IDEXX Brucellosis Milk X2 Ab Test Brucelosis
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1. o de TMB em recipientes limpos de vidro ou pl stico Todos os res duos devem ser descontaminados adequadamente antes do descarte Descarte os conte dos de acordo com as normas locais regionais e nacionais Tenha cuidado para evitar a contamina o dos componentes do kit N o devolver a sobra do reagente ao frasco N o utilize kits com prazo de validade vencido e n o misture componentes de kits de lotes diferentes Prepara o dos reagentes Controles Reconstituir os controles positivos e negativos com 5 ml de gua destilada Nota Os controles devem ser reconstitu do aliquotado e armazenado congelado Solu o de Lavagem Determinar a quantidade necess ria de Solu o de Lavagem para fazer a lavagem das placas de microtitula o e para diluir amostras e controles Diluir o Concentrado de Lavagem 10X a 1 10 com gua 1 parte de Concentrado de Lavagem 10X para 9 partes de gua p ex 100 ml de Concentrado de Lavagem 10X 900 ml de gua destilada Quando a Solu o de Lavagem preparada em condi es est reis pode ser armazenada durante uma semana a 2 8 C Precau es e Advert ncias Amostras de leite deve ser desnatado ap s a centrifuga o 14 IDEXX Brucellosis Milk X2 Protocolo de teste Todos os reagentes devem equilibrar se com a 18 26 C antes do uso Os reagentes devem ser homogeneizados por movimentos gentis por v rtex 1 Diluir Controle Positivo em uma proporc o de 1 4 em um tubo usando S2. 8 Cobrir e incubar a placa por 60 minutos 5 min a 37 C 3 C A placa s deve ser hermeticamente selada ou ser coberta e incubada em uma c mara mida 9 Repetir a etapa 6 10 Distribuir 100 ul de Substrato TMB No 12 do em cada cavidade 11 Incubar 18 26 C durante 15 minutos 1 min 12 Bloquear a reac o crom tica adicionando 100 ul de Soluc o de Interrupc o No 3 por cavidade A Soluc o de Interrupc o No 3 dever ser colocada na mesma ordem e na mesma velocidade utilizadas com o Substrato TMB No 12 13 Ler os resultados usando um fot metro com comprimento de onda de 450 nm Resultados Para validar o ensaio a densidade ptica DO do Controle Positivo CPX n o deve exceder 2 000 e a DO do Controle Negativo CNX 0 500 respectivamente A diferen a entre o Controle Positivo e o Negativo CPx CNX dever ser de gt 0 300 imprescindivel que a leitura das placas seja feita dentro de 2 horas ap s a adic o da Solu o de Interrup o Nota IDEXX Laboratories Inc t m instrumentos e software dispon veis para o c lculo de raz es das m dias e raz es A P e elabora o de resumo de dados IDEXX Brucellosis Milk X2 15 C lculos Se o teste das amostras for realizado em duplicata dever ser obtida a m dia da DO A densidade ptica m dia do Controle Positivo CPx assim como a DO das amostras Amostra A450 sao corrigidas subtraindo a DO m dia do Controle Negativo CNX DO corr
3. abortus Antigen beschichtete Testplatte inaktiviert 10 2 Positive Kontrolle lyophilisiert 1x5 0 ml 3 Negative Kontrolle lyophilisiert 1x5 0 ml 4 Konjugat 1x 110 ml A TMB Substrat Nr 12 1x 100 ml B Stoppl sung Nr 3 1x 100 ml C Waschkonzentrat 10X 1 x 480 ml Sonstige Komponenten Plastikbeutel mit Druckverschluss 1 Hinweis Am Ende dieser Gebrauchsinformation befindet sich eine Tabelle welche die auf den Etiketten verwendeten internationalen Symbole erl utert Lagerung Reagenzien bei 2 8 C lagern Bei entsprechender Lagerung sind die Reagenzien bis zum Verfalldatum stabil IDEXX Brucellosis Milk X2 25 Notwendiges Material das nicht mitgeliefert wird Pr zisionspipetten und Multikanalmikropipetten Einweg Pipettenspitzen Graduierter Zylinder f r die Waschl sung Photometer f r 96 Vertiefungen ausgestattet mit 450 nm Messfiltern Manuelles halbautomatisches oder automatisches Mikrotiterplatten Waschsystem Zur Vorbereitung der Reagenzien nur destilliertes oder demineralisiertes Wasser verwenden Abdeckungen f r Mikrotiterplatten Deckel Alu Folie oder Klebefolie Feuchte Kammer Inkubator f r eine konstante Temperatur von 37 C 3 C Zentrifuge 2000 x g Mikrotiterplatten Sch ttler Vorsichtsmafinahmen und Warnhinweise Alle biologischen Substanzen als potenziell infekti s behandeln Die Substratl sung reizt Augen Atemwege und Haut Kontakt mit Haut und Augen vermeiden Schutzhandschuhe Schutzkleidung A
4. incubation courte 30 gt 30 E P incubation longue lt 60 96 gt 60 Interpr tation N gatif Positif Interpr tation pour les m langes de laits de 126 vaches jusqu 250 vaches E P incubation longue 30 gt 30 Interpr tation N gatif Positif Pour les m langes trouv s positifs il est recommand que chaque chantillon l origine du m lange soit analys de facon individuelle Pour toute information Contactez votre repr sentant local IDEXX ou visitez idexx com contactlpd IDEXX Technical Support 800 727 43399 IDEXX et Test With Confidence sont des marques de commerce ou des marques d pos es d IDEXX Laboratories Inc ou ses filiales aux tats Unis et ou dans d autres pays 2013 IDEXX Laboratories Inc Tous droits r serv s 12 IDEXX Brucellosis Milk X2 IDEXX Brucellosis Milk X2 Vers o em Portugu s Kit para detecc o de Anticorpos contra Brucella abortus no leite de bovinos Para uso exclusivamente veterin rio Nome e Indicag es IDEXX Brucellosis Milk X2 oferece um m todo r pido simples sens vel e espec fico para detecc o de anticorpos contra Brucella abortus B abortus no leite bovino individual ou em pool Para os Estados Membros Europeus os testes ELISA feitos em leite devem ser conduzidos em amostras de tanque de leite conforme AnexoC da EU Decision 2008 984 EC Informac es gerais S o fornecidas placas de microtitula o impregnadas com ant geno inativ
5. ndose en condiciones est riles la Soluci n de Lavado puede almacenarse durante una semana a 2 8 C 20 IDEXX Brucellosis Milk X2 Preparaci n de las muestras Las muestras de leche deben ser desnatadas obtenidas despu s de centrifugar Protocolo del ensayo Debe dejarse que todos los reactivos adquieran 18 26 C antes de usarlos Los reactivos deber n mezclarse invirti ndolos o agit ndolos en un v rtex suavemente 1 2 3 13 Diluir en un tubo el Control Positivo a una relaci n 1 4 utilizando la Soluci n de Lavado Dispensar 50 ul de Soluci n de Lavado en cada pocillo de la placa de microtitulaci n Dispensar 50 ul de Control Positivo DILUIDO en dos pocillos correspondientes Diluci n final del Control Positivo 1 8 Dispensar 50 ul de Control Negativo NO DILUIDO en dos pocillos correspondientes Dispensar 50 ul de cada muestra de leche desnatada NO DILUIDA en los pocillos correspondientes Diluci n final del Control Negativo y de las muestras 1 2 Homogeneizar el contenido de los pocillos mediante una breve y suave agitaci n de la placa puede usarse para ello un agitador de placas Cubrir la placa e incubar Muestras individuales o mezclas de leche de hasta 125 vacas 60 minutos 5 min a 37 C 3 C o 14 18 horas a 2 8 C Mezclas de leche de 126 a 250 vacas 14 18 horas a 2 8 C Para ambas opciones las placas deben de estar selladas herm ticamente o deben cubrirse e incubarse en una c
