tico Se debe tener cuidado de que la jeringa no contenga burbujas de aire y la ultima porci n de 0 1 mL de la jeringa no debe utilizarse Todos los frascos de medio 12B utilizados en la prueba deben analizarse previamente en un instrumento BACTEC 460TB para establecer una atm sfera de CO en el frasco y para desechar cualquier frasco con un ndice de crecimiento de 20 o m s Preparaci n de in culo bacteriano Los cultivos de M tuberculosis con crecimiento activo en medio 12B o en medios s lidos se utilizan para definir el an lisis de sensibilidad Si un frasco de medio 12B BACTEC presenta una lectura de 210 volver a incubar y analizar diariamente Consultar la sig
61. esistentes ao f rmaco Para uma populac o sens vel o aumento do IC di rio seria maior para o controlo do que para o frasco do f rmaco Por exemplo se 1 da populac o de micobact rias for resistente isoniazida INH ent o 9996 dos microrganismos ser inibido pela INH e apenas 196 crescer no frasco do f rmaco A taxa de crescimento no frasco do f rmaco seria semelhante taxa de crescimento no frasco de controlo em que o in culo bacteriano original corresponderia apenas a 1 100 do in culo do frasco do f rmaco REAGENTES Antes do processamento os frascos de f rmacos do BACTEC S I R E cont m os seguintes princ pios activos Antimicrobianos liofilizados cada frasco Estreptomiciria 2 crearet ne aen anapi usindi cga a sairaana raus 1 2 mg Isoniazida Rifampicina Etambutol Advert ncias Para diagn stico in vitro Este produto cont m borracha natural desidratada Nas amostras podem existir microorganismos patog nicos incluindo os v rus das hepatites e o v rus da imunodefici ncia humana No manuseamento de todos os itens contaminados com sangue ou outros fluidos corporais devem ser seguidas as Precau es padr o 25 e as linhas de orienta o da institui o Antes de ser utilizado cada frasco deve ser examinado relativamente a danos deteriora o ou contamina o N O UTILIZAR nenhum frasco que apresente sinais de contamina o Os frascos que apresentem sinais de danos devem ser eliminados E
62. etere il test 16 Contaminazione Prestare attenzione a evitare contaminazioni durante l inoculo nel flacone BACTEC 12B Un campione contaminato produce una lettura positiva senza per indicare un corrispondente campione clinico La determinazione di contaminazione deve essere effettuata dall utente sulla base di fattori quali il tipo di microrganismo recuperato la presenza dello stesso microrganismo in pi colture l anamnesi del paziente appropriati controlli delle apparecchiature ecc La contaminazione pu essere dovuta anche a errata manutenzione di aghi e tubi BACTEC a insufficiente pulizia del setto o al malfunzionamento dell unit di riscaldamento degli aghi BACTEC vedere il manuale d uso e manutenzione della cappa TB Data la natura dei materiali biologici nei prodotti dei terreni e della variabilita intrinseca dei microrganismi l utente deve essere consapevole di potenziali risultati variabili nel recupero di alcuni microrganismi VALORI ATTESI In caso di popolazione sensibile con rifampicina streptomicina e isoniazide si riscontra solitamente una marcata diminuzione nel GI entro pochi giorni mentre l etambutolo di norma associato a un piccolo aumento iniziale nel GI seguito poi da un calo dei valori GI La misura in cui cala il GI dipende dalla rapidit di azione del farmaco e dalla sensibilit dei batteri Se una coltura di M tuberculosis ha una popolazione mista di microrganismi sensibili e resistenti i valori AGI ri
63. f rmacos etambutol e estreptomicina do BACTEC 460TB S I R E com o m todo das proporc es Os resultados s o demonstrados na tabela abaixo 3 Tabela 3 Resultados iniciais do teste de sensibilidade ao etambutol e estreptomicina em instrumentos BACTEC e m todo das propor es MOP No de resultados que foram F rmaco Sistema BACTEC MOP No de isolados Etambutol S S 63 R R 8 S R 3 Estreptomicina S S 59 R R 14 R S 1 tAbreviaturas MOP m todo das proporc es S sens vel R resistente Num estudo separado Bergmann e Woods tamb m estudaram e compararam os f rmacos isoniazida e estreptomicina do BACTEC 460TB S LR E com o m todo das propor es 24 Tabela 4 Resultados do teste de sensibilidade resolvidos para isolados cl nicos de M tuberculosis atrav s do m todo das proporc es BACTEC 460 TB No de isolados com resultados segundo F rmaco e MOP BACTEC resultado 460 TB Isoniazida baixob Sens vel 16 16 Resistente 4 4 Isoniazida elevados Sens vel 19 18 Resistente 1 PA Rifampicina Sens vel 17 17 Resistente 3 3 2MOP m todo das proporc es bBaixo 0 2 ug mL para o m todo da proporc o e 0 1 ug mL para o BACTEC 460 TB Elevado 1 0 pg mL para o m todo da propor o e 0 4 ug mL para o BACTEC 460 TB APRESENTAC O No decat Descric o 442102 BACTEC S I R E Drug Kit 2 frascos liofilizados de estreptomicina 2 frascos liofilizados de isoniazida 2 frascos lio
64. f M tuberculosis from culture SUMMARY AND EXPLANATION The BACTEC procedure for drug susceptibility testing of mycobacteria is based on the same basic principle employed in the conventional method except that a liquid medium is used and instead of counting colonies after about 3 weeks the growth is monitored radiometrically and the results are reportable within 4 to 12 days BACTEC drug susceptibility is determined by following a modified version of the conventional proportion method The critical proportion for resistance is taken as 1 for all antituberculosis drugs This means that if 1 or more of the test mycobacterial population is resistant the culture is considered resistant for laboratory reporting purposes Resistance is determined by comparing the rate of growth in the control vial and the 12B Medium vials containing the test drug PRINCIPLES OF THE PROCEDURE The basic principle of the BACTEC radiometric susceptibility assay for mycobacteria is similar to the one utilized in the primary isolation procedure When mycobacteria grow in 7H12 medium containing 4C labeled substrate they utilize the substrate and 14CO is produced The amount of 14CO detected reflects the rate and amount of growth occurring in the vial and is expressed in terms of the Growth Index GI When an antituberculous drug is added to the medium suppression of growth occurs if the test organisms are susceptible This suppression can be detected by either a decline
65. filizados de rifampicina 2 frascos liofilizados de etambutol 442146 BACTEC Isoniazid 1 frasco liofilizado de isoniazida 442004 BACTEC 12B Medium 4 mL 100 por caixa BIBLIOGRAFIA Consulte References no texto em Ingl s Somente para uso diagn stico in vitro Importado e Distribu do no Brasil por Becton Dickinson Ind strias Cir rgicas Ltda Rua Cyro Correia Pereira 550 Curitiba Paran Brasil CNPJ 21 551 379 0013 31 Servico de Suporte Tecnico 11 5185 9961 Registro ANVISA n 10033430314 Centro de Relacionamento com o Cliente 0800 0555 654 22 amp BD BACTEC S I R E Drug Kit USO PREVISTO BACTEC S I R E Drug Kit equipo de antibi ticos BACTEC S I R E contiene agentes antimicrobianos para el uso por BACTEC 12B Medium medio BACTEC 12B en el an lisis de Mycobacterium tuberculosis Se utiliza principalmente con el instrumento BACTEC 460TB Los antibi ticos de BACTEC S I R E estreptomicina isoniazida rifampicina y etambutol se recomiendan como aditivos para medio de cultivo BACTEC 12B para realizar an lisis cualitativos de sensibilidad de M tuberculosis a partir de cultivo Espafiol RESUMEN Y EXPLICACION El procedimiento BACTEC para el an lisis de sensibilidad de micobacterias a antibi ticos se basa en el mismo principio b sico empleado en el m todo convencional excepto que se utiliza un medio l quido y en lugar de realizar el recuento de colonias despu s de 3 semanas aproximadamente
