BactiDrop Acridine Orange
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1. PRODUCT DETERIORATION This product should not be used if 1 there is evidence of dehydration 2 the color has changed 3 the expiration date has passed or 4 there are other signs of deterioration The expiration date applies to the product in its intact container when stored as directed Discard remaining portion of partially used ampule at end of workday SPECIMEN COLLECTION STORAGE TRANSPORT Specimens should be collected and handled following recommended guidelines 8 MATERIALS REQUIRED BUT NOT SUPPLIED 1 Loop sterilization device 2 Inoculating loop swabs collection containers 3 Incubators alternative environmental systems 4 Supplemental media blood culture media 5 Quality control organisms 6 Glass slides coverslips 7 Methanol 8 Fluorescent microscope 9 Immersion oil 10 Gram stain reagents 11 Microscope 12 Xylene PROCEDURE Place dropper in the assembled reusable ampule crusher provided Hold the dropper crusher in an upright position and lightly tap the bottom to dislodge any bubbles that may have formed Grasp the middle of the dropper crusher with the thumb and forefinger and with the tip pointing away press gently to crush the ampule Invert dropper and squeeze slightly to dispense in a dropwise fashion Test Procedure 1 Prepare a smear of the specimen on a clean glass slide and allow smear to air dry 2 Fix the smear in methanol for 2 minutes Allow the smear to2. 1980 J Clin Microbiol 11 281 285 3 Lauer B A L B Reller and S Mirrett 1981 J Clin Microbiol 14 201 205 4 Levett P N 1980 Med Lab Sci 37 85 88 5 Forsum U and A Hallen 1979 Acta Derm Venereol 59 281 282 6 Guglielmetti P 1991 Microbiologica 14 131 134 7 Rosendal S and A Valdivieso Garcia 1981 Appl Environ Microbiol 41 1000 1002 8 Forbes B A D F Sahm and A S Weissfeld 2002 Bailey and Scott s Diagnostic Microbiology 11 ed Mosby St Louis MO 9 Murray P R E J Baron J H Jorgensen M A Pfaller and R H Yolken 2003 Manual of Clinical Microbiology 8 ed ASM Washington D C 10 Baron E J and S M Finegold 1990 Bailey and Scott s Diagnostic Microbiology 8 ed The C V Mosby Co St Louis MO CONFEZIONE BactiDrop Arancio di Acridina 0 75 ml fiala A AA inansp ainena edieyEieS 50 fiale confezione Spiegazioni dei Simboli REF Numero di catalogo codice IVD Dispositivo medico diagnostico in vitro LAB Per uso di laboratorio ME Consultare le istruzioni per l uso IFU Limiti di temperatura LOT Codice del lotto gt Utilizzare entro EC REP Mandatario nella Comunit Europea CE BactiDrop un marchio di Remel Inc ATCC un marchio registrato di American Type Culture Collection CAS Numero del registro del Chemical Abstract Service IFU 21502 Data di revisione 2006 06 12 Stampato negli Stati
3. andere hell f rbende Organismen sollten in gro er Zahl im selben Ausstrich vorhanden sein ida Kronvall G und E Myhre 1977 Acta Path Microbiol Scand Sec B 85 249 254 2 McCarthy LR und J E Senne 1980 J Clin Microbiol 11 281 285 3 Lauer B A L B Reller und S Mirrett 1981 J Clin Microbiol 14 201 205 4 Levett P N 1980 Med Lab Sci 37 85 88 5 Forsum U und A Hallen 1979 Acta Derm Venereol 59 281 282 6 Guglielmetti P 1991 Microbiologica 14 131 134 7 Rosendal S und A Valdivieso Garcia 1981 Appl Environ Microbiol 41 1000 1002 8 Forbes B A D F Sahm und A S Weissfeld 2002 Bailey and Scott s Diagnostic Microbiology 11 ed Mosby St Louis MO 9 Murray P R E J Baron J H Jorgensen M A Pfaller und R H Yolken 2003 Manual of Clinical Microbiology 8 ed ASM Washington D C 10 Baron E J und S M Finegold 1990 Bailey and Scott s Diagnostic Microbiology 8 ed The C V Mosby Co St Louis MO VERPACKUNG BactiDrop Akridinorange 0 75 ml Ampulle REF 21502 ata tn eves 50 Ampullen Pk Verwendete Symbole REF Katalognummer IVD In Vitro Diagnostikum LAB Nur im Labor anwenden BRI In der Packungsbeilage IFU nachlesen X Temperatureinschr nkungen Lagertemperatur LOT Chargencode Lotnummer z Verwendbar bis Verfallsdatum EC REP CE BactiDrop ist ein Warenzeichen von Remel Inc ATCC ist ein ei
4. 2002 Bailey and Scott s Diagnostic Microbiology 11 ed Mosby St Louis MO 9 Murray P R EJ Baron J H Jorgensen M A Pfaller and R H Yolken 2003 Manual of Clinical Microbiology 8 ed ASM Washington D C 10 Baron E J and S M Finegold 1990 Bailey and Scott s Diagnostic Microbiology 8 ed The C V Mosby Co St Louis MO PACKAGING BactiDrop Acridine Orange 0 75 ml Ampule RER 21002 sinter Ritch ae at oi vinili 50 Ampules Pk Symbol Legend REF Catalog Number IVD In Vitro Diagnostic Medical Device LAB For Laboratory Use ME Consult Instructions for Use IFU X Temperature Limitation Storage Temp LOT Batch Code Lot Number e Use By Expiration Date EC REP European Authorized Representative CE BactiDrop is a trademark of Remel Inc ATCC is a registered trademark of American Type Culture Collection CAS Chemical Abstracts Service Registry No IFU 21502 Revised June 12 2006 Printed in the U S A 12076 Santa Fe Drive Lenexa KS 66215 USA General Information 800 255 6730 Technical Service 800 447 3641 Local International Phone 913 888 0939 Website www remel com Order Entry 800 447 3635 International Fax 913 895 4128 Email remel remel com WO J remel BactiDrop Acridine Orange Fran ais INDICATION Le colorant Acridine orange BactiDrop de Remel est recommand dans le cadre des proc dur
