FLEX Monoclonal Rabbit Anti-Human Postmeiotic Segregation
Contents
1. 1 1 Smooth muscle 30 nuclear 2 2 Ductal epithelium 80 nuclear 1 1 Lymphoid cells 50 nuclear 1 1 Connective Tissue 30 nuclear 2 2 Connective tissue cells 20 nuclear Cerebellum 3 3 3 Purkinje cells 80 90 nuclear Skeletal muscle 3 0 3 Muscle cells 3 3 Glial cells 50 nuclear 3 3 Connective tissue 10 20 nuclear Cerebrum 3 3 3 Glial cells 20 60 nuclear Skin 3 2 2 Basal epithelium 50 80 nuclear Cervix 3 3 3 Basal epithelium 80 100 nuclear 3 3 Sweat gland 30 90 nuclear 3 3 Stromal cells 50 nuclear Small intestine 3 3 3 Epithelium 60 80 nuclear Colon 3 3 3 Epithelium 50 80 nuclear 3 3 Smooth muscle 30 40 nuclear 3 3 Lymphocytes 20 40 nuclear Spleen 3 3 3 Resting lymphocytes 20 70 nuclear 3 3 Connective tissue 10 40 nuclear 1 1 Reactive lymphocytes 80 nuclear Esophagus 3 3 3 Squamous epithelium 10 50 nuclear 3 3 Sinus lining red pulp 30 50 nuclear 1 1 Connective tissue 30 nuclear Stomach 3 1 1 Connective tissue 30 nuclear 0 1 Lymphocytes 1 2 Epithelium 10 nuclear 3 3 Cardiac cells 50 60 nuclear 1 1 Gastric gland 10 nuclear 3 3 Connective tissue 30 40 nuclear 2 2 Smooth muscle 20 60 nuclear2. une augmentation de la susceptibilit au cancer du c lon et de l endome amp tre et un moindre degr aux autres types de cancers 1 3 Une caract ristique de marque des cancers pr sentant des erreurs dans la voie MMR est l instabilit des microsatellites MSI c est dire des alt rations du nombre de r p titions des microsatellites dans l ADN cause du processus de r paration d fectueux 4 5 Une mutation au niveau des lign es germinales dans une seule copie d un gene MMR pr dispose les patients un syndrome HNPCC toutefois le d veloppement d un cancer n cessite la perte de fonction de la copie du type sauvage restante Les mutations de PMS2 repr sentent environ 5 de l ensemble des cas de syndrome HNPCC 6 toutefois la stabilit de l expression de PMS2 d pend de MLH1 ainsi au niveau prot ique les cancers colorectaux sporadiques ainsi que les cancers colorectaux h r ditaires ayant une d ficience en MLH1 pr sentent en g n ral une perte concomitante de PMS2 7 Les anticorps dirig s contre PMS2 sont utiles pour identifier par immunohistochimie IHC les d ficiences de la r paration des m sappariements dans les tumeurs de l appareil digestif y compris le syndrome HNPCC et les cancers extra coliques associ s Une d ficience en PMS2 d termin e par IHC a t rapport e dans les cancers de l endom tre de l ovaire du sein de l oesophage et de l ampoule de Vater ainsi que dans les m lanomes 8
3. 3 3 Tissu conjonctif 30 40 nucl aire 2 2 Muscle lisse 20 60 nucl aire 3 3 Tubule 50 60 nucl aire 1 1 Lymphocytes 60 nucl aire 3 3 Capsule de Bowman 10 20 nucl aire Testicule 3 3 3 Cellules de Leydig 60 80 nucl aire 3 3 Glom rule 10 nucl aire 3 3 Cellules tubulaires 10 20 nucl aire 0 3 H patocytes 3 3 Cortex 10 30 nucl aire 1 3 Canal biliaire 10 nucl aire 3 3 Moelle 10 nucl aire P01935EFG_001_IR087 2012 05 p 6 4 Verwendungszweck Synonyme f r das Antigen Zusammenfassung und Erkl rung 122463 001 Poumon 3 2 2 Lymphocytes 80 Thyroide 3 2 3 Epithelium folliculaire 50 nucl aire nucl aire 3 3 pith lium alv olaire 50 3 3 Cellules C parafolliculaires 60 nucl aire 10 30 nucl aire Cellules 2 2 M soth lium 20 50 Amygdale 3 3 3 Lymphocytes folliculaires 40 m soth liales 3 nucl aire 60 nucl aire 3 3 Tissu conjonctif 50 3 3 Lymphocytes extra nucl aire folliculaires 40 50 nucl aire Nerf 3 3 Cellules de Schwann 10 3 3 Epithelium 60 80 p riph rique 3 30 nucl aire nucl aire 3 3 Tissu conjonctif 30 50 Ut rus 3 3 3 pith lium glandulaire 30 nucl aire 50 nucl aire Ovaire 3 3 3 Cellules stromales 20 3 3 Cellule
4. paration des m sappariements mismatch repair MMR de l ADN La voie MMR est utilis e par les cellules saines en prolif ration afin de r parer les mutations pouvant survenir au cours de la r plication de l ADN PMS2 forme un h t rodim re avec la prot ine de r paration des m sappariements MLH1 Mut protein homolog 1 et le complexe h t rodim rique MLH1 PMS2 est recrut pour la s quence ADN m sappari e par un complexe h t rodim rique de r paration des m sappariements MutS compos de MSH2 et de MSH6 qui se lie directement l o se trouve le m sappariement de la base Le complexe MLH1 PMS2 initie ensuite des fonctions en aval y compris l excision des brins d ADN m sappari s et la r paration gr ce au recrutement de nucl ases de polym rases et d autres prot ines 1 Une d ficience en PMS2 est souvent le r sultat de mutations au niveau des lign es germinales chez des individus pr sentant une d ficience de la r paration des m sappariements 1 La perte de fonction de PMS2 se traduit par une augmentation du taux de mutations et est associ e au d veloppement d un syndrome HNPCC appel aussi syndrome de Lynch Le syndrome HNPCC qui repr sente 1 5 des cancers colorectaux est une maladie autosomique dominante qui r sulte de mutations au niveau des lign es germinales dans au moins un des quatre g nes MMR y compris MSH2 env 40 MLH1 env 50 MSH6 env 5 et PMS2 lt 5 et il est associ