66. h Empfindlich VERFAHRENSBESCHRANKUNGEN Variationen bei der Vorbereitung eines Inokulums beeintrachtigen das Ergebnis der Empfindlichkeitstests besonders bei Vorhandensein von gro en Klumpen und nicht ordnungsgem er Verd nnung im Verh ltnis 1 100 f r das Kontrollflaschchen Wenn das Wachstum im Kontrollfl schchen unbefriedigend ist sollte der Test wiederholt werden Kontamination Kontamination wahrend der Inokulation in das BACTEC 12B Flaschchen muss vermieden werden Eine kontaminierte Probe ergibt einen positiven Wert ohne klinische Relevanz Eine entsprechende Beurteilung muss vom Anwender auf der Basis von Faktoren wie z B Art des isolierten Organismus Auftreten des gleichen Organismus in mehreren Kulturen Anamnese des Patienten geeignete berpr fung der Ger te usw vorgenommen werden Kontamination kann auch durch unsachgem e Wartung der BACTEC Kan len und Schl uche durch unzureichende Reinigung des Septums oder durch St rungen im BACTEC Kan lenheizer verursacht werden vgl Betriebs und Wartungsanleitung der TB Haube Der Anwender sollte sich bewusst sein dass unterschiedliche Ergebnisse beim Nachweis bestimmter Keime auftreten k nnen Dies ist auf die Natur der in Kulturmedien enthaltenen biologischen Stoffe und auf die nat rliche Variabilit t von Mikroorganismen zur ckzuf hren ZU ERWARTENDE WERTE Bei Rifampin Streptomycin und Isoniazid gibt es blicherweise innerhalb von wenigen
67. h als Folge des mikrobiellen Stoffwechsels m glicherweise angesammelte Gas abzulassen Aseptische Techniken und anerkannte Verfahren zum Schutz vor mikrobieller Gef hrdung m ssen zu allen Zeiten befolgt werden Die Arbeitsschritte m ssen an einer geeigneten biologischen Sicherheitswerkbank in einem Raum mit einem entsprechenden Bel ftungssystem in Anlehnung an die Empfehlungen der CDC U S Centers for Disease Control and Prevention durchgef hrt werden W hrend der Handhabung von Proben und Kulturen potenziell pathogener Mikroorganismen sollte Schutzkleidung einschlieBlich Kittel Handschuhe und Gesichtsmaske getragen werden Befolgen Sie bitte die Empfehlungen der CDC und der OSHA U S Occupational Safety and Health Administration Um potenzielle Sickerverluste bei der Inokulation von Proben so weit wie m glich auszuschlieBen sollten Spritzen mit fest eingesetzten Kan len oder mit fest verschlossenem Luer Lok Kegel verwendet werden Die f r herk mmliche Empfindlichkeitstests verwendeten Arzneimittelkonzentrationen k nnen von Labor zu Labor unterschiedlich sein Es ist u erst wichtig die gleiche Konzentration einer Testarznei f r den BACTEC Empfindlichkeitstest zu verwenden wenn die beiden Methoden miteinander verglichen werden sollen Die Zugabe der korrekten Menge einer Testarznei zum Kulturmedium ist ein ausschlaggebender Schritt beim Empfindlichkeitstest Aufbewahrung BACTEC S I R E Arzneimittelfl schchen m ssen an einem k
68. icos BACTEC S I R E contienen los siguientes ingredientes reactivos Agentes antimicrobianos liofilizados cada frasco Esreptomicina 1 2 mg Isoniazida Rifampicina Etambutol Advertencias y precauciones Para uso diagn stico in vitro Este producto contiene goma natural seca En las muestras cl nicas puede haber microorganismos pat genos como los virus de la hepatitis y el virus de la inmunodeficiencia humana Para la manipulaci n de todos los elementos contaminados con sangre u otros l quidos corporales deben seguirse las Precauciones est ndar 25 y las directrices del centro Se debe examinar cada frasco antes de usarlo para ver si presenta indicios de dafio deterioro o contaminaci n NO UTILIZAR ning n frasco que presente indicios de contaminaci n Los frascos que muestren indicios de dafio deben ser desechados En raras ocasiones el cuello del frasco puede estar rajado y puede romperse al quitar el tap n a presi n o al manipular el frasco Al realizar una toma de muestras con frascos de cultivo de medio 12B positivos para realizar subcultivo tinci n etc es necesario liberar el gas que pueda haberse acumulado debido al metabolismo microbiano En todo momento deben seguirse las t cnicas as pticas y los procedimientos establecidos contra riesgos microbiol gicos Los procedimientos deben realizarse en una cabina de seguridad biol gica adecuada en una habitaci n con un sistema de ventilaci n adecuado conforme a
69. instrumento BACTEC 460TB para estabelecer uma atmosfera de CO no frasco e excluir os frascos com um IC igual ou superior a 20 Prepara o do in culo bacteriano Para preparar o teste de sensibilidade s o utilizadas culturas de M tuberculosis em crescimento em 12B Medium ou em meios s lidos 19 Quando um frasco BACTEC 12B tiver uma leitura 2 10 volte a incub lo e teste diariamente Consulte a tabela seguinte que indica quando deve ser executado o teste de sensibilidade LEITURA DI RIA ACC O IC 300 499 Incube mais um dia e em seguida execute o teste IC 500 799 Execute o teste no mesmo dia IC 2 800 Dilua de 1 2 com 1 mL de l quido de diluic o execute o teste Se desejar atrasar o teste de sensibilidade refrigere o frasco 12B Nesta altura o teste de sensibilidade deve ser executado no prazo de uma semana Prepare um in culo bacteriano uniforme retirando meio para uma seringa de utilizac o nica com uma agulha fixa e expelindo novamente o meio para o frasco v rias vezes sem retirar a agulha do septo do frasco Este in culo utilizado directamente para o teste de sensibilidade ao f rmaco Cultura em meio s lido Fa a uma suspens o homog nea de v rias col nias em meio s lido A cultura n o deve ter mais de 4 a 5 semanas Ajuste a turvac o da suspens o para um padr o no 1 0 de McFarland caso esteja a utilizar um plano diario ou para 0 5 caso esteja a utilizar um plano que n o inclua fins de semana
70. ionizada est ril e ap s a diluic o apropriada s o as seguintes Factor de Qtd adicionada Concentrag o final F rmaco Reconstitu do diluic o Concentrac o mL ao 12B Medium no 12B Medium mL Estreptomicina 5mL 240 ug 0 1 mL 6 0 ug Estreptomicina 5mL 1 3 dilution 80 ug 0 1 mL 2 0 ug Isoniazid 5mL Aug 0 1 mL 0 1 ug Rifampicina 5mL 80 ug 0 1 mL 2 0 ug Etambutol 5mL 300 ug 0 1 mL 7 5 ug Etambutol 5mL 1 3 dilution 100 ug 0 1 mL 2 5 ug Equivalente s concentrac es cr ticas recomendadas pelo CDC Na secc o IV do BACTEC 460TB Product and Procedure Manual encontram se exemplos de concentrac es equivalentes em meios convencionais para f rmacos prim rios e secund rios Se for necess ria alguma diluic o para obter a concentrac o do f rmaco desejada ver acima dilua assepticamente em agua destilada desionizada est ril Agite bem Preparac o do meio dos f rmacos Utilize uma soluc o do f rmaco rec m preparada ou descongele um tubo com soluc o do f rmaco de reserva congelada Utilizando uma seringa de utilizac o nica de 1 mL adicione exactamente 0 1 mL a um frasco de BACTEC 12B Medium de 4 mL Utilize uma seringa diferente para cada f rmaco Deve ter cuidado para que n o existam bolhas de ar na seringa e n o deve utilizar a ltima fracc o de 0 1 mL da seringa Todos os frascos de 12B Medium utilizados no teste devem ser previamente testados num
71. ison of detection identification and drug susceptibility testing of mycobacteria by using the BACTEC radiometric method and conventional methods Abstract C260 A S M Annual Meeting Las Vegas 1985 11 Roberts G D et al Evaluation of BACTEC radiometric method for recovery of mycobacteria and drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis from acid fast smear positive specimens J Clin Microbiol 18 689 696 1983 12 Siddiqi S H et al Evaluation of a rapid radiometric method for drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis J Clin Microbiol 1981 13 908 912 13 Siddiqi S H et al Interlaboratory drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis by a radiometric procedure and two conventional methods J Clin Microbiol 1985 22 919 923 14 Vincke G et al Rapid susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis by a radiometric technique J Antimicrobiol Chemother 1982 10 351 354 15 Snider Jr D E et al Rapid drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis Am Rev Respir Dis 123 402 406 1981 16 Good R C et al Reproducibility of drug susceptibility tests with M tuberculosis Abstract U5 A S M Annual Meeting St Louis MO 1984 17 Siddiqi S H et al Accuracy and reproducibility of the BACTEC drug susceptibility testing of M tuberculosis Abstract 1041 1 C A A C Annual Meeting Las Vegas NV 1983 18 Terrand J J et al Evaluation of the BACTEC radiome
