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Etude des paramètres biologiques chez les donneurs de sang

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1. ALPHA 2 VHC VHC GLOBULINES EFFECTIFS EFFECTIFS lt 7 20 52 24 3 29 13 6 gt 7 20 162 15 1 185 86 4 Total 214 100 214 100 Le nombre de personnes ayant un taux normal de alpha 2 prot ine est plus lev que ceux ayant un taux anormal La Diff rence est significative entre les VHC 75 7 et les VHC 86 4 avec p 0 05 et Odds ratio 0 49 0 29 lt OR lt 0 83 Tableau XV Classe des taux des b ta 1 globulines chez les VHC et les VHC VHC VHC BETA 1 GLOBULINES EFFECTIFS EFFECTIFS lt 6 42 19 6 31 14 5 6 9 154 12 177 82 1 gt 9 14 8 4 6 2 8 Total 214 100 214 100 Le nombre de personnes ayant un taux normal de beta 1 prot ine est plus lev que ceux ayant un taux anormal La diff rence est significative entre les VHC 72 et les VHC 82 7 avec x 6 42 et p 0 05 Hamadi Traor Tableau XVI Classe des taux des b ta 2 globulines chez les VHC et les VHC VHC VHC BETA 2 GLOBULINES EFFECTIFS EFFECTIFS lt 2 16 7 5 5 2 3 2 5 183 85 5 192 89 7 gt 5 15 1 17 8 Total 214 100 214 100 Le nombre de personnes ayant un taux normal de beta 2 globulines est plus lev que ceux ayant un taux anormal Ce nombre est comparable chez les VHC 85 5 et les VHC 89 7 avec 4 6 1 et p 0 06 Tableau XVII Comparaison des proportions de gammaglobulines chez les VHC et les VHC
2. ELISA 3 0 HCV orthodignostic system HCV 3 0 abbott dignostic Murex anti HCV Murex diagnostic et INNOTEST HCV ab IV innogenetics 2 9 2 Le diagnostic direct L importance des h patopathies NANB dans la pathologie virale h patique et notamment post transfusionnelle a fortement stimul la recherche de test de diagnostic s rologique et mol culaire afin de pouvoir les identifier et mieux comprendre leur volution 25 L amplification g nomique par PCR introduite en 1985 par les chercheurs de la firme lt lt Cetus gt gt 37 permettant d obtenir des mol cules de copies d ADN sp cifiques constitue ce jour une v ritable r volution dans ce diagnostic Pour le VHC cette amplification n cessite une premi re tape dite transcriptase reverse qui consiste en une transformation de l ARN viral en ADN grace une transcriptase Hamadi Traor 16 reverse L amplification g nomique par PCR comporte 3 tapes 37 La premi re tape consiste en une d termination de l ADN double brin par rupture des ponts d hydrog ne temp rature lev e aboutissant la lib ration d ADN simple brin La deuxi me tape r alis e basse temp rature permet le couplage aux deux brins d ADN issus de l tape pr c dente de deux amorces oligonucl otidiques compl mentaires l une de la r gion 5 et l autre de la r gion 3 de la s quence cible Pendant la troisi me tape l utilisation d une po
3. Statut Moyenne Ecart type s rologique Gamma globulines g l VHC N 214 21 0 5 1 VHC N 214 16 8 3 1 Les gammaglobulines repr sentaient en moyenne de 21 du total des prot ines s riques chez les VHC alors qu elles repr sentaient 16 8 du total des prot ines chez les VHC L infection par le VHC est associ e une hypergammaglobulin mie avec 4 68 15 et p 0 002 Hamadi Traor 4 Tableau XVIII Distribution des classes de gammaglobulin mie chez les VHC et les VHC Classes de pourcentage VHC VHC de gammaglobulines EFFECTIFS EFFECTIFS 8 4 16 3 29 13 6 110 51 4 216 4 185 86 4 104 48 6 Total 214 100 214 100 L hypergammaglobulin mie tait plus fr quente chez les VHC 86 4 que chez les VHC 48 6 Odds ratio 6 75 4 10 lt OR lt 11 17 et p lt 0 00001 Tableau XIX Comparaison des moyennes des GPT et GOT chez les VHC et les VHC Statut s rologique GPT GOT Moyenne Ecart type Moyenne Ecart type VHC N 214 38 5 26 4 27 5 14 6 VHC N 214 22 4 10 16 23 60 11 4 Les taux s riques de TGP et TGO taient en moyennes plus lev es chez les VHC que chez les VHC Ces valeurs taient cependant inf rieures aux valeurs seuils TGP 40UI et TGO 45 U l quelque soit le statut s rologique en VHC L infection n entra ne pas une augmentation significative des transaminases s riques Pour le GPT
4. a t en contact avec le virus Elle ne permet pas de savoir si le virus a t limin ou pas de l organisme De m me ce test restera positif en cas de gu rison En cas de r sultat positif et si un doute persiste un second test ELISA sera prescrit pour confirmation Mais la plupart du temps on s aidera d un dosage qualitatif de la charge virale plasmatique par PCR Ce test indique si l ARN du VHC est retrouv ou non sans en d terminer la quantit circulante sa sensibilit actuelle 2 9 1 Le diagnostic indirect Il repose sur des tests qui utilisent les antig nes viraux permettant la d tection sp cifique d anticorps anti VHC Deux types de tests sont actuellement utilis s les tests de d pistage utilis s en premi re intention et les tests de validation Tests de d pistage Il s agit habituellement des tests ELISA Les prot ines r combinantes ou les peptides de synth se viraux sont fix s soit sur des microplaques soit sur des billes de polystyr ne Les anticorps sont mis en vidence par immuno capture suivie d une r v lation enzymatique colorim trique Aujourd hui les tests s rologiques de d pistage commercialis s sont des tests de troisi me g n ration Ils incluent des prot ines r combinantes et ou des peptides synth tiques cod s la fois par les r gions structurales capside et enveloppe et les r gions non structurales NS3 NS4 NS5 Plusieurs tests sont disponibles sur le march
5. presque compl tement disparu depuis 1991 dans les pays d velopp s du fait du d pistage syst matique et des mesures d inactivation virale dans la pr paration des produits d riv s du sang Le risque r siduel de transmission du VHC est estim en France en 1997 1 pour 204 000 dons de sang ce qui repr sente moins de 10 nouveaux cas par an alors que celui du VHB est estim 1 pour 220 000 dons de sang Avec la syst matisation du dosage des transaminases chez les donneurs de sang ce risque est ce jour de 1 pour 500 000 transfusions 2 7 2 la toxicomanie La toxicomanie intraveineuse est actuellement la principale voie de transmission du VHC dans les pays d velopp s Cette toxicomanie est responsable des 2 3 de nouveaux cas de contamination par le VHC 60 90 des personnes ayant une p riode de toxicomanie sup rieure a 1 an ont t infect es par le VHC 2 7 3 Les autres modes de transmission La transmission m re enfant est bien d montr e mais rare estim e 3 Le risque de transmission est inf rieur 6 mais peut atteindre 10 si la m re a une charge virale lev e ou si elle est co infect e par le VIH ou le VHB 53 S agissant de l allaitement le risque semble tre extr mement faible ou nul 2 7 4 la transmission intra familiale Elle est rare et est le plus souvent li e au partage d objets courants en particulier les objets de toilette et d autres objets pour tatouages perc e d oreill
6. Temps de migration 30minutes Voltage constant 90Volts Amp rage de d part 12Am O Hamadi Traor Apr s migration d brancher la cuve et sortir le gel Fixation coloration d coloration du gel nous avons adopt la fixation la chaleur le gel est s ch sous air chaud 80 C dans l incubateur s cheur jusqu s chage complet pendant au moins 10minutes Le gel refroidi est d abord immerg dans la solution de coloration pendant 4 minutes puis dans deux bains successifs de solution de d coloration jusqu obtention d un fond parfaitement clair Le gel est ensuite s ch dans une tuve Lecture le gel ainsi pr par est pr t pour une lecture 570nm par densitom tre permettant de d finir les concentrations relatives pourcentages de chaque fraction 35 IV 5 Consid rations thiques Le pr sent travail entre dans le cadre d une recherche scientifique L enqu te garantissait la confidentialit des donn es Aucun nom de malade n apparaitra dans la th se Aucun cas n a t inclus sans accord apr s consentement clair Les analyses taient gratuites pour les malades IV 6 Traitement des donn es Les informations recueillies sur le sujet participant l tude ont t analys es et saisies sur logiciel EPI info version 6 04 bfr Le test x a t utilis pour comparer les variables et le seuil de significativit a t fix a 0 05 V 1 R sultats so
7. acide sulfurique 0 9N Rio Films adh sifs R Sachet s minigrip pour la conservation des barrettes inutilis es R12 Mat riels n cessaires mais non fournis Eau distill e ou compl tement d min ralis e Eau de javel et bicarbonate de soude Papier absorbant Gant usage unique Hamadi Traor 25 e Lunette de protection e Tubes usage unique e Pipettes automatiques ou semi automatiques r glables ou fixes avec embouts pouvant distribuer 20u1 80u1 10011 200u1 et 1ml respectivement e Pipettes multicanaux et r servoir en V jetables pour l addition du conjugue de la solution de substrat et de la solution d arr t e Eprouvettes gradu es de 10ml 20m1 1000ml1 e Agitateur de type vortex e Syst me de lavage automatique semi automatique ou manuel pour micro plaque e Bain marie ou un incubateur sec 37 40 C 1 C e Conteneur de d chets contamin s e Appareil de lecture pour microplaque quip de filtre 450 620nm d Pr paration des r actifs Avant l utilisation des r actifs de la trousse INNOTEST HCV Ab IV les laisser quilibrer la temp rature ambiante pendant 30minutes e Solution de lavage R3 Diluer au 1 10 la solution de lavage dans de l eau distill e sachant que 2 x 250 ml de solution pr t l emploi sont n cessaires pour une plaque Homog n iser e Solution de r v lation enzymatique R 3 Ro Diluer le r actif R9 dans le r actif R8 au 1 100 exemple 20u1 de R9 da
8. ge est comparable entre les VHC et les VHC Y 0 8 et p 0 83 Hamadi Traor 39 Tableau VIII R partition des VHC et des VHC selon la situation matrimoniale VHC VHC Situation matrimoniale EFFECTIFS EFFECTIFS C libataires 96 44 86 100 46 73 Mari s 104 48 6 101 47 2 Divorc s 14 6 54 13 6 07 Total 214 100 214 100 Les deux groupes sont comparables dans leur r partition en fonction du statut matrimonial Y 0 l6etp 0 9 Tableau IX comparaison des taux s riques des protides totaux chez les VHC et les VHC Taux des Protides MOYENNE ECART TYPE totaux Protides totaux g l VHC N 214 99 50 36 7 VHC N 214 78 02 13 4 La moyenne des protides totaux du sang tait plus lev e chez les VHC que chez les VHC respectivement 99 5g l et 78 02g 1 p lt 0 0001 40 Hamadi Traor Tableau X Fr quence des taux de protides totaux chez les VHC et les VHC VHC VHC Protides totaux g l EFFECTIFS EFFECTIFS lt 80 83 38 8 150 69 1 gt 80 131 61 2 64 29 9 Total 214 100 214 100 Les personnes pr sentant une hyperprotid mie gt 80g 1 sont plus fr quentes chez les VHC 61 2 que chez les VHC 29 9 Il y a donc une association significative entre l hyper protid mie et l infection par le VHC x 45 9 p lt 0 0001 et Odds ratio 3 7 2 4 lt OR lt 5 64 Tableau_XI Comparaison des moyennes des
9. patiques chez les donneurs de sang Effectuer la num ration formule sanguine et la vitesse de s dimentation chez les donneurs de sang D terminer le protidogramme chez les donneurs de sang Comparer les param tres biologiques obtenus chez les donneurs de sang porteurs du VHC et ceux non porteurs de cette infection Hamadi Traor 3 III 1 Rappels sur les h patites virales Le terme d h patite virale est commun ment utilis pour plusieurs maladies cliniquement similaires mais qui sont distinctes sur le plan tiologique et pid miologie Ce sont des maladies inflammatoires des tissus parenchymateux qui s expriment essentiellement sur le foie Six virus ont t identifi comme responsables de la majorit des h patites il s agit des virus A B C D E et G Les modes de transmission diff rent selon les types de virus Les virus des h patites p n trent dans l organisme soit par voie digestive VHA soit par voie sanguine VHB et VHC soit par voie sexuelle VHB surtout 18 61 62 Les virus A et B ont t reconnus comme des entit s enti res depuis 1940 mais ils n ont t formellement isol s qu en 1968 et 1973 respectivement Il existait une troisi me cat gorie de virus provoquant une forme d h patite qui n tait li ni au virus A ni au virus B Apr s une p riode d tude sur les h patites le virus responsable de la plupart des h patites non A non B NANB a t finalement identifi par Cho