5. 13 Se reporter aux Instructions g n rales de coloration immunohistochimique de Dako ou aux instructions du syst me de d tection relatives aux proc dures IHC Anticorps monoclonal de lapin pr t l emploi fourni sous forme liquide dans un tampon contenant une prot ine stabilisante et 0 015 mol L d azide de sodium Clone EP51 Isotype IgG de lapin Peptide synth tique correspondant aux r sidus de la prot ine PMS2 humaine Lors de Western Blots effectu s sur des cellules SHSY5Y l anticorps anti PMS2 clone EP51 reconna t une bande principale 110 kDa qui correspond au poids mol culaire attendu de PMS2 P01935EFG_001_IR087 2012 05 p 4 4 Precautions d emploi Conservation Guide rapide Preparation des echantillons Procedure de coloration 122463 001 1 Pour utilisateurs professionnels 2 Ce produit contient de l azide de sodium NaN produit chimique hautement toxique dans sa forme pure Aux concentrations du produit bien que non class comme dangereux l azide de sodium peut r agir avec le cuivre et le plomb des canalisations et former des accumulations d azides m talliques hautement explosives Lors de l limination rincer abondamment l eau pour viter toute accumulation d azide m tallique dans les canalisations 3 Comme avec tout produit d origine biologique respecter les proc dures de manipulation appropri es Porter un quipement de protection individuelle app
6. Allgemeine Richtlinien zur immunhistochemischen F rbung von Dako oder die Anweisungen des Detektionssystems von IHC Verfahren Gebrauchsfertiger monoklonaler Kaninchen Antik rper in fl ssiger Form in einem Puffer der stabilisierendes Protein und 0 015 mol L Natriumazid enth lt Klon EP51 Isotyp Kaninchen IgG Synthetisches Peptid das den R ckst nden in humanem PMS2 Protein entspricht Beim Western Blot von SHSY5Y Zellen erkannte der Anti PMS2 Clone EP51 eine starke Bande bei 110 kDa die mit dem erwarteten Molekulargewicht von PMS2 bereinstimmt F r Fachpersonal 2 Dieses Produkt enth lt Natriumazid NaNs eine in reiner Form u erst giftige Chemikalie Bei den in diesem Produkt verwendeten Konzentrationen kann Natriumazid obwohl nicht als gef hrlich klassifiziert mit Blei und Kupferabflussrohren reagieren und hochexplosive Metallazide bilden Nach der Entsorgung stets mit viel Wasser nachsp len um Ansammlungen von Metallazid in den Leitungen vorzubeugen 3 Wie alle Produkte biologischen Ursprungs m ssen auch diese entsprechend gehandhabt werden Geeignete Schutzkleidung tragen um Augen und Hautkontakt zu vermeiden 5 Nicht verwendete L sung ist entsprechend rtlichen bundesstaatlichen und staatlichen Richtlinien zu entsorgen Bei 2 8 aufbewahren Nach Ablauf des auf dem Fl schchen aufgedruckten Verfalldatums nicht mehr verwenden Werden die Reagenzien nicht entsprechend den angegebenen Bedingungen aufb
7. EP51 has been created by Epitomics Inc using Epitomics proprietary rabbit monoclonal antibody technology covered under Patent Nos 5 675 063 and 7 402 409 122463 001 P01935EFG_001_IR087 2012 05 p 10 4 Monoclonal Rabbit Anti Human Postmeiotic Segregation Increased 2 Clone EP51 a t cr par Epitomics Inc suivant la technologie d anticorps monoconal de lapin d pos e de Epitomics prot g e par les brevets N 5 675 063 et 7 402 409 Monoclonal Rabbit Anti Human Postmeiotic Segregation Increased 2 Clone EP51 wurde von Epitomics Inc unter Verwendung der firmeneigenen Technik f r monoklonale Kaninchen Antik rper von Epitomics hergestellt und ist durch die Patente mit den Nummern 5 675 063 und 7 402 409 gesch tzt Catalogue number Temperature limitation Consult instructions for use Reference du catalogue Limites de temp rature Consulter les instructions d utilisation Bestellnummer Zul ssiger Temperaturbereich Gebrauchsanweisung beachten Manufacturer Batch code Use by Fabricant Code du lot Utiliser jusque Hersteller Chargenbezeichnung Verwendbar bis Authorized representative in the European Community In vitro diagnostic medical device ec REP Repr sentant Autoris dans la Communaut Europ enne Dispositif m dical de diagnostic in vitro Autorisierter Repr sentant in der EU In vitro Diagnostikum PT0039 Rev C Edition 05 12 122463 001 s Dako North America Inc 6392 Via Real Carpinteria Califo
8. Pour plus de d tails se reporter au Manuel d utilisation du PT Link Les param tres suivants doivent tre utilis s pour le PT Link temp rature de pr chauffage 65 temp rature et dur e du d masquage des pitopes 97 pendant 20 minutes 1 minute laisser refroidir jusqu 65 Reti rer le portoir de lames de la cuve PT et plonger imm diatement les lames dans une jarre cuve par ex station de rin age du PT Link r f PT109 contenant du tampon de lavage EnVision FLEX Wash Buffer 20x r f K8007 dilu temp rature ambiante Laisser les lames dans le tampon de lavage pendant 1 5 minutes Les coupes de tissu ne doivent pas s cher lors du traitement ni lors de la proc dure de coloration immunohistochimique qui suit Pour une meilleure adh rence des coupes de tissu sur les lames de verre il est recommand d utiliser les lames FLEX IHC Microscope Slides r f K8020 Une fois la proc dure de coloration termin e les coupes doivent tre d shydrat es claircies et mont es l aide d un milieu de montage permanent Visualisation le syst me de visualisation recommand est le syst me EnVision FLEX High pH Link r f K8000 Programme les tapes de coloration et les temps d incubation sont pr programm s dans le logiciel Autostainer Link Le volume de r actif recommand devant tre appliqu est de 1 x 200 uL ou 2 x 150 uL par lame Se reporter au Manuel d utilisation de l Autostain
