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Faculté de Médecine, de Pharmacie et d`Odonto

1. 2 LES VALEURS DE REFERENCE DE L HB A Les 95 des valeurs de l h moglobine A taient comprises entre 2 50 et 3 68 La moyenne est de 2 98 0 23 Metaxotou et al ont rapport des valeurs moyennes de 2 5 chez l enfant de 6 mois 2 7 1 an 2 9 18 mois et 2 8 2 ans 30 Wajman a rapport une valeur moyenne de l h moglobine A similaire la n tre 31 Le taux moyen d h moglobine A de notre tude tait en revanche significativement sup rieur ceux rapport s par certains auteurs 12 13 14 Ces diff rences observ es entre les diff rents pays pourraient trouver leur explication dans des diff rences m thodologiques les caract ristiques des populations les techniques d analyses et la Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 45 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako taille des chantillons Ceci justifie l tablissement des normes locales pour chaque param tre biologique et par chaque laboratoire Dans notre tude la valeur moyenne comme les valeurs extr mes du taux d HbA ne diff rent pas selon le genre et l ge 3 LES PARAMETRES ERYTHROCYTAIRES 3 1 Le nombre des globules rouges et le taux d h moglobine Le nombre de GR comme le taux d h moglobine tait plus lev chez l homme que chez la femme Mais cette diff rence n est pas significative Ce r sultat a t confirm par l institut r gional d h matologi
2. Les r actifs ont t stock s entre 8 c et 30 c jusqu la date de p remption contr les et calibrants entre 2 c et 8 c jusqu la date de p remption Mode op ratoire L analyseur compte par imp dance le nombre des globules blancs des globules rouges et des plaquettes Les cellules en suspension dans un milieu isotonique traversent un orifice o un champ lectrique est tabli En passant travers l orifice les cellules provoquent une augmentation d imp dance proportionnelle leur volume L instrument compte le nombre de cellules et les trie en fonction de leur taille permettant ainsi l analyse de leur distribution Le grand nombre de cellules compt es am liore beaucoup l exactitude de l appareil en r duisant consid rablement le risque d erreurs statistiques L am lioration des instruments et des r actifs en h matologie a permis de d terminer en routine le nombre des globules rouges des plaquettes et des globules blancs L introduction de techniques compl mentaires comme le centrage hydrodynamique et l analyse combin e de l imp dance et de la lumi re diffus e par les cellules iIlumin es par un rayon laser focalis permettent l analyse de 5 populations de leucocytes lymphocytes monocytes polynucl aires neutrophiles basophiles et osinophiles Pour tre utilis s sur l analyseur les r actifs ont t pr sent s avec des caract ristiques bien particuli res Le diluant a
3. rence de l h moglobine A Bamako Num ration cellulaire automatique Sur Diana 5 X nia SOMMAIRE I Principe II Calibrateur Contr les et R actifs II Mesures de s curit s Conservation sur le pr l vement chantillons et r actifs IV Mode op ratoire y Valeurs de r f rence et limites patient Principe DIANA 5 X nia compte par imp dance le nombre des leucocytes d rythrocytes et de thrombocytes Calibrateur et Contr les e Calibrateur HYCEL CAL R f R2C7020A 2 tubes e Contr le DIANATROL N R f R2A7040A 4 N e Contr le DIANATROL AQ R f R2A7141A 1B 4N 1H e Contr le DIANATROL AQ Plus R f R2A7242A 2B 4N 2H R actifs v HEMALYSE 5 HEMATON 5 y HEMACORE Mesures de s curit s sur le pr l vement conservation des chantillons et r actifs L chantillon de sang veineux a t pr lev sur anticoagulant EDTA K2 ou Na2 le calibrage du VGM varie de 2 3 selon l anti coagulant Le rapport d EDTA K2 au sang total tait de 1 2 mg par ml de sang Les chantillons ont t conserv s temp rature ambiante 20 2 c et les analyses effectu es dans les douze heures suivant le pr l vement Les chantillons ont t transport s et conserv s 2 8 c Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 61 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako Num ration cellulaire automatique Sur Diana 5 X nia
4. 2 g l d quivalents triglyc rides gt de la bilirubin mie apr s surcharge d chantillons en bilirubine de 0 a 513 umol l Il est n anmoins conseill de ne pas utiliser d chantillons visiblement h molys s lip miques ou ict riques et d effectuer si possible un nouveau pr l vement 2 Stabilit des chantillons Les chantillons peuvent tre stock s 7 jours 2 8 c au maximum au del les congeler 25 6 c Ce delai n a pas t d pass pour nos cas Mode op ratoire 1 Saisie des donn es de la carte MLE A l ouverture d un nouveau lot les sp cifications ou donn es usine ont t entr es dans l instrument VIDAS ou mini VIDAS l aide de la carte MLE fiche de sp cifications Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 32 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako incluse dans chaque coffret Si cette op ration n tait pas effectu e avant de commencer les tests l instrument ne pourrait pas diter de r sultat Ces sp cifications ne sont entr es qu une seule fois pour chaque lot Il est possible de saisir les sp cifications manuellement ou de fa on automatique gr ce la carte MLE 2 Calibration La calibration l aide d un Calibrateur fourni dans le coffret doit tre effectu e l ouverture de chaque nouveau lot apr s entr e des sp cifications du lot puis tous les 14 jours Cette op rat
5. Dispositions particuli res e Utiliser pour le frottis une lame d graiss e pr te l emploi e Apr s la confection du frottis s cher imm diatement le frottis l air pour viter la r action cellulaire Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 69 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako D termination De la Ferritine s rique Par VIDAS Ferritin Objet Ce document d crit la proc dure d analyse des chantillons de sang par VIDAS Ferritin Domaine d application Biologiste Pharmacien ou M decin Etudiant en Ann e de th se ou Interne de Pharmacie ou de M decine Technicien de laboratoire Document de r f rence Manuel de l operateur Sommaire I PRINCIPE IL MATERIEL ET REACTIFS HI PRECAUTIONS D UTILISATION IV CONDITIONS DE STOCKAGE DES REACTIFS ET ECHANTILLONS V MODE OPERATOIRE VI INTERPRETATION DES RESULTATS VII LIMITES DU TEST Principe Le principe du dosage associe la m thode immunoenzymatique par sandwich en une tape une d tection finale en fluorescence ELFA Mat riel et R actifs e Pipette embout jetable permettant la distribution de 100 ul e Gants non talqu s usage unique e Lunettes e Blouse e Immunoglobulines monoclonales de souris anti Ferritine marqu es la phosphatase alcaline azoture de sodium e Tampon de lavage 1 phosphate de sodium e Tampon de lavage 2 di thanolamine
6. La production des r actifs a t effectu e dans des conditions de contr les stricts du niveau de poussi re en atmosph re filtr e dans des locaux en surpression La filtration st rilisante 0 22 um des produits permet d assurer leur protection contre des contaminations significatives en micro organismes et en poussi res Des agents conservateurs freinent le d veloppement de germes qui pourraient contaminer les r actifs lors de leur utilisation Le comptage des GB n cessite une destruction rapide des GR L agent de lyse d truit la membrane des GR r duisant la plupart du temps le stroma cellulaire l tat de d bris de tr s petites tailles qui ne sont plus d tectables par la m thode de mesure Cette action lysante a t ralentie pour pr server au mieux la structure nucl aire des globules blancs D autres facteurs ont leur importance pour assurer la qualit des r sultats par exemple une agitation suffisante des chantillons de sang 8 retournements complets doux successifs pour un tube de moins de 5 ml de 75 mm de haut rempli 75 au plus Dans le cas ou le sang a t s diment plus de 4 H l agitation a t prolong e Comptage des GB GR et PIt L analyseur compte les globules blancs les globules rouges comme les plaquettes par mesure de l imp dance lectrique Le sang est dilu avec une solution saline isotonique qui maintient la forme des globules et qui conduit le courant lectrique Un volume pr
7. Le choix de ce laboratoire a t motiv du fait que c tait le seul laboratoire capable de determiner les fractions d hemoglobines sur Capillarys 2 Sebia 2 Description des sites de recrutement 2 1 Description du service de p diatrie du CHU Gabriel TOURE Le service de p diatrie est situ au sein du CHU GT qui est sur la rive gauche du fleuve Niger dans la ville de Bamako la capitale du Mali Ce service est dirig par deux Professeurs de p diatrie assist par un ma tre de conf rence chef de service deux ma tres assistants cinq m decins p diatres deux m decins g n ralistes vingt huit m decins en cours de sp cialisation neuf techniciens sup rieurs de sant dix neuf techniciens de sant douze aides soignants et quatre man uvres Il s agit d un service de troisi me niveau de r f rence de la pyramide sanitaire au Mali qui re oit les enfants des communes Il et IMI essentiellement avec environs 50 000 consultations annuelles Ces deux communes ont respectivement 159 805 et 128 872 habitants environs Le d partement de p diatrie est divis en deux parties A l tage e L oncologie p diatrique comprend 10 salles climatis es dont chacune dispose d un lit r serv l hospitalisation des enfants canc reux Une salle de consultation Une salle de soins La p diatrie IV comprend 4 grandes salles dont chacune dispose de 4 lits r serv s l hospitalisation des enfants de
8. Les valeurs de r f rence propos es par d faut le sont seulement titre indicatif Chaque laboratoire doit tablir lui m me les valeurs de R f rence Patient et ses Valeurs Limites et indiquer dans son Manuel d Assurance Qualit GBEA Guide de Bonne Ex cution des Analyses la source de telles valeurs Lorsqu un r sultat est signal en Valeur Limite l chantillon de sang est reanalys pour contr ler sa reproductivit Il est aussi compar un r sultat ant c dent le cas ch ant Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 27 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako 7 5 2 Num ration manuelle des r ticulocytes Principe Il consiste compter les globules rouges jeunes Mat riel et r actifs e Un bain marie 37 C e Un tube h molyse sec e Une lame porte objet e Huile d immersion e Vortex G nie e Portoirs pour lames e Le colorant le bleu de cr syl brillant qui est re u dans le laboratoire de biologie clinique de la FMPOS sous forme de poudre conserv e dans des flacons teint s 25g e Gants e Blouses Mode op ratoire 1 Pr paration du Colorant A l aide de la poudre on pr pare la solution de bleu de cr syl brillant 1 dans de l eau physiologique que l on filtre 2 R alisation des frottis On fait un m lange partie gale de sang et de solution de bleu de cr syl brillant 1 On agite ce m lange au Vortex G nie et o
9. cis de sang dilu est inject travers un orifice de diam tre 75um dans un cymom tre de flux quantitatif pour les GR Plt comme pour les GB alors qu un courant constant est appliqu de part et d autre de l orifice Lorsqu une cellule passe travers un orifice elle d place son propre volume de diluant augmentant ainsi momentan ment la r sistance au passage du courant lectrique Cette variation temporaire de l imp dance est proportionnelle au volume de diluant d plac c est dire au volume de la cellule L instrument amplifie les impulsions lectriques et les compte pour d terminer le nombre des GB GR et Pt Sur l histogramme de distribution en taille des plaquettes on constate parfois que les bases des histogrammes des GR et Plt se recouvrent Lorsque ce recouvrement est important il n est pas possible de d terminer simplement le seuil appropri entre les deux Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 24 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako populations et des algorithmes plus sophistiqu s sont n cessaires pour distinguer les plaquettes des globules rouges L analyseur corrige le r sultat des plaquettes La distribution non corrig e reste repr sent e en noir dans l histogramme des plaquettes Comme les GR sont g n ralement 500 1000 fois plus nombreux que les GB il faut d truire les premiers pour pouvoir compter les seconds C est pourq