10. port e sur 9931 donneurs de sang recens s au CNTS pendant la p riode de l tude Nous avons s lectionn un chantillon de 214 VHC et de 214 VHC pour tudier les modifications biologiques possibles induites par l infection par le VHC Au plan socio demographique nous avons inclus plus de donneurs homme que de femme Ceci vient du fait qu au CNTS les donneurs sont majoritairement hommes comme l ont d j d crit certains auteurs 25 30 54et 64 Ceci pourrait s expliquer par les multiples contres indications au don de sang chez les femmes allaitement menstruation gestation etc Nous avons galement observ que les donneurs de sang de notre tude taient en majorit jeunes 18 35 ans Cette tranche d ges repr sentait 75 des donneurs Ceci est comparable au r sultat de Sarro en 2002 et Tangara en 2004 qui ont respectivement trouv que les donneurs de sang de 18 35 ans repr sentaient 76 et 72 59 54 D autre part les scolaires taient les plus repr sent s parmi les donneurs de sang avec une fr quence de 42 6 suivis par les hommes en tenue 21 4 Ceci s expliquerait par le mode de recrutement de nos donneurs En effet nous recrutons nos donneurs principalement dans les lyc es les coles de formation professionnelles l Universit et les garnisons militaires de Bamako et Kati La plupart de nos donneurs sont des c libataires 55 6 qui est en relation Hamadi Traor 49 avec le mo
11. rale associ e un ict re une h morragie et d autres signes d insuffisance h patique 43 Actuellement six virus ont t identifi s comme responsables de la majorit des h patites il s agit des virus type A B C D E et G Le virus type C responsable de l h patite virale C a t d couvert en 1989 et d crit comme tant l agent tiologique des maladies du foie dans la plupart des r gions du globe 56 L h patite virale C se pr sente plus fr quemment 50 60 des cas sous la forme d un portage chronique actif qui peut voluer dans 20 des cas vers une cirrhose 9 Le nombre de personnes infect es par le virus de l h patite C dans le monde est estim 170 millions soit 3 de la population mondiale 52 En Europe 9 millions de personnes sont infect es par le VHC soit 1 de la population europ enne 52 En Afrique 32 millions d individus sont porteurs de ce virus soit 5 3 de la population africaine 52 La distribution de l infection est variable selon les pays La s ropr valence du VHC varie de 0 26 en Afrique du Sud 63 13 5 en Egypte 21 Au Mali de nombreuses tudes ont t effectu es sur les h patites virales mais la plupart ont concern l h patite B du fait de ses complications graves Peu d tudes ont port sur l h patite C et les donn es disponibles montrent des pr valences variables de 2 5 4 5 6 20 et 25 La pr valence de l infection par le
12. 2002 par Katemb 6 et 4 96 en 2003 par Tangara 54 chez les m mes populations de donneurs Au Ghana la pr valence du VHC est de 5 4 chez les enfants en age scolaire 46 et 3 3 chez les donneurs de sang Lom 3 En Afrique Centrale des tudes ont rapport es une s ropr valence de l ordre de 10 20 au Gabon oriental et au Sud du Cameroun 24 40 51 58 Au Zaire la pr valence est de 6 65 En Afrique Australe au Zimbabwe la pr valence est de 7 7 L Egypte appara t comme ayant la haute pr valence les anticorps Anti VHC ont t retrouv s chez 22 des nouvelles recrues de l arm e et chez 16 4 des enfants avec h patom galie 1 Hamadi Traor 10 H patite C 2003 Pribvaterica de Finkection A EE ii i E 1 20 E Figure 2 carte de distribution g ographique du VHC dans le monde Source OMS 2003 Hamadi Traor 11 2 7 Modes de transmission Les principaux modes de transmission du VHC sont connus Il se transmet essentiellement par voie parent rale les transmissions sexuelles et m re enfant sont rares Les deux principaux modes de transmission sont la toxicomanie intraveineuse et les ant c dents de transfusion 27 34 38 2 7 1 les produits sanguins La transfusion de produits sanguins sang total albumine plasma globulines etc a t la premi re cause reconnue de transmission et a jou un r le majeur dans la diffusion de 1 infection Ce mode de transmission
13. 43 6 6 0 001 Le nombre de neutrophiles tait plus lev chez les VHC que chez les VHC et celui des lymphocytes tait par contre l g rement plus lev chez les VHC que chez lesVHC Les osinophiles les basophiles et les monocytes sont comparables entre VHC et VHC Hamadi Traor 47 Tableau XXII Comparaison des valeurs moyennes de la Vitesse de s dimentaion Vs chez les VHC et les VHC Statut s rologique Vs 1 heure Vs 2 heure Moyenne Ecart type Moyenne Ecart type mm mm VHC N 214 33 7 17 9 63 6 31 6 VHC N 214 23 1 12 4 47 0 43 6 p lt 0 0001 lt 0 0001 Les vitesses de s dimentations sont plus lev es chez les VHC que chez les VHC aussi bien la 1 heure qu la 2 heure p lt 0 0001 Hamadi Traor 48 Commentaires Le but de notre travail tait d tudier les modifications de certains param tres h matologiques et ou biochimiques induites par l infection par le VHC C est pourquoi nous avons choisi d effectuer ce travail au CNTS chez les donneurs de sang Au CNTS il y a un d pistage syst matique de l infection par le VHC chez tous les donneurs de sang Ceci facilitait la s lection des cas et des t moins Par ailleurs travailler au CNTS permettait en cas de besoin de revoir plus facilement les donneurs inclus dans l tude Notre tude s est d roul e au CNTS du 01 Mars 2004 au 31 D cembre 2004 Elle a
14. Masson 1994 387P 21cm 11 Burix J Calvet X Cort J Ventura M Bruguera M Astillo R Barrera J Ercella G Topias JMS ALL M Redes J Prevalence of antibodies to hepatitis C virus in spanish patient with hepatocellular carcinoma and cirrhosis Lancet 1989 28 1004 8 12 Busson F Trapet P Lecog F Exploration des prot ine s riques Application aux s rums d africains de Dakar Med Top 1953 13 6 977 1001 Bull Med A O F 31954 11 1 11 39 13 Cenac A Pedreso MJ Djibo A Develoux M Pichoud C Lamothe F Trepo C Warter A Hepatitis B C and D virus infection in patients with chronic hepatitis cirrhosis Hamadi Traor 54 and hepatocellular carcinoma a comparative study of Niger Am Jr Epid Hyg 1996 52 4 293 6 14 Charmonte M Papicetta M Trofellini T et al Prevalence of anti VHC in Cameroon school children abst In Abstat book of the 1990 international symposium on viral hepatitis and liver disease Apr 4 8 Houston 1990 159 15 Chen DS Kuo GC Sung JL Lai MY Shen JC Schen JP et al Hepatitis C virus infection in an area hyperendemic for hepatitis B and chronic liver diease The Taiwan experience J infect Dis 1990 162 817 22 16 Choo QL Kuo G Weiner AJ Overby LR Bradley BW and Houghton M 1989 Isolation of a cDNA clone derived from a blood borne non A non B hepatitis genome Science 244 362 4 17 Cicciarello S Borgia G Ciampi R Orlando R Mainok M Rena
15. Techniciens Sup rieurs de Sant e De quatre Agents Comptables e De trois Secr taires e Dun R ceptionniste de t l phone e D une Cuisini re e D un Manceuvre Hamadi Traor 20 e D un gardien e De deux chauffeurs 1 2 Les locaux Le b timent est compos e D un bloc administratif e D un bloc pour les laboratoires groupage s rologie h mato biochimie traitement des pr l vements sanguins e D une chambre froide e D un magasin de stockage des mat riels e D une salle de garde e De deux salles de consultations et de suivi des donneurs En outre le centre dispose d une salle de restauration pour les donneurs b n voles de sang d un incin rateur de d chets biom dicaux d un groupe lectrog ne et d un logement pour le gardien 1 3 Les prestations du CNTS Les prestations assur es par le CNTS sont e La collecte du sang des donneurs en cabine close et en quipe mobile e La sensibilisation de la population au don de sang volontaire e Les analyses de s curit transfusionnelle afin de valider les produits sanguins selon les normes de l OMS e Le fractionnement des produits sanguins e Les analyses dites diverses concernent les pr l vements des non donneurs e La formation continue en transfusion sanguine La mise en uvre des projets de recherche et l encadrement des th ses de M decine et de Pharmacie Au CNTS environ 20 000 poches sont collect es par an et environ
16. albumines s riques chez les VHC et les VHC Statut s rologique Moyenne Ecart type albumines g l VHC N 214 56 5 6 1 VHC N 214 61 4 5 5 La moyenne de l abumine s rique tait plus faible chez les donneurs VHC que chez ceux VHC Donc il y a une association n gative entre l infection par le VHC et l albumine s rique p lt 0 0001 Hamadi Traor 41 Tableau XII Fr quence des taux des albumines chez les VHC et les VHC VHC VHC TAUX D ALBUMINE EFFCTIFS EFFECTIFS lt 59 7 152 71 64 29 9 59 7 70 7 62 29 150 70 1 Total 214 100 214 100 La diminution de l albumine est observ e chez 71 des donneurs VHC contre 29 9 des VHC y 72 3 ddl 2 p lt 0 0001 Il y a une association significative entre Odds ratio l infection par le VHC et l hypo albumin mie 5 75 3 71 lt OR lt 8 91 Tableau XIII Classes des taux des alpha 1 globulines chez les VHC et les VHC VHC VHC ALPHA 1 EFFECTIFS EFFECTIFS GLOBULINES lt 1 1 9 1 0 5 1 2 7 181 84 6 206 96 2 gt 2 7 29 13 5 7 3 3 Total 214 100 214 100 Le nombre de personnes ayant un taux normal de alpha 1 prot ine est plus lev que ceux ayant un taux anormal Ce nombre est comparable aussi bien chez les VHC 84 6 que les VHC 96 2 Hamadi Traor 42 Tableau XIV Classe des taux des alpha 2 globulines chez les VHC et VHC
17. mani re diff rentielle Recouvrir la lame de May Grunwald et Giemsa et laisser au contact 3 mn Ajouter 1 ml d eau distill e laisser agir une minute rejeter le tout et colorer par la solution de Giemsa pr par e extemporan ment Laisser au contact 15 20 mn laver s cher et lire gt La formule leucocytaire tait tablie sur 100 leucocytes en examinant la lame l objectif 100 en immersion Hamadi Traor 30 4 2 3 S dimentation globulaire o Principe Du sang recueilli sur anticoagulant est plac dans un long tube de verre gradu vertical Les h maties tombent s dimentent et une couche de plasma surnage La hauteur plus ou moins grande de cette couche de plasma apr s une heure deux heures traduit la vitesse de s dimentation des globules rouges o Mat riel Tube de Westergreen Support pour les tubes de Westergreen un chronom tre o Mode op ratoire Aspirer le sang dans le tube gradu de Westergreen jusqu la graduation z ro Fixer le tube sur le support en appuyant bien le bas du tube contre la rondelle de caoutchouc du support Attendre une heure et noter alors la hauteur de la couche rythrocytaire en graduation mm partir du z ro du haut du tube Attendre une deuxi me heure noter alors la nouvelle hauteur de la couche rythrocytaire 4 2 4 Dosage s rique des transaminases h patiques a Principe Les enzymes GOT et GPT contenus dans le s rum en pr sence de leurs substrats re
18. nous avons des ions cuivriques qui se combinent aux liaisons peptidiques des prot ines doser pour donner un complexe violet pourpre toutes les substances ayant au moins trois liaisons peptidiques voisines donnent une r action positive de Biuret gt Mode op ratoire La solution de travail tait pr par e en ajoutant 5ml du r actif R3 un flacon du r actif R2 Apr s m lange la solution est pr te l emploi La stabilit est de six mois entre 2 C et 8 C Distribuer 1ml de la solution de travail dans les 3 cuves Cuve de blanc Cuve Hamadi Traor 32 d talonnage et Cuve de dosage Ajouter 20u1 de l talon la cuve d talonnage Ajouter 20u1 de s rum chantillon la cuve de dosage M langer et attendre Sminutes Effectuer la lecture au spectrophotom tre une longueur d onde de 55nm La stabilit de la r action est de 30 minutes La valeur normale dans le s rum est comprise entre 60 80g 1 b Electophor se des prot ines s riques gt Principe l lectrophor se des prot ines s riques est bas e sur la s paration des prot ines en milieu tampon alcalin pH 8 5 par un champ lectrique sur un support solide Un gel d agarose est utilis comme le support solide Il donne une s paration des constituants s riques humains en six fractions majeurs de mobilit s diff rentes savoir Albumine alpha 1 globuline Alpha 2 globuline B ta Iglobuline B ta 2 globuline gamma globuline Nous