6. Lavado Concentrada 10X 1x480 ml Otros componentes Bolsa de pl stico de cierre herm tico reutilizable 1 Nota Ver tabla al final del protocolo para las explicaciones de los s mbolos internacionales utilizados en las etiquetas del kit Almacenamiento Almacenar los reactivos a 2 8 C Los reactivos son estables hasta su fecha de caducidad siempre y cuando hayan sido almacenados en las condiciones correctas IDEXX Brucellosis Milk X2 19 Materiales necesarios que no se suministran Micropipetas de precisi n y micropipetas multidispensadoras Puntas de pipeta desechables Probetas graduadas para la soluci n de lavado Lector de placas de 96 pocillos equipado con filtros de 450 nm Lavador de microplacas manual semiautom tica o autom tica Usar s lo agua destilada o desionizada para preparar los reactivos de la prueba Cubiertas de placas tapa papel de aluminio o adhesivo etc Centr fuga 2000 x 9 Agitador de placas C mara h meda Incubadora capaz de mantener una temperatura de 37 C 3 C Precauciones y advertencias para los usuarios Considerar todo material biol gico como potencialmente infeccioso cuando lo manipule a soluci n substrato irrita los ojos el aparato respiratorio y la piel Evitar el contacto con la piel y los ojos Usar guantes de protecci n prendas de protecci n gafas o protecci n de la cara al manipular muestras y reactivos Consultar la Ficha de Datos de Segur
7. abortus B abortus partir d chantillons de laits individuels et de laits de tank bovins Dans les Etats Membres de l Union Europ enne les tests ELISA effectu s sur chantillons de lait doivent tre r alis s partir de laits de tank comme requis dans l annexe C de la D cision Europ enne 2008 984 EC Description et principe Les cupules de la plaque de microtitration sont sensibilis es avec l antig ne inactiv de B abortus Si l chantillon contient des anticorps anti B abortus ceux ci se combinent avec l antig ne fix dans les cupules pour former un complexe anticorps antig ne Apr s lavage pour liminer les fractions non li es le Conjugu IgG anti ruminant marqu la peroxidase de raifort est ajout et se lie aux antig nes B abortus captur s Le Conjugu non li est limin par lavage et le Substrat TMB est ajout dans les puits l intensit de la coloration qui se d veloppe est proportionnelle la quantit d anticorps pr sents dans l chantillon L valuation diagnostique est r alis e par comparaison des densit s optiques DO obtenues pour les chantillons et les Contr les R actif Volume 1 Plaque sensibilis e avec des antigenes de B abortus 10 2 Contr le positif lyophilis 1x5 0 ml 3 Contr le n gatif lyophilis 1x5 0 ml 4 Conjugu 1x110 ml A Substrat TMB N 12 1x100 ml B Solution d arr t N 3 1x100 ml C Solution de lavage concentr e 10X 1x480 ml Autres composants sache
8. ber Nacht 60 gt 60 Bewertung Negativ Positiv Tankmilchproben von 126 bis zu 250 Rindern P PK 96 Inkubation ber Nacht 30 gt 30 Bewertung Negativ Positiv Sollte ein Pool positiv sein wird empfohlen die Proben des Pools einzeln zu testen 29 Zul Nr BGAF B 023 Technischer Kundendienst Kontaktieren Sie Ihren zust ndigen IDEXX Area Manager oder Vertriebsh ndler oder besuchen Sie unsere Webseite idexx com contactlpd IDEXX und Test With Confidence sind Schutzmarken oder eingetragene Schutzmarken von IDEXX Laboratories Inc oder eines Tochterunternehmens von IDEXX in den Vereinigten Staaten und oder in anderen L ndern 02013 IDEXX Laboratories Inc Alle Rechte vorbehalten 30 IDEXX Brucellosis Milk X2 IDEXX Brucellosis Milk X2 31 32 IDEXX Brucellosis Milk X2 Symbol Descriptions Descriptions des symboles Symbol Beschreibungen Descrizione dei simboli Descripciones de los s mbolos Descric es do s mbolos Batch Code Lot Num ro de lot Chargenbezeichnung Ch B Use by date utiliser avant la date Verwendbar bis LOT Codice del lotto partita Usare entro C digo de lote Lote Usar antes de mero de Partida Lote Data de Vencimento Serial Number Control positive m ro de s rie Contr le positif Seriennummer Positive Kontrolle SN mero di serie CONTROL Cont
9. mara h meda Eliminar o aspirar el l quido de cada pocillo y lavar cada pocillo con aproximadamente 300 ul de Soluci n de Lavado tres veces Eliminar los contenidos l quidos de todos los pocillos despu s de cada lavado Despu s de la aspiraci n final eliminar el fluido de lavado residual de cada placa golpe ndola sobre material absorbente Evitar que las placas se sequen entre los lavados y antes de a adir el reactivo siguiente Dispensar 100 ul de Conjugado en cada pocillo Cubrir la placa e incubar durante 60 minutos 2 5 min a 37 C 3 C La placa s debe de estar sellada herm ticamente o debe cubrirse e incubarse en c mara h meda Repetir el paso 6 10 11 12 Dispensar 100 ul de Substrato TMB n 12 en cada pocillo Incubar a 18 26 C durante 15 minutos 1 min Frenar la reacci n dispensando 100 ul por pocillo de Soluci n de Frenado n 3 La Soluci n de Frenado n 3 debe dispensarse en el mismo orden y al mismo ritmo que la dispensaci n del Substrato TMB n 12 Leer los resultados con un fot metro a una longitud de onda de 450 nm IDEXX Brucellosis Milk X2 21 Resultados Para la validaci n de la placa la densidad ptica del Control Positivo CPX no deber a ser superior a 2 000 y la densidad ptica del Control Negativo CNx no deber a exceder de 0 500 La diferencia de la densidad ptica entre los Controles Positivo y Negativo CPx CNx debe ser gt 0 300 Las placas deben ser le da
10. 10 Stopping the reaction 11 Measure the plate 12 Interpretation IDEXX Brucellosis Milk X2 Action Reconstitute the Iyophilized Control milks each with 5 ml of sterile water Dilute the Wash Concentrate 10X 1 10 with water to prepare the Wash Solution Dilute the Positive Control 1 4 in a separate tube with the Wash Solution Dispense 50 uL of Wash Solution into each well of the microtiter plate Add 50 uL of the DILUTED Positive Control into two appropriate wells Final dilution of Positive Control 1 8 Add 50 uL of UNDILUTED Negative Control into two appropriate wells Add 50 uL of UNDILUTED skimmed milk samples into the appropriate wells Final dilution of samples and negative control milk 1 2 Mix the contents within each well by gently shaking the microtiter plate briefly a microtiter plate shaker might be used Cover the plate and incubate for Individual milk and bulk milk up to 125 cows 60 minutes 5 min at 37 C 3 C or 14 18 hours at 2 8 C Bulk milk from 126 cows up to 250 cows 14 18 hours at 2 8 C in a humid chamber With either options plates should be hermetically sealed or covered and incubated in a humid chamber Empty or aspirate liquid content from the microwells and wash each well with approximately 300 uL of Wash Solution three times Dispense 100 uL of Conjugate into each well Cover the plate and incubate it for 60 minutes 5 min at 37 C 3 C The plate s should be he
11. 50 vaches 14 18 heures 2 8 C Quelle que soit l option choisie les plaques doivent tre s ll es herm tiquement ou couvertes et incub es en chambre humide pour viter toute vaporation 6 Vider ou aspirer les puits de la microplaque et laver 3 fois chaque puits avec environ 300 ul de Solution de lavage Eliminer la Solution de lavage contenue dans la plaque entre chaque lavage Apr s la derni re limination cons cutive au dernier lavage vider le liquide r siduel contenu dans les puits par retournement et tapotement de la plaque sur du papier absorbant Eviter la dessiccation des puits de la microplaque entre les lavages et pr alablement la distribution du prochain r actif 7 Distribuer 100 ul de Conjugu dans chaque cupule 8 Couvrir la microplaque et incuber pendant 60 minutes 5 min 37 C 3 C Les plaques doivent tre s ll es herm tiquement ou couvertes et incub es en chambre humide pour viter toute vaporation 9 R p ter l tape 6 10 Distribuer 100 ul de Substrat TMB N 12 dans chaque cupule 11 Incuber 18 26 C durant 15 minutes 1 min 12 Ajouter 100 ul de Solution d arr t N 3 dans chaque cupule La distribution de la Solution d arr t devrait se faire dans le m me ordre et la m me vitesse que la distribution du Substrat L ajout de la Solution d arr t dans les cupules conduit un changement de couleur du Substrat de bleu jaune 13 Les r sultats des r actions colorim