72. izados O desempenho dos f rmacos pode ser verificado executando testes de sensibilidade com ou mais microrganismos de controlo de qualidade sempre que executar um teste de sensibilidade No ATCC Estirpe 27294 M tuberculosis H37Rv sens vel aos f rmacos S I R E 35820 M tuberculosis H37Rv resistente estreptomicina 35822 M tuberculosis H37Rv resistente isoniazida 35837 M tuberculosis H37Rv resistente ao etambutol 35838 M tuberculosis H37Rv resistente rifampicina A estirpe ATCC 27294 H37Rv deve ser sempre inclu da e deve ser sempre sens vel Se esta cultura demonstrar resist ncia a algum f rmaco ou se o controlo do teste de sensibilidade de alguma cultura n o crescer no prazo de 12 dias n o apresente os resultados Repita o teste Como parte do plano de manutenc o diario devem ser executados no instrumento BACTEC Frascos de teste do desempenho BACTEC Performance Test Kit Caso sejam obtidas leituras baixas mas os Frascos de teste do desempenho tenham apresentado um resultado correcto poder o existir problemas do instrumento consulte o folheto informativo do BACTEC PTK PP046JAA Os requisitos do controlo de qualidade devem ser efectuados de acordo com os regulamentos ou requisitos de acreditac o europeus e ou nacionais aplic veis e com os procedimentos padrao de controlo de qualidade do seu laborat rio recomendado que o utilizador consulte as normas do CLSI anteriormente NCCLS e os regulamentos da CLIA que
73. l inoculum les mesures initiales peuvent tre inf rieures Valeurs quotidiennes d IC Jour Contr le Streptomycine Isoniazide Rifampicine Ethambutol 1 5 40 50 38 76 2 11 20 100 19 100 3 24 12 250 10 100 4 65 14 500 12 91 AIC 41 2 250 2 9 R sultats Sensible R sistant Sensible Sensible LIMITES DE LA PROCEDURE Des variations dans la pr paration de l inoculum ont une influence sur les r sultats des tests de sensibilit notamment la pr sence d agr gats de grande taille ou une dilution au 1 100 incorrecte du flacon de contr le Si le contr le de croissance ne donne pas les r sultats escompt s il faut recommencer le test Contamination Veiller ne pas contaminer le flacon BACTEC 12B pendant l ensemencement Un chantillon contamin donnera une lecture positive mais n indiquera pas un chantillon valeur clinique Cette d termination doit tre effectu e par l utilisateur sur la base de facteurs comme le type de microorganisme r cup r l apparition du m me microorganisme dans plusieurs cultures les ant c dents du malade les contr les appropri s des quipements etc Cette contamination peut galement provenir d un entretien insuffisant des aiguilles et des tubulures BACTEC d un bouchon mal nettoy ou d un mauvais fonctionnement du syst me de chauffage des aiguilles BACTEC consulter le Manuel d utilisation et d entretien de la hotte B K En raison de la natur
74. las normas de los CDC U S Centers for Disease Control and Prevention Utilizar una bata m scara y guantes protectores adecuados al manipular las muestras y los cultivos de posibles agentes pat genos Seguir las recomendaciones de los CDC y OSHA U S Occupational Health and Safety Administration Para reducir a un m nimo la posibilidad de fugas durante la inoculaci n usar jeringas de aguja fija o puntas Luer Lok fijadas firmemente Las concentraciones de antibi tico utilizadas en los an lisis de sensibilidad convencionales pueden variar de un laboratorio a otro Es muy importante seleccionar una concentraci n equivalente de un antibi tico de prueba para el an lisis de sensibilidad BACTEC si se ha de realizar una comparaci n de los resultados obtenidos mediante los dos m todos La adici n de una cantidad exacta de un antibi tico de prueba en el medio de cultivo es un paso clave en el an lisis de sensibilidad Instrucciones para el almacenamiento Los frascos con antibi ticos BACTEC S I R E deben almacenarse en un lugar fresco 2 8 C y seco sin luz solar directa Una vez reconstituidos los frascos deben almacenarse durante no m s de 3 d as a 2 8 C o congelados a 20 C o a una temperatura inferior durante un m ximo de seis meses Congelar en al cuotas peque as No congelar y descongelar repetidas veces La fecha de caducidad se aplica al frasco liofilizado sin abrir almacenado de la manera recomendada EXTRACCION DE
75. m raras ocasi es o vidro do frasco poder estar rachado e o gargalo poder partir se durante a remo o da tampa de encaixe ou durante a manipula o Antes da colheita de amostras de frascos de cultura 12B Medium positivos para repicagem colora o etc necess rio libertar o g s que se poder ter acumulado devido ao metabolismo microbiano Utilizar sempre t cnicas ass pticas e cumprir as precau es estabelecidas contra perigos microbiol gicos Os procedimentos devem ser efectuados numa c mara de seguran a biol gica adequada numa sala com sistema de ventila o apropriado conforme recomendado pelo CDC Utilizar bata m scara e luvas protectoras adequadas quando manusear as amostras e culturas de agentes potencialmente patog nicos Seguir as recomenda es do CDC e OSHA Para minimizar a possibilidade de fugas durante a inocula o utilizar seringas com agulhas fixas ou pontas da marca Luer Lok bem apertadas As concentra es dos f rmacos utilizados no teste de sensibilidade convencional poder o variar de laborat rio para laborat rio A selec o de uma concentra o equivalente de um f rmaco de teste extremamente importante para o teste de sensibilidade BACTEC caso se pretenda comparar os resultados obtidos pelos dois m todos A adi o de uma quantidade exacta do f rmaco de teste ao meio de cultura um passo cr tico no teste de sensibilidade Instru es de armazenamento Os frascos de f rmacos BACTEC
76. menesio pabaiga AAAA MM DD AAAA MM MM slutten av m neden RRRR MM DD RRRR MM MM koniec miesiaca AAAA MM DD AAAA MM MM fim do m s RRRR MM DD RRRR MM MM koniec mesiaca aaaa mm dd aaaa mm mm fin del mes AAAA MM DD AAAA MM MM slutet p m naden FTTT MM AI TTTT MM MM kpas Ha Meceua AAAA LL ZZ AAAA LL LL sf rsitul lunii YYYY AA GG YYYY AA AA ay n sonu GGGG MM DD GGGG MM MM kraj meseca FTTT MM AJ TTTT MM MM koneu mecaua MO0IOIOK AA KK HOKOKOK AA AA a ablH COHbI GGGG MM DD GGGG MM MM kraj mjeseca Catalog number Katalogov slo Katalognummer Catalogusnummer Kataloogi number Tuotenumero Num ro catalogue Bestellnummer Api8u c karad you Katal gussz m Numero di catalogo Katalogo numeris Numer katalogowy N mero do cat logo Katal gov slo N mero de cat logo KaranoxeH Homep Num r de catalog Katalog numaras Katalo ki broj Homep no karanory Karanor Hemipi Authorized Representative in the European Community Autorizovany z stupce pro Evropskou unii Autoriseret repraesentant i EU Erkend vertegenwoordiger in de Europese Unie Volitatud esindaja Euroopa N ukogus Valtuutettu edustaja Euroopan yhteis ss Repr sentant agr pour la C E E Autorisierte EG Vertretung E oucio ornp vog avrimrp ourroc oTnv Eupwraikr Koiv rnra Hivatalos k pviselet az Eur pai Uni ban Rappre
77. mpfindlichkeitstests und Diagnoseleistungsindizes erzielt mit dem BACTEC 460TB System im Vergleich zur Agarverd nnungsmethode basierend auf 47 Isolaten von M tuberculosis Anz der Isolate mit spezifischen Ergebnissen Diagnoseleistungsindizes Arzneimittel Beide Beide Agar E Agar R Spezifitat Sensitivitat Methode amp Arzneimit E R BACTEC R BACTEC E 96 96 telkonzentration STR BACTEC 2 0 ug mL 36 9 0 2 100 81 8 INH BACTEC 0 1 ug mL 16 29 1 1 94 1 96 7 RMP BACTEC 2 0 ug mL 30 14 1 2 96 8 87 5 EMB BACTEC 2 0 ug mL 35 2 4 6 89 7 25 Bei der Agarverd nnungsmethode wurden die Arzneimittel mit folgenden Konzentrationen getestet STR 2 g mL INH 0 2 pg mL RMP 1 0 ug mL und EMB 5 pg mL tE empfindlich R resistent Eine Studie von Bemer et al verglich das BACTEC 460TB S I R E System mit dem BACTEC MGIT 960 5 1 R E System Einhundertzehn 110 St mme wurden getestet und eine Gesamt bereinstimmung von 93 5 festgestellt Die Umschlagzeiten betrugen zwischen 4 und 10 Tagen mit BACTEC 460TB S I R E bei einem Durchschnitt von 7 Tagen 22 Tabelle 2 Ergebnisse der Arzneimittel Empfindlichkeitstests mit klinischen M tuberculosis St mmen erzielt mit BACTEC MGIT 960 und dem BACTEC 460TB System Anz der Ergebnisse mit folgenden Charakteristika Arzneimittel Anz Tests E bei beiden R beim MGIT 960 E beim MGIT 960 R bei beiden bereinstim Konz in pg mL Tests E beim 460TB R beim 460TB Tests mung