5. 8 ed ASM Washington D C 10 Baron E J and S M Finegold 1990 Bailey and Scott s Diagnostic Microbiology 8 ed The C V Mosby Co St Louis MO PRESENTACI N BactiDrop Naranja de Acridina 0 75 ml Ampolla REF 21502 sus ilari 50 Ampollas envase Leyenda de los simbolos REF N mero de cat logo IVD Producto sanitario de diagn stico in vitro LAB Para uso en el laboratorio ME Consultar las instrucciones de uso Y Limitaci n de la temperatura temperatura de almacenamiento LOT C digo de lote n mero e Usar antes de Fecha de caducidad REP Representante europeo autorizado CE BactiDrop es una marca comercial de Remel Inc ATCC es una marca comercial registrada de American Type Culture Collection CAS N de registro del servicio de res menes qu micos IFU 21502 Revisado el 2006 06 12 Impreso en Estados Unidos 12076 Santa Fe Drive Lenexa KS 66215 EE UU Informaci n general 800 255 6730 Servicio t cnico 800 447 3641 Pedidos 800 447 3635 Tel fono local Internacional 913 888 0939 Fax internacional 913 895 4128 Direcci n en Internet www remel com Correo electr nico remel remel com
6. Uniti 12076 Santa Fe Drive Lenexa KS 66215 USA Informazioni generali 800 255 6730 Tel locali internazionali 913 888 0939 Sito web www remel com Assistenza tecnica 800 447 3641 Ufficio vendite 800 447 3635 Fax internazionale 913 895 4128 E Mail remel remel com D__ amp remel BactiDrop Naranja de Acridina __ spa o USO PREVISTO Remel BactiDrop Naranja de acridina se recomienda para procedimientos cualitativos durante la detecci n microsc pica fluorescente de microorganismos procedentes de muestras cl nicas y de cultivos de sangre RESUMEN Y EXPLICACI N En 9177 Kronvall y Myhre describieron el uso de la tinci n naranja de acridina para detectar microorganismos en frotis directos preparados a partir de muestras clinicas Publicaron que el naranja de acridina tamponada a un bajo pH produc a tinci n diferencial de las bacterias y el material del fondo en las muestras cl nicas Las c lulas y los tejidos humanos se ti en de color verde claro a amarillo mientras que las bacterias se ti en de un color naranja brillante a un pH de 4 0 En 1980 McCarthy y Senne evaluaron el uso del naranja de acridina para la detecci n de microorganismos en cultivos sanguineos Observaron que el naranja de acridina era una alternativa r pida y barata a los subcultivos a ciegas y m s sensible que las tinciones Gram para detectar los microorganismos en los frotis Se publicaron niveles de detecci
7. individuazione di microrganismi in colture ematiche Scoprirono che l arancio di acridina rappresenta un alternativa pratica ed economica a sottocolture cieche ed maggiormente sensibile rispetto alle colorazioni Gram nell individuazione di microrganismi negli strisci Si riscontrarono livelli di rilevamento inferiori alle 1 x 104 unit formanti colonie per ml Nel 1981 Lauer Reller e Mirrett misero a confronto l arancio di acridina con la colorazione Gram in termini di rilevamento di microrganismi nel liquido cerebrospinale e in altri fluidi tessuti ed essudati corporei risultati da loro ottenuti avallavano le scoperte di Kronvall e Myhre a conferma del fatto che l arancio di acridina pi sensibile rispetto alla colorazione Gram e altrettanto specifica L arancio di acridina stato inoltre impiegato per il rilevamento del Trichomonas vaginalis in campioni prelevati dalle vie urogenitali della Neisseria gonorrhoeae in strisci cervicali e uretrali dell Helicobacter pylori in biopsie gastriche6 e per la ricerca di micoplasmi nella coltura di brodo 7 PRINCIPIO L arancio di acridina fluorocromo un colorante che si lega agli acidi nucleici di batteri e altre cellule nello stato naturale o in quello denaturato Il pH ridotto della soluzione tampone determina la colorazione arancione di batteri e funghi e una colorazione verde gialla delle cellule infiammatorie ed epiteliali umane e dei residui di fondo REAGENTI FORMULA C
8. n de tan s lo 1 x 10 unidades formadoras de colonias por ml En 1981 Lauer Reller y Mirrett compararon el naranja de acridina con la tinci n Gram para la detecci n de microorganismos en el l quido cefalorraqu deo otros l quidos corporales tejidos y exudados Sus resultados respaldaron los encontrados por Kronvall y Myhre demostrando que la tinci n con naranja de acridina era m s sensible que la tinci n Gram e igual de espec fica Tambi n se ha utilizado el naranja de acridina para la detecci n de Trichomonas vaginalis en muestras genitales Neisseria gonorrhoeae en frotis cervicales y uretrales y Helicobacter pylori en biopsias g stricas as como para el recuento de micoplasmas en medio de cultivo en caldo PRINCIPIO El fluorocromo naranja de acridina es un colorante que se une a los cidos nucleicos de las bacterias y otras c lulas ya sea en su estado nativo o desnaturalizado El bajo pH de la disoluci n tamp n provoca una tinci n naranja de las bacterias y los hongos y de verde a amarilla de las c lulas epiteliales e inflamatorias humanas y los restos del fondo REACTIVOS F RMULA CL SICA Acetato s dico CAS 127 09 3 Naranja de acridina CAS 10127 02 3 at Acido clorh drico CAS 7647 01 0 Agua desmineralizada CAS 7732 18 5 Ajustado seg n necesidad para adaptarse a los patrones de rendimiento PRECAUCIONES ADVERTENCIA Puede provocar irritaci n ocula
9. vaginalis in genital tract specimens Neisseria gonorrhoeae in cervical and urethral smears Helicobacter pylori in gastric biopsies and the enumeration of mycoplasmas in broth culture PRINCIPLE Fluorochrome acridine orange is a dye which binds to nucleic acids of bacteria and other cells either in the native or the denatured state The low pH of the buffer solution results in an orange staining of bacteria and fungi and a green to yellow staining of human epithelial and inflammatory cells and background debris REAGENTS CLASSICAL FORMULA Sodium Acetate CAS 127 09 3 Acridine Orange CAS 10127 02 3 He Hydrochloric Acid CAS 7647 01 0 Demineralized Water CAS 7732 18 5 962 0 ml Adjusted as required to meet performance standards PRECAUTIONS WARNING May cause eye skin and respiratory tract irritation Corrosive to metal This product is For n Vitro Diagnostic Use and should be used by properly trained individuals Precautions should be taken against the dangers of microbiological hazards by properly sterilizing specimens containers and media after use Directions should be read and followed carefully Refer to Material Safety Data Sheet for additional information STORAGE This product is ready for use and no further preparation is necessary Store product in its original container at 20 25 C until used Do not freeze or overheat Protect from light