10. dans l histogramme des plaquettes Comme les GR sont g n ralement 500 1000 fois plus nombreux que les GB il faut d truire les premiers pour pouvoir compter les seconds C est pourquoi ces cellules sont analys es sur des pr parations diff rentes Les GB sont mesur s sur une dilution h molys e au 1 251ul Les GR et Plt sont mesur s sur une dilution au 1 6000 r alis e en cascade depuis une pr dilution au 1 72 Les GB n interf rent g n ralement plus de fa on significative sur le comptage des GR ce taux de dilution Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 64 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako Num ration cellulaire automatique Sur Diana 5 X nia Lorsque la dilution des GR PIt est termin e l agent de lyse est ajout une partie de la pr dilution afin de d truire la membrane des GR et lib rer ainsi leur contenu en h moglobine Formule leucocytaire Les sous populations leucocytaires ont t distingu es les unes des autres par l analyse du cytogramme que l on obtient en combinant les informations lectriques et optiques appari es cellule par cellule Certaines conditions de test tels que l chantillonnage dilution temp rature de la r action m lange r actionnel et dur e de la r action sont contr l es par l analyseur D autres conditions telles que la temp rature ambiante comme celles des r actifs et des chanti
11. de Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 74 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako D termination De la Ferritine s rique Par VIDAS Ferritin la RFV Relative Fluorescence Value est le r sultat de la diff rence des deux mesures Il apparait sur la feuille de r sultats Les r sultats sont calcul s automatiquement par l instrument par rapport une couche de calibration m moris e mod le math matique lt lt mod le logistique 4 param tres gt gt et sont exprim s en ng ml pr paration NIBSC 80 578 Les chantillons pr sentent des concentrations en ferritine sup rieures 1 200 ng ml doivent tre redos s apr s dilution au 1 10 voire au 1 100 dans le tampon de dilution FER R1 Si le facteur de dilution n a pas t saisi lors de la cr ation de la liste de travail voir Manuel d utilisation multiplier le r sultat par le facteur de dilution pour avoir la concentration de l chantillon L interpr tation des r sultats du test doit tre faite en tenant compte du contexte clinique et ventuellement des r sultats d autres tests Limite du test Une interf rence peut tre rencontr e avec certains s rums contenant des anticorps dirig s contre des composants du r actif c est pourquoi les r sultats de ce test doivent tre interpr t s en tenant compte du contexte clinique et ventuellement des r sultats d autres tests Th se
12. de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 41 Effectif 41 16 ans 45 ans 21 Moyenne 1DS 2 98 0 22 73 84 39 80 4 68 0 38 13 35 0 97 88 08 2 19 28 56 1 17 32 43 0 88 38 26 10 13 94 Signification P 0 95 0 84 0 63 0 01 0 01 0 01 0 01 0 01 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako La comparaison de ces param tres selon l ge ne montre pas de diff rence entre l enfant et l adulte pour taux d h moglobine A de ferritine s rique ou du nombre de globules rouges Les valeurs des autres param tres Hb VGM TCMH CCMH R tic sont en revanche significativement plus hautes chez l adulte que l enfant p lt 0 05 Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 42 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako Tableau VI moyenne 1DS des param tres tudi s selon le sexe Effectif 41 Moyenne IDS Moyenne 1DS p Hb A 2 97 0 22 2 99 0 25 0 78 FS ng L 82 39 47 30 59 85 35 36 0 10 GR T ra L 4 72 0 33 4 56 0 38 0 16 Hb g dl 12 83 1 47 12 23 0 71 0 12 VGM fl 84 22 5 54 83 83 4 76 0 81 TCMH pg cell 27 10 2 09 26 89 2 00 0 74 CCMH g dl 32 17 0 85 32 04 0 74 0 61 R tic 10 mm 33 71 14 79 32 39 10 79 0 75 FS Ferritine S rique Effectif selon le genre 1DS une d viation standard Aucune diff rence sig
13. de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 75 Bakary Kossa DEMBELE
14. de r duire le risque caus par le passage simultan de plus d une cellule dans l orifice Lorsque la concentration s l ve les passages en co ncidence deviennent in vitables Le proc d de focalisation hydrodynamique qui centre et tire le flux de dilution cellulaire r duit consid rablement ce risque sans l liminer totalement L analyseur dispose d algorithmes pour corriger automatiquement les r sultats L analyseur contr le aussi la fr quence d acquisition des signaux Au del de certaines fr quences la vitesse d injection de la pr paration cellulaire est r duite automatiquement Ce proc d brevet tend la lin arit des niveaux tr s lev s La lin arit th orique du comptage de particules est port e 20 T ra L et 1 5 T ra L respectivement pour le canal des GR et celui des GB Toutefois compte tenu de la difficult se procurer de tels chantillons les lin arit s revendiqu es pour le comptage des particules ont t d termin es avec des kits sp cialis s disponibles dans le commerce 8 5 T ra L pour le canal GR et 450 giga L pour le canal GB Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 23 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako Le diluant a un effet important sur la mesure du Volume Globulaire Moyen De stricts contr les ont t effectu s en production pour maintenir constants l osmolarit et le pH d un lot l autre
15. e Feuille A4 Rame Mode op ration Le syst me Capillarys utilise le principe de l lectrophor se capillaire en solution libre Avec cette technique les mol cules charg es sont s par es dans un champ lectrique haute tension selon leur mobilit dans un tampon alcalin et selon le flux lectroosmotique Le syst me Capillarys poss de des capillaires mont s en parall le permettant sept analyses simultan es L chantillon est dilu dans la solution h molysante puis inject Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 29 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako par l aspiration l extr mit anodique du capillaire Les h moglobines sont s par es par application d une haute tension puis d tect es directement 415 nm cot cathodique Avant chaque test les capillaires sont lav s avec une solution de lavage puis remplis de tampon pour l analyse suivante En tampon alcalin les h moglobines normales et anormales ou variants sont d tect es dans l ordre suivant de la cathode vers l anode A 2 variant A2 C A2 0 Arab E S D G Philadelphia F A Hope Bart J N Baltimore et H A 415nm l anhydrase carbonique n est pas visualis e sur le profil lectrophor tique ce qui permet d identifier les variants de l h moglobine A qui migrent dans cette zone Pr paration de l chantillon Laisser s dimenter les globules rouges pendant p
16. 05 L analyse de ces donn es a montr que les valeurs de l h moglobine A2 sont comprises entre 2 50 et 3 68 Nous n avons pas trouv de diff rence statistiquement significative de la fraction A2 de l h moglobine selon l ge ou le sexe des volontaires soumis l tude Ces r sultats incitent d terminer syst matiquement des valeurs de r f rence biologiques propres chaque population dans son contexte g ographique Mots cl s valeurs HbA Bamako Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 54 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako Fiche Signalitique Nom et pr noms DEMBELE Bakary Kossa Email bakarykossa dembele yahoo fr Tel 00223 79 38 04 00 Ann e de soutenance 2011 2012 Nationalit Malienne Lieu de d p t Biblioth que de la FMPOS Secteur d int r t H matologie H moglobinopathie R sum Du 17 aout au 07 octobre 2009 nous avons conduit une tude prospective chez 41 sujets g s de 6 mois 45 ans tous sexes et ges confondus dans le district de Bamako Elle s est d roul e au service de p diatrie de CHU GT CHME Luxembourg et la Facult de M decine de Pharmacie et d Odonto Stomatologie de Bamako Cette tude avait pour objectif de d terminer les valeurs de r f rence de la fraction A2 de l h moglobine dans cette population L tude a t autoris e par le comit d thique institutionnel de facu
17. 2 ans e L unit de r animation et de n onatologie comprend 4 salles d hospitalisations Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 16 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako Une salle pour les nouveaux instables Une salle pour les nouveaux pr matur s instables Une salle pour les nouveaux stables Une salle pour les pr matur s stables Une salle de surveillance r guli re Une salle d observation des nouveaux vus au cours de la permanence et de garde dont l tat ne n cessite pas une hospitalisation Une salle d observation des b b s kangourou e Une unit kangourou compos e de 2 salles d hospitalisation Une salle de consultation L unit kangourou a pour but le suivi de l enfant pr matur e Six 6 salles d hospitalisations V I P En bas de l tage Le service de p diatrie I compos e de Trois 3 salles d hospitalisations comportant chacune huit 8 lits Une salle de soins e Le service de p diatrie II compos e de Trois 3 salles d hospitalisations comportant chacune huit 8 lits Une d observation Une boxe de consultation des urgences Une occup e par le CVD Une occup e par le DEAP e Le service des urgences p diatriques compos e de Une salle d hospitalisation comprend Trois 3 salles reparties comme suite Une salle pour les grands enfants Deux 2 salles pour les nourrissons Une salle de consul
18. MPOS Universit de Bamako 13 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako se caract risent par une baisse du taux d h moglobine A2 Le taux d h moglobine F comme celui de l h moglobine A peuvent toutefois tre modifi s au cours de pathologies diverses ou d tats physiologiques comme la carence martiale l h molyse la dr panocytose les h moglobinopathies par l h moglobine instable l rythropo se accrue la grossesse les sorties d aplasies m dullaires les suites de greffe de moelle osseuse les r cup rations d rythroblastop nies transitoires les h mopathies malignes l insuffisance m dullaire globale la Leuc mie my lo de chronique la maladie de Fanconi ou de Backfan Damond le syndrome my lomonocytaire de l enfant les syndromes pr leucemiques les h morragies aigu s la persistance h r ditaire de la synth se de l h moglobine f tale s accompagne d un taux d h moglobine F lev variant entre 1 et 35 selon les mutations 8 9 Apr s migration en pH alcalin technique utilis e plus couramment jusqu une p riode r cente le taux d h moglobine A n est pas valuable chez le sujet ayant l h moglobine C cause de sa co migration avec cette h moglobine De ce fait les complications sp cifiques l association h moglobine C et thalass mie sont peu d crites Le syst me Capillarys est un syst me qui permet en routine de s pa
19. Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 26 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako La focalisation hydrodynamique ne permettant pas d viter compl tement les ph nom nes de co ncidence un algorithme r alise automatiquement l limination des signaux d form s par le ph nom ne de co ncidence pour construire l histogramme de distribution selon la taille des cellules L histogramme relatif donne une image encore plus exacte de la distribution en volume des cellules Les autres param tres savoir H matocrite Hte Teneur Corpusculaire Moyen en H moglobine TCMH et Concentration Corpusculaire Moyen en H moglobine CCMH sont calcul s par des formules suivantes Hte VGM x Nbre GR TCMH Hb g dl NbreGR mm CCMH z Hb g dl Ht Valeurs de r f rence et limites patient L analyseur compare les r sultats mesur s pour chaque patient avec les R f rences Patients s lectionn s et les valeurs Limites Si un r sultat exc de la R f rence Patient correspondante il apparait en bleu l cran et l impression un signe ou un signe est ajout selon qu il est sup rieur ou inferieur l intervalle de r f rence Sil est en dehors des Valeurs Limites le r sultat apparait en rouge l cran comme l impression le param tre est soulign l impression pleine page et demi page Un point accompagne le signe ou affich
20. Pharmacien ou M decin Etudiant en Ann e de th se ou Interne de Pharmacie ou de M decine Technicien de laboratoire Document de r f rence Manuel de l operateur Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 56 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako D termination Des types d h moglobines Par le Capillarys 2 Sebia SOMMAIRE I Principe II Mat riels et R actifs I Mode op ration IV Pr paration de l chantillon V Limites et Mesures de s curit s Principe Il consiste d terminer quantitativement et s parer les diff rents types d h moglobines dans un champ lectrique en fonction de leur charge et leur mobilit Mat riels et r actifs e EDTA ou Citrate H parine e Tampon alcalin e Solution h molysante e Solution de lavage e Centrifugeuse e Vortex e Imprimante ou ordinateur e Gants e Coton ou compresse e Blouses e Feuille A4 Rame Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 57 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako Mode op ration Le syst me Capillarys utilise le principe de l lectrophor se capillaire en solution libre Avec cette technique les mol cules charg es sont s par es dans un champ lectrique haute tension selon leur mobilit dans un tampon alcalin et selon le flux D termination Des types d h moglobines Par le Capillarys 2 Sebia l