19. persistance du VHC dans le foie et dans le sang au del de 6 mois apr s la contamination Les cellules de d fense de l organisme se r v lent incapables d liminer toutes les infect es et le virus persiste au long cours dans le foie Comme dans l h patite aigu les cellules d truites r g n rent Toute fois chez Hamadi Traor 13 certaines personnes va se d velopper progressivement une fibrose qui est un tissu cicatriciel irr versible La fibrose va d limiter progressivement des nodules on parle alors de cirrhose Lorsque la cirrhose est constitu e il n y a pas obligatoirement de troubles il peut m me n y avoir aucun risque Toute fois lorsque la fibrose progresse elle finit par touffer les cellules h patiques normales et va entra ner des manifestations qui peuvent tre graves La cirrhose peut survenir au terme de 20 ann es d volution dans environ 30 des cas Par la suite cette cirrhose peut se compliquer par un cancer du foie survenant chaque ann e pour 4 5 des cas de cirrhose Certains facteurs acc l rent l volution de la maladie Age lev au moment de la contamination 40 50 ans Sexe masculin Alcool consommation quotidienne sup rieure 40 50 g Poids lev Coinfection par le VIH et ou le VHB Tabagisme Polytoxicomanie Benzodiazepines ecstasy m dicaments 2 8 3 Le Cancer du foie Les malades atteints de cirrhose ont un risque de d veloppe
20. pourquoi je souhaite encore beaucoup de courage et pers v rance a tous A tous les travailleurs du CNTS de Bamako merci pour votre disponibilit 9 SS A mes grands parents que j aime tant Une pens e mue ceux qui nous ont quitt Qu ils reposent en paix LS A touts mes amis David DIARRA Moussa SAMAKE Amara DIARRA Bouya TRAORE Famori KEITA ce travail est aussi le v tre Au Comit Universitaire pour la Coordination des Arts Martiaux et Disciplines Assimil es de la FMPOS je dirai merci pour le soutien appr ciable 7 LS A la LIEEMA merci pour le soutien moral ce Au Dr Mamadou TOUNKARA et tout le personnel de la Pharmacie le GUIDE SARL pour leur collaboration franche e A tous ceux qui de pr s ou de loin ont contribu a l laboration de ce document e A tous les donneurs ayant particip cette tude Sans vous cette tude ne pourrait avoir lieu Recevez ici ma profonde gratitude Minist re de l ducation nationale R publique du Mali M EN oh ok oh oh ok ok ok ok ok ok ok ok ok ok oh CE CE CE CE CE CE CE CE CE CE CE CE CC Universit de Bamako Un peuple Un But Une Foi CCE CE CE CE CE CE CE CE CE CE CE CE CE CE CCE CE CE CE CE CE CE DE CE CE CE CE CE CCC Facult de M decine de Pharmacie Th se N et d Odonto stomatologie FMPOS ANNEE 2004 2005 ETUDE DES PARAMETRES BIOLOGIQUES CHEZ LES DONNEURS DE SANG INFECTES PAR LE VIRUS DE L HEPATITE C Th
21. se Pr sent e et soutenue publiquemenatle caracas 2005 Devant la Facult de M decine de Pharmacie et d Odonto stomatologie Par Monsieur Hamadi TRAORE Pour obtenir le grade de DOCTEUR EN PHARMACIE Dipl me d Etat JURY Pr sident du jury Professeur Moussa HARAMA Membres professeur Flabou BOUGOUDOGO Docteur Issaka SAGARA Directeur de th se Professeur Anatole TOUNKARA Hommage aux membres du jury A notre pr sident du jury Professeur Moussa HARAMA Professeur charg des cours et TP de chimie Organique et des cours et TP de chimie Analytique qualitative Responsable de l enseignement de la chimie Organique Nous sommes tr s heureux de l honneur que vous nous faites en acceptant de pr sider le jury de cette th se En vous choisissant comme pr sident la facult voulu rendre hommage votre profond attachement votre d vouement la formation des tudiants et la simplicit de votre enseignement de qualit Veuillez trouver ici l assurance de notre reconnaissance et de notre profond respect A notre Maitre et juge Professeur Flabou BOUGOUDOGO Professeur agr g en Bact riologie et Virologie la F M P O S Directeur G n ral de l Institut National de Recherche en Sant Publique I N R S P Nous sommes tr s honor s par votre pr sence dans ce jury de th se Vos qualit s humaines et surtout votre sens lev de la responsabilit et de la rigueur dans le travail ont beaucou
22. t test s entre Mars 2004 et D cembre 2004 pour la recherche des Ac anti VHC par la technique ELISA Seulement 428 donneurs ont t pr lever pour les analyses biologiques La s roprevalence du VHC est estim e a 4 8 L infection par le VHC touche principalement les adulte 36 45ans L infection par le VHC n affecte pas significativement les transaminases h patiques chez les personnes portant de fa on asymptomatique Pinfection par le VHC Il y a une augmentation significative des gammaglobulines s riques aucours de l infection asymptomatique par le VHC Les param tres h matologiques ne semblent pas particuli rement affect s au cours de l infection asymptomatique par le VHC Mots cl s VHC donneurs de sang CNTS Fiche d enqu te sur le VHC au CNTS de Bamako Fiche N Pr nom Age Situation matrimoniale Mari e Etat s rologique VHC positif Nom sexe Divorc e C libataire VHC n gatif Bilan Biologique Signes cliniques NES Ict re VS H patom galie Protides totaux Perte de poids Electrophor se des protides Transaminases ALAT ASAT Consentement clair J accepte librement sans aucune contrainte d tre pr lev pour des fins d tudes sur le VHC en fois de quoi j appose aussi librement ma signature sur le pr sent document d enqu te Fait Bamako CNTS lesi
23. utilis e a permis 1 isolement d un clone d ADN compl mentaire d riv du g nome du virus de 1 h patite NANB transmission parent rale 55 En effet la production d une prot ine virale antig nique obtenue par recombinaison g n tique partir d un chimpanz pr alablement inocul a permis la firme lt lt Chiron gt gt de mettre au point un test pour la d tection des anticorps s riques 31 42 Des contr les d hybridation ont permis d affirmer que ces anticorps taient dirig s contre une prot ine cod e par une autre partie du g nome du virus de 1 h patite NANB transmission parent rale d sormais appel e virus de l h patite C 2 2 Caract ristiques du virus de l h patite C Le VHC d couvert par les chercheurs de la firme Californienne Chiron est pour I instant l unique virus identifi par les techniques de la biologie mol culaire sans avoir t pr alablement ni cultiv ni m me observ 42 C est un virus ARN de 50 60 nm de diam tre envelopp tr s r sistant la chaleur dont le g nome est hautement variable Il survit au moins deux jours l air libre Son poids mol culaire est voisin de 4 106 Da avec une densit de 1 09 1 11 en gradient de suc rose Par ses caract ristiques 1l est apparent la famille des Flaviviridae dont les membres les plus connus sont les virus de la fi vre jaune et de la dengue type 2 L h patite virale C repr sente jusqu 85
24. 17000 poches sont distribu es par an 1 4 Les quipements techniques de laboratoire Hamadi Traor 21 e Une cha ne de micro typage en gel DIAMED e Une cha ne d lectrophor se SEBIA e Un coagulom tre e Deux automates d h matologie e Un spectrophotom tre e Trois microscopes optiques OLYMPUS e Une chaine ELISA de BIORAD e Une chambre froide e Des r frig rateurs et un cong lateur a 30 C Deux centrifugeuses r frig r es pour les poches de sang et les petits quipements et consommables pour la transfusion sanguine IV 2 Type et la p riode d tude Nous avons effectu une enqu te pid miologique transversale chez les donneurs de sang Elle s est d roul e de Mars 2004 a D cembre 2004 IV 3 Population d tude Notre tude a port sur la population des donneurs de sang du CNTS Ces donneurs sont de deux types Ceux qui viennent r guli rement donner volontairement et b n volement du sang au CNTS donneurs r guliers et ceux qui par occasion viennent donner du sang pour leur parent ou leur malade donneurs occasionnels parentaux Nous avons constitu notre chantillon de fa on al atoire tirage au sort num ros al atoires partir de l ensemble des donneurs r guliers et occasionnels venus au CNTS pendant la p riode d tude 3 1 Les crit res d inclusion e Etre donneur de sang r gulier ou occasionnel e Avoir t test deux fois pour le VHC e Avoir donn son cons
25. 45 413 15 27 Denis F Aussel L Ranger S Mrtin P Itona N Gaporo A Frommel D etal Prevalence of antibodies to hepatitis C virus among patients with leprosy in several african countries and the Yemen J Med Virol 1994 43 1 4 28 Esteba JI Gonzales A Hernandez JM Vilademin L Sanches L et al Evaluation of antibodies to HCV in a study of transfusion hepatitis associated Eng J Med 1990 323 1107 11 29 GangaidzoT Mozo VM Khumalo H Saungwene T Gouro Z Ronault T CHV infection in Zimbabwe Cent Afr Jr Med 1997 43 5 122 25 30 Guindo O Infection VIH et VHB chez les donneurs de sang au CNTS de Bamako Th se Pharm Bamako 2003 31 Janot C Botte C Le virus de l h patite C Rev Fr Trnsf H mobiol 1992 35 3 155 61 32 Jeng GJE TSAT JF Hepatitis C virus antibody in hepato cellular carcinoma in Taiwan J Med Virol 1991 34 74 7 Hamadi Traor 57 33 Joseph L Flass Statistical Methods for Rates and Propostions 2 nd edition John Willey amp Sons 1981 ISBNO 471 06428 9 PP 44 451 34 KA MM Herve P Legenno B N Diaye MF Diop TM Diop B Dangon JM Bao O Brechot C Faible pr valence des anticorps anti VHC dans le carcinome h patocellulaire au S n gal Ann Gastroent rol H patol 1995 31 329 35 Kew MC Hougton M Choo QL Kwo G Hepatitis C antibodies in southern african blacks with hepato cellular carcinoma Lancet 1990 335 873 74 36 Kowo PM Gouban P Mdam EC Ngaya O Sasa
26. R publique du Mali Un Peuple Un But Une Foi MINIST RE DE l DUCATION NATIONALE UNIVERSIT DE BAMAKO Facult de M decine de Pharmacie et D Odonto Stomatologie ANNEE 2004 2005 These N sssssssses Etude des param tres biologiques chez les donneurs de sang infect s par Le virus de l h patite C Th se pr sent e et soutenue publiquement le Facult de M decine de Pharmacie et D Odonto Stomatologie Par Hamadi TRAORE Pour obtenir le grade de Docteur en Pharmacie Dipl me d Etat JURY Pr sident du jury Professeur Moussa ARAMA Membres du jury Professeur Flabou BOUGOUDOGO Docteur Issaka SAGARA Directeur de th se Professeur Anatole TOUNKARA DEDICACES D abord au Tout Puissant mis ricordieux et au proph te Mohamed paix et b n diction d Allah sur lui pour m avoir inspir et donn la chance de mener bien ce travail Qu il en soit remerci A mon p re Lassine TRAORE Tu m as toujours t d un grand secours tu m as toujours donn les bons conseils et au bon moment Ta complicit a fait de moi ce que je suis aujourd hui Mon v u le plus ardent tait de te compter parmi les participants de cette c r monie Que Dieu soit lou Tu as t pour moi un exemple de courage et de pers v rance dans le travail bien fait Puisse ce travail m offrir l occasion de me rendre digne de tes conseils de ta confiance et de ton estime Que Dieu te garde encore longtemps au