9. eren Anf lligkeit f r Kolon und Endometriumkarzinome und zu einem geringeren Grade f r andere Arten von Neoplasien in Verbindung gebracht 1 3 Deutliches Kennzeichen f r Karzinome mit Defekten im MMR Pfad ist die Mikrosatelliteninstabilit t MSI nderungen in der Anzahl von Mikrosatellitenwiederholungen in der DNA aufgrund des fehlerhaften Reparaturprozesses 4 5 Eine Keimbahnmutation in einer einzelnen MMR Gen Kopie stellt eine Pr disposition des Patienten f r HNPCC dar f r die Entwicklung des Karzinoms ist allerdings der Funktionsverlust der verbleibenden Wildtyp Kopie erforderlich Mutationen in PMS2 sind f r ca 5 aller F lle von HNPCC verantwortlich 6 PMS2 h ngt jedoch von MLH1 f r eine stabile Expression ab sodass auf der Proteinebene sporadische und heredit re kolorektale Karzinome mit einer Defizienz an MLH1 den damit einhergehenden Verlust von PMS2 aufweisen 7 Antik rper gegen PMS2 sind hilfreich bei der Identifizierung von Mismatch Repair Defekten in Tumoren des Gastrointestinaltrakts einschlie lich HNPCC und assoziierter Krebsarten au erhalb des Kolons durch Immunhistochemie IHC Die durch IHC definierte PMS2 Defizienz wurde in Endometrium Ovarial Mamma P01935EFG_001_IR087 2012 05 p 7 4 Geliefertes Reagenz Immunogen Spezifit t Vorsichtsma nahmen Lagerung Kurzanleitung Probenvorbereitung 122463 001 sophagus und Papillenkarzinomen und melanomen beobachtet 8 13 Siehe
10. patterns as described for this tissue in the Performance characteristics section The recommended negative control reagent is FLEX Negative Control Rabbit Link Code IR600 Staining interpretation The cellular staining pattern is predominantly nuclear Performance characteristics Normal tissues Monoclonal Rabbit Anti Human Postmeiotic Segregation Increased 2 Clone EP51 positively labels the nuclei of a variety of cell types in normal tissue Although not noted in the table below positive nuclear staining was observed in endothelial cells in many tissue types 14 Tissue Type Positive Tissue Elements Positive Tissue Elements tested Adrenal 3 Tissue Type tested Parathyroid 3 Pituitary 3 3 3 Cortex 10 50 nuclear 3 3 Epithelium 20 80 nuclear 2 3 Medulla 10 50 nuclear 3 3 Endocrine cells 50 90 nuclear 122463 001 P01935EFG_001_IR087 2012 05 p 2 4 122463 001 Appendix 1 1 1 Epithelium 80 nuclear Prostate 3 3 3 Glandular and ductal epithelium 40 90 nuclear 1 1 Extra follicular lymphocytes 100 nuclear 3 3 Stromal cells 50 70 nuclear 1 1 Smooth muscle 50 nuclear Salivary gland 3 3 3 Ductal epithelium 60 80 nuclear Bone marrow 2 2 2 Blast cells 10 20 nuclear 3 3 Glandular epithelium 20 80 nuclear Breast 3 1 1 Glandular epithelium 80 nuclear
11. 3 3 Tubule 50 60 nuclear 1 1 Lymphocytes 60 nuclear 3 3 Bowman s capsule 10 20 nuclear Testis 3 3 3 Leydig cells 60 80 nuclear 3 3 Glomerulus 10 nuclear 3 3 Tubular cells 10 20 nuclear 0 3 Hepatocytes Thymus 3 3 3 Cortex 10 30 nuclear 1 3 Bile duct 10 nuclear 3 3 Medulla 10 nuclear 2 2 Lymphocytes 80 nuclear Thyroid 3 2 3 Follicular epithelium 50 nuclear 3 3 Alveolar epithelium 50 60 nuclear 3 3 Parafollicular C cells 10 30 nuclear Mesothelial cells 3 2 2 Mesothelium 20 50 nuclear Tonsil 3 3 3 Follicular lymphocytes 40 60 nuclear 3 3 Connective tissue 50 nuclear 3 3 Extra follicular lymphocytes 40 50 nuclear Nerve peripheral 3 3 3 Schwann cells 10 30 nuclear 3 3 Epithelium 60 80 nuclear 3 3 Connective tissue 30 50 nuclear Uterus 3 3 3 Glandular epithelium 30 50 nuclear Ovary 3 3 3 Stromal cells 20 40 nuclear 3 3 Stromal cells 50 60 nuclear 3 3 Follicular epithelium 10 50 nuclear 3 3 Myometrium 50 nuclear Pancreas 3 3 3 Acinar cells 50 60 nuclear 3 3 Islet cells 10 30 nuclear Abnormal tissues In PMS2 deficient tumors no nuclear staining should be observed in the neoplastic cells A 3 3 Pancreatic ductal ce
12. Behandlung oder des anschlie enden immunhistochemischen F rbeverfahrens nicht austrocknen F r eine bessere Haftung der Gewebeschnitte an den Glas Objekttr gern werden FLEX IHC Microscope Slides Code Nr K8020 empfohlen Nach dem F rben m ssen die Schnitte dehydriert gekl rt und unter Verwendung eines permanenten Fixiermittels fixiert werden P01935EFG_001_IR087 2012 05 p 8 4 F rbeverfahren Auswertung der F rbung Leistungs eigenschaften 122463 001 Visualisierung Das empfohlene Visualisierungssystem ist EnVision FLEX High pH Link Code Nr K8000 Programm Die F rbeschritte und Inkubationszeiten sind in der Autostainer Link Software vorprogrammiert Das empfohlene Reagenz Anwendungsvolumen ist 1 x 200 uL oder 2 x 150 pL pro Objekttr ger Detaillierte Anweisungen zum Laden der Objekttr ger und Reagenzien bitte dem Benutzerhandbuch zum Autostainer Link entnehmen Wenn die Protokolle auf der Autostainer Link Plattform nicht verf gbar sind wenden Sie sich an den technischen Kundendienst von Dako Das Installationsprogramm der Autostainer Link Software ist unter www dako com Installer erh ltlich Dieses Installationsprogramm aktualisiert die DakoLink Software mit Protokoll und Reagenzinformationen f r Anti PMS2 Clone EP51 Der Kurzname f r das Antik rperprotokoll ist PMS2 EP51 Alle Inkubationsschritte sollten bei Raumtemperatur durchgef hrt werden Gegenf rbung Die empfohlene Gegenf rbung ist EnVision FL
13. EX Hematoxylin Link Code Nr K8008 Empfohlen wird ein nichtw ssriges permanentes Fixiermittel Kontrollen Positiv und Negativkontrollen sollten zur gleichen Zeit und mit demselben Protokoll wie die Patientenproben getestet werden Die Positivkontrolle sollte Appendix oder Kolongewebe enthalten und die Zellen Strukturen sollten die f r dieses Gewebe unter Leistungsmerkmale beschriebenen Reaktionsmuster aufweisen Das empfohlene Negativ Kontrollreagenz ist FLEX Negative Control Rabbit Link Code Nr IR600 Das zellul re F rbemuster ist berwiegend nukle r Gesunde Gewebe Monoclonal Rabbit Anti Human Postmeiotic Segregation Increased 2 Clone EP51 markiert die Kerne einer Reihe von Zelltypen in gesundem Gewebe Obwohl nicht in der Tabelle unten aufgezeigt wurde eine positive nukle re F rbung in Endothelzellen bei vielen Gewebetypen beobachtet 14 Gewebetyp Anz getestet Positive Gewebeelemente Gewebetyp Anz getestet Positive Gewebeelemente Nebennieren 3 3 3 Cortex 10 50 nukle r Nebenschild dr se 3 3 3 Epithel 20 80 nukle r 2 3 Medulla 10 50 nukle r Hypophyse 3 3 3 Endokrine Zellen 50 90 nukle r Appendix 1 1 1 Epithel 80 nukle r Prostata 3 3 3 Dr sen und Duktusepithel 40 90 nukle r 1 1 Extrafollikul re Lymphozyten 100 nukle r 3 3 Stromazellen 50 70 nukle r 1 1 Glatte Muskel