10. LASSICA Acetato di Sodio CAS 127 09 3 Arancio di Acridina CAS 10127 02 3 Be Acido Cloridrico CAS 7647 01 0 Acqua Demineralizzata CAS 7732 18 5 La formulazione regolata in base ai criteri di esecuzione richiesti PRECAUZIONI AVVERTENZA Pu causare irritazione a occhi pelle e alle vie respiratorie Corrosivo per i metalli Il prodotto indicato per l uso diagnostico in vitro e deve essere utilizzato solo da personale competente ed esperto Si raccomanda di adottare le dovute precauzioni contro eventuali rischi microbiologici sterilizzando opportunamente dopo l uso campioni contenitori e strumenti Leggere con attenzione le istruzioni contenute in questo documento e attenervisi scrupolosamente Per ulteriori informazioni consultare la scheda tecnica di sicurezza CONDIZIONI DI CONSERVAZIONE Questo prodotto pronto per l uso e non necessita di ulteriore preparazione Conservare il prodotto nel suo contenitore originale ad una temperatura di 20 25 C fino al momento dell utilizzo Non congelare n surriscaldare Proteggere il prodotto dalla luce DETERIORAMENTO DEL PRODOTTO Non utilizzare il prodotto 1 in presenza di segni evidenti di disidratazione 2 se ha cambiato colore 3 oltre la data di scadenza o 4 in presenza di altri segni di deterioramento La data di scadenza del prodotto considerata valida se il contenitore integro e se il prodotto viene conservato secon
11. WO J remel BactiDrop Acridine Orange English INTENDED USE Remel BactiDrop Acridine Orange stain is recommended for use in qualitative procedures in the fluorescent microscopic detection of microorganisms from clinical specimens and blood cultures SUMMARY AND EXPLANATION In 1977 Kronvall and Myhre described the use of acridine orange stain to detect microorganisms in direct smears prepared from clinical specimens They reported that acridine orange buffered at a low pH produced differential staining of bacteria and background material in clinical specimens Human cells and tissue material stain a pale green to yellow while bacteria stain a bright orange at a pH of 4 0 In 1980 McCarthy and Senne evaluated the use of acridine orange for the detection of microorganisms in blood cultures They found acridine orange to be a rapid inexpensive alternative to blind subcultures and more sensitive than Gram stains for detecting microorganisms in smears Detection levels were reported as low as 1 x 10 colony forming units per ml In 1981 Lauer Reller and Mirrett compared acridine orange with the Gram stain for detection of microorganisms in cerebrospinal fluid other body fluids tissues and exudates Their results supported the findings of Kronvall and Myhre showing the acridine orange stain to be more sensitive than the Gram stain and equally specific Acridine orange has also been used for the detection of Trichomonas
12. air dry 3 Flood slide with Acridine Orange and allow stain to remain on surface for 2 minutes 4 Rinse with demineralized water and allow smear to air dry 5 Examine the slide under 100 x to 400 x magnification using a fluorescent microscope Confirm by examination at 1000 x under oil immersion NOTE Smears may be Gram stained directly without prior decolorization as long as all immersion oil is removed with xylene Consult appropriate reference for Gram stain procedure INTERPRETATION Background Black yellow or pale green Leukocytes Pale apple green Erythrocytes Non fluorescent Bacteria and Yeast Bright red orange Inclusion Leukocytes Apple green yellow orange or red QUALITY CONTROL All lot numbers of BactiDrop Acridine Orange have been tested using the following quality control organisms and have been found to be acceptable Testing with a known fresh reference specimen should be performed in accordance with established laboratory quality control procedures If aberrant quality control results are noted patient results should not be reported CONTROL RESULTS Escherichia coli Bright red orange ATCC 25922 fluorescent rods Staphylococcus aureus Bright red orange ATCC 25923 fluorescent cocci LIMITATIONS 1 The presence of microorganisms in smears stained by the Acridine Orange method should be confirmed by culture 2 A Gram stain must be performed to distinguish between gram positive a
13. are il vetrino con arancio di acridina e lasciare reagire il colorante per 2 minuti 4 Sciacquare con acqua demineralizzata e lasciare asciugare lo striscio all aria 5 Esaminare il vetrino con un microscopio a fluorescenza ad un ingrandimento di 100 x 400 x Confermare l esito del test ad un ingrandimento di 1000 x con obiettivo ad immersione NOTA Gli strisci possono essere sottoposti direttamente ad una colorazione Gram senza previa decolorazione rimuovendo l olio di immersione con lo xilene Per la procedura di colorazione Gram consultare la documentazione pertinente INTERPRETAZIONE DEL TEST Sfondo Nero giallo o verde pallido Leucociti Verde mela pallido Eritrociti Nessuna fluorescenza Rosso arancione vivo Verde mela giallo arancione O rosso Batteri e lieviti Leucociti di inclusione CONTROLLO QUALIT Ogni lotto di arancio di acridina BactiDrop stato testato utilizzando i microrganismi per il controllo di qualit di seguito indicati ottenendo risultati ritenuti soddisfacenti E necessario eseguire una serie di test utilizzando un campione di riferimento fresco e noto conformemente alle procedure di controllo qualit stabilite Se i test di controllo qualit forniscono risultati aberranti i risultati ottenuti con i campioni in esame non devono essere refertati CONTROLLO RISULTATO Escherichia coli Bastoncini fluorescenti di ATCC 25922 colore rosso arancione vivo Staphylococcus aureus Cocchi f