27. VHC cependant d crite chez les donneurs de sang a montr la n cessit d introduire la recherche du VHC dans la validation biologique du sang au CNTS de Bamako Hamadi Traor 1 L infection par le VHC est un probl me majeur pour les centres de transfusion sanguine car selon certains auteurs seuls 20 des patients infect s sont ce jour diagnostiqu s 56 D ot la n cessit de trouver un moyen de diagnostic efficace Il a t d crit que l infection par le VHC est associ e une modification des transaminases h patiques les Alanine Aminotranf rases ALAT tant presque toujours plus lev s que les Aspartate Aminotransf rases ASAT Cette l vation est cependant fluctuante et particuli rement au cours d h patite chronique due au virus C 10 Les gamma globulines pr f rentiellement les immunoglobulines G IgG sont plus souvent lev es au cours d une h patite virale chronique 10 Au Mali peut on identifier des param tres h matologiques et ou biochimiques associ s l infection par le HCV Pour r pondre cette question nous avons effectu cette tude chez les donneurs de sang du CNTS de Bamako Hamadi Traor 2 1 OBJECTIF GENERAL Evaluer les param tres h matologiques et biochimiques chez les personnes infect es par le VHC au CNTS de Bamako 2 OBJECTIFS SPECIFIQUES D terminer la s ropr valence du VHC chez les donneurs de sang au CNTS Doser les transaminases h
28. ale C est une maladie dont l volution est variable mais souvent tr s lentement progressive Apr s contamination par le VHC 42 43 10415 des sujets gu rissent spontan ment gr ce au syst me immunitaire 20 a 25 ont une maladie chronique totalement asymptomatique avec des transaminases normales et des l sions au niveau du foie le plus souvent minimes Ainsi 30 40 gu rissent ou ont une maladie chronique b nigne sans cons quence 60a 70 d veloppent une h patite chronique se manifestant par une l vation le Hamadi Traor 8 plus souvent mod r e des transaminases La majorit de ces patients ont des l sions h patiques inflammatoires discr tes et une fibrose minime Environ 20 des personnes atteintes d h patites chroniques C d veloppent apr s 10 20 ans d volution une cirrhose susceptible d voluer vers une insuffisance des fonctions h patiques ou plus rarement un cancer Le risque de cancer du foie une fois la cirrhose constitu e est de 1 5 Plusieurs facteurs jouent un r le important dans le d veloppement de la cirrhose Comme l age au moment de l infection la consommation d alcool sup rieure 50 g jet le sexe masculin En revanche les caract ristiques virales comme le g notype et la charge virale ne sont pas associ es la progression de la fibrose 2 6 R partition g ographique Depuis la mise au point des moyens de d pistage du VCH des tudes prospectives
29. avons utilit s le kit HYDRAGEL PROTEIN E K20 Sebia France Chaque gel d agarose contenu dans le Kit est pr vu pour l analyse de 7 chantillons gt Mat riels G n rateur de courant Cuve d lectrophor se Pipette de 10ul 200u1 et 1ml Embouts Bac de fixation de coloration et de d coloration Applicateur HYDRAGEL K20 SEBIA contenant le port e applicateur HYDRAGAEL K20 Etuve universelle Densitom tre Incubateur s cheur gt R actifs L lectrophor se sur gel d agarose des prot ines s riques a t r alis e grace l utilisation du Kit HY DRAGEL PROTEIN E K20 qui fournit tout le r actif n cessaire a savoir Hamadi Traor 33 Gel d agarose pr t l emploi Tampon tri barbital en solution concentr e Applicateurs sept dents pr t l emploi Papiers filtres fins Autres n cessaires mais non fourni eau distill e gt Mode op ratoire o Pr paration de la solution tampon la cuve K20est constitu e de deux compartiments pouvant contenir chacun 150ml de solution tampon Ce ci tant 30ml de tri barbital sont compl t s 300ml avec de l eau distill e et partag s entre les deux compartiments de cuve K20 de fa on quitable o Migration doser le porte applicateur HYDRAGEL K20 plat sur la paillasse et relever le chariot porte applicateur d poser 120ul d eau distill e sur le plateau du porte applicateur dans le
30. chez les VHC n gatifs Nous avons augment s la taille de notre chantillon 214 volontaires pour chaque cas en vu de remplacer des sujets Hamadi Traor 23 dont certaines donn es ne sont pas exploitables IV 4 M thodes d tudes 4 1 Les chantillons biologiques Nous disposions dans la salle de pr l vement de deux s ries de tubes h molyse pour la collecte des chantillons de sang une s rie de tubes secs destin s aux analyses s rologiques et biochimiques et l autre s rie contenant des anticoagulants du citrate pour les analyses des facteurs de coagulation et de l EDTA pour la num ration formule sanguine Nous proc dions de la m me fa on lors des sorties mobiles Environ 5ml de sang veineux taient pr lev s dans chaque tube Les tubes pour les analyses biochimiques s rologiques et les facteurs de coagulation taient centrifug s 1500 tours minute pendant 10 mn Ensuite le s rum ou le plasma taient pr lev s d licatement dans un autre tube afin d ex cuter les analyses 4 2 Les techniques utilis es La d marche tait la suivante Dans un premier temps nous proc dions au d pistage s rologique de l infection par le VHC puis dans un 2 temps nous effectuions les analyses h matologiques et biochimiques de ces m mes donneurs Lorsqu un s rum est positif pour le VHC un second pr l vement tait d abord effectu pour confirmer le r sultat Si le deuxi me d pistage do
31. ciaux d mographiques de l ensemble des donneurs de sang pendant notre p riode d tude Tableau I R partition des donneurs de sang selon le sexe SEXE EFFECTIFS Masculin 8755 88 16 F minin 1176 11 84 Total 9931 100 Les donneurs de sang taient majoritairement du sexe masculin 88 1 Sexe ratio 7en faveur des hommes Hamadi Traor 36 Tableau IL R partition des donneurs de sang par tranche d ge TRANCHES D AGE EFFECTIFS 18 25 3514 35 38 26 35 3966 39 94 36 45 1760 17 72 46 60 691 6 96 Total 9931 100 Les majorit 75 32 des donneurs de sang venu au CNTS pendant la p riode de lP tude taient g s de 18 35 ans La tranche d ge de 26 35ans tait la plus fr quente suivie de celle de 18 25ans Tableau III R partition des donneurs selon la situation matrimoniale SITUATION EFFECTIFS MATRIMONIALE Maries 3498 35 22 C libataires 5530 55 68 Divorc s 903 9 1 Total 9931 100 Parmi les donneurs les c libataires taient les plus nombreux 55 68 Hamadi Traor 37 Tableau IV Fr quence du VHC chez les donneurs de sang VHC positifs VHC n gatifs Total SEXE Effectif Effectif Effectif Masculin 390 4 4 8365 95 5 8755 100 F minin 91 7 1 1085 92 3 1176 100 Total 481 4 8 9450 95 2 9931 100 La fr quence du VHC tait de 4 8 chez les donneurs de sang venus au CNTS
32. d miologiques de l h patite C car leur distribution est variable selon les r gions du globe Il existe des g notypes propres certains continents ou sont plus fr quent dans d autres Les g notypes 1 2 3 sont responsables de la majorit des h patites C en Europe de l Ouest aux Etats Unis et au Japon Le g notype 4 est par exemple tr s fr quent en Afrique Centrale en Afrique du nord et Moyen Orient Le g notype 5 pr domine en Afrique du Sud Les g notypes 6 et 11 sont tr s fr quents dans le Sud Est Asiatique Le g notype 3 avec de nombreux sous types est particuli rement fr quent en Inde Les g notypes 1 et 2 sont pr dominant en Afrique de l Ouest Les g notypes du VHC ont t d crits comme significativement associ s a certains modes de transmission C est par exemple le cas pour le g notype lb et la transfusion sanguine et les g notypes la et 3a et la toxicomanie intraveineuse 57 Les g notypes sont surtout utiles avant le traitement pour le choix du traitement et la d termination des chances de succ s et surtout de la dur e 2 5 Histoire naturelle de infection virale C Longtemps appel non A non B ce virus garde encore aujourd hui des aspects myst rieux A la diff rence des autres h patites l h patite C est caract ris e par un risque lev de passage a la chronicit Depuis 1990 beaucoup de progr s dans la connaissance de cette maladie ont t r alis s L h patite vir
33. de de recrutement qui fait que nos donneurs sont majoritairement plut t des jeunes en formation scolaire ou militaire Au Mali les gens se marient g n ralement quand ils ont termin s les tudes et sont en activit professionnelle Au plan de l infection par le VHC la s ropr valence du VHC tait de 4 8 ces r sultats sont comparables ceux obtenus par d autres auteurs KATEMBE avait trouv un taux de 5 4 en 2003 6 et TANGARA a obtenu un taux de 4 96 en 2004 54 Nos r sultats compar s ceux des tudes ant rieures au CNTS montrent que la pr valence de l infection par le VHC demeure stable depuis les premiers travaux ce jour Cette pr valence est cependant plus lev e que celle publi e par l OMS En effet selon POMS la s ropr valence du VHC dans le monde est d environ 3 de la population mondiale 52 La tranche d age 36 45ans tait la plus infect e 41 6 compar e aux autres classes d ge Tableau VII Le Tableau IV montre que la pr valence du VHC tait plus lev chez la femme 7 7 que chez l homme 4 45 Cependant l Odds ratio de 0 56 avec l intervalle de confiance 0 44 lt OR lt 0 71 indique que le sexe n est pas un facteur de risque de l infection par le VHC dans notre tude Ces r sultats sont en accord avec ceux de Demb l 25 qui a trouv une s ropr valence de 6 52 chez les femmes contre 3 34 chez les hommes au CNTS de Bamako Nous avons s lectionn 214 individus infec
34. de tous les cas d h patites post transfusionnelles et ne se propage apparemment que par voie parent rale partir de donneurs atteints de formes subcliniques de l infection Hamadi Traor 5 2 3 Organisation g nomique Le VHC contient un ARN simple brin de polarit positive d environ 9400 nucl otides Le g nome du virus peut tre subdivis sch matiquement en 3 r gions de S s La r gion non codante mesure environ 329 341 nucl otides et contient les s quences les plus conserv es qui jouent un r le majeur dans la r plication du g nome et la synth se des prot ines En aval de la r gion 5 est situ le plus grand cadre de lecture ouvert contenant 9379 nucl otides Cette r gion comporte 42 55 des g nes de structure gt Le g ne C code pour la prot ine C capside qui est compos e de 114 acides amin s avec une masse mol culaire de 13 000 Da et pourrait se lier 1 ARN g nomique gt Les g nes El et E2NS1 codent pour les prot ines d enveloppe la prot ine E comprendrait 198 acides amin s et aurait une masse mol culaire de 21 400 Da Sa portion C terminale pourrait interagir avec la membrane de la cellule h te Les g nes non structuraux codent pour les prot ines structurales NS2 NSS gt Le g ne NS2 code pour une prot ine tr s hydrophobe dont la fonction est inconnue elle serait souvent trouv e associer aux membranes cellulaires gt Le g ne NS3 c
35. econdes puis aspirer le liquide R aliser cette tape 6 fois Puis s cher la plaque par retournement sur un papier absorbant Distribuer 200u1 de solution de Conjugu pr par e dans toutes les cupules Couvrir les barrettes avec une feuille adh sive neuve et incuber pendant 60minutes 3 minutes 37 C 1 C Pr parer la solution substrat solution de r v lation durant l incubation Retirer la feuille adh sive vider les cupules par aspiration et laver 6 fois comme pr c demment Distribuer 200u1 de solution de substrat pr par e dans toutes les cupules Incuber pendant 30minutes Iminute temp rature ambiante et l obscurit Pour stopper la r action ajouter 50ul de solution d arr t toutes les cupules en respectant la m me s quence et les m mes intervalles de temps que lors Hamadi Traor 27 de l ajout de la solution de substrat Tapoter soigneusement le support pour assurer un m lange parfait v Lire l absorbance de la solution dans les 15 minutes suivant l tape de l arr t de la r action l aide d un lecteur de micro plaque quip d un filtre 450 620 nm f validation et interpr tation des r sultats gt Validation La pr sence ou l absence des Ac Anti VHC est d termin e en comparant pour chaque chantillon l absorbance enregistr e celle de la valeur seuil Vs calcul e V rifier la validit individuelle des cupules contr les positif et n gatif absorbanc