12. Brucella abortus Antibody Test Kit Bovine Milk Kit de d tection des anticorps dirig s contre Brucella abortus dans les laits bovins Kit para detecc o de Anticorpos contra Brucella abortus no leite de bovinos Kit para la detecci n de Anticuerpos frente a Brucella abortus en leche de bovino Testkit zum Nachweis von Antik rpern gegen Brucella abortus in Milch von Rindern Die deutsche Fassung der Gebrauchsinformation ist entsprechend 817c TierSG zugelassen IDEXX Brucellosis Milk X2 Test With Confidence PARE 06 40709 06 BP Hn FOO IDEXX Brucellosis Milk X2 English version Brucella abortus Antibody Test Kit Bovine Milk For veterinary use only Name and Intended Use IDEXX Brucellosis Milk X2 ELISA Test Kit provides a rapid simple sensitive and specific method for detecting antibodies against Brucella abortus B abortus in bovine individual and bulk milk samples In Member States of the European Union ELISA tests done on milk must be conducted on bulk milk samples as required in Annex C of EU Decision 2008 984 EC Descriptions and Principles Microtiter plates are supplied precoated with inactivated antigen Dilutions of the samples to be tested are incubated in the wells of these plates Any antibody specific for B abortus binds to the antigen in the wells and forms an antigen antibody complex on the plate well surface Unbound material is removed from the wells by washing A peroxidase labeled anti ruminant IgG C
13. a data de validade desde que sejam devidamente conservados IDEXX Brucellosis Milk X2 13 Materiais Necess rios mas N o Fornecidos Micropipetas de precis o e micropipetas multicanal Ponteiras de pipeta descart veis Proveta graduada para a soluc o de lavagem Leitor de placas para 96 cavidades equipado com filtro 450 nm Lavador de microplaca sistema manual semi autom tico ou autom tico Use somente gua destilada ou deionizada para o preparo dos reagentes usados no teste C mara mida Incubadora capaz de manter uma temperatura de 37 C 3 C Tampa para placas tampa pl stica papel alum nio ou adesivo Agitador de placas Centr fuga capacidade de 2000 x g Precauc es e Advert ncias Manipule todos os materiais biol gicos como potencialmente infectantes Asolu o Substrato causa irrita o aos olhos ao sistema respirat rio e pele Evite contato com a pele e os olhos Usar luvas de protec o vestu rio olhos ou o rosto de protec o ao manusear amostras e reagentes Consulte o Ficha de Seguran a produto para informa es adicionais Pr ticas laboratoriais Resultados timos ser o obtidos seguindo se rigorosamente o protocolo deste teste Pipetagem cuidadosa observa o dos tempos de incuba o e lavagens corretas durante todo o procedimento s o necess rios para manter a precis o e acur cia N o exponha a solu o de TMB luz forte ou a agentes oxidantes Manuseie a solu
14. ado As dilui es das amostras que ser o testadas s o incubadas nas cavidades destas placas Qualquer anticorpo espec fico contra o B abortus liga se ao ant geno nas cavidades e forma um complexo ant geno anticorpo na superf cie da cavidade da placa O material n o ligado removido das cavidades atrav s de lavagem adicionado o conjugado anti IgG ruminante marcado com peroxidase que se liga aos anticorpos dos ruminantes no complexo com o ant geno contra a B abortus O conjugado n o ligado removido atrav s de lavagem e o substrato que cont m o TMB adicionado s cavidades A graduac o da cor desenvolvida densidade ptica medida a 450 nm diretamente proporcional quantidade de anticorpo espec fico contra B abortus existente na amostra O resultado obtido comparando se a densidade ptica DO que se desenvolve nas cavidades que cont m as amostras com a densidade ptica DO das cavidades que cont m o controle positivo Reagentes Volume 1 Placa Impregnada com Ant geno B abortus 10 2 Controle Positivo 1x5 0 ml 9 Controle Negativo 1x5 0 ml 4 Conjugado 1x110ml A Substrato TMB No 12 1x100 ml B Soluc o de Interrupc o No 3 1x100 ml C Concentrado de Lavagem 10X 1x480 ml Outros componentes embalagem zip lock 1 Nota veja a tabela no final do protocolo para descric o dos s mbolos internacionais usados nos r tulos dos kits Armazenagem Conservar os reagentes a 2 8 C Os reagentes s o est veis at
15. as instrument and software systems available that calculate means and values and provide data summaries IDEXX Brucellosis Milk X2 3 Calculation The ODs of samples tested in duplicates must be averaged The mean OD of the Positive Control PCX and the OD of the sample Sample A450 are corrected by subtracting the mean OD of the Negative Control NCX Positive Control corrected OD Sample corrected OD S P ratio for each sample t GES Sample A450 NCX PCX NCx Sample A450 NCx S P 100 x C PNG Interpretation of Results Interpretation for individual milks and bulk milk samples up to 125 cows S P short incubation 30 gt 30 S P long incubation lt 60 gt 60 Interpretation Negative Positive Interpretation for bulk milk samples from 126 up to 250 cows S P long incubation lt 30 gt 30 Interpretation Negative Positive If a pool yields a positive result it is recommended that test samples used to prepare the pool should be analyzed individually amp Major change in the user instructions 4 IDEXX Brucellosis Milk X2 Summarized Test Procedure IDEXX strongly recommends that you read the complete instructions carefully before using the test for the first time Step 1 Reagents 2 Sample Distribution 3 Sample Incubation 4 Washing the Plate 5 Conjugate distribution 6 Conjugate incubation 7 Repeat step 4 8 Substrate distribution 9 Substrate incubation
16. das en leche deben de realizarse en tanques de leche tal y como se requiere en el Anexo C de la Decisi n de la Uni n Europea 2008 984 EC Descripci n y principios Las placas de microtitulaci n se suministran tapizadas con un ant geno inactivado Las diluciones de las muestras se incuban en los pocillos de dichas placas Cualquier anticuerpo espec fico frente a B abortus se une al ant geno que tapiza los pocillos y forma un complejo ant geno anticuerpo en la superficie del pocillo El material que no ha quedado unido se elimina de los pocillos mediante lavado A continuaci n se a ade un conjugado formado por una IgG anti rumiante unida al enzima peroxidasa el cual es susceptible de unirse a los anticuerpos que formaron el complejo con el ant geno de B abortus El conjugado no unido se elimina mediante lavado y un substrato TMB es a adido a los pocillos El grado de color desarrollado densidad ptica medida a 450 nm es directamente proporcional a la cantidad de anticuerpo espec fico frente a B abortus presente en la muestra El resultado se obtiene comparando la densidad ptica de los pocillos con muestra con la densidad ptica de los pocillos que contienen el control positivo Reactivos Volumen 1 Placa tapizada con Ant geno de B abortus 10 2 Control Positivo liofilizado 1x5 0 ml 3 Control Negativo liofilizado 1x5 0 ml 4 Conjugado 1x110 ml A Substrato TMB n 12 1x100 ml B Soluci n de Frenado n 3 1x100 ml C Soluci n de