14. bei 20 25 C in dem Originalbeh lter aufzubewahren Nicht einfrieren oder berhitzen Vor Licht sch tzen PRODUKTBEEINTR CHTIGUNG Dieses Produkt darf nicht angewendet werden falls 1 Dehydrierung auftritt 2 Farbver nderungen eingetreten sind 3 das Verfallsdatum berschritten wurde oder 4 andere Anzeichen einer Beeintr chtigung des Produkts erkennbar sind Das Verfallsdatum gilt unter der Voraussetzung dass sich das Produkt im Originalbeh lter befindet und gem den Anleitungen aufbewahrt wird Reste teilweise verbrauchter Ampullen sind am Ende des Arbeitstages zu vernichten PROBENENTNAHME LAGERUNG UND TRANSPORT Die Probennahme und die weitere Handhabung sind nach den empfohlenen Richtlinien durchzuf hren ERFORDERLICHE MATERIALIEN DIE NICHT IM LIEFERUMFANG ENTHALTEN SIND 1 Ger t zur Sterilisierung von Impf sen 2 Impf se Tupfer Sammelbeh lter 3 Inkubator alternative Anzuchtmethoden 4 erg nzende Kulturmedien Blutkulturmedien 5 Qualit tskontrollorganismen 6 Objekttr ger Deckgl schen 7 Methanol 8 Fluoreszenzmikroskop 9 Immersions l 10 Gramf rbereagenzien 11 Mikroskop 12 Xylol VERFAHREN Ampulle in den mitgelieferten wieder verwendbaren Tropfer Ampullen ffner einsetzen Ampullen ffner in aufrechter Position halten und leicht auf den Boden klopfen um eventuelle Luftbl schen zu entfernen Den Ampullen ffner mit Daumen und Zeigefinger in der Mitte umfassen
15. dad de la fluorescencia de los microorganismos 4 La tinci n de naranja de acridina es capaz de detectar bacterias en concentraciones de aproximadamente 10 unidades formadoras de colonias por ml 5 Ciertos restos pueden producir fluorescencia de color amarillo naranja o roja El examen con mayores aumentos permitir diferenciar en funci n de la morfolog a 6 Los n cleos o gr nulos de leucocitos desintegrados pueden parecer cocos a bajos aumentos Pueden distinguirse por su morfolog a a mayores aumentos 1000 x 7 A veces las bacterias aparecen como tenues siluetas grises debe haber otros microorganismos con tinci n brillante en gran cantidad en el mismo frotis BIBLIOGRAF A 1 Kronvall G and E Myhre 1977 Acta Path Microbiol Scand Sec B 85 249 254 2 McCarthy LR and J E Senne 1980 J Clin Microbiol 11 281 285 3 Lauer B A L B Reller and S Mirrett 1981 J Clin Microbiol 14 201 205 4 Levett P N 1980 Med Lab Sci 37 85 88 5 Forsum U and A Hallen 1979 Acta Derm Venereol 59 281 282 6 Guglielmetti P 1991 Microbiologica 14 131 134 7 Rosendal S and A Valdivieso Garcia 1981 Appl Environ Microbiol 41 1000 1002 8 Forbes B A D F Sahm and AS Weissfeld 2002 Bailey and Scott s Diagnostic Microbiology 11 ed Mosby St Louis MO 9 Murray P R E J Baron J H Jorgensen M A Pfaller and R H Yolken 2003 Manual of Clinical Microbiology
16. de tinci n Gram en la referencia bibliogr fica adecuada INTERPRETACI N Fondo Negro amarillo o verde claro Leucocitos Verde manzana claro Eritrocitos No fluorescentes Bacterias y levaduras Leucocitos de inclusi n Naranja rojizo brillante Verde claro amarillo naranja o rojo CONTROL DE CALIDAD Todos los n meros de lote de BactiDrop Naranja de acridina se han ensayado utilizando los siguientes microorganismos de control de calidad y se han encontrado aceptables Hay que realizar un an lisis con una muestra de referencia conocida reciente de acuerdo con los procedimientos anal ticos establecidos de control de calidad Si se observan resultados an malos en el control de calidad no deben informarse los resultados de los pacientes CONTROL RESULTADOS Escherichia coli Bacilos fluorescentes de color ATCC 25922 rojo anaranjado brillante Staphylococcus aureus Cocos fluorescentes de color ATCC 25923 rojo anaranjado brillante LIMITACIONES 1 La presencia de microorganismos en frotis te idos con el m todo del naranja de acridina debe confirmarse mediante cultivo 2 Debe realizarse una tinci n Gram para distinguir entre microorganismos grampositivos y gramnegativos La reacci n Gram puede determinarse mediante tinci n Gram directa sobre la tinci n naranja de acridina despu s de retirar el aceite de inmersi n 3 Evitar la exposici n excesiva de los frotis te idos a la luz ya que puede reducir la intensi
17. do le indicazioni Gettare la parte restante della fiala parzialmente utilizzata alla fine del giorno di lavoro RACCOLTA CONSERVAZIONE E TRASPORTO DEI CAMPIONI Prelevare e trattare i campioni attenendosi alle linee guida raccomandate MATERIALE NECESSARIO MA NON FORNITO 1 Dispositivo di sterilizzazione per anse 2 ansa per inoculo tamponi contenitori di raccolta 3 termostato sistemi per la formazione di atmosfere modificate 4 terreni di coltura supplementari terreni di coltura ematici 5 microrganismi per il controllo qualit 6 vetrini coprivetrini 7 metanolo 8 microscopio a fluorescenza 9 olio di immersione 10 reagenti per colorazione Gram 11 microscopio 12 xilene PROCEDIMENTO Posizionare il contagocce nello strumento aprifiale montato e riutilizzabile fornito in dotazione Tenere il contagocce lo strumento aprifiale in posizione verticale e picchiettare leggermente la parte inferiore per eliminare eventuali bolle Afferrare la parte centrale del contagocce dello strumento aprifiale con il pollice e l indice e con la punta orientata verso l esterno premere delicatamente per aprire la fiala Capovolgere il contagocce e premere leggermente per una distribuzione goccia a goccia Procedura del test 1 Preparare uno striscio di campione su un vetrino pulito e lasciarlo asciugare all aria 2 Fissare lo striscio con il metanolo per 2 minuti Lasciare asciugare lo striscio all aria 8 Irror