21. S Universit de Bamako 33 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako e Homog n iser l aide d un agitateur de type vortex le Calibrateur le contr le et les chantillons e Distribuer 100ul de Calibrateur d chantillon ou de contr le dans le puits chantillon e Placer dans l instrument les c nes et les cartouches Bien v rifier la concordance des codes couleurs et lettres entre le c ne et la cartouche e D marrer l analyse voir Manuel d utilisation Toutes les tapes sont alors g r es automatiquement par l instrument Les r sultats sont obtenus en 30 minutes environ e A la fin de l analyse retirer les c nes et les cartouches de l instrument e Fliminer les c nes et cartouches utilis s dans un r cipient appropri 5 Interpr tation des r sultats D s le test termin les r sultats sont analys s automatiquement par le syst me informatique L instrument effectue deux mesures de fluorescence dans la cuvette de lecture pour chacun des tests La premi re lecture prend en compte le bruit de fond d la cuvette substrat avant mise en contact du substrat avec le c ne La seconde lecture est effectu e apr s incubation du substrat avec l enzyme pr sente dans le c ne Le calcul de la REV Relative Fluorescence Value est le r sultat de la diff rence des deux mesures Il apparait sur la feuille de r sultats Les r sultats sont calcul s automa
22. aille de l chantillon et pr l vements La taille de l chantillon de cette tude a t d termin e conform ment aux directives publi es par la NCCLS National Consensus Committee on Laboratory Standards du comit national am ricain sur les standards des laboratoires 11 Selon la NCCLS le nombre minimum de valeurs observ es requises pour les percentiles 2 5 et 97 5 d une distribution est de 39 et recommande en cons quence d inclure au moins 120 sujets c est ainsi que dans cette tude nous avons inclus 127 volontaires pour le sous groupe des enfants et adolescents et 123 pour le sous groupe des adultes Du fait de la nature des examens biologiques deux types de pr l vements ont t effectu s un sur tube contenant un anticoagulant EDTA et un sur tube sec La quantit totale de sang pr lev tait de 4 ml pour les enfants et 10 ml chez les adultes Tous les pr l vements ont t des pr l vements veineux Le tube EDTA K tait destin l h mogramme le taux des r ticulocytes et l lectrophor se de l h moglobine et le tube sans anticoagulant tait destin la d termination du taux de ferritine s rique pour tous les volontaires Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 20 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako 6 1 Crit res d inclusion e Tout sujet g de 6 mois 45 ans ayant donn son consentement clair ou pour qui un assen
23. bleau III moyenne 1DS m diane et valeurs de r f rence de l h moglobine A de nos 41 volontaires H moglobine Moyenne 1DS M diane Percentile Percentile 25 97 5 A2 2 98 0 23 3 00 2 50 3 68 Les 95 des valeurs de l h moglobine Az chez nos volontaires se situent entre 2 50 et 3 68 La valeur moyenne est de 2 98 0 23 Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 39 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako Tableau IV valeurs moyennes 1DS et m dianes des autres param tres tudi s Effectif 41 Param tres Moyenne 1DS M diane FS ng L 72 49 43 47 57 00 GR T ra L 4 65 0 36 4 70 Hb g dl 12 57 1 22 12 50 VGM 1 84 05 5 15 85 60 TCHM pg cell 27 01 2 03 27 30 CCMH g dl 32 11 0 80 32 00 7 R tic mm 331310741304 2920 1DS une d viation standard Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 40 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako Tableau V moyenne 1DS des param tres tudi s selon la tranche d ge Param tres 6 mois 15 ans 20 Moyenne 1DS Hb A2 2 98 0 24 FS ng L 71 07 48 04 GR T ra L 4 63 0 34 Hb g dl 11 74 0 87 VGM l 79 85 3 82 TCMH pg cell 25 38 1 34 CCMH g dl 31 78 0 54 R tic mm 27 75 10 9 70 FS Ferritine S rique Effectif selon la tranche d ge 1DS une d viation standard Th se
24. bli en f vrier 1984 un premier document lt lt Standard Approved gt gt intitul lt lt Reference Procedure for the Quantitative D termination of Hemoglobin in Blood gt gt 11 La derni re dition de ce standard approuv H 15 A3 a t publi le 12 01 2000 L agent de lyse ajout dans la dilution des GB contient un sel de cyanure 0 03 qui r agit avec l h moglobine lib r e des rythrocytes pour tre convertie en un compos cyanmeth moglobinique Son absorbance est lue 560 nm travers la chambre des GR La mesure de la cyanmeth moglobine test e est compar e celle d une r f rence un blanc r actif alors que la chambre des GB est remplie de diluant isotonique propre Une fonction du rapport de ces deux mesures d termine la concentration en h moglobine L instrument affiche et imprime le r sultat avec le syst me d unit s s lectionn dans le laboratoire en g dl ou g l D termination du VGM et du VMP Pour diverses raisons les impulsions des cellules qui passent pr s des bords de l orifice sont d form es Leurs amplitudes peuvent tre sur estim es jusqu 30 ce qui conduit sur la plupart des analyseurs des histogrammes de r partition en taille artificiellement d form s sur la droite Pour compenser ce ph nom ne qui perturbe gravement la mesure de l IDR Indice Distribution GR la plupart des analyseurs m me de haute gamme ne disposant pas de la focalisation hydrod
25. ce de l h moglobine A Bamako 10 LISSOIR B WALLEMACQ P MAISIN D Electrophor se des prot ines s riques comparaisons de la technique en capillaire de zone Capillarys Sebia Ann Biol Clin 2003 61 557 62 11 NCCLS How to Define and Determine Reference Intervals in the Clinical Laboratory Approved Guideline Second Edition C28 A2 Vol 20 No 13 2000 12 LUSINA D SIFI A MATHIEU P ADAM M N LE PENNEC M P GUEROUT T BALEDENT F Evaluation of high performance liquid chromatography modular system for the diagnosis of haemoglobinopathies Ann Bio Clin Vol 56 No 6 734 9 Novembre D cembre 1998 Prat quot http www jle com en print e docs 00 00 C5 69 article phtml consult le 11 06 2009 13 TAN G B AW T C DUNSTAN R A and LEE S H Evaluation of high performance liquid chromatography for routine estimation of haemoglobins A2 and F Clin pathol 1993 46 852 856 14 FR D RIC C CHANGYNIG L BERNARD F B ATRICE G JACQUES J FRAN OISE V Evaluation of a Capillary Electrophoresis Method for Routine Determination of Hemoglobins A and F Clinical Chemestry 45 2 237 243 1999 15 BAO W DALFERS ER SRINIVASAN SR WEBBER LS BERENSON GS Normative distribution of complete blood count from early chilhood through adolescence the Bogalusa Heart Study Pre Med 1993 22 825 37 Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 51 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f re
26. d chantillons en lipides de O 2 g L d quivalents triglyc rides gt de la bilirubin mie apr s surcharge d chantillons en bilirubine de 0 513 umol L Il est n anmoins conseill de ne pas utiliser d chantillons visiblement h molys s lip miques ou ict riques et d effectuer si possible un nouveau pr l vement 2 Stabilit des chantillons Les chantillons peuvent tre stock s 7 jours 2 8 c au maximum au del les congeler 25 6 c Ce delai n a pas t d pass pour nos cas Eviter les cong lations et d cong lations successives Mode op ratoire 1 Saisie des donn es de la carte MLE Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 72 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako D termination De la Ferritine s rique Par VIDAS Ferritin A l ouverture d un nouveau lot les sp cifications ou donn es usine ont t entr es dans l instrument VIDAS ou mini VIDAS l aide de la carte MLE fiche de sp cifications incluse dans chaque coffret Si cette op ration n tait pas effectu e avant de commencer les tests l instrument ne pourrait pas diter de r sultats Ces sp cifications ne sont entr es qu une seule fois pour chaque lot Il est possible de saisir les sp cifications manuellement ou de fa on automatique gr ce la carte MLE 1 Calibration La calibration l aide d un calibrateur four
27. e 16 et par une tude am ricaine NHANES II Second National Health and Nutrition Examination portant sur 1454 enfants sains g s de 1 11 ans 18 Ce m me constat a t rapport par l institut Pasteur de Madagascar en 2000 portant sur 35 hommes et 32 femmes d ge compris entre 18 et 45 ans 19 24 Les valeurs moyennes d h moglobine de m me que celles des globules rouges observ es dans notre population sont inferieures celles rapport es par certains 19 22 23 Ces diff rences observ es entre notre tude et d autres pays pourraient trouver leur explication dans des diff rences m thodologiques les caract ristiques des populations tudi es en particulier les tudes de concordances entre les appareils de mesure ne sont pas disponibles Ke ta 24 a fait le m me constat propos d une tude de quelques param tres h matologiques et biochimiques Don gu bougou un village de la commune de Kati situ une soixantaine de km de Bamako chez 100 volontaires g s de 6 mois 45 ans en 2003 3 2 Les constantes rythrocytaires Les valeurs moyennes du VGM taient plus basses que celles rapport es par d autres auteurs 19 23 Arnal C et Girot R ont rapport des valeurs moyennes de VGM similaires celles observ es dans notre population dans la tranche d ge 16 45 ans qui est par contre significativement inferieure dans notre population dans la tranche d ge 6 mois 15 ans Les val
28. e Cuvette de lecture avec substrat Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 70 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako D termination De la Ferritine s rique Par VIDAS Ferritin Pr cautions d utilisations Le coffret contient des composants d origine animale La ma trise de l origine et ou de l tat sanitaire des animaux ne pouvant garantir de fa on absolue que ces produits ne contiennent aucun agent pathog ne transmissible il est recommand de les manipuler avec les pr cautions d usage relatives au produits potentiellement infectieux ne pas ing rer ne pas inhaler Ne pas utiliser les c nes dont le sachet est perc Ne pas utiliser de cartouches visiblement alt r es feuille aluminium ou plastique endommag Ne pas utiliser les r actifs apr s la date de p remption indiqu e sur l tiquette tui Ne pas m langer les r actifs ou consommables de lots diff rents Ne pas utiliser de gants talqu s le talc pouvant entrainer de faux r sultats pour certains tests immunoenzymatiques Les r actifs du coffret contiennent un conservateur azoture de sodium susceptible de r agir avec les tuyauteries en plomb ou en cuivre et de former des azotures m talliques explosifs Il est recommand de rincer l eau tout rejet Le tampon de lavage 2 contient un agent nocif di thanolamine 11 5 prendre connaissance des risques et des conseils de p
29. e d immersion Vortex G nie Portoirs pour lames Le colorant le bleu de cr syl brillant qui est re u dans le laboratoire de biologie clinique de la FMPOS sous forme de poudre conserv e dans des flacons teint s 25g Gants Blouses Mode op ratoire 1 Pr paration du Colorant A l aide de la poudre on pr pare la solution de bleu de cr syl brillant 1 dans de l eau physiologique que l on filtre 2 R alisation des frottis On fait un m lange partie gale de sang et de solution de bleu de cr syl brillant 1 On agite ce m lange au Vortex G nie et on incube au bain marie 37 C pendant 30 mn Apr s l incubation on effectue le frottis mince que l on s che l air libre Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 68 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako Num ration cellulaire automatique Sur Diana 5 X nia 3 Lecture des frottis On observe l immersion l objectif x 100 La substance r ticulo filamenteuse appara t color e en bleu sombre Le pourcentage des r ticulocytes est obtenu lorsque le d compte atteint 1000 h maties au minimum Il se calcule partir de la formule suivante Nombre total de r ticulocytes parmi 1000GRX100 Nombre total de GR compt s Le nombre absolu des r ticulocytes est obtenu en multipliant le nombre des globules rouges donn par la num ration par le pourcentage des r ticulocytes