17. e lavage est pr par e dans des conditions st riles c d utilisation de pipettes st riles d eau ultra pure et de r cipients st riles pr l vements des volumes utilis s dans des conditions st riles elle peut tre conserv e pendant 7 jours 2 8 C 8 IDEXX Brucellosis Milk X2 Pr paration des chantillons Echantillons de lait les chantillons de lait doivent tre cr m s apr s centrifugation Mode op ratoire Porter tous les r actifs 18 26 C avant utilisation et bien les homog n iser par agitation douce ou au vortex 1 Diluer le Contr le positif au 1 4 avec la Solution de lavage dans un tube essais 2 Distribuer 50 ul de Solution de lavage dans chaque cupule 3 Distribuer 50 ul de Contr le positif DILUE dans deux cupules appropri es Dilution finale du contr le positif 1 8 Distribuer 50 ul de Contr le n gatif NON DILUE dans deux cupules appropri es Distribuer 50 ul d chantillons de lait cr m NON DILUE dans les cupules adjacentes de la microplaque Dilution finale du Contr le n gatif et des chantillons 1 2 4 Agiter bri vement la microplaque pour homog n iser les chantillons l utilisation d un agitateur de microplaque est recommand e 5 Couvrir la microplaque et incuber e chantillons individuels de laits et laits de tank jusqu 125 vaches 60 minutes 5 min 37 C 3 C ou 14 18 heures 2 8 C e M langes de laits de tank de 126 vaches jusqu 2
18. ebefeld Bern Switzerland EU Representative IDEXX Europe B V PO Box 1334 2130 EK Hoofddorp The Netherlands idexx com
19. en Endverd nnung positive Kontrolle 1 8 50 ul UNVERD NNTE negative Kontrolle in zwei entsprechende Vertiefungen geben 50 ul von jeder UNVERD NNTEN Probe in eine entsprechende Vertiefung geben Endverd nnung negative Kontrolle und Proben 1 2 Den Inhalt der Vertiefungen mit einem Mikrotiterplatten Sch ttler mischen Testplatte abdecken und inkubieren Einzelmilch und Tankmilchproben von bis zu 125 Rindern 60 Minuten 5 Min bei 37 C 3 C oder 14 18 Stunden bei 2 8 C Tankmilchproben von 126 bis zu 250 Rindern 14 18 Stunden bei 2 8 C In jedem Fall sollten die Testplatten entweder hermetisch verschlossen inkubiert werden oder abgedeckt in einer feuchten Kammer Den fl ssigen Inhalt aus den Vertiefungen entfernen und jede Vertiefung dreimal mit etwa 300 ul Waschl sung waschen In jede Vertiefung der Testplatte 100 ul Konjugat pipettieren Testplatte abdecken und 60 Minuten 5 Min bei 37 C 3 C inkubieren Die Testplatten sollten entweder hermetisch verschlossen inkubiert werden oder abgedeckt in einer feuchten Kammer In jede Vertiefung 100 ul TMB Substrat Nr 12 pipettieren 15 Minuten 1 Min bei 18 26 C inkubieren Die Farbreaktion durch Zugabe von 100 ul Stoppl sung Nr 3 in jede Vertiefung stoppen Messen der Farbreaktion im Photometer bei einer Wellenl nge von 450 nm Einzelmilch und Tankmilchproben von bis zu 125 Rindern P PK 96 Kurzinkubation 30 gt 30 P PK 96 Inkubation
20. idad de Materiales del producto para obtener informaci n adicional Pr cticas de laboratorio Los resultados ptimos se obtendr n siguiendo estrictamente este protocolo El pipeteo cuidadoso la coordinaci n y el lavado durante todo este procedimiento son necesarios para mantener la precisi n y exactitud No exponer las soluciones TMB a la luz fuerte o a cualquier agente oxidante Manejar el Substrato TMB con material de cristal limpio o material pl stico Todos los desechos deben descontaminarse adecuadamente antes de ser eliminados Desechar el contenido de conformidad con las regulaciones locales regionales y nacionales Extremar la precauci n para evitar la contaminaci n de los componentes del kit No verter los reactivos no utilizados de nuevo en contenedores No utilizar los kits pasada su fecha de caducidad y no mezclar componentes de kits con n mero de lote distintos Preparaci n de los reactivos Controles Reconstituir los Controles Positivo y Negativo con 5 ml de agua destilada Notas Los controles reconstituidos deben conservarse en partes al cuotas y congelados Soluci n de Lavado La Soluci n de Lavado Concentrada 10X debe dejarse que adquiera 18 26 C y agitarse para asegurar la disoluci n de posibles sales precipitadas Esta soluci n deber diluirse 1 10 con agua destilada desionizada antes de emplearla por ej 30 ml Soluci n de Lavado Concentrada 10X m s 270 ml de agua por placa a analizar Prepar
21. igida do Controle Positivo DO corrigida de Amostra Raz o A P de Amostra CPX CNX Amostra A450 CNX Np p 00x LEER CPx CNX Interpreta o de Resultados Interpreta o para leite individual e pool de at 125 vacas A P incuba o curta lt 30 gt 30 A P incuba o o 9 durante a noite lt 60 SE Interpretac o Negativo Positivo Interpretac o para pool de leite de 126 at 250 vacas A P incuba o p 9 durante a noite Hi zz Interpretac o Negativo Positivo Se um pool de amostras positivo recomenda se testar individualmente as amostras utilizadas para preparar o pool amp Modificag es importante nas instrug es de uso 16 IDEXX Brucellosis Milk X2 Resumo do procedimento de teste altamente recomend vel que todas as instruc es sejam lidas cuidadosamente antes de usar o produto Etapa Preparac o dos reagentes Diluig o da amostras Incubagao da amostras Lavagem da placa Distribuig o do Conjugado Incubac o do Conjugado Repetir a etapa 4 Distribuig o do Substrato Incubac o do Substrato 10 Interrupc o da reagao 11 Leitura da placa 12 Interpretac o IDEXX Brucellosis Milk X2 Agao Reconstituir os controles positivos e negativos com 5 ml de agua destilada Diluir a Soluc o de Lavagem Concentrada 10X do a 1 10 em gua para preparar a Soluc o de Lavagem Diluir controle positivo em uma propor o de 1 4 em um tubo usando Solu o de La
22. inutos 5 min a 37 C 3 C o 14 18 horas a 2 8 C Mezclas de leche de 126 a 250 vacas 14 18 horas a 2 8 C Para ambas opciones las placas deben de estar selladas herm ticamente o deben cubrirse e incubarse en una c mara h meda Eliminar o aspirar el l quido de cada pocillo y lavar cada pocillo con aproximadamente 300 ul de Soluci n de Lavado tres veces Dispensar 100 ul de Conjugado en cada pocillo Cubrir la placa e incubar durante 60 minutos 5 min a 37 C 3 C La placa s debe de estar sellada herm ticamente o debe cubrirse e incubarse en c mara h meda Dispensar 100 ul de Substrato TMB n 12 en cada pocillo Incubar a 18 26 C durante 15 minutos 1 min Frenar la reacci n dispensando 100 ul por pocillo de Soluci n de Frenado n 3 Leer los resultados con un fot metro a una longitud de onda de 450 nm Interpretaci n de muestras individuales o mezclas de leche de hasta 125 vacas M P incubaci n corta lt 30 230 M P incubaci n nocturna lt 60 gt 60 96 Interpretaci n Negativo Positivo Interpretaci n para mezclas de leche de 126 a 250 vacas M P 96 incubaci n nocturna 30 230 Interpretaci n Negativo Positivo Si una mezcla de sueros ofrece un resultado positivo se recomienda analizar las muestras que componen la mezcla de forma individual 23 N de registro 1213 RD Para asistencia t cnica Contacte el representante local IDEXX o visite idexx com con