14. a ako Intended use Synonyms for antigen Summary and explanation Reagent provided Immunogen Specificity Precautions 122463 001 CE FLEX Monoclonal Rabbit Anti Human Postmeiotic Segregation Increased 2 Clone EP51 Ready to Use Link English Code IR087 For in vitro diagnostic use FLEX Monoclonal Rabbit Anti Human Postmeiotic Segregation Increased 2 Clone EP51 Ready to Use Link is intended for use in immunohistochemistry together with Autostainer Link instruments Antibodies to postmeiotic segregation increased 2 PMS2 may be useful for the differential identification of colorectal carcinomas When deficient PMS2 is associated with the onset of hereditary non polyposis colorectal cancer HNPCC 1 2 The clinical interpretation of any staining or its absence should be complemented by morphological studies using proper controls and should be evaluated within the context of the patient s clinical history and other diagnostic tests by a qualified pathologist hPMS2 mismatch repair endonuclease PMS2 PMS1 protein homolog 2 PMS2 is a ubiquitousiy expressed gene encoding the protein PMS2 an 100 kDa nuclear protein involved in the DNA mismatch repair MMR pathway The MMR pathway is utilized by normal proliferating cells to repair mutations that may occur during DNA replication PMS2 forms a heterodimer with the mismatch repair protein MutL protein homolog 1 MLH1 and the MLH1 PMS2 heterodimeric compl
15. ective Equipment to avoid contact with eyes and skin P01935EFG_001_IR087 2012 05 p 1 4 5 Unused solution should be disposed of according to local State and Federal regulations Storage Store at 2 8 Do not use after expiration date stamped on vial If reagents are stored under any conditions other than those specified the conditions must be verified by the user There are no obvious signs to indicate instability of this product Therefore positive and negative controls should be run simultaneously with patient specimens If unexpected staining is observed which cannot be explained by variations in laboratory procedures and a problem with the antibody is suspected contact Dako Technical Support Quick guide Step Comments Fixation Formalin Pre treatment EnVision FLEX High pH Code K8004 20 min HIER 3 in 1 using PT Link and PT Link Rinse Station Dilution Ready to use 30 min incubation Dilution buffer Pre diluted Negative Control FLEX Negative Control Rabbit Code IR600 30 min incubation Visualization EnVision FLEX High pH Code K8000 30 min incubation 2x5 min DAB Counterstain EnVision FLEX Hematoxylin Code K8008 5 min incubation Control Tissue Appendix colon Nuclear staining Slides FLEX IHC Microscope Slides Code K8020 Recommended for greater adherence of tissue sections to glass slides Mounting Non aqueous permanent mo
16. er Link correspondant pour plus de d tails sur le chargement des lames et des r actifs Si les protocoles ne sont pas disponibles sur la plate forme Autostainer Link contacter l assistance technique de Dako Un programme d installation du logiciel Autostainer Link peut tre obtenu sur www dako com Installer Ce programme d installation mettra le logiciel DakoLink jour avec les informations relatives au protocole et aux r actifs pour l anticorps anti PMS2 clone EP51 Le nom abr g pour le protocole de l anticorps est PMS2 EP51 Toutes les tapes d incubation doivent tre effectu es temp rature ambiante P01935EFG_001_IR087 2012 05 p 5 4 Contre coloration le contre colorant recommand est le produit EnVision FLEX Hematoxylin Link r f K8008 L utilisation d un milieu de montage permanent non aqueux est recommand e Contr les des contr les positifs et n gatifs doivent tre test s en m me temps et en suivant le m me protocole que les chantillons de patients Le tissu de contr le positif doit comprendre l appendice ou le c lon et les cellules structures doivent pr senter les sch mas de r action d crits pour ces tissus dans la section Caract ristiques de performance Le r actif de contr le n gatif recommand est le produit FLEX Negative Control Rabbit Link r f IR600 Interpr tation de la coloration Le sch ma de coloration cellulaire est principalement nucl aire Caract rist
17. ests des Patienten vorgenommen werden hPMS2 Mismatch Repair Endonuklease PMS2 PMS1 Protein Homolog 2 PMS2 ist ein ubiquit r exprimiertes Gen das das Protein PMS2 kodiert ein Kernprotein von 100 kDa welches wiederum am DNA Mismatch Repair MMR Pfad beteiligt ist Der MMR Mechanismus wird von sich normal vermehrenden Zellen verwendet um Mutationen zu reparieren die w hrend der DNA Replikation auftreten k nnen PMS2 bildet ein Heterodimer mit dem MMR Protein MutL Protein Homolog 1 MLH1 Der heterodimere MLH1 PMS2 Komplex wird durch ein weiteres aus MSH2 und MSH6 bestehendem MutS MMR Heterodimer das direkt an den zu reparierenden Basen Mismatch bindet zum DNA Mismatch gebracht Der MLH1 PMS2 Komplex l st dann eine Reihe von Funktionen aus die das Ausschneiden des falsch gepaarten DNA Strangs und die Reparatur durch Nukleasen Polymerasen und weitere spezielle Proteine einschlie t 1 Ein PMS2 Defekt ist oft die Folge von Keimbahnmutationen bei Personen mit Beeintr chtigungen der Mismatch Reparatur 1 Der Verlust der PMS2 Funktion f hrt zu einer gesteigerten Mutationsrate und wird mit dem Entstehen von HNPCC auch bekannt als Lynch Syndrom in Zusammenhang gebracht HNPCC das f r 1 5 der kolorektalen Karzinome verantwortlich ist ist eine autosomal dominante Erkrankung die aus der Keimbahnmutation von mindestens vier MMR Genen entsteht darunter MSH2 40 MLHT 50 MSH6 5 und PMS2 lt 5 sie wird mit einer gr