18. es qualitatives permettant de d tecter au microscope fluorescence des microorganismes pr sents dans des cultures d chantillons cliniques et dans des h mocultures R SUM ET EXPLICATION En 1977 Kronvall et Myhre ont d crit l utilisation du colorant acridine orange pour d tecter des microorganismes dans des frottis de pr l vements cliniques tal s directement Ils ont signal que l acridine orange tamponn e un pH bas produit une coloration diff rente des bact ries et du mat riel de fond issus des chantillons cliniques Les cellules et les tissus humains donnent une coloration allant du vert p le au jaune tandis que les bact ries se colorent en orange vif un pH de 4 0 En 1980 McCarthy et Senne ont valu l utilisation de l acridine orange pour d tecter des microorganismes dans des h mocultures Ils ont tabli que l acridine orange est une m thode rapide bon march alternative aux subcultures et plus sensible que la coloration de Gram pour d tecter les microorganismes dans des frottis lls ont rendu compte de seuils de d tection de 1 x 10 unit s formant colonies par ml En 1981 Lauer Reller et Mirrett ont compar acridine orange avec la coloration de Gram pour la d tection de microorganismes dans le liquide c phalorachidien dans d autres liquides corporels dans des tissus et dans des exsudats Leurs r sultats ont corrobor ceux de Kronvall et de Myhre en montrant que Pacridine ora
19. ey and Scott s Diagnostic Microbiology 11 ed Mosby St Louis MO 9 Murray P R E J Baron J H Jorgensen M A Pfaller and R H Yolken 2003 Manual of Clinical Microbiology 8 ed ASM Washington D C 10 Baron E J and S M Finegold 1990 Bailey and Scott s Diagnostic Microbiology 8 ed The C V Mosby Co St Louis MO CONDITIONNEMENT BactiDrop Acridine Orange 0 75 ml ampoule RER 215025 ia intanto 50 ampoules bo te L gende des Symboles REF Num ro de r f rence IVD Dispositif m dical de diagnostic in vitro LAB Pour usage en laboratoire un Lire les instructions avant utilisation 44 IFU mode d emploi E Limites de temp rature stockage LOT Code du lot num ro de lot e utiliser avant le date de p remption EC REP Mandataire pour l UE CE BactiDrop est une marque de commerce de Remel Inc ATCC est une marque d pos e d American Type Culture Collection CAS num ro de registre CAS IFU 21502 r vis le 2006 06 12 Imprim aux tats Unis 12076 Santa Fe Drive Lenexa KS 66215 tats unis Informations g n rales 800 255 6730 Services techniques 800 447 3641 T l phone local International 913 888 0939 Site Internet www remel com Service des commandes 800 447 3635 Fax International 913 895 4128 Courriel remelOremel com WO remel BactiDrop Akridinorange Deutsch ANWENDUNGSGEBIET Remel BactiDr
20. it 6 lames de verre lamelles couvre objets 7 m thanol 8 microscope fluorescence 9 huile immersion 10 r actifs pour coloration de Gram 11 microscope 12 xyl ne PROC DURE Placer le compte gouttes dans le broyeur d ampoules r utilisable fourni Tenir bien droit l ensemble compte gouttes broyeur et tapoter l g rement le bas pour en d loger les bulles qui s y sont ventuellement form es Saisir l ensemble compte gouttes broyeur par le milieu entre le pouce et l index et la pointe dirig e vers l ext rieur appuyer doucement pour craser l ampoule Retourner le compte gouttes et appuyer sans exc s pour d poser les gouttes une une Proc dure de l analyse 1 Pr parer un frottis de pr l vement sur une lame de verre propre et attendre que le frottis s che l air libre 2 Fixer le frottis dans du m thanol pendant 2 minutes Attendre qu il s che l air libre 3 Tremper la lame avec de l acridine orange et laisser le colorant la surface pendant 2 minutes 4 Rincer avec de l eau d min ralis e et laisser le frottis s cher l air libre 5 Observer la lame au microscope fluorescence et un grossissement de 100 x 400 x Confirmer l observation 1000 x sous huile immersion REMARQUE Il est possible r aliser directement une coloration de Gram sur les frottis sans d coloration pr alable condition que toute l huile immersion ait t enlev e a
21. le de bien st riliser les pr l vements les r cipients et les milieux apr s usage Toutes les instructions doivent tre lues attentivement et soigneusement suivies Consulter la fiche de donn es de s curit pour avoir des informations suppl mentaires STOCKAGE Le produit est pr t a l emploi et aucune pr paration suppl mentaire n est n cessaire Le conserver dans son conditionnement d origine entre 20 et 25 C jusqu son utilisation Ne pas congeler ni surchauffer Ne pas exposer la lumi re D T RIORATION DU PRODUIT Le produit ne doit pas tre utilis si 1 vous observez une d shydratation 2 la couleur a chang 3 la date de p remption est d pass e ou 4 d autres signes de d t rioration sont pr sents La date de p remption s applique au produit condition que le r cipient soit intact et qu il soit stock conform ment aux instructions la fin de la journ e de travail le produit restant ventuellement dans l ampoule doit tre jet RECUEIL STOCKAGE ET TRANSPORT DES PR L VEMENTS Les pr l vements doivent tre recueillis et manipul s conform ment aux recommandations en usage dans la profession 8 MAT RIEL REQUIS NON FOURNI 1 Dispositif de st rilisation 2 oese d inoculation couvillons r cipients de pr l vement 3 incubateurs autres syst mes environnementaux 4 milieux suppl mentaires milieux pour h moculture 5 microorganismes de contr le de qual