36. entement clair par signature d une fiche d enqu te individuelle Hamadi Traor 22 3 2 Les crit res de non inclusion N ont pas t inclus dans cette tude e les donneurs de sang venus au CNTS pendant la p riode d tude et ayant refus de participer a I tude e les donneurs de sang ayant donn leur consentement mais ayant t jug s inaptes au don de sang par le m decin de collecte il s agit de femme en p riode des r gles de grossesse ou d allaitement les personnes de petits poids inf rieur 55kg les personnes de moins de 18 ans ou de plus de 60 ans au moment du don de sang les hypertendus les diab tiques et les malades sous traitement 3 3 Taille de l chantillon d tude En nous basant sur l tude de Oumar TANGARA 54 nous avons estim la fr quence de l h patite C dans la population des donneurs desang Sur la base de cette estimation nous avons calcul la taille N de l chantillon en appliquant la formule apq 1 96 cart r duit de la loi normale pour amp 5 seuil de significativit N Taille de l chantillon N p 4 96 pr valence estim es a partir d une tude q 1 p 95 04 compl mentaire de la probabilit i 3 pr cision que nous avons fix s 1 96 0 0496 0 9504 N 201 13 0 03 N 202 Pour notre chantillon d tude nous avons besoin de 202 volontaires chez les VHC positifs et 202 volontaires
37. es 420nm Abr viations DORA absorbance moyenne du contr le positif E absorbance moyenne de l chantillon 1 Chaque contr le n gatif doit tre inf rieur 0 100 2 Chaque contr le positif doit tre sup rieur 0 800 3 calculer l absorbance moyenne du contr le positif P en excluant les valeurs contr les inf rieur 0 800 Calcul de la moyenne des absorbances mesur es pour le s rum positif DORA DOR4 DO C1 DO D1 DO E1 3 Calcul de la valeur seuil VS d finie par VS DOR4 2 75 gt Interpr tation Les chantillons dont l absorbance est inf rieure la valeur seuil sont consid r s n gatifs d apr s INNOTEST HCV Ab IV Il est conseill de ne pas soustraire la valeur du puits blanc En effet des chantillons limites r actifs positifs pourraient devenir limites n gatifs Dans ce cas toutes les DO sont diminu es de la valeur DO blanc par contre la valeur du seuil n est diminu e que de DO blanc 2 75 Hamadi Traor 28 Tous les s rums positifs taient test s nouveau en double 4 2 2 Num ration formule sanguine e L h mogramme est r alis l aide d un automate ABX MICROsot France sur du sang total pr lev dans un tube contenant de EDTA L automate utilis donne directement les param tres h matologiques suivants nombre de globules blancs ul nombre de globules rouges ul taux d h moglobine taux d h matocrite nombre de plaquettes ul Volume globulai
38. es acupuncture Hamadi Traor 12 scarifications rituelles vaccinations de masses 2 8 Clinique 2 8 1 L h patite aigu Lorsque le virus est introduit dans l organisme par voie sanguine il va gagner le foie et s y multiplie Il provoque alors apr s une p riode d incubation moyenne de deux mois une h patite aigu Il s agit d une p riode totalement asymptomatique silencieuse ou la quantit de virus dans l organisme n est pas suffisante pour provoquer des signes cliniques ou perturber les r sultats des prises de sang Dans certains cas la phase aigu s accompagne de certains signes qui sont 60 gt Fi vre c phal es douleurs musculaires et articulaire fatigue passag re gt Douleur dans la r gion du foie naus es diarrh es gt Eruption cutan e de type urticaire Ces signes peuvent tre accompagn s d un ict re Ils mettent plusieurs semaines dispara tre D roulement de la phase aigu Apparition de l ARN du VHC premier marqueur dans le s rum 7 21jours apr s la contamination Augmentation des transaminases s riques au del du 15 me jour souvent au del de 4semaines apr s la contamination 2 8 2 H patite chronique L volution vers la chronicit est d sormais bien d montr e 55 c est la complication majeure de l HVC ce qui fait toute sa gravit Elle survient dans 80 des cas apr s une infection aigu symptomatique ou non Elle se caract rise par la
39. et m me r trospectives ont permis d tudier le virus dans l espace 28 35 On sait aujourd hui que le virus est ubiquitaire pr sent dans tous les continents avec cependant une pr dominance dans certaines pays industrialis s comme le Japon 16 61 Ceci s expliquerait par les habitudes de la modernit qui favoriseraient la propagation du virus dans la population toxicomanie la seringue dialyse homosexualit greffes d organes et transfusion 42 La pr valence moyenne du VHC dans le monde est de 3 soit 170million de personnes infect es 60 Aux Etats unis il y a environ 4millions de porteurs chroniques 4 En Europe la proportion de sujets atteints varie de 0 5 2 en fonction des pays avec un gradient Nord Sud En Europe de l Ouest Smillions de personnes sont touch es en Europe de l Est certains pays sont particuli rement touch s jusqu 3 4 52 57 En France la pr valence de la s ropositivit VHC est de 1 1 a 1 2 soit 5000000 650000 personnes infect es dont 55 85 environ sont porteuses du virus 60 Hamadi Traor 9 En Afrique noire la pr valence varie de 2 6 selon les pays 55 La distribution est tr s h t rog ne en particulier en Afrique du Sud du Sahara 55 57 En Afrique occidentale peu d tudes sont publi es de nos jours Au Mali une pr valence de 3 a t rapport e chez les donneurs de sang au CNTS de Bamako en 1999 par Dembel 25 5 4 en
40. g notypes 2 et 3 sont associ s une meilleure r ponse th rapeutique et de la charge virale 3 3 La prophylaxie Pour retarder l volution de l infection par le VHC nous avons cot du traitement antiviral d autres pr cautions qui sont fondamentales Il s agit de l hygi ne de vie et des pr cautions prendre pour viter la contamination et les complications Le r gime alimentaire L existence du virus associ une consommation r guli re d alcool majore de fa on nette les l sions au niveau du foie En cas de surpoids ou d ob sit un r gime amaigrissant peut tre conseill car ce ci est un facteur de sensibilit h patique Par contre il n y a aucune restriction alimentaire et tous les aliments sont autoris s Pr cautions Hamadi Traor 18 Qu un sujet soit malade ou porteur asymptomatique il est indispensable de respecter certaines pr cautions La transmission se fait par contact sanguine il faut donc viter le partage des objets de toilette potentiellement contaminant comme les rasoirs les brosses a dents coupe ongles En cas de blessure il est n cessaire de bien d sinfecter la plaie l aide d antiseptique et de prot ger d un pansement Aucune trace de sang ne doit persister Il faut nettoyer les outils de travail l eau de javel dilu e 1 2 ou a partir de la bouteille d un litre Le virus est peut transmissible par voie sexuelle mais en cas de partenaire mu
41. h patite Cossio adora 5 2 3 Organisation PEO MU dinastia 6 2 4 Le g notype Vil Al iio 2 5 Histoire naturelle de l infection virale C vrai 8 2 6 R partition g graphigUe it 9 Zhe Modes de ASIS IO ario 12 2 CUS ne ed Li ee aan Can co 13 2 9 Diagnostic bolo ci radica 15 IIL 3 Traitementetprophylaxie 18 IV MATERIELS ET METHODES NANA A A 21 IV 2 Type et p riode d tude c c ccrcsssorcssiiissesricaressreresiissssrs 23 IV 3 Population EUR A 23 IV 4 M thodes tudes ns urnes entend 24 4 1 Les chantillons biologiques cicssccarsecssecsaeesaasaeccncncarses 24 4 2 Les techniques utilis es sir rd 25 IV 5 Consid rations CU Ques serra 37 IV 6 Taitement des donn es 37 V RESULTATS V 1 R sultats sociiaux d mographiques 38 V 2 R sultats pour les sujets inclus dans I tude 42 VI COMMENTAIRES ET DISCUSSIONG 50 VILCONCLUSION ET RECOMMANDATIONS 54 VIILREFERENCES BIBLIOGRAFIQUES 55 ANNEXE Fiche signal tique Nom TRAORE Pr nom Hamadi Titre de la th se Etude des param tres biologiques chez les donneurs de sang infect s par le virus de l h patite C Ann e 2005 Pays d origine Mali Ville de soutenance Bamako Lieu de d p t Biblioth que de la Facult de M decine de Pharmacie et d Odonto Stomatologie R sum Au Centre National de Transfusion Sanguine de Bamako 9931 donneurs ont
42. her to infants Hamadi Traor 60 N Engl Med Jr 1994 330 744 50 54 Oumar Tangara Co infection h patite B h patite C chez les donneurs de sang au CNTS de Bamako th se pharm 2004 57 P 61 55 Pawlotsky JK Lunel F Le virus de l h patite C In les virus transmissibles par le sang 1996 23 52 56 Quaranta JF B Reboulot et J P Cassuto Paris Masson Abr g s d h patites virales 1997 3110p 21cm 57 R seau H patite C Marseille Province Alpes du Sud Corse MPAC www h patiteweb com 58 Richard Lenoble D Traor O Kombila M Roingeard P Dubois F Goudeau A Heptitis B C D and E markers in rural equatorial african villages Gabon Ani J Trop Med Hyg 1995 53 338 41 59 SARRO Yaya Bilan de l h mostase chez les donneurs de sang Bamako Th se Pharm Bamako 2002 N 44 60 SIDA Infos Service Qu est ce que l h patite C http www sida info service org page_hepatites page hepatites php3 Hamadi Traor 61 61 Snon T Ikuta Y Hasegawa M et al Prevalence of hepatitis C virus antibodies in Yatsuka town of Simane prefecture Japan Nippon Shokakihyo Gakkai Zasshi 1992 89 1173 8 62 Sokal E Les h patites virales donn es r centes de pr vention et de traitement www icampus ucl ac be 63 Soni PN Tart DR Gopaul W Sathan MA Simjee AE Hepatitis C virus infection in livers disease in natal South Afr Med Jrs 1996 29 80 3 64 Soureya ZAKARIA Depistage d
43. it des VHC 70 1 ont un taux normal d albumine compris entre 59 7 70 70 avec un taux moyen de 61 48 L Odds ratio 5 7 avec l intervalle de confiance 3 71 lt OR lt 8 91 montre que les VHC ont 5 fois plus de risque de d velopper une hypoalbumin mie que les sujets non infect s Cependant 29 9 des donneurs VHC pr sentaient une hypoalbumin mie et ce taux faible d albumine est probablement d a une malnutrition comme d crit dans la litt rature m me si nous n avons pas de donn sur l tat nutritionnel de nos donneurs Par contre nous avons observ une augmentation des gammaglobulines chez les VHC 86 4 avec un Odds ratio 6 75 4 10 lt OR lt 11 17 ce qui montre que les VHC ont 6 fois plus de risque d avoir les gammaglobulines lev es que les VHC Cependant certains sujets VHC pr sentaient galement des taux lev s de gammaglobulines L levation des protides totaux est probablement due l augmentation des gammaglobulines car l albumine est au contraire diminu e Selon Buffet et al 10 l augmentation des gammaglobulines au cours d une h patite chronique virale C est inconstante Par ailleurs de nombreux auteurs ont indiqu s que l l vation des gammaglobulines est fr quente chez les populations noires d Afrique Ceci est probablement du l environnement dans lequel ces individus vivent o les infections bact riennes virales et parasitaires sont fr quentes Donc il y a une stimula
44. kisis Seghers V et al Prevalence of hepatitis C virus and other blood bornes viruses in pygmies and Bantus in southern Cameroon Soc Trop Med Hyg 1995 89 484 86 37 Laurent F Li JS Vitvitsky L Berby F Lamelin JP Alonso C Trepo C Int r t de la PCR dans le diagnostic des h patites Rev Fr Transf Hemobiol 1992 35 3 211 24 38 Lawrence S Philippe G Dominique V Quels sont les modes de transmission non transfusionnels du virus de l h patite C Gastro Clin Biol 1995 19 525 33 39 Lin HH Kao JH Hsn HY Ni YH Yeh SH Hwang LH et al Possible role of transmission of hepatitis C virus through house hold or sexual contact Jr Hept 1991 14 177 Hamadi Traor 58 40 Louis FJ Maubert B Le Hesran JK Kremmegne J Delaporte E Louis JP High prevalence of anti hepatitis C virus antibodies in Cameroon rural forest area Trans Roy Soc Trop Med Hyg 1994 88 53 54 41 Lunel F Virus de l h patite C le virus responsable de la plus part des h patites non A non B Premi re partie Biologie du virus et aspects cliniques et s rologiques des h patites Gastroenterol Clin Biol 1992 16 518 25 42 Maiga S Place de l infection par le virus de l h patite C dans les h pathopathies chroniques Bamako Th se M d Bamako 2001 N 118 43 Maladies tropicales E Chouvalova Edition Mir 1984 2 Moscou I 110 44 Marcellin P Bernuan J Martino PM Larzul D Xu LZ Tran S et al Prevalence of hepatitis C