18. ewahrt m ssen die Bedingungen vom Anwender gepr ft werden Es gibt keine offensichtlichen Anzeichen f r eine eventuelle Produktinstabilit t Positiv und Negativkontrollen sollten daher zur gleichen Zeit wie die Patientenproben durchgef hrt werden Falls es zu einer unerwarteten F rbung kommt die sich nicht durch Unterschiede bei Laborverfahren erkl ren l sst und auf ein Problem mit dem Antik rper hindeutet ist der technische Kundendienst von Dako zu verst ndigen Schritt Anmerkungen Fixierung Formalin Vorbehandlung EnVisionTM FLEX High pH Code Nr K8004 20 Min HIER 3 in 1 mit PT Link und PT Link Rinse Station Verd nnung Gebrauchsfertig 20 Min Inkubation Verd nnungs Vorverd nnt puffer Negativkontrolle FLEX Negative Control Rabbit Code Nr IR600 30 Min Inkubation Visualisierung EnVision FLEX High pH Code Nr K8000 30 Min Inkubation 2 x 5 Min DAB Gegenf rbung EnVisionTM FLEX Hematoxylin Code Nr K8008 5 Min Inkubation Kontrollgewebe Appendix Kolon Nukle re F rbung Objekttr ger FLEX IHC Microscope Slides Code Nr K8020 Zur besseren Haftung der Gewebeschnitte an Glasobjekttr gern Fixierung Nichtw ssrige permanente Fixierung erforderlich Nach dem F rben m ssen die Schnitte dehydriert gekl rt und unter Verwendung eines permanenten Fixiermittels fixiert werden Ger te Autostainer Link 48 Ger tespezifische Fl schchen ver
19. ex is recruited to the mismatch DNA sequence by a MutS MMR heterodimer consisting of MSH2 and MSH6 which binds directly to the base mismatch The MLH1 PMS2 complex then initiates downstream functions including the excision of the mismatched DNA strands and repair through the recruitment of nucleases polymerases and other proteins 1 PMS2 deficiency is often the result of germline mutations in MMR deficient individuals 1 PMS2 loss of function results in an increased mutation rate and is associated with the development of HNPCC also called Lynch syndrome HNPCC which accounts for 1 5 of colorectal cancers is an autosomal dominant condition that results from germline mutations in any of at least four MMR genes including MSH2 40 MLHT 50 MSH6 5 and PMS2 lt 5 and is associated with increased susceptibility to colon and endometrial cancer and to a lesser degree other types of neoplasms 1 3 A hallmark feature of cancers with defects in the MMR pathway is microsatellite instability MSI alterations in the number of microsatellite repeats in the DNA as a result of the faulty repair process 4 5 A germline mutation in a single MMR gene copy predisposes patients to HNPCC however cancer development requires loss of function of the remaining wildtype copy Mutations in PMS2 account for approximately 5 of all cases of HNPCC 6 however PMS2 is dependent upon MLH1 for stable expression thus at the protein level both sporadic and he
20. f the Lynch syndrome history molecular genetics screening differential diagnosis and medicolegal ramifications Clin Genet 2009 76 1 18 8 Garg K Shih K Barakat R Zhou Q lasonos A Soslow RA Endometrial carcinomas in women aged 40 years and younger tumors associated with loss of DNA mismatch repair proteins comprise a distinct clinicopathologic subset Am J Surg Pathol 2009 33 1869 77 9 Pal T Permuth Wey J Sellers TA A review of the clinical relevance of mismatch repair deficiency in ovarian cancer Cancer 2008 113 733 42 10 Buerki N Gautier L Kovac M Marra G Buser M Heinimann K Evidence for breast cancer as an integral part of Lynch syndrome Gene Chrom Cancer 2012 51 83 91 11 Agaram NP Shia J Tang LH Klimstra DS DNA mismatch repair deficiency in ampullary carcinoma a morphologic and immunohistochemical study of 54 cases Am J Clin Pathol 2010 133 772 80 12 Farris AB 3rd Demicco EG Le LP Finberg KE Miller J Mandal R et al Clinicopathologic and molecular profiles of microsatellite unstable Barrett Esophagus associated adenocarcinoma Am J Surg Pathol 2011 35 647 55 13 Alvino E Marra G Pagani E Falcinelli S Pepponi R Perrera C et al High frequency microsatellite instability is associated with defective DNA mismatch repair in human melanoma J Invest Dermatol 2002 118 79 86 14 PMS2 clone EP51 M3647 1R087 30 Normal Report D08987 Monoclonal Rabbit Anti Human Postmeiotic Segregation Increased 2 Clone
21. iques de performance Tissus sains l anticoros Monoclonal Rabbit Anti Human Postmeiotic Segregation Increased 2 Clone EP51 marque de facon positive les noyaux de divers types cellulaires dans les tissus sains Bien que cela ne soit pas not dans le tableau ci apr s une coloration nucl aire positive a t observ e dans les cellules endoth liales de 122463 001 nombreux types de tissu 14 Type de tissu nb test s El ments tissulaires positifs Type de tissu nb test s El ments tissulaires positifs Surr nale 3 3 3 Cortex 10 a 50 nucl aire Parathyroide 3 3 3 Epith lium 20 a 80 nucl aire 2 3 Moelle 10 50 nucl aire Pituitaire 3 3 3 Cellules endocrines 50 a 90 nucl aire Appendice 1 1 1 Epith lium 80 nucl aire Prostate 3 3 3 Epith lium glandulaire et canalaire 40 a 90 nucl aire 1 1 Lymphocytes extra folliculaires 100 nucl aire 3 3 Cellules stromales 50 a 70 nucl aire 1 1 Muscle lisse 50 nucl aire Glande salivaire 3 3 3 Epith lium canalaire 60 a 80 nucl aire Moelle osseuse 2 2 2 Blastes 10 20 nucl aire 3 3 pith lium glandulaire 20 80 nucl aire Sein 3 1 1 pith lium glandulaire 80 nucl aire 1 1 Muscle lisse 30 nucl aire 2 2 Epithelium canalaire 80 nucl aire 1 1 Cellules Iym