30. ectroosmotique Le syst me Capillarys poss de des capillaires mont s en parall le permettant sept analyses simultan es L chantillon est dilu dans la solution h molysante puis inject par l aspiration l extr mit anodique du capillaire Les h moglobines sont s par es par application d une haute tension puis d tect es directement 415 nm cot cathodique Avant chaque test les capillaires sont lav s avec une solution de lavage puis remplis de tampon pour l analyse suivante En tampon alcalin les h moglobines normales et anormales ou variants sont d tect es dans l ordre suivant de la cathode vers l anode A 2 variant A2 C A2 O Arab E S D G Philadelphia F A Hope Bart J N Baltimore et H A 415nm l anhydrase carbonique n est pas visualis e sur le profil lectrophor tique ce qui permet d identifier les variants de l h moglobine A qui migrent dans cette zone Pr paration de l chantillon Laisser s dimenter les globules rouges pendant plusieurs heures jusqu ce que les globules rouges se s parent du plasma et que le plasma devienne limpide temps optimum 1 nuit 2 8 C ou centrifuger l chantillon de sang 5 000 tours min pendant 5 min Eliminer d licatement le maximum de volume de plasma Vortexer pendant cinq secondes Limites et pr cautions de s curit s Les chantillons de sang ont t pr lev s exclusivement sur tube EDTA K2 Ne pas utilis
31. ences Patients s lectionn s et les valeurs Limites Si un r sultat exc de la R f rence Patient correspondante il apparait en bleu l cran et l impression un signe ou un signe est ajout selon qu il est sup rieur ou inferieur l intervalle de r f rence Sil est en dehors des Valeurs Limites le r sultat apparait en rouge l cran comme l impression le param tre est soulign l impression pleine page et demi page Un point accompagne le signe ou affich Les valeurs de r f rence propos es par d faut le sont seulement titre indicatif Chaque laboratoire doit tablir lui m me les valeurs de R f rence Patient et ses Valeurs Limites et indiquer dans son Manuel d Assurance Qualit GBEA Guide de Bonne Ex cution des Analyses la source de telles valeurs Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 67 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako Num ration cellulaire automatique Sur Diana 5 X nia Lorsqu un r sultat est signal en Valeur Limite l chantillon de sang est analys une fois de plus pour contr ler son exactitude Il est aussi compar un r sultat ant c dent le cas ch ant Num ration manuelle des r ticulocytes Principe Il consiste compter les globules rouges jeunes Mat riel et r actifs Un bain marie 37 C Un tube h molyse sec Une lame porte objet Huil
32. endre connaissances des risques et des conseils de prudence Le substrat contient un agent irritant prendre connaissance du risque et des conseils de prudence Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 31 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako Conditions de stockage e Conserver le coffret VIDAS FER 2 8 c e Ne pas congeler les r actifs e Laisser 2 8 c les r actifs non utilis s e A louverture du coffret v rifier l int grit et la bonne fermeture du des sachet s de c nes dans le cas contraire ne pas utiliser les c nes e Apres chaque utilisation bien refermer le sachet avec son d shydratant pour maintenir la stabilit des c nes et replacer la totalit du coffret 2 8 c e Tous les composants sont stables jusqu la date de p remption indiqu e sur l tiquette tui lorsqu ils sont conserv s dans les conditions pr conis es Echantillons 1 Nature et pr l vement des chantillons S rum ou plasma h parine de lithium ou EDTAK2 Il est pr conis chaque laboratoire de valider le type de tube de pr l vement utilis L utilisation de s rums inactiv s par la chaleur n a pas t valid e Il n a pas t observ pour ce dosage d influence significative gt de l h molyse apr s surcharge d chantillons en h moglobine de 0 300 puml l gt de la lip mie apr s surcharge d chantillons en lipides de 0
33. enfant africain vivant en milieu tropical africain Med Afr noire 1988 vol 21 n 90 pp 9 15 5 pages Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 52 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako 24 KEITA MN Etude de quelques param tres h matologiques et biochimiques Don gu bougou l exp rience d introduction des bonnes pratiques de laboratoire au MRTC DEAP FMPOS Th se de Pharmacie Bamako 2003 58 70 81p 25 HINCHLIFFE RF LILLEYMAN JS Pratical paediatric haematology Chichester John Wiley and Sons 1987 26 OSKI FA Normal blood values in the newborn period In FA Oski JL Naiman Hematologic problems in the newborn Philadelphia WB Saunders Co 1982 1 31 27 ARNAL C et GIROT R Dr panocytose chez l adulte Encycl M d chir Editions Scientifiques et M dicales Elsevier SAS Paris H matologie 13 006 D 16 2002 15p 28 BARAIKA M AG Valeurs de r f rence rythrocytaires et leucocytaires la naissance dans le district de Bamako Th se de Pharmacie Bamako 2010 19 amp 20 48p 29 MOREL P GUIBOURDENCHE J and PORQUET D D termination des valeurs de r f rence de la ferritine s rique en p diatrie l aide de l automate ACS 180 1mmuno analyse amp Biologie Sp cialis e Vol 10 Issue 5 1995 p 285 290 30 METAXOTOU MAVROMATI AD et al Developmental changes in Hemoglobin F levels during the first two years of life in norma
34. ent crit pour les adultes et d assentiment pour les enfants a t soumis en deux exemplaires par le clinicien charg de faire le recrutement chaque volontaire ou le parent tuteur qui y a appos son empreinte digitale ou sa signature L tude a t autoris e par le comit d thique institutionnel de la facult de m decine de pharmacie et d odontostomatologie de Bamako Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 36 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako RESULTATS 1 LES PARAMETRES SOCIO DEMOGRAPHIQUES Tableau I distribution des volontaires selon le sexe Sexe Fr quence Pourcentage Masculin 23 56 1 F minin 18 43 9 Total 41 100 Le sexe masculin tait le plus repr sent avec 56 1 de la population tudi e Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 37 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako Tableau IT distribution des volontaires selon l ge et le sexe Classe d Age Sexe 6 mois 15 ans 16 ans 45 ans Masculin 9 14 F minin 11 7 Total 20 48 8 21 51 2 La classe d ge 16 ans 45 ans tait la plus repr sent e avec 51 2 de notre chantillon Il y avait presque autant d enfants que d adultes 49 contre 51 Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 38 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako 2 LES PARAMETRES ETUDIES Ta
35. er d chantillon de sang contenant plus de plasma r siduel au dessus du Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 58 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako culot de globules rouges car l analyse en serait affect e Enlever l exc s de plasma avant l analyse Ne pas utiliser d chantillon de sang non s diment Seuls les globules rouges ont t analys s Eviter les chantillons vieillis plus de 7 jours ou stock s improprement la pr sence D termination Des types d h moglobines Par le Capillarys 2 Sebia d agr gats visqueux ainsi g n r s pourrait affecter l h molyse automatique des chantillons Les produits de d gradation pouvaient en effet interf rer sur le profil lectrophor tique Ne pas utiliser d chantillons h molys s Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 59 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako Num ration cellulaire automatique Sur Diana 5 X nia Objet Ce document d crit la proc dure d analyse des chantillons de sang par le DIANA 5 X nia Domaine d application Biologiste Pharmacien ou M decin Etudiant en Ann e de th se ou Interne de Pharmacie ou de M decine Technicien de laboratoire Document de r f rence Manuel de l operateur Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 60 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f
36. eth moglobinique Son absorbance est lue 560 nm travers la chambre des GR La mesure de la cyanmeth moglobine test e est compar e celle d une r f rence un blanc r actif alors que la chambre des GB est remplie de diluant isotonique propre Une fonction du rapport de ces deux mesures d termine la concentration en h moglobine L instrument affiche et imprime le r sultat avec le syst me d unit s s lectionn dans le laboratoire en g dl ou g l D termination du VGM et du VMP Pour diverses raisons les impulsions des cellules qui passent pr s des bords de l orifice sont d form es Leurs amplitudes peuvent tre sur estim es jusqu 30 ce qui conduit sur la plupart des analyseurs des histogrammes de r partition en taille artificiellement d form s sur la droite Pour compenser ce ph nom ne qui perturbe gravement la mesure de l IDR Indice Distribution GR la plupart des analyseurs m me de haute gamme ne disposant pas de la focalisation hydrodynamique des GR PIt tentent de trier les impulsions pour d terminer l IDR par exemple en comparant la hauteur de l impression par rapport sa surface ou sa dur e Cet analyseur est quip d un dispositif de focalisation hydrodynamique en amont qui aligne et centre les cellules dans l orifice Dans ces conditions id ales les d formations des signaux en fonction de la zone de passage dans l orifice sont limin es par principe Th se de
37. eurs moyennes de la CCMH et de la TCMH de notre tude taient plus basses que celles rapport es par certains auteurs en Afrique et dans certaines populations non africaines 19 25 26 Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 46 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako Comme chez la population tudi e par Ke ta Don gu bougou 24 les taux moyens du TCMH dans notre tude augmentaient significativement avec l ge 4 LE TAUX DES RETICULOCYTES ET LA FERRITINE SERIQUE La valeur moyenne du taux des r ticulocytes tait de 33 71 10 14 79 mm en valeur absolue Arnal C et Girot R 27 ont trouv s des valeurs moyennes plus lev es que celles rapport es dans notre population Nos valeurs moyennes sont nettement plus basses que celles observ es chez le nouveau n lors de la d termination des valeurs de r f rence rythrocytaires et leucocytaires la naissance dans le district de Bamako chez 481 nouveau n s 28 cela pourrait tre expliqu par l tat physiologique particulier du nouveau n Les valeurs moyennes du taux de la ferritine s rique sont de 82 39 47 30ng L pour le sexe masculin et 59 85 35 36ng L pour le sexe f minin Cette diff rence n est pas statistiquement significative p 0 10 Morel P et al 29 en 1995 Paris en France chez les nouveau n s lors de la d termination des valeurs de r f rence de la ferritine s rique en p diatr
38. fier que le sachet de c nes a bien t referm apr s chaque utilisation Taper ou s lectionner FER sur l instrument pour entrer le code du test Le calibrateur identifi obligatoirement par S doit tre utilis en double Si le contr le doit tre test il sera identifi par C1 Homog n iser l aide d un agitateur de type vortex le calibrateur le contr le et les chantillons Distribuer 100ul de calibrateur d chantillon ou de contr le dans le puits chantillon Placer dans l instrument les c nes et les cartouches Bien v rifier la concordance des codes couleurs et lettres entre le c ne et la cartouche D marrer l analyse voir Manuel d utilisation Toutes les tapes sont alors g r es automatiquement par l instrument Les r sultats sont obtenus en 30 minutes environ A la fin de l analyse retirer les c nes et les cartouches de l instrument Eliminer les c nes et cartouches utilis s dans un r cipient appropri Interpr tation D s le test termin les r sultats sont analys s automatiquement par le syst me informatique L instrument effectue deux mesures de fluorescence dans la cuvette de lecture pour chacun des tests La premi re lecture prend en compte le bruit de fond d la cuvette substrat avant mise en contact du substrat avec le c ne La seconde lecture est effectu e apr s incubation du substrat avec l enzyme pr sente dans le c ne Le calcul
39. h moglobine A Bamako CCMH CHME CHU GT CNRST CRLD CVD DEAP DS EDTA FMPOS FS ft g dl GB GR H Hb Glyqu e HbA HbA2 HbC HbF L LMC min ml mm ng L Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 9 ABREVIATIONS ET SIGLES Concentration Corpusculaire Moyenne en H moglobine Centre Hospitalier M re Enfant Centre Hospitalier Universitaire Gabriel TOURE Centre National de Recherche Scientifique et Technologique Centre de Recherche et de Lutte contre la Dr panocytose Center Vaccin Development Degr Celsius D partement Epid miologique des Affections Parasitaires D viation Standard Ethyl ne Di aminoacide T tra ac tique Facult de M decine de Pharmacie et d Odontostomatologie Ferritine S rique fentolite gramme par d cilitre Globules Blancs Globules Rouges heure H moglobine Glyqu e H moglobine adulte majeure A H moglobine adulte mineure A2 H moglobine C H moglobine f tale litre Leuc mie My lo de Chronique minute millilitre millim tre cube nano gramme par litre Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako Parmt pg cell Pit PTME R tic SPSS TCMH VGM Param tre Seuil de Signification picogramme par cellule Plaquettes Pr vention Transmission M re Enfant R ticulocytes Statistical Package for Social Science Teneur Corpusculaire Moyenne en H mogl