78. msindex dem so genannten Growth Index GI beziffern Wenn dem Medium ein Arzneimittel gegen Tuberkulose zugesetzt wird wird das Wachstum gehemmt wenn die Testorganismen empfindlich sind Diese Hemmung l sst sich entweder durch einen Abfall oder einen sehr geringen Anstieg des t glichen Gl Werts im Vergleich zur Kontrolle ermitteln Wenn die Organismen jedoch resistent sind ist die Hemmung nur gering oder gar nicht vorhanden Um die 1 ige Resistenzproportion zu ermitteln ist die Konzentration des im Kontrollfl schchen enthaltenen bakteriellen Inokulums hundert Mal geringer als die im Fl schchen mit dem Arzneimittel Die Arzneimittel und Kontrollfl schchen werden t glich nach der Inokulation getestet Die Anstiegsrate des GI Wertes oder der nderungsgrad gegen ber dem vorherigen Tag wird als Delta Gl A Gl bezeichnet und liefert einen Vergleich zwischen dem Kontrollfl schchen und den Fl schchen mit den Arzneimitteln Wenn der t gliche Gl Wert im Arzneimittelfl schchen gleich dem oder gr er als der Anstieg im Kontrollfl schchen ist ist davon auszugehen dass die Testorganismen resistent gegen ber der Arznei sind Bei einer empfindlichen Population ist der t gliche Anstieg des Gl Wertes h her als der des Arzneimittelfl schchens Wenn beispielsweise 1 der mykobakteriellen Population resistent gegen ber Isoniazid INH ist w rden 99 der Organismen durch INH gehemmt und nur 1 w rden im Arzneimittelfl schchen wachsen Die Wa
79. n ndice de crecimiento de 30 o m s los resultados deben interpretarse de la manera siguiente Si el ndice de crecimiento A es menor en el frasco de antibi tico que en el de control la poblaci n es sensible de lo contrario es resistente GI A Control gt GI A antibi tico sensible GI A Control GI A antibi tico resistente GI A Control GI A antibi tico dudoso La tabla siguiente representa los datos obtenidos de M tuberculosis cultivada en medio s lido y analizada con el m todo de sensibilidad BACTEC Se obtienen datos similares a partir de M tuberculosis cultivada inicialmente en medio 12B Sin embargo debido a que hay menos c lulas en el in culo las lecturas iniciales pueden ser inferiores Valores diarios del GI D a Control Estreptomicina Isoniazida Rifampicina Etambutol 1 5 40 50 38 76 2 11 20 100 19 100 3 24 12 250 10 100 4 65 14 500 12 91 GIA 41 2 250 2 9 Resultados Sensible Resistente Sensible Sensible LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO Las variaciones en la preparaci n del in culo afectan el resultado de las pruebas de sensibilidad en especial la presencia de grumos grandes y la diluci n incorrecta de 1 100 para el frasco de control Si el crecimiento en el frasco de control no es satisfactorio debe repetirse la prueba Contaminaci n Se deben extremar las precauciones para evitar contaminar la muestra durante la inoculaci n en el frasco BAC
80. n Monday skipping the weekend The vials should be tested at least on Monday Tuesday and Wednesday minimum of 5 days from the inoculation day to a maximum of 12 days approximately at the same time each day x 2 h Direct Drug Susceptibility Test If a specimen is positive for AFB on a smear it usually contains enough mycobacteria to perform a drug susceptibility test in 12B Medium The procedure is basically the same as in indirect susceptibility The procedure differences are as follows After specimen processing inoculate the culture media and make a smear for AFB staining Refrigerate the remainder of the specimen concentrate Examine the AFB smear If it is positive with the Ziehl Neelsen or fluorochrome method set up the susceptibility test the same day Add BACTEC PANTA to all of the drug containing and drug free control vials Add 0 1 mL of well mixed specimen concentrate into the drug containing vials Dilute the specimen concentrate 1 10 and inoculate 0 1 mL into the control vial Incubate at 37 C and test the vials on the BACTEC 460TB System instrument every 2 to 3 days for a maximum of 21 days With highly smear positive specimens test daily Interpret the results when the GI of the control is 20 or more Confirm the results with an indirect susceptibility test Report the results once the identification of M tuberculosis is confirmed by a BACTEC NAP test or other tests Quality Control DO NOT USE vials past their expiration date DO
81. na mediante BACTEC e metodica della proporzione N di risultati Farmaco Sistema BACTEC MOP N di isolati Ethambutol S S 63 R S R 3 Streptomicina S 59 R R 14 R E 1 tAbbreviazioni MOP metodica delle proporzioni S sensibile R resistente In uno studio separato Bergmann e Woods ha esaminato anche i farmaci BACTEC 460TB S I R E isoniazide e streptomicina comparandoli con la metodica delle proporzioni 24 Tabella 4 Risultati dei test di sensibilit risolti per isolati clinici di M tuberculosis mediante metodica delle proporzioni BACTEC 460TB N di isolati con risultati mediante Farmaco e MOP BACTEC risultato 460TB Isoniazide basso5 Sensibile 16 16 Resistente 4 4 Isoniazide alto Sensibile 19 18 Resistente 1 2 Rifampicina Sensibile 17 17 Resistente 3 3 aMOP metodica delle proporzioni Basso 0 2 ug mL per la metodica delle proporzioni e 0 1 pg mL per BACTEC 460TB Alto 1 0 ug mL per la metodica delle proporzioni e 0 4 ug mL per BACTEC 460TB DISPONIBILIT N di cat Descrizione 442102 BACTEC S I R E Drug Kit 2 flaconi di streptomicina liofilizzata 2 flaconi di isoniazide liofilizzata 2 flaconi di rifampicina liofilizzata 2 flaconi di etambutolo liofilizzati 442146 BACTEC Isoniazid 1 flacone di isoniazide liofilizzata 442004 BACTEC 12B Medium 4 mL 100 per cartone BIBLIOGRAFIA Vedere References nel testo inglese amp BD BACTEC S I R E Drug Kit
82. oben die Kulturmedien inokulieren und einen Ausstrich zur AFB Farbung anfertigen Das restliche Probenkonzentrat im K hlschrank aufbewahren Den AFB Ausstrich untersuchen Ist das Ergebnis mit der Ziehl Neelsen oder fluorochromen Methode positiv den Empfindlich keitstest f r den gleichen Tag ansetzen BACTEC PANTA zu allen arzneimittelhaltigen und arzneimittelfreien Kontroll Fl schchen hinzuf gen Den Fl schchen mit dem Arzneimittel 0 1 mL des gut durchmischen Probenkonzentrats hinzuf gen Das Probenkonzentrat im Verh ltnis 1 10 verd nnen und 0 1 mL in das Kontrollfl schchen inokulieren Bei 37 C inkubieren und die Fl schchen alle 2 3 Tage f r die Dauer von max 21 Tagen auf dem BACTEC 460TB Ger tesystem testen Bei stark ausstrichpositiven Proben t glich testen Die Ergebnisse interpretieren wenn der Gl Wert der Kontrolle 20 oder mehr betr gt Die Ergebnisse mit einem indirekten Empfindlichkeitstest best tigen Die Ergebnisse dokumentieren wenn der Nachweis von M tuberculosis durch einen BACTEC NAP Test oder andere Tests bestatigt wurde Qualit tskontrolle Die Fl schchen D RFEN NICHT nach dem Verfallsdatum verwendet werden Fl schchen die Spr nge oder Besch digungen aufweisen D RFEN NICHT verwendet werden Fl schchen ordnungsgem entsorgen Qualit tskontrollzertifikate werden mit jedem S I R E Arzneimittelkit geliefert Diese Zertifikate geben die f r diese Art von Produkt verwendeten Testorganismen an
83. of sterile distilled deionized water and after dilution as appropriate are as follows Dilution Qty added to Final Concentration Drug Reconstituted Factor Concentration mL 12B Medium in 12B Medium mL Streptomycin 5mL 240 ug 0 1 mL 6 0 ug Streptomycin 5mL 1 3 dilution 80 ug 0 1 mL 2 0 ug Isoniazid 5mL 4 ug 0 1 mL 0 1 ug Rifampin 5mL 80 ug 0 1 mL 2 0 ug Ethambutol 5mL 300 ug 0 1 mL 7 5 ug Ethambutol 5mL 1 3 dilution 100 ug 0 1 mL 2 5 ug Equivalent to the critical concentrations recommended by CDC Examples of conventional media equivalent concentrations for primary and secondary drugs are found in the BACTEC 460TB Product and Procedure Manual in Section IV If dilution is required to achieve the desired drug concentration see above aseptically dilute in sterile distilled deionized water Shake well Preparation of Drug Medium Use a freshly prepared drug solution or thaw a tube of frozen stock drug solution Using a 1 mL single use syringe add exactly 0 1 mL into a 4 mL BACTEC 12B Medium vial Use a separate syringe for each drug Care should be taken not to have any air bubbles in the syringe and the last 0 1 mL portion in the syringe should not be used All of the 12B Medium vials used in the test should be pre tested on a BACTEC 460TB instrument to establish a CO atmosphere in the vial and to screen out any vials with a GI of 20 or more Preparation of Bacterial