22. le r 0 1 Lymphozyten 1 2 Epithel 10 nukle r 3 3 Herzzellen 50 60 nukle r 1 1 Magendr se 10 nukle r 3 3 Bindegewebe 30 40 nukle r 2 2 Glatte Muskelzellen 20 60 nukle r 3 3 Tubuli 50 60 nukle r 1 1 Lymphozyten 60 nukle r P01935EFG_001_IR087 2012 05 p 9 4 3 3 Bowman Kapsel 10 20 3 3 Leydig Zellen 60 80 nukle r nukle r 3 3 Glomerulus 10 nukle r 3 3 Tubuluszellen 10 20 nukle r 0 3 Hepatozyten Thymus 3 3 3 Cortex 10 30 nukle r 1 3 Gallengang 10 nukle r 3 3 Medulla 10 nukle r 2 2 Lymphozyten 80 Schilddr se 3 2 3 Follikelepithel 50 nukle r nukle r 3 3 Alveolarepithel 50 60 nukle r 10 30 nukle r Mesothelzellen 3 2 2 Mesothel 20 50 Mandel 3 3 3 Follikul re Lymphozyten nukle r 40 60 nukle r 3 3 Parafollikulare C Zellen 3 3 Bindegewebe 50 3 3 Extrafollikulare Lymphozyten nuklear 40 50 nukle r 3 3 Epithel 60 80 nukle r Nerv peripher 3 3 3 Schwann Zellen 10 30 nukle r 3 3 Bindegewebe 30 50 Uterus 3 3 3 Dr senepithel 30 50 nukle r nukle r Ovarium 3 3 3 Stromazellen 20 40 3 3 Stromazellen 50 60 nukle r nukle r 3 3 Follikelepithel 10 50 3 3 Myometrium 50 nukle r nukle r Pankreas 3 3 3 Azinuszelle
23. lls 10 40 nuclear population of benign cells should demonstrate nuclear staining and serve as an internal tissue control P01935EFG_001_IR087 2012 05 p 3 4 Int r t Synonymes de l antig ne R sum et explication R actif fourni Immunog ne Sp cificit 122463 001 Fran ais R f IR087 Pour diagnostic in vitro L anticorps FLEX Monoclonal Rabbit Anti Human Postmeiotic Segregation Increased 2 Clone EP51 Ready to Use Link est destin tre utilis en immunohistochimie avec les appareils Autostainer Link Les anticorps dirig s contre la prot ine PMS2 postmeiotic segregation increased 2 peuvent tre utiles pour l identification diff rentielle des cancers colorectaux Lorsqu elle est d ficiente PMS2 est associ e l apparition d un cancer colorectal h r ditaire sans polypose ou syndrome HNPCC hereditary non polyposis colorectal cancer 1 2 L interpr tation clinique de toute coloration ou son absence doit tre compl t e par des tudes morphologiques en utilisant des contr les appropri s et doit tre valu e en fonction des ant c dents cliniques du patient et d autres tests diagnostiques par un pathologiste qualifi hPMS2 endonucl ase PMS2 de r paration des m sappariements homologue 2 de la prot ine PMS1 PMS2 est un g ne exprim de mani re ubiquitaire codant pour la prot ine PMS2 une prot ine nucl aire d environ 100 kDa impliqu e dans la voie de r
24. n 50 60 nukle r 3 3 Inselzellen 10 30 nukle r 3 3 Zellen des Pankreasduktus 10 40 nukle r Pathologische Gewebe Bei Tumoren mit PMS2 Defekt sollte in den neoplastischen Zellen keine nukle re F rbung zu beobachten sein Eine Population aus benignen Zellen sollte nukle re F rbung aufweisen und als interne Gewebekontrolle dienen Literaturangaben 1 Peltom ki P Role of DNA mismatch repair defects in the pathogenesis of human cancer J Clin Oncol 2003 21 1174 79 2 Lynch H Smyrk T Hereditary nonpolyposis colorectal cancer Lynch syndrome An updated review Cancer 1996 78 1149 67 3 Marcus VA Madlensky L Gryfe R Kim H So K Millar A et al Immunohistochemistry for hMLH1 and hMSH2 A practical test for DNA mismatch repair deficient tumors Am J Surg Pathol 1999 23 1248 55 4 Lanza G Gaf R Maestri Santini A Matteuzzi M Cavazzini L Immunohistochemical pattern of MLH1 MSH2 expression is related to clinical and pathological features in colorectal adenocarcinomas with microsatellite instability Mod Pathol 2002 15 741 9 5 Okuda T Sekizawa A Purwosunu Y Nagatsuka M Morioka M Hayashi M Okai T Genetics of endometrial cancers Obstet Gynecol Int 2010 984013 6 Burgart L J Testing for defective DNA mismatch repair in colorectal carcinoma A practical guide Arch Pathol Lab Med 2005 129 1385 9 7 Lynch HT Lynch PM Lanspa SJ Snyder CL Lynch JF Boland CR Review o
25. ntre coloration EnVision FLEX Hematoxylin r f K8008 Tissu de contr le Appendice c lon Lames FLEX IHC Microscope Slides r f K8020 Recommand es pour une meilleure adh rence des coupes de tissu sur les lames de verre Montage Milieu de montage permanent non Une fois la proc dure de coloration aqueux requis termin e les coupes doivent tre d shydrat es claircies et mont es l aide d un milieu de montage permanent Appareillage Autostainer Link 48 Utiliser les flacons sp cifiques l appareil r f SK201 SK203 L utilisateur doit toujours lire la notice pour obtenir des instructions d taill es sur la proc dure de coloration et sur la manipulation du produit Coupes en paraffine l anticorps peut tre utilis pour le marquage des coupes de tissu fix es au formol et incluses en paraffine L amp paisseur des coupes d chantillons de tissu doit tre d environ 4 um Pretraitement le pr traitement des coupes de tissu fix es au formol et incluses en paraffine par d masquage des pitopes induit par la chaleur HIER est n cessaire Il est recommand de pr traiter les tissus par la m thode HIER a l aide de la solution de demasquage des cibles EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x r f K8004 dilu e Le d paraffinage la r hydratation et le demasquage des pitopes peuvent tre r alis s dans l appareil PT Link de Dako r f PT100 PT101