23. lons de lait cr m NON DILUE dans les cupules adjacentes Dilution finale du Contr le n gatif et des chantillons 1 2 Agiter bri vement la microplaque pour homog n iser les chantillons l utilisation d un agitateur de microplaque est recommand e Couvrir la microplaque et incuber e chantillons individuels de laits et m langes de laits jusqu 125 vaches 60 minutes 5 min 37 C 3 C ou 14 18 heures 2 8 C e M langes de laits de 126 vaches jusqu 250 vaches 14 18 heures 2 8 C Quelle que soit l option choisie les plaques doivent tre s ll es herm tiquement ou couvertes et incub es en chambre humide pour viter toute vaporation Vider ou aspirer les puits de la microplaque et laver 3 fois chaque puits avec environ 300 ul de Solution de lavage Distribuer 100 ul de Conjugu dans chaque cupule Couvrir la microplaque et incuber pendant 60 minutes 5 min 37 C 3 C Les plaques doivent tre s ll es herm tiquement ou couvertes et incub es en chambre humide pour viter toute vaporation Distribuer 100 ul de Substrat TMB N 12 dans chaque cupule Incuber 18 26 C durant 15 minutes 1 min Ajouter 100 ul de Solution d arr t N 3 dans chaque cupule Les r sultats des r actions colorim triques sont lus sur un spectrophotom tre une longueur d onde de 450 nm Interpr tation pour chantillons de laits individuels et de laits de tank jusqu 125 vaches E P
24. m 126 cows up to 250 cows 14 18 hours at 2 8 C With either options plates should be hermetically sealed or covered and incubated in a humid chamber Empty or aspirate liquid content from the microwells and wash each well with approximately 300 uL of Wash Solution three times Discard the liquid contents of all wells after each wash Following the final fluid removal firmly tap residual washfluid from each plate onto absorbent material Avoid plate drying between washes and prior to the addition of the next reagent Dispense 100 uL of Conjugate into each well Cover the plate and incubate for 60 minutes 5 min at 37 C 3 C The plate s should be hermetically sealed or covered and incubated in a humid chamber Repeat Step 6 Dispense 100 uL TMB Substrate N 12 into each well Incubate at 18 26 C for 15 minutes 1 min Stop the color reaction by adding 100 uL of Stop Solution N 3 per well The Stop Solution should be dispensed in the same order and at the same speed as the Substrate Read the results using a photometer at a wavelength of 450 nm Results To validate the assay the mean optical density 0D of the Positive Control PCx should not exceed 2 000 and the mean OD of the Negative Control NCx should not exceed 0 500 The difference between the Positive and the Negative Control mean ODs PCX NCx must be gt 0 300 Make sure to read the plates within two hours after the addition of the Stop Solution Note IDEXX h
25. nformations Pratiques de laboratoire Des r sultats optimaux seront obtenus en se conformant de mani re stricte au protocole suivant La pr cision du test d pend des l ments suivants pipetage minutage et lavage minutieux au cours de cette procedure Ne pas exposer la solution de substrat TMB la lumi re directe du soleil ou aux agents oxydants Veiller la propret de la verrerie et ou du mat riel de laboratoire en mati re plastique utilis s lors de sa manipulation Tous les d chets doivent tre correctement d contamin s avant leur limination liminer les contenus selon les r glementations locales r gionales et nationales en vigueur viter la contamination des composants du kit Ne pas verser les r actifs non utilis s de nouveau dans les conteneurs Ne pas utiliser les trousses apr s leur date de p remption et ne pas m langer les composants avec ceux de trousses ayant un num ro de lot diff rent Pr paration des r actifs Contr les Reconstituer les Contr les positif et n gatif avec 5 ml d eau distill e Note Les Contr les reconstitu s doivent tre aliquot s et conserv s congel s Solution de lavage Pr parer le volume n cessaire de Solution de lavage partir de la Solution de lavage concentr e 10X diluer 1 volume de Solution de lavage concentr e 10X avec 9 volumes d eau distill e Cette solution doit tre fraichement pr par e avant chaque utilisation Lorsque la Solution d
26. olu o de Interrup o No 3 por cavidade Ler os resultados usando um fot metro com comprimento de onda de 450 nm Interpreta o para leite individual e pool de at 125 vacas A P incuba o curta lt 30 230 A P incuba o durante a noite lt 60 2 60 Interpretagao Negativo Positivo Interpretac o para pool de leite de 126 at 250 vacas A P incubagao durante a noite lt 30 gt 30 Interpretagao Negativo Positivo Se um pool de amostras positivo recomenda se testar individualmente as amostras utilizadas para preparar o pool Assist ncia t cnica Entre em contato com seu gerente de rea ou distribuidor IDEXX Ou visite idexx com contactlpd Assist ncia T cnica IDEXX Europe 800 727 43399 IDEXX e Test With Confidence s o marcas ou marcas registradas de IDEXX Laboratories Inc ou de suas filiais nos Estados Unidos e ou em outros pa ses 2013 IDEXX Laboratories Inc Todos os direitos reservados 18 IDEXX Brucellosis Milk X2 IDEXX Brucellosis Milk X2 Versi n Espa ola Kit para la detecci n de Anticuerpos frente a Brucella abortus en leche de bovino Para uso veterinario exclusivo Nombre y uso previsto IDEXX Brucellosis Milk X2 proporciona un m todo r pido simple sensible y espec fico para detectar anticuerpos frente a Brucella abortus B abortus en muestras individuales o mezclas de leche de bovino En los pa ses miembros de la Uni n Europea las pruebas ELISA realiza
27. oluc o de Lavagem 2 Distribuir 50 ul de Solu o de Lavagem em cada uma das cavidades da placa de microtitulac o 3 Adicionar 50 ul de Controle Positivo DILU DO nas duas cavidades apropriadas da placa de microtitulac o Dilui o final do Controle Positivo 1 8 Adicionar 50 ul de Controle Positivo NAO DILUIDO nas duas cavidades apropriadas da placa de microtitulac o Adicionar 50 ul de amostras de leite desnatado NAO DILUIDAS nas cavidades apropriadas da placa de microtitulac o Diluig o final do Controle Negativo e amostras 1 2 4 Homogeneizar o conte do das cavidades da placa com um agitador de placas 5 Cobrir a placa e incubar Leite individual e leite em pool de at 125 vacas 60 minutos 5 min a 37 C 3 C ou 14 18 horas a 2 8 C Leite em pool de leite de 126 at 250 vacas 14 18 horas a 2 8 C Em ambas opc es a placa s deve ser hermeticamente selada ou ser coberta e incubada em uma c mara mida 6 Esvaciar ou aspirar o conte do l quido das cavidades da placa e lavar cada cavidade com aproximadamente 300 ul de Solug o de Lavagem por 3 vezes Remover o conte do l quido de todas as cavidades ap s cada lavagem Ap s a remoc o da soluc o de lavagem final eliminar o fluido residual de lavagem de cada placa batendo a firmemente em material absorvente Evitar que a placa seque entre os lavados e antes de adicionar o pr ximo reagente 7 Distribuir 100 ul do Conjugado em cada uma das cavidades