84. ofilizada 2 frascos de etambutol liofilizado 442146 BACTEC Isoniazid 1 frasco de isoniazida liofiizada 442004 BACTEC 12B Medium 4 mL 100 por caja BIBLIOGRAFIA Vedr References en el texto en ingl s 27 Manufacturer V robce Producent Fabrikant Tootja Valmistaja Fabricant Hersteller Kataokeuaotii Gy rt Ditta produttrice Gamintojas Producent Fabricante V robca Tillverkare l ipousBonuren Produc tor Uretici Proizvo a Tponssoantene Arkapyuibi Use by Spotfebujte do Anvendes for Houdbaar tot Kasutada enne Viimeink ytt p iv A utiliser avant Verwendbar bis Huepopnia Afffng Felhaszn lhat s g d tuma Usare entro Naudokite iki Brukes for Stosowa do Utilizar em Pou ite do Usar antes de Anv nd f re Manonsaaitre no A se utiliza pana la Son kullanma tarihi Upotrebiti do l tcnonbsosarb no neitin na ganaHyra Upotrijebiti do YYYY MM DD YYYY MM MM z end of month RRRR MM DD RRRR MM MM konec m s ce AAAA MM DD AAAA MM MM slutning af m ned JJJJ MM DD JJJJ MM MM einde maand AAAA KK PP AAAA KK KK kuu l pp VVVV KK PP VVVV KK kuukauden loppuun menness AAAA MM JJ AAAA MM MM fin du mois JJJJ MM TT JJJJ MM MM Monatsende EEEE MM HH EEEE MM MM t Aoc TOU priva EEEE HH NN EEEE HH HH h nap utols napja AAAA MN GG AAAA MM MM fine mese MMMM MM DD MMMM MM MM
85. olte inferiore a quello usato per il flacone contenente il farmaco I flaconi del farmaco e del controllo sono testati ogni giorno dopo l inoculo Si compara quindi la percentuale di aumento nel Gl o l entit della variazione rispetto a quella del giorno precedente chiamata delta A GI tra flacone di controllo e flaconi contenenti il farmaco Se l aumento del GI giornaliero del flacone del farmaco uguale o superiore a quello nel flacone di controllo i microrganismi testati sono considerati resistenti al farmaco In caso di popolazione sensibile l aumento del GI giornaliero per il controllo amp superiore a quello del flacone contenente il farmaco Per esempio se l 1 della popolazione micobatterica resistente all isoniazide INH il 99 dei microrganismi inibito da INH e nel flacone del farmaco cresce soltanto 1 La percentuale di crescita nel flacone del farmaco simile a quella nel flacone di controllo contenente un inoculo batterico originario pari soltanto a 1 100 di quello del flacone del farmaco REAGENTI I flaconi BACTEC S I R E Drug contengono i seguenti ingredienti attivi prima del trattamento Farmaci liofilizzati ogni flacone Streptomicina Isoniazide iii da til Rifampicina Etambutolo 14 Avvertenze e precauzioni Per uso diagnostico in vitro Questo prodotto contiene gomma naturale secca I campioni clinici possono contenere microrganismi patogeni inclusi i virus dell epatite e i virus dell immuno
86. ontrolo Teste durante 4 dias no m nimo ou at um m ximo de 12 dias Utilizando este plano de testes poder executar um teste de sensibilidade a f rmacos em qualquer dia da semana Plano que n o inclui fins de semana O procedimento semelhante ao plano de testes di rios acima descrito com as seguintes excep es a Agrupe todas as culturas positivas e execute os testes de sensibilidade apenas s sextas feiras Siga os procedimentos anteriormente descritos b Se for utilizado um frasco BACTEC positivo consulte a tabela acima Inicie os testes dos frascos inoculados s segundas feiras omitindo os fins de semana Os frascos devem ser testados pelo menos s segundas ter as e quartas feiras m nimo de 5 dias desde o dia de inocula o at um m ximo de 12 dias aproximadamente mesma hora 2 h Teste directo de sensibilidade a f rmacos Se uma amostra for positiva para AFB num esfrega o normalmente conter micobact rias em n mero suficiente para a execu o de um teste de sensibilidade a f rmacos no 12B Medium O procedimento basicamente o mesmo procedimento indicado para a sensibilidade indirecta As diferen as entre procedimentos s o as seguintes Ap s o processamento da amostra inocule o meio de cultura e fa a um esfrega o para colora o AFB Refrigere o restante concentrado da amostra Observe o esfrega o AFB Se for positivo com a colora o de Ziehl Neelsen ou o m todo de flurocromo execute o
87. or a very small increase of the daily GI as compared to the control However if the organisms are resistant little or no suppression occurs To determine the 196 proportion of resistance the bacterial inoculum used in the control vial is one hundred fold less than that used for the drug containing vial The drug and control vials are tested daily after inoculation The rate of increase in the GI or the amount of change over that of the previous day called delta A Gl is compared between the control vial and the vials containing drugs If the daily Gl increase in the drug vial is equal to or greater than that in the control vial the test organisms are considered resistant to the drug For a susceptible population the daily Gl increase for the control would be higher than that of the drug vial For example if 1 of the mycobacterial population is resistant to isoniazid INH then 99 of the organisms would be inhibited by INH and only 1 will grow in the drug vial The growth rate in the drug vial would be similar to the growth rate in the control vial in which the original bacterial inoculum was only 1 100 of that in the drug vial REAGENTS The BACTEC S l R E Drug vials contain the following active ingredients prior to processing Lyophilized antimicrobials each vial A A deh eese hotte ed doti e di ili ssa 1 2 mg Isoniazid 0 02 mg Rifampin 0 4 mg Ethambutol ile LE al lia 1 5 mg Warnings and Precautions For in vitro Diagnos
88. ory Committee U S Department of Health and Human Services Centers for Disease Control and Prevention Guideline for isolation precautions in hospitals Infect Control Hospital Epidemiol 17 53 80 4 U S Department of Health and Human Services 1999 Biosafety in microbiological and biomedical laboratories HHS Publication CDC 4th ed U S Government Printing Office Washington D C 5 Directive 2000 54 EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection of workers from risks related to exposure to biological agents at work seventh individual directive within the meaning of Article 16 1 of Directive 89 391 EEC Official Journal L262 17 10 2000 p 0021 0045 6 Kent PT et al Public health mycobacteriology a guide for the level III laboratory Centers for Disease Control Division of Laboratory Training and Consultation Atlanta GA 1985 7 Hawkins J E Non weekend schedule for BACTEC susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis J Clin Microbiol 23 934 937 1986 Libonati J P et al Identification and direct drug susceptibility testing of mycobacteria by the radiometric method Abstract C300 A S M Annual Meeting St Louis MO 1984 9 Stager C E et al Identification and susceptibility testing of M tuberculosis by direct inoculation of smear positive specimens into BACTEC 12A media Abstract C301 A S M Annual Meeting St Louis MO 1984 10 Bannister E R et al Compar
89. os Ambos Agar S Agar R Especificidade Sensibilidade concentra o do f rmaco s R BACTEC R BACTEC S 9 STR BACTEC 2 0 ug mL 36 9 0 2 100 81 8 INH BACTEC 0 1 ug mL 16 29 1 1 94 1 96 7 RMP BACTEC 2 0 ug mL 30 14 1 2 96 8 87 5 EMB BACTEC 2 0 ug mL 35 2 4 6 89 7 25 No m todo de dilui o em gar os f rmacos foram testados nas seguintes concentra es STR 2 ug mL INH 0 2 pg mL RMP 1 0 g mL e EMB 5 pg mL tS sens vel R resistente 21 Um estudo realizado por Bemer et al comparou o sistema BACTEC 460TB S I R E com o sistema BACTEC MIGIT 960 S I R E Foram testas cento e dez estirpes com uma concord ncia global de 93 5 Os tempos de resposta situaram se entre 4 0 e 10 0 dias para o BACTEC 460TB S I R E com uma mediana de 7 0 dias 22 Tabela 2 Resultados do teste de sensibilidade a f rmacos de estirpes cl nicas de M tuberculosis conforme determinado pelos sistemas BACTEC MGIT 960 E BACTEC 460 TB No de resultados que foram F rmaco No de testes S em ambos R no MGIT 960 S no MGIT 960 R em ambos Concord ncia conc em pg mL OS testes S no 460 TB R no 460 TB OS testes 96 INH 0 1 110 81 4 25 96 4 INH 0 4 29 5 3 21 89 7 RIF 2 0 110 92 1 17 99 1 EMB 2 5 110 93 3 1 13 96 4 EMB 7 5 17 7 3 7 82 4 STR 2 0 110 76 9 25 91 8 STR 6 0 34 12 10 12 70 6 Total de testes 520 366 33 1 120 93 5 ts sensivel R resistente Um estudo realizado por Bergmann e Woods comparou os