22. luorescenti di ATCC 25923 colore rosso arancione vivo LIMITAZIONI 1 La presenza di microrganismi negli strisci colorati con arancio di acridina deve essere verificata mediante coltura 2 E necessario eseguire una colorazione Gram al fine di distinguere organismi gram positivi e gram negativi La reazione Gram pu essere determinata mediante colorazione Gram direttamente sulla colorazione di arancio di acridina in seguito a rimozione dell olio di immersione 3 Evitare un eccessiva esposizione alla luce degli strisci colorati in quanto la luce potrebbe ridurre l intensit di fluorescenza degli organismi 4 Il colorante arancio di acridina in grado di rilevare batteri in concentrazioni di circa 10 unit formanti colonie per ml 5 Alcuni residui possono emettere luce fluorescente di colore giallo arancione o rosso Un esame a maggiore ingrandimento ne consentir la differenziazione a livello morfologico 6 A ingrandimenti inferiori nuclei o granuli appartenenti a leucociti disintegrati potrebbero sembrare cocci Per distinguerne la morfologia necessario utilizzare ingrandimenti maggiori 1000 x 7 A volte i batteri appaiono come indistinte silhouette di colore grigio nello stesso striscio dovrebbero essere visibili in gran numero altri organismi con colorazione pi accesa BIBLIOGRAFIA 1 Kronvall G and E Myhre 1977 Acta Path Microbiol Scand Sec B 85 249 254 2 McCarthy LR and J E Senne
23. n Falls die Qualit tskontrollergebnisse abweichen sollten die Patientenergebnisse nicht angegeben werden KONTROLLE ERGEBNISSE Escherichia coli Hell rot orange ATCC 25922 fluoreszierende St bchen Staphylococcus aureus Hell rot orange ATCC 25923 fluoreszierende Kokken SO Die Anwesenheit von Mikroorganismen in mit Akridinorange gef rbten Ausstrichen sollte durch Kulturverfahren best tigt werden 2 Eine Gramf rbung muss durchgef hrt werden um zwischen grampositiven und gramnegativen Organismen zu unterscheiden Die Gramf rbung kann im gleichen Ausstrich direkt nach der Akridinorangef rbung durchgef hrt werden wenn das Immersions l vollst ndig entfernt wurde 3 Die gef rbten Ausstriche keiner berm igen Lichteinwirkung aussetzen da dies die Intensit t der Fluoreszenz der Mikroorganismen vermindern kann 4 Durch die F rbung mit Akridinorange k nnen Bakterien in einer Konzentration von 10 koloniebildenden Einheiten pro ml erkannt werden 5 Zelltr mmer k nnen gelb orange oder rot fluoreszieren Durch eine Untersuchung mit einer h heren Vergr erung kann eine Differenzierung durch morphologische Kriterien erfolgen 6 Zellkerne oder Granula zerfallender Leukozyten k nnen bei geringerer Aufl sung wie Kokken aussehen Sie k nnen bei einer h heren Aufl sung 1000 fach durch morphologische Kriterien unterschieden werden 7 Gelegentlich erscheinen Bakterien als blasse graue Silhouetten
24. nd gram negative organisms The Gram reaction may be determined by Gram staining directly over the acridine orange stain after removal of the immersion oil 3 Avoid excessive exposure of stained smears to light as it may lower the intensity of fluorescence of the organisms 4 The Acridine Orange stain is capable of detecting bacteria in concentrations of approximately 10 colony forming units per ml 5 Certain debris may fluoresce yellow orange or red Examination at a higher magnification will differentiate on the basis of morphology 6 Nuclei or granules from disintegrating leukocytes may resemble cocci at lower magnifications They may be distinguished on the basis of morphology at higher magnifications 1000 x 7 Occasionally bacteria appear as faint gray silhouettes other brightly staining organisms should be present in large numbers on the same smear BIBLIOGRAPHY 1 Kronvall G and E Myhre 1977 Acta Path Microbiol Scand Sec B 85 249 254 2 McCarthy LR and J E Senne 1980 J Clin Microbiol 11 281 285 3 Lauer B A L B Reller and S Mirrett 1981 J Clin Microbiol 14 201 205 4 Levett P N 1980 Med Lab Sci 37 85 88 5 Forsum U and A Hallen 1979 Acta Derm Venereol 59 281 282 6 Guglielmetti P 1991 Microbiologica 14 131 134 7 Rosendal S and A Valdivieso Garcia 1981 Appl Environ Microbiol 41 1000 1002 8 Forbes B A D F Sahm and A S Weissfeld
25. nge est plus sensible et aussi sp cifique que la coloration de Gram L acridine orange a aussi t utilis e pour d tecter Trichomonas vaginalis dans des pr l vements du tractus g nital Neisseria gonorrhoeae dans des frottis cervicaux et ur traux 5 Helicobacter pylori dans les biopsies gastriques et pour d nombrer les mycoplasmes dans les bouillons de culture PRINCIPE L acridine orange fluorochrome est un colorant qui se fixe sur les acides nucl iques des bact ries et d autres cellules qu elles soient d natur es ou non Le pH bas de la solution tampon entra ne une coloration orange des bact ries et des champignons et une coloration allant du vert au jaune des cellules pith liales et inflammatoires humaines et des d bris de fond R ACTIFS FORMULE CLASSIQUE Ac tate de sodium CAS 127 09 3 44 26 Y Acridine orange CAS 10127 02 3 g Acide chlorhydrique CAS 7647 01 0 38 0 ml Eau d min ralis e CAS 7732 18 5 962 0 ml Avec les ajustements ventuels pour satisfaire aux normes de performance PR CAUTIONS ATTENTION Risque d irritation des yeux de la peau et des voies respiratoires Corrosif pour les m taux Ce produit exclusivement destin un usage diagnostique in vitro ne doit tre utilis que par des personnes d ment form es Toutes les pr cautions contre les risques microbiologiques doivent tre prises et il est indispensab