28. onjugate is added which binds to the ruminant antibodies complexed with the B abortus antigen Unbound Conjugate is removed by washing and the TMB Substrate is added to the wells The degree of color that develops optical density measured at 450 nm is directly proportional to the amount of antibody specific for B abortus present in the sample The diagnostic relevance of the result is obtained by comparing the optical density OD that develops in wells containing the samples with the OD from wells containing the Positive Control Reagents Volume B abortus Antigen Coated Plate 10 2 Positive Control lyophilized 1x5 0mL 3 Negative Control lyophilized 1x5 0 mL 4 Conjugate 1x110 mL A TMB Substrate N 12 1x100 mL B Stop Solution N 3 1x100 mL C Wash Concentrate 10X 1x480 mL Other components Zip lock bag 1 Note See table at the end of the insert for a description of international symbols used on the labels of this kit Storage Store the reagents at 2 8 C Reagents are stable until expiration date provided they have been stored properly IDEXX Brucellosis Milk X2 1 Materials Required but Not Provided Precision micropipettes or multi dispensing micropipettes Disposable pipette tips Graduated cylinder for wash solution 96 well microplate reader equipped with 450 nm filter Use only distilled or deionized water for preparation of the reagents used in the test Microplate washer manual semi automatic or automatic
29. ozen Wash Solution Determine the amount of Wash Solution needed for washing the microtiter plates and diluting the samples and controls Dilute the Wash Concentrate 10X 1 10 with water 1 part Wash Concentrate with 9 parts water e g 100 mL Wash Concentrate 10X 900 mL distilled water When prepared under sterile conditions the Wash Solution can be stored for one week at 2 8 C Preparation of Reagents Milk samples must be skimmed milk samples obtained after centrifugation 2 IDEXX Brucellosis Milk X2 Test Procedure All reagents must be allowed to come to 18 26 C before use Reagents should be mixed by gentle swirling or vortexing 1 2 3 th 8 9 10 11 12 13 Dilute the Positive Control 1 4 in a separate tube with the Wash Solution Dispense 50 uL of Wash Solution into each well of the microtiter plate Add 50 uL of the DILUTED Positive Control into two appropriate wells Final dilution of positive control 1 8 Add 50 uL of UNDILUTED Negative Control into two appropriate wells Add 50 uL of UNDILUTED skimmed milk samples into the appropriate wells Final dilution of samples and Negative Control milk 1 2 Mix the contents within each well by gently shaking the microtiter plate briefly a microtiter plate shaker might be used Cover the plate and incubate for Individual milk and bulk milk up to 125 cows 60 minutes 5 min at 37 C 43 C or 14 18 hours at 2 8 C Bulk milk fro
30. positiven Kontrolle 100 bezogen oe s SIS Probe A450 NKX PKx NKx Probe A450 NKx P PK 100 x PRN Interpretation der Ergebnisse Einzelmilch und Tankmilchproben von bis zu 125 Rindern P PK Kurzinkubation lt 30 230 P PK Inkubation ber Nacht lt 60 2 60 Bewertung negativ positiv Tankmilchproben von 126 bis zu 250 Rindern P PK Inkubation ber Nacht lt 30 2 30 Bewertung negativ positiv Sollte ein Pool positiv sein wird empfohlen die Proben des Pools einzeln zu testen Wesentliche nderung der Gebrauchsinformation 28 IDEXX Brucellosis Milk X2 Kurzbeschreibung Es ist empfehlenswert vor dem ersten Gebrauch des Testkits die gesamte Anleitung durchzulesen Schritt 1 Vorbereitung des Tests 2 Probenverdiinnung 3 Probeninkubation 4 Waschen der Platte 5 Konjugatverteilung 6 Konjugatinkubation 7 Schritt 4 wiederholen 8 Verteilen des Substrats 9 Substratinkubation 10 Stoppen der Reaktion 11 Messen der Platte 12 Interpretation IDEXX Brucellosis Milk X2 Handlung Die positive und die negative Kontrolle werden mit je 5 ml destilliertem Wasser gel st Herstellung der Waschl sung aus dem Waschkonzentrat 10X 1 Teil Waschkonzentrat 10X mit 9 Teilen destilliertem Wasser verd nnen Positive Kontrolle 1 4 mit der Waschl sung verd nnen 50 ul Waschl sung in jede Vertiefung geben 50 ul VERD NNTE positive Kontrolle in zwei entsprechende Vertiefungen geb
31. rmetically sealed or covered and incubated in a humid chamber Dispense 100 uL TMB Substrate N 12 into each well Incubate at 18 26 C for 15 minutes 1 min Stop the color reaction by adding 100 uL Stop Solution N 3 per well Read the results using a photometer at a wavelength of 450 nm Interpretation for individual milk and bulk milk samples up to 125 cows S P short incubation 30 230 S P long incubation lt 60 2 60 Interpretation egative Positive Interpretation for bulk milk samples from 126 up to 250 cows S P long incubation 30 230 Interpretation egative Positive If a pool yields a positive result it is recommended that test samples used to prepare the pool should be analyzed individually For technical assistance Contact your IDEXX area manager or distributor or visit our website idexx com contactlpd IDEXX Technical Support 800 727 43399 IDEXX and Test With Confidence are trademarks or registered trademarks of IDEXX Laboratories Inc or its affiliates in the United States and or other countries 2013 IDEXX Laboratories Inc All rights reserved 6 IDEXX Brucellosis Milk X2 IDEXX Brucellosis Milk X2 Version francaise Kit de d tection des anticorps dirig s contre Brucella abortus dans les laits bovins R serv l usage v t rinaire Nom et usage IDEXX Brucellosis Milk X2 est un test immunoenzymatique ELISA pour la d tection des anticorps dirig s contre Brucella
32. roben verwenden z B durch einen vorgeschalteten Zentrifugationsschritt Testanweisung Alle Reagenzien vor Gebrauch auf 18 26 C bringen Die Reagenzien durch leichtes Sch tteln mischen 1 Positive Kontrolle 1 4 mit der Waschl sung verd nnen 2 50 ul Waschl sung in jede Vertiefung geben 3 50 ul VERD NNTE positive Kontrolle in zwei entsprechende Vertiefungen geben Endverd nnung positive Kontrolle 1 8 50 ul UNVERD NNTE negative Kontrolle in zwei entsprechende Vertiefungen geben 50 ul von jeder UNVERD NNTEN entrahmten Probe in eine entsprechende Vertiefung geben Endverd nnung negative Kontrolle und Proben 1 2 4 Den Inhalt der Vertiefungen mit Mikrotiterplatten Sch ttler mischen 5 Testplatte abdecken und inkubieren Einzelmilch und Tankmilchproben von bis zu 125 Rindern 60 Minuten 5 Min bei 37 C 3 C in oder 14 18 Stunden bei 2 8 C Tankmilchproben von 126 bis zu 250 Rindern 14 18 Stunden bei 2 8 C In jedem Fall sollten die Testplatten entweder hermetisch verschlossen inkubiert werden oder abgedeckt in einer feuchten Kammer 6 Den fl ssigen Inhalt aus den Vertiefungen entfernen und jede Vertiefung dreimal mit etwa 300 ul Waschl sung waschen Den fl ssigen Inhalt aus jeder Vertiefung nach jedem Waschen entfernen Nach dem letzten Waschschritt vorsichtig aber fest die Reste der Waschl sung aus den Vertiefungen auf ein St ck Saugpapier klopfen Ein Austrocknen der Vertiefungen zwischen den ein