45. ltiples l usage de pr servatif est recommand de fa on syst matique ainsi que pendant les p riodes de r gles et en cas de l sions g nitales pour un couple stable Vaccin De nos jour s il n y a pas de vaccin disponible contre le VHC les difficult s rencontr es pour la mise au point d un vaccin prot geant de fa on efficace sont importantes En effet il n existe pas d exp rimentation possible chez l animal en dehors du Chimpanz qui seul avec l homme peut d velopper la maladie De plus le virus est tr s hautement variable et d veloppe rapidement des mutations qui le rendent r sistant au syst me immunitaire Hamadi Traor 19 IV 1 Lieu d tude Notre tude s est d roul e au CNTS Centre National de Transfusion Sanguine de Bamako centre de r f rence pour la collecte et la dispensation des produits sanguins et apparent s Le CNTS a t cr par l ordonnance N 90 38 P RM du 5 juin 1990 L ordonnance 041 P RM du 20 septembre 2000 lui conf re le statut d Etablissement Publique caract re Scientifique Technologique et culturel EPSTC avec une autonomie de gestion et le d cret N 587 P RM du 23 novembre 2000 r glemente son fonctionnement Il est situ en commune 2 du district de Bamako dans le quartier de Quinzambougou sur la rue ACHKABAD 1 1 Le personnel Il est compos e De cinq M decins e De trois Pharmaciens e De cinq Techniciens de Sant e De trois
46. lym rase permet la synth se d un brin compl mentaire par extension partir des amorces dans le sens 5 3 Il en r sulte un d doublement de la s quence initiale puisque les deux brins issus de P tape 1 sont copi s L op ration est ensuite recommencer avec pour chaque cycle un temps de d naturation de acide nucl ique 95 C pendant 1 mn un temps d hybridation avec les amorces 37 C pendant 1 mn un temps d extension des amorces 72 C pendant 2 mn L amplification qui requiert environ 35 cycles est ensuite achev e par extension de 10 mn 72 C 111 3 Traitement et prophylaxie Quand une h patite C chronique est suspect e on proc de une ponction biopsie h patique PBH La d cision de traiter repose sur les r sultats de cette biopsie La PBH a pour objectifs de d terminer le stade pr cis d volution de la maladie d aider la d cision pour le traitement de permettre de clarifier les atteintes multifactorielles En plus de la PBH une nouvelle technique d valuation du degr de fibrose a t mis en place Il s agit du fibrotest c est dire d un dosage sanguin de cinq marqueurs biochimiques de fibrose Gamma GT Bilirubine Haptoglobine Apolipoprot ine Al Alpha 2 macroglobulines Ce fibrotest permettra d viter la PBH une fois sur deux Le traitement a pour but d liminer le virus et d am liorer l tat du foie il repose bien s r sur de
47. nnait un r sultat positif alors les pr l vements taient effectu s pour les analyses biochimiques et h matologiques 4 2 1 D pistage s rologique du VHC Il s agit de rechercher la pr sence des anticorps anti VHC dans le s rum La technique utilis e est ELISA Nous avons utilis le kit INNOTEST HCV Ab Iv Innogenetics Ghent Belgique Hamadi Traor 24 a Principe du test Il s agit d une m thode immuno enzymatique Les anticorps anti VHC contenus dans le s rum se lient aux antig nes de VHC pr alablement fix s sur une phase solide Puis cette r action antig ne anticorps est r v l e par un syst me enzymatique qui comprend un second anticorps coupl une enzyme le conjugu qui hydrolyse son substrat ajout la r action et qui se traduit par l apparition d une coloration dont l intensit est fonction de la quantit d anticorps pr sent dans le s rum b Composition de la trousse Le r actif comprend une micro plaque compos e de 12 barrettes de 8 cupules rev tues d un m lange de trois Ag recombinants purifi s sp cifiques du VHC R Solution de lavage concentr e 10 fois R3 S rum de control n gatif R3 S rum de control positif R4 Diluant pour chantillon R Diluant conjugu Re Conjugu concentr 100 fois R7 Tampon substrat de la peroxydase Rg Substrat TMB concentr 100 fois t tram thylbenzidine Ro Solution d arr t solution d
48. nous avons p 0 0001 Hamadi Traor 45 TableauXX Comparaison des param tres de la num ration sanguine chez les VHC et les VHC Param tres VHC VHC p h matologiques Moyenne Ecart Moyenne Ecar type type Nombre de globules blancs 5 6 4 7 3 1 3 0 7 x 10 ul Nombre de globules rouges 4 6 0 7 4 8 0 78 0 05 x 10 u1 Nombre de plaquettes 215 64 213 65 0 7 x 10 ul Taux d h moglobine g dl 14 0 1 6 14 5 1 7 0 02 Taux d h matocrite 43 5 42 6 0 06 Les nombres de globules rouges de globules blancs et de plaquettes par ul de sang sont comparables entre les VHC et lesVHC Ces nombres sont dans les valeurs physiologiques normales 3 5 6 4x10 ul pour les globules blancs 3 8 5 8x10 ul pour les globules rouges et 150 390x10 ul pour les plaquettes Les taux d h matocrite et d h moglobine chez les VHC sont galement comparables aux valeurs observ es chez lesVHC Ces param tres h matologiques sont galement dans les valeurs physiologiques normales 11 16 5g dl pour l h moglobine et 35 50 pour l h matocrite Hamadi Traor 46 Tableau XXI Comparaison des formules leucocytaires chez les VHC et les VHC Param tres VHC VHC p h matologiques Moyenne Ecar type Moyenne Ecart leucocytes leucocytes type Neutrophiles 43 7 8 6 51 7 6 0 001 Eosinophiles 0 4 7 9 0 3 4 1 0 8 Basophiles 0 0 Monocytes 1 6 1 07 1 3 3 1 0 05 Lymphocytes 54 8 5
49. ns 2ml de R8 par barrette e Mode op ratoire Il comprend les tapes suivantes v Etablir soigneusement le plan de distribution et d identification des chantillons Y Pr parer la solution de lavage Y Sortir le cadre support et les barrettes R1 de l emballage protecteur Durant le test les barrettes restent sur le support et peuvent tre identifi es sur le rebord Y Distribuer directement sans pr lavage de la plaque successivement Hamadi Traor 26 200u1 de Diluant Echantillon dans chaque cupule 20u1 de s rum de contr le n gatif R1 en Al B1 20u1 de s rum de contr le positif R4 en C1 D1 El 20u1 du premier chantillon en El 20u1 du deuxi me chantillon en G1 etc en homog n isant le m lange par trois aspirations au minimum avec une pipette de 20ul v Y Couvrir les barrettes avec une feuille adh sive en appuyant bien sur toute la surface pour assurer l tanch it Incuber la micro plaque dans un incubateur sec de micro plaque pendant 60minutes 3minutes 37 C 1 C Retirer la feuille adh sive Et laver les cupules 6fois par lavage manuel qui se fait comme suit Aspirer compl tement le liquide de toutes les cupules dans un conteneur de d chets contamin s Ne pas rayer les parois des cupules retourner et tapoter la plaque sur un papier absorbant apr s chaque aspiration Remplir les cupules avec 400u1 de solution de lavage laisser tremper pendant un minimum de 30 s
50. o et al en 1989 il s agit du virus de l h patite C ou de l h patite post transfusionnelle III 2 Le virus de l h patite C 2 1 Historique L existence de 1 h patite C r sulte de 1 mergence il y a plusieurs ann es de la notion d h patite non A non B NANB Les virus responsables des h patites A et B ont t isol s respectivement en 1968 et 1973 31 Les h patites virales persistaient alors qu aucun agent pathog ne n tait identifi Elles ne pouvaient tre rattach es ni au virus A ni au virus B Pendant de nombreuses ann es toutes les tentatives d identification utilisant les techniques conventionnelles de recherche des virus culture recherche d effet cytopathog ne microscopie lectronique se sont sold es par des checs Hamadi Traor 4 Un progr s consid rable a t accompli au d but des ann es 1980 lorsque des tudes pid miologiques ont permis d individualiser deux formes distinctes d h patites NANB 55 La premi re ressemble 1 h patite A transmission oro f cale dite A like et 1 autre l h patite B transmission parent rale dite B like 31 55 En 1988 l utilisation des techniques modernes de la biologie mol culaire a permis identification quasi simultan e du virus E responsable de la majorit des h patites NANB transmission oro f cale et du virus C responsable des h patites NANB a transmission parent rale 31 42 55 La technique
51. ode pour la prot ine NS3 celle ci contient une h licase qui interviendrait dans la r plication de l ARN g nomique et une prot ase qui serait impliqu e dans la fabrication des prot ines non structurales partir des polypeptides pr curseurs gt La prot ine NS4 est tr s hydrophobe et serait li e la membrane gt Le g ne NSS coderait pour plusieurs fonctions pour la plupart inconnues en Hamadi Traor 6 dehors d une ARN polym rase ARN d pendante C est surtout dans la r gion 3 que le virus C pr sente des homologies de lecture avec les Flaviviridae notamment pour la r gion NS3 et NSS En revanche la r gion structurale 5 parait tr s diff rente Par ces caract ristiques le VHC est apparent a la famille des Flaviviridae 5 AUG 10 000 nucl otides Step 3 Structurale Non structurale C ES S NS NS NS Capside N A prot ase ARN d pendant H licase ARN polymerase Enveloppe R gion protease Hypervariable Fixation a la menbrane C core E enveloppe S surface NS non structurale FIGURE 1 Repr sentation sch matique de la structure du g nome du VHC selon Pawlotsky JM Lunel F 55 2 4 Le g notype viral On distingue aujourd hui 11 principaux g notypes num rot s de 1 11 eux m mes subdivis s en un grand nombre de sous types identifi s par des lettres minuscules Hamadi Traor 7 environ 80 sous types 57 Les g notypes peuvent tre utilis s comme marqueurs pi
52. ol rances suivant la proc dure d crite dans le manuel d utilisation Passage de la s rie de num ration Entrer l identification de l chantillon ou le num ro de tube selon le mode d identification choisi et appuyer sur la touche ENTER Placer le tube en position de Pr l vement Appuyer sur la gachette ou sur la touche START Lorsque le voyant de cycle passe au vert retirer le tube de sa position de Pr l vement R p ter la proc dure d identification et de d part cycle b Confection du frottis mince gt Sur une lame d graiss e et nettoy e d poser une extr mit 1cm du bord une petite goutte de sang de 2mm de diam tre environ placer en avant de cette goutte le bord d une deuxi me lame rod e de pr f rence au contact de la premi re suivant un angle de 30 degr s environ de fa on que son ar te se trouve entre la goutte et la partie libre de la premi re lame On glisse tr s l g rement la deuxi me lame vers la goutte de sang celle ci capillarit s tale le long de l ar te A ce moment on porte d un mouvement continu et r gulier la deuxi me lame vers l autre extr mit de la premi re lame en maintenant l g rement l ar te rod e au contact du verre le frottis se fait alors d une fa on r guli re faire s cher rapidement par agitation gt Coloration du frottis Les r actifs May Grunwald et Giemsa colorent les leucocytes des talements minces de sang d une
53. on et ou de dysprot in mie cette l vation que nous avons constat e chez les VHC reste coh rente avec nos r sultats d crits plus haut CONCLUSION Au terme de cette tude nous avons obtenus les r sultats suivants gt L infection par le VHC est pr valente 4 8 chez les donneurs de sang du CNTS Cette pr valence est stable depuis la premi re description de l infection au CNTS gt L infection par le VHC n affecte pas significativement les transaminases h patiques chez les personnes portant de fa on asymptomatique l infection par le VHC Hamadi Traor 52 gt Il y a une augmentation significative des gammaglobulines s riques au cours de l infection asymptomatique par le VHC gt Les param tres h matologiques ne semblent pas particuli rement affect s au cours de l infection asymptomatique par le VHC RECOMMENDATIONS Nos r sultats nous permettent de formuler les recommandations suivantes o Au CNTS Le renforcement de la s curit transfusionnelle par un d pistage continu du VHC chez tous les donneurs L am lioration de la qualit du d pistage du VHC par l introduction d une technique plus sensible comme celle de la PCR Polym rase Chain R action o Aux autorit s sanitaires L augmentation de la subvention de l Etat pour permettre le depistage du VHC chez les donneurs de sang sur toute l tendue du territoire 1 Abdoul Wahab MF Zakaria MF Kamel S et al High sero