26. ngetragenes Warenzeichen von American Type Culture Collection CAS Chemical Abstracts Service Registernummer Autorisierte Vertretung f r EU Lander IFU 21502 Version vom 2006 06 12 Gedruckt in den U S A 12076 Santa Fe Drive Lenexa KS 66215 USA Allgemeine Informationen 800 255 6730 Technischer Kundendienst 800 447 3641 Auftragsannahme 800 447 3635 Telefon national international 913 888 0939 Website www remel com Fax international 913 895 4128 E Mail remel remel com D ooo remel BactiDrop Arancio di Acridina USO PREVISTO L arancio di Acridina BactiDrop di Remel un colorante indicato per l uso in procedure qualitative finalizzate al rilevamento microscopico mediante fluorescenza di microrganismi in campioni clinici e colture ematiche Italiano DESCRIZIONE DEL PRODOTTO Nel 1977 Kronvall e Myhre descrissero l uso dell arancio di acridina per rilevare la presenza di microrganismi in strisci diretti realizzati con campioni clinici Scoprirono che nei campioni clinici l arancio di acridina tamponato ad un pH ridotto produceva una colorazione differenziale dei batteri e del materiale di sfondo A pH 4 0 le cellule e il materiale tissutale umani assumono una colorazione che oscilla tra il verde pallido e il giallo mentre i batteri assumono una colorazione di un arancione acceso Nel 1980 McCarthy e Senne presero in esame l uso dell arancio di acridina per l
27. op Akridinorange F rbemittel wird f r qualitative Verfahren zur Erkennung von Mikroorganismen aus klinischem Probenmaterial und Blutkulturen am Fluoreszenzmikroskop empfohlen ZUSAMMENFASSUNG UND ERKLARUNG Kronvall und Myhre beschrieben 1977 die Akridinorange F rbung zur Erkennung von Mikroorganismen in Direktausstrichen aus klinischem Probenmaterial Sie berichteten dass Akridinorange in einer Stamml sung mit geringem pH Wert zu einer differenzierten F rbung der Bakterien und des Hintergrundes in klinischem Probenmaterial f hrte Bei einem pH Wert von 4 0 verf rben sich menschliche Zellen und Gewebematerialien blassgr n bis gelb w hrend sich Bakterien hell orange f rben McCarthy und Senne untersuchten 1980 die Anwendung von Akridinorange bei der Erkennung von Mikroorganismen aus Blutkulturen Sie stellten fest dass Akridinorange eine schnelle und kosteng nstige Alternative zu blind angelegten Subkulturen ist Zus tzlich erwies sich eine F rbung mit Akridinorange empfindlicher als die Gramf rbung Als Grenzwert gaben sie 1 x 10 koloniebildenden Einheiten pro ml an 1981 verglichen Lauer Reller und Mirrett Akridinorange mit der Gramf rbung hinsichtlich der Erkennung von Mikroorganismen in Cerebrospinalfl ssigkeit anderen K rperfl ssigkeiten Geweben und Exudaten Ihre Ergebnisse st tzten die Erkenntnisse von Kronvall und Myhre dass Akridinorange empfindlicher reagiert als die Gramf rbung und dabei ebenso spezifi
28. r cut nea y de las v as respiratorias Es corrosivo para los metales Es un producto para diagn stico in vitro nicamente y debe ser utilizado por personas adecuadamente preparadas Deben tomarse precauciones contra los peligros de riesgos microbiol gicos mediante la esterilizaci n adecuada de las muestras los envases y los medios despu s de su uso Hay que leer las instrucciones y seguirlas meticulosamente Consultar m s informaci n en la Ficha T cnica de Seguridad del material ALMACENAMIENTO Este producto est listo para su uso y no se necestia m s preparaci n Guardar el producto en su envase original a 20 25 C hasta que se use No congelar ni sobrecalentar Protegerlo de la luz DETERIORO DEL PRODUCTO Este producto no debe utilizarse si 1 hay pruebas de deshidrataci n 2 el color ha cambiado 3 la fecha de caducidad ha pasado 6 4 hay otros signos de deterioro La fecha de caducidad se refiere a este producto cuando est en su envase intacto y se almacena seg n las instrucciones Desechar la porci n restante de la ampolla parcialmente utilizada al final del d a de trabajo RECOGIDA ALMACENAMIENTO Y TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS Las muestras deben recogerse y manipularse siguiendo las pautas recomendadas MATERIAL NECESARIO PERO NO SUMINISTRADO 1 Esterilizador del asa 2 Asa de inoculaci n torundas envases de recogida 3 Incubadores sistemas ambientales alternativos 4 Medios de cul
29. s a la lumi re car cela risquerait de diminuer l intensit de la fluorescence des microorganismes 4 Le colorant acridine orange permet de d tecter des bact ries dont la concentration est d environ 10 unit s formant colonies par ml 5 Certains d bris peuvent donner une fluorescence jaune orange ou rouge Une observation un grossissement plus important permet de faire la diff rence gr ce la morphologie 6 Les noyaux ou les granules des leucocytes qui se d sint grent peuvent ressembler des cocci un grossissement plus faible Un grossissement plus important 1000 x permet de les diff rencier grace la morphologie 6 Dans certains cas des bact ries se pr sentent sous la forme de l g res silhouettes grises tandis que d autres microorganismes color s d une couleur vive devraient tre pr sents en grand nombre dans le m me frottis BIBLIOGRAPHIE 1 Kronvall G and E Myhre 1977 Acta Path Microbiol Scand Sec B 85 249 254 2 McCarthy LR and J E Senne 1980 J Clin Microbiol 11 281 285 Lauer B A L B Reller and S Mirrett 1981 J Clin Microbiol 14 201 205 4 Levett P N 1980 Med Lab Sci 37 85 88 5 Forsum U and A Hallen 1979 Acta Derm Venereol 59 281 282 6 Guglielmetti P 1991 Microbiologica 14 131 134 7 Rosendal S and A Valdivieso Garcia 1981 Appl Environ Microbiol 41 1000 1002 8 Forbes B A D F Sahm and A S Weissfeld 2002 Bail