26. phoides 50 nucl aire 1 1 Tissu conjonctif 30 nucl aire 2 2 Cellules du tissu conjonctif 20 nucl aire Cervelet 3 3 3 Cellules de Purkinje 80 90 nucl aire Muscle squelettique 3 0 3 Cellules musculaires 3 3 Cellules gliales 50 nucl aire 3 3 Tissu conjonctif 10 20 nucl aire Cerveau 3 3 3 Cellules gliales 20 60 nucl aire Peau 3 2 2 pith lium basal 50 80 nucl aire Col de l ut rus 3 3 3 pith lium basal 80 100 nucl aire 3 3 Glande sudoripare 30 90 nucl aire 3 3 Cellules stromales 50 nucl aire Intestin gr le 3 3 3 Epith lium 60 a 80 nucl aire 3 3 Epith lium 50 80 nucl aire 3 3 Muscle lisse 30 a 40 nucl aire 3 3 Lymphocytes 20 a 40 nucl aire 3 3 Lymphocytes au repos 20 a 70 nucl aire 3 3 Tissu conjonctif 10 a 40 nucl aire 1 1 Lymphocytes r actifs 80 nucl aire sophage 3 3 3 Epithelium pidermo de 10 50 nucl aire 3 3 Tapis de sinus pulpe rouge 30 50 nucl aire 1 1 Tissu conjonctif 30 nucl aire Estomac 3 1 1 Tissu conjonctif 30 nucl aire 0 1 Lymphocytes 1 2 pith lium 10 nucl aire 3 3 Cellules cardiaques 50 60 nucl aire 1 1 Glande gastrique 10 nucl aire
27. reditary colorectal cancers deficient in MLH1 generally exhibit concomitant loss of PMS2 7 Antibodies to PMS2 are useful for identifying mismatch repair deficiencies in tumors of the gastrointestinal tract including HNPCC and associated extracolonic cancers by immunohistochemistry IHC PMS2 deficiency as determined by IHC has been reported in endometrial ovarian breast esophageal and ampullary carcinomas and melanomas 8 13 Refer to Dako s General Instructions for Immunohistochemical Staining or the detection system instructions of IHC procedures Ready to use monoclonal rabbit antibody provided in liquid form in a buffer containing stabilizing protein and 0 015 mol L sodium azide Clone EP51 Isotype Rabbit IgG Synthetic peptide corresponding to residues in human PMS2 protein In Western blotting of SHSY5Y cells anti PMS2 clone EP51 recognizes a major band at 110 kDa corresponding to the expected molecular weight of PMS2 1 For professional users 2 This product contains sodium azide NaN a chemical highly toxic in pure form At product concentrations though not classified as hazardous sodium azide may react with lead and copper plumbing to form highly explosive build ups of metal azides Upon disposal flush with large volumes of water to prevent metal azide build up in plumbing 3 As with any product derived from biological sources proper handling procedures should be used 4 Wear appropriate Personal Prot
28. rnia 93013 USA Tel 805 566 6655 Fax 805 566 6688 Technical Support 800 424 0021 Customer Service 800 235 5763 Ec REP Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 4485 9500 Fax 45 4485 9595 www dako com P01935EFG_001_IR087 2012 05 p 11 4
29. ropri pour viter tout contact avec les yeux et la peau 5 Les solutions non utilis es doivent tre limin es conform ment aux r glementations locales et nationales Conserver entre 2 et 8 Ne pas utiliser apr s la date de p remption indiqu e sur le flacon Si les r actifs sont conserv s dans des conditions autres que celles indiqu es celles ci doivent tre valid es par l utilisateur II n existe pas de signe particulier pour indiquer l instabilit de ce produit Par cons quent des contr les positifs et n gatifs doivent tre test s en m me temps que les chantillons de patients Si une coloration inattendue est observ e qui ne peut tre expliqu e par un changement des proc dures du laboratoire et en cas de suspicion d un probl me li l anticorps contacter l assistance technique de Dako tape Commentaires Fixation Formol Pr traitement EnVision FLEX High pH r f K8004 D masquage des pitopes induit par la chaleur HIER de 20 minutes proc dure 3 en 1 l aide de l appareil PT Link et de la station de rin age du PT Link Dilution Pr t l emploi Incubation de 30 minutes Tampon de Pr dilu dilution Contr le n gatif FLEX Negative Control Rabbit r f IR600 Visualisation EnVision FLEX High pH r f K8000 Incubation de 30 minutes Incubation de 30 minutes 2 incubations de 5 minutes avec le DAB Incubation de 5 minutes Coloration nucl aire Co
30. s stromales 50 40 nucl aire 60 nucl aire 3 3 Epithelium folliculaire 10 3 3 Myom tre 50 nucl aire 50 nucl aire Pancr as 3 3 3 Cellules acinaires 50 60 nucl aire 3 3 Cellules des lots de Langerhans 10 30 nucl aire 3 3 Cellules canalaires pancr atiques 10 40 nucl aire Tissus tumoraux dans les tumeurs d ficientes en PMS2 aucune coloration nucl aire ne doit tre observ e dans les cellules n oplasiques Une population de cellules b nignes doit pr senter une coloration nucl aire et servir de tissu de contr le interne Deutsch Code Nr IR087 Zur In vitro Diagnostik FLEX Monoclonal Rabbit Anti Human Postmeiotic Segregation Increased 2 Clone EP51 Ready to Use Link ist f r die Verwendung in der Immunhistochemie zusammen mit Autostainer Link Ger ten bestimmt Antik rper f r Postmeiotic segregation increased 2 PSM2 k nnen hilfreich bei der Differentialidentifizierung von kolorektalen Karzinomen sein Ein Defekt von PMS2 wird mit dem Auftreten des erblichen nicht polyp sen kolorektalen Karzinoms hereditary non polyposis colorectal cancer HNPCC assoziiert 1 2 Die klinische Auswertung einer eventuell eintretenden F rbung sollte durch morphologische Studien mit ordnungsgem en Kontrollen erg nzt werden und von einem qualifizierten Pathologen unter Ber cksichtigung der Krankengeschichte und anderer Diagnostikt