33. rollo Positivo mero de serie Control Positivo mero de s rie Controle Positivo Catalog Number Control negative um ro de catalogue Contr le n gatif Katalognummer Negative Kontrolle REF umero di catalogo CONTROL Controllo Negativo mero de cat logo Control Negativo mero de cat logo Controle Negativo Date of manufacture In vitro diagnostic Date de fabrication Diagnostic in vitro Herstellungsdatum In vitro Diagnostikum CR vw lv Data di produzione Fecha de fabricaci n Data de Fabrica o Diagnostico in vitro Diagn stico in vitro Diagn stico in vitro Manufacturer Fabricant Hersteller Ditta produttrice Fabricante Fabricante Temperature limitation Limite de temp rature Zul ssiger Temperaturbereich Limite di temperatura L mite de temperatura Limite de temperatura ECIREP Authorized Representative in the European Community Repr sentant agr pour la Communaut europ enne Autorisierte EG Vertretung Rappresentante autorizzato nella Comunit Europea Representante autorizado na Comunidade Europ ia Representante autorizado en la Comunidad Europea Consult instructions for use Consulter la notice d utilisation Gebrauchsinformation beachten Consultare le istruzioni per l uso Consultar las instrucciones de uso Consulte instruc es para o uso DEXX Brucellosis Milk X2 33 pm FAS ind PA VAS Manufacturer IDEXX Switzerland AG Stationsstrasse 12 3097 Li
34. s dentro de un periodo m ximo de 2 horas tras a adir la Soluci n de Frenado Nota IDEXX tiene a disposici n instrumentos y sistemas de software para el c lculo de valores medios y valores y la elaboraci n de res menes de datos C lculos Debe obtenerse el valor medio de la densidad ptica de las muestras duplicadas La densidad ptica del Control Positivo CPX as como la densidad ptica de las muestras Muestra A450 deben corregirse rest ndoles el valor de la densidad ptica del Control Negativo CNX DO corregida del Control Positivo DO corregida de la Muestra Coeficiente M P de la muestra E dd e Muestra A450 CNX CPx CNX Muestra A450 CNx M P 100 x OPK Interpretaci n de los resultados Interpretaci n de muestras individuales o mezclas de leche de hasta 125 vacas M P incubaci n corta lt 30 gt 30 M P incubaci n nocturna lt 60 gt 60 Interpretaci n Negativo Positivo Interpretaci n para mezclas de leche de 126 a 250 vacas M P incubaci n nocturna lt 30 gt 30 Interpretaci n Negativo Positivo Si una mezcla de sueros ofrece un resultado positivo se recomienda analizar las muestras que componen la mezcla de forma individual o Modificaci n importante en e manual de instrucciones 22 IDEXX Brucellosis Milk X2 Resumen del protocolo del ensayo Se recomienda especialmente antes de la realizaci n del test por primera vez y de la utilizaci n de ste res
35. s m langes de laits de 126 vaches jusqu 250 vaches E P incubation longue 30 gt 30 Interpr tation N gatif Positif Pour les m langes trouv s positifs il est recommand que chaque chantillon l origine du m lange soit analys de facon individuelle Modification majeure du mode d emploi 10 IDEXX Brucellosis Milk X2 R sum du Mode op ratoire Avant la premi re mise en oeuvre du test il est vivement recommand de lire l ensemble du mode d emploi Etape Pr paration des r actifs Dilution des 2 chantillons et des contr les Incubation des chantillons 4 Lavage des plaques Distribution du Conjugu Incubation du Conjugu T R p ter l tape 4 Distribution du 8 Substrat 9 Incubation du Substrat 10 Arr t de la r action 11 Lecture de la plaque 12 Interpr tation IDEXX Brucellosis Milk X2 Action Reconstituer les Contr les positif et n gatif avec 5 ml d eau distill e Diluer 1 volume de Solution de lavage concentr e 10X avec 9 volumes d eau distill e Diluer le Contr le positif au 1 4 dans un tube essais avec la Solution de lavage Distribuer 50 ul de Solution de lavage dans chaque cupule Distribuer 50 ul de Contr le positif DILUE dans deux cupules appropri es de la microplaque Dilution finale du Contr le positif 1 8 Distribuer 50 ul de Contr le n gatif NON DILUE dans deux cupules appropri es Distribuer 50 ul d chantil
36. system Microplate covers lid aluminium foil or adhesive e Humid Chamber Incubator capable of maintaining a temperature of 37 C 3 C Centrifuge capacity 2000 x g Microplate shaker Precautions and Warnings for Users Handle all biological material as potentially infectious The Substrate solution is irritating to eyes respiratory system and skin Avoid contact with skin and eyes Wear protective gloves protective clothing eye or face protection when handling samples and reagents e Refer to the product Material Safety Data Sheet for additional information Laboratory Practices Optimal results will be obtained by strict adherence to this protocol Careful pipetting timing and washing throughout this procedure are necessary to maintain precision and accuracy Do not expose TMB solution to strong light or any oxidizing agents Handle TMB solution with clean glass or plastic ware All wastes should be properly decontaminated prior to disposal Dispose of contents in accordance with local regional and national regulations Care should be taken to prevent contamination of kit components Do not pour unused reagents back into containers Do not use kit past expiration date and do not intermix components from kits with different lot numbers Preparation of Reagents Controls Reconstitute Negative and Positive Controls with 5 ml of distilled deionized water Notes Reconstituted Controls must be aliquoted and kept fr
37. t plastique herm tique r utilisable 1 Remarque voir le tableau la fin du mode d emploi pour la description des symboles internationaux utilis s sur les tiquettes de la trousse Conservation Conserver les r actifs 2 8 C Les r actifs sont stables jusqu leur date de p remption condition d tre conserv s correctement IDEXX Brucellosis Milk X2 T Mat riel n cessaire mais non fourni Pipettes de pr cision ou pipettes multicanaux Embouts de pipette usage unique e Eprouvette gradu e pour la pr paration de la solution de lavage Lecteur de plaque 96 puits quip d un filtre 450 nm Syst me de lavage manuel semi automatique ou automatique Utiliser de l eau distill e ou d sionis e pour la pr paration des r actifs Couvercles pour microplaques aluminium ou adh sifs Chambre humide Incubateur de plaques 37 C 3 C Centrifugeuse 2000 x g Agitateur de microplaques Mises en garde et pr cautions d emploi Manipuler tous les r actifs et les chantillons comme une source potentielle de contamination a solution de substrat est irritante pour les yeux le syst me respiratoire et la peau Eviter tout contact avec les yeux et la peau Porter des gants de protection des v tements de protection un quipement de protection des yeux ou du visage lors de la manipulation des chantillons et des r actifs e Se reporter la fiche de s curit du produit pour plus d i
38. tactlpd Servicio T cnico de IDEXX 00800 727 43399 IDEXX y Test With Confidence son marcas o marcas registradas de IDEXX Laboratories Inc o sus filiales en los Estados Unidos de America y o en otros pa ses 2013 IDEXX Laboratories Inc Todos los derechos reservados 24 IDEXX Brucellosis Milk X2 IDEXX Brucellosis Milk X2 Deutsche Version Testkit zum Nachweis von Antik rpern gegen Brucella abortus in Milch von Rindern Nur zum tier rztlichen Gebrauch Name und Verwendungszweck IDEXX Brucellosis Milk X2 ist ein ELISA Testkit zum Nachweis von Antik rpern gegen den Erreger der Brucellose Brucella abortus in Einzelmilch oder Tankmilchproben von bis zu 250 Rindern In den Mitgliedsstaaten der europ ischen Union miissen Milch Untersuchungen mittels ELISA an Tankmilchproben nach Annex C der EU Entscheidung 2008 984 EG durchgef hrt werden Beschreibung Prinzipien Die Vertiefungen der Testplatten sind mit inaktiviertem B abortus Antigen beschichtet welches Antik rper die gegen B abortus gerichtet sind spezifisch bindet Gebundene Antik rper werden mit dem Brucellose Anti Rind IgG PO Konjugat nachgewiesen welches seinerseits das TMB Substrat blau verf rbt Nach Zugabe der Stoppl sung erfolgt ein Farbumschlag auf gelb Die Farbintensit t h ngt von der Menge der gebundenen Antik rper ab Die diagnostische Bewertung erfolgt durch den Vergleich der Extinktionen von Proben und Kontrollen Reagenzien Menge 1 Mit B