30. sch ist Akridinorange wurde dar ber hinaus f r die Erkennung von Trichomonas vaginalis in Genitaltrakt Probenmaterial Neisseria gonorrhoeae in Cervix und Harnr hren Abstrichen Helicobacter pylori in Magenbiopsien und die Z hlung von Mycoplasmen in Fliissigkulturen verwendet PRINZIP Der Fluoreszenzfarbstoff Akridinorange bindet an native und denaturierte Nukleins uren von Bakterien und anderen Zellen Der geringe pH Wert der Pufferl sung f hrt zu einer Orangef rbung der Bakterien und Pilze und einer gr nen bis gelben F rbung menschlicher Epithel und Entz ndungszellen und des Hintergrundes REAGENZIEN KLASSISCHE FORMEL Natriumacetat CAS 127 09 3 Akridinorange CAS 10127 02 3 la Salzs ure CAS 7647 01 0 Entmineralisiertes Wasser CAS 7732 18 5 962 0 ml Jeweils angepasst um die Leistungscharakteristika zu erf llen VORSICHTSMABNAHMEN WARNUNG Kann Irritationen der Augen der Haut und der Atemwege hervorrufen Korrosiv zu Metall In Vitro Diagnostikum Nur zur Verwendung durch Fachpersonal Zur Vermeidung mikrobiologischer Risiken sind geeignete Vorsichtsma nahmen zu treffen Nach dem Gebrauch sind das Probenmaterial Beh lter und Kulturmedien zu sterilisieren Die Anweisungen sind sorgf ltig zu lesen und zu befolgen Zus tzliche Hinweise sind im Sicherheitsdatenblatt abgedruckt LAGERUNG Dieses Produkt ist gebrauchsfertig Das Produkt ist bis zur Verwendung
31. tivo complementarios medios para cultivo de sangre 5 Microorganismos para control de calidad 6 Portaobjetos y cubreobjetos 7 Metanol 8 Microscopio de fluorescencia 9 Aceite de inmersi n 10 Reactivos para tinci n Gram 11 Microscopio 12 Xileno AS PROCEDIMIENTO Colocar el cuentagotas en el triturador de la ampolla reutilizable que se suministra ya montado Sostener el cuentagotas triturador en posici n vertical y golpear suavemente la base para liberar las burbujas que puedan haberse formado Sujetar la parte media del cuentagotas triturador con el pulgar y el indice y apartando la punta apretar suavemente para aplastar la ampolla Invertir el cuentagotas y apretar suavemente para dispensar gota a gota Procedimiento de an lisis 1 Preparar un frotis de la muestra en un portaobjetos de vidrio limpio y dejar que se seque al aire 2 Fijarlo en metanol durante 2 minutos Dejar que se seque al aire 3 Inundar el portaobjetos con naranja de acridina y dejar que la tinci n permanezca en la superficie durante 2 minutos 4 Aclarar con agua desmineralizada y dejar secar al aire 5 Examinar el portaobjetos bajo 100 a 400 aumentos utilizando microscopio de fluorescencia Confirmar mediante examen a 1000 aumentos bajo aceite de inmersi n NOTA Los frotis pueden te irse directamente con Gram sin decoloraci n previa ya que todo el aceite de inmersi n se elimina con xileno Consultar el procedimiento
32. um die Ampulle zu zerdr cken Ampulle umdrehen und die Fl ssigkeit durch leichtes Dr cken tropfenweise auftragen Testverfahren 1 Einen Ausstrich der Probe auf einem sauberen Objekttr ger anlegen und an der Luft trocknen lassen 2 Den Ausstrich f r 2 Minuten in Methanol fixieren und an der Luft trocknen lassen 3 Den Objekttr ger mit Akridinorange berschichten und den Farbstoff f r 2 Minuten einwirken lassen 4 Den Objekttr ger mit entmineralisiertem Wasser sp len und an der Luft trocknen lassen 5 Unter dem Fluoreszenzmikroskop den Objekttr ger bei 100 bis 400 facher Vergr erung untersuchen Das Ergebnis ist durch eine Untersuchung bei 1000 facher Vergr erung mit Immersions l zu best tigen HINWEIS Die Ausstriche k nnen ohne vorherige Entf rbung gramgef rbt werden sofern das Immerions l mit Xylol vollst ndig entfernt wurde Die entsprechende Anweisung f r die Gramf rbung ist zu beachten INTERPRETATION Hintergrund Schwarz gelb oder blassgr n Leukozyten Blasses Apfelgr n Erythrozyten Nichtfluoreszierend Bakterien und Hefen Helles Rot Orange Leukozyteneinschl sse Apfelgr n gelb orange oder rot QUALIT TSKONTROLLE Alle Chargen von BactiDrop Akridinorange wurden mithilfe der folgenden Qualit tskontrollorganismen berpr ft Die Tests sollten mit frischem Referenz probenmaterial entsprechend den blichen Qualit tskontroll verfahren f r Laboratorien durchgef hrt werde
33. vec du xyl ne Consulter la documentation appropri e pour la proc dure de coloration de Gram INTERPR TATION DU TEST Fond Noir jaune ou vert p le Leucocytes Vert pomme p le rythrocytes Non fluorescent Bact ries et levures Leucocytes avec inclusion Rouge orange vif Vert pomme jaune orange ou rouge CONTR LE QUALIT Tous les num ros de lots d Acridine orange BactiDropTM ont t test s avec les microorganismes de contr le de qualit suivants et reconnus acceptables Les tests avec des pr l vements de r f rence frais et connus doivent satisfaire aux crit res tablis pour les proc dures de contr le qualit en laboratoire En cas de r sultats de contr le qualit aberrants ne pas signaler les r sultats du patient CONTR LE R SULTATS Escherichia coli Bacilles fluorescents de ATCC 25922 couleur rouge orange vif Staphylococcus aureus Cocci fluorescents de ATCC 25923 couleur rouge orange vif LIMITATIONS 1 La pr sence de microorganismes dans des frottis color s avec la m thode de l acridine orange doit tre confirm e par culture 2 Il est n cessaire de r aliser une coloration de Gram pour diff rencier les germes Gram positif des germes Gram n gatif ce qu il est possible de d terminer en effectuant directement la coloration de Gram sur la coloration l acridine orange apr s avoir enlev l huile immersion 3 Eviter d exposer trop longtemps les frottis color
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