90. pment trays may be used as racks Wearing rubber gloves and working in a biological safety cabinet inoculate 0 1 mL of the bacterial suspension into each of the BACTEC 12B Medium vials containing a drug Use a disposable tuberculin syringe with a permanently attached needle for this inoculation For the control vial do not inoculate the suspension directly but first dilute 1 100 by transferring 0 1 mL of the suspension into 9 9 mL of special Diluting Fluid After mixing thoroughly inverting at least 10 times inoculate 0 1 mL of this dilution into the control 12B Medium vial without a drug Swab the top of each inoculated vial with a gauze pad soaked with an appropriate disinfectant followed by cleaning with a 7096 alcohol swab Incubate at 37 C 1 C Reading Schedule Daily Testing Schedule Test the vials daily including weekends and holidays at approximately the same time each day 2 h ona BACTEC 460TB until a Gl of 30 or more is achieved in the control vial Test for a minimum of 4 days or a maximum of 12 days Using this testing schedule a drug susceptibility test can be set up on any day of the week Non Weekend Schedule The procedure is similar to the daily testing schedule discussed above with the following exceptions a Batch all positive cultures and set up susceptibility tests on Friday only Follow the procedures described earlier b If a positive BACTEC vial is used see chart above Start testing inoculated vials o
91. portionsmethode bGering 0 2 pg mL bei der Proportionsmethode und 0 1 pg mL bei BACTEC 460TB Hoch 1 0 pg mL bei der Proportionsmethode und 0 4 pg mL bei BACTEC 460TB LIEFERBARE PRODUKTE Best Nr Beschreibung 442102 BACTEC S I R E Drug Kit 2 Fl schchen lyophilisiertes Streptomycin 2 Fl schchen lyophilisiertes Isoniazid 2 Fl schchen lyophilisiertes Rifampin 2 Flaschchen lyophilisiertes Ethambutol 442146 BACTEC Isoniazid 1 Flaschchen lyophilisiertes Isoniazid 442004 BACTEC 12B Medium 4 mL 100 pro Karton LITERATURNACHWEIS S Reference im englischen Text BD BACTEC S I R E Drug Kit USO PREVISTO BACTEC S I R E Drug Kit kit farmaci BACTEC S l R E contiene farmaci da usare con BACTEC 12B Medium terreno BACTEC 12B nei test di Mycobacterium tuberculosis ed amp destinato principalmente all uso con lo strumento BACTEC 460TB Italiano I farmaci BACTEC S I R E streptomicina isoniazide rifampicina ed etambutolo sono raccomandati come additivi del terreno di coltura BACTEC 12B per i test qualitativi di sensibilit di M tuberculosis da cultura SOMMARIO E SPIEGAZIONE La procedura BACTEC per i test di sensibilit ai farmaci dei micobatteri si basa sullo stesso principio di base adottato nella metodica tradizionale salvo che viene usato un terreno liquido e anzich contare le colonie dopo circa 3 settimane la crescita viene monitorata con metodo radiometrico e i risultati sono refertabili entro 4
92. que avec 0 1 mL de cette dilution Frotter le dessus de chaque flacon ensemenc avec une compresse imbib e d un d sinfectant appropri puis nettoyer avec un tampon imbib d alcool 70 96 Incuber 37 1 C P riodicit de lecture Lecture quotidienne Tester quotidiennement les flacons y compris les week ends et les jours f ri s la m me heure environ chaque jour 2 h sur un systeme BACTEC 460TB jusqu obtention d un IC sup rieur ou gal 30 dans le flacon de contr le Tester pendant 4 jours au minimum et 12 jours au maximum Avec ce programme de test il est possible de pr parer un test de sensibilit n importe quel jour de la semaine Lecture hors week end La m thode employ e est similaire celle du programme de test quotidien pr sent ci dessus avec les exceptions suivantes 7 a Les cultures positives sont regroup es par lot et les tests de sensibilit sont pr par s le vendredi uniquement Suivre le mode op ratoire d crit plus haut b Si un flacon BACTEC positif est employ voir le tableau ci dessus Commencer tester les flacons ensemenc s le lundi en passant le week end Tester au minimum les flacons les lundis mardis et mercredis au moins 5 jours apr s l ensemencement jusqu 12 jours au maximum la m me heure environ chaque jour 2 h Antibiogramme direct Si un frottis de l chantillon avec coloration acido r sistante est positif il contient habituellement assez de my
93. ra cada concentraci n de antibi tico y uno para control Las bandejas de cart n que vinieron con el producto pueden utilizarse como gradilla Con guantes de goma y trabajando en un gabinete de seguridad biol gica inocular 0 1 mL de la suspensi n bacteriana en cada uno de los frascos del medio BACTEC 12B con un antibi tico Utilizar una jeringa con tuberculina desechable con aguja fija para esta inoculaci n Para el frasco de control no inocular la suspensi n directamente sino primero realizar una diluci n 1 100 transfiriendo 0 1 mL de la suspensi n en 9 9 mL de l quido diluyente especial Despu s de mezclar bien invertir al menos 10 veces inocular 0 1 mL de esta diluci n en el frasco de medio 12B de control sin un antibi tico Pasar sobre la parte superior de cada frasco inoculado una gasa embebida con un desinfectante apropiado y luego limpiar con una torunda con alcohol al 7096 Incubar a 37 C 1 C Cronograma de lectura Cronograma de an lisis diario Realizar el an lisis de los frascos diariamente incluidos fines de semana y festivos a la misma hora aproximada cada d a 2 h en un sistema BACTEC 460TB hasta lograr un indice de crecimiento de 30 o m s en el frasco de control Analizar durante un m nimo de 4 d as o un m ximo de 12 d as Mediante este cronograma de pruebas se puede definir una prueba de sensibilidad de antibi ticos en cualquier d a de la semana Cronograma sin incluir fines de semana El proce
94. sare i flaconi di farmaci S I R E che presentano umidit assenza di aspetto fioccoso Le performance dei farmaci possono essere controllate mediante test di sensibilit di uno o pi microrganismi per controllo di qualit con ogni test di sensibilit allestito N ATCC Ceppo 27294 M tuberculosis H37Rv sensibile ai farmaci S I R E 35820 M tuberculosis H37Rv streptomicino resistente 35822 M tuberculosis H37Rv isoniazide resistente 35837 M tuberculosis H37Rv etambutolo resistente 35838 M tuberculosis H37Rv rifampicino resistente ATCC 27294 H37Rv deve essere sempre incluso e risultare sempre sensibile Se questa coltura presenta resistenza a un farmaco o il controllo del test di sensibilit di una coltura non cresce entro 12 giorni non refertare i risultati Ripetere il test Nell ambito del programma di manutenzione giornaliera testare i flaconi per test della performance kit per test della performance BACTEC con lo strumento BACTEC Se si ottengono letture basse ma i flaconi per test della performance sono stati testati correttamente e possibile che vi sia qualche problema allo strumento vedere il foglietto illustrativo di BACTEC PTK PP046JAA Le procedure prescritte per il controllo di qualit devono essere effettuate in conformit alle norme vigenti o ai requisiti di accreditazione e alla prassi di controllo di qualit del laboratorio specifico Per una guida alla prassi di controllo di qualit appropriata si consiglia
95. se controla el crecimiento mediante un sistema radiom trico y se obtienen resultados notificables dentro de los 4 12 d as El an lisis de sensibilidad de antibi tico BACTEC se determina mediante la siguiente versi n modificada del m todo de proporci n convencional La proporci n cr tica de la resistencia se determina como el 196 para todos los antibi ticos antituberculosos Esto significa que si el 1 o m s de la poblaci n micobacteriana de prueba es resistente el cultivo se considera resistente para prop sitos de informe de laboratorio La resistencia se determina comparando la velocidad de crecimiento en el frasco de control y los frascos de medio 12B que contienen el antibi tico de prueba PRINCIPIOS DEL PROCEDIMIENTO El principio b sico del ensayo de sensibilidad radiom trico BACTEC para micobacterias es similar al utilizado en el procedimiento de aislamiento primario Cuando se cultivan micobacterias en el medio 7H12 que contiene sustrato 14C utilizan el sustrato y se produce 14CO La cantidad de 4CO detectada refleja la velocidad y la cantidad de crecimiento que ocurre en el frasco y se expresa en t rminos de indice de crecimiento growth index o GI Cuando se afiade un antibi tico antituberculoso al medio ocurre una supresi n de crecimiento si los organismos de prueba son sensibles Esta supresi n puede detectarse por una reducci n o un pequefio incremento del ndice de crecimiento diario en comparaci n con el control