54. ona 200 Signature SERMENT DE GALIEN Je jure en pr sence des ma tres de la facult des conseillers de l ordre des pharmaciens et de mes condisciples d honorer ceux qui m ont instruit dans les pr ceptes de mon art et de leur t moigner ma reconnaissance en restant fid le leur enseignement d exercer dans l int r t de la Sant Publique ma profession avec conscience et de respecter non seulement la l gislation en vigueur mais aussi les r gles de Vhonneurs de la probit et du d sint ressement de ne jamais oublier ma responsabilit et mes devoirs envers le malade et sa dignit humaine En aucun cas je ne consentirai a utiliser mes connaissances et mon tat pour corrompre les m urs et favoriser les actes criminels Que les hommes m accordent leur estime si je suis fid le mes Promesses Que je sois couvert d opprobre et m pris de mes confr res Si j y manque Je le jure Annexe LISTE DES ABREVIATIONS Ac Anticorps Ag antig ne Ac anti VHC Anticorps anti virus de l h patite C ALAT Alanine aminotransf rases ARN Acide ribonucl ique ASAT Aspartate aminotransf rases CNTS Centre national de transfusion sanguine DO Densit optique EDTA Ethyl ne diamine t tra ac tate ELISA Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay FMPOS facult de m decine de pharmacie et d odonto stomatologie GOT Transaminase glutamique oxalo acetique GPT Tran
55. ons extra h patiques les plus connues sont 25 maladies Auto immunes dont les plus connues sont la cryoglobulin mie mixte les cryoglobulines sont les prot ines anormales qui poss dent la propri t de pr cipiter et de s agglutiner lors d une baisse de temp rature Elle touche 50 des patients atteints d h patite chronique C H matologiques type de purpura R nales se traduisant par une glom rulo n phrite Neurologiques entra nant des neuropathies p riph riques Articulaires polyarthrite syndrome de GOURGEROT SJOEGREN et p riarthrite noueuse Dermatologiques lichen plan lupus ryth mateux diss min porphyrie cutan e tardive Pseudo syndromes secs s cheresse des muqueuses pr sents chez un sur deux Thyro dite auto immune 10 20 des cas 2 9 Diagnostic biologique Le diagnostic des infections par le VHC comme celui de toute infection virale repose sur deux types de tests les tests indirects qui mettent en vidence les anticorps dirig s sp cifiquement contre le virus tests s rologiques et les tests directs qui mettent en vidence les constituants de la particule virale PCR par exemple pour le VHC Le pr l vement sanguin permet de rechercher la pr sence d anticorps anti VHC La s roconversion a lieu dans 95 des cas au cour du premier mois dans 99 des cas au cour des 3 premiers mois La positivit de ce test signifie seulement que la personne Hamadi Traor 15
56. p attir notre attention Veuillez recevoir nos vifs remerciements A notre Ma tre juge Dcteur Issaka SAGARA M decin geraliste Bio statisticien Epid miologiste au DEAP FMPOS Assistant chercheur la FMPOS Votre apport au cours de l laboration de cette th se t d une qualit inestimable Ce travail est donc le votre Vos qualit s humaines et intellectuelles votre disponibilit permanente et votre simplicit font de vous un bon ma tre admir Recevez cher ma tre devant cette auguste assembl e l expression de notre profonde gratitude A notre Directeur de th se Professeur Anatole TOUNKARA Ma tre de conf rence agr g en Immunologie Responsable des enseignements d Immunologie la F M P O S Chef de D E R des Sciences Fondamentales la F M P O S Directeur du Centre National de Transfusion Sanguine CNTS Directeur du Centre de Recherche sur le VIH Nous vous remercions pour la confiance que vous nous avez faites en nous confiant ce travail qui est aussi le votre Nous avons toujours appr ci votre rigueur scientifique et vos qualit de p dagogue qui ont model notre parcours acad mique Veuillez trouvez ici l expression de notre profond reconnaissance SOMMAIRE E INTRODUCTION torcida 1 ILOBIECTIPS saison rr 3 M GENERALITES III 1 Rappels sur les h patites virales 4 111 2 Virus d Ph palite Cincinnati ra 4 A A A EEE 4 2 2 Caract ristiques du virus de l
57. pendant la p riode de notre tude La fr quence de l infection tait plus lev e chez les femmes 7 7 que chez les hommes 4 4 y 24 p lt 0 0001 Tableau V R partition des donneurs de sang selon la profession PROFESSION EFFECTIFS Homme en tenue 2125 21 40 Scolaires 4230 42 60 Commer ant 1975 19 88 Autres 1601 16 12 Total 9931 100 Les donneurs de sang de notre tude taient majoritairement des scolaires 42 60 Hamadi Traor 38 V 2 R sultats pour les sujets inclus dans l tude Tableau VI R partition de l chantillon d tude en fonction du sexe VCH VHC SEXE EFFECTIFS EFFECTIFS F minin 90 42 85 39 7 Masculin 124 58 129 60 3 Total 214 100 214 100 Les VHC et les VHC taient comparables au niveau de leur distribution en fonction du sexe Y 0 24 p 0 6 cependant les hommes taient majoritairement plus r psent s aussi bien chez les VHC 58 que chez les VCH 60 3 Tableau VII R partition des VHC et des VHC en fonction de la tranche d age VHC VHC Tranche d age EFFECTIFS EFFECTIFS 18 25 47 22 51 23 8 26 35 74 34 6 Ta 33 6 36 45 89 41 6 89 41 6 46 60 4 1 8 2 1 Total 214 100 214 100 La tranche d age 36 45 est majoritairement repr sent e aussi bien chez les VHC que chez les VHC soit 41 6 dans chaque groupe La r partition des diff rentes classes d
58. pr s de nous A ma m re Maimouna TOUNKARA Tu m as guid vers le bon chemin celui du travail bien fait Ton affection et ton estime envers moi n ont pas d gaux Tu as t d un soutien inestimable pour moi Les mots me manquent pour t exprimer ce que je ressens ton gard Puisse Dieu nous garder encore longtemps ensemble A mon tr s cher oncle Ousseyni TOUNKARA Tu m as adopt depuis mon lyc e Tu as t pour moi un p re Ton amour ton estime tes encouragements ton respect envers moi m ont donn la force de pers v rer dans ce travail Je te serai toujours reconnaissant A ma tante Safiatou DIALLO Ton profond respect ton amour d autrui et ton sens du partage m ont beaucoup marqu REMERCIEMENTS A mes fr res et s urs vous m avez toujours aid dans ce que je fais Votre soutien moral mat riel et financier ne m ont jamais fait d faut Ce travail est aussi le v tre Recevez ici mes sinc res remerciements 2e A mes oncles et tantes toute ma reconnaissance e A mon oncle Ousseyni TOUNKARA pour l hospitalit dont il a fait montre tout au long de mes tudes secondaires et sup rieures Que Dieu vous garde encore longtemps pr s de nous Le A ma Tante Fatoumata TOUNKARA tu nous as quitt que la terre te soit l g re A tout le corps professoral de la FMPS pour leur enseignement de qualit reconnaissance A Issa BERTHE Ton soutien mat riel et moral ne m on
59. prevalence of hepatitis C infection among risk groups in Egypt Am J Trop Hyg 1994 51 563 6 2 Aceti A Taliani G Bruni R Sharif OS Moallin KA Celestino D et al Hepatitis C virus infection in chronic liver disease in 2 Somalia An J Trop Med Hyg 1993 48 581 84 3 Agbodjan E Pince David M Nicot T Dagura C Denis F Recherche s rologique et g nomique par PCR du VHC dans differentes populations Lom Bull Soc Path Ex 1995 88 5 219 24 4 Alter M Kruszon Moran D Nainan OV et al The prevalence of hepatitis C virus infection in the US 1998 through 1994 Neng J Med 1999 341 556 62 Hamadi Traor 53 5 Bagayoko S Place de l h patite C dans les h patopathies a Bamako Th se M d Bko 1991 M10 6 Balkissa G K L h patite C chez les donneurs de sang et les malades du SIDA Bamako Th se pharm Bamako 2003 7 Bastie Pawlotsky JM Roulot TF Dhumeaux D Infection par le virus de l h patite C pid miologie Path Biol 1995 43 674 80 8 Benjeloum S Bougdri F Abchir S Bahbouhi B Benada A Benlimane A Pr valence des anticorps anti VHC chez les consultants pour maladies sexuellement transmissibles compte rendu de la 8 conf rence internationale sur le SIDA et les MST en Afrique Marrakech 1993 wopo8 9 Brechot Christian Stamilos Pol H patites virales collection Sciences en marche Paris ESTEM 1993 171 P 10 Buffet Catherine Gilles Pelletier Abr g d h patologie Paris
60. r un cancer du foie G n ralement les cancers de foie de petite taille peuvent tre gu ris alors que ceux volu s sont malheureusement peu accessibles au traitement et peuvent conduire au coma et a la mort dans de nombreux cas le diagnostic est tardif 2 8 4 L insuffisance h patique Elle traduit une destruction importante du tissu h patique fonctionnel Le foie ne peut plus alors effectuer son travail et purer les toxines de l organisme Les troubles sont constants et on assiste souvent a une fatigue importante une jaunisse et un amaigrissement L importance de l atteinte h patique du tissu fonctionnel est appr ci e par la d termination du taux de prothrombine TP 2 8 5 L hypertension portale Le foie est travers par une grosse veine au d bit important la veine porte qui draine Hamadi Traor 14 le sang en provenance du tube digestif En cas de cirrhose le sang ne peut pas traverser le foie en raison des transfusions tissulaires cons cutives la fibrose La pression dans la veine augmente Le sang va alors emprunter les itin raires secondaires pour court circuiter le foie il passe par des veines situ es dans la paroi de Poesophage Ces veines se dilatent et se transforment en v ritables varices L hypertension portale peut par ailleurs tre responsable de l accumulation de liquide dans la cavit abdominale l ascite 2 8 6 Les manifestations extra h patiques Les manifestati
61. re moyen en h moglobine concentration globulaire moyen en h moglobine e Ceci tait suivi de l tablissement de la formule sanguine bas e sur l observation au microscope optique d un frottis sanguin apr s coloration par le May Grunwald Giemsa a Mode op ratoire de l automate MICROSot Appuyer sur le bouton MARCHE ARRET du MICRO situ l arri re droit de l appareil Appuyer sur le bouton MARCHE ARRET de l imprimante situ l arri re droit de l imprimante et v rifier que le voyant SEL est allum Attendre la fin du cycle de STARTUP si le mode de STARTUP automatique est s lectionn ou appuyer sur la touche STARTUP V rifier que les valeurs de cycle a vide sont en dessous des limites suivantes GB 0 310 mm GR 0 02 10 mm HGB 0 3g dl PLA 8 10 mm Lorsque les valeurs sont au dessus de ces limites l appareil effectue un deuxi me et ventuellement un troisi me cycle de STARTUP Passer un sang de contr le ou un sang de la veille pour v rifier la calibration de l appareil Entrer l identification ou le num ro de tube du contr le selon le mode d identification choisi si n cessaire en utilisant la touche ID SEOQ Placer le tube ouvert en position de Pr l vement l aiguille bien au fond du tube Hamadi Traor 29 Appuyer sur la g chette ou sur la touche START Effectuer la calibration uniquement si cela est n cessaire r sultats hors limites de t
62. s traitements Hamadi Traor 17 sp cifiques mais il est essentiel d insister sur le mode de vie 3 1 Lors de la phase aigu Le traitement par interf ron alpha permet de multiplier par dix la r ponse immunitaire Actuellement l h patite aigu doit tre traiter lorsque l ARN du virus C devient positive au cours d un accident d exposition au virus C L int r t d un traitement pr ventif n a pas t d montr Le traitement par interf ron alpha 3MU administr e trois fois par semaine pendant trois mois permet d obtenir une r ponse prolong e dans 41 des cas 57 Pour augmenter la r ponse certains insistent sur l int r t d un traitement forte dose d interf ron alpha 10 millions d unit s par jour pendant 1 mois en moyenne permettant d augmenter cette r ponse de 90 3 2 Lors de la phase chronique le traitement combin interf ron alpha et ribavirine doit tre propos s il n y a pas de contre indication car une r ponse prolong e est obtenue chez plus de 40 des patients apr s 12 mois de traitement combin contre seulement 20 apr s 12 mois de traitement par l interf ron seul Ce traitement associe l interf ron 3 MU trois fois par semaine et ribavirine 1000 1200mg par jour Lorsque l ARN du virus ne devient plus d tectable dans le sang au del d un an apr s traitement le risque de rechute long terme est pratiquement nul La dur e du traitement d pend du g notype les