40. hospitalier du CHU GT Ma tre assistant en p diatrie la Facult de M decine de Pharmacie et d Odonto Stomatologie P diatre sp cialiste en h matologie p diatrique Responsable de l unit fonctionnelle de prise en charge de la dr panocytose Dipl m Universitaire sur la surveillance pid miologique des maladies tropicales Permettez nous de vous remercier pour ce grand honneur que vous nous faites en acceptant de juger ce travail Votre simplicit votre disponibilit constante et votre dynamisme font de vous un tre admir de tous Soyez rassur de notre reconnaissance et de notre profonde gratitude Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 6 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako A notre Ma tre et juge Docteur Aldiouma GUINDO Titulaire d un PhD d h matologie Immunologie de l universit de LONDRES Ma tre assistant en h matologie la Facult de M decine de Pharmacie et d Odonto Stomatologie Responsable du Laboratoire de biologie clinique et de recherche du CRLD Membre de la soci t Fran aise d h matologie Secr taire g n ral de la Soci t Malienne d h matologie oncologie Cher Ma tre vous nous faites un grand honneur en acceptant de juger notre travail Votre rigueur scientifique votre souci pour un travail accompli votre disponibilit et votre simplicit nous ont touch s Veuillez cher Ma tre recevoi
41. ie l aide de l automate ACS 180 ont trouv que la ferritine variait en fonction de l ge mais pas en fonction du sexe de l enfant et qu elle atteignait progressivement les valeurs de l ge adulte de l ordre de 35 ug L vers l ge de 10 ans Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 47 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako CONCLUSION Notre tude conduite aupr s de 41 volontaires dans le district de Bamako a permis de constater que les valeurs de r f rence de l h moglobine A dans la population tudi e ne diff raient pas selon l ge et le sexe Les diff rences observ es avec les donn es obtenues ailleurs par d autres auteurs incitent la d termination syst matique des valeurs de r f rence biologiques propres chaque population dans son contexte g ographique Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 48 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako RECOMMANDATIONS gt AU MINISTERE DE LA SANTE v Appuyer et financer Des tudes sur le typage des diff rents types d h moglobines de 6 mois 45 ans Des tudes sur les valeurs de r f rence des types d h moglobines v Diffuser les r sultats aux structures de sant du pays gt AU C R L D v Conduire des tudes sur des param tres qui modifient le taux d HbA dans certaines pathologies gt AU C N R S T Promouvoir la recherche s
42. ion permet d ajuster la calibration chaque instrument et l volution ventuelle du r actif dans le temps Le Calibrateur a t analys en double voir manuel d utilisation La valeur du Calibrateur tait comprise dans les limites de RFV Relative Fluorescence Value fix es Si ce n est pas le cas on allait faire une calibration 3 Contr le de qualit Un contr le est inclus dans chaque coffret VIDAS FER Ce nouveau doit tre utilis l ouverture de nouveau coffret afin de v rifier l absence d alt ration des r actifs Chaque calibration a t galement v rifi e l aide de ce contr le Pour que l instrument puisse v rifier la valeur du contr le il faut l identifier par C1 Si la valeur du contr le s carte des valeurs attendues les r sultats ne peuvent tre valid s 4 R alisation du test e Sortir uniquement les r actifs n cessaires les laisser 30 minutes la temp rature ambiante avant utilisation e Utiliser une cartouche FER et un c ne FER pour chaque chantillon contr le ou Calibrateur tester V rifier que le sachet de c nes a bien t referm apr s chaque utilisation e Taper ou s lectionner FER sur l instrument pour entrer le code du test Le Calibrateur identifi obligatoirement par S doit tre utilis en double Si le contr le doit tre test il sera identifi par C1 Th se de Pharmacie FMPO
43. iversit de Bamako 22 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako e Mode op ratoire L analyseur compte par imp dance le nombre des globules blancs des globules rouges et des plaquettes Les cellules en suspension dans un milieu isotonique traversent un orifice o un champ lectrique est tabli En passant travers l orifice les cellules provoquent une augmentation d imp dance proportionnelle leur volume L instrument compte le nombre de cellules et les trie en fonction de leur taille permettant ainsi l analyse de leur distribution Le grand nombre de cellules compt es am liore beaucoup l exactitude de l appareil en r duisant consid rablement le risque d erreurs statistiques L am lioration des instruments et des r actifs en h matologie a permis de d terminer en routine le nombre des globules rouges des plaquettes et des globules blancs L introduction de techniques compl mentaires comme le centrage hydrodynamique et l analyse combin e de l imp dance et de la lumi re diffus e par les cellules 1Ilumin es par un rayon laser focalis permettent l analyse de 5 populations de leucocytes lymphocytes monocytes polynucl aires neutrophiles basophiles et osinophiles Pour tre utilis s sur l analyseur les r actifs ont t pr sent s avec des caract ristiques bien particuli res Le diluant a permis une bonne dispersion des l ments figur s du sang afin
44. l and heterozygous beta thalassemia infants Pediatrics 1982 69 734 731 WAJMAN H Diagnostic et d pistage de la dr panocytose Rev Prat 2004 54 1545 Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 53 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako RESUME Du 17 aout au 07 octobre 2009 nous avons conduit une tude prospective chez 41 sujets g s de 6 mois 45 ans tous sexes et ges confondus dans le district de Bamako Elle s est d roul e au service de p diatrie de CHU GT CHME Luxembourg et la Facult de M decine de Pharmacie et d Odonto Stomatologie de Bamako Cette tude avait pour objectif de d terminer les valeurs de r f rence de la fraction A2 de l h moglobine dans cette population L tude a t autoris e par le comit d thique institutionnel de la facult de m decine de pharmacie et d odontostomatologie de Bamako L valuation des param tres biologiques n cessaires l tude a port sur la d termination des constantes rythrocytaires du taux des r ticulocytes de la ferritine s rique et des fractions h moglobiniques La d termination des fractions h moglobiniques a t faite par le syst me Capillarys La saisie et l analyse des donn es ont t faites sur SPSS Le test de d ANOVA a t utilis pour la comparaison des valeurs moyennes des m dianes et les percentiles 2 5 et 97 5 avec un seuil de signification fix p lt 0
45. llons la m thode de pr l vement l emploi des r actifs appropri s comme une agitation correcte des chantillons juste avant la mesure sont contr l s par le laboratoire Il ne faut pas sous estimer l importance des facteurs pr analytiques et d environnement dans la qualit globale de l analyse La lyse permet l analyse de 5 populations leucocytaires avec la mesure de quatre sous populations leucocytaires lymphocytes monocytes granulocytes neutrophiles osinophiles et granulocytes basophiles Les diff rentes sous populations ont t extraites du cytogramme gr ce des techniques d analyse d images et leur interpr tation par un logiciel brevet D termination du taux d h moglobine La d termination du taux d Hb sur analyseur est une adaptation de la m thode de r f rence bas e sur la transformation de l Hb en cyanmeth moglobine Cette m thode a t accept e en 1966 lors d un congr s International d h matologie publi e en 1967 la suite des recommandations faites par un comit d experts form ce propos 1964 par le lt lt international Committee for Standardisation in Haematology ICSH gt gt La NCCLS National Committee for Clinical Laboratory Standard aux Etats Unis a Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 65 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako Num ration cellulaire automatique Sur Diana 5 X nia pu
46. lt de m decine de pharmacie et d odontostomatologie de Bamako L valuation des param tres biologiques n cessaires l tude a port sur la d termination des constantes rythrocytaires du taux des r ticulocytes de la ferritine s rique et des fractions h moglobiniques La d termination des fractions h moglobiniques a t faite par le syst me Capillarys La saisie et l analyse des donn es ont t faites sur SPSS Le test d ANOVA a t utilis pour la comparaison des valeurs moyennes des m dianes et les percentiles 2 5 et 97 5 avec un seuil de signification fix P lt 0 05 L analyse de ces donn es a montr que les valeurs de l h moglobine A2 sont comprises entre 2 50 et 3 68 Nous n avons pas trouv de diff rence statistiquement significative de la fraction A2 de l h moglobine selon l ge ou le sexe des volontaires soumis T tude Ces r sultats incitent d terminer syst matiquement des valeurs de r f rence biologiques propres chaque population dans son contexte g ographique Mots cl s valeurs HbA gt Bamako Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 55 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako ANNEXES D termination Des types d h moglobines Par le Capillarys 2 Sebia Objet Ce document d crit la proc dure d analyse des chantillons de sang par le Capillarys 2 Sebia Domaine d application Biologiste
47. lusieurs heures jusqu ce que les globules rouges se s parent du plasma et que le plasma devienne limpide temps optimum 1 nuit 2 8 C ou centrifuger l chantillon de sang 5 000 tours min pendant 5 min Eliminer d licatement le maximum de volume de plasma Vortexer pendant cinq secondes Limites Les chantillons de sang ont t pr lev s exclusivement sur tube EDTA K2 Ne pas utiliser d chantillon de sang contenant plus de plasma r siduel au dessus du culot de globules rouges car l analyse en serait affect e Enlever l exc s de plasma avant l analyse Ne pas utiliser d chantillon de sang non s diment Seuls les globules rouges ont t analys s Eviter les chantillons vieillis plus de 7 jours ou stock s improprement la pr sence d agr gats visqueux ainsi g n r s pourrait affecter l h molyse automatique des chantillons Les produits de d gradation pouvaient en effet interf rer sur le profil lectrophor tique Ne pas utiliser d chantillons h molys s 7 5 4 D termination de la Ferritine s rique par VIDAS Ferritin Principe Le principe du dosage associe la m thode immunoenzymatique par sandwich en une tape de d tection finale en fluorescence ELFA Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 30 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako Mat riel Pipette embout jetable permettant la distribution de 100 ul Ga
48. n incube au bain marie 37 C pendant 30 mn Apr s l incubation on effectue le frottis mince que l on s che l air libre 3 Lecture des frottis On observe l immersion l objectif x100 La substance r ticulo filamenteuse appara t color e en bleu sombre Le pourcentage des r ticulocytes est obtenu lorsque le d compte atteint 1000 h maties au minimum Il se calcule partir de la formule suivante Nombre total de r ticulocytes parmi 1000GRX100 Nombre total de GR compt s Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 28 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako Le nombre absolu des r ticulocytes est obtenu en multipliant le nombre des globules rouges donn par la num ration par le pourcentage des r ticulocytes Dispositions particuli res e Le frottis a t fait sur des lames d graiss es pr te l emploi e Apr s la confection les frottis ont t s ch s imm diatement l air pour viter la r action cellulaire 7 5 3 D termination des types d h moglobines par Capillarys 2 Sebia Principe Il consiste s parer les diff rents types d h moglobines dans un champ lectrique selon leur charge et leur mobilit et les quantifier Mat riels et r actifs e EDTA e Tampon alcalin e Solution h molysante e Solution de lavage e Centrifugeuse e Vortex e Imprimante ou ordinateur e Gants e Coton ou compresse e Blouses
49. nce de l h moglobine A Bamako 16 Institut R gional pour la Sant H matologie La Riche ISRA D partement Statistiques et Epid miologie 1991 17 GONZALEZ SILVA M BERNARD DM GABEZON I Hematologic values and iron levels in a rural student population Sangre 1994 39 309 404 18 YIP R JOHNSON C DALLMAN PR Age related changes in laboratory values used in the diagnosis of anemia and iron deficiency Am J Clin Nutr 1984 39 427 36 19 RAKOTO ALSON O RATSITORAHINA M PFISTER P LAGANIER R DROMIGNY JA Estimation des valeurs normales de l h mogramme Madagascar Arch Institut Pasteur de Madagascar 2000 66 1 amp 2 68 71 20 SAXENA S WONG ET Heterogeneity of common hematologic parameters among racial ethnic and gender subgroups Arch Path Lab Med 1990 114 175 719 21 SHIGA S KOYANAGI I KANNAGI R Clinical reference values for laboratory hematology tests calculated using the iterative truncation method with correction Part 1 Reference values for erythrocyte count hemoglobin quantity hematocrit and other erythrocyte parameters including MCV MCH MCHC and RDW Rinsho Byori 1990 38 93 103 22 MENARD D MANDENG MJ TOTHY MB KELEMBHO EK GRESENGUET G and TALARMIN A Immunohematological Reference Ranges for Adults from the Central African Republic Clin and Diagn Lab Immun 2003 10 No 3 443 445 23 BASSIMBLIE J CABANNES R SANGARE A TEA D Normes h matologiques de l