31. tochemical staining procedure For greater adherence of tissue sections to glass slides the use of FLEX IHC Microscope Slides Code K8020 is recommended After staining the sections must be dehydrated cleared and mounted using permanent mounting medium Staining procedure Visualization The recommended visualization system is EnVision FLEX High pH Link Code K8000 Program The staining steps and incubation times are pre programmed into the Autostainer Link software The recommended reagent application volume is 1 x 200 uL or 2 x 150 uL per slide Please refer to the proper Autostainer Link User Guide for detailed instructions on loading slides and reagents If the protocols are not available on the Autostainer Link platform please contact Dako Technical Services An Autostainer Link software installer can be found at www dako com Installer This installer will update DakoLink software with protocol and reagent information for Anti PMS2 Clone EP51 The short name for the antibody protocol is PMS2 EP51 All incubation steps should be performed at room temperature Counterstaining The recommended counterstain is EnVision FLEX Hematoxylin Link Code K8008 Non aqueous permanent mounting medium is recommended Controls Positive and negative controls should be run simultaneously using the same protocol as the patient specimens The positive control tissue should include appendix or colon and the cells structures should display reaction
32. unting required After staining the sections must be dehydrated cleared and mounted using permanent mounting medium Instrumentation Autostainer Link 48 Use instrument specific vials Code SK201 SK203 The user must always read the package insert for detailed instructions of the staining procedure and handling of the product Specimen preparation Paraffin sections The antibody can be used for labeling formalin fixed paraffin embedded tissue sections Tissue specimens should be cut into sections of approximately 4 um Pre treatment Pre treatment of formalin fixed paraffin embedded tissue sections with heat induced epitope retrieval HIER is required Pretreating tissues with HIER using diluted EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code K8004 is recommended Deparaffinization rehydration and epitope retrieval can be performed in Dako PT Link Code PT100 PT101 For details please refer to PT Link User Guide The following parameters should be used for PT Link Pre heat temperature 65 epitope retrieval temper ature and time 97 for 20 1 minutes cool down to 65 Remove slide rack from PT tank and immediately dip slides in jar tank e g PT Link Rinse Station Code PT109 containing diluted room temperature EnVision FLEX Wash Buffer 20x Code K8007 Leave slides in Wash Buffer for 1 5 minutes The tissue sections should not dry out during the treatment or during the following immunohis
33. wenden Code Nr SK201 SK203 Der Anwender muss stets die Packungsbeilage lesen um sich ber die detaillierten Anweisungen f r das F rbeverfahren und die Handhabung des Produkts zu informieren Paraffinschnitte Der Antik rper eignet sich zur Markierung von formalinfixierten paraffineingebetteten Gewebeschnitten Gewebeproben sollten in Schnitte von ca 4 um St rke geschnitten werden Vorbehandlung Es ist eine Vorbehandlung der formalinfixierten und paraffineingebetteten Gewebeschnitte durch hitzeinduzierte Epitopdemaskierung HIER erforderlich Die Vorbehandlung des Gewebes mit HIER unter Verwendung von verd nnter EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code Nr K8004 wird empfohlen Entparaffinierung Rehydrierung und Epitopdemaskierung k nnen im Dako PT Link Code Nr PT100 PT101 vorgenommen werden Weitere Informationen hierzu siehe PT Link Benutzerhandbuch F r PT Link sollten die folgenden Parameter verwendet werden Vorw rmtemperatur 65 C Temperatur und Zeit f r Epitopdemaskierung 97 f r 20 1 Minuten auf 65 abk hlen Das Objekttragergestell aus dem PT Link Beh lter herausnehmen und die Objekttr ger sofort in ein Gef einen Beh lter z B PT Link Rinse Station Code Nr PT109 mit verd nntem auf Zimmertemperatur gebrachtem EnVision FLEX Wash Buffer 20x Code Nr K8007 eintauchen Die Objekttr ger f r 1 5 Minuten im Wash Buffer belassen Die Gewebeschnitte d rfen w hrend der
34. zellen 50 nukle r Speichel dr sen 3 3 3 Duktusepithel 60 80 nukle r Knochenmark 2 2 2 Blastzellen 10 20 nukle r 3 3 Dr senepithel 20 80 nukle r Mamma 3 1 1 Dr senepithel 80 nukle r 1 1 Glatte Muskelzellen 30 nukle r 2 2 Duktusepitel 80 nukle r 1 1 Lymphoide Zellen 50 nukle r 1 1 Bindegewebe 30 nukle r 2 2 Bindegewebszellen 20 nukle r Zerebellum 3 3 3 Purkinje Zellen 80 90 nukle r Skelett muskulatur 3 0 3 Muskelzellen 3 3 Gliazellen 50 nukle r 3 3 Bindegewebe 10 20 nukle r Zerebrum 3 3 3 Gliazellen 20 60 nukle r Haut 3 2 2 Basalepithel 50 80 nukle r Zervix 3 3 3 Basalepithel 80 100 nukle r 3 3 Schwei dr sen 30 90 nukle r 3 3 Stromazellen 50 nukle r D nndarm 3 3 3 Epithel 60 80 nukle r 3 3 Epithel 50 80 nukle r 3 3 Glatte Muskelzellen 30 40 nukle r 3 3 Lymphozyten 20 40 nukle r Milz 3 3 3 Ruhende Lymphozyten 20 70 nukle r 3 3 Bindegewebe 10 40 nukle r 1 1 Reaktive Lymphozyten 80 nukle r Speiser hre 3 3 3 Plattenepithel 10 50 nukle r 3 3 Sinus auskleidende Zellen rote Pulpa 30 50 nukle r 1 1 Bindegewebe 30 nukle r 1 1 Bindegewebe 30 nuk
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