39. triques sont lus sur un spectrophotom tre une longueur d onde de 450 nm IDEXX Brucellosis Milk X2 9 R sultats Pour la validation de la manipulation la densit optique DO moyenne du Contr le n gatif CNX ne doit pas d passer 0 500 La DO moyenne du Contr le positif CPX ne doit pas d passer 2 000 La diff rence entre la moyenne de DO du Contr le positif et celle du Contr le n gatif CPX CNX doit tre gt 0 300 La mesure de la densit optique doit imp rativement tre effectu e dans les 2 heures apr s arr t de la r action Note IDEXX est en mesure de fournir mat riel et logiciel informatique pour le calcul des r sultats et l enregistrement des donn es Calculs Calculer la moyenne des valeurs de densit optique des chantillons test s en double Les valeurs de densit optique des chantillons Echantillon A450 et du Contr le Positif CPx sont corrig es par soustraction de la valeur de densit optique moyenne du Contr le N gatif CNX Calcul du pourcentage E P pour DO corrig e du Contr le positif DO corrig e de l chantillon chaque chantillon CPX CNX chantillon A450 CNX E P 100 x Estantilon A450 CNK CPx CNX Interpr tation Interpr tation pour chantillons individuels de laits et pools de laits jusqu a 125 vaches E P incubation courte lt 30 230 E P incubation longue lt 60 gt 60 Interpr tation N gatif Positif Interpr tation pour le
40. ugenschutz oder Gesichtsschutz beim Umgang mit Proben und Reagenzien verwenden Weitere Informationen sind im Sicherheitsdatenblatt enthalten Laborpraktiken 26 Bei strikter Einhaltung dieser Anweisungen werden optimale Ergebnisse erzielt Sorgf ltiges Pipettieren und Waschen und eine genaue Zeiteinteilung w hrend der Testdurchf hrung sind notwendig um die Genauigkeit der Werte zu gew hrleisten Substrat nicht starkem Licht oder oxidierenden Mitteln aussetzen Nur saubere Glas oder Plastikbeh lter benutzen Alle Abf lle vor der Entsorgung ordnungsgem dekontaminieren Den Inhalt im Einklang mit den lokalen regionalen und nationalen Bestimmungen entsorgen Eine Verunreinigung der Bestandteile des Testkits sorgf ltig vermeiden Keine unbenutzten Reagenzien zur ck in die Orginalflaschen sch tten Die Bestandteile nicht nach Ablauf des Verfalldatums benutzen und nicht mit Bestandteilen aus anderen Chargen vermischen IDEXX Brucellosis Milk X2 Vorbereitung der Reagenzien Kontrollen Die lyophilisierte positive und die negative Kontrolle werden mit je 5 ml destilliertem Wasser gel st Anmerkungen Kontrollen aliquotieren und eingefroren lagern Waschl sung Herstellung der Waschl sung aus dem Waschkonzentrat 10X 1 Teil Waschkonzentrat 10X mit 9 Teilen destilliertem Wasser verd nnen Bei steriler Zubereitung kann die Waschl sung eine Woche bei 2 8 C aufbewahrt werden Vorbereitung der Proben Nur entrahmte Milchp
41. umen realizar una lectura completa y cuidadosa del manual de instrucciones Paso Preparaci n de los reactivos Diluci n de las muestras Incubaci n de la muestra 4 Lavado de la plac Distribuci n del Conjugado Incubaci n del Conjugado 7 Repetir el paso 4 Distribuci n del Substrato Incubaci n del Substrato Frenado de la 10 ip reacci n 11 Lectura de la placa 12 Interpretaci n IDEXX Brucellosis Milk X2 Acci n Reconstituir los Controles Positivo y Negativo con 5 ml de agua destilada Diluirla Soluci n de Lavado Concentrada 10X 1 10 con agua destilada desionizada para preparar la Soluci n de Lavado Diluir en un tubo separado el Control Positivo a una relaci n 1 4 utilizando la Soluci n de Lavado Dispensar 50 ul de Soluci n de Lavado en cada pocillo de la placa de microtitulaci n Dispensar 50 ul de Control Positivo DILUIDO en dos pocillos correspondientes Diluci n final del Control Positivo 1 8 Dispensar 50 ul de Control Negativo NO DILUIDO en dos pocillos correspondientes Dispensar 50 ul de cada muestra de leche desnatada NO DILUIDA en los pocillos correspondientes Diluci n final del Control Negativo y de las muestras 1 2 Homogeneizar el contenido de los pocillos mediante una breve y suave agitaci n dela placa puede usarse para ello un agitador de placas Cubrir la placa e incubar Muestras individuales o mezclas de leche de hasta 125 vacas 60 m
42. vagem Distribuir 50 ul de Solug o de Lavagem em cada uma das cavidades da placa de microtitulac o Adicionar 50 ul de Controle Positivo DILU DO nas duas cavidades apropriadas da placa de microtitulagao Diluig o final do Controle Positivo 1 8 Adicionar 50 ul de Controle Positivo NAO DILUIDO nas duas cavidades apropriadas da placa de microtitula o Adicionar 50 ul de amostras de leite desnatado N O DILUIDAS nas cavidades apropriadas da placa de microtitulac o Diluig o final do Controle Negativo e amostras 1 2 Homogeneizar o conte do das cavidades da placa com um agitador de placas Cobrir a placa e incubar Leite individual e leite em pool de at 125 vacas 60 minutos 5 min a 37 C 3 C ou 14 18 horas a 2 8 C Leite em pool de leite de 126 at 250 vacas 14 18 horas a 2 8 C Em ambas opc es a placa s deve ser hermeticamente selada ou ser coberta e incubada em uma c mara mida Esvaciar ou aspirar o conte do l quido das cavidades da placa e lavar cada cavidade com aproximadamente 300 ul de Soluc o de Lavagem por 3 vezes Distribuir 100 ul do Conjugado em cada uma das cavidades Cobrir e incubar a placa por 60 minutos 5 min a 37 C 3 C A placa s deve ser hermeticamente selada ou ser coberta e incubada em uma c mara mida Distribuir 100 ul de Substrato TMB No 12 do em cada cavidade Incubar 18 26 C durante 15 minutos 1 min Bloquear a rea o crom tica adicionando 100 ul de S
43. zelnen Waschschritten und vor Zugabe des n chsten Reagenz vermeiden 7 n jede Vertiefung der Testplatte 100 ul Konjugat pipettieren 8 Testplatte verschlie en und 60 Minuten 5 Min bei 37 C 3 C inkubieren Die Testplatte n sollten entweder hermetisch verschlossen inkubiert werden oder abgedeckt in einer feuchten Kammer 9 Schritt 6 wiederholen 10 In jede Vertiefung 100 ul TMB Substrat Nr 12 pipettieren 11 15 Minuten 1 Min bei 18 26 C inkubieren 12 Die Farbreaktion durch Zugabe von 100 ul Stoppl sung Nr 3 in jede Vertiefung stoppen 13 Messen der Farbreaktion im Photometer bei einer Wellenl nge von 450 nm IDEXX Brucellosis Milk X2 27 Ergebnisse Die gemessene optische Dichte der negativen Kontrolle NKX sollte 0 500 diejenige der positiven Kontrolle PKx 2 000 nicht berschreiten Die Differenz zwischen der positiven und der negativen Kontrolle PKx NKX sollte gt 0 300 sein Die Testplatte innerhalb von 2 Stunden nach Zugabe der Stoppl sung mit dem Photometer messen Hinweis IDEXX bietet auch Instrumente und Software zur Berechnung der Mittel und Prozentwerte an Berechnungen Bei Doppelbestimmungen die Mittelwerte der optischen Dichten OD berechnen Extinktionen der Proben Probe A450 sowie der positiven Kontrolle PKx werden durch Subtraktion der Extinktion der negativen Kontrolle NKx korrigiert Die korrigierten Werte der Proben werden auf den korrigierten IL Proben Wert der
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