50. ni dans le coffret doit tre effectu e l ouverture de chaque nouveau lot apr s entr e des sp cifications du lot puis tous les 14 jours Cette op ration permet d ajuster la calibration chaque instrument et l volution ventuelle du r actif dans le temps Le calibrateur a t analys en double voir manuel d utilisation La valeur du calibrateur tait comprise dans les limites de RFV Relative Fluorescence Value fix es Si ce n est pas le cas faire une calibration 2 Contr le de qualit Un contr le est inclus dans chaque coffret VIDAS FER Ce nouveau doit tre utilis l ouverture de nouveau coffret afin de v rifier l absence d alt ration des r actifs Chaque calibration a t galement v rifi e l aide de ce contr le Pour que l instrument puisse v rifier la valeur du contr le il faut l identifier par C1 Si la valeur du contr le s carte des valeurs attendues les r sultats ne peuvent tre valid s Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 73 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako D termination De la Ferritine s rique Par VIDAS Ferritin 4 R alisation du test Sortir uniquement les r actifs n cessaires les laisser 30 minutes temp rature ambiante avant utilisation Utiliser une cartouche FER et un c ne FER pour chaque chantillon contr le ou calibrateur tester V ri
51. nificative n a t observ e pour les param tres tudi s en fonction du sexe Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 43 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako Tableau VII comparaison des valeurs moyennes d h moglobine A de notre population celles rapport s par d autres tudes Auteurs H moglobine Notre Etude LUSINAD et TANG B etal FREDERICC Bamako Mali p al p Singapour p etal Belgique France Bruxelles N 41 N 114 12 N 104 13 N 107 14 A2 2 98 2 50 3 68 10 2 75 2 18 3 32 10 2 40 1 90 3 00 10 2 90 2 70 3 80 p p p _ 10 N taille de l chantillon R f rence bibliographique Moyenne valeurs de r f rence de Hb A p comparaison des moyennes de notre tude ceux rapport es par LUSINA D et al Pal p comparaison des moyennes de notre tude ceux rapport es par TAN G B et al EI p comparaison des moyennes de notre tude ceux rapport es par FREDERIC C et al 1 Le taux de l h moglobine A trouv chez nos 41 volontaires est significativement plus lev que ceux rapport s par certains auteurs 12 13 14 Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 44 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako COMMENTAIRES ET DISCUSSION 1 QUESTIONS LIEES A LA METHODOLOGIE L effectif sur le quel a port notre tude tait de 41 volontaire
52. ns votre service malgr mes d fauts Votre respect pour la personne humaine fait de vous une personne admirer C est en effet que vous avez initi ce travail dont vous l avez suivi tout au long de sa r alisation en lui apportant toutes vos qualit s scientifiques Votre sens critique tr s pouss mais aussi Votre rigueur scientifique nous a conduits au terme de ce travail Que DIEU vous donne bonne sant et long vit Amen Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 1 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako REMERCIEMENTS A PETERNEL DES ARMEES qui m a donn la bonne sant et m a gard au cours de mes tudes gloire honneur et magnificence te soit rendu aux si cles des si cles Amen A mes Tontons et Tantes Amadou dit Kossa Abel Adama Youssouf Paul Djiguiya Sounkalo C fa Bintou DEMBELE et Eli COULIBALY Alima N ma Rebecca COULIBALY Fatoumata TANGARA Baselle COUMARE Ma mouna DEMBELE et Hawa OUATTARA C est ici le lieu de vous dire merci pour vos pri res et b n dictions pendant mes preuves scolaires et universitaires Vous m avez toujours inculqu le sens du travail bien fait de la dignit du courage et de la pers v rance puisse ce travail tre une grande satisfaction pour vous tous A mon cher grand fr re Robert Je ne sais pas si un jour je trouverai un mot pour exprimer toute ma reconnaissance et ma gratitude pour m avoir supp
53. nts non talqu s usage unique Lunettes Blouse Immunoglobulines monoclonales de souris anti Ferritine marqu es la phosphatase alcaline azoture de sodium Tampon de lavage 1 phosphate de sodium Tampon de lavage 2 di thanolamine Cuvette de lecture avec substrat Pr cautions d utilisation Le coffret contient des composants d origine animale La ma trise de l origine et ou de l tat sanitaire des animaux ne pouvant garantir de fa on absolue que ces produits ne contiennent aucun agent pathog ne transmissible il est recommand de les manipuler avec les pr cautions d usage relatives au produits potentiellement infectieux ne pas ing rer ne pas inhaler Ne pas utiliser les c nes dont le sachet est perc Ne pas utiliser de cartouches visiblement alt r es feuille aluminium ou plastique endommag Ne pas utiliser les r actifs apr s la date de p remption indiqu e sur l tiquette tui Ne pas m langer les r actifs ou consommables de lots diff rents Ne pas utiliser de gants talqu s le talc pouvant entrainer de faux r sultats pour certains tests immunoenzymatiques Les r actifs du coffret contiennent un conservateur azoture de sodium susceptible de r agir avec les tuyauteries en plomb ou en cuivre et de former des azotures m talliques explosifs Il est recommand de rincer l eau tout rejet Le tampon de lavage 2 contient un agent nocif di thanolamine 11 5 pr
54. obine Volume Globulaire Moyen Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 10 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako SOMMAIRE PAGES INTRODUCTION cessent insert 1 OBJECTS nd nsstioentnese sn dass hs vastes seed a 3 MATERIELS ET METHODES sssseesssssseeeeesscceeesesoeeeeescoooeeeeee 4 RESULTA IS saintes ns ss ten ressens 25 COMMENTAIRES ET DISCUSSION sssssssesssscsssssessenee 33 CONCLUSION ET RECOMMANDATIONS nssssnssssssscssessse 36 REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES ss sssssssssssssessessee 38 RESUME ans ion dinar silent 42 FICHE SIGNALETIQUE css sesesetassectedasassasaueti sn 43 11 1h 1 08 9 D APP ee PE teert ts istre kt tSErre n icn easi 44 Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 11 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako Liste des Tableaux Tableau I distribution des volontaires selon le sexe 25 Tableau IT distribution des volontaires selon l ge et le sexe 26 Tableau III moyenne 1DS m diane et valeurs de r f rence de l h moglobine Tableau IV valeurs moyennes 1DS et m dianes des autres param tres TUA S sn cor en ten oran ensnnineenratas men need ri seine range des 28 Tableau V moyenne 1DS des param tres tudi s selon la tranche d ge 29 Tableau VI moyenne 1DS des param tres tudi s
55. ologie Ancien Recteur de l Universit du Mali Membre correspondant Etranger de l Acad mie de Pharmacie de France au Mali Honorable Ma tre vous nous faites ce jour un honneur en acceptant de pr sider ce jury malgr vos multiples occupations Veuillez trouver ici l expression de notre profonde gratitude et de notre respect Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 4 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako A notre Ma tre et juge Professeur Mounirou BABY Ma tre de conf rence en h matologie la Facult de M decine de Pharmacie et d Odonto Stomatologie Charg de cours d h matologie la Facult de M decine de Pharmacie et d Odonto Stomatologie Directeur G n ral du Centre National de Transfusion Sanguine du Mali Secr taire adjoint charg des questions de recherches scientifiques de formation et d thique de la Soci t Malienne d H matologie et Oncologie Cher ma tre nous sommes flatt s de vous avoir pour juger notre travail Votre g n rosit votre diplomatie votre disponibilit ainsi que vos qualit s intellectuelles nous honorent Recevez ici tr s cher ma tre l expression de notre profonde reconnaissance et gratitude Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 5 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako A notre Ma tre et juge Docteur Abdoul Aziz DIAKITE Praticien
56. ort pendant toutes ces ann es d tudes A mes fr res et s urs merci pour tout Les mots me manquent pour vous remercier du soutien dont vous m avez fait b n ficier pendant mes tudes Que l amour fraternel de notre SEIGNEUR nous unisse jamais Je vous souhaite beaucoup de r ussite dans toutes vos entreprises A mon papa Moussa COUMARE Tu m as accept sous ton toit pendant mon cycle universitaire Tu m as montr le chemin du travail bien fait c est ici le lieu de te remercier Puisse ce travail tre un sujet de joie pour toi A ma maman Esther KAMATE tu es vraiment une m re poule pour moi Tu m a toujours montr e de bonnes choses tes conseils ne m ont jamais fait d faut la meilleure fa on de te dire merci c est de r ussir A mes cousins et cousines merci pour tous vos soutiens mon gard Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 2 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako A mon amie Rebecca DEMBELE Je te remercie pour tes conseils et le soutien que tu m as apport Je ne pourrai jamais assez te remercier j implore DIEU qu IL te donne plein de satisfaction dans ce travail A tout le personnel du laboratoire de biologie clinique de la FMPOS A mon grand fr re ain Dr Mohamed AG BARAIKA comme le dit ce proverbe La vache ne remerciera jamais assez la brousse tant qu elle s y retournera Ce modeste remerciement est l un des frui
57. pe Diana 5 Evolution XENIA 27parmt gt Le taux des r ticulocytes a t d termin sur un frottis color par le bleu de cr syl brillant apr s comptage au microscope optique gt L lectrophor se de l h moglobine a t r alis e sur l automate Capillarys 2 Sebia 7 5 1 Num ration cellulaire sur l automate DIANA 5 X nia e Principe DIANA 5 X nia compte par imp dance le nombre des leucocytes d rythrocytes et de thrombocytes e Calibrateur et Contr les Calibrateur HYCEL CAL R f R2C7020A 2 tubes Contr le DIANATROL N R f R2A7040A 4 N Contr le DIANATROL AQ R f R2A7141A 1B 4N 1H Contr le DIANATROL AQ Plus R f R2A7242A 2B 4N 2H e R actifs HEMALYSE 5 HEMATON 5 HEMACORE e Mesures de s curit s sur le pr l vement conservation des chantillons et r actifs L chantillon de sang veineux a t pr lev sur anticoagulant EDTA K2 le calibrage du VGM varie de 2 3 selon l anti coagulant Le rapport d EDTA K2 au sang total tait de 1 2 mg par ml de sang Les chantillons ont t conserv s temp rature ambiante 20 2 c et les analyses effectu es dans les douze heures suivant le pr l vement Les chantillons ont t transport s et conserv s 2 8 c Les r actifs ont t stock s entre 8 c et 30 c jusqu la date de p remption contr les et calibrants entre 2 c et 8 c jusqu la date de p remption Th se de Pharmacie FMPOS Un
58. permis une bonne dispersion des l ments figur s du sang afin de r duire le risque caus par le passage simultan de plus d une cellule dans l orifice Lorsque la concentration s l ve les passages en co ncidence deviennent in vitables Le proc d de focalisation hydrodynamique qui centre et tire le flux de dilution cellulaire r duit consid rablement ce risque sans l liminer totalement L analyseur dispose d algorithmes pour corriger automatiquement les r sultats Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 62 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako Num ration cellulaire automatique Sur Diana 5 X nia L analyseur contr le aussi la fr quence d acquisition des signaux Au del de certaines fr quences la vitesse d injection de la pr paration cellulaire est r duite automatiquement Ce proc d brevet tend la lin arit des niveaux tr s lev s La lin arit th orique du comptage de particules est port e 20 T ra L et 1 5 T ra L respectivement pour le canal des GR et celui des GB Toutefois compte tenu de la difficult se procurer de tels chantillons les lin arit s revendiqu es pour le comptage des particules ont t d termin es avec des kits sp cialis s disponibles dans le commerce 8 5 T ra L pour le canal GR et 450 giga L pour le canal GB Le diluant a un effet important sur la mesure du Volume Globulaire Moyen De