96. sentante autorizzato nella Comunit europea Igaliotasis atstovas Europos Bendrijoje Autorisert representant i EU Autoryzowane przedstawicielstwo w Unii Europejskiej Representante autorizado na Uni o Europeia Autorizovany z stupca v Eur pskom spolocenstve Representante autorizado en la Comunidad Europea Auktoriserad representant i EU Oropusnpan npeacrasuren B EU Reprezentant autorizat in Uniunea European Avrupa Toplulu u Yetkili Temsilcisi Ovla eni predstavnik u Evropskoj zajednici YnonHomo4eHHbI NpegcTasuTenb B EBponeiickoM coobujectBe EBpona kaybimgactbirbiHfarel yekinetti ekin Autorizuirani predstavnik u EU In Vitro Diagnostic Medical Device L ka sk za zen ur en pro diagnostiku in vitro In vitro diagnostisk medicinsk anordning Medisch hulpmiddel voor in vitro diagnose In vitro diagnostika meditsiiniaparatuur L kinn llinen in vitro diagnostiikkalaite Dispositif m dical de diagnostic in vitro Medizinisches In vitro Diagnostikum In vitro Siayvworikh rarpikrj CUOKEU In vitro diagnosztikai orvosi eszk z Dispositivo medico diagnostico in vitro In vitro diagnostikos prietaisas In vitro diagnostisk medisinsk utstyr Urzadzenie medyczne do diagnostyki in vitro Dispositivo m dico para diagn stico in vitro Medic nska pom cka na diagnostiku in vitro Dispositivo m dico de diagn stico in vitro Medicinsk anordning f r in vitro diagnostik MeauunHcku ypen sa qnarHocTuk
97. spensione allo standard McFarland 1 0 in caso di applicazione del piano giornaliero e a 0 5 in caso di piano che non preveda il fine settimana Se la vitalit o l et della coltura incerta eseguire una subcoltura in un terreno 12B per ottenere una crescita fresca Inoculo Disporre i flaconi di terreno 12B in un rack ed apporre le etichette appropriate di solito controllo streptomicina isoniazide rifampicina ed etambutolo Sono necessari un flacone per ogni concentrazione di farmaco e uno per il controllo Come rack possibile usare i vassoi di cartone usati per la spedizione Indossando guanti di gomma e lavorando in una cappa di sicurezza biologica inoculare 0 1 mL di sospensione batterica in ogni flacone di terreno BACTEC 12B contenente un farmaco Per questo inoculo usare una siringa monouso per tubercolina con ago fisso 15 Per il flacone di controllo non inoculare la sospensione direttamente ma diluire prima 1 100 trasferendo 0 1 mL di sospensione in 9 9 mL di fluido di diluizione apposito Dopo aver mescolato accuratamente capovolgere almeno 10 volte inoculare 0 1 mL di questa diluizione nel flacone di terreno 12B di controllo senza farmaco Disinfettare la sommit di ogni flacone inoculato con una com pressa di garza inumidita con un disinfettante appropriato quindi pulire con un tampone imbevuto di alcol al 70 Incubare a 37 1 C Piano di lettura Piano di test giornaliero Testare i flaconi ogni giorno incl
98. spetto al tempo tendono a variare in relazione alla percentuale della popolazione sensibile Per il test diretto di sensibilit il successo complessivo e il tempo necessario per il referto dipendono dalla positivita dello striscio La letteratura documenta una media di 10 12 giorni con una buona concordanza con risultati di test tradizionali 8 9 PERFORMANCE Alcuni studi pubblicati hanno dimostrato che i risultati ottenuti con la metodica di sensibilit BACTEC equivalgono a quelli conseguiti con la tradizionale metodica proporzionale che impiega terreni 7H10 7H11 media o del rapporto di resistenza che utilizza il terreno all uovo Lowenstein Jensen 1 10 15 l accuratezza e la riproducibilit della metodica di sensibilit BACTEC stata anch essa valutata con risultati spesso ottenuti entro 4 6 giorni 16 20 Uno studio di Huang et al sulla comparazione del sistema BACTEC 460TB con la metodica della proporzioni ha dato i seguenti risultati 21 Tabella 1 Risultati dei test di sensibilit ai farmaci e indici di performance diagnostici determinati con il sistema BACTEC 460TB rispetto alla metodica di diluizione in agar basati su 47 isolati di M tuberculosis N di isolati con risultati specificit Indici di performance diagnostici Farmaco metodica Entrambi Entrambi Agar S Agar R Specificit Sensibilit e concentrazione S R BACTECR BACTEC S 96 96 farmaco STR BACTEC 2 0 ug mL 36 9 0 2 100 81 8 INH BACTEC 0 1 ug mL 16 29
99. t In a separate study Bergmann and Woods also looked at the BACTEC 460TB S I R E drugs isoniazid and streptomycin and compared them with the method of proportions 24 Table 4 Resolved susceptibility test results for clinical isolates of M tuberculosis by method of proportion BACTEC 460TB No of isolates with results bya Drug and MOP BACTEC result 460TB Isoniazid low Susceptible 16 16 Resistant 4 4 Isoniazid high Susceptible 19 18 Resistant 1 2 Rifampin Susceptible 17 17 Resistant 3 3 MOP method of proportions bLow 0 2 ug mL for method of proportion and 0 1 ug mL for BACTEC 460TB High 1 0 pg mL for method of proportion and 0 4 ug mL for BACTEC 460TB 4 AVAILABILITY Cat No Description 442102 BACTEC S I R E Drug Kit 2 vials lyophilized Streptomycin 2 vials lyophilized Isoniazid 2 vials lyophilized Rifampin 2 vials lyophilized Ethambutol 442146 BACTEC Isoniazid 1 vial lyophilized Isoniazid 442004 BACTEC 12B Medium 4 mL 100 per carton REFERENCES 1 Canetti G et al Advances in techniques of testing mycobacterial drug susceptibility and the use of sensitivity test in tuberculosis programmes Bull W H O 1969 41 21 43 2 National Commitee for Clinical Laboratory Standards 2001 Approved Guideline M29 A2 Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections 2nd ed NCCLS Wayne PA 3 Garner J S 1996 Hospital Infection Control Practices Advis
100. tenant l antibiotique est sup rieure ou gale celle du flacon de contr le les microorganismes tester sont consid r s comme r sistants l antibiotique Dans le cas d une population sensible l augmentation de l IC quotidien du flacon de contr le serait sup rieure celle du flacon contenant l antibiotique Par exemple si 1 de la population mycobact rienne est r sistante l isoniazide INH alors 99 des microorganismes seront inhib s par l INH et seul 1 se d veloppera dans le flacon contenant l antibiotique Le taux de croissance dans le flacon contenant l antibiotique serait similaire celui du flacon de contr le dans lequel l inoculum bact rien d origine est 100 fois moins concentr que dans le flacon contenant l antibiotique REACTIFS Avant traitement les flacons d antibiotiques BACTEC S I R E contiennent les r actifs suivants Agents antimicrobiens lyophilis s par flacon Streptomycine Isoniazide 1 2 mg Rifampicine Ethambutol Avertissements et pr cautions R serv au diagnostic in vitro Ce produit contient du caoutchouc naturel sec Des microorganismes pathog nes notamment les virus de l h patite et de l immunod ficience humaine sont susceptibles d tre pr sents dans les chantillons cliniques Respecter les Pr cautions standard 25 et les consignes en vigueur dans l tablissement pour manipuler tout objet contamin avec du sang ou d autres liquides organiques Avant l