63. saminase glutamique pyruvique IV Intra veineuse mm Millim tre MST Maladies Sexuellement Transmissibles NANB Non A Non B NFS num ration formule sanguine nm Nanom tre OMS Organisation mondiale de la sant ONUSIDA Organisation des nations unies pour le syndrome d immunod ficience aquise PCR polymerase Chain R action PBH Ponction Biopsie H patique UI Unit internationale U 11 unit par litre VHA Virus de l h patite A VHB Virus de l h patite B VHC Virus de l h patite C VHD Virus de l h patite D VIH Virus de l immunod ficience humaine VS vitesse de s dimentation Il OBJECTS I INTRODUCTION Il censralites VI comarcales ee Discussions y RESUEDES Matarialsat M tinodes VII actos VIII BINIODTANNIQUES Les h patites sont des inflammations du foie qui sont principalement dues une infection par des virus tropisme h patique 56 Elles sont caract ris es par une n crose h patocellulaire diffuse ou en foyer atteignant l ensemble des acini L h patite virale est une infection transmission oro f cale et ou parent rale Elle est caract ris e par une atteinte pr pond rante du parenchyme h patique 43 Elle volue sous une forme aigu et ou chronique et pr sente des manifestations cliniques variables depuis les formes asymptomatiques et frustes jusqu aux formes graves et mortelles Ces cas graves conduisent une intoxication g n
64. spectifs ajout s la r action conduisent la formation respectivement d oxaloac tate et glutamate ou de pyruvate et glutamate Les pyruvates ou oxaloac tates form s sont dos s sous forme de leur d riv color 2 4 dinitroph nyl hydrazone b R actifs R1 GOT R2 GPT R3 2 4 dinitroph nyl hydrazine 1 mmol l R4 pyruvate talon c Mode op ratoire Hamadi Traor 31 mettre dans des cuves appropri es 200 ul de Riou R2 blanc talonnage et dosage Incuber 5 minutes 37 C au bain marie Ensuite ajouter 40 ul de l talon et de l chantillon respectivement dans les cuves d talon et de dosage sans en mettre dans le blanc Incuber une heure pour GOT et 30 mn pour GPT Ensuite ajouter 200 ul du r actif 3 dans toutes les cuves Incuber temp rature ambiante puis ajouter 2 ml de la solution de soude 0 4 N dans toutes les cuves M langer et attendre 5 mn effectuer la lecture dans les 60 mn qui suivent au spectrophotom tre 4 2 5 Dosage et lectrophor se des prot ines s riques a Dosage de la prot in mie totale Nous avons utilis la m thode colorim trique dite de Biuret sel de cuivre en milieu alcalin gt R actifs R1 albumine bovine R2 r actif alcalin constitu de tartrate de sodium et de potassium 9g D hydroxyde de sodium 0 2mol l iodure de potassium Sg l R3 r actif de coloration sulfate de cuivre 150g 1 gt Principe En milieu alcalin
65. t s par le VHC VHC et 214 non infect s VHC pour tudier la relation possible entre l infection par le VHC et certains param tres biologiques Les VHC et les VHC taient comparables au niveau de l ge du sexe et de la situation matrimoniale Tableaux VI VIT et VID Ceci indique que les facteurs confondants ont t cart s dans notre tude L infection par le VHC semble induire une augmentation des protides totaux au regard des r sultats du tableau X En effet la moyenne des protides totaux tait plus lev e chez les VHC que chez les VHC p lt 0 001 Tableau IX Lorsque le taux de protides totaux tait class en hyperprotid mie hypoprotid mie et protid mie normale la distribution chez les VHC et les VHC en fonction de ces 3 classes Hamadi Traor 50 montrait que les hyperprotid mies taient majoritairement chez les VHC que chez les VHC TableauX Ceci sugg re que l infection par le VHC induirait une hyperprotid mie Ceci est en accord avec certains auteurs dont Buffet 10 qui a d crit que l infection par le VHC provoque soit une l vation mod r e du taux des protides totaux ou soit leur taux restent normal Lorsque l on observe les fractions de protides il appara t que ce sont les albumines et les gammaglobulines qui sont affect es par l infection par le VHC En effet l albumine est diminu e chez les VHC par rapport auxVHC Les donneurs 71 VHC ont une hypoalbumin mie La major
66. t jamais fait d faut Ce travail est galement le tien A tous mes a n s du CNTS Docteurs Noumsi Gislain Moumine SANOGO Oumar TANGARA Madani MARIKO et Hassane GUITTEYE pour leurs conseils Le ee e ee ee Au Dr KOURIBA vous avez toujours r pondu mes sollicitations combien nombreuses Ce travail est aussi le v tre Au Dr Issaka SAGARA votre contribution scientifique ce travail a t tr s appr ciable Vous m avez permis de comprendre comment effectuer une analyse de donn es Je vous remercie pour votre sympathie et votre disponibilit Ce travail est aussi le v tre Au Dr GUITEYE tu as toujours r pondu mes sollicitations combien nombreuses Ce travail est aussi le tien A Mme YARA Kadiatou TAPO Votre contribution mat riel et morale ne m a jamais fait d faut A toute la promotion 2003 de la section pharmacie de la FMPOS bonne carri re professionnelle A tout le personnel de la Biblioth que de la FMPOS pour la recherche 7 bibliographique A tous mes coll gues internes du CNTS Amadou Diawara Moussa Doumbia Eve Tangara Haguiratou Ouedraogo Abdoulaye Traore Hama Diallo Soumaila Guindo Moctar Djiguiba D d Andr Lall Oumar Dao Hamane Ibrahime Tour Abdramane Diarra Aboubacr T k te Nous avons tous travaill pendant plus d un an en complicit et par la grace de Dieu nous avons su surmonter les moments difficiles C est
67. tiers inf rieur du cadre s rigraphie sortir le gel de son emballage liminer rapidement l exc s de liquide en surface en effleurant le gel avec un papier filtre fin placer le gel face orient e vers le haut sur le plateau du porte applicateur contre la barrette l int rieur du cadre s rigraphie baisser le chariot du porte applicateur jusqu en position interm diaire poser un applicateur plat sur la paillasse la face num rot e puits vers le haut d poser 10ul du s rum dans chaque puits Le chargement de l applicateur ne doit pas exc der 2minutes et doit tre utilis imm diatement apr s le chargement liminer la protection des dents de l applicateur et le placer en position n 5 sur le porte applicateur enfin abaisser le chariot Hamadi Traor 34 Les conditions porte applicateur jusqu en but e l aide de manette pour amener l applicateur au contact du gel apr s 40 secondes d applications tourner la manette du porte applicateur pour relever l applicateur et le jeter placer le gel dans la cuve d lectrophor se selon la polarit indiqu e sur le gel le bas du gel cot cathodique Le gel est plong dans le tampon face orient e vers le bas sur une distance de 1cm de chaque cot brancher la cuve au g n rateur de migrations sont les suivantes Volume de tampon par compartiment 150ml Volume total de tampon 300ml
68. tion constante du syst me immunitaire qui se traduirait par une production continue d anticorps Hamadi Traor 51 Les transaminases sont normales mais plus lev es surtout alaniques GPT chez les VHC positifs avec une moyenne de 38 50UI 1 contre 22 40UI chez les VHC n gatifs Les transaminases GPT sont presque toujours sup rieures aux transaminases GOT au cours d une h patite virale C 10 Nos r sultats montrent qu il n y a pas de perturbation des transaminases au cours des infections par le VHC Ce qui sugg re que le seul dosage des transaminases ne suffit pas pour conclure la pr sence d une h patite virale C comme certains auteurs l ont propos 10 En effet une hypertransaminas mie peut faire soup onner une h patite virale mais ne peut tre consid r e comme un diagnostic s r Au niveau h matologique nos r sultats montrent que l infection par le VHC n affecte pas la formule sanguine En effet les nombres des globules rouges celui des globules blancs et des plaquettes ainsi que le taux d h moglobine et d h matocrite ne sont pas modifi s par la pr sence de l infection par le VHC C est ce qui est normalement attendu au vu de la litt rature Cependant la VS semble tre acc l r chez les VHC par rapport aux VHC dans notre chantillon L acc l ration de la VS par l infection par le VHC a t d crite par Xavier et al 66 L augmentation de la VS tant un signe de l inflammati
69. u VIH au CNTS de Bamako de 1993 a 1999 Th se pharmacie Bamako 2001 N 9 65 Tembely K Les transaminases chez les donneurs de sang au CNTS de Bamako Th se Pharm Bamako 2002 66 Tiblo CJ Palmer SJ Loker R et al Pr valence of hepatitis C in tropical communities the importance of conformatoriy assays J Med viral 1991 34 143 7 67 Xavier F Y L antig n mie HBs et param tres h matologiques chez les donneurs de sang au Hamadi Traor 62 CNTS de Bamako Th se pharmacie 1997 N 34 Hamadi Traor 63
70. ud L Milano M Piazza M Prevalence of hepatitis C virus genotype in southern Italy Emo Jr Epid 1997 13 1 49 54 18 Cohen P Les h patites virales Rev Press M dicale 1999 28 27 280 305 19 Colombo M Choo QL Ninno ED Dioguardin N Kuo G Douato MF Tourmasini MA Hougton M Hamadi Traor 55 Prevalence of antibodies to hepatitis C virus in Italients with hepatocellular carcinoma Lancet 1989 1006 20 Coulibali A Pr valence des anticorps anti VHC chez les donneurs de sang au CNTS de Bamako Th se M d 1993 N 52 21 Darwich MA Rouf TA Rushdy P Constantine NT Rao MR Edelman R Risk factors associated with a high seroprevalence of hepatitis C virus infection in Egytian blood donors Am J Trop Med Hyg 1993 49 440 47 22 Delambalerie X Etude mol culaire et s rologique des virus des h patites A B et C These M d Marseille 1995 23 Delaporte E Froment A Dazza MC Henzel D Larouze B Hepatitis C remonte population of southern Cameroon An Trop Med Parasitol 1994 88 97 8 24 Delaporte E Thies V Dazza MC et al High level of hepatitis C endemicity in Gabon equatorial Africa Trans Roy Soc Trop Med Hyg 1993 87 636 37 25 Demb l A Consid rations s ro pid miologiques sur le virus de l h patite C au CNTS de Hamadi Traor 56 Bamako Th se pharm N 10 1999 26 De Mitri MS Poussin K Baccarini P CHV associated liver cancer without cirrhosis Lancet 1995 3
71. virus infection in asymptomatic anti HIV1 negative pregnant women and their children Dig Dis Sci 1994 38 2151 55 45 Marcellin P Erlinger S Clinique et volution de l h patite C Ann Gastroenterol Hepatol 1997 33 29 33 46 Martinson FE Weigle KA Mushahwar IK Weber DJ Royce R et al Sero epidemiologycal survey of hepatitis B and C virus infection in Ghanaian children Jr Med Virol 1996 48 3 278 83 Hamadi Traor 59 47 Marcellin P Hepatitis C the clinicalspectrum of the dieases Hepatol 1999 31 Suppl 1 9 16 48 Melbye M Biggar KJ Wantzin P Krogsgard K Ebbesen P Becker NG Sexual transmission of hepatitis C virus a cohort study 1991 89 among Europan homosexual men Rev Med Jr 1990 301 210 12 49 Monclarmont P Janot C Bondart D Courouc AM L maire Jm et al Virus de l h patite C et transfusion attitude vis a vis du don et du donneur R v Fr Transf H mobiol 1992 35 205 10 50 Moussa I MAIGA Protidogramme chez les donneurs de sang a Bamako 2003 th se Pharmacie Bamako N 36 51 Nkengasong JN De Beenhower H Claeys Hetal A pilo study of the prevalence of hepatitis C virus antibodies and hepatitis C virus RNA in southern Cameroon Am J Trop Med Hyg 1995 52 98 100 52 OMS WHO Aide m moire N 164 R vis Octobre 2000 http www who inv inf fs fv am 164 html 53 Ortho H Terazawa S Sasaki N Hino K Ishimata C et al Transmission of hepatitis C virus from mot

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