59. que Sur Diana 5 X nia Comptage des BG GR et PIt L analyseur compte les globules blancs les globules rouges comme les plaquettes par mesure de l imp dance lectrique Le sang est dilu avec une solution saline isotonique qui maintient la forme des globules et qui conduit le courant lectrique Un volume pr cis de sang dilu est inject travers un orifice de diam tre 75um dans un cymom tre de flux quantitatif pour les GR Plt comme pour les GB alors qu un courant constant est appliqu de part et d autre de l orifice Lorsqu une cellule passe travers un orifice elle d place son propre volume de diluant augmentant ainsi momentan ment la r sistance au passage du courant lectrique Cette variation temporaire de l imp dance est proportionnelle au volume de diluant d plac c est dire au volume de la cellule L instrument amplifie les impulsions lectriques et les compte pour d terminer le nombre des GB GR et PIt Sur l histogramme de distribution en taille des plaquettes on constate parfois que les bases des histogrammes des GR et Plt se recouvrent Lorsque ce recouvrement est important il n est pas possible de d terminer simplement le seuil appropri entre les deux populations et des algorithmes plus sophistiqu s sont n cessaires pour distinguer les plaquettes des globules rouges L analyseur corrige le r sultat des plaquettes La distribution non corrig e reste repr sent e en noir
60. r nos profondes reconnaissances Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 7 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako A notre Ma tre et Directeur de th se Professeur Dapa Aly DIALLO Professeur Titulaire d h matologie Responsable de l enseignement de cours d h matologie la Facult de M decine de Pharmacie et d Odonto Stomatologie Chef de Service d H matologie Oncologie du Centre Hospitalier Universitaire du Point G Chef de laboratoire de biologie clinique de la Facult de M decine de Pharmacie et d Odonto Stomatologie Pr sident de la Soci t malienne d H matologie et oncologie Pr sident de la Soci t Africaine Francophone d H matologie SAFHEMA Membre de la soci t Fran aise d H matologie Membre du conseil d administration des laboratoires Pierre FABRE Directeur G n ral du Centre de Recherche et de Lutte contre la Dr panocytose Cher Ma tre vous nous avez fait honneur en nous confiant ce travail Votre courage votre ponctualit votre disponibilit et votre compr hension sont entre autres des qualit s envi es de tous Votre connaissance votre rigueur scientifique et votre souci de bonne formation font de vous un Ma tre admirable C est l occasion pour nous de vous exprimer humblement nos vives motions Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 8 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l
61. rer l h moglobine A2 de l h moglobine C et de les quantifier Il nous a paru int ressant de d terminer par cette technique d lectrophor se utilis e dans plusieurs laboratoires Bamako les valeurs de r f rence de l h moglobine A permettant long terme de caract riser les syndromes thalass miques dans notre contexte quelques soit le ph notype h moglobine de l individu 10 Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 14 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako OBJECTIFS 1 Objectif g n ral D terminer les valeurs de r f rence du taux d h moglobine A Bamako 2 Objectifs sp cifiques gt Mesurer les valeurs d Hb A dans une population de 6 mois 45 ans gt Calculer les percentiles 2 5 et 97 5 des valeurs d HbA d termin es dans la population tudi e Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 15 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako METHODOLOGIE 1 Cadre d tude Des enfants et adolescents volontaires ont t recrut s dans les services de p diatrie du Centre Hospitalo universitaire de Gabriel Tour du Centre Hospitalier M re Enfant de Bamako Les adultes ont t recrut s la facult de m decine de pharmacie et d Odontostomatologie de Bamako au Point G Le laboratoire priv ALGI de Quinzambougou de Bamako a servi de lieu de traitement des chantillons pr lev s
62. rudence Le substrat contient un agent irritant prendre connaissance du risque et des conseils de prudence Conditions de stockage des r actifs Conserver le coffret VIDAS FER 2 8 c Ne pas congeler les r actifs Laisser 2 8 c les r actifs non utilis s Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 71 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako D termination De la Ferritine s rique Par VIDAS Ferritin e A louverture du coffret v rifier l int grit et la bonne fermeture du des sachet s de c nes dans le cas contraire ne pas utiliser les c nes e Apr s chaque utilisation bien refermer le sachet avec son d shydratant pour maintenir la stabilit des c nes et replacer la totalit du coffret 2 8 c e Tous les composants sont stables jusqu la date de p remption indiqu e sur l tiquette tui lorsqu ils sont conserv s dans les conditions pr conis es Echantillons 1 Nature et pr l vement des chantillons S rum ou plasma h parinate de lithium ou EDTAK2 Il est pr conis chaque laboratoire de valider le type de tube de pr l vement utilis L utilisation de s rums inactiv s par la chaleur n a pas t valid e Il n a pas t observ pour ce dosage d influence significative gt de l h molyse apr s surcharge d chantillons en h moglobine de 0 300 uml L gt de la lip mie apr s surcharge
63. s g s de 6 mois 45 ans Cette taille d chantillon est dans l intervalle de taille minimum recommand dans le guide du NCCLS 11 Le recrutement a t fait dans deux services de p diatries de Bamako et au laboratoire de biologie clinique de la FMPOS Le choix des deux services de p diatries a t motiv par leur activit de consultation plus importante qui pouvait nous permettre d atteindre la taille souhait e dans un d lai imparti De m me le choix du laboratoire priv a t motiv par du fait que c tait le seul laboratoire capable de d terminer les fractions d h moglobines sur Capillarys L exclusion de pathologies diverses ou d tats physiologiques comme la carence martiale l h molyse les h moglobinopathies les tats d rythropo se accrue la grossesse les sorties d aplasies m dullaires les suites de greffe de moelle osseuse les r cup rations d rythroblastop nies transitoires les h mopathies malignes l insuffisance m dullaire globale la LMC la maladie de Fanconi ou de Backfan Damond le syndrome my lomonocytaire de l enfant les syndromes pr leucemiques et les h morragies aigu s a permis d liminer les biais d interpr tation pr visibles des param tres biologiques essentiellement l h moglobine A et les constantes rythrocytaires Les r sultats obtenus au terme de cette tude peuvent ainsi tre consid r s comme repr sentatifs pour la population de Bamako
64. s A1 a2 B2 h moglobine adulte majeure et A a2 62 ou h moglobine adulte mineure Apr s la naissance on trouve les h moglobines A1 A F et glyqu e La formule h moglobinique de l adulte est atteinte 6 mois apr s la naissance avec les proportions suivantes d finies par les techniques densitom triques Hb A 76 97 Hb A 2 3 5 Hb F lt 1 Hb glyqu e traces 3 4 Des mutations ou d l tions au niveau de ces g nes peuvent conduire des syndromes thalass miques associ es ou non des manifestations cliniques 5 Les a thalass mies sont plus souvent secondaires des d l tions chromosomiques elles sont incompatibles avec la vie lorsque la d l tion concerne les 4 g nes a elles entra nent une an mie mod r e lorsque deux ou trois g nes sont touch s par la d l tion et restent asymptomatiques lorsque seulement un g ne est del t Les B thalass mies sont la cons quence de mutations ou plus rarement de d l tions chromosomiques 6 7 En l absence de donn es de biologie mol culaire les syndromes thalass miques sont caract ris s en pratique partir de param tres biologiques essentiels savoir les fractions h moglobiniques F A2 et Ai le statut martial les constantes rythrocytaires et le taux d h moglobine de l individu Les P thalass mies sont caract ris es par une augmentation du taux des fractions F et A2 de l h moglobine alors que les a thalass mies Th se de Pharmacie F
65. selon le sexe 31 Tableau VIT comparaison des valeurs moyennes d h moglobine A de notre population celles rapport s par d autres DUTeS 2e ssiasrnenin ein ere trRe ra R nn end iatersesdenes 32 Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 12 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako INTRODUCTION L h moglobine humaine est constitu e de quatre cha nes polypeptidiques identiques deux deux constituants la globine Chacune de ces cha nes prot iques dites de type a et B est pelotonn e sur elle m me et forme 8 segments h lico daux not s de H elles m nagent entre les h lices E et F une poche destin e recevoir un pigment appel h me 1 La synth se des cha nes constituant la globine est pr coce dans la vie et ob it une cin tique particuli re 2 command e par des g nes de type a pour les cha nes de type a 1 C2 du a2 et type B pour les cha nes de type P e Gy Ay P Les g nes qui codent pour les cha nes a sont au nombre de quatre ceux qui codent pour les cha nes y sont au nombre de deux Gy et Ay Ainsi la p riode embryonnaire est caract ris e par trois types d h moglobines les h moglobines Gowers I et II et l h moglobine Portland Durant la p riode f tale on observe une synth se plus importante d h moglobine f tale HbF a2 02 C est partir de ce moment que commence la synth se des h moglobine
66. stant en h matologie biologique et un assistant en h matologie clinique Le plateau technique est compos de Deux microscopes optiques Leica DM 2000 Un microscope optique Leitz LABORLUX S Un bain marie Fisher Scientific Un ABX micros 60 18 parmt Un Citadel 1000 Une cyto centrifugeuse SHANDON Une centrifugeuse KOKUSAN Deux s choirs lectroniques memmert et JOUAN Iso 9001 Une balance analytique type Voyager Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 18 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako Un agitateur type VORTEX GENIE Un Option 4 plus Biom rieux Un Protofluor Z Un r frig rateur ARISTON Un r frig rateur ARTHUR MARTIN Un r frig rateur Brandt Un cong lateur Ultima II REVCO Trois ordinateurs Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 19 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako 3 Type d tude Nous avons r alis une tude d observation transversale allant du 17 ao t au 07 octobre 2009 4 Population d tude Cette tude a concern les sujets g s de 6 mois 45 ans des deux sexes 5 Variables ind pendantes de l tude gt Age compris entre 6 mois 45 ans gt Ferritin mie Volume globulaire moyen taux d h moglobine F gt Fractions d h moglobines d termin es par lectrophor se en capillaire de zone technique Capillarys 6 T
67. stricts contr les ont t effectu s en production pour maintenir constants l osmolarit et le pH d un lot l autre La production des r actifs a t effectu e dans des conditions de contr les stricts du niveau de poussi re en atmosph re filtr e dans des locaux en surpression La filtration st rilisante 0 22 um des produits permet d assurer leur protection contre des contaminations significatives en micro organismes et en poussi res Des agents conservateurs freinent le d veloppement de germes qui pourraient contaminer les r actifs lors de leur utilisation Le comptage des GB n cessite une destruction rapide des GR L agent de lyse d truit la membrane des GR r duisant la plupart du temps le stroma cellulaire l tat de d bris de tr s petites tailles qui ne sont plus d tectables par la m thode de mesure Cette action lysante a t ralentie pour pr server au mieux la structure nucl aire des globules blancs D autres facteurs ont leur importance pour assurer la qualit des r sultats par exemple une agitation suffisante des chantillons de sang 8 retournements complets doux successifs pour un tube de moins de 5 ml de 75 mm de haut rempli 75 au plus Dans le cas ou le sang a t s diment plus de 4 H l agitation a t prolong e Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 63 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako Num ration cellulaire automati
68. tation des urgences Une salle de soins des malades vus aux urgences Une unit de nutrition Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 17 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako Une unit de P T MLE Une salle de consultation de la dr panocytose Une salle de consultation de l oncologie p diatrique Une salle de perfusion et Une unit V LH 2 2 Description du service de p diatrie du CHME le Luxembourg Il est situ au sein du CHME le Luxembourg dans le quartier Hamdallaye de Bamako Il est dirig par un m decin p diatre assist des tudiants en ann e de th se des infirmiers et aides soignants Ce service est sollicit par les populations de Lafiabougou et Hamdallaye Il est compos de cinq salles de la salle 20 24 Chacune de ces salles comprend deux lits en plus des lits la salle 21 comprend galement deux berceaux 2 3 Description du laboratoire de biologie clinique de la FMPOS Le laboratoire de biologie clinique est situ au sein de la FMPOS II assure la formation pratique des tudiants de la dite facult Il apporte un appui aux structures sanitaires dans le diagnostic et le suivi des malades du Mali il fait ce titre des activit s d h matologie de routine et de cytologie sp cialis e Le laboratoire est dirig par un professeur titulaire d h matologie assist par un Ma tre de conf rence en h matologie biologique un Ma tre assi