101. tic Use This product contains dry natural rubber Pathogenic microorganisms including hepatitis virus and Human Immunodeficiency Virus may be present in clinical specimens Standard Precautions 2 5 and institutional guidelines should be followed in handling all items contaminated with blood or other body fluids Prior to use each vial should be examined for evidence of damage deterioration or contamination DO NOT USE any vial showing evidence of contamination Vials that exhibit evidence of damage should be discarded On rare occasions the glass bottle may be cracked and the neck may break during removal of the flip off cap or in handling Before sampling positive 12B Medium culture vials for subculturing or staining etc it is necessary to release gas which may build up due to microbial metabolism Aseptic techniques and established precautions against microbial hazards should be used at all times Procedures should be performed in a suitable biological safety cabinet in a room with an appropriate ventilation system as recommended by the CDC 6 Use a proper protective gown mask and gloves while handling specimens and cultures of potential pathogens Follow the CDC and OSHA recommendations To minimize the potential of leakage during inoculation use syringes with permanently attached needles or securely fastened Luer Lok brand tips Drug concentrations used in the conventional susceptibility testing may vary from laboratory to laboratory
102. tric method for detection of 1 resistant populations of Mycobacterium tuberculosis J Clin Microbiol 1985 21 941 946 19 Woodley C L Evaluation of streptomycin and ethambutol concentrations for susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis by radiometric and conventional procedures J Clin Microbiol 1986 23 385 386 20 Heifets L B Drug susceptibility in the chemotherapy of mycobacterial infection C R C Press Inc Boca Raton FL 1991 21 Huang T H Tu S Lee W Huang and Y Liu 2002 Antimicrobial susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis to first line drugs comparisons of the IMGIT 960 and BACTEC 460 systems Ann Clini Lab Sci 32 142 147 22 Bemer P F Palicova S R sch Gerdes H Drugeon and G Pfyffer 2002 Multicenter evaluation of fully automated BACTEC Mycobacteria Growth Indicator Tube 960 System for susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis J Clin Microbiol 40 150 154 23 Bergmann J S and G L Woods 1997 Reliability of mycobacteria growth indicator tube for testing susceptibility of Mycobacterium tuberculosis to ethambutol and streptomycin J Clin Microbiol 35 3325 3327 24 Bergmann J S and G L Woods 1998 Evaluation of the ESP culture system Il for testing susceptibilities of Mycobacterium tuberculosis isolates to four primary antituberculosis drugs J Clin Microbiol 36 2940 2943 amp BD BACTEC S I R E Drug Kit APPLICATION La BACTEC S I R E
103. uiente tabla para determinar cu ndo definir un an lisis de sensibilidad Lectura diaria ACCION GI 300 499 Incubar un d a m s y luego definir la prueba GI 500 799 Definir la prueba el mismo d a GI 2 800 Realizar una diluci n 1 2 con 1 mL de l quido diluyente definir la prueba Si se debe demorar el an lisis de sensibilidad refrigerar el frasco con medio 12B En este momento se debe definir la prueba de sensibilidad en el plazo de una semana Preparar un in culo bacteriano uniforme introduciendo alternativamente el medio en una jeringa de un solo uso con una jeringa de aguja fija y volvi ndolo a expulsar en el frasco varias veces sin retirar la aguja del tap n del frasco Este in culo se utiliza directamente para la prueba de sensibilidad a antibi ticos Cultivo en medio s lido Realizar una suspensi n homogeneizada de varias colonias en el medio s lido El cultivo no debe ser de m s de 4 5 semanas de antig edad Ajustar la suspensi n a un patr n 1 0 de McFarland si se utiliza un cronograma diario y un patr n de 0 5 si se utiliza un cronograma sin tomar en cuenta los fines de semana Si no se ha determinado claramente la viabilidad o la edad del cultivo realizar un subcultivo en el medio 12B para obtener un crecimiento reciente Inoculaci n Colocar los frascos de medio 12B en una gravilla y rotularlos adecuadamente a menudo como control estreptomicina isoniazida rifampicina etambutol Necesitar un frasco pa
104. usi fine settimana e giorni festivi pi o meno alla stessa ora ogni giorno x 2 h con lo strumento BACTEC 460TB finch il GI nel flacone di controllo non raggiunge almeno 30 Testare per un minimo di 4 o un massimo di 12 giorni Seguendo questo piano di test possibile allestire un test di sensibilit qualsiasi giorno della settimana Piano con esclusione del fine settimana La procedura e simile a quella del piano di test giornaliero sopra descritta con le eccezioni seguenti 7 a mettere in batch tutte le colture positive e allestire i testi di sensibilit soltanto il venerdi Seguire le procedure sopra descritte b Se si usa un flacone BACTEC positivo consultare la tabella sopra riportata Iniziare a testare i flaconi inoculati il lunedi saltando il fine settimana Testare i flaconi almeno il lunedi martedi e mercoledi da un minimo di 5 giorni dal giorno di inoculo a un massimo di 12 giorni pi o meno alla stessa ora ogni giorno 2 h Test diretto di sensibilit ai farmaci Se un campione positivo per AFB su striscio contiene di norma una quantit di micobatteri sufficiente per condurre un test di sensibilit ai farmaci in terreno 12B La procedura amp sostanzialmente identica al test indiretto di sensibilit Le differenze procedurali sono le seguenti Una volta trattato il campione inoculare i terreni di coltura ed eseguire uno striscio per la colorazione AFB Refrigerare la parte restante del concentrato di campione
105. wird und auf den Tr bungsstandard 0 5 wenn nur an Werktagen nicht an Wochenenden getestet wird Wenn die Lebensf higkeit oder das Alter der Kultur ungewiss ist eine Subkultur in einem 12B Medium anlegen um frisches Wachstum zu erhalten Inokulation Die 12B Mediumflaschchen in einem Gestell anordnen und korrekt beschriften gew hnlich mit Kontrolle Streptomycin Isoniazid Rifampin Ethambutol Es wird ein Fl schchen f r jede Arzneimittelkonzentration und eines f r die Kontrolle ben tigt die Versandtabletts aus Pappkarton k nnen als Gestelle verwendet werden Gummihandschuhe tragen und an einer biologischen Sicherheitswerkbank arbeiten 0 1 mL Bakterien Suspension in jedes der BACTEC 12B Mediumfl schchen mit Arzneimittel geben F r diese Inokulation eine Einmal Tuberkulinspritze mit einer fest eingesetzten Kan le verwenden F r das Kontrollflaschchen die Suspension nicht direkt inokulieren sondern zun chst im Verh ltnis 1 100 verd nnen Hierzu 0 1 mL der Suspension in 9 9 mL des speziellen Verd nners bertragen Nach gr ndlichem Mischen mindestens 10 Mal umdrehen 0 1 mL dieser Verd nnung in das 12B Kontrollmediumflaschchen ohne Arzneimittel inokulieren Den oberen Teil jedes inokulierten Flaschchens mit einer mit einem entsprechenden Desinfektionsmittel getr nkten Gaze ausstreichen anschlie end mit einem mit 70 igem Alkohol getr nkten Tupfer reinigen Bei 37 1 C inkubieren Zeitplan f r das Ablesen T gli
106. zu BACTEC 12B Kulturmedium f r qualitative Empfindlichkeitstests von M tuberculosis aus einer Kultur verwendet Deutsch ZUSAMMENFASSUNG UND ERKLARUNG Das BACTEC Verfahren zum Testen von Mykobakterien auf Arzneimittelempfindlichkeit basiert auf demselben Prinzip wie die herk mmliche Methode au er dass hierbei ein fl ssiges Medium verwendet wird und die Kolonien nicht nach ca 3 Wochen gez hlt werden sondern das Wachstum radiometrisch berwacht und die Ergebnisse innerhalb von 4 12 Tagen interpretiert werden k nnen Die BACTEC Arzneimittelempfindlichkeit l sst sich durch eine modifizierte Version der herk mmlichen Proportionsmethode bestimmen Als kritische Proportion f r die Resistenz wird 1 f r alle Arzneimittel gegen Tuberkulose angenommen Dies bedeutet dass wenn 1 oder mehr der mykobakteriellen Testpopulation resistent ist die Kultur f r Labordokumentationszwecke ebenfalls als negativ betrachtet wird Die Resistenz wird durch einen Vergleich der Wachstumsrate im Kontrollfl schchen und in den 12B Mediumfl schchen mit Testarznei bestimmt VERFAHRENSGRUNDLAGEN Das Grundprinzip des radiometrischen BACTEC Empfindlichkeitstests f r Mykobakterien gleicht dem beim prim ren Isolationsverfahren Wenn Mykobakterien im 7H12 Medium mit 14C markiertem N hrboden wachsen verbrauchen sie diesen N hrboden und bilden 14CO Die Menge an erfasstem 4CO spiegelt die Wachstumsrate und menge im Fl schchen wider und l sst sich als Wachstu

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