69. timent sign d un parent ou d un tuteur l gal a t obtenu e Tout sujet n ayant pas de pathologie h matologique grave notamment une an mie s v re 6 2 Crit res de non inclusion e Tout sujet pour qui un consentement ou un assentiment sign n a pas t obtenu Les femmes enceintes Les malades souffrant d une pathologie canc reuse Les sujets sous suppl mentation martiale Les sujets chez qui une h molyse ou une h morragie r cente ou une h moglobinopathie a t document e 7 1 Param tres sociod mographiques Ces param tres ont concern l ge et le sexe 7 2 Param tres cliniques e Ant c dents m dicaux Etat de la peau et des muqueuses p leur ict re Etat de la rate spl nom galie du foie h patom galie des aires ganglionnaires ad nopathies et des amygdales hypertrophie amygdalienne 7 3 Param tres h matologiques e Constantes rythrocytaires e Taux d h moglobine e Taux des r ticulocytes e Taux d h moglobines A A et F Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 21 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako 7 4 Param tre biochimique Le param tre biochimique mesur a t le taux de ferritine s rique 7 5 M thodes de d termination des param tres biologiques gt L h mogramme et la formule leucocytaire ont t d termin s l aide d un compteur automatique de ty
70. tiquement par l instrument par rapport une couche de calibration m moris e mod le math matique lt lt mod le logistique 4 param tres gt gt et sont exprim s en ng ml pr paration NIBSC 80 578 Les chantillons qui pr sentaient des concentrations en ferritine sup rieures 1200 ng ml ont t redos s apr s dilution au 1 10 voire au 1 100 dans le tampon de dilution FER R1 Si le facteur de dilution n a pas t saisi lors de la cr ation de la liste de travail voir Manuel utilisation on multiplie le r sultat par le facteur de dilution pour avoir la concentration de l chantillon L interpr tation des r sultats du test a t faite en tenant compte du contexte clinique et ventuellement des r sultats d autres tests Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 34 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako 6 Limite du test Une interf rence peut tre rencontr e pour s rum contenant des anticorps dirig s contre des composants du r actif c est pourquoi les r sultats du test doivent tre interpr t s en tenant compte du contexte clinique et ventuellement des r sultats d autres tests Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 35 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako 8 Crit res d ligibilit pour la d termination des valeurs de r f rence de l h moglobine A et tes
71. tre sous populations leucocytaires lymphocytes monocytes granulocytes neutrophiles osinophiles et granulocytes basophiles Les diff rentes sous populations ont t extraites du cytogramme gr ce des techniques d analyse d images et leur interpr tation par un logiciel brevet Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 25 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako D termination du taux d h moglobine La d termination du taux d Hb sur analyseur est une adaptation de la m thode de r f rence bas e sur la transformation de l Hb en cyanmeth moglobine Cette m thode a t accept e en 1966 lors d un congr s International d h matologie publi e en 1967 la suite des recommandations faites par un comit d experts constitu 1964 par le lt lt international Committee for Standardisation in Haematology ICSH gt gt La NCCLS National Committee for Clinical Laboratory Standard aux Etats Unis a publi en f vrier 1984 un premier document lt lt Standard Approved gt gt intitul lt lt Reference Procedure for the Quantitative D termination of Hemoglobin in Blood gt gt 11 La derni re dition de ce standard approuv H 15 A3 a t publi le 12 01 2000 L agent de lyse ajout dans la dilution des GB contient un sel de cyanure 0 03 qui r agit avec l h moglobine lib r e des rythrocytes pour tre convertie en un compos cyanm
72. ts de ton travail bien fait de tes conseils et de ton soutien A M Alkassimou BA et Mme BAKAYOGO Dj n ba COULIBALY pour la formation que vous m avez donn e et vos conseils quotidiens A tout le personnel du service d H matologie Oncologie M dicale CHU Point G A mon cousin Dr Abdoul Karim DEMBELE pour son soutien tous gards Aux Dr Aboudramane Alou KONE Dr Aboubacrine Ali TOURE Dr Moussa BATHILY Dr Yacouba Lazare DIALLO Dr Madani LY A mes amis El azar DAO Barou SOGOBA Dr Dj n ba B FOFANA Dr Michel COULIBALY Dr Mamadou Mamourou BERE et Dr Benjamin SANOGO A mes cadets Oumar TESSOUGUE Pierre GUINDO Ousmane KONATE Abdoul Kader ISSOUFY bon courage pour le reste du cursus et la th se A tout le personnel du CRLD A mes camarades des coles fondamentales et secondaires A mes Professeurs de la FMPOS A mes camarades de la deuxi me promotion du numerus clausus de la FMPOS pour ces ann es de travail et pour tous les moments de joie et de peine A tout le groupe Hysope A tous ceux qui de pr s ou de loin m ont aid r aliser ce travail qui est aussi le v tre Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 3 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako Hommages A notre Ma tre et Pr sident du jury Professeur Boubacar Sidiki CISSE Professeur honoraire de Toxicologie la Facult de M decine de Pharmacie et d Odonto Stomat
73. ts statistiques utilis s Les crit res d ligibilit pour la d termination des valeurs de r f rence de l h moglobine ont t gt Un volume globulaire moyen VGM normal c est dire compris entre 75 et 85 fl pour les volontaires g s de 6 mois 12 ans 85 et 95 fl pour les volontaires g s de 13 45 ans gt Un taux d h moglobine F normal c est dire lt 1 gt Un taux de ferritine s rique normal autrement dit compris entre 20 et 180 ng L Ces crit res ont conduit retenir 41 volontaires pour calculer les valeurs de r f rence de l h moglobine A2 Les donn es relatives ces 41 volontaires ont t enregistr es et analys es sur le logiciel SPSS 12 0 L ge moyen des volontaires a t calcul avec le logiciel Excel 2003 Pour la comparaison des moyennes des diff rents param tres tudi s selon le sexe des volontaires nous avons eu recours au test d ANOVA pour la comparaison de nos valeurs celles rapport es par certains auteurs travers le monde nous avons utilis s le test de student Les valeurs comprises entre les percentiles 2 5 et 97 5 ont t consid r es comme les valeurs de r f rence Le seuil de signification des diff rences observ es a t fix un p lt 0 05 9 Consid rations thiques Les volontaires inclus dans l tude ont re u une information orale et crite d taill e sur le but et le d roulement de l tude Un formulaire de consentem
74. uoi ces cellules sont analys es sur des pr parations diff rentes Les GB sont mesur s sur une dilution h molys e au 1 251ul Les GR et Plt sont mesur s sur une dilution au 1 6000 r alis e en cascade depuis une pr dilution au 1 72 Les GB n interf rent g n ralement plus de fa on significative sur le comptage des GR ce taux de dilution Lorsque la dilution des GR PIt est termin e l agent de lyse est ajout une partie de la pr dilution afin de d truire la membrane des GR et lib rer ainsi leur contenu en h moglobine Formule leucocytaire Les sous populations leucocytaires ont t distingu es les unes des autres par l analyse du cytogramme que l on obtient en combinant les informations lectriques et optiques appari es cellule par cellule Certaines conditions de test tels que l chantillonnage dilution temp rature de la r action m lange r actionnel et dur e de la r action sont contr l es par l analyseur D autres conditions telles que la temp rature ambiante comme celles des r actifs et des chantillons la m thode de pr l vement l emploi des r actifs appropri s comme une agitation correcte des chantillons juste avant la mesure sont contr l s par le laboratoire Il ne faut pas sous estimer l importance des facteurs pr analytiques et d environnement dans la qualit globale de l analyse La lyse permet l analyse de 5 populations leucocytaires avec la mesure de qua
75. ur les h moglobinopathies en g n rales et les thalass mies en particulier Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 49 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES 1 PERUTZ MF LEHMANN H Molecular pathology of haemoglobin Nature 1998 222 902 9 2 STAMATOYANNOPOULOS G GROSVELD F Hemoglobin switching In STAMATOYANNOPOULOS G MAJERUS PW PERLMUTER RM VARNUS H editors The molecular basis of blood diseases Philadelphia WB Saunders 2001 P 135 82 3 FRANKLIN BUNN H FORGET BG hemoglobin molecular genetic and clinical aspects Saunders Philadelphia 1986 4 STEINBERG MRH et al Disorders of hemoglobin New York Cambridge University Press 2001 5 LABIE D ELION J Bases mol culaires et pathologiques des maladies de l h moglobine EMC H matologie 2005 2 220 239 6 WEATHERALL DJ CLEGG JB The thalassemia syndromes Oxford Blackwell Science 2001 7 STAMATOYANNOPOULOS G et al The molecular basis of blood diseases W B Saunders Company 1887 8 MAIER REDELSPERGER M GIROT R Les aspects cellulaires de la distribution et de la production de l h moglobine f tale H matologie 1996 2 5 437 42 9 HIGGS DR et al Clinical features and molecular analysis of acquired hemoglobin H disease Am J med 1983 75 181 Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 50 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f ren
76. x R PUBLIQUE DU MALI MINIST RE DE L ENSEIGNEMENTS SUP RIEUR ET DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE eee ee ee ee k UNIVERSIT DE BAMAKO UN PEUPTE UN BUT UNE FOT Ann e universitaire 2011 2012 TITRE THESE Pr sent e et soutenue publiquement le 03 03 2012 devant la Facult de M decine de Pharmacie et d Odonto Stomatologie de l Universit de Bamako Par M Bakary Kossa DEMBELE Pour obtenir le grade de DOCTEUR en Pharmacie Dipl me d tat URY Pr sident Professeur Boubacar Sidiki CISSE Membres Professeur Mounirou BABY Docteur Abdoul Aziz DIAKITE Docteur Aldiouma GUINDO Directeur de th se Professeur Dapa A DIALLO Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako DEDICACES ET REMERCIEMENTS DEDICACES A mon p re feu Dounantj DEMBELE et ma m re feue Kanuya COULIBALY j aurais voulu que vous voyez ce jour mais DIEU l a voulu ainsi qu il soit lou pour ce qu IL a fait Vous resterez toujours dans ma m moire A ma grand m re feue Z l DIARRA Tu tais au seuil de ce jour que tu as tant attendu certes la mort t a arrach e de mon affection mais tu resteras toujours dans ma m moire A la nation malienne pour l effort fourni pour ma formation A tous les malades du monde entier MENTION SPECIALE A mon Directeur de th se Professeur Dapa A DIALLO je ne sais pas comment vous remerciez pour tout ce que vous avez fait pour moi Vous m avez accept da
77. ynamique des GR PIt tentent de trier les impulsions pour d terminer l IDR par exemple en comparant la hauteur de l impression par rapport sa surface ou sa dur e Cet analyseur est quip d un dispositif de focalisation hydrodynamique en amont qui aligne et centre les cellules dans l orifice Dans ces conditions id ales les d formations des signaux en fonction de la zone de passage dans l orifice sont limin es par principe La focalisation hydrodynamique ne permettant pas d viter compl tement les ph nom nes de co ncidence un algorithme r alise automatiquement l limination des Th se de Pharmacie FMPOS Universit de Bamako 66 Bakary Kossa DEMBELE Valeurs de r f rence de l h moglobine A Bamako Num ration cellulaire automatique Sur Diana 5 X nia signaux d form s par le ph nom ne de co ncidence pour construire l histogramme de distribution selon la taille des cellules L histogramme relatif donne une image encore plus exacte de la distribution en volume des cellules Les autres param tres savoir H matocrite Hte Teneur Corpusculaire Moyen en H moglobine TCMH et Concentration Corpusculaire Moyen en H moglobine CCMH sont calcul s par des formules suivantes Hte VGM x Nbre GR TCMH Hb g dl NbreGR mm CCMH Hb g dl Ht Valeurs de r f rence et limites patient L analyseur compare les r sultats mesur s pour chaque patient avec les